средство, обладающее липидкорригирующими, гипокоагуляционными и антиоксидантными свойствами

Формула изобретения

Средство, обладающее липидкорригирующими, гипокоагуляционными и антиоксидантными свойствами, характеризующееся тем, что представляет собой фракцию липидов из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, содержащее 10% полиненасыщенных жирных кислот, 10% алкил-диацилглицеридов и комплекс природных биоантиоксидантов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической фармакологии и восстановительной терапии.

Как известно, в этиологии и патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний важное место принадлежит нарушениям в липидтранспортной и коагуляционной системах крови. Отягчающим фактором ряда заболеваний сердечно-сосудистой системы, в частности атеросклероза, является окислительный стресс, развивающийся на фоне снижения уровня природных низко- и высокомолекулярных антиоксидантов в тканях. Терапия основных сердечно-сосудистых заболеваний (ишемическая болезнь сердца, атеросклероз сосудов головного мозга и др.) состоит из медикаментозных и немедикаментозных методов, обеспечивающих преимущественно гиполипидемическое действие. Антиагрегационная терапия является стандартным компонентом к схемам лечения таких больных (Лупанов В.П. Стабильная стенокардия: тактика лечения и ведения больных в стационаре и амбулаторных условиях // Русский медицинский журнал. 2004. Том 11, №9. С.556-563).

Доказана эффективность включения в профилактические и лечебные комплексы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы препаратов-антиоксидантов (Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra // Кардиология. 2004. №2. С.72-81).

При этом действующее начало синтетических препаратов направлено на конкретное патогенетическое звено. В отличие от синтетических природные препараты могут сочетать в себе суммарные биологические эффекты, опосредованные разнообразным составом их компонентов. В связи с чем для фармакотерапии, направленной на профилактику рецидивов заболеваний сердца и их прогрессирование, актуальным является поиск природных препаратов и биологически активных добавок (БАД) к пище, обладающих наряду с липидкорригирующими эффектами - гипокоагуляционными и антиоксидантными свойствами.

В последние годы большое внимание привлекают жиры морских гидробионтов, содержащие 3 полиненасыщенные жирные кислоты ( 3 ПНЖК). Доказаны их разнообразные биологические эффекты, позволяющие использовать источники этих биологически активных веществ для профилактики и лечения целого ряда заболеваний, в том числе сердечно-сосудистых. Известно, что 3 ПНЖК включаются в клеточные структуры организма и оказывают модифицирующее влияние на структурно-функциональную организацию клеточных мембран, активность мембраносвязанных ферментов и биосинтез эйкозаноидов. Довольно часто морские гидробионты используются как потенциальные источники именно 3 ПНЖК. В то же время в состав суммарной липидной фракции жиров морских гидробионтов могут входить и другие липиды. Именно разнообразный состав липидов из различных морских источников определяет специфичность действия используемых средств.

Липиды из гепатопанкреаса (печени) краба - перспективный объект для создания медицинских препаратов: эффективный источник омега-3 жирных кислот рациона, содержащий также комплекс активных биоантиоксидантов. В доклинических исследованиях установлены безопасность образцов крабового жира, его биологические эффекты, позволяющие говорить о целесообразности разработки на их основе медицинских препаратов и биологически-активных добавок к пище.

Если биологические свойства 3 ПНЖК, как говорилось ранее, хорошо известны и данные жирные кислоты давно применяются для профилактики и лечения многих заболеваний, то лечебный эффект алкил-диацилглицеридов (АДГ) мало изучен, и, тем более, не ясно, каким образом проявили бы себя активные компоненты, связанные в одном природном комплексе, содержащем также и биоантиоксиданты.

Большинство натуральных жиров и масел представляют собой триглицриды - эфиры глицерина и жирных кислот.

Среди разнообразия жиров нередки случаи присутствия в них значительных количеств алкил-диацилглицеридов (АДГ). В этих соединениях в 1-м положении молекулы находится алкильный остаток, связанный с глицерином простой эфирной связью:

Если из молекулы удалить свободные жирные кислоты, то получаются спирты общей формулы:

Если R=16:0 (С₁₆Н ₃₃) (16:0 обозначает наличие в радикале 16 атомов углерода и 0 двойных связей; в скобках приведен элементный состав), то спирт химиловый, если R=18:0 (C₁₈H ₃₇), то батиловый, если R=18:1 (C₁₈ H₃₅), то селахиловый.

