способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени

Формула изобретения

Способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата для лечения и профилактики заболеваний печени, нарушения липидного обмена и восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, глицирризиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и углевод, при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли не более 4:1, путем смешения эмульсии растительных фосфолипидов в водном растворе глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли с водным раствором углевода, в качестве которого используют лактозу, мальтозу и/или изомальтозу, при рН 6,5-7,5 и полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают 5-22 циклам гомогенизации при давлении 800-1200 бар с последующими предварительной фильтрацией и стерилизующей фильтрацией и сублимационной сушкой.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области фармацевтики и касается способа получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "Фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени, нарушения липидного обмена, восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды, глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества.

Известно, что патологические процессы в печени при различных заболеваниях сопровождаются нарушением структуры и функции мембранных систем гепатоцитов. Повреждение мембран обусловлено нарушением липидного бислоя за счет вовлечения липидов в процессы перекисного окисления и воздействия на них эндогенных фосфолипаз. Изменение физико-химических свойств липидов приводит к нарушению структуры липидного матрикса биомембран и к потере их барьерной функции, что сопровождается инактивацией мембранных ферментных систем.

В ряде исследований, в том числе и в ГУ НИИ БМХ РАМН, было показано, что наиболее перспективным в плане использования фосфолипидов для восстановления поврежденных мембран гепатоцитов являются фосфолипиды растительного происхождения, которые имеют в своем составе незаменимые жирные кислоты (линолевую и линоленовую). Это делает их более жидкими, чем обычный мембранный фосфатидилхолин, позволяя выполнять роль "мембранного клея", способного репарировать дефекты поврежденных клеточных мембран. Механизм действия растительных фосфолипидов связан с включением в мембраны полиненасыщенного фосфатидилхолина, способного восстанавливать структуру и функцию поврежденных клеток.

Известен ряд препаратов на основе фосфолипидов, применяемых как в виде капсул, драже или таблеток, так и в виде инъекционных форм. Одним из таких препаратов, который уже более 40 лет применяется в практическом здравоохранении для восстановления функций печени является "Эссенциале" и более современный "Эссенциале Н" (Франция-Германия) [1]. "Эссенциале" содержит смесь фосфолипидов, ненасыщенных жирных кислот и витаминов.

В технологии производства инъекционной формы "Эссенциале" для растворения жироподобной фосфолипидной субстанции в качестве детергента используют соль дезоксихолевой кислоты, обладающей цитотоксическим действием и оказывающей негативное воздействие на клетку.

Известен способ получения инъекционной формы фосфолипидного препарата "Фосфоглив" для лечения и профилактики заболеваний печени, содержащего растительные фосфолипиды с высоким содержанием фосфадитилхолина (75-98%), глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества [2]. Используемая в качестве эмульгатора глицирризиновая кислота или ее соль помимо мягкого детергентного действия обладает гепатопротекторным противовоспалительным, противоаллергическим и противовирусным свойствами.

Описано два способа получения инъекционной формы препарата "Фосфоглив".

Первый способ предусматривает смешение спиртового раствора фосфолипида с водными растворами глицирризиновой кислоты или ее соли и мальтозы с последующей обработкой полученной смеси ультразвуком, фильтрацией, отгонкой растворителя и лиофилизацией.

Второй способ заключается в смешение жироподобного фосфолипида с водными растворами соли глицирризиновой кислоты и мальтозы. Полученную смесь подвергают пяти циклам щелевой гомогенизации при давлении 600 бар с последующей фильтрацией, отгонкой растворителя и лиофилизацией.

В указанных известных способах получения инъекционной формы фосфолипидной композиции во всех случаях получают неоднородные и относительно большие по размеру липосомальные частицы, агрегирующие в растворе при хранении. Лиофильно высушенный порошок препарата при хранении в течение 4-6 месяцев при растворении мутнеет, не сохраняет липосомально/мицелярную структуру, частицы укрупняются. Отмечено также увеличение содержания в препарате окисленных фосфолипидов, в частности лизофосфатидилхолина. Поэтому срок хранения такого препарата не превышает трех месяцев. Весь технологический процесс очень сложен в исполнении и не позволяет получать стабильные при длительном хранении, однородные, по размеру не превышающие 30-50 нм липосомально/мицелярные частицы, восстанавливающие свою структуру при растворении в воде после длительного хранения.

Необходимо также отметить, что известные способы получения инъекционной формы фосфолипидной композиции не предусматривают предохранение фосфолипидов в процессе технологической обработки от окисления. При гомогенизации эмульсия разогревается до 90°С, что ускоряет процесс окисления и образования лизофосфатидилхолина. Согласно нормативной документации содержание этого соединения в готовом препарате не должно превышать 3%. Анализ образцов, полученных известным способом, показал, что уровень лизофосфатидилхолина в них превышал 8%, что указывало на низкое качество препарата. В силу указанных причин препарат не мог быть разрешен к использованию в медицинской практике.

