способ лечения гиперхолестеринемических состояний у больных с желчнокаменной болезнью путем применения препарата "гепатосан", ускоряющего окисление холестерина в печени

Формула изобретения

Способ лечения гиперхолестеринемии у больных с желчнокаменной болезнью путем перорального введения лекарственного препарата, отличающийся тем, что вводят гепатосан, содержащий смесь высушенных гепатоцитов печени свиньи, в дозе 0,8 г в сутки в течение 2-х месяцев.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для коррекции нарушений липидного обмена.

Известно, что целый ряд патологических состояний сопровождается повышением уровня холестерина (ХС) в плазме крови - гиперхолестеринемией (ГХС). Она может быть результатом как избыточного поступления ХС (ускорения всасывания в кишечнике и активации синтеза в печени, стенке кишечника и других тканях), так и замедления выведения ХС из организма (метаболизма в печени, надпочечниках и половых железах, а также выведения с желчью и через сальные железы).

Основной путь элиминации ХС из организма состоит в окислении в желчные кислоты (ЖК), которое протекает в печени. Ключевым ферментом этого процесса является холестерол-7 -гидроксилаза, локализованная в эндоплазматическом ретикулуме и относящаяся к надсемейству цитохромов. Активность фермента контролируется множеством факторов, в том числе концентрацией самих ЖК (по принципу обратной отрицательной связи). Первичные ЖК - холевая и хенодезоксихолевая, в том числе введенные в диету, оказывают на 7 -гидроксилазу ингибирующее действие, а уменьшение поступления ЖК в печень (например, при дренировании желчного протока или применении связывающих смол) стимулирует фермент [Jelinek, D., Andersson S., Slaughter S., Russell D. Cloning and regulation of cholesterol 7ahydroxylase, the rate-limiting enzyme in bile acid biosynthesis // J. Biol. Chon. - 1990. - V.265. - P.8190-8197.]. Увеличение экспрессии 7 -гидроксилазы методами генной терапии приводит к существенному снижению плазменного уровня ХС у мышей (Izzat NN, Deshazer ME, Loose-Mitchell SL. New molecular targets for cholesterol lowering therapy. The Journal for Pharmacology and Experimental therapeutics. 2000; 293(2):315-320). В то же время защита от ГХС путем индукции 7 -гидроксилазы и ускорения желчегенеза выражена у крыс и собак, а у человека и у кроликов отсутствует. Из-за неиндуцируемости фермента пищевая нагрузка холестерином у человека не приводит к увеличению синтеза ЖК и, соответственно, сопровождается ростом уровня ХС в крови.

Такие особенности регуляции гомеостаза ХС в гепатоцитах были приняты во внимание при создании фармакологических препаратов, способствующих снижению уровня ХС в крови. К ним относятся статины, конкурентно угнетающие ключевой фермент синтеза ХС - ГМГ-КоА-редуктазу, фибраты, ингибиторы абсорбции холестерина (эзетимиб), секвестранты ЖК (колестимид и колесевилам) и др. (Климов А.Н. //Превентивная кардиология. - М., 1977. - С.260-321; Сусеков А.В. Гиперлипидемия - современное состояние проблемы и методы ее коррекции.// РМЖ. - т.11. - №5. - 2003 - с.28-32). К сожалению, эти препараты, помимо их высокой стоимости, обладают и некоторыми недостатками, проявляющимися при длительном лечении. Это хронические запоры, боли в мышцах, помутнение хрусталика глаза (катаракта), токсическое воздействие на печень, импотенция и др. Широко применяемые в настоящее время статины обладают выраженным гепатоповреждающим действием, вплоть до развития "статинового гепатита", и поэтому противопоказаны при активных заболеваниях печени.