Сумма трех этих спиртов от их общей суммы в природных липидах составляет 90% и более (Hayashi К., Okawa Y., Kawasaki К. Liver lipids of gonatid squid Berryteuthis magister: a rich source of alkyi glyceryl ethers. 1985, Bull. Jap.Soc. Sci. Fish., Vol.51, N 9, P.1523-1526). В научной литературе эта суммарная композиция спиртов получила название алкил-глицериловых эфиров (АГЭ).

Известно местное применение (Bodman J., Maisin J.H. The -glyceryl ethers // Clinica Chimica Acta, 1958, V.3, P.253-274) алкил-глицериловых эфиров для заживления ран у крыс Вистар от лучевой травмы. Результаты продемонстрировали почти 2-кратное ускорение заживления раны.

Известно применение АГЭ (Bodman J., Maisin J.H. The -glyceryl ethers // Clinica Chimica Acta, 1958, V.3, P.253-274) на некоторых пациентах с серьезными наружными поражениями: а) незаживающая гнойная рана, б) незаживающие раны, связанные с хирургическим удалением злокачественных опухолей, в) незаживающие гнойные раны, связанные с хирургической обработкой переломов, г) незаживающие раны, связанные с лучевым поражением. Во всех случаях применение АГЭ приводило к немедленному началу заживления ран.

Известны примеры эффективного внутреннего потребления АГЭ пациентами при лечении лучевых поражений (Brohult A., Holmberg J. Alkoxyglycerols in the treatment of leucopenia caused by irradiation / Nature, 1954, V.174, N 4441, P.1102-1103). У больных назначенная терапия вызвала увеличение количества лейкоцитов в крови: в 1,5 раза за несколько дней и в конце лечения более чем в 2 раза. Также показана большая выживаемость пациенток (Brohult A. Alkoxyglycerols in irradiation treatment / Nature, 1962), получавших лучевую терапию при раке шейки матки, при одновременном назначении АГЭ.

Известна работа (European Patent 0333678, 02.01.89, МКИ ⁵ А61К 31/08 / Brohult S., Brohult A. Use of glycerol ethers in the treatment of allergic diseases) по применению АГЭ при аллергических заболеваниях. Препарат выделяли из жира печени гренландской акулы, удаляя из него все жирные кислоты. В качестве примера приводятся результаты лечения астмы. После 3-4 месяцев дискомфорт (от болезни) исчезал. В отдельных случаях полное его исчезновение наблюдалось после 6-ти месяцев.

Однако все вышеприведенные исследователи использовали АГЭ из разрушенного природного комплекса, где они находились вместе с полиненасыщенными жирными кислотами, отбрасывая при этом важную биологическую составляющую. Тем самым снижался общий лечебный эффект, а в многостадийном процессе получения препарата использовалась жесткая химическая обработка и соответствующим образом поднималась стоимость конечного продукта. Полиненасыщенные жирные кислоты рассматривали как балласт, который нужно удалить. И в дальнейшем исследователи для удобства использования препарата растворяли его в обычных растительных маслах (Bodman J., Maisin J.H. The -glyceryl ethers // Clinica Chimica Acta, 1958, V.3, P.253-274).

Наиболее близким к заявляемому изобретению является исследование (Заявка №2003132574/15, получившая положительное решение о выдаче патента от 24.02.2005 "Средство, обладающее липидкорригирующими и иммуномодулирующими свойствами" / Бочаров Л.Н., Касьянов С.П., Блинов Ю.Г. и др.) по применению жира из печени командорского кальмара Berryteuthis magister в лечебно-профилактических целях. В жире командорского кальмара содержится 50% АДГ и 10% полиненасыщенных жирных кислот. Назначение жира вызывало у животных (крысы) при экспериментальной кардиовазопатии выраженные липидкорригирующие и иммуномодулирующие эффекты. Они проявлялись в значительном снижении в крови холестерина, триглицеридов, ЛПНП и ЛПОНП и др., а также в изменении иммунологических параметров - повышении фагоцитарной активности нейтрофилов, увеличении фагоцитарного резерва и т.д. Все вышеуказанное позволило рекомендовать жир командорского кальмара для профилактики заболеваний, сопровождающихся нарушениями как липидного обмена, так и системы иммунитета.

К недостаткам данного лечебного средства можно отнести то, что высокое содержание в нем алкил-диацилглицеридов - АДГ (50%), как показал анализ проведенных исследований, не позволяет в полной мере использовать потенциал содержащихся в средстве полиненасыщенных жирных кислот ввиду необходимости увеличения потребляемой дозы средства, что не желательно из-за избыточной нагрузки АДГ на организм.

