тоник для роста волос

Формула изобретения

Соединение, представленное формулой (I)

где R¹ и R ² являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу или С_2-6-алканоильную группу;

Х представляет собой атом водорода или атом галогена;

R ^3а и R^3b являются разными, и каждый из них представляет собой атом водорода или гидроксильную группу; и

R⁴, R⁵, R ⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, атом галогена или С_2-6-алканоилоксигруппу, или указанные группы, которые являются смежными, вместе образуют связь или эфирную связь, или R⁵ и R⁸ или R⁵ и R ⁹ вместе образуют эфирную связь.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к промотору роста клеток сосочков дермы, к стимулятору роста волос и к тонику для роста волос. Более конкретно, оно относится к промотору роста клеток сосочков дермы, к стимулятору роста волос и к тонику для роста волос, включающему в качестве активного ингредиента ингибитор функции WNT-5A. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу скрининга промотора роста клеток сосочков дермы, основанному на эффекте ингибирования функции WNT-5A.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Волосяные фолликулы человека состоят из эпителиальных и мезенхимальных клеток дермы, таких как кератиноциты, клетки сосочков дермы, фибробласты и сальные клетки, и цикл роста волос (цикл развития волоса) контролируется через взаимодействия между этими клетками. Стержневая структура волоса формируется посредством пролиферации/дифференцировки (кератинизации) фолликулярных кератиноцитов. Сосочки дермы регулируют пролиферацию, дифференцировку и апоптоз этих фолликулярных кератиноцитов и, таким образом, играют ключевую роль в контроле цикла развития волоса. Поэтому при разработке стимулятора роста волос/тоника для роста волос, важно исследовать действие на клетки сосочков дермы. Однако молекулярный механизм, регулирующий способность клеток сосочков дермы к пролиферации и способность контролировать цикл роста волос, до настоящего времени оставался практически не выясненным.

С другой стороны, WNT-5A представляет собой секреторный гликопротеин, относящийся к семейству WNT. Семейство WNT включает около 20 видов молекул, встречающихся в широком ряде организмов, от нематод до млекопитающих. Известно, что эти WNT являются важными межклеточными сигнальными молекулами, регулирующими формирование позвоночника и формирование органов на стадии развития плода (Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 14, 59-88 (1998); Genes & Dev. 11, 3286-3305 (1997)). У человека существует 10 видов рецепторов WNT, которые являются Frizzled семиканальными трансмембранными рецепторами (Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 14, 59-88 (1998), Genes & Dev., 11, 3286-3305 (1997)). В зависимости от комбинаций связи WNT-Frizzled существует 3 типа пути сигнальной трансдукции (т.е., путь WNT/ -катенин, путь PCP и путь WNT/Ca²⁺ ) (Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 14, 59-88 (1998)).

В последние годы было выяснено, что путь WNT/ -катенин является фундаментальным для формирования волосяных фолликул (Genes & Dev., 8, 2691-2703 (1994); Cell, 95, 605-614 (1998); Dev. Biol., 207, 133-149 (1999); Genes & Dev., 14, 1181-1185 (2000); Cell, 105, 533-545 (2001)). В 1988 была получена трансгенная мышь со стабилизированным -катенином в коже. Сообщалось, что такая мышь демонстрировала повышенный de novo фолликулярный морфогенез, и в результате это приводило к гипертрихозу (Cell, 95, 605-614 (1998)). В 2000 году было сообщение, что сигнальный путь WNT/ -катенин играет важную роль в поддержании активности сосочков дермы, индуцирующих рост волос (Genes & Dev., 14, 1181-1185 (2000)).

Однако было выяснено, что сигнальная трансдукция от WNT-5A опосредована не путем WNT/ -катенин, а путем Ca²⁺ (Dev. Biol ., 182, 114-120 (1997); Curr. Biol., 9, 695-698 (1999)), и до настоящего времени не было никаких сообщений относительно взаимосвязи между WNT-5A и фолликулярным морфогенезом.

Кроме того, сообщалось, что дупликация эмбрионной оси индуцируется инъекцией мРНК WNT-5A Xenopus laevis вместе с мРНК Frizzled 5 человека в эмбрион Xenopus laevis на ранней стадии развития (Science, 275 , 1652-1654 (1997)), тогда как дупликация оси, индуцированная инъекцией мРНК WNT-1 или WNT-8, ингибируется посредством WNT-5A (J. Cell Biol., 133, 1123-1137 (1996)), и что WNT-5A Xenopus laevis связывается с Frizzled 2 крысы и активирует CamKII (Ca²⁺/калмодулин-зависимая протеинкиназа II) и PKC (протеинкиназа II) через путь Ca ²⁺ (Curr. Biol., 9, 695-698 (1999)). Однако физиологическое значение этого до сих пор остается неизвестным, и не было никаких сообщений относительно взаимосвязи между WNT-5A и стимуляцией роста волос/промотированием роста волос.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью настоящего изобретения является разработка способа скрининга с использованием молекулы, регулирующей пролиферацию клеток сосочков дермы, промотора роста клеток сосочков дермы и стимулятора роста волос, а также тоника для роста волос на основе новой функции.

Для достижения этих целей авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования. В результате они обнаружили, что WNT-5A является высоко экспрессируемым в клетках сосочков дермы и что WNT-5A связан с пролиферирующей способностью клеток сосочков дермы. В результате последующих исследований на основании этого открытия авторы, кроме того, обнаружили, что рост клеток сосочков дермы может быть существенно активирован и такие части фолликул, как волосяные луковицы могут быть увеличены путем ингибирования функции WNT-5A, таким образом, было создано настоящее изобретение.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к промотору роста клеток сосочков дермы, который включает соединение, обладающее активностью ингибирования функции WNT-5A.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к промотору роста клеток сосочков дермы, который включает соединение, обладающее активностью ингибирования продукции WNT-5A.

Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой (I):

где R¹ и R ² являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу или С_2-6-алканоильную группу;

X представляет собой атом водорода или атом галогена;

R ^3a и R^3b являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода или гидроксильную группу; и

R⁴, R ⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, атом галогена или С _2-6 алканоилокси группу, или указанные группы, которые являются смежными, вместе образуют связь или эфирную связь, или R⁵ и R⁸, или R⁵ и R ⁹ вместе образуют эфирную связь.

Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к промотору роста клеток сосочков дермы, который включает соединение, представленное формулой (II):

где R¹ и R ² являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу или С_2-6-алканоильную группу;

X представляет собой атом водорода или атом галогена;

R ^3c и R^3d являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу или С_1-6-алкоксигруппу, или R ^3c и R^3d вместе образуют оксогруппу, гидроксииминогруппу или С_1-6-алкоксииминогруппу; и

R⁴, R⁵, R ⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, атом галогена или С_2-6-алканоилоксигруппу, или указанные группы, которые являются смежными, вместе образуют связь или эфирную связь, или R⁵ и R⁸, или R⁵ и R ⁹ вместе образуют эфирную связь.

В следующем варианте осуществления настоящее изобретение относится к промотору роста клеток сосочков дермы, включающему соединение, представленное формулой (IX):

где R^1a и R ^2a являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу, C_2-6-алканоильную группу,

группу, представленную формулой (CH₂) _pCO-Y-R¹⁰ (где Y представляет собой атом кислорода или атом серы; R¹⁰ представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу или замещенную или незамещенную арильную группу; и p имеет значение 0 или 1),

группу, представленную формулой (CH ₂)_qR¹¹ (где R¹¹ представляет собой замещенную или незамещенную циклоалкильную группу или замещенный или незамещенный C _2-10 гетероцикл; и q имеет значение 0 или 1), или

группу, представленную формулой COR¹² (где R¹² представляет собой замещенную или незамещенную арильную группу или замещенный или незамещенный C _2-10-гетероцикл);

X представляет собой атом водорода или атом галогена;

R^3e и R ^3f являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, C_1-6 -алкоксигруппу или С_1-6-алканоилоксигруппу, или R^3e и R^3f вместе образуют оксогруппу, гидроксиимино группу или С _1-6-алкоксииминогруппу; и

R^4a , R^5a, R^6a, R ^7a, R^8a и R^9a являются одинаковыми или разными, и каждый из них представляет собой атом водорода, гидроксильную группу, атом галогена или

группу, представленную формулой Z-R¹³ (где Z представляет собой атом кислорода или атом серы; и R ¹³ представляет собой C_1-6-алкильную группу, C_1-6-алканоильную группу или замещенную или незамещенную арильную группу), или

указанные группы, которые являются смежными, вместе образуют связь или эфирную связь, или

R^5a и R^8a или R^5a и R^9a вместе образуют эфирную связь; и

R^6b представляет собой атом водорода, или вместе с R^3e или R^3f образует эфирную связь.

В следующем варианте осуществления настоящее изобретение относится к стимулятору роста волос или к тонику для роста волос, содержащему в качестве активного ингредиента указанный выше промотор роста клеток сосочков дермы.

В следующем варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу скрининга промотора роста клеток сосочков дермы, который включает отбор вещества, ингибирующего функцию WNT-5A.

И в еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу отбора вещества, ингибирующего функцию WNT-5A, который представляет собой способ скрининга промотора роста клеток сосочков дермы, включающий следующие стадии (a)-(c):

(a) стадию культивирования клеток, экспрессирующих WNT-5A человека, в среде, к которой добавлено испытываемое соединение;

(b) стадию лизинга клеток, экспрессирующих WNT-5A человека, культивированных на стадии (a), для экстракции РНК и определения количества мРНК WNT-5A; и

(c) стадию сравнения количества мРНК WNT-5A, определенного на стадии (b).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 показывает картину электрофореза, демонстрирующую, что мРНК WNT-5A экспрессируется в клетках сосочков дермы.

Фиг. 2 показывает картину электрофореза, демонстрирующую, что испытываемые соединения вызывают снижение количества мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы.

Фиг. 3 показывает график, демонстрирующий, что испытываемые соединения обладают активностью промотора роста клеток сосочков дермы.

Фиг. 4 показывает картину электрофореза, демонстрирующую снижение количества мРНК WNT-5A в органной культуре кожи обезьяны.

Фиг. 5 показывает результаты PCNA-окрашивания в телогенных и анагенных волосяных фолликулах в органной культуре кожи обезьяны.

Фиг. 6 показывает гистограммы, демонстрирующие, что Соединение 7 увеличивает диаметр волосяной луковицы в органной культуре кожи обезьяны.

Фиг. 7 показывает гистограммы, демонстрирующие, что Соединение 3 увеличивает диаметр волосяной луковицы в органной культуре кожи обезьяны.

Фиг. 8 показывает фотографии кожи до и после применения испытываемого соединения в течение 6 месяцев в испытании роста волос у медвежьего макака (Macaca arctoides).

ЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее настоящее изобретение описывается более подробно.

<Соединение, ингибирующее функцию WNT-5A>

Термин "соединение, ингибирующее функцию WNT-5A" (далее в некоторых случаях называется "ингибитор функции WNT-5A"), в настоящем изобретении означает соединение, ингибирующее связывание WNT-5A с рецептором WNT-5A, или соединение, ингибирующее продукцию WNT-5A, предпочтительно соединение, ингибирующее продукцию WNT-5A.

Было подтверждено, что WNT-5A, являющийся секреторным гликопротеином, принадлежащим к семейству WNT, экспрессируется в организме человека, мыши, крысы, Xenopus laevis и т.д. С точки зрения применения в качестве лекарственного средства, соединение, ингибирующее функцию WNT-5A человека (SEQ ID NO:1), является предпочтительным.

Соединение, ингибирующее связывание WNT-5A с рецептором WNT-5A, означает соединение, которое действует на WNT-5A или рецептор WNT-5A и, таким образом, ингибирует связывание WNT-5A с рецептором WNT-5A, регулируя тем самым трансдукцию сигнала, осуществляемую WNT-5A, предпочтительно представляет собой соединение, регулирующее трансдукцию сигнала через Ca²⁺ путь. Примеры таких соединений включают антагонист рецептора WNT-5A. Конкретные примеры рецептора WNT-5A включают Frizzled 5 человека (SEQ ID NO:4) и Frizzled 2 крысы (SEQ ID NO:6). Хотя такое соединение может быть как пептидным, так и непептидным, непептидный ингибитор является предпочтительным, имеет преимущество более длительного действия. Соединение может быть отобрано при помощи системы скрининга, использующей меченый WNT-5A и рецептор WNT-5A, и предпочтительно имеет ИК₅₀, равную 30 мкМ или меньше, и более предпочтительно ИК ₅₀, равную 10 мкМ или меньше.

Соединение, ингибирующее продукцию WNT-5A, означает соединение, ингибирующее экспрессию гена WNT-5A. Хотя такое соединение может быть как пептидным, так и непептидным, непептидный ингибитор является предпочтительным, имеет преимущество более длительного действия. Соединение может быть выбрано с использованием в качестве показателя снижения количества белка WNT-5A (SEQ ID NO:1) или количества мРНК WNT-5A (SEQ ID NO:2), и предпочтительно имеет ИК₅₀ , равную 30 мкМ или меньше, и более предпочтительно 10 мкМ или меньше, как определено в испытании с использованием нуклеиновокислотного зонда в соответствии с методом Hartley et al. (Drug Metabolism and Disposition, 28(5), 608-616 (2000); Пример испытания 4, описанный ниже).

Соединения, представленные формулами (I), (II) и (IX), являются особенно предпочтительными.

В соединениях, представленных формулами (I), (II) и (IX), C_1-6-алкильная группа означает линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и примеры такой группы включают метильную группу, этильную группу, пропильную группу, изопропильную группу, бутильную группу, изобутильную группу, трет-бутильную группу, пентильную группу, 2-этилпропильную группу, гексильную группу и т.д.

C_1-6-алканоильная группа означает линейную или разветвленную алканоильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и примеры таких групп включают ацетильную группу, пропионильную группу, бутирильную группу, трет-бутирильную группу и т.д.

Группа C_1-6-алкокси означает линейную или разветвленную алкоксигруппу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и примеры таких групп включают метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, изопропоксигруппу, бутоксигруппу, изобутоксигруппу, втор-бутоксигруппу, трет-бутоксигруппу, пентилоксигруппу, изопентилоксигруппу, неоизопентилоксигруппу, трет-пентилоксигруппу, 1-метилбутоксигруппу, 2-метилбутоксигруппу, 1,2-диметилпропоксигруппу, гексилоксигруппу, изогексилоксигруппу и т.д.

