средство, нормализующее функции щитовидной железы, и способ его получения

Формула изобретения

1. Средство, нормализующее функции щитовидной железы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 222 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из щитовидной железы телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.

2. Способ получения средства, нормализующего функции щитовидной железы, характеризующийся тем, что щитовидную железу телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее -40°С, выдерживают при температуре -20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2-х раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см ² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см² , разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см ².

Описание изобретения к патенту

Группа изобретений относится к лекарственному средству и способу его получения из органов животных, в частности к выделению биологически активного вещества из щитовидной железы и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее функции щитовидной железы.

Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из животного сырья (патент РФ №944191, 1994; а.с. SU №1112606, 1996; а.с. SU №1218521, 1994; а.с. SU №1227198, 1986; патент РФ 1298879, 1993; патент РФ №1448443, 1994; патент РФ №2075944, 1997; патент РФ №2104702, 1998; патент РФ №2161501, 2001; патент РФ №2163129, 2000; патент US 4341765, патент FR 2583982, 1987).

Известно использование полипептидов в фармацевтических композициях, включающих эти пептиды для нормализации функции щитовидной железы (патент GB 1161896, 1969, являющийся наиболее близким аналогом для предлагаемого средства, нормализующего функции щитовидной железы).

Известны способы получения комплексных пептидных препаратов, обладающих тканеспецифическим действием (патент РФ №944191, 1994; патент РФ №1122606, 1993; патент РФ №1417244, 1993; патент РФ №2104702, 1998).

Известен способ получения указанных препаратов (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы. СПб.: Наука, 1996, 74 с.), включающий получение биологически активного вещества из органов и тканей животных путем экстракции 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка и обработки надосадочной жидкости ацетоном, являющийся наиболее близким аналогом-прототипом для предлагаемого способа получения средства, нормализующего функции щитовидной железы. К недостаткам указанного способа следует отнести извлечение в процессе экстракции из ткани большого количества (более 70%) веществ не пептидной природы - балластных компонентов, которые, являясь примесями, не определяют биологическую активность выделенного активного вещества, а также его низкий выход.

Настоящим изобретением поставлена и решена задача разработки способа получения средства, нормализующего функции щитовидной железы, в виде лекарственной формы для парентерального введения, выделенного из щитовидной железы телят не старше 12-месячного возраста или свиней, техническим результатом которого является оптимальная технология выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 222 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход.

Экспериментальная проверка показала, что предлагаемый способ обеспечивает фармацевтическую стабильность, максимальную биологическую ценность и терапевтическую эффективность средства, нормализующего функции щитовидной железы, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, что подтверждено результатами экспериментов, приводимыми в примерах, иллюстрирующих изобретение.

Другим аспектом изобретения является средство, нормализующее функции щитовидной железы, в виде лекарственной формы для парентерального введения, представляющее собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 222 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, технический результат которого заключается в том, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе (от 500 до 1500 Да) входящих в него пептидных компонентов (патенты РФ №№1298879, 2104702, 2163129), а также по его нетоксичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей.

В ходе исследований в экспериментах на животных выявлено, что полученный водный раствор средства с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл является терапевтически эффективной дозой, что позволяет считать показанным использование средства при различных видах патологии щитовидной железы. Это подтверждается приводимыми ниже примерами.

В процессе проведения исследований была установлена важность следующих стадий способа получения средства, нормализующего функции щитовидной железы, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения (далее - препарат):

- повторное осаждение образовавшегося гомогенизированного осадка двукратными объемами ацетона не менее двух раз и последующее промывание на нутч-фильтре двукратными объемами ацетона до получения осадка светло-серого цвета, что свидетельствует о полной очистке осадка от примесей, таких как липидные, белковые, фосфолипидные и другие;

- получение водного раствора экстракта в концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, его центрифугирование, фильтрование, с последующей ультрафильтрационной очисткой на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, и добавление в ультрафильтрат гликокола до конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН=5,6÷6,6;

- стерилизующая фильтрация, ампулирование и автоклавирование в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см² , что обеспечивает стабильность препарата при сохранении терапевтической эффективности.

