способ получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины

Формула изобретения

Способ получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины путем смешивания коклюшного компонента, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, дозирования смеси в емкость, лиофилизации смеси и герметического запаивания емкости, отличающийся тем, что в качестве коклюшного компонента используют бесклеточный коклюшный анатоксин в концентрации 40-50 мкг/мл, смесь из бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов сорбируют на гидроксиде алюминия, вводят в смесь полиоксидоний в качестве иммуномодулятора в количестве 0,5-0,52 мкг/мл с последующим выдерживанием смеси в течение 18-20 ч при 4-10°С, затем добавляют сахарозу в количестве 5 г в мл до конечной концентрации 10% и выдерживают смесь в течение 1 ч при 4-10°С.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной, столбнячной вакцины (АКДС).

Известен способ получения АКДС путем смешивания 30 Lf дифтерийного и 10 ЕС столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, последующего добавления в смесь суспензии убитых коклюшных микробов, в конечной концентрации - 20 млрд микробных клеток, перемешивание смеси в течение 30 минут, дозирование смеси в емкость, лиофилизацию смеси и герметическое запаивание емкости (Руководство по вакцинно-сывороточному делу. - М.: Медицина, 1978 г., с.165-169).

Проблема получения высокоэффективной и слаботоксичной ассоциированной АКДС-вакцины для профилактики коклюшной, дифтерийной и столбнячной инфекций остается актуальной до последнего времени из-за реактогенности АКДС-вакцины не только из-за корпускулярного коклюшного компонента, но из-за присутствия в ней гидроксида алюминия, который может вызывать уплотнения, воспаление, покраснение, опухлость в месте введения препарата.

Снижение реактогенности АКДС-вакцины является одним из важных условий совершенствования этого препарата.

Технический результат заявленного способа заключается в получении высокоактивного и низкотоксичного препарата АКДС-вакцины.

Для достижения указанного технического результата в способе получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины путем смешивания коклюшного компонента, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, дозирование смеси в емкость, лиофилизацию смеси и герметическое запаивание емкости, согласно изобретению в качестве коклюшного компонента используют бесклеточный коклюшный анатоксин в концентрации 40-50 мкг/мл, смесь из бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов сорбируют на гидроксиде алюминия, вводят в смесь полиоксидоний в качестве иммуномодулятора в количестве 0,5-0,52 мкг/мл с последующим выдерживанием смеси в течение 18-20 часов при 4-10°С, затем добавляют сахарозу в количестве 5 г в мл до конечной концентрации 10% и выдерживают смесь в течение 1 часа при 4-10°С.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах.

Пример 1. Для приготовления 1 ампулы АКДС-вакцины, содержащей по 2 дозы для человека на 1 мл, смешивают 40 мкг белка бесклеточного коклюшного анатоксина, 30 Lf дифтерийного анатоксина, 10 ЕС столбнячного анатоксина, 0,132 мг гидроксида алюминия аммиачного. Смесь встряхивают в течение 1 часа при 4-10°С, добавляют 0,5 мкг полиоксидония и оставляют на 18-20 часов при 4-10°С. Затем добавляют 5 г сахарозы до конечной концентрации 10%, смесь осторожно перемешивают, выдерживают 1 час при 4-10°С, разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофилизируют. После лиофилизации ампулы запаивают под вакуумом и хранят при 4-10°С. При использовании в 1 ампулу добавляют 1,0 мл апирогенной стерильной дистиллированной воды. Доза, вводимая человеку - 0,5 мл.

Пример 2. Для приготовления 1 ампулы АКДС-вакцины, содержащей 2 дозы для человека на 1 мл, смешивают 50 мкг белка бесклеточного коклюшного анатоксина, 30 Lf дифтерийного анатоксина, 10 ЕС столбнячного анатоксина, 0,132 мг гидроксида алюминия аммиачного. Смесь встряхивают в течение 1 часа при 4-10°С, добавляют 0,52 мкг полиоксидония и оставляют на 18-20 часов при 4-10°С. Затем добавляют 5 г сахарозы до конечной концентрации 10%, смесь осторожно перемешивают, выдерживают 1 час при 4-10°С, разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофилизируют. После лиофилизации ампулы запаивают под вакуумом и хранят при 4-10°С. При использовании в 1 ампулу добавляют 1,0 мл апирогенной стерильной дистиллированной воды. Доза, вводимая человеку - 0,5 мл.

Как известно, гидроксид алюминия, входящий в состав АКДС-вакцины, необходим для проявления протективных свойств белковых антигенов, входящих в их состав: бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, но поскольку он обладает реактогенностью, уменьшение его в вакцине снижает реактогенность препарата. Однако при этом происходит снижение протективных свойств компонентов, входящих в состав вакцины (табл.1).

Таблица 1 Протективная активность компонентов, входящих в АКДС-вакцину с полиоксидонием и без него
Препарат	Кол-во гидроксида алюминия в мг/мл	Кол-во полиоксидония в мкг/мл	Кол-во *МЗЕ в мл коклюшного компонента	Кол-во **МИЕ в мл дифтерийного компонента	Кол-во **МИЕ в мл столбнячного компонента
АКДС сер.5	0,53	-	8,8	163,7	416,9
АКДС сер.1	0,265	-	11,1	43,8	221,1
АКДС сер.2	0,265	0,5-0,52	8,1	66,4	282,2
АКДС сер.3	0,132	0,5-0,52	8,4	72,3	350,3
АКДС сер.4	0,066	0,5-0,52	11,1	57,8	201,1
Требования ВОЗ к изученным препаратам (не менее)			8,0	60,0	120,0
*МЗЕ - международные защитные единицы. **МИЕ - международные иммунизирующие единицы.

Применение иммуномодулятора полиоксидония в дозе 0,5-0,52 мкг/мл дало возможность снизить содержание гидроксида алюминия до 0,132 мг/мл. При этом все компоненты АКДС-вакцины сохраняли высокие протективные свойства и отвечали требованиям ВОЗ.

Препараты АКДС-вакцины, полученные заявляемым способом, были менее токсичными по сравнению с таковыми, полученными известным способом. Так в реакции чувствительности к гистамину гибель мышей составляла 30%, в то время, как в последних она достигала 62,26%.

Полученные данные свидетельствовали о высоких протективных свойствах и сниженной токсичности АКДС-вакцины, полученной по заявляемому способу и содержащей в 8 раз меньше гидроксида алюминия, в сравнении с препаратами, полученными известным способом.

Преимущество изобретения в том, что разработан способ получения высокоактивного и низкотоксичного препарата АКДС-вакцины.