Группа C_1-6-алкоксиимино означает линейную или разветвленную алкоксииминогруппу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и примеры таких групп включают N -метоксииминогруппу, N-этоксииминогруппу, N-пропоксииминогруппу, N-изопропоксииминогруппу, N-бутоксииминогруппу, N-изобутоксииминогруппу, N-пентилоксииминогруппу, N-гексилоксииминогруппу и т.д.

Группа C _1-6-алканоилокси означает линейную или разветвленную алканоилоксигруппу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и примеры таких групп включают ацетоксигруппу, пропионилоксигруппу, пивалоилоксигруппу и т.д.

C_3-10-циклоалкильная группа означает циклоалкильную группу, содержащую от 3 до 10 атомов углерода, и примеры таких групп включают циклопропильную группу, циклобутильную группу, циклопентильную группу, циклогексильную группу, циклогептильную группу, циклооктильную группу, циклононильную группу и т.д.

Примеры замещенной C_3-10-циклоалкильной группы включают циклоалкильную группу, где атом(атомы) водорода в циклоалкильной группе является/являются замещенным(ми) по меньшей мере одной группой, выбранной из группы, состоящей из атома галогена, замещенной или незамещенной C_1-10-алкильной группы, гидроксильной группы, C_1-5-гидроксиалкильной группы, карбоксильной группы, меркаптогруппы, индолильной группы, C_1-5-алкилтиогруппы, аминогруппы, амидогруппы и C_1-5-алкоксигруппы.

Примеры арильной группы включают фенильную группу, нафтильную группу, антраценовую группу и т.д.

Примеры замещенной арильной группы включают арильные группы, в которых атом(атомы) водорода в арильной группе является/являются замещенным(ми) по меньшей мере одной группой, выбранной из группы, включающей замещенную или незамещенную C _1-10-алкильную группу, гидроксильную группу, C _1-5-гидроксиалкильную группу, карбоксильную группу, меркаптогруппу, индазолильную группу, индолильную группу, C_1-5 -алкилтиогруппу, цианогруппу, нитрогруппу, аминогруппу, амидогруппу, ацетиламиногруппу и C_1-5-алкоксигруппу.

Примеры C_2-10-гетероцикла включают фуран, пиррол, тиофен, оксазол, изоксазол, тиазол, имидазол, пиразол, пиран, пиридин, пиперидин, пиридазин, пиримидин, пиразин, хинолин и т.д.

Примеры замещенного C_2-10-гетероцикла включают гетероцикл, в котором атом(атомы) водорода в гетероцикле является/являются замещенным(ми) по меньшей мере одной группой, выбранной из группы, включающей атом галогена, замещенную или незамещенную

C_1-10-алкильную группу, гидроксильную группу, C_1-5-гидроксиалкильную группу, карбоксильную группу, меркаптогруппу, индазолильную группу, индолильную группу, C_1-5-алкилтиогруппу, цианогруппу, нитрогруппу, аминогруппу, амидогруппу и C _1-5-алкоксигруппу.

Эфирная связь означает -O-, формулу -(CH₂)_m-O-(CH ₂)_n- (где m и n каждый означает целое число от 1 до 3, и алкиленовые группы в формуле могут быть замещены алкильной группой(ами)), или формулу -O-(CH₂ )_m-O- (где m означает целое число от 1 до 3, и алкиленовые группы в формуле могут быть замещены алкильной группой(ами)).

Примеры комбинаций смежных групп, которые могут образовывать связь или эфирную связь, включают (R⁴ и R⁵), (R⁵ и R ⁶), (R⁶ и R⁷ ), (R⁷ и R⁸) и (R ⁸ и R⁹) (то же относится и к R ^4a - R^9a в формуле (IX)).

Из соединений, представленных формулой (IX), соединение, представленное формулой (I), является предпочтительным, а соединение, в котором R^3a представляет собой атом водорода и R^3b представляет собой гидроксильную группу, является более предпочтительным. С точки зрения стабильности соединения, предпочтительными являются соединения, представленные формулами (IIa), (IIb) и (IIc).

Соединение формулы (II), где (R⁴ и R⁵) и (R ⁶ и R⁷) образуют связь:

(где R¹, R ², R^3c, R^3d , R⁸, R⁹ и X определены выше).

Соединение формулы (II), где (R⁴ и R⁵) образуют связь и R⁶ и R⁷ представляют собой атом водорода:

(где R¹, R ², R^3c, R^3d , R⁸, R⁹ и X определены выше).

Соединение формулы (II), где R⁴ , R⁵, R⁶ и R ⁷ представляют собой атом водорода:

(где R¹, R ², R^3c, R^3d , R⁸, R⁹ и X определены выше).

Из соединений, представленных формулой (IX), соединение, в котором R^3e и R^6b , взятые вместе, образуют эфирную связь, а (R ^3f и R^4a) и (R^5a и R^6a) образуют связь (например, Соединение 77, и т.д.), являются предпочтительными, поскольку они эффективно ингибируют экспрессию мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы и промотируют рост клеток сосочков дермы.

Из соединений, представленных формулой (IX), соединение, в котором R^1a и R ^2a представляют собой (CH₂) _pCO-Y-R¹⁰ (где Y представляет собой атом кислорода или атом серы; R¹⁰ представляет собой атом водорода, C_1-6-алкильную группу или замещенную или незамещенную арильную группу; и p имеет значение 0 или 1) (например, Соединение 52 и т.д.), и соединение, в котором R^1a и R^2a представляют собой COR₁₂ (где R ₁₂ представляет собой замещенную или незамещенную арильную группу или замещенный или незамещенный гетероцикл) (например, Соединение 58 и т.д.), являются предпочтительными, поскольку они эффективно ингибируют экспрессию мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы и промотируют рост клеток сосочков дермы.

Также соединение, в котором R^7a представляет собой Z-R ¹³ (где Z представляет собой атом кислорода или атом серы; и R¹³ представляет собой C _2-6 алканоильную группу или замещенную или незамещенную арильную группу) (например, Соединение 53 и т.д.), является предпочтительным, поскольку такие соединения эффективно ингибируют экспрессию мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы и промотируют рост клеток сосочков дермы.

Соединение, представленное формулой (II), можно получить, например, путем сочетания следующих способов получения.

Схема реакций 1

(где R¹, R ², R^3c, R^3d , R⁸, R⁹ и X определены выше).

Соединение, представленное формулой (III), подвергают реакции гидрирования в присутствии катализатора, такого как палладий на углероде, в органическом растворителе (например, этилацетате, тетрагидрофуране, диэтиловом эфире, этиловом спирте, метиловом спирте и т.д.) с получением соединения, представленного формулой (IV) или (IV'), или смеси этих соединений. Соединения формул (IV) и (IV') можно разделить и очистить обычным методом разделения, таким как колоночная хроматография.

Схема реакций 2

(где R¹, R ², R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R ⁸, R⁹ и X определены выше).

Осуществляют взаимодействие соединения формулы (V) с восстановителем, таким как борогидрид калия, борогидрид натрия или борогидрид лития, если это необходимо, также в присутствии соли, такой как LiCl, MgCl₂, CeCl₃ , CaCl₂ или NiCl, в органическом растворителе (например, тетрагидрофуране, диэтиловом эфире, этиловом спирте, метиловом спирте, и т.д.) при температуре в пределах -20 до 100°C, предпочтительно при температуре от 0 до 20°C, с получением соединения формулы (VI). Соединение формулы (VI) можно разделить и очистить обычным методом разделения, таким как колоночная хроматография.

Схема реакций 3

(где R¹, R ², R^3c, R^3d , R⁴, R⁵, R ⁶, R⁷ и X определены выше).

Соединение формулы (VII) обрабатывают кислотой или основанием в подходящем органическом растворителе (например, тетрагидрофуране, диэтиловом эфире, этаноле, метаноле и т.д.) с получением соединения формулы (VIII).

Соединения, представленные формулой (IX) (1, 60-78), получают путем культивирования штамма Pochonia chalamydosporia var. chlamydosporia TF-0480 в среде, содержащей различные питательные вещества, в основном, в соответствии с методами, обычно используемыми для получения продуктов ферментации.

В качестве среды в основном используют жидкую среду, при этом такая среда содержит источник углерода, источник азота и неорганическую соль, необязательно, вместе с витаминами, соединениями-предшественниками и противопенным агентом, и pH доводят примерно до уровня около 7. Источник углерода включает глюкозу, декстрин, глицерин, крахмал и т.д., которые могут использоваться отдельно или в виде смеси этих веществ. Источник азота включает мясной экстракт, овсяную муку, дрожжевой экстракт, соевую муку, полипептон, раствор замоченной кукурузы, мочевину, соль аммония и т.д., которые могут использоваться отдельно или в виде смеси этих веществ. Неорганическая соль включает монофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция и т.д., которые могут использоваться отдельно или в виде смеси этих веществ. Противопенный агент, который может быть использован, включает Adekanol или силиконовое соединение. В качестве метода культивирования подходящими являются методы аэробного культивирования, такие как культивирование со встряхиванием или культивирование с аэрацией-взбалтыванием. Культивирование осуществляют при pH 4-10 и при температуре в пределах от 25 до 35°C в течение 2-5 дней, предпочтительно при 25-28°C в течение 3 дней.

Полученные таким способом при помощи культуральной среды соединения 1 и 60-78 могут быть выделены в соответствии с методами, обычно используемыми для сбора продуктов ферментации. Например, следующие методы являются эффективными. А именно, после завершения культивирования культуральный фильтрат получают центрифугированием или фильтрацией. Затем его адсорбируют при помощи полистирольной смолы, такой как DIAION HP-20 (товарное наименование, изготовитель Mitsubishi Chemical) и элюируют органическим растворителем, таким как низший спирт или ацетон. Клетки экстрагируют органическим растворителем, таким как низший спирт или ацетон. Затем клеточный экстракт и элюат из адсорбирующей смолы объединяют и концентрируют при пониженном давлении. К оставшейся водной фазе добавляют для экстракции органический растворитель, такой как этилацетат, хлороформ или н-бутанол, и экстракт концентрируют. Полученный остаток снова растворяют в органическом растворителе, таком как бензол, этилацетат, ацетон, метанол или хлороформ, и затем подвергают колоночной хроматографии на силикагеле, гель-фильтрационной колоночной хроматографии, хроматографии на колонке, заполненной ODS, для обращенно-фазового разделения и высокоэффективной жидкостной хроматографии для очистки и выделения соединения по настоящему изобретению.

Штамм, продуцирующий активный ингредиент в соответствии с настоящим изобретением, является новым штаммом, который был впервые выделен из почвы авторами настоящего изобретения. Микроорганизм был назван "Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia TF-0480" и был депонирован как в "FERM BP-8332" в International Patent Organism Depository, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology.

Микробиологические свойства этого штамма следующие.

1) Рост на среде

Данный микроорганизм хорошо растет в различных средах на агаровых пластинах и показывает хорошее или умеренное спорообразование в испытываемых средах. В Таблице 1 обобщены характеристики колоний, образованных после культивирования при 26°C в течение 2 недель на различных средах. Цвет указан в соответствии с кодами цвета, предложенными A. Kornerup et al., Dizionario dei colori, Musterschmidt (1978).

Таблица 1
Среда	Результаты наблюдения за колониями невооруженным глазом
PDA*-1	Показывает относительно хороший рост и спорообразование. Диаметр колонии: 23-28 мм. Шерстистые и несколько конусообразные колонии с войлочным центром и небольшими радиальными морщинками. Несколько неправильной формы периферия (оконечность колонии). Секретируют бледный светло-желтый [3A6] пигмент в среду. Цвет поверхности колонии: белый [1A1] на периферии и бледно-желтый [4A3] в центре. Цвет обратной стороны: красновато-желтый [4A6] на периферии и желтовато-коричневый [5D8] в центре. Иррегулярное или радиальное растрескивание агаровой среды.
OMA*-2	Показывает хороший рост и спорообразование. Диаметр колонии: 48-50 мм. Несколько тонкие и шерстистые колонии с войлочным центром и промежуточной частью. Относительно правильной формы периферия. Не секретируют никакого пигмента. Цвет поверхности колонии: белый [1A1] на периферии и бледно-желтый [3A4] в центре. Цвет обратной стороны: светло-желтый [3А4], такой же, как на поверхности.
CMA*-3	Показывает хороший рост и умеренное спорообразование. Диаметр колонии: 47-51 мм. Тонкие и войлочные колонии. Относительно правильной формы периферия. Не секретируют никакого пигмента в среду. Цвет поверхности колонии/цвет обратной стороны: с обеих сторон от белого [1A1] до желтовато-белого [1А2].
MA* -4	Показывает относительно хороший рост и спорообразование. Диаметр колонии: 26-27 мм. Толстые и шерстистые колонии с войлочным центром. Относительно правильной формы периферия. Секретируют слегка красновато-желтый [4А7] пигмент в среду. Цвет поверхности колонии: белый [1A1] на периферии и бледно-желтый [4А3] в центре. Цвет обратной стороны: светло-оранжевый [5А4] на периферии, коричневый [7E8] в центре и оранжевый [6B7] в промежуточной части.
SA* -5	Показывает относительно хороший рост и спорообразование. Диаметр колонии: 23-28 мм. Шерстистые и несколько конусообразные колонии с войлочным центром. Несколько неправильной формы периферия и небольшие радиальные морщинки. Секретируют красновато-желтый [4А7] пигмент в среду. Цвет поверхности колонии: белый [1A1] на периферии и оранжевато-белый [5А2] в других частях. Цвет обратной стороны: светло-оранжевый [5А4] на периферии и в центре и коричневый [7Е8] в других частях. Иррегулярное или радиальное растрескивание агаровой среды.
LCA*-6	Показывает хороший рост и умеренное спорообразование. Диаметр колонии: 42-44 мм. Тонкие войлочные до слегка шерстистых колонии. Относительно правильной формы периферия. Не секретируют никакого пигмента в среду. Цвет поверхности колонии/цвет обратной стороны: с обеих сторон белый [1A1].

*-1: среда картофельного агара с декстрозой (E-MF21, изготовитель Eiken Chemical Co., Ltd.).