Режим и время автоклавирования были установлены экспериментально.

Указанный технический результат достигается тем, что средство, нормализующее функции щитовидной железы, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 222 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, и получено из щитовидной железы телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.

Указанный технический результат достигается также тем, что предлагаемый способ получения средства, нормализующего функции щитовидной железы, характеризуется тем, что щитовидную железу телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре (20±5)°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см ² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН=5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см² , разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см ².

Сущность изобретения поясняется и таблицами и чертежом.

В Таблице 1 показано влияние препарата на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.

На чертеже показано влияние препарата на развитие эксплантатов щитовидной железы.

В Таблице 2 показано влияние препарата на уровень гормонов щитовидной железы в сыворотке крови у больных первичным гипотиреозом.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами: пример 1 - способ получения препарата; пример 2, подтверждающий биологическую активность препарата; пример 3 - изучение токсичности препарата; пример 4, подтверждающий терапевтическую эффективность препарата, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.

Пример 1. Способ получения препарата

В качестве сырья используется щитовидная железа телят (не старше 12-месячного возраста) или свиней, которую замораживают при температуре не менее минус 40°С и выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев.

В реактор для экстракции перекачивают 300 л 3% раствора уксусной кислоты и охлаждают до температуры (20±5)°С, затем в реактор при постоянном перемешивании загружают 60 кг измельченного до получения гомогенной массы сырья. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры плюс 7÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч.

Экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием при (5000±500) об/мин в течение 1 ч. К экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5. Выдерживают при температуре плюс 3÷5°С в течение 4 ч. Образовавшийся осадок гомогенизируют и повторно осаждают ацетоном не менее двух раз. Затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета. Промытый осадок протирают через металлическое сито, выкладывают тонким слоем в эмалированные кюветы, закрывают двойным слоем ткани хлопчатобумажной и высушивают при периодическом помешивании в вытяжном шкафу до полного удаления запаха ацетона.

Выход активного вещества (порошка биологически активного пептидного комплекса, выделенного из щитовидной железы) составляет 40 г на 1 кг исходного сырья.

Полученный порошок растворяют в дистиллированной воде при постоянном перемешивании при комнатной температуре в течение 40 мин до концентрации пептидов 2,5÷2,9 мг/мл. Полученный раствор центрифугируют при (3000±200) об/мин в течение (20±5)мин. Центрифугат фильтруют через фильтр типа АР-15 или аналогичный.

Фильтрат подвергают ультрафильтрационной очистке на установке для ультрафильтрации при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да.

В ультрафильтрат добавляют расчетную навеску гликокола до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл, перемешивают до полного растворения гликокола при сохранении рН=5,6÷6,6.

Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, которую проводят под давлением, не превышающим 2,0 кгс/см².

Полученный раствор разливают в ампулы по 2,0 мл и автоклавируют, причем ампулы с препаратом подвергают стерилизации в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении не более 1,1 кгс/см².

Препарат представляет собой бесцветный, прозрачный раствор и содержит пептидный комплекс с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.

Тестирование на отсутствие высокомолекулярных белковых компонентов осуществляют путем добавления к содержимому 1 ампулы препарата 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Прозрачность раствора свидетельствует об отсутствии высокомолекулярных белковых компонентов.

Для определения в препарате пептидных связей к его раствору добавляют биуретовый реактив. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в препарате пептидных связях.

С целью определения в препарате полипептидов и их фракций используют методы ультрафиолетовой спектрофотометрии, гель-хроматографии, масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.

Ультрафиолетовый спектр раствора препарата снимают в области длин волн от 250 до 350 нм: максимум поглощения отмечается при длине волны (270±5) нм.