Задача, решаемая заявляемым изобретением, - расширение арсенала биологически активных добавок к пище природного происхождения липидкорригирующего действия с выраженными гипокоагуляпионными и антиоксидантными свойствами на основе применения природного комплекса липидов, сочетающего в себе оптимальное количество АГЭ, полиненасыщенные жирные кислоты и природные биоантиоксиданты (альфа-токоферол и бета-каротин).

Сущность изобретения заключается в том, что найдено средство, являющееся фракцией липидов из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, которое содержит 10% полиненасыщенных жирных кислот, 10% алкил-диацилглицеридов и комплекс природных биоантиоксидантов и обладает гиполипидемическими, гипокоагуляционными и антиоксидантными свойствами.

Средство, обладающее вышеуказанными биологическими свойствами, получают следующим образом: извлеченную из краба печень подвергают автолизу (самопроизвольному гидролизу за счет содержащихся в печени ферментов) при температуре 40°С, затем образовавшуюся жидкую массу разделяют на центрифуге или сепараторе для отделения жира-сырца, который рафинируют стандартным образом (щелочная рафинация) с получением продукта, удовлетворяющего нормативам безопасности, предъявляемым к жирам (СанПиН 2.3.2.1078-01): кислотное число - менее 2 мг КОН/г; перекисное число - менее 10 ммоль активного кислорода/1 кг.

Средство представляет собой легко подвижную масляную жидкость темно-коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом.

Использование полученного препарата из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica в эксперименте на крысах с алиментарной гиперлипидемией (ГЛП) дало результат, превосходящий ожидаемые от его назначения прогнозы и заключающийся в направленном липидкорригирующем, гипокоагуляционном и антиоксидантном действии на больной организм.

ПРИМЕР 1. Лечение средством из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica алиментариой гиперлипидемии, сопровождающейся выраженными нарушениями коагуляционных параметров крови, дисбалансом в системе перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита (ПОЛ-АОЗ).

В эксперименте на крысах изучено средство, выделенное из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, содержащее в своем составе 10% полиненасыщенных жирных кислот, 10% алкил-диацилглицеридов (от общей массы липидов), комплекс биоантиоксидантов; перекисное число - менее 10 ммоль активного кислорода/кг.

В таблице 1 представлен состав суммарной липидной фракции печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, используемой в качестве средства.

Таблица 1 Состав липидов из печени краба*
Компоненты	Содержание, г/100 г
Триглицериды	85
Алкил-диацилглицериды (АДГ)	10
Альфа-токоферол	129 мг
Бета-каротин	3
Другие	˜5
Общее содержание 3 ПНЖК**	10
* - приведен состав липидов после процесса рафинации;
** - жирные кислоты входят в состав триглицеридов и АДГ.

Опыты проведены на белых половозрелых крысах-самцах линии Вистар, выведенных в питомнике лабораторных животных РАМН "Столбовая" (г.Чехов, Московская обл.), ветеринарное свидетельство №32-361061, 2002 г. Животные содержались в виварии в соответствии с санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник, в пластмассовых клетках по 4-5 голов в каждой, на подстилке из лиственных пород дерева при естественном освещении и температуре 19±2°С. Карантирование крыс осуществлялось 14 дней и более. Исследования проводились в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (1977). Эвтаназию животных осуществляли путем декапитации под эфирным наркозом.

Для исследования выделялось 3 группы крыс:

контрольная группа - интактные крысы, содержащиеся на стандартном рационе вивария (10 голов);

опытная группа 1 - крысы, содержащиеся на экспериментальном рационе для развития алиментарной ГЛП (10 голов);

опытная 2 - крысы с моделированной алиментарной ГЛП, получавшие лечебную дозу изучаемого средства с пищей - 0,3 мл/кг в сутки (10 голов).