*-2: 1/2-Разбавленная агаровая среда на отваре из овсяной муки (изготовитель Difco, получена путем 1/2-разбавления агара Bacto на отваре из овсяной муки и добавления агара с получением конечной концентрации агара 2%).

*-3: Агаровая среда на отваре из овсяной муки (изготовитель Difco, Corn meal agar).

*-4: Солодовая агаровая среда (Nakase, T., 6th ed., pp,617, Japan Collection of Microorganisms, the Institute of Physical and Chemical Research, Saitama, 1995)

*-5: Агаровая среда Сабуро (изготовитель Eiken Chemical Co., Ltd., E-MF03)

*-6: Агаровая среда Миуры (Miura, K. and M. Kudo, Trans. Mycol. Soc. Japan, 11, 116-118 (1970))

2) Морфология

Колонии, образованные после культивирования штамма на агаровой среде на отваре из овсяной муки при 26°C в течение 14 дней, наблюдали под оптическим микроскопом. В результате, наблюдали образование фиало-конидий. Образование одной конидия-образующей клетки (фиалиды) или 2-4 мутовчатых фиалид происходило непосредственно на гифе. Конидиофоры нельзя было четко отличить от вегетативных гиф. Происходило образование множества конидий на переднем крае фиалиды с образованием вязкой массы. Фиалида имела форму конусообразного цилиндра и ровную и бесцветную поверхность. Ее длина составляла 13-15 мкм, а толщина на конце 0,8-1,7 мкм. Конидии имели элипсообразную форму или форму полусфер (редко) и большинство из них имели слегка выступающее основание. Конидии имели ровную и бесцветную поверхность и размер 2,2-5,0×1,8-2,8 мкм. Образование единственной бледно-желтой и многоклеточной хламидоспоры (диктиохламидоспоры) происходило на поверхности среды или на конце короткого ростка гифы на среде. Также происходило образование в среде небольшого количества диктиохламидоспор. Эти диктиохламидоспоры имели размер 14-20×12-22 мкм. При продолжении культивирования в течение одного месяца или дольше не наблюдали никакого телеоморфа.

3) Физиологические свойства

(1) Пределы температуры роста и оптимальная температура

В агаровой среде Сабуро при pH 6,0 этот штамм растет в температурных пределах 15-31°C, и оптимальная температура составляет от 25 до 27°C.

(2) Пределы значений pH для роста и оптимальное значение pH

В жидкой среде YpSs при 26°C этот штамм растет в пределах значений pH 3-10, и оптимальное значение pH составляет от 5 до 7.

4) Аэробный/анаэробный: аэробный.

На основании описанных выше морфологических характеристик и свойств культуры, характеристики этого штамма сравнивали с различными известными видами, о которых сообщалось в (1) K.H. Domsch et al., Compendium of soil fungi, Vol. 1, IHW-Verlag (1980) и (2) G.L. Barron, The Genera of Hyphoomycetes from soil, Williams & Wilkins (1968) и т.д. В результате было обнаружено, что этот штамм является очень схожим с неполным видом, известным под классификационными названием Verticillium chlamydosporia или Diheterospora chlamydosporia , и поэтому, вероятно, относится к этому виду. В (3) R. Zare, W. Gams and H.C. Evans, A revision of Verticillium section Prostrata. V. The genus Pochonia, with notes on Rotiferophthora, 73, 1-2, p51-86 (2001), этот вид был молекулярно систематически повторно исследован и, в свою очередь, назван как относящийся к роду Pochonia, как к подходящему для него роду. Более того, предлагается назвать такой вид, образующий несвязанные конидии типа Verticillium, как штамм по настоящему изобретению, вариантом Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia.

На основании этих данных, этот штамм был назван "Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia TF-0480".

<Промотор роста клеток сосочков дермы>

Термин "промотор роста клеток сосочков дермы", как он использован в настоящем изобретении, означает лекарственное средство или реагент, обладающие действием по увеличению количества клеток сосочков дермы.

Промотор роста клеток сосочков дермы по настоящему изобретению характеризуется тем, что он основан на действии по ингибированию функции WNT-5A. Поскольку WNT-5A ингибирует функции молекул класса WNT-1 (WNT-1, WNT-8 и т.д. ), которые являются активаторами пути WNT/ -катенина, рост клеток сосочков дермы контролируется регулированием функции WNT-5A или регулированием экспрессии WNT-5A. Поэтому, даже соединения, имеющие совершенно разные структуры (например, Соединение 24, Соединение 79, Соединение 7 и т.д.), обладают отличным действием промотирования роста клеток сосочков дермы, если эти соединения обладают отличным эффектом ингибирования функции WNT-5A.

Рост клеток можно измерить методом, хорошо известным специалистам в данной области. Примеры методов измерения включают подсчет жизнеспособных клеток с использованием подходящего проявляющего цвет субстрата, и метод поглощения [³H]-тимидина. В качестве, проявляющего цвет субстрата предпочтительно используют соли тетразолия, такие как MTT, MTS и XTT и Alamar Blue.

<Стимулятор роста волос/тоник для роста волос>

Термин "стимулятор роста волос или тоник для роста волос", как он использован в настоящем изобретении, означает продукты, предназначенные для индуцирования роста волос, промотирования роста волос, предотвращения алопеции и т.д. В случае использования стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению в качестве лекарственных средств, объект изобретения включает улучшение или профилактику гнездной алопеции и алопеции мужского типа.

Эффекты стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению достигаются посредством действия по промотированию роста клеток сосочков дермы путем ингибирования функции WNT-5A. На основании механизма этой функции, способность к росту клеток, подавленная в сосочках дермы на участке алопеции, повышается и образуется хорошо развитая дермальная сосочковая ткань. Поэтому ожидается, что стимулятор роста волос/тоник для роста волос по настоящему изобретению должны быть эффективными против симптомов, на которые, как было установлено, известные в настоящее время стимуляторы роста волос и тоники для роста волос оказывают слабое действие.

Кроме того, ожидается, что может быть достигнут синергический эффект путем объединения стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению с другими стимуляторами роста волос и тониками для роста волос, обладающими другими функциональными свойствами.

Стимулятор роста волос/тоник для роста волос по настоящему изобретению можно вводить различными дозами и в различных лекарственных формах, в зависимости от конкретных соединений.

В случае введения соединения, представленного формулой (IX), путем нанесения (лосьон, мазь, гель и т.д.), его можно вводить, например, при дозе 0,0001-10% масс., предпочтительно 0,001-5% масс., и более предпочтительно 0,001-1% масс., хотя доза варьирует в зависимости от типа и лекарственной формы тоника для роста волос. В случае перорального введения (порошок, таблетка или капсула) соединения, представленного формулой (IX), взрослому мужчине, суточная доза предпочтительно составляет от 1 до 100 мг/кг.

Хотя лекарственные формы для стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению конкретно не ограничены, в случае наружного применения предпочтительно обеспечение стимулятора роста волос/тоника для роста волос по настоящему изобретению, содержащего в виде активного ингредиента ингибитор продукции WNT-5A (например, соединение формулы (IX)), в форме водорастворимой композиции. Такую водорастворимую композицию можно получить с использованием различных добавок (увлажнитель, загуститель, консервант, антиоксидант, отдушка, краситель и т.д.), обычно используемых для получения лекарственных средств, квази-лекарственных средств или косметических средств, при условии, что они не оказывают негативного влияния на эффект настоящего изобретения. Стимулятор роста волос и тоник для роста волос по настоящему изобретению могут быть предоставлены в виде композиций для ухода за волосами, таких как тоник для волос, масло для волос, мусс или гель для волос или мази.

В случае использования стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению в виде жидких препаратов, такой препарат получают в виде водного раствора, неводного раствора, суспензии, липосом или эмульсии, которые получают путем растворения ингибитора продукции WNT-5A (например, соединения формулы (IX)) в дистиллированной воде, подходящем буфере, таком как фосфатный буфер, физиологическом солевом растворе, таком как физиологический солевой раствор, раствор Рингера или раствор Locke, этаноле или глицерине, объединенными с традиционно используемым поверхностно-активным веществом и т.д., с последующей стерилизацией. Такие препараты применяют местно путем нанесения жидкого препарата на волосистую часть головы. Альтернативно, такой препарат можно наносить при помощи струйной форсунки, как в случае спрея.

В случае использования стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению в виде полутвердых препаратов, ингибитор продукции WNT-5A (например, соединение формулы (IX)) смешивают с жиром, маслом, ланолином, вазелином, парафином, воском, гипсом, смолой, пластиком, глицерином, высшим спиртом, глицерином, водой, эмульгатором, суспендирующим средством и т.п. с получением препарата для наружного применения (мазь, крем и т.д.), который можно применять местно.

В случае использования стимулятора роста волос и тоника для роста волос по настоящему изобретению в виде твердых препаратов, ингибитор продукции WNT-5A (например, соединение формулы (IX)) смешивают с подходящей добавкой(ами) с получением препарата для наружного применения, такого как дуст или порошок. Альтернативно, возможно получение твердого препарата, который растворяют или суспендируют в растворителе перед применением и наносят на волосистую часть головы.

В случае перорального применения, предпочтительно смешивание ингибитора продукции WNT-5A (например, соединения формулы (IX)) с фармацевтически приемлемым носителем (наполнителем, связующим, разрыхлителем, отдушкой, корригентом, эмульгатором и т.д.), разбавителем, средством, способствующим растворению и т.п., и обработка полученной лекарственной композиции обычным способом с получением таблетки, капсулы, гранул, дуста, сиропа, суспензии, раствора и т.д.

Такие препараты можно получать с использованием традиционных приемов формулирования.

<Способ скрининга>

Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу скрининга промотора роста клеток сосочков дермы, который включает отбор соединения, ингибирующего функцию WNT-5A.

Отбор соединения, ингибирующего функцию WNT-5A (далее в некоторых случаях называемого "ингибитор функции WNT-5A"), означает, например, отбор (т.е., скрининг) ингибитора продукции WNT-5A, или отбор антагониста рецептора WNT-5A.

В качестве испытываемых веществ, используемых в способе скрининга по настоящему изобретению, можно использовать любые вещества. А именно, тип испытываемых веществ не ограничивается, и это могут быть низкомолекулярные соединения, соединения, содержащиеся в натуральном экстракте, или синтетические пептиды. Это также может быть библиотека соединений или комбинаторная библиотека. Библиотека соединений может быть составлена способом, хорошо известным специалистам. Альтернативно, можно использовать коммерчески доступную библиотеку соединений. С точки зрения использования в качестве лекарственного средства, соединение, подвергаемое скринингу, предпочтительно имеет молекулярную массу 3000 или меньше. С точки зрения обеспечения нанесения/перорального введения, низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу 600 или меньше, является предпочтительным.

(1) Способ скрининга антагониста рецептора WNT-5A

В способе скрининга антагониста рецептора WNT-5A, определить, образуется или нет связь между белком WNT-5A и рецептором WNT-5A, можно при помощи меченого белка WNT-5A и рецептора WNT-5A путем определения и измерения метки. Примеры метки включают радиоизотоп ( ³²P, ³³P, ¹³¹ I, ¹²⁵I, ³H, ¹⁴C, ³⁵S и т.д.), фермент (щелочная фосфатаза, пероксидаза хрена и т.д.), флуоресцентное вещество (флуоресцеинизотиоцианат и т.д.) и т.д. Эти вещества могут быть коммерчески доступны, и мечение можно осуществлять известными методами.

Конкретный пример системы анализа in vitro осуществляют в бесклеточной системе. Более конкретно, либо белок WNT-5A, либо рецептор WNT-5A связывают с подложной, а второе соединение и испытываемое вещество добавляют к нему. После инкубации реакционную смесь промывают и определяют или измеряют связывание другого белка с белком, связанным с подложкой.

Примеры подложки, с которой связывается белок, включают нерастворимые полисахариды, такие как агароза, декстран и целлюлозы; синтетические смолы, так как полистирол, полиакриламид и силикон; и т.д. Более конкретно, можно использовать коммерчески доступные шарики и пластинки, полученные из этих веществ.

(2) Способ скрининга соединения, ингибирующего продукцию WNT-5A

Соединение, ингибирующее продукцию WNT-5A, можно скринировать с использованием в качестве показателя количества мРНК WNT-5A или количества белка WNT-5A. Также возможно связывание репортерного гена с областью промотора гена WNT-5A и определение количества экспрессии. В качестве промотора гена WNT-5A предпочтительно используют промотор, представленный SEQ ID NO:3.

Примеры репортерного гена включают ген GFP (зеленого флуоресцентного белка), ген GUS ( -глюкуронидазы), ген LUC (люциферазы) и ген CAT (ацетилтрансферазы хлорамфеникола).

Когда в качестве показателя используют количество экспрессии мРНК WNT-5A, например, используют клетки, эксперссирующие WNT-5A человека, и к ним добавляют испытываемое вещество. После культивации в инкубаторе в течение нескольких часов при 37°C в атмосфере 5% CO₂-95% воздуха, клетки лизируют и РНК экстрагируют. Затем количество мРНК WNT-5A измеряют при помощи, например, ОТ-ПЦР. Таким образом, может быть определено вещество, обладающее активностью снижения количества мРНК WNT-5A. Праймеры, используемые в ПЦР, конкретно не ограничены при условии, что они являются специфическими для мРНК WNT-5A, и они могут быть сконструированы из последовательности мРНК WNT-5A. Предпочтительные примеры включают прямой праймер AATGTCTTCC AAGTTCTTCC TAGTGGC (SEQ ID NO:8) и обратный праймер GATGTCGGAA TTGATACTGG CA (SEQ ID NO:9).

Когда в качестве показателя используют количество белка WNT-5A, например, используют клетки, экспрессирующие WNT-5A человека, и к ним добавляют испытываемое вещество. После культивирования в инкубаторе в течение нескольких часов при 37°C в атмосфере 5% CO₂-95% воздуха, клетки лизируют, используя культуральную среду, и белок экстрагируют. Затем количество белка WNT-5A измеряют методом ELISA (твердофазный иммуно-ферментный анализ) или т.п. Таким образом, может быть определено вещество, обладающее активностью по снижению количества экспрессии мРНК WNT-5A.

Далее настоящее изобретение описывается подробно со ссылкой на Примеры испытания, представленные ниже; однако, настоящее изобретение не ограничивается этим.