Молекулярную массу полипептидов, входящих в препарат, определяют следующими методами:

- методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6х60 см используют Peptide Molecular Weight Kit MS III («Serva», Германия);

- методом масс-спектрометрии. Спектры получают на времяпролетном масс-спектрометре Voyager DE Biospectrometry с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF) при относительной интенсивности азотного лазера 2300÷2400, ускоряющем напряжении 25000 В, времени задержки 90 нс и давлении в вакуумной камере 2,6×10 ⁶ тор;

- методом электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле в сравнении со стандартным набором маркерных белков.

Перечисленными выше методами установлено, что в состав препарата входят полипептиды с молекулярной массой от 74 до 222 Да.

С помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2×62 мм) установлено, что в состав препарата входят преимущественно низкомолекулярные фракции - от 70 до 90%, а высокомолекулярные компоненты в препарате отсутствуют.

Пирогенность препарата определяют на кроликах общепринятым методом (ГФ XI, вып.2, с.183) при тест-дозе препарата 0,25 мг на 1 кг массы животного в 1,0 мл изотонического 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Показано, что препарат является апирогенным.

Таким образом, вышеизложенным способом получен препарат - лекарственная форма для парентерального введения, представляющая собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 222 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.

Пример 2. Влияние препарата на развитие эксплантатов щитовидной железы

Эксперименты проведены на 45 фрагментах щитовидной железы крыс линии «Wistar» с массой тела 150÷200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты щитовидной железы помещали в эту среду и культивировали на коллагеновой подложке в чашках Петри в термостате при 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли препарат в концентрациях 2, 10, 20, 50, 100 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента щитовидной железы. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.

На чертеже показано влияние препарата на развитие эксплантатов щитовидной железы.

Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-и сутки культивирования при концентрации препарата 50 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 32% по сравнению с контрольными значениями ИП (см. чертеж). При исследовании эксплантатов щитовидной железы на более длительных сроках культивирования (7 дней) было выявлено аналогичное стимулирующее действие препарата в той же концентрации.

Таким образом, в отношении ткани щитовидной железы препарат оказывал тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.

Пример 3. Изучение токсичности препарата

Общетоксическое действие препарата исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении препарата.

Исследование по изучению острой токсичности проведено на 72 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 19÷22 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 35 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.

Исследование по изучению подострой токсичности проведено на 70 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 170÷210 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор NaCl. До введения препарата, на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.

Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев, исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата, на 84 морских свинках-самцах с массой тела 230÷250 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно препарат в течение 6 мес в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинномозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почек, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.

При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого препарата животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.

Изучение подострой и хронической токсичности препарата свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 300÷3000 раз. При исследовании влияния препарата на морфологический состав и биохимические показатели периферической крови морских свинок через 3 и 6 месяцев после начала введения препарата достоверного изменения показателей не выявлено (Таблица 1).

При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.

Следовательно, препарат, полученный предлагаемым способом, при длительном введении животным не обладает токсическими свойствами, препятствующими дальнейшему его применению в качестве лекарственного средства, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.

Пример 4. Эффективность применения препарата у больных первичным гипотиреозом

Первичный гипотиреоз является одним из возрастных нарушений функции щитовидной железы. В патогенезе первичного гипотиреоза на первый план выступает изменение ткани железы или торможение синтеза тиреоидных гормонов вследствие перенесенных инфекционных заболеваний, травм или спонтанной деструкции щитовидной железы.

В исследовании эффективности применения препарата приняли участие 42 больных первичным гипотиреозом в возрасте от 61 до 75 лет. Больные предъявляли жалобы на быструю утомляемость, сонливость, ухудшение памяти, частые головные боли, головокружения. В большинстве случаев пальпаторно определялись признаки атрофии щитовидной железы. Все больные ранее получали симптоматическую терапию по поводу клинических проявлений данного заболевания.

Методом рандомизации все пациенты были разделены на 2 группы. В основную группу вошли 23 пациента, которым вводили препарат в дозе 5 мг в 2 мл физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.

Контрольная группа включала 19 пациентов, получавших общепринятое лечение, в том числе гормонозаместительную терапию.

