способ лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей, и лекарственный препарат для его реализации

Формула изобретения

1. Способ лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов, путем энтерального введения фермента ДНКазы, отличающийся тем, что фермент ДНКазу вводят в дозах от 2000 до 500000 ед. Кунца на 1 кг массы тела в сутки.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что фермент ДНКазу вводят орально.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют лекарственную форму, обеспечивающую освобождение фермента в ротовой полости.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют лекарственную форму, обеспечивающую освобождение фермента в желудке.

5. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют лекарственную форму, обеспечивающую освобождение фермента в тонком кишечнике.

6. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют лекарственную форму, обеспечивающую освобождение фермента в толстом кишечнике.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что фермент ДНКазу вводят ректально.

8. Лекарственный препарат для лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов человека, содержащий биологически активное вещество - фермент ДНКазу, отличающийся тем, что содержание фермента ДНКазы в единичной дозе препарата составляет от 50000 до 5000000 ед. Кунца.

9. Лекарственный препарат по п.8, отличающийся тем, что выполнен в виде таблетки для приема через рот.

10. Лекарственный препарат по п.8, отличающийся тем, что выполнен в виде капсулы для приема через рот.

11. Лекарственный препарат по п.8, отличающийся тем, что выполнен в виде суппозитория для ректального введения.

12. Лекарственный препарат по п.8, отличающийся тем, что выполнен в виде жевательной резинки или орально-буккальной пленки, или сублингвальной таблетки.

13. Лекарственный препарат по п.8, отличающийся тем, что выполнен с возможностью дозирования в виде зубной пасты или зубного геля, или порошка, или ополаскивателя полости рта, жевательной резинки, орально-буккальной пленки или сублингвальной таблетки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения и профилактики широкого круга заболеваний, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов человека. Круг подобных заболеваний широк и включает следующие основные группы заболеваний:

- заболевания пролиферативной природы, сопровождающиеся ускоренным размножением и избыточной гибелью собственных клеток организма, например, опухолевые и гиперпластические процессы; высокое содержание внеклеточной ДНК связано с плохим прогнозом заболевания (Lecomte Т., et al., Detection of free-circulating tumor-associated DNA in plasma of colorectal cancer patients and its association with prognosis. Int J. Cancer 2002 Aug. 10; 100(5):542-8;

- заболевания инфекционной природы, связанные с размножением инфекционного агента, например, бактериальные, вирусные, грибковые, протозойные инфекции, дисбактериозы; внеклеточная ДНК при подобных заболеваниях является либо самостоятельным патогенным фактором, например, в случае инфекций, вызываемых ДНК-содержащими вирусами, либо способствует развитию микроорганизмов, являясь основой внеклеточного матрикса их колоний (Extracellular DNA required for bacterial biofilm formation, Cynthia В Whitchurch et al., Science. 2002 Feb. 22; 295(5559):1487), участвуя в генетической трансформации микроорганизмов (Transformation of malaria parasites by the spontaneous uptake and expression of DNA from human erythrocytes. Deitsch K., Driskill С., Wellems Т.: Nucleic Acids Res. 2001 Feb. 1; 29(3):850-3), либо осложняет их течение, формируя основу гнойно-некротических масс (Zaman S., et al. Direct amplification of Entamoeba histolytica DNA from amoebic liver abscess pus using polymerase chain reaction, Parasitol Res. 2000 Sep; 86(9):724-8.); With S.Sherry and L.R.Christensen. Presence and significance of desoxyribose nucleoprotein in the purulent pleural exudates of patients. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1948, 68:179-84;

- заболевания, являющиеся следствием атрофических, дегенеративных и воспалительных изменений в органах и тканях, например, системная красная волчанка; внеклеточная ДНК при этом является одним из ключевых факторов патогенеза заболевания (Pisetsky D.S., Immune response to DNA in systemic lupus erythematosus. Isr Med Assoc J., 2001 Nov.; 3(11):850-3); ДНК, образующееся из гибнущих клеток, может ускорять процессы старения и атрофии тканей человека, US 6524578.