Пример 1 (Соединения 3 и 4)

Радицикол (Соединение 1: 10,8 г) растворяли в этилацетате (140 мл) и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (255 мг) с последующей заменой водородом (1 атм) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 час. После фильтрации палладия на углероде, фильтрат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке хроматографией на силикагеле и элюировали смесью н-гексан:этилацетат (2:1) с получением целевого Соединения 4 (3,43 г), или элюировали смесью н-гексан:этилацетат (3:2) с получением целевого Соединения 3 (4,14 г).

Пример 2 (Соединения 7 и 8)

Соединение 3 (602,5 мг) растворяли в метаноле (13 мл) и добавляли к нему гептагидрат хлорида церия (III) (2,14 г) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (180 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 5 минут. После добавления к реакционному раствору насыщенного раствора дигидрофосфата натрия (40 мл) смесь разбавляли водой (40 мл) и органический растворитель отгоняли при пониженном давлении. Оставшийся водный слой экстрагировали этилацетатом (300 мл × 2). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток подвергали грубой очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 1,0 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 93:7, элюировали этилацетатом). Полученный грубо очищенный продукт затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением целевых соединений (Соединение 7: 144,9 мг, Соединение 8: 13,8 мг).

Пример 3 (Соединения 9 и 10)

Соединение 4 (26,5 мг) растворяли в метаноле (5 мл) и добавляли к нему гептагидрат хлорида церия (III) (100 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (60 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. После добавления к реакционному раствору насыщенного раствора дигидрофосфата натрия смесь разбавляли водой (20 мл) и органический растворитель отгоняли при пониженном давлении. Оставшийся водный слой экстрагировали этилацетатом (30 мл × 2). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. После этого остаток подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 0,25 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 94:6, элюировали этилацетатом) с получением целевых соединений (Соединение 9: 5,7 мг, Соединение 10: 8,8 мг).

Пример 4 (Соединение 5)

Радицикол (91,5 мг) растворяли в метаноле (5 мл) и добавляли к нему гептагидрат хлорида церия (III) (88 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (60 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. После добавления к реакционному раствору насыщенного раствора дигидрофосфата натрия (20 мл) смесь разбавляли водой (20 мл) и органический растворитель отгоняли при пониженном давлении. Оставшийся водный слой экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Остаток подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 0,5 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 9:1, элюировали этилацетатом) с получением целевого Соединения 5 (27,2 мг).

Пример 5 (Соединение 2)

Радицикол (15,3 мг) растворяли в пиридине (1,5 мл) и добавляли к нему уксусный ангидрид (4 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 6,5 час. После добавления к реакционному раствору ледяной воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл). Этилацетатный слой промывали водой (20 мл × 2) и сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Остаток подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 0,5 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 95:5, элюировали этилацетатом) с получением целевого Соединения 2 (18,5 мг).

Пример 6 (Соединение 11)

Радицикол (19,0 мг) растворяли в диметилсульфоксиде (1 мл) и добавляли карбонат калия (3 мг) и метилиодид (4 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 6,5 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Остаток подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 0,5 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 95:5, элюировали этилацетатом) с получением целевого Соединения 11 (15,3 мг).

Пример 7 (Соединения 16, 17, 19 и 23)

Радицикол (930 мг) растворяли в 1,4-диоксане (14 мл) и добавляли к нему 1н раствор хлористоводородной кислоты (12 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 час. После разбавления водой (40 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Остаток подвергали грубой очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 1,0 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол:н-гексан = 5:1:5, элюировали этилацетатом). Полученный грубо очищенный продукт затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали градиентом смеси вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 70:30 до 40:60) с получением целевых соединений (Соединение 16: 11,4 мг, Соединение 17: 19,4 мг, Соединение 19: 32,6 мг, Соединение 23: 103,7 мг).

Пример 8 (Соединения 12 и 13)

Радицикол (232,6 мг) растворяли в 1,4-диоксане (4 мл) и добавляли к нему 1н раствор хлористоводородной кислоты (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. После нейтрализации 1н раствором гидроксида натрия, растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем концентрат растворяли при помощи 20 мл метанола. Полученный раствор фильтровали через ватную пробку, и метанол отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением целевых соединений (Соединение 12: 42,6 мг, Соединение 13: 10,4 мг).

Пример 9 (Соединение 18)

В 5 мл диметилформамида по каплям при охлаждении льдом вводили 1 мл оксихлорида фосфора и затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Полученный раствор медленно, при охлаждении льдом, добавляли к раствору радицикола (98,5 мг) в диметилформамиде (4 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 24 час. Затем реакционный раствор разбавляли этилацетатом (100 мл) и промывали водой (100 мл × 3). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (20 см × 20 см, толщина 0,5 мм, проявляющий растворитель хлороформ:метанол = 94:6, элюировали этилацетатом) с получением целевого соединения (Соединение 18: 61,8 мг).

Пример 10 (Соединения 14 и 15)

Радицикол (378 мг) растворяли в 1,4-диоксане (4 мл) и добавляли к нему 1н раствор хлористоводородной кислоты (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 20 минут. После нейтрализации 1н раствором гидроксида натрия растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем концентрат растворяли при помощи 20 мл метанола. Полученный раствор фильтровали через ватную пробку, и метанол отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 70:30) с получением целевых соединений (Соединение 14: 10,7 мг, Соединение 15: 9,9 мг), одновременно с Соединением 12 (40,6 мг).

Пример 11 (Соединения 20, 21 и 22)

Соединение 3 (96,3 мг) растворяли в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли к нему 1н раствор хлористоводородной кислоты (2,5 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 16 час. После нейтрализации 1н раствором гидроксида натрия растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем концентрат растворяли при помощи 20 мл метанола. Полученный раствор фильтровали через ватную пробку, и метанол отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 45:55) с получением целевых соединений (Соединение 20: 9,3 мг, Соединение 21: 22,0 мг, Соединение 22: 26,2 мг).

Пример 12 (Соединения 25 и 26)

Соединение 7 (34 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (2 мл) и добавляли гидроксид калия (3 мг) и метилиодид (500 мкл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 4,5 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (38:62) с получением двух фракций. Каждую фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 25 (6,4 мг, 39 мин) и Соединения 26 (14,5 мг, 29 мин).

Пример 13 (Соединение 27)

Соединение 7 (55 мг) растворяли в пиридине (1 мл) и добавляли к нему уксусный ангидрид (3 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 17 час. После добавления к реакционному раствору воды (50 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (60:40). Полученные фракции концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 27 (64,7 мг, 18 мин).

Пример 14 (Соединения 28 и 29)

Соединение 8 (131 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (2 мл) и добавляли гидроксид калия (3 мг) и метилиодид (2 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 7 час. После добавления к реакционному раствору воды (40 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (38:62). Таким образом, получали 2 фракции и концентрировали при пониженном давлении с получением, соответственно, Соединения 28 (14,2 мг, 52 мин) и Соединения 29 (31,7 мг, 37 мин).

Пример 15 (Соединение 30)

Соединение 8 (72 мг) растворяли в пиридине (2 мл) и добавляли к нему уксусный ангидрид (2 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 17 час. После добавления к реакционному раствору воды (50 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (53:47). Полученные фракции концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 30 (45,5 мг, 30 мин).

Пример 16 (Соединение 31)

Радицикол (10,8 г) растворяли в этилацетате (140 мл) и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (255 мг) с последующим замещением водородом (1 атм) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 час. После фильтрации палладия на углероде, фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке хроматографией на силикагеле [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] и элюировали смесью н-гексан:этилацетат (2:1) с получением Соединения 4 (3,43 г), или элюировали смесью н-гексан:этилацетат (3:2) с получением Соединения 3 (4,14 г). Часть (500 мг) фракции (3,08 г) между Соединением 3 и Соединением 4 растворяли в небольшом количестве N,N-диметилформамида и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (38:62). Таким образом, получали 2 фракции и концентрировали при пониженном давлении с получением, соответственно, Соединения 3 (177,8 мг) вместе с Соединением 31 (20,7 мг, 23 мин).

Пример 17 (Соединения 32, 33 и 34)

Радицикол (11,9 г) растворяли в этилацетате (160 мл) и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (300 мг). После продувки водородом (1 атм) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 час. После фильтрации палладий на углероде фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке хроматографией на силикагеле [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] и элюировали смесью н-гексан:этилацетат (2:1) с получением Соединения 4, или элюировали смесью н-гексан:этилацетат (3:2) с получением Соединения 3. Кроме того, фракцию, которую элюировали смесью н-гексан:этилацетат (1:1), концентрировали при пониженном давлении с получением грубо очищенного продукта (936 мг). Полученный грубо очищенный продукт растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (34:66) с получением трех фракций. Каждую фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 32 (17,4 мг, 17 мин), Соединения 33 (49,4 мг, 18 мин) и Соединения 34 (347,4 мг, 21 мин).

Пример 18 (Соединение 35)

Радицикол (210 мг) растворяли в пиридине (4 мл) и добавляли к нему гидрохлорид гидроксиламина (180 мг) при комнатной температуре с последующим нагреванием до 40°C и перемешиванием в течение 2,5 час. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (100 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (80 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке препаративной хроматографией на силикагеле [Silica Gel 60 F254 (товарное наименование, изготовитель Merck), толщина 0,5 мм] с использованием в качестве проявляющего растворителя смеси хлороформ-метанол (90:10). Фракцию, показывающую значение Rf 0,65, собирали, экстрагировали этилацетатом и затем концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 35 (40,0 мг).

Пример 19 (Соединения 36, 37, 38 и 39)

Радицикол (11,9 г) растворяли в этилацетате (160 мл) и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (300 мг) с последующим замещением водородом (1 атм) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 час. После фильтрации палладия на углероде фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток подвергали очистке хроматографией на силикагеле [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] и элюировали смесью н-гексан:этилацетат (2:1). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением фракции (1537 мг), включающей Соединение 4 в качестве основного компонента. Эту фракцию растворяли в метаноле (21 мл)/тетрагидрофуране (7 мл), и добавляли гептагидрат хлорида церия (III) (2130 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (790 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 10 минут. Реакционный раствор разбавляли водой (30 мл) и значение pH доводили до нейтрального путем добавления 1н раствора хлористоводородной кислоты с последующим дополнительным разбавлением водой (30 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл × 2). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении с получением смолистого вещества (1,46 г). Полученное вещество растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке с силикагелем [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] (400 мл), которую подготавливали смачиванием н-гексаном. Затем успешно осуществляли элюирование смесью растворителей н-гексан-этилацетат. После элюирования Соединения 4 смесью н-гексан-этилацетат (2:1) остаток элюировали смесью н-гексан-этилацетат (3:2) с получением путем концентрирования при пониженном давлении каждой из фракций - фракции (1) (190 мг) и фракции (2) (398 мг). Фракцию (1) растворяли в небольшом количестве тетрагидрофурана и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (35:65) с получением трех фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 9 (87,2 мг) вместе с Соединением 36 (11,3 мг, 20 мин) и Соединением 38 (10,1 мг, 25 мин). Фракцию (2) растворяли в небольшом количестве тетрагидрофурана и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии при тех же условиях, что и фракцию (1), с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 37 (19,8 мг, 25 мин) и Соединения 39 (23,2 мг, 27 мин).

Пример 20 (Соединения 40 и 41)

Соединение 7 (61 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл) и добавляли гидроксид калия (5 мг) и 1-бромбутан (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3,5 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) с градиентом (60:40) до (90:10) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 40 (25,6 мг, 33 мин) и Соединения 41 (21,4 мг, 40 мин).

Пример 21 (Соединения 42 и 43)

Соединение 7 (67 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл) и добавляли гидроксид калия (5 мг) и 1-бромгексан (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3,5 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) с градиентом (60:40) до (90:10) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 42 (24,9 мг, 38 мин) и Соединения 43 (32,9 мг, 53 мин).

Пример 22 (Соединение 44)

Соединение 7 (62 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл) и добавляли гидроксид калия (5 мг) и 1-бромпропан (1 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1,5 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) с градиентом (45:55) до (85:15). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 44 (45,3 мг, 38 мин).

Пример 23 (Соединение 45)

Соединение 7 (64 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл) и добавляли гидроксид калия (5 мг) и 2-(бромметил)циклогексан (2 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 7 час. После добавления к реакционному раствору воды (20 мл) смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) с градиентом (65:35) до (85:15). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 45 (24,7 мг, 70 мин).

Пример 24 (Соединение 46)

Соединение 7 (200 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (10 мл) и добавляли к нему бромистоводородную кислоту (5 мл) с последующим перемешиванием при 110°C в течение 6 час. После добавления к реакционному раствору этилацетата (150 мл) смесь промывали гидрокарбонатом натрия (150 мл × 2). Этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в небольшом количестве метанола и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) с градиентом (38:62) до (50:50). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 46 (17,0 мг, 18 мин).

Пример 25 (Соединение 47)

Соединение 62 (154 мг) растворяли в этилацетате (5 мл), и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (30 мг) с последующим замещением водородом (1 атм) и перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут. После фильтрации палладия на углероде фильтрат отгоняли при пониженном давлении с получением Соединения 47 (134,8 мг).

Пример 26 (Соединение 48)

Соединение 61 (211 мг) растворяли в этилацетате (11 мл), и добавляли к нему 5% палладий на углероде (мокрого типа) (42 мг) с последующим замещением водородом (1 атм) и перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут. После фильтрации палладия на углероде фильтрат отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток (184 мг) подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии [Silica Gel 60 F254 (товарное наименование, изготовитель Merck), 20 см × 20 см, толщина 0,5 мм] с использованием в качестве проявляющего растворителя смеси хлороформ-метанол (95:5). Фракцию со значением Rf 0,5 собирали, экстрагировали этилацетатом и затем концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 48 (159,7 мг).

Пример 27 (Соединения 49 и 50)

Соединение 61 (233 мг) растворяли в метаноле (10 мл)/тетрагидрофуране (2 мл) и добавляли к нему гептагидрат хлорида церия (III) (754 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (236 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 5 минут. После разбавления реакционного раствора водой (30 мл) добавляли 1н водный раствор хлористоводородной кислоты (3 мл) для доведения значения pH до нейтрального и смесь снова разбавляли водой (30 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл × 2). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении с получением белого порошка (267 мг). Затем полученный порошок растворяли в небольшом количестве воды и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (45:55) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 49 (49,3 мг, 19 мин) и Соединения 50 (184,6 мг, 21 мин).