Прототипом данного изобретения является отдельное направление в лечении гиперхолестеринемий - стимуляция синтеза ЖК с последующей их эвакуацией через кишечник, что сопровождается усиленным потреблением ХС на эти цели и снижением его плазменного уровня, что достигается, например, пероральным приемом холестирамина (Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А., Коган Э.М. Холестериноз. - М., 1983). Известно действие секвестрантов ЖК, связывающих их в кишечнике и препятствующих реабсорбции, что приводит к уменьшению пула ЖК в гепатоэнтеральной циркуляции и ускорению их новообразования путем активации окисления ХС в печени и, тем самым, его усиленного потребления (Reihnir E., Angelin В., Rudling M., Ewerth S., Bjorkhem I, Einarsson K. Regulation of hepatic cholesterol metabolism in humans: stimulatory effects of cholestyramine on HMG-CoA reductase activity and low density lipoprotein receptor expression in gallstone patients // J. Lipid Res. - 1990. - V.31. - P.2219-2226).

Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков. Применение указанных препаратов сопровождается выраженными побочными эффектами в виде диспепсии, тошноты, расстройства стула, а также нарушением переваривания и всасывания липидов, в том числе жирорастворимых витаминов и полиненасыщенных жирных кислот, вследствие связывания в кишечнике ЖК как эмульгирующих агентов. Секвестранты ЖК принимаются в фиксированных дозах, их нельзя сочетать с другими препаратами.

Дополнительные возможности для лечения ГХС может открыть обнаружение специфических индукторов 7 -гидроксилазы гепатоцитов. Их действие также должно сопровождаться усиленным потреблением ХС и снижением его плазменного уровня, но без побочных эффектов, свойственных секвестрантам ЖК.

Технический результат - ускорение окисление холестерина в клетках печени за счет повышения активности фермента 7-альфа гидроксилазы, расширение арсенала средств гипохолестеринового действия.

Предлагаемый способ лечения осуществляется следующим образом: больным с ГХС на фоне подтвержденного диагноза желчнокаменной болезни (ЖКБ) с билиарным сладжем для коррекции билиарной недостаточности и достижения гипохолестеринемического эффекта вводят клеточный препарат "Гепатосан" в дозе 0,8 г в сутки (по 2 капсулы 2 раза в день) в течение 2-х месяцев. Препарат представляет собой смесь лиофилизированных клеток донорской печени свиньи и был предложен ранее для коррекции печеночной недостаточности при заболеваниях печени различного генеза [Билиарная недостаточность при заболеваниях органов пищеварения. В.А.Максимов, А.Л.Чернышев, К.М.Тарасов, С.Д.Каратаев, А.Г.Куликов, С.Е.Бунтин, С.Н.Зеленцов. Materia Medica Бюллетень для фармацевтов №3 (39) - М.: 2003 г. - с.25].

В доступных источниках научно-технической и патентной информации авторами не был найден способ лечения ГХС у больных с ЖКБ и билиарным сладжем путем применения активаторов окисления ХС в печени. Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию "Новизна".

Для определения влияния препарата "Гепатосан" сравнительно с другими лекарственными средствами на активность 7 -гидроксилазы гепатоцитов авторы провели серию экспериментов на 48 беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г, которые содержались в стандартных условиях вивария. У животных вызывали ГХС путем перорального введения раствора ХС в растительном масле. В дальнейшем крысы получали медикаментозную терапию гепатосаном, карсилом, энтеросаном и аллохолом, а в группе контроля - воду. По окончании эксперимента животных забивали, определяли массу печени и рассчитывали весовой коэффициент, а также определяли концентрацию малонового диальдегида в гомогенате печени (по Стальной и Гаришвили) и уровень ХС в сыворотке крови ХС-оксидазным методом (Андреева А.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. Дело - 1988. - №41. - с.41-46).