Известны способы лечения ряда из перечисленных заболеваний, путем энтерального применения определенных ферментов; в частности, в патенте СА 2394856 описывают энтеральное введение ферментов, разрушающих поверхностные белки, липиды и углеводороды клеток для лечения инфекционных заболеваний. Этот способ не обеспечивает разрушения дезоксирибонуклеиновых кислот, являющихся одним из основных компонентов как межклеточного матрикса растущих микроорганизмов, так и гнойных детритных масс и, как следствие, данный способ недостаточно эффективен в лечении инфекционных заболеваний.

Известен способ лечения заболеваний, сопровождающихся воспалением, путем орального применения комплекса протеолитических и липолитических ферментов Бромелайн, GB 984464. Применяемые по описанному способу композиции также не содержат ферментов, разрушающих дезоксирибонуклеиновые кислоты. В связи с низкой лечебной эффективностью описанный способ не нашел самостоятельного применения в клинической фармакологии и используется лишь в качестве вспомогательного (Bromelain: biochemistry, pharmacology and medical use, Maurer H.R., Cell Mol Life Sci 2001 Aug 58: pp.1234-45).

Известен способ системной энзимотерапии (СЭТ), основанный на применении композиций протеолитических ферментов, вводимых перорально или в виде клизм в высоких дозах (Wrba, Н. & Pecher, О. Enzymes: A Drug of the Future. Ecomed Verlagsgesellschaft AG & Co., 1993).

Известны также способы лечения заболеваний человека, сопровождающихся воспалением, основанные на энтеральном введении комплекса ферментов, содержащего кроме гликолитических, протеолитических и липолитических ферментов, также и ферменты, разрушающие дезоксирибонуклеиновую кислоту (дезоксирибонуклеазы, ДНКазы), GB 1005985.

В патенте GB 1005985 описан способ лечения воспалительных заболеваний путем орального введения комбинации ферментов, в том числе стептодорназы (стрептококковой ДНКазы) и химических противовоспалительных субстанций; в патенте указано на предпочтительное использование именно протеолитических ферментов, получаемых из поджелудочной железы; также делается вывод об отсутствии влияния дозы используемых ферментов на эффективность лечения.

Среди известных способов лечения, основанных на энтеральном применении ферментов ДНКаз, наиболее близким к заявляемому способу является способ лечения широкого круга заболеваний, сопровождающихся воспалением, основанный на энтеральном введении фермента ДНКазы путем приема таблеток Varidase, содержащих комплекс ферментов стерептокиназы и стрептодорназы (ДНКаз). Способ лечения основан на энтеральном введении от 4 до 8 таблеток Varidase в день для лечения некоторых заболеваний, сопровождающихся воспалением (ROTE LISTE Buch 2004; ISBN 3-87193-286-8, Rote Liste Service GmbH), и получил наибольшее распространение: Continued marketing of a useless drug ('Varidase') in Panama. Lee D., Lancet 1990 Mar, pp.335:667.

Главным недостатком этого способа является его низкая лечебная и профилактическая эффективность как для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, так и для лечения заболеваний других органов, что связано с отсутствием абсорбции фермента в системную циркуляцию. Это отмечается, в частности, в работе: Orally and rectally administered streptokinase. Investigation of its absorption and activity; Oliven A., Gidron E.; Pharmacology, 1981 vol.22: pp.135-8.

Известен лекарственный препарат для орального приема (Varidase), содержащий стрептококковые ферменты стрептокиназу (протеолитический фермент) и стрептодорназу - стрептококковую дезоксирибонуклеазу. Препарат содержит 10000 единиц стрептокиназы и 2500 единиц стрептодорназы в одной таблетке (ROTE LISTE Buch 2004; ISBN 3-87193-286-8, Rote Liste Service GmbH).

Данный препарат принят в качестве прототипа заявленного лекарственного препарата.

Низкая эффективность препарата стала одной из основных причин того, что таблетки Varidase были сняты с производства и отменена их регистрация как лекарственного средства во многих странах мира и, в частности, в США. Одним из основных аргументов являлась их фармакологическая неэффективность (Department of Health and Human Services Food and Drug Administration; Federal Register, Vol.50, N240; Dec.13, 1985).

В основу настоящего изобретения по п.п.1-7 положено решение задачи создания эффективного способа лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов.