Пример 28 (Соединение 51)

Соединение 62 (191 мг) растворяли в метаноле (10 мл)/тетрагидрофуране (4 мл) и добавляли гептагидрат хлорида церия (III) (641 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к раствору при охлаждении льдом медленно добавляли борогидрид натрия (216 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 10 минут. После разбавления реакционного раствора водой (30 мл) добавляли 1н водный раствор хлористоводородной кислоты (3 мл) для доведения значения pH до нейтрального и смесь снова разбавляли водой (30 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл × 2). Полученный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия, и затем этилацетат отгоняли при пониженном давлении с получением бесцветного маслянистого вещества (182 мг). Затем полученное масло растворяли в небольшом количестве метанола и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (30:70). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 51 (137,3 мг, 29 мин).

Пример 29 (Соединение 52)

Радицикол (205 мг) растворяли в ацетоне (10 мл) и добавляли S-хлорацетилтиофенол (330 мг) и карбонат калия (310 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1,5 час. Затем к реакционному раствору добавляли воду с последующим экстракцией этилацетатом. После промывки насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Затем остаток подвергали грубой очистке методом колоночной хроматографии на силикагеле (20 г, этилацетат:н-гексан = 1:2). Полученный грубо очищенный продукт затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением Соединения 52 (105 мг).

Пример 30 (Соединение 53)

Радицикол (406 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (6 мл) и добавляли триэтиламин (57,6 мг) и тиофенол (260 мг) с последующим перемешиванием при охлаждении льдом в течение ночи. Затем к реакционному раствору добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки последовательно водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Часть 238 мг полученного остатка затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением Соединения 53 (46,0 мг).

Пример 31 (Соединения 54 и 55)

Радицикол (378 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (6 мл) и добавляли триэтиламин (56,4 мг) и тиоуксусную кислоту (163 мг) при охлаждении льдом с последующим перемешиванием при охлаждении льдом в течение ночи. Затем к реакционному раствору добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки последовательно водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Часть 238 мг полученного остатка затем подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением Соединения 54 (49,0 мг) и Соединения 55 (15,7 мг).

Пример 32 (Соединение 56)

Радицикол (131 мг) растворяли в ацетоне (10 мл) и добавляли метилбромацетат (219 мг) и карбонат калия (183 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3 час. Затем к реакционному раствору добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Затем полученный остаток перекристаллизовывали из этилацетата с получением Соединения 56 (81,8 мг).

Пример 33 (Соединение 57)

Соединение 7 (116 мг) растворяли в ацетоне (10 мл) и добавляли метилбромацетат (330 мг) и карбонат калия (276 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3 дней. Затем к реакционному раствору добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Затем полученный остаток перекристаллизовывали из этилацетата с получением Соединения 57 (27,7 мг).

Пример 34 (Соединение 58)

Радицикол (103 мг) растворяли в N,N-диметилформамиде (6 мл) и добавляли никотиновую кислоту (190 мг), гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (270 мг) и 4-диметилпиридин (37,7 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3,5 час. Затем к реакционному раствору добавляли воду с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния, экстракт сушили при пониженном давлении. Затем полученный остаток перекристаллизовывали из ацетона-воды с получением Соединения 58 (94,5 мг).

Пример 35 (Соединение 59)

Соединение 56 (312 мг) растворяли в метаноле (60 мл), и добавляли к нему смесь гидроксида калия (206 мг)-воды (20 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем к реакционному раствору добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту с последующей экстракцией этилацетатом. После промывки насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушки над безводным сульфатом магния экстракт сушили при пониженном давлении. Затем полученный остаток подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (20 × 250 мм, YMC-Pack Pro C18, элюировали смесью вода (к которой была добавлена уксусная кислота, pH 3,5):ацетонитрил = 65:35) с получением Соединения 59 (10,6 мг).

Пример 36 (Соединения 60, 61, 62, 63, 68 и 70)

В асептическую жидкую среду (pH 6), содержащую 2,0% глюкозы, 4,0% маннита, 2,0% овсяной муки, 0,4% дрожжевого экстракта, 0,001% гептагидрата сульфата железа (II), 0,001% гептагидрата сульфата цинка (II), тетрапентагидрата сульфата 0,001% марганца (II) и 0,0005% пентагидрата сульфата меди (II), инокулировали штамм Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia TF-0480, который затем культивировали в этой среде при встряхивании при температуре 26°C в течение 72 часов. Используя сосуд емкостью 50 л, в асептическую среду, имеющую такую же композицию, как среда, используемая в посевной культуре, инокулировали 300 мл среды, содержащей посевную культуру, и затем культивировали в этой среде при аэрации-взбалтывании при температуре 26°C в течение 144 часов. После завершения культивирования, культуру центрифугировали для отделения клеток от надосадочной жидкости. Надосадочную жидкость адсорбировали при помощи 1,5 л HP-20 (изготовитель Mitsubishi Chemical), промывали водой и затем элюировали 3 л метанола. Элюат концентрировали при пониженном давлении, и полученный водный слой экстрагировали этилацетатом. Этилацетатный слой дегидратировали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением коричневого вещества в виде сиропа (60 г).

Часть (30 г) экстракта культуры растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] (1600 мл), подготовленной путем смачивания н-гексаном. Затем последовательно осуществляли элюирование смесями н-гексан-этилацетат с получением фракции (130 мг), которую элюировали при соотношении растворителей в смеси н-гексан-этилацетат (4:1), фракций (1) (1,88 г) и (2) (780 мг), которые элюировали при соотношении (2:1), и фракции (3,56 г), которую элюировали при соотношении (1:2). Фракции (130 мг), которые элюировали при соотношении н-гексан:этилацетат (4:1), растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (55:45) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 63 (23,5 мг, 20 мин) и Соединения 70 (4,8 мг, 24 мин). Фракцию (1,88 г), которую элюировали при соотношении с н-гексан:этилацетат (2:1), перекристаллизовывали из ацетона (30 мл) с получением Соединения 61 (277 мг). Фракцию элюата (2) (780 мг) подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии [Silica Gel 60 F254 (товарное наименование, изготовитель Merck), 20 см × 20 см, толщина 1 мм] с использованием в качестве проявляющего растворителя смеси н-гексан-ацетон (3:2). Фракцию, имеющую значение Rf 0,4, собирали, экстрагировали этилацетатом и затем концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 60 (80,3 мг). Затем фракцию (3,56 г), которую элюировали при соотношении н-гексан:этилацетат (1:2), растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] (880 мл), подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол с получением фракции (926 мг), элюция которой происходила при соотношении хлороформ:метанол (98:2). Затем эту фракцию перекристаллизовывали из смеси ацетон-метанол (1 мл/3 мл) с получением Соединения 62 (339 мг). Фракцию (1,42 г), которую элюировали при соотношении хлороформ:метанол (97:3), подвергали очистке колоночной хроматографией с использованием Sephadex LH-20 (товарное наименование, изготовитель Amersham Pharmacia Biotech) (метанол, 900 мл), а затем методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] и с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (30:70). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 68 (4,5 мг, 21 мин).

Пример 37 (Соединения 64, 65, 71, 72 и 76)

Часть (30 г) экстракта культуры, полученного как описано в Примере 36, растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем (700 мл) [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)], подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол. Фракцию, которую элюировали при соотношении хлороформ:метанол (93:7), разделяли на две части, т.е., фракции (1) (156 мг) и (2) (164 мг). Фракцию (1) растворяли в небольшом количестве метанола и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (30:70) с получением четырех фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 64 (35,4 мг, 21 мин), Соединения 72 (13,7 мг, 27 мин), Соединения 71 (6,6 мг, 29 мин) и Соединения 65 (4,1 мг, 33 мин). Фракцию (2) подвергали очистке методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии в тех же условиях, и полученные фракции собирали и концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 71 (3,7 мг) вместе с Соединением 76 (4,5 мг, 20 мин).

Пример 38 (Соединения 69 и 74)

Экстракт культуры (39,5 г), полученный как описано в Примере 36, растворяли в н-гексане (300 мл × 2). Образованный таким образом осадок фильтровали и растворитель удаляли. Полученный осадок (8,1 г) растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем (650 мл) [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)], подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол с получением фракции (318 мг), элюция которой происходила при соотношении хлороформ:метанол (88:12). Эту фракцию разделяли в небольшом количестве метанола и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (30:70) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 74 (15,3 мг, 19 мин) и Соединения 69 (8,0 мг, 38 мин).

Пример 39 (Соединение 66)

Экстракт культуры (39,5 г), полученный как описано в Примере 36, растворяли в н-гексане (300 мл × 2). Образованный таким образом осадок фильтровали и растворитель удаляли. Полученный осадок (8,1 г) растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)] (650 мл), подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол с получением фракции (1,5 мг), элюция которой происходила при соотношении хлороформ:метанол (100:0). Затем эту фракцию подвергали очистке на колонке с силикагелем (620 мл), используя смесь растворителей н-гексан-этилацетат, с получением фракции (321 мг), которую элюировали при соотношении н-гексан:этилацетат (2:1). Полученную фракцию растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (с градиентом от 45:55 до 70:30) с получением Соединения 66 (14,4 мг, 34 мин).

Пример 40 (Соединения 73, 77 и 78)

Экстракт культуры (500 г), полученный как описано в Примере 36, растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем (6000 мл) [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)], подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол. Таким образом, получали фракцию (57 г), элюция которой происходила при соотношении хлороформ:метанол (95:5). Часть (18 г) этой фракции затем подвергали очистке на колонке с силикагелем (800 мл), используя смесь растворителей н-гексан-этилацетат. Фракцию, которую элюировали при соотношении н-гексан:этилацетат (2:1), разделяли на 2 части, т.е., фракции (1) (126 мг) и (2) (985 мг). Фракцию (1) растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (55:45). Полученную фракцию концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 78 (13,4 мг, 26 мин). С другой стороны, фракцию (2) подвергали очистке методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (45:55) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 73 (38,1 мг, 10 мин) и Соединения 77 (67,2 мг, 26 мин).

Пример 41 (Соединения 67 и 75)

Экстракт культуры (500 г), полученный как описано в Примере 36, растворяли в смеси растворителей хлороформ-метанол (4:1) и адсорбировали на колонке c силикагелем (6000 мл) [Silica Gel 60 (товарное наименование, изготовитель Merck)], подготовленной смачиванием хлороформом. Затем последовательно осуществляли элюирование смесью растворителей хлороформ-метанол. Таким образом, получали фракцию (57 г), элюция которой происходила при соотношении хлороформ:метанол (95:5). Часть (18 г) этой фракции затем подвергали очистке на колонке с силикагелем (800 мл), используя смесь растворителей н-гексан-этилацетат, с получением фракции, которую элюировали при соотношении н-гексан:этилацетат (1:2). Эту фракцию растворяли в небольшом количестве ацетона и очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии [колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-343 (20 × 250 мм), детекция: УФ-абсорбция при 254 нм, скорость потока: 10 мл/мин] с использованием в качестве подвижной фазы ацетонитрила-воды (pH 3,5, уксусная кислота) (40:60) с получением двух фракций. Каждую из этих фракций концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 67 (17,4 мг, 11 мин) вместе с полуочищенным образцом (23,9 мг). Этот полуочищенный образец подвергали очистке методом препаративной тонкослойной хроматографии [Silica Gel 60 F254 (товарное наименование, изготовитель Merck), 20 см × 20 см, толщина 0,5 мм] с использованием в качестве проявляющего растворителя смеси хлороформ-метанол (90:10). Фракцию, имеющую значение Rf 0,5, собирали, экстрагировали этилацетатом и затем концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 75 (4,3 мг).

В Таблице 2 представлены соединения, синтезированные и очищенные, как описано выше в Примерах, и данные этих соединений.