Модель алиментарной ГЛП вызывали разбалансированным по составу жиров рационом с включением высококалорийных продуктов и холестерина (табл.2). Критерием развития модели служил уровень холестерина (ХС) в сыворотке крови и печени крыс, превысивший исходный более чем на 1/3. Срок развития модели составил 46 суток, после чего крысы переводились на стандартный рацион вивария, и в течение 30 дней опытным животным ежедневно per os давали изучаемое средство. Животные ежедневно осматривались, учитывалась поедаемость корма. За время опыта не было случаев падежа и заболеваний животных. Оценивались интегральные показатели состояния животных, функциональное состояние эритрона и коагуляционные свойства крови, метаболиты липидного обмена и показатели системы ПОЛ-АОЗ в крови и печени крыс. Липидный спектр сыворотки крови исследовали на автоанализаторе, определяли уровень общего холестерина (ХС), триглиперидов (ТГ), ХС липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП), результаты выражали в ммоль/л. Холестерин липопротеидов низкой (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП) определяли расчетным методом по формулам Фридвальда. Индекс атерогенности (ИА) рассчитывали по формуле ОХС-ХС ЛПВП/ХС ЛПВП (Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. - СПб., 1995. - 246 с.). Оценку системы липопероксидации проводили по уровню образования гидроперекисей липидов (ГЛ), малонового диальдегида (МДА) в крови (Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Янькова В.И. Руководство по методам исследования параметров системы "перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита" в биологических жидкостях. Владивосток: Изд-во Дальневосточного ун-та, 2003. 80 с.; Гончаренко М.С., Латинова А.М. Метод оценки перекисного окисления липидов. Лаб. дело. 1985. №1. С.60-69) и печени крыс (Пищевые продукты и пищевые добавки. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище / Методические указания МУК 2.3.2.721-98. М.: Минздрав России, 1999. 199 с.), интегральному показателю антиоксидантной активности (АОА) (Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов. Лаб. дело. 1988. №5. С.59-62), параметру устойчивости эритроцитов к перекисному гемолизу (УЭПГ) (Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. - СПб., 1995. - 246 с.).

Результаты исследования представлены в таблицах 2-4.

Как следует из представленных данных, развитие модели алиментарной ГЛП сопровождалось достоверным увеличением в сыворотке крови содержания ХС атерогенных фракций липопротеидов (ХС ЛПНП и ХС ЛПОНП), уровня ТГ, величины индекса атерогенности в 6 раз. Количество ХС ЛПВП снижалось в 2 раза (табл.2). Оценка параметров периферической крови выявила достоверное уменьшение количества эритроцитов в сравнении с интактными животными, снижение уровня гемоглобина, времени свертывания крови и количества тромбоцитов. При этом среднее содержание гемоглобина в крови и цветной показатель сохранялись неизменными (табл.3). В крови и тканях наблюдалось накопление первичных (ГЛ) и вторичных (МДА) продуктов пероксидации липидов. Резко снижалась устойчивость эритроцитов к перекисному гемолизу - в 2 раза в сравнении с показателем в контрольной группе крыс. Показатель интегральной активности антиоксидантной защиты снижался. О дисбалансе в системе ПОЛ-АОЗ при алиментарной ГЛП свидетельствовали также повышенные значения показателя МДА/АОА.

Курсовое введение заявляемого средства, представляющего собой фракцию липидов из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, содержащую 10% полиненасыщенных жирных кислот и 10% алкил-диацилглицеридов, помимо ожидаемого липидкорригирующего действия (снижения уровня общего ХС и ХС атерогенных классов липопротеидов, ТГ в 2 и более раз, индекса атерогенности до уровня интактных животных, увеличение ХС ЛПВП) оказывало гипокоагуляционный и антиоксидантный эффекты. Так, введение средства крысам с алиментарной ГЛП вызывало увеличение времени свертываемости крови до значений в контрольной группе животных. Состояние оксидативных процессов под влиянием средства выходило на нормальный физиологический уровень функционирования. В ответ на повышенное образование МДА в крови происходила активация системы антиоксидантной защиты, о чем свидетельствовало увеличение по сравнению с крысами опытной 1 группы показателя АОА в 2 раза, параметра УЭПГ в 7 раз. Образование первичных продуктов пероксидации - гидроперекисей липидов в крови и печени, а также МДА в печени снижалось. Показатель МДА/АОА также свидетельствовал об активации компенсаторных процессов под влиянием средства.

Таким образом, предлагаемое средство, выделенное из печени камчатского краба Paralithodes camtschatica, содержащее 10% полиненасыщенных жирных кислот, 10% алкил-диацилглицеридов и комплекс биоантиоксидантов, обладает выраженными липидкорригирующими, гипокоагуляционными и антиоксидантными свойствами, проявляющимися:

- в нормализации показателей липидного обмена в сыворотке крови, снижении их атерогенной направленности;

- в замедлении процесса свертывания крови;

- в активации антиоксидантной системы животного организма, увеличении устойчивости клеток к перекисному гемолизу.

Впервые выявленная совокупность позитивных свойств липидкорригирующего средства природного происхождения позволяет его использовать в качестве эффективного инструмента профилактики как сердечно-сосудистых заболеваний, так и других патологий, при которых нарушения в обмене липидов сопровождаются нарушениями гемокоагуляции, интенсификацией процесса липопероксидации.