Согласно изобретению (п.п.1-7) эта задача решается за счет того, что в способе лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов, путем энтерального введения фермента ДНКазы, фермент ДНКазу вводят в дозах от 2000 до 500000 ед. Кунца на 1 кг массы тела в сутки; при этом в способе фермент ДНКаза может быть введен орально; при этом в способе может быть использована лекарственная форма, обеспечивающая освобождение фермента в ротовой полости; при этом в способе может быть использована лекарственная форма, обеспечивающая освобождение фермента в желудке; при этом в способе может быть использована лекарственная форма, обеспечивающая освобождение фермента в тонком кишечнике; при этом в способе может быть использована лекарственная форма, обеспечивающая освобождение фермента в толстом кишечнике; при этом в способе фермент ДНКазы может быть введен ректально.

В основу изобретения по п.п.8-13 положено решение задачи создания лекарственного препарата для реализации заявляемого способа.

Согласно изобретению (п.п.8-13) эта задача решается за счет того, что в лекарственном препарате для лечения заболеваний человека, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов человека, содержащем биологически активное вещество - фермент ДНКазу, содержание фермента ДНКазы в единичной дозе препарата составляет от 50000 до 5000000 ед. Кунца; при этом лекарственный препарат может быть выполнен в виде таблетки для приема через рот; при этом лекарственный препарат может быть выполнен в виде капсулы для приема через рот; при этом лекарственный препарат может быть выполнен в виде суппозитория для ректального введения; при этом лекарственный препарат может быть выполнен в виде жевательной резинки или орально-буккальной пленки, или сублингвальной таблетки; при этом лекарственный препарат может быть выполнен с возможностью дозирования в виде зубной пасты или зубного геля, или порошка, или ополаскивателя полости рта, жевательной резинки, орально-буккальной пленки или сублингвальной таблетки.

Заявителем впервые было установлено, что при энтеральном приеме только высоких доз фермента, превышающих 2000 KU/кг/сутки, наблюдается достоверное увеличение ДНК-гидролитической активности в моче и нарастает содержание в моче иммунореактивного фермента ДНКазы I (таблица 1). Данные изменения имеют в диапазоне доз от 2000 до 500000 KU/кг/сутки доза-зависимый характер. В целом это свидетельствует о том, что при энтеральном приеме высоких доз ДНКазы происходит абсорбция каталитически значимых количеств фермента в кровь. Подобное открытие делает возможным создание эффективных энтеральных лекарственных форм ДНКазы для лечения заболеваний, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов человека, вне пределов пищеварительного тракта.

Благодаря реализации отличительных признаков изобретения достигается важный новый результат: обеспечивается эффективность и безопасность лечения широкого круга заболеваний, сопровождающихся повышенным содержанием дезоксирибонуклеиновой кислоты во внеклеточных пространствах тканей и органов; кроме того, важным свойством способа является техническая простота реализации изобретения (как способа, так и препарата).

Кроме того, как было установлено заявителями, при осуществлении заявляемого способа для лечения инфекционных заболеваний происходит угнетение формирования биопленок патогенных микрорганизмов, а также подавление возникновения и селекции лекарственно-резистентных клонов микроорганизмов. Данное обстоятельство позволяет использовать заявляемый способ для осуществления контроля за развитием и распространением лекарственной устойчивости среди как нормальной, так и среди патогенной микрофлоры организма человека.

Расчетное количество бычьей панкреатической ДНКазы I активностью 3500 KU/мг (производства Seravac; ЮАР) растворяли в воде и вводили однократно энтерально (per os) 24 здоровым добровольцам (по 3 добровольца на одну дозу). После этого в течение 12 часов осуществляли сбор суммарной мочи; определяли вискозиметрическим методом ДНК-гидролитическую активность мочи, KU на 1 мл суммарной мочи; наличие бычьей сывороточной ДНКазы I в суммарной фракции ДНКазы I определяли по изменению картины электрофореграммы при гель-электрофорезе с изоэлектрофокусированием. Результаты исследования приведены в таблице 1.