Соед.№	Структура	1Н-ЯМР	13С-ЯМР
1		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,48 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,83 (ддд, J=15,3, 9,6, 3,7 Гц, 1H), 2,33 (дт, J=15,3, 3,7 Гц, 1H), 2,94 (дт, J=9,6, 3,0 Гц, 1H), 3,19 (с, 1H), 3,86 (д, J=16,5 Гц, 1H), 4,51 (д, J=16,5 Гц, 1H), 5,41 (секстет, J=3,7 Гц, 1H), 5,78 (дд, J=9,8, 3,0 Гц, 1H), 6,05 (д, J=15,9 Гц, 1H), 6,15 (т, J=9,8 Гц, 1H), 6,45 (с, 1H), 7,48 (дд, J=15,9, 9,8 Гц, 1H)	(CDCl3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,5 (кв), 36,3 (т), 46,3 (т), 55,8 (д), 56,1 (д), 71,2 (д), 103,4 (д), 108,0 (с), 116,1 (с), 130,1 (д), 130,5 (д), 135,0 (д), 135,7 (с), 139,6 (д), 158,2 (с), 161,2 (с), 168,9 (с), 199,1 (с)
2		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,51 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,54 (ддд, J=14,6, 8,5, 3,7 Гц, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,38 (дт, J=14,6, 3,7 Гц, 1H), 2,99 (дт, J=8,5, 3,7 Гц, 1H), 3,49 (кв, J=1,8 Гц, 1H), 3,91 (д, J=15,9 Гц, 1H), 4,04 (д, J=15,9 Гц, 1H), 5,37 (дкв, J=6,7, 3,7 Гц, 1H), 5,74 (дд, J=11,0, 3,7 Гц, 1H), 6,03 (д, J=16,5 Гц, 1H), 6,12 (т, J=11,0 Гц, 1H), 7,02 (с, 1H), 7,45 (дд, J=16,5, 11,0 Гц, 1H)	(CDCl3 , 125 МГц) ч/млн: 18,6 (кв), 20,6 (кв), 20,7 (кв), 37,1 (т), 45,1 (т), 55,0 (д), 55,4 (д), 70,8 (д), 117,8 (д), 126,3 (с), 126,5 (с), 129,9 (д), 130,6 (д), 133,6 (с), 136,1 (д), 139,1 (д), 146,6 (с), 148,7 (с), 163,8 (с), 167,5 (с), 168,1 (с), 195,6 (с)
3		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,21 (м, 1H), 1,41 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,81 (дт, J=15,9, 4,3 Гц, 1H), 1,97 (ддд, J=15,9, 4,9, 2,4 Гц, 1H), 2,23 (м, 1H), 2,35 (ддд, J=14,0, 7,3, 2,4 Гц, 1H), 2,48 (дд, J=7,3, 3,7 Гц, 1H), 2,52 (дт, J=9,8, 2,4 Гц, 1H), 2,74 (секстет, J=2,4 Гц, 1H), 4,27 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,40 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,21 (дкв, J=6,1, 4,3 Гц, 1H), 6,05 (дд, J=15,9, 1,2 Гц, 1H), 6,48 (с, 1H), 6,85 (ддд, J=15,9, 11,0, 4,3 Гц, 1H)	(CDCl3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 17,8 (кв), 29,2 (т), 30,9 (т), 36,4 (т), 45,1 (т), 56,0 (д), 57,6 (д), 72,1 (д), 103,5 (д), 106,3 (с), 116,3 (с), 130,1 (д), 136,1 (с), 148,0 (д), 158,8 (с), 163,4 (с), 170,3 (с), 197,0 (с)
4		(CDCl3/CD 3OD, 500 M Гц) ч/млн: 1,02 (м, 1H), 1,32 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,36 (м, 1H), 1,41 (м, 2H), 1,64 (м, 1H), 1,77 (ддд, J=15,5, 6,4, 2,7 Гц, 1H), 1,92 (ддд, J=14,0, 7,0, 3,0 Гц, 1H), 2,04 (ддд, J=15,5, 5,5, 4,3 Гц, 1H), 2,34 (м, 2H), 2,53 (дт, J=8,8, 3,0 Гц, 1H), 2,68 (м, 1H), 4,02 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,25 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,15 (двойной кв, J=6,4, 2,7 Гц, 1H), 6,37 (с, 1H)	(CDCl3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,6 (кв), 22,1 (т), 23,2 (т), 30,8 (т), 36,1 (т), 40,3 (т), 46,5 (т), 54,8 (д), 57,6 (д), 70,8 (д), 103,1 (д), 106,4 (с), 115,6 (с), 135,6 (с), 158,2 (с), 162,2 (с), 169,6 (с), 208,0 (с)
5		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,41 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,95 (дд, J=16,1, 5,5 Гц, 1H), 2,50 (ддд, J=16,1, 7,6, 3,0 Гц, 1H), 2,97 (квинтет, J=3,0 Гц, 1H), 3,18 (дд, J=12,8, 4,0 Гц, 1H), 3,28 (м, 1H), 3,73 (дд, J=12,8, 10,4 Гц, 1H), 4,52 (септет, J=4,0 Гц, 1H), 5,21 (м, 1H), 5,31 (дд, J=11,3, 5,5 Гц, 1H), 5,78˜5,90 (м, 3H), 6,35 (с, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,1 (кв), 36,0 (т), 40,0 (т), 56,0 (д), 57,2 (д), 70,3 (д), 72,7 (д), 103,5 (д), 108,6 (с), 115,9 (с), 127,4 (д), 129,3 (д), 130,7 (д), 139,0 (с), 139,1 (д), 159,0 (с), 162,8 (с), 171,2 (с)
7		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,19 (м, 1H), 1,35 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,85 (ддд, J=15,5, 5,5, 2,4 Гц, 1H), 1,95 (м, 1H), 2,01 (м, 1H), 2,16 (м, 1Н), 2,27 (ддд, J=15,5, 6,7, 3,0 Гц, 1Н), 2,50 (дт, J=9,1, 3,0 Гц, 1Н), 2,85 (квинтет, J=3,0 Гц, 1Н), 3,23 (дд, J=12,5, 5,5 Гц, 1Н), 3,63 (дд, J=12,5, 9,4 Гц, 1Н), 4,33 (квинтет, J=5,5 Гц, 1Н), 5,07 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1Н), 5,28 (дд, J=15,5, 5,5 Гц, 1Н), 5,38 (ддд, J=15,5, 12,5, 5,5, 1Н), 6,32 (с,1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,2 (кв), 29,5 (т), 31,3 (т), 37,0 (т), 40,2 (т), 58,3 (д), 59,6 (д), 70,9 (д), 71,8 (д), 103,4 (д), 109,3 (д), 115,9 (д), 129,1 (д), 133,2 (д), 140,0 (д), 159,2 (с), 163,0 (с), 171,8 (с)
8		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,27 (м, 1H), 1,35 (д, J=6,1 Гц, 3H), 2,02 (м, 1H), 2,03 (м, 1H), 2,05 (м, 1H), 2,17 (м, 1H), 2,20 (м, 1H), 2,86 (дд, J=5,8, 3,0 Гц, 1Н), 2,92 (дт, J=8,5, 3,0 Гц, 1Н), 3,25 (дд, J=12,8, 5,5 Гц, 1Н), 3,30 (дд, J=12,8, 9,8 Гц, 1Н), 4,43 (м, 1Н), 4,93 (двойной секстет, J=6,1, 1,8 Гц, 1Н), 5,37 (дд, J=15,5, 4,0 Гц, 1H), 5,64 (дт, J=15,5, 6,1 Гц, 1H), 6,41 (с,1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,4 (кв), 28,8 (т), 31,2 (т), 36,8 (т), 39,7 (т), 56,8 (д), 57,6 (д), 69,5 (д), 70,6 (д), 103,3 (д), 114,7 (с), 114,9 (с), 129,7 (д), 133,4 (д), 138,5 (с), 157,3 (с), 158,2 (с), 169,5 (с)
9		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,11 (м, 1H), 1,43 (м, 1H), 1,45 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,48 (м, 1H), 1,52 (м, 1H), 1,57 (м, 1H), 1,74 (ддд, J=15,5, 7,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,09 (двойной квинтет, J=14,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,36 (ддд, J=15,5, 7,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,71 (дт, J=9,4, 2,4 Гц, 1Н), 3,03 (дт, J=7,3, 2,4 Гц, 1H), 3,21 (дд, J=7,3, 1,8 Гц, 2H), 3,88 (м, 1H), 5,20 (двойной квинтет, J=6,4, 2,4 Гц, 1Н), 6,38 (с, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,0 (кв), 25,2 (т), 25,8 (т), 32,2 (т), 36,8 (т), 38,0 (т), 39,9 (т), 58,2 (д), 60,5 (д), 71,4 (д), 72,8 (д), 103,0 (д), 112,3 (с), 115,3 (с), 139,7 (с), 158,0 (с), 160,1 (с), 171,1 (с)
10		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,29 (м, 1H), 1,35 (м, 2H), 1,38 (м, 2H), 1,40 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,50 (м, 1H), 1,57 (м, 1H), 1,94 (м, 1H), 2,37 (м, 1H), 2,81 (дт, J=7,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,88 (дт, J=7,3, 2,4 Гц, 1H), 2,98 (дд, J=13,4, 5,5 Гц, 1Н), 3,15 (дд, J=13,4, 7,2 Гц, 1Н), 3,82 (квинтет, J=6,1 Гц, 1H), 5,12 (двойной секстет, J=6,1, 2,4 Гц, 1H), 6,39 (с, 1H)	(CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,5 (кв), 23,5 (т), 24,6 (т), 30,2 (т), 35,1 (т), 37,8 (т), 39,2 (т), 57,1 (д), 59,1 (д), 72,2 (д), 72,3 (д), 102,9 (д), 114,6 (с), 115,9 (с), 138,5 (с), 156,6 (с), 156,8 (с), 169,8 (с)
11		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,50 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,61 (ддд, J=14,6, 8,6, 3,7 Гц, 1Н), 2,40 (дт, J=14,6, 3,7 Гц, 1Н), 3,02 (дт, J=8,6, 1,8 Гц, 1Н), 3,40 (ушир.т, J=1,8 Гц, 1Н), 3,75 (д, J=15,9 Гц, 1H), 3,83 (с, 3H), 3,89 (с, 3H), 3,95 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 5,35 (дкв, J=6,7, 3,7 Гц, 1Н), 5,69 (дд, J=10,4, 4,3 Гц, 1Н), 6,07 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 6,12 (т, J=10,4 Гц, 1H), 6,45 (с, 1H), 7,48 (дд, J=15,9, 10,4 Гц, 1H)	(CDCl 3, 125 МГц) ч/млн: 18,6 (кв), 37,3 (т), 45,2 (т), 55,5 (д), 55,6 (д), 56,3 (кв), 56,4 (кв), 70,2 (д), 95,5 (д), 115,5 (с), 117,9 (с), 130,2 (д), 131,0 (д), 132,4 (с), 135,6 (д), 138,6 (д), 156,3 (с), 156,9 (с), 166,0 (с), 196,4 (с)
12		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,42 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,89 (ддд, J=15,2, 9,1, 3,6 Гц, 1Н), 2,03 (дд, J=15,2, 7,0 Гц, 1Н), 3,66 (д, J=16,2 Гц, 1Н), 3,99 (дд, J=9,1, 5,8 Гц, 1Н), 4,21 (д, J=16,2 Гц, 1Н), 5,12 (дд, J=10,0, 5,8 Гц, 1Н), 5,38 (дкв, J=6,4, 3,6 Гц, 1Н), 5,75 (т, J=10,0 Гц, 1Н), 5,95 (д, J=16,1 Гц, 1H), 6,17 (т, J=11,0 Гц, 1H), 6,46 (с, 1H), 7,21 (дд, J=16,1, 11,0 Гц, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,3 (кв), 38,2 (т), 45,7 (т), 60,6 (д), 70,9 (д), 72,6 (д), 103,9 (д), 114,3 (с), 116,3 (с), 130,8 (д), 132,6 (д), 134,6 (с), 138,1 (д), 141,1 (д), 156,9 (с), 157,0 (с), 168,1 (с), 199,8 (с)
13		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,46 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,96 (ддд, J=14,0, 10,4, 3,0 Гц, 1Н), 2,12 (ддд, J=14,0, 9,8, 3,0 Гц, 1Н), 3,76 (д, J=15,3 Гц, 1Н), 3,88 (дт, J=9,8, 3,0 Гц, 1Н), 4,73 (д, J=15,3 Гц, 1H), 5,00 (дд, J=9,8, 3,0 Гц, 1H), 5,27 (м, 1H), 6,00 (д, J=15,9 Гц, 1H), 6,02 (т, J=9,8 Гц, 1H), 6,14 (т, J=9,8 Гц, 1H), 6,46 (с, 1Н), 7,18 (дд, J=15,9, 9,8 Гц, 1Н)	(CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,8 (кв), 40,6 (т), 44,5 (т), 60,4 (д), 71,0 (д), 72,1 (д), 104,1 (д), 113,8 (с), 115,7 (с), 127,6 (д), 131,7 (д), 135,4 (с), 138,6 (д), 139,1 (д), 157,8 (с), 158,6 (с), 168,5 (с), 198,7 (с)
14		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,42 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,87 (ддд, J=15,3, 9,2, 3,7 Гц, 1Н), 1,95 (дд, J=15,3, 6,7 Гц, 1Н), 3,63 (д, J=15,9 Гц, 1H), 3,80 (м, 1H), 4,18 (д, J=15,9 Гц, 1H), 4,78 (дд, J=8,5, 6,1 Гц, 1H), 5,40 (м, 1H), 5,73 (дд, J=11,0, 8,5 Гц, 1H), 5,90 (д, J=15,9 Гц, 1H), 6,14 (т, J=11,0 Гц, 1H), 6,41 (с, 1H), 7,30 (дд, J=15,9, 11,0 Гц, 1H)	(CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,4 (кв), 37,8 (т), 45,8 (т), 71,2 (д), 71,9 (д), 72,0 (д), 103,8 (д), 114,3 (с), 116,6 (с), 130,0 (д), 131,5 (д), 134,7 (с), 142,4 (д), 142,9 (д), 156,7 (с), 156,9 (с), 168,4 (с), 200,2 (с)
