метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок

Формула изобретения

Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок, включающий обнаружение в сыворотке крови полового гормона, отличающийся тем, что в качестве гормона используют плацентарный гормон - хорионический гонадотропин, который определяют в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин - антител при помощи диагностикума, для изготовления которого кролик массой 1,5-2 кг 4-кратно с интервалом 7 дней, подкожно в область лопатки иммунизируется антигеном «Гонадотропин хорионический человека» в дозе 2000 Ед, разведенным в 1 мл стерильного адъюванта Фрейда, через 10 дней после последней инъекции гормона получают сыворотку крови методом отстаивания, затем 2 мл полученной иммунной сыворотки, разведенной 1:5 в 1%-ном растворе борной кислоты добавляют к 10 мл суспензии мелкодисперсных частиц (1-1,6 мкм) ализарина, смесь выдерживают 2 ч при температуре 37°С и еще 13 ч при 4-8°С, затем смесь центрифугируют до просветления, к осадку добавляют 10 мл 2%-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки в 0,5%-ной борной кислоте на физиологическом растворе и консервируют хинозолом (мертиолятом) в соотношении 1 часть консерванта на 10000 частей реактива, при постановке реакции на чистое обезжиренное предметное стекло наносят слева (опыт) и справа (контроль) по 1 капле суспензии ализариновых антител, затем в опытную каплю добавляют 1-2 капли испытуемой сыворотки крови, а в контрольную - такое же количество физиологического раствора, капли перемешивают отдельными стеклянными палочками и осторожно подогревают над пламенем горелки, покачивая стекло круговыми движениями в горизонтальной плоскости, при этом реакция завершается в течение 5-10 мин, учет результатов реакции осуществляется визуально по изменению гомогенности кирпично-красной мутной капли реагентов на предметном стекле: при положительной реакции на стельность в капле появляются оранжево-желтые зерна агглютината и жидкость при этом просветляется, при отрицательной реакции вид капли не изменяется.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к методам ранней диагностики беременности и бесплодия коров и телок.

Известен иммунологический метод диагностики стельности и бесплодия, заключающийся в обнаружении в сыворотке крови коров и телок гормона прогестерона при помощи иммуноферментного анализа, который позволяет установить беременность с 19-24 дня после осеменения [1].

Однако иммуноферментный анализ, как и многие существующие методы лабораторной диагностики беременности и бесплодия, трудоемок и сложен, требует наличия специального оборудования.

Техническим результатом изобретения является упрощение метода ранней иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок, а также снижение трудоемкости диагностических исследований.

Указанный результат достигается тем, что в качестве гормона, подвергающегося исследованию, используют плацентарный гормон - хорионический гонадотропин, который определяют в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин-антител при помощи диагностикума. Для изготовления диагностикума кролик массой 1,5-2 кг 4-кратно с интервалом 7 дней подкожно в область лопатки иммунизируется антигеном «Гонадотропин хорионический человека» в дозе - 2000 ЕД, разведенным в 1 мл стерильного адъюванта Фрейда. Через 10 дней после последней инъекции гормона получают сыворотку методом отстаивания. Затем 2 мл полученной иммунной сыворотки, разведенной 1:5 в 1%-ном растворе борной кислоты добавляют к 10 мл суспензии мелкодисперсных частиц (1-1,6 мкм) ализарина, смесь выдерживают 2 ч при температуре 37°С и еще 13 ч при 4-8°С. После этого смесь центрифугируют до просветления, к осадку добавляют 10 мл 2%-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки в 0,5%-ной борной кислоте на физиологическом растворе и консервируют хинозолом (мертиолятом) в соотношении 1 часть консерванта на 10000 частей реактива. При постановке реакции на чистое обезжиренное предметное стекло наносят слева (опыт) и справа (контроль) по 1 капле суспензии ализариновых антител. Затем в опытную каплю добавляют 1-2 капли испытуемой сыворотки крови, а в контрольную - такое же количество физиологического раствора. Капли перемешивают отдельными стеклянными палочками и осторожно подогревают над пламенем горелки, покачивая стекло круговыми движениями в горизонтальной плоскости, при этом реакция завершается течение 5-10 минут. Учет результата реакции осуществляют визуально по изменению гомогенности кирпично-красной мутной капли реагентов на предметном стекле: при положительной реакции на стельность в капле появляются оранжево-желтые зерна агглютината, и жидкость при этом просветляется, при отрицательной реакции вид капли не изменяется.

Испытание метода диагностики беременности и бесплодия по наличию плацентарного гормона - хорионического гонадотропина в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин-антител проводили в учебно-опытном хозяйстве Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. Для опыта было взято 100 проб сыворотки крови коров и телок (50 от стельных в ранней стадии беременности и 50 от бесплодных животных). Предварительно пробы подверглись исследованию при помощи иммуноферментного анализа. Затем эти же пробы исследовались с помощью разработанного метода диагностики беременности и бесплодия.

Результаты определения диагностической эффективности методов иммунологической диагностики беременности и бесплодия приведены в таблице.

Простота метода иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок позволяет использовать его для раннего определения или исключения стельности в условиях животноводческих ферм и комплексов при одинаковой с прототипом точности исследований. Также снижается трудоемкость диагностических исследований, поскольку время, затрачиваемое на исследование одной пробы, не превышает пятнадцати минут, в то время как иммуноферментный анализ предусматривает наличие специального оборудования и осуществляется, как правило, в условиях специализированных лабораторий.

Группы животных	Общее количество проб	Результаты исследований (подтверждение стельности)
		иммуноферментный анализ				разработанный метод иммунологической диагностики
		положительный		отрицательный		положительный		отрицательный
		количество проб	%	количество проб	%	количество проб	%	количество проб	%
Стельные	50	48	96	2	4	49	98	-	-
Бесплодные	50	-	-	50	100	-	-	50	100

Источник информации

1. Преображенский О.Н. Современные методы диагностики беременности и бесплодия животных. - Ветеринария, 2003. №7, с.32-33.