Таблица 1
Доза ДНКазы (KU/кг) однократно	0	250	1000	2000	20000	35000	50000	100000	500000
ДНК-гидролитическая активность мочи, KU/мл	0,11	0,13	0,09	0,5	0,9	5,2	10,3	17,0	37,9
Наличие бычьей панкреатической ДНКАзы I в суммарной фракции ДНКазы крови	-	-	-	+	+	+	++	++	+++

Реализация изобретения по п.п.8-13 иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1.

Твердая дозированная форма ДНКазы для переорального приема следующего состава:

Сухая бычья панкреатическая ДНКаза	100000 ед. Кунца
Магния стеарат	2,5 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	50 мг
Лактоза	до образования таблетки
	массой 200 мг

Лекарственную форму готовят следующим образом: сухую бычью панкреатическую ДНКазу активностью 3500 KU/мг (производства Seravac; ЮАР) (из расчета 100000 ед. Кунца (около 28 мг на 1 таблетку) смешивают с магния стеаратом, смачивают, гранулируют. Смешивают с лактозой и микрокристаллической целлюлозой в количестве, необходимом для получения таблеток массой 200 мг, смесь прессуют в таблетки.

Пример 2:

Капсульная дозированная форма ДНКазы для переорального приема следующего состава:

Сухая бычья панкреатическая ДНКаза	1000000 ед. Кунца
Магния стеарат	2,5 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	40 мг

Лекарственную форму готовят следующим образом: сухую кристаллическую бычью панкреатическую ДНКазу активностью 3500 KU/мг (производства Seravac; ЮАР) из расчета 1000000 ед. Кунца (около 280 мг на 1 капсулу) смешивали с магния стеаратом и микрокристаллической целлюлозой, увлажняли, прессовали и гранулировали. Гранулят засыпали в целлюлозные капсулы.

Пример 3.

Мягкая дозированная лекарственная форма для ректального применения следующего состава (на 1 свечу весом 3 г).

Бычья панкреатическая ДНКаза	5000000 ед. Кунца
Твердая жировая основа	1600 мг

Пример 4

Дозированная лекарственная форма в виде пластин для орального использования (жевательная резинка).

Бычья панкреатическая ДНКаза	1000000 ед. Кунца
Резиновая основа	2500 мг
Сахар, декстроза, тапиока, воск	до 3000 мг

Реализация заявленного способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 5.

Лечение онкологических заболеваний.

В исследование было включено 9 больных, поступивших в клинику хирургии с диагнозом рецидива рака молочной железы. Всем больным ранее выполнялось оперативное и химио-лучевое лечение заболевания. Всем больным при госпитализации установлены противопоказания к дальнейшему оперативному и химио-лучевому лечению. Все больные имели измеряемые метастазы в печени и/или легких. Все больные дали согласие на осуществление лечения. На момент начала исследования ожидаемая продолжительность жизни больных составляла не менее 3 месяцев.

1 группа больных (3 человека) получала капсулы-плацебо в течение трех месяцев.

2 группа больных (3 человека) получала капсулы по примеру 2 в суточной дозе 5000000 ед. Кунца в течение трех месяцев.

3 группа больных (3 человека) получала таблетки Varidase (производства Wyeth) в максимальной рекомендованной дозе 10 таблеток в сутки (25000IU стрептодорназы в сутки) в течение 3 месяцев.

Одна больная группы 3 была госпитализирована через 9 недель после начала лечения в связи с резким ухудшением самочувствия и прогрессированием метастазирования и скончалась в клинике через 3 дня после госпитализации.

Через 3 месяца после начала лечения больные были повторно госпитализированы. Всем больным была проведена контрольная компьютерная томография, осуществлено клиническое и биохимическое исследование крови, произведена оценка общего состояния по шкале Карновского.

У всех больных групп 1 и 3 отмечено увеличение размеров метастатических узлов в печени и легких, появление новых метастатических очагов, выявлено снижение в среднем на 30% индекса Карновского. У трех больных из пяти заметно ухудшились биохимические показатели крови (снижение содержания альбумина в сыворотке, нарастание гепатоцитолитического синдрома, анемии и биохимических признаков воспаления).