15		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,44 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,83 (ддд, J=14,6, 9,8, 3,0 Гц, 1Н), 2,10 (ддд, J=14,6, 9,8, 3,0 Гц, 1Н), 3,64 (дт, J=9,8, 3,0 Гц, 1Н), 3,87 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 4,53 (д, J=15,9 Гц, 1H), 4,56 (м, 1H), 5,45 (м, 1H), 5,94 (дд, J=10,4, 7,3 Гц, 1Н), 5,96 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 6,12 (т, J=10,4 Гц, 1H), 6,44 (с, 1H), 7,36 (дд, J=15,9, 10,4 Гц, 1H)	(CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 21,0 (кв), 39,3 (т), 44,5 (т), 69,5 (д), 71,2 (д), 72,7 (д), 104,0 (д), 113,0 (с), 115,9 (с), 127,2 (д), 131,3 (д), 135,8 (с), 140,6 (д), 143,7 (д), 158,2 (с), 158,9 (с), 168,7 (с), 199,5 (с)
16		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,29 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,70 (ддд, J=11,6, 10,4, 2,4 Гц, 1Н), 2,17 (дт, J=11,6, 6,1 Гц, 1Н), 4,01 (д, J=18,9 Гц, 1H), 4,05 (м, 1H), 4,34 (д, J=18,9 Гц, 1H), 5,01 (м, 1H), 5,46 (д, J=9,8 Гц, 1H), 5,82 (дд, J=15,3, 9,8 Гц, 1H), 6,02 (т, J=11,0 Гц, 1Н), 6,10 (дд, J=15,3, 11,0 Гц, 1Н), 6,30 (т, J=11,0 Гц, 1H), 6,45 (с, 1H)	(CD3 OD, 125 МГц) ч/млн: 20,6 (кв), 42,3 (т), 42,4 (т), 62,9 (д), 70,4 (д), 71,5 (д), 103,8 (д), 115,0 (с), 116,4 (с), 126,2 (д), 127,6 (д), 133,4 (с), 134,8 (д), 140,8 (д), 156,5 (с), 156,6 (с), 169,4 (с), 201,0 (с)
17		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,38 (с, 3H), 1,39 (с, 3H), 1,46 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,87 (дд, J=16,1, 9,1 Гц, 1Н), 2,08 (ддд, J=16,1, 5,8, 1,8 Гц, 1Н), 3,73 (дд, J=9,1, 5,8 Гц, 1Н), 3,85 (д, J=16,4 Гц, 1Н), 4,38 (д, J=16,4 Гц, 1Н), 4,71 (т, J=9,1 Гц, 1Н), 5,65 (м, 1Н), 5,78 (дд, J=11,3, 9,1 Гц, 1Н), 6,03 (д, J=16,1 Гц, 1Н), 6,32 (т, J=11,3 Гц, 1Н), 6,47 (с, 1Н), 7,83 (дд, J=16,1, 11,3 Гц, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 21,8 (кв), 27,2 (кв), 27,3 (кв), 34,5 (т), 45,9 (т), 70,3 (д), 75,9 (д), 78,9 (д), 103,8 (д), 110,1 (с), 111,0 (с), 116,2 (с), 130,3 (д), 131,3 (д), 136,6 (с), 138,7 (д), 142,2 (д), 158,8 (с), 160,3 (с), 169,1 (с), 200,4 (с)
18		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,52 (д, J=6,4 Гц, 3H), 2,02 (ддд, J=14,9, 9,1, 4,0 Гц, 1Н), 2,09 (дд, J=14,9, 6,4 Гц, 1Н), 3,79 (д, J=16,1 Гц, 1Н), 4,20 (д, J=16,1 Гц, 1Н), 5,23 (дд, J=10,0, 5,8 Гц, 1Н), 5,34 (дт, J=6,4, 4,0 Гц, 1Н), 5,39 (дд, J=8,8, 5,8 Гц, 1Н), 5,73 (т, J=10,0 Гц, 1Н), 6,00 (д, J=16,1 Гц, 1H), 6,16 (т, J=11,0 Гц, 1H), 6,48 (с, 1H), 7,18 (дд, J=16,1, 11,0 Гц, 1Н), 8,02 (с, 1Н)	(CDCl3/CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,0 (кв), 35,4 (т), 45,4 (т), 56,8 (д), 70,0 (д), 73,3 (д), 103,6 (д), 114,0 (с), 115,1 (с), 130,9 (д), 133,1 (д), 133,6 (с), 135,6 (д), 139,2 (д), 156,3 (с), 156,4 (с), 160,6 (д), 167,3 (с), 198,8 (с)
19		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,25 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,74 (ддд, J=15,3, 10,4, 7,9 Гц, 1Н), 2,01 (д, J=15,3 Гц, 1Н), 2,49 (дд, J=14,6, 3,0 Гц, 1Н), 3,11 (дд, J=14,6, 12,2 Гц, 1Н), 3,81 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,92 (д, J=17,7 Гц, 1H), 3,97 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,39 (дд, J=7,9, 1,8 Гц, 1H), 4,61 (д, J=12,2 Гц, 1H), 5,11 (м, 1H), 5,83 (дт, J=10,4, 1,8 Гц, 1H), 5,91 (дт, J=10,4, 1,8 Гц, 1H), 6,47 (с, 1H), 9,97 (ушир.с, 1H), 10,35 (ушир.с, 1H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 20,8 (кв), 37,8 (т), 43,3 (т), 46,0 (т), 56,1 (д), 69,2 (д), 72,1 (д), 72,6 (д), 102,2 (д), 112,3 (с), 115,0 (с), 126,9 (д), 131,6 (д), 131,8 (с), 154,0 (с), 154,7 (с), 167,2 (с), 202,8 (с)
20		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,40 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,77 (ддд, J=10,4, 7,9, 1,5 Гц, 1H), 1,91 (м, 1H), 2,04 (м, 1H), 2,13 (м, 1Н), 2,23 (дд, J=12,5, 7,3 Гц, 1Н), 2,42 (дд, J=14,6, 4,9 Гц, 1Н), 2,73 (дд, J=15,5, 11,3 Гц, 1Н), 3,04 (дд, J=14,6, 4,6 Гц, 1Н), 3,30 (т, J=10,0 Гц, 1Н), 3,91 (ддд, J=10,4, 7,9, 1,5 Гц, 1Н), 4,13 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,42 (секстет, J=4,6 Гц, 1Н), 4,94 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 5,26 (секстет, J=6,4 Гц, 1H), 6,60 (с, 1H), 11,9 (ушир.с, 1H)	(CDCl3, 125 МГц) ч/млн: 20,6 (кв), 27,2 (т), 28,7 (т), 42,5 (т), 45,3 (т), 50,4 (т), 58,6 (д), 72,3 (д), 78,1 (д), 81,3 (д), 103,8 (д), 107,4 (с), 114,5 (с), 135,8 (с), 156,3 (с), 164,1 (с), 170,3 (с), 206,1 (с)
21		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,20 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,41 (м, 1H), 1,66 (м, 1H), 1,70 (м, 1H), 1,75 (м, 1H), 2,13 (д, J=13,4 Гц, 1H), 2,16 (дд, J=11,0, 2,7 Гц, 1H), 2,22 (м, 1H), 2,57 (т, J=11,0 Гц, 1Н), 3,28 (т, J=9,8 Гц, 1Н), 3,42 (ддд, J=11,6, 9,8, 4,6 Гц, 1Н), 3,51 (дт, J=11,0, 2,7 Гц, 1Н), 4,13 (д, J=19,2 Гц, 1Н), 5,05 (двойной секстет, J=6,1, 1,8 Гц, 1Н), 5,31 (ушир.д, J=19,2 Гц, 1Н), 6,33 (с, 1Н)	(CDCl3 /CD3OD, 125 M Гц) ч/млн: 20,8 (кв), 32,4 (т), 34,1 (т), 37,9 (т), 47,3 (т), 47,9 (т), 57,5 (д), 74,4 (д), 76,2 (д), 81,7 (д), 102,8 (д), 107,6 (с), 115,0 (с), 134,7 (с), 157,3 (с), 161,3 (с), 170,5 (с), 207,0 (с)
22		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,30 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,75 (дд, J=11,6, 5,5 Гц, 1H), 1,80 (д, J=14,6 Гц, 1H), 1,99 (м, 1H), 2,18 (м, 2H), 2,54 (ушир.с, 2H), 2,85 (ушир.с, 2H), 3,82 (м, 1H), 3,91 (ушир.с, 1H), 4,42 (ушир.с, 1H), 5,15 (м, 1H), 6,43 (с, 1H)	(CDCl3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 21,4 (кв), 27,0 (т), 28,7 (т), 35,8 (т), 46,9 (т), 46,9 (т), 58,6 (д), 68,2 (д), 74,1 (д), 77,0 (д), 103,2 (д), 107,0 (с), 115,5 (с), 134,8 (с), 158,0 (с), 162,1 (с), 170,9 (с), 205,0 (с)
23		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,26 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,44 (ддд, J=14,6, 7,9, 3,0 Гц, 1Н), 2,16 (д, J=12,8 Гц, 1Н), 2,37 (дд, J=14,6, 5,5 Гц, 1Н), 2,76 (дд, J=14,6, 4,9 Гц, 1Н), 3,20 (м, 1H), 3,71 (д, J=18,3 Гц, 1H), 3,90 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,21 (дт, J=9,8, 1,8 Гц, 1H), 4,88 (д, J=6,7 Гц, 1H), 5,01 (ушир.с, 1H), 5,20 (септет, J=3,7 Гц, 1Н), 5,89 (дт, J=6,1, 1,8 Гц, 1Н), 6,00 (дт, J=6,1, 1,8 Гц, 1H), 6,50 (с, 1H), 9,97 (с, 1H), 10,47 (ушир.с, 1H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,2 (кв), 37,6 (т), 45,1 (т), 48,3 (т), 69,7 (д), 70,3 (д), 83,3 (д), 88,4 (д), 102,4 (д), 111,7 (с), 115,3 (с), 129,3 (д), 130,0 (д), 130,2 (с), 154,4 (с), 154,7 (с), 166,4 (с), 203,8 (с)
25		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,22 (дт, J=17,0, 9,1 Гц, 1H), 1,43 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,98 (м, 1H), 2,00 (м, 1H), 2,06 (м, 1H), 2,21 (м, 1Н), 2,33 (ддд, J=15,8, 7,0, 3,0 Гц, 1Н), 2,50 (дт, J=9,4, 1,8 Гц, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,35 (дд, J=12,5, 6,1 Гц, 1H) 3,89 (дд, J=12,5, 9,8 Гц, 1H), 3,94 (с, 3H), 4,43 (м, 1H), 5,16 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1Н), 5,36 (дд, J=15,2, 4,3 Гц, 1Н), 5,53 (дддд, J=15,2, 6,7, 4,3, 1,8 Гц, 1Н), 6,58 (с, 1Н)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 20,2 (кв), 29,3 (т), 31,1 (т), 36,5 (т), 40,3 (т), 56,9 (кв), 57,2 (д), 58,3 (д), 70,6 (д), 70,7 (д), 100,2 (д), 108,0 (с), 116,4 (с), 127,9 (д), 133,4 (д), 140,4 (с), 160,4 (с), 164,5 (с), 171,8 (с)
26		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,09 (м, 1H), 1,40 (ддд, J=14,6, 8,6, 3,0 Гц, 1H), 1,46 (д, J=6,7 Гц, 3H), 2,10-2,20 (м, 3H), 2,31 (ддд, J=14,6, 6,7, 3,7 Гц, 1Н), 2,69 (дт, J=9,2, 1,8 Гц, 1Н), 2,73 (дд, J=13,4, 5,5 Гц, 1Н), 2,83 (ддд, J=8,6, 3,7, 1,8 Гц, 1Н), 3,28 (дд, J=13,4, 6,7 Гц, 1Н), 3,84 (с, 3H), 3,94 (с, 3H), 4,49 (дд, J=13,4, 6,7 Гц, 1H), 5,18 (двойной квинтет, J=6,7, 3,0 Гц, 1H), 5,52 (дд, J=15,9, 6,7 Гц, 1H), 5,58 (м, 1H), 6,75 (с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,8 (кв), 28,7 (т), 33,3 (т), 39,0 (т), 40,8 (т), 56,1 (д), 56,7 (кв), 56,8 (кв), 58,0 (д), 71,5 (д), 73,0 (д), 96,5 (д), 115,1 (с), 119,9 (с), 130,2 (д), 135,7 (д), 136,1 (с), 156,9 (с), 157,4 (с), 167,2 (с)
27		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,15 (м, 1H), 1,47 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,48 (ддд, J=15,3, 7,9, 3,0 Гц, 1H), 1,94 (с, 3H), 2,13-2,23 (м, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,30 (ддд, J=15,3, 7,9, 4,3 Гц, 1H), 2,34 (с, 3H), 2,71 (дт, J=9,2, 2,4 Гц, 1Н), 2,88 (ддд, J=7,9, 3,7, 1,8 Гц, 1Н), 3,05 (дд, J=14,0, 4,9 Гц, 1H), 3,51 (дд, J=14,0, 7,9 Гц, 1H), 5,30 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1H), 5,53 (дд, J=14,6, 7,3 Гц, 1H), 5,55 (м, 1H), 5,74 (дт, J=14,6, 6,7 Гц, 1Н), 7,16 (с, 1Н)	(Ацетон-d6 , 125 МГц) ч/млн: 19,8 (кв), 20,4 (кв), 20,6 (кв), 20,9 (кв), 28,0 (т), 32,9 (т), 37,4 (т), 38,9 (т), 56,2 (д), 57,7 (д), 72,8 (д), 74,7 (д), 118,6 (д), 126,0 (с), 129,0 (с), 130,0 (д), 134,1 (д), 136,1 (с), 147,6 (с), 149,2 (с), 165,5 (с), 168,4 (с), 168,7 (с), 169,9 (с)
28		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,17 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,53 (дт, J=14,0, 5,5 Гц, 1H), 1,62 (м, 2H), 1,66 (дд, J=14,0, 6,7 Гц, 1H) 2,25 (м, 2H), 2,68 (дт, J=5,5, 2,4 Гц, 1H), 2,80 (м, 1H), 2,99 (дд, J=17,1, 10,4 Гц, 1Н), 3,28 (дд, J=17,1, 3,7 Гц, 1Н), 3,92 (квинтет, J=6,1 Гц, 1H), 3,98 (с, 3H), 5,13 (ддд, J=10,4, 3,7, 3,0 Гц, 1H) 5,76 (дд, J=15,3, 6,7 Гц, 1H), 6,02 (дт, J=15,3, 6,7 Гц, 1H), 6,60 (с, 1H)	(Ацетон-d6 , 125 МГц) ч/млн: 23,9 (кв), 29,4 (т), 31,5 (т), 32,1 (т), 42,3 (т), 56,6 (д), 57,1 (кв), 58,0 (д), 65,8 (д), 79,3 (д), 99,9 (д), 102,9 (с), 112,0 (с), 128,2 (д), 135,8 (д),, 138,9 (с), 162,1 (с), 164,0 (с), 170,0 (с)
29		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,22 (м, 1H), 1,33 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,93 (м, 1H), 1,96 (м, 2H), 2,15 (дд, J=9,8, 3,0 Гц, 1H), 2,18 (м, 1H), 2,76 (дд, J=5,5, 3,7 Гц, 1H), 2,84 (дт, J=7,9, 2,4 Гц, 1H), 3,09 (дд, J=12,8, 10,4 Гц, 1Н), 3,18 (дд, J=12,8, 4,3 Гц, 1Н), 3,88 (с, 3H), 3,96 (с, 3H), 4,52 (м, 1H), 4,81 (квинтет, J=6,1 Гц, 1H), 5,32 (ддд, J=16,5, 3,0, 1,2 Гц, 1H), 5,72 (м, 1H), 6,78 (с, 1H)	(Ацетон-d6 , 125 МГц) ч/млн: 20,4 (кв), 28,6 (т), 30,8 (т), 36,7 (т), 40,4 (т), 55,3 (д), 56,4 (д), 56,7 (кв), 56,8 (кв), 68,6 (д), 69,4 (д), 96,8 (д), 115,6 (с), 118,9 (с), 128,8 (д), 133,2 (д), 137,1 (с), 158,0 (с), 158,6 (с), 167,7 (с)
