способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2
Классы МПК:
G01N33/50 химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого
Автор(ы):
Рыбкин Владимир Семёнович (RU), Алёшкин Владимир Андрианович (RU), Афанасьев Станислав Степанович (RU), Сентюрова Людмила Георгиевна (RU), Галимзянов Халил Мингалиевич (RU), Рубальский Олег Васильевич (RU), Косарева Вероника Павловна (RU), Давыдкин Валерий Юрьевич (RU), Давыдкин Игорь Юрьевич (RU), Пичугина Наталья Александровна (RU), Рубальский Евгений Олегович (RU)
Патентообладатель(и):
Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) (RU), Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО АГМА Росздрава) (RU)
Приоритеты:
подача заявки: 2006-07-03
публикация патента: 27.05.2007
Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2. Сущность изобретения состоит в том, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов определяют лимфоаденотропное действие препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего установить наличие лимфоаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
(56) (продолжение):
CLASS="b560m"function", Proc Soc Exp Biol Med, 1993, Nov; 204(2), p.155-164. GIMBLE JM et al. "Modulation of lymphohematopoiesis in long-term cultures by gamma interferon: direct and indirect action on lymphoid and stromal cells", Exp. Hematol., 1993, Feb; 21(2), p.224-230.
Формула изобретения
Способ определения лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 на основании оценки морфофункционального состояния лимфоидной ткани, отличающийся тем, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе, через 30-60 мин одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 и прекращают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 и продолжают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="/images/patents/163/2300010/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
Известен способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 на основе обнаружения в лимфатических узлах увеличения количества клеток, объема мякотных тяжей и лимфоидных узелков, сокращения объема краевого синуса, уменьшения объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий, появления эритроцитов, увеличения численности зрелых плазмоцитов, нейтрофилов и тучных клеток (Майбородин И.В. Лимфоидные органы при воздействии интерферона. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. - Новосибирск, 1992. - 16 с.).
Недостатками известного прототипа является то, что:
- отсутствует критерий прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2;
- используется большой перечень критериев лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 и не определены наиболее информативные из них, что увеличивает трудозатраты при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
В основу изобретения положена задача обеспечения информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
Задача решена тем, что согласно заявляемому способу в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2, и прекращают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 и продолжают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к лимфаденотропному действию препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 животные - мыши линии BALB/c; установлена необходимость использования нетоксичной для выбранных чувствительных животных дозы глицериносодержащего раствора рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2; определено время забоя опытной и интактной мышей; определено сочетание двух критериев, обеспечивающих у выбранных чувствительных животных информативную, нетрудоемкую регистрацию прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2, а именно сравнительного определения в идентичных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей интенсивности специфического свечения при определении интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа и числа тканевых базофилов.
Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих обеспечение информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 при использовании заявляемого способа.
Пример 1. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе 20 ME. Через 30 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 .В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил отсутствие усиления специфического свечения и отсутствие тканевых базофилов, поэтому было установлено отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2, и были прекращены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
Пример 2. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе 100 ME. Через 45 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> . В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
Пример 3. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2 в нетоксичной дозе 500 ME. Через 60 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, патент № 2300105" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 2.
2