У больных группы 2 при повторном томографическом исследовании не выявлено признаков увеличения размеров ранее имевшихся метастатических узлов и не отмечено появления новых. В одном случае отмечено увеличение индекса Карновского на 40%. У двух других больных индекс Карновского не изменился. Отмечено повышение содержания сывороточного альбумина и гемоглобина крови у всех трех больных.

Пример 6.

Лечение инфекционного мононуклеоза, вызываемого ДНК-содержащим вирусом EBV.

В исследование было включено 20 больных в возрасте от 15 до 28 лет с иммунологически подтвержденным диагнозом инфекционного мононуклеоза. Больные были разбиты на 3 группы:

1 группа больных (8 человек) получала таблетки-плацебо в течение 5 суток и стандартную симптоматическую терапию (глюкокортикоиды и антибиотики).

2 группа больных (6 человек) получала таблетки по примеру 1 в суточной дозе 25000 ед. Кунца на кг массы тела в течение 5 суток.

3 группа больных (3 человека) получала таблетки Varidase (производства Wyeth) в максимальной рекомендованной дозе 10 таблеток в сутки (25000IU стрептодорназы в сутки) в течение 5 суток.

Результаты лечения приведены в таблице 2.

Таблица 2
Синдром	Сроки исчезновение синдрома после начала заболевания (сут)
	1 группа	2 группа	3 группа
Лихорадка	12	7	11
Периферическая лимфоаденопатия	16	9	17
Тонзилит	15	11	14
Гепатоспленомегалия	17	12	18

Пример 7.

Лечение флегмон челюстно-лицевой области

В исследование было включено 15 больных в состоянии средней тяжести, поступивших в клинику челюстно-лицевой хирургии с диагнозом флегмона челюстно-лицевой области. Больные были разделены на 3 группы:

1 группа больных (5 человек) получала таблетки-плацебо в течение трех суток и стандартную антибактериальную терапию в течение пяти суток (цефотаксим 3 г в сутки внутримышечно).

2 группа больных (5 человек) получала таблетки по примеру 1 в суточной дозе 1500000 ед. Кунца (15 таблеток) в течение 3 суток и стандартную антибактериальную терапию в течение 5 суток (цефотаксим 3 г в сутки внутримышечно).

3 группа больных (5 человек) получала таблетки Varidase (производства Wyeth) в максимальной рекомендованной дозе 10 таблеток в сутки (25000IU стрептодорназы в сутки) в течение 3 суток и стандартную антибактериальную терапию в течение 5 суток (цефотаксим 3 г в сутки внутримышечно).

Результаты лечения приведены в таблице 3.

Таблица 3
	Группа 1	Группа 2	Группа 3
Сроки прекращения лихорадки после начала лечения	5 день	2 день	5 день
Сроки очищения раны после начала лечения	7 день	3 день	6 день
Сроки закрытия раны после начала лечения	12 день	7 день	11 день
Наличие резистентных к применяемому антибиотику микроорганизмов	2 из 5	0	1 из 5

Пример 8.

Лечение пародонтита.

В исследование было включено 30 пациентов со средне-тяжелой степенью пародонтита. В начале исследования всем пациентам удаляли зубные отложения и обучали стандартному методу чистки с использованием зубных нитей и межзубных ершиков. Пациенты были разбиты на 3 группы:

1 группа - 10 пациентов в дальнейшем использовали только зубную пасту Колгейт;

2 группа - 10 пациентов в дальнейшем использовали зубную пасту Колгейт и применяли жевательную резинку с ДНКазой по примеру 4 (по 1/4 пластины жевалось в течение 30 минут 4 раза в сутки) в течение 4 недель.

3 группа - 10 пациентов в дальнейшем использовали зубную пасту Колгейт и применяли таблетки Varidase Buccal Tablets в течение 4 недель;

Определяли показатели индекса Силенса и Лоэ (индекс гигиены полости рта) и индекса Мюллермана (индекс кровоточивости десневой бороздки) до начала исследования и его окончании.

Результаты исследования приведены в таблице 4.