Для определения активности гидроксилазы печени использовали ХС, меченый тритием в 7 -положении. Принцип метода основан на том, что в реакции окисления (гидроксилирования) ХС один атом трития переходит в состав воды. Таким образом, радиоактивность тритиевой воды ( ³H₂О) в моче отражает скорость гидроксилирования ХС в микросомальной системе печени (В.П.Твердохлиб, А.А.Никоноров, Ф.З.Меерсон и соав., авт. свид. SU 1476380 А1). Меченый ХС фирмы Amersham вводили крысам внутривенно в виде эмульсии с 10% альбумином накануне опыта, на 17-й день холестериновой диеты и на 21-й день с момента начала медикаментозной терапии. У животных затем собирали суточную мочу и определяли ее -активность на сцинтилляционном счетчике (с пересчетом на 1 мл мочи).

В группах животных, получавших медикаментозную терапию гепатосаном, карсилом, энтеросаном и аллохолом, наблюдались однонаправленные изменения в виде повышения радиоактивности мочи, т.е. имело место дополнительное ускорение гидроксилирования ХС в печени. Повышение активности 7- -гидроксилазы на фоне лечения гепатосаном было максимальным и составило 137% от контроля. Карсил оказался на втором месте, энтеросан - на третьем. В группе животных, получавших аллохол, повышения активности фермента не наблюдалось

Аналогичные тенденции отмечались и в отношении влияния препаратов на сывороточный уровень ХС. На фоне холестериновой нагрузки его содержание в плазме крови животных составляло более 10 ммоль/л (1,95 ммоль/л в контроле); при лечении гепатосаном уровень ХС снижался до 3,7 ммоль/л, в группе карсила - до 6,9 ммоль/л, энтеросана - до 7,9 ммоль/л, аллохола - до 9,1 ммоль/л.

Таким образом, действие лекарственных препаратов сопровождалось дополнительной индукцией микросомальной ХС-гидроксилазы, активизирующейся при ГХС, и корригирующим эффектом, который убывает в ряду гепатосан - карсил - энтеросан.

Использование предлагаемого способа позволяет производить коррекцию ГХС с исключением побочных эффектов применяемых ныне гиполипидемических препаратов и значительно расширить контингент больных с ГХС, которым может быть применен гепатосан, в силу отсутствия противопоказаний для его приема.

Как было показано в проведенных нами экспериментальных исследованиях на животных препарат гепатосан также обладает гипохолестеринемической активностью и действует путем активации 7 -гидроксилазы гепатоцитов, что соответствует критерию "Изобретательский уровень".

На базе Клиники БГМУ и РКБ им. Куватова под наблюдением находились 60 больных с диагнозом ЖКБ I ст.(билиарный сладж) и II стадии (Ильченко А.А. Билиарный сладж как начальная стадия желчнокаменной болезни //Consilium Medicum - том 6 /№6/ 2004). Диагноз подтверждался клиническими, инструментальными и лабораторными данными, включающими УЗИ органов брюшной полости, дуоденальное зондирование, биохимическое исследование крови (липидный профиль, печеночные пробы). Для коррекции билиарной недостаточности больным с дислипидемией и с неизмененной липидограммой назначался гепатосан в дозе 0,8 г в сутки в течение 2-х месяцев. Гепатосан представляет собой смесь лиофилизированных клеток донорской печени свиньи, в состав которой входят 17 заменимых и незаменимых аминокислот, микроэлементы, витамины, фосфолипиды, окислительно-восстановительные ферменты. Анализ дуоденального содержимого после курса гепатосана выявил уменьшение литогенных свойств желчи за счет увеличения пула желчных кислот, фосфолипидов, холатохолестеринового и фосфолипиднохолестеринового коэффициентов. В результате проведенного лечения нами также были зарегистрированы положительная атерогенная направленность изменений липидного профиля у больных с тенденцией к снижению уровней повышенного уровня плазменного ХС и липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), повышению уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами:

Пример 1. Больная А. 44 лет находилась на стационарном лечении в Клинике БГМУ с диагнозом желчнокаменная болезнь I стадии. Больная предъявляла жалобы на ощущение болей и дискомфорта в правом подреберье различной интенсивности и продолжительности, в основном, связанные с приемом пищи, периодически - ощущение горечи во рту.