Задачей настоящего изобретения является устранение указанных недостатков и разработка технологии получения инъекционной формы лекарственного препарата "Фосфоглив" с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, содержащего глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты не более 4:1.

В соответствии с изобретением описывается способ получения инъекционной формы фосфолипидного препарата для лечения и профилактики заболеваний печени, нарушения липидного обмена и восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, глицирризиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соли и вспомогательные вещества при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты не более 4:1, путем смешения эмульсии растительных фосфолипидов в водном растворе глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли с водным раствором углевода, в качестве которого используют лактозу, мальтозу и/или изомальтозу, при рН 6,5-7,5, и полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают 5-22 циклам гомогенизации при комнатной температуре и давлении 800-1200 бар с последующими предварительной фильтрацией, стерилизующей фильтрацией и сублимационной сушкой.

Получают мелкодисперсные, однородные и стабильные липосомальные частицы размером 20-100 нм, из которых 95% составляют частицы размером 20-35 нм, что позволяет получать стабильный раствор, наиболее пригодный для внутривенного введения. Однородность частиц обеспечивает высокую прозрачность и стабильность раствора. Частицы восстанавливают свою структуру при растворении в воде после трехлетнего хранения.

Изобретение иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1.

Раствор А: 6,9 г динатриевой соли глицирризиновой кислоты растворяют в воде для инъекций и доводят объем до 90 мл. Добавляют 2,25 мл 1 н. NaOH (для достижения в конечном объеме 300 мл рН 6,7-7,5). Добавляют 16,5 г измельченного фосфолипида с содержанием фосфатидилхолина 80%. Растворение проводят на высокоэффективной пропеллерной мешалке в токе инертного газа (азот).

Раствор Б: Растворяют 59,4 г мальтозы в воде для инъекций, тщательно перемешивают на мешалке до тех пор, пока раствор не станет прозрачным, и доводят конечный объем до 150 мл. Можно добавить немного больше воды, чтобы (V раствора А+V раствора Б) 300 мл. Смешивают растворы А и Б. Доводят общий объем смеси до 300 мл водой для инъекций.

Гомогенизация раствора

Пропускают раствор через гомогенизатор (модель Mini-Lab 7.30 VH, Rannie, Дания) в течение 60 минут под давлением 800 бар. Охлаждение осуществляют через обратный холодильник. На этом этапе получают гомогенные по размеру липосомы диаметром 40-60 нм. Светопропускание (прозрачность) образца при 660 нм после гомогенизации не менее 60%.

Предфильтрация

Гомогенизированный раствор отфильтровывают под давлением азота 2 атм через мембрану ("Владипор") 3-4 мкм. Прозрачность раствора при 660 нм не менее 60%.

Стерилизующая фильтрация

Стерилизующую фильтрацию проводят в стерильной комнате в ламинаре (Ламинарбокс ЛБ-Г, Россия) на приборе напорного фильтрования (ПНФ-90, ЗАО "Мембраны", Россия) через фильтр ("Владипор") диаметром 0,2 мкм под давлением 3 атм. Прозрачность раствора 65%.

Стерильный розлив во флаконы

Дозатором в ламинарном потоке стерильного воздуха разливают раствор по 10 мл в темные флаконы и замораживают при -25°С.

Сублимационная сушка водного раствора

Замороженные образцы подвергают сублимационной сушке (LSL SECFROID, LYOLAB F, Германия) в течение 48 часов. Получают однородную липосомальную массу плотной консистенции. Флаконы с препаратом укупоривают резиновыми пробкам и закатывают алюминиевыми колпачками. Полученные образцы после трехлетнего хранения при комнатной температуре восстанавливают свою структуру при растворении в воде. Данные остальных примеров приведены в таблице.

Описываемый способ позволяет получить стабильный, высокоэффективный препарат с оптимальным размером наночастиц, который может использоваться в клинической практике в комплексном лечении различных заболеваний, сопровождающихся нарушениями функции печени.

Проведенные клинические исследования показали, что полученный в соответствии с изобретением препарат "Фосфоглив" лиофилизат для приготовления раствора для внутривенного введения обладает высокой эффективностью при лечении заболеваний печени различной этиологии. Внутривенная форма препарата хорошо переносится больными, не дает побочных реакций и приводит к заметному улучшению лабораторных показателей и общего состояния больных. Отмечено позитивное влияние препарата на репликативную активность вирусов гепатитов В и С, а также на иммунный и интерфероновый статусы, что позволяет рекомендовать его для использования в лечении хронических вирусных гепатитов и других заболеваний, при которых отмечается поражение печени.