В динамике оценивали жалобы больных, проводили общеклиническое исследование крови и мочи, биохимическое изучение крови, ультразвуковое исследование щитовидной железы, электрокардиографию. Содержание гормонов Т ₃ и Т₄ в сыворотке крови определяли радиоиммунологическим методом.

В результате проведенных исследований установлено, что применение препарата способствовало улучшению клинических проявлений заболевания в 71% случаев, причем наибольший эффект наблюдался у лиц старшей возрастной группы с выраженными признаками атрофии щитовидной железы. На фоне приема препарата больные отмечали повышение работоспособности, уменьшение частоты и интенсивности головных болей и болей в области сердца.

При исследовании объективных показателей наблюдалась нормализация параметров ЭКГ. Отмечены достоверное увеличение уровня гормона T₃ и тенденция к восстановлению уровня гормона Т₄ щитовидной железы (Таблица 2), что говорит о стабилизирующем влиянии препарата на клеточный метаболизм в железе и регуляторном воздействии его на обменные процессы в щитовидной железе, приводящем к нормализации секреции гормонов.

Важно подчеркнуть, что пациенты основной группы получали препарат в качестве монотерапии. При этом не было выявлено его побочного действия и осложнений.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о лечебной эффективности препарата и целесообразности его применения в комплексном лечении первичного гипотиреоза в терапевтически эффективной дозе 5 мг (2,5 мг/мл) внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.

Таблица 1
Средство, нормализующее функции щитовидной железы, и способ его получения
Показатель	Введение препарата (10 мг/кг)
	3 месяца		6 месяцев
	Контроль (n=21)	Препарат (n=21)	Контроль (n=21)	Препарат (n=21)
Эритроциты, ×10 12/л	5,3±0,4	5,1±0,6	5,3±0,2	5,3±0,4
Гемоглобин, г/л	14,3±1,8	14,1±1,6	14,4±1,5	14,3±1,8
Ретикулоциты, %	1,1±0,01	1,1±0,03	1,2±0,01	1,1±0,02
Тромбоциты, ×109/л	142,1±4,5	141,2±4,1	140,4±3,9	142,3±4,8
Лейкоциты, ×109 /л	9,6±0,3	9,6±0,1	9,4±0,7	9,5±0,2
Нейтрофилы палочкоядерные, %	0,31±0,04	0,32±0,04	0,31±0,05	0,34±0,02
Нейтрофилы сегментоядерные, %	43,7±2,5	42,5±2,9	42,9±3,3	42,1±3,6
Эозинофилы, %	0,68±0,07	0,67±0,04	0,71±0,03	0,67±0,09
Базофилы, %	0,61±0,03	0,62±0,05	0,65±0,04	0,60±0,05
Моноциты,%	2,2±0,05	2,5±0,06	2,3±0,06	2,3±0,01
Лимфоциты, %	45,2±2,7	48,3±2,9	51,2±2,8	46,3±2,9
СОЭ, мм/ч	1,65±0,04	1,72±0,03	1,69±0,04	1,67±0,05
Резистентность эритроцитов, % NaCl
- максимальная	0,40±0,02	0,44±0,02	0,42±0,05	0,43±0,07
- минимальная	0,28±0,03	0,27±0,05	0,30±0,01	0,27±0,05
Общий белок в сыворотке крови, г/л	68,5±1,6	67,9±1,4	70,1±1,4	66,5±1,3
Натрий в сыворотке крови, ммоль/л	154,1±7,3	152,6±7,7	155,1±7,8	151,3±7,6
Калий в сыворотке крови, ммоль/л	5,3±1,7	5,2±1,8	5,3±1,7	5,4±1,9

Таблица 2
Средство, нормализующее функции щитовидной железы, и способ его получения
Показатель	До лечения	После лечения с применением общепринятых средств	После лечения с применением препарата
T3, нг/мл	1,28±0,05	1,44±0,03*	1,55±0,05*
Т 4, нг/мл	162,7±10,2	168,6±11,1	174,5±9,6
* - Р<0,05 по сравнению с показателем до лечения.