По данным УЗИ: определяется гиперхогенная мелкозернистая структура печени с гипоэхогенными участками 5-6 сегментах диаметром от 9 до 17 мм, сглаженный сосудистый рисунок; протоки не расширены, холедох - 8 мм, свободен. Желчный пузырь - изогнутый, с перегибом, стенки его утолщены до 4,2 мм, в его полости определяется густая желчь на 1/4 объема. Размеры поджелудочной железы 24-19-20 мм, контуры ровные, структура однородная, уплотненная

Биохимические показатели крови: ХС 6,20 ммоль/л, ЛПВП-ХС - 1,10 ммоль/л, ACT 16 ед./л, АЛТ 11 ед/л, триглицериды 1,51 ммоль/л, билирубин общий 10,8 ммоль/л, СРБ отрицательный, щелоч. фосфотаза 160 ед./л, гамма - ГГТ 14,6 ед./л. При анализе дуоденального содержимого в желчи в порции В выявлено снижение уровня холевой кислоты до 14,1 ммоль/л (норма 18,6 ммоль/л), фосфолипидов до 2,98 ммоль/л (норма 3,58 ммоль/л) и повышение уровня холестерина до 11,64 ммоль/л (норма 8,9 ммоль/л).

Аналогичные изменения наблюдались в порции С: холевая кислота - 2,99 ммоль/л (норма - 3,49 ммоль/л), фосфолипиды - 0,37 ммоль/л (норма 0,40 ммоль/л), холестерин - 3,08 ммоль/л (норма 2,38 ммоль/л).

Больной для коррекции ГХС в стандартное лечение был включен гепатосан по 2 капсулы 2 раза в день за 30 минут до еды в течение 2-х месяцев. По окончании лечения больная отмечает улучшение самочувствия в виде исчезновения болевого синдрома, чувства тяжести в правом подреберье, горечи во рту.

При повторном УЗИ обследовании у больной отмечается уменьшение гиперэхогенности печени, восстановление размеров органа до нормы и исчезновение билиарного сладжа в желчном пузыре.

Биохимический анализ показал позитивные изменения в липидном спектре в сторону снижения холестерина до 5,20 ммоль/л, ЛПНП - до 3,10 ммоль/л, триглицеридов - до 1,49 ммоль/л, гамма ГГТ - 142 ед./л, повышение уровня ЛПВП - до 1,50 ммоль/л. В желчи отмечались однонаправленные изменения холестерина в сторону его снижения до 9,00 ммоль/л и до 2,36 ммоль/л в порциях В и С соответственно и повышение уровня желчных кислот до 18,1 ммоль/л и 3,49 ммоль/л в порциях В и С и уровня фосфолипидов до 3,36 ммоль/л и 0,44 ммоль/л в порциях В и С.

Пример 2. Больная В. 35 лет находилась на стационарном лечении в Клинике БГМУ с диагнозом нейроциркуляторная дистония с синдромом кардиалгии. В процессе обследования у нее была выявлена клинически латентное течение желчнокаменной болезни начальной стадии в форме взвеси гиперэхогенных частиц. В анамнезе больная отметила длительный прием противозачаточных препаратов. Жалоб по поводу диспепсии билиарного типа не предъявляла.

По данным УЗИ: определяется однородная гипоэхогенная структура печени; протоки не расширены, холедох - 7 мм, свободен. Желчный пузырь - изогнутый, стенки его утолщены до 4,1 мм, в его полости по задней стенке определяется гиперэхогенные включения без эхотени. Размеры поджелудочной железы 25-20-23 мм, контуры ровные, структура однородная, гиперэхогенная.

Биохимические показатели крови: ХС - 6,40 ммоль/л, ЛПВП-ХС - 1,30 ммоль/л, ACT - 13 ед/л, АЛТ - 16 ед./л, триглицериды - 1,46 ммоль/л, билирубин общий -11,8 ммоль/л, СРБ - отр., ГГТ - 15,6 ед./л.