Таблица 4
Группы	Индексы	До лечения	После лечения
1 Группа	Силенс и Лоэ	1,77±0,27	1,31±0,35
	Мюллермана	1,4±0,55	0,65±0,31
2 Группа	Силенс и Лоэ	1,78±0,37	0,71±0,38
	Мюллермана	1,35±0,б7	0,29±0,21
3 Группа	Силенс и Лоэ	1,74±0,35	1,23±0,45
	Мюллермана	1,48±0,41	0,8±0,32

Пример 9.

Лечение системной красной волчанки.

В исследование было включено 16 пациентов с установленным диагнозом системной красной волчанки и лабораторными симптомами гломерулонефрита (протеинурия, микрогематурия). Все пациенты получали стандартную терапию (нестероидные противовоспалительные средства, хлороквин). Пациенты опытной группы (8 человек) получали дополнительно свечи по примеру 3 в дозе 250000 ед. Кунца на кг массы тела в сутки на протяжении 15 суток. Изучали концентрацию ДНК в плазме крови до начала лечения и после его окончания. Содержание ДНК в плазме у контрольных больных достоверно не изменилось. У больных опытной группы выявлено двукратное снижение ДНК в плазме крови по окончании 15-дневного курса лечения.

Пример 10.

Лечение возрастного нарушения подвижности сперматозоидов.

В исследование были включены 18 здоровых мужчин-добровольцев в возрасте от 50 до 55 лет. Пациенты были разделены на 3 группы:

1 группа пациентов (7 человек) получала капсулы-плацебо в течение 30 суток;

2 группа пациентов (6 человек) получала капсулы по примеру 2 в суточной дозе 35000 ед. Кунца на кг массы тела в течение 30 суток;

3 группа пациентов (5 человек) получала таблетки Varidase (производства Wyeth) в максимальной рекомендованной дозе 10 таблеток в сутки (25000IU стрептодорназы в сутки) в течение 5 суток.

Исследовали подвижность сперматозоидов в образцах спермы у пациентов в трех группах до начала лечения и по его завершении. До начала лечения процентное содержание подвижных сперматозоидов в образцах спермы у пациентов всех трех групп находилось в пределах 46-54%. Показатели содержания подвижных сперматозоидов у пациентов групп 1 и 3 после лечения не изменились. Содержание подвижных сперматозоидов в образцах спермы пациентов 2-й группы после лечения составило 58-62%.

Пример 11

Влияние заявляемого способа на число выявляемых у больных бактерий-мутантов, устойчивых к рифампицину. Осуществляли посев микрофлоры носоглотки у больного, получавшего лечение рифампицином (1), и больного, получавшего лечение рифампицином парралельно с лечением по заявляемому способу (2). Посевы высевали на агаризованную среду, содержащую рифампицин 50 мкг/мл. Число КОЕ оценивали серийными разведениями с высевами на агаризованную среду без антибиотика (см. табл.5).

Таблица 5
Больной	Число КОЕ	Число клонов, устойчивых к рифампицину
1	(3,7±0,6)×10 9	110
2	(2,0±0,1)×10 8	2-3

Из таблицы 5 видно, что у больного, получавшего антибиотик совместно с лечением по заявляемому способу, высевалось на порядок меньшее число микрорганизмов и среди них всего несколько рифампицин-устойчивых клонов.

Пример 12

Влияние заявляемого способа на число высеваемых у больных мутантов, устойчивых к гентамицину.

Осуществляли посев кала больных, получивших курс лечения гентамицином по поводу острой кишечной инфекции. Посев осуществляли на следующий день после окончания курса лечения. Смешанные культуры выращивали в пробирках как планктонный рост в течение 24 часов. Количество жизнеспособных клеток оценивали по числу КОЕ (колониеобразующих единиц) после 24 часов роста высевами на агаризованную среду, содержащую антибиотик (Км, 50 мкг/мл). В таблице 6 представлены усредненные результаты для группы контрольных больных (Группа А; 3 человека) и группы больных, получавших параллельное лечение по заявляемому способу (Группа Б; 3 человека) (см. табл.6).

Таблица 6
	Число КОЕ
Группа А	1,8×1010
Группа Б	2,8×10 9

Из таблицы 6 видно, что у больных, получавшего антибиотик совместно с лечением по заявляемому способу, высевалось на порядок меньшее число микрорганизмов, устойчивых к гентамицину.