Таблица измерений размеров (диаметра) частиц (мицелл) в препарате " Фосфоглив для инъекций"
№ п/п	Содержание ФХ*, %	Т% (660 нм) (светопропускание)	Размер частиц (нм)	Количество циклов гомогенизации, режим, температура и др. параметры.	Суммарное содержание ФЛ** и ГК***; %	Соотношение ФЛ и ГК
1	2	3	4	5	6	7
2	75	70%	1.22 нм (96%) и 68 нм (4%)	9 циклов гомогенизации при 1000 бар, Т средняя 45°С, рН 6,85	2%	4:1
			2.22 нм (94%) и 77 нм (6%)
			3,26 нм (95%) и 73 нм (7%)
			4.22 нм (95%) и 75 нм (5%)
			5.20 нм (90%) и 54 нм (10%)
3	75	72%	21±1,9 нм (44%±10%)и 51±7,6 нм (47,1%±14%)	500 мл при 1200 бар через 22 цикла, Т средняя 40°С	2%	3:1
4	80		27,2±7,6 нм (66,2%±13,4%);	10 циклов гомогенизации при 1000 бар, Т средняя 45°С	5%	2,5:1
			70±12,3 нм (34%±10%)
			28,5±7,4 нм (60%±18%);

Продолжение таблицы
1	2	3	4	5	6	7
			71,1±9,8 нм (43%±12%)
			25,4±4,3 нм (80%±10%);
			70,1±13,8 нм (20%±10%)
5	01109998	69%	20±1 и 44±5; 20±4 и 39±2; 21±3 и 53±10; 24±6 и 54±8; 25±5 и 55±10	300 мл при 800 бар 14 циклов, Т средняя 43°С, рН 6,2	30%	2,0:1
6	98	64%; 71% после л/ф	22±2,8 нм (47%)	Партия 1500 мл 3 раза по 500 мл, каждый прошел 7 циклов гомогенизации, рН 6,8	80%	1:1
			53±8 нм (43%)
			110±8,3 нм (10%) (после лиофилизации)
7	80	1) 61,5%	До сушки	Готовили 1500 р-ра, делили на 3 части по 500 мл	80%	2,5:1
		2) 69%	21±7 нм (42%±4%);
		3) 66%	60±3,3 нм (57,5%±5%)	Гомогенизировали: 1) 15 циклов при 800 бар,
		71% после	после	2) 6 циклов при 1100 бар и
		ф/л	24±5 нм (65%±10,5%);	3) 8 циклов при 1000 бар,
			71±11 нм (35%±9%)	прозрачность измеряли без

Продолжение таблицы
1	2	3	4	5	6	7
				фильтрации, затем все 3
				части объединили, сушили.
				Т средняя 46°С
				рН 6,69
8	78	76%	75,88 нм (1,62% по массе)	Гомогенизация в течение 5	50%	0,5:1
			23,02 нм (98,38% по массе)	циклов при 1000 бар,
				стартовая Т=40°С,
				Т средняя 45°С
9	85	78%	58,80 нм (1,01% по массе)	Гомогенизация в течение 6	80%	1,5:1
			19,02 нм (98,83% по массе)	циклов при 1000 бар,
				стартовая Т=40°С,
				Т средняя 45°С
10	Серия 02.09.02 (старая)	От 71,4% до 74,6%	8550,57 нм (9,64% по массе) 133,06 нм (0,34% по массе) 34,91 нм (90,03% по массе)		10%	2,5:1

Продолжение таблицы
1	2	3	4	5	6	7
			Та же серия, но другой флакон 6657,81 нм (6,65% по массе), 297,46 нм (0,07% по массе), 41,09 нм (93,28% по массе)	Гомогенизация в течение 10 циклов при 1000 бар, стартовая Т=40°С,
			Третий флакон серии 02.09.02 9063,63 нм (6,54% по массе), 139,63 нм (0,25% по массе), 35,20 нм (93,22% по массе)	Т средняя 45°С
11	80	67%	7876,79 нм (5,26% по массе), 87,70 нм (0,39% по массе), 21,79 нм (94,35% по массе)	Гомогенизация в течение 8 циклов при 1000 бар, стартовая Т=40°С, Т средняя 45°С	20%
ФХ* - фосфатидилхолин ФЛ** - фосфолипид ГК*** - глицирризиновая кислота или ее соль

Источники информации

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, М., 2001, т.1, стр.508.

2. RU 2133122, C1, A61K 31/685, 20.07.97.