При анализе дуоденального содержимого в желчи в порции В выявлено снижение уровня холевой кислоты до 13,4 ммоль/л, фосфолипидов до 2,39 ммоль/л и повышение уровня холестерина до 10,4 ммоль/л. Аналогичные изменения наблюдались в порции С: холевая кислота - 2,48 ммоль/л, фосфолипиды - 0,39 ммоль/л, холестерин - 3,11 ммоль/л.

Больной для коррекции ГХС в лечебный алгоритм был включен гепатосан по 2 капсулы 2 раза в день за 30 минут до еды в течение 2-х месяцев.

По окончании лечения при повторном УЗИ обследовании у больной выявлена однородная эхогенность печени и исчезновение эховзвеси в желчном пузыре.

Биохимический анализ показал позитивные изменения в липидном спектре в сторону снижения холестерина до 5,49 ммоль/л, триглицеридов - до 1,31 ммоль/л, ЛПНП - до 3,21, щелочной фосфотазы до 64 ед./л, гамма ГТ - до 13,1 ед./л, ACT и АЛТ - до 7 ед. и 9 ед. соответственно, биллирубина - до 10,7 ммоль/л, повышения уровня ЛПВП - до 1,69 ммоль/л.

В желчи отмечались однонаправленные изменения холестерина в сторону его снижения до 8,76 ммоль/л и до 2,39 ммоль/л в порциях В и С соответственно и повышение уровня желчных кислот до 79,45 ммоль/л и 3,28 ммоль/л в порциях В и С; фосфолипиды - 2,68 ммоль/л и 0,51 ммоль/л.

Типичные показатели лабораторного обследования больных, которым проводилось лечение гепатосаном, приведены в приложении. Предлагаемый способ лечения является более экономически выгодным по сравнению с другими липидемическими средствами, дает выраженный клинический эффект, не обладает побочными действиями и противопоказаниями. Может быть использован в любых клинических учреждениях, и, таким образом, соответствует критерию «Промышленная применимость».

Способ лечения гиперхолестеринемических состояний у больных с желчнокаменной болезнью путем применения препарата "Гепатосан", ускоряющего окисление холестерина в печени

Таблица 1
Биохимический состав желчи у больной «А» на фоне лечения гепатосаном (ммоль/л)
N=1	Пузырная желчь
	Холевая кислота	Холестерин	ХХК	ФЛ	ФХК
До лечения	14,1	11,64	1,22	2,98	0,26
После лечения	18,10	9,00	2,01	3,36	0,37
N=1	Печеночная желчь
	Холевая кислота	Холестерин	ХХК	ФЛ	ФХК
До лечения	2,90	3,08	0,94	0,37	0,12
После лечения	3,49	2,36	1,48	0,44	0,18

Таблица 2
Биохимический состав желчи у больной «В» на фоне лечения гепатосаном (ммоль/л)
N=1	Пузырная желчь
	Холевая кислота	Холестерин	ХХК	ФЛ	ФХК
До лечения	13,40	10,40	1,29	2,39	0,23
После лечения	17,45	8,76	1,99	2,68	0,31
N=1	Печеночная желчь
	Холевая кислота	Холестерин	ХХК	ФЛ	ФХК
До лечения	2,48	3,11	0,79	0,39	0,12
После лечения	3,28	2,39	1,37	0,51	0,21

Таблица 3
Биохимические показатели крови у больных ЖКБ I-II стадии (ммоль/л)
Группа	Концентрация липидов, ммоль/л
	ХС	ЛПВП	ЛПНП	ТГ	ЛОНП	АЛТ (ед)	ACT (ед)
Больная «А» до лечения	6,20	1,10	4,41	1,51	0,69	17,0	16,0
Больная«А»после лечения	5,20	1,50	3,10	1,32	0,60	16,0	11,0
Больная «В» до лечения	6,40	1,30	4,40	1,46	0,66	16,0	13,0
Больная «В» после лечения	5,49	1,69	3,21	1,31	0,59	7,0	9