30		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,27 (м, 1H), 1,40 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,96 (м, 1H), 1,98 (с, 3H), 2,03-2,10 (м, 3H), 2,11 (м, 1H), 2,27 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,75 (дт, J=7,9, 2,4 Гц, 1H), 2,81 (м, 1H), 3,35 (дд, J=14,0, 6,7 Гц, 1H), 3,55 (дд, J=14,0, 8,5 Гц, 1H), 5,09 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1Н), 5,42 (дд, J=15,9, 4,9 Гц, 1Н), 5,57 (дд, J=12,8, 6,7 Гц, 1Н), 5,69 (ддт, J=15,9, 6,7, 1,2 Гц, 1Н), 7,18 (с, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 19,8 (кв), 20,4 (кв), 20,9 (кв), 20,9 (кв), 27,5 (т), 30,9 (т), 36,3 (т), 37,2 (т), 55,4 (д), 56,1 (д), 71,2 (д), 71,2 (д), 119,2 (д), 126,6 (с), 128,1 (с), 128,5 (д), 133,2 (д), 136,9 (с), 148,7 (с), 149,7 (с), 165,2 (с), 168,3 (с), 169,0 (с), 169,7 (с)
31		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,31 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,66 (м, 2H), 2,10 (дддд, J=14,6, 4,9, 3,7, 3,0 Гц, 1Н), 2,53 (ддд, J=14,0, 6,7, 3,7 Гц, 1Н), 2,60 (дт, J=7,9, 3,0 Гц, 1Н), 2,69 (дт, J=9,2, 3,0 Гц, 1Н), 2,81 (дд, J=12,2, 7,3 Гц, 1Н), 3,14 (дд, J=12,2, 7,9 Гц, 1Н), 4,06 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,22 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,18 (м, 1H), 5,28 (ддд, J=15,3, 7,3, 6,7 Гц, 1H) 5,40 (ддд, J=15,3, 7,9, 7,3 Гц, 1Н), 6,38 (с, 1Н)	(CDCl 3/CD3OD, 125 M Гц) ч/млн: 18,9 (кв), 33,8 (т), 36,2 (т), 45,4 (т), 45,8 (т), 53,7 (д), 58,2 (д), 71,5 (д), 103,1 (д), 107,6 (с), 115,6 (с), 125,9 (д), 129,2 (д), 135,2 (с), 157,8 (с), 161,0 (с), 169,1 (с), 205,6 (с)
32		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,40 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,63 (м, 2H), 1,79 (ддд, J=14,9, 6,4, 3,0 Гц, 1Н), 1,89 (ддд, J=14,9, 7,6, 6,4 Гц, 1Н), 2,20 (м, 2H), 3,04 (дд, J=12,5, 7,6 Гц, 1H), 3,16 (дд, J=12,5, 7,6 Гц, 1H) 3,78 (ддд, J=6,7, 6,4, 5,2 Гц, 1Н), 4,48 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,59 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 5,33 (двойной квинтет, J=6,4, 3,0 Гц, 1Н), 5,47 (дт, J=15,2, 7,6 Гц, 1Н), 5,60 (ддд, J=15,2, 7,6, 7,0 Гц, 1Н), 6,53 (с, 1H)	(CDCl 3, 125 M Гц) ч/млн: 20,6 (кв), 28,0 (т), 35,3 (т), 42,1 (т), 45,1 (т), 46,4 (т), 66,4 (д), 71,7 (д), 103,7 (д), 108,5 (с), 115,2 (с), 123,5 (д), 135,2 (д), 135,8 (с), 156,0 (с), 161,2 (с), 168,0 (с), 205,0 (с)
33		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,42 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,86 (м, 2H), 2,04 (м, 1H), 2,20 (м, 1H), 2,29 (м, 1Н), 2,32 (м, 1H), 2,40 (м, 1H), 2,73 (ддд, J=13,4, 8,8, 3,0 Гц, 1Н), 3,60 (ддд, J=6,7, 6,4, 5,8 Гц, 1Н), 4,24 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,38 (д, J=17,7 Гц, 1H), 5,41-5,50 (м, 3H), 6,50 (с, 1H)	(CDCl 3, 125 M Гц) ч/млн: 20,3 (кв), 22,4 (т), 34,6 (т), 41,1 (т), 41,4 (т), 47,4 (т), 69,3 (д), 71,2 (д), 103,8 (д), 107,8 (с), 115,1 (с), 126,5 (д), 131,1 (д), 136,1 (с), 156,7 (с), 161,9 (с), 168,8 (с), 207,8 (с)
34		(CDCl3, 500 МГц) ч/млн: 1,24 (м, 2H), 1,32 (м, 1H), 1,44 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,46 (м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,69 (м, 1H), 1,84 (ддд, J=15,3, 6,7, 3,0 Гц, 1Н), 1,95 (ддд, J=15,3, 7,3, 5,5 Гц, 1Н), 2,32 (ддд, J=15,9, 9,2, 3,7 Гц, 1Н), 2,58 (ддд, J=15,9, 8,5, 3,0 Гц, 1Н), 3,71 (ддд, J=6,7, 6,1, 5,5 Гц, 1Н), 4,33 (д, J=17,7 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=17,7 Гц, 1H), 5,47 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1H), 6,54 (с, 1H)	(CDCl3 , 125 МГц) ч/млн: 20,3 (кв), 22,0 (т), 22,8 (т), 25,2 (т), 34,9 (т), 40,6 (т), 42,3 (т), 46,5 (т), 66,4 (д), 71,4 (д), 103,8 (д), 107,9 (с), 115,3 (с), 136,2 (с), 156,3 (с), 161,7 (с), 168,3 (с), 207,9 (с)
35		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,52 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,57 (м, 1H), 2,41 (м, 1H), 3,01 (ддд, J=9,2, 3,7, 1,8 Гц, 1H), 3,34 (м, 1H), 3,79 (д, J=15,9 Гц, 1H), 3,90 (д, J=15,9 Гц, 1H), 5,29 (двойной квинтет, J=6,7, 3,7 Гц, 1H), 5,56 (дд, J=10,4, 3,0 Гц, 1H), 6,16 (м, 1H), 6,43 (с, 1H), 6,83 (д, J=15,9 Гц, 1H), 7,22 (дд, J=15,9, 11,0 Гц, 1H)	(CDCl3, 125 МГц) ч/млн: 18,6 (кв), 36,2 (т), 38,1 (т), 56,6 (д), 57,0 (д), 72,3 (д), 103,4 (д), 114,6 (с), 116,2 (с), 121,9 (д), 130,8 (д), 132,5 (д), 132,8 (д), 135,5 (с), 154,8 (с), 156,7 (с), 157,1 (с), 169,0 (с)
36		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,29 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,37 (ддд, J=14,6, 9,2, 2,4 Гц, 1H), 2,01 (м, 1H), 2,16 (м, 2H), 2,19 (м, 1Н), 2,50 (ддд, J=14,0, 7,3, 3,0 Гц, 1Н), 2,79 (дд, J=14,0, 3,0 Гц, 1Н), 2,85 (ддд, J=5,5, 3,0, 2,4 Гц, 1Н), 3,01 (дт, J=9,2, 2,4 Гц, 1H), 3,23 (дд, J=14,0, 10,4 Гц, 1H), 3,93 (м, 1H) 5,22 (дсекстет, J=6,7, 2,4 Гц, 1Н), 5,35 (дт, J=15,3, 7,3 Гц, 1Н), 5,52 (дт, J=15,3, 7,9 Гц, 1Н), 6,26 (с, 1Н)	(CDCl 3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,3 (кв), 33,1 (т), 36,4 (т), 37,1 (т), 39,4 (т), 54,6 (д), 59,4 (д), 70,1 (д), 70,5 (д), 102,0 (д), 111,8 (с), 113,7 (с), 127,6 (д), 129,8 (д), 138,1 (с), 155,8 (с), 157,7 (с), 169,4 (с)
37		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,22 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,27 (ддд, J=14,0, 6,7, 1,8 Гц, 1Н), 1,90 (дд, J=12,2, 11,6 Гц, 1Н), 2,07 (ддд, J=14,0, 11,0, 3,0 Гц, 1Н), 2,40 (м, 2H), 2,45 (дд, J=14,6, 3,0 Гц, 1Н), 2,66 (дд, J=14,0, 11,0 Гц, 1Н), 2,81 (м, 1H), 2,88 (кв, J=2,4 Гц, 1H), 4,05 (м, 1H), 5,17 (ддд, J=15,3, 9,8, 4,9 Гц, 1Н), 5,53 (ддд, J=15,3, 10,4, 4,9 Гц, 1Н), 6,21 (с, 1H)	(CDCl3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,1 (кв), 32,7 (т), 37,0 (т), 38,2 (т), 38,8 (т), 54,4 (д), 59,4 (д), 67,7 (д), 69,9 (д), 102,0 (д), 112,7 (с), 114,4 (с), 127,5 (д), 129,8 (д), 136,1 (с), 154,9 (с), 155,1 (с), 169,8 (с)
38		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,44 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,84 (дт, J=15,9, 4,9 Гц, 1H), 1,96 (м, 1H), 2,04 (дт, J=15,9, 3,7 Гц, 1H), 2,18 (м, 1Н), 2,41 (ддд, J=14,0, 10,4, 3,7 Гц, 1Н), 2,55 (ддд, J=14,0, 7,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,74 (дт, J=9,2, 2,4 Гц, 1Н), 2,96 (м, 1H), 3,30 (дд, J=13,4, 9,8 Гц, 1H), 3,39 (дд, J=13,4, 4,9 Гц, 1H) 3,78 (двойной квинтет, J=6,1, 3,7 Гц, 1H), 5,37 (м, 1H), 5,52 (дд, J=10,4, 7,9 Гц, 1Н), 5,70 (ддд, J=10,4, 5,5, 4,9 Гц, 1Н), 6,38 (с, 1H)	(CDCl3/CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,6 (кв), 30,1 (т), 36,4 (т), 36,6 (т), 38,8 (т), 55,4 (д), 56,8 (д), 71,2 (д), 72,1 (д), 102,6 (д), 107,4 (с), 115,6 (с), 124,2 (д), 130,7 (д), 138,8 (с), 157,3 (с), 161,7 (с), 170,2 (с)
39		(CDCl3/CD 3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,08 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,52 (дд, J=14,2, 6,7 Гц, 1H), 1,57 (ддд, J=14,2, 5,5, 4,9 Гц, 1H), 2,18 (т-подобный, J=4,9 Гц, 2H), 2,42 (м, 2H), 2,66 (м, 1H), 2,68 (м, 1H), 2,75 (ддт, J=14,0, 5,5, 2,4 Гц, 1Н), 3,05 (ддд, J=17,1, 9,2, 3,0 Гц, 1Н), 3,84 (секстет, J=6,1 Гц, 1H), 4,40 (ддкв, J=6,1, 5,5, 3,7 Гц, 1H), 5,49 (м, 2H) 6,28 (с, 1H)	(CDCl 3/CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 22,7 (кв), 29,7 (т), 34,6 (т), 37,5 (т), 40,5 (т), 55,9 (д), 57,4 (д), 65,5 (д), 77,7 (д), 101,1 (с), 102,0 (д), 110,8 (с), 126,4 (д), 129,0 (д), 137,9 (с), 160,1 (с), 162,0 (с), 169,4 (с)
40		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,98 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,21 (м, 1H), 1,42 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,54 (дт, J=15,3, 7,3 Гц, 2H), 1,81 (дт, J=15,3, 6,7 Гц, 2H), 2,00 (м, 2H), 2,05 (м, 1H), 2,21 (м, 1H), 2,34 (ддд, J=15,9, 6,7, 3,0 Гц, 1Н), 2,50 (дт, J=9,8, 1,8 Гц, 1Н), 2,85 (м, 1H), 3,35 (дд, J=12,8, 6,1 Гц, 1H), 3,90 (дд, J=12,8, 9,8 Гц, 1H) 4,12 (т, J=6,7 Гц, 2H), 4,44 (м, 1H), 5,15 (двойной квинтет, J=6,7, 2,4 Гц, 1H), 5,35 (дд, J=15,9, 4,3 Гц, 1Н), 5,53 (ддд, J=15,9, 4,3, 1,8 Гц, 1Н), 6,55 (с, 1H), 11,9 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 14,0 (кв), 19,8 (т), 20,3 (кв), 29,3 (т), 31,1 (т), 31,7 (т), 36,5 (т), 40,3 (т), 57,2 (д), 58,3 (д), 69,7 (т), 70,5 (д), 70,6 (д), 100,8 (д), 107,8 (с), 116,7 (с), 127,8 (д), 133,4 (д), 140,4 (с), 159,9 (с), 164,5 (с), 171,8 (с)
41		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,92 (т, J=7,3 Гц, 3H), 0,97 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,07 (м, 1H), 1,38 (ддд, J=14,6, 9,2, 3,0 Гц, 1H), 1,45 (д, J=6,1 Гц, 2H), 1,46 (д, J=7,3 Гц, 3H), 1,53 (дт, J=15,3, 7,3 Гц, 2H), 1,68 (дт, J=14,6, 6,7 Гц, 2H), 1,79 (дт, J=15,3, 6,1 Гц, 2H), 2,12-2,20 (м, 3H), 2,33 (ддд, J=14,6, 7,3, 3,7 Гц, 1Н), 2,71 (м, 1Н), 2,73 (дд, J=9,2, 6,1 Гц, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,29 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1H), 4,04 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,12 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,48 (квинтет, J=6,1 Гц, 1H), 5,18 (двойной квинтет, J=7,3, 2,4 Гц, 1Н), 5,54 (дд, J=15,9, 6,1 Гц, 1Н), 5,59 (дд, J=15,9, 11,0 Гц, 1Н), 6,71 (с, 1Н)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 14,0 (кв*2), 19,8 (т*2), 19,9 (кв), 28,6 (т), 31,9 (т*2), 33,6 (т), 39,1 (т), 41,0 (т), 56,1 (д), 57,9 (д), 69,3 (т), 69,6 (т), 71,5 (д), 73,3 (д), 98,1 (д), 115,3 (с), 120,1 (с), 130,2 (д), 136,0 (д), 136,0 (с), 156,2 (с), 156,8 (с), 167,4 (с)
42		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,90 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,22 (м, 1H), 1,33-1,39 (м, 4H), 1,42 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,52 (м, 2H), 1,83 (дт, J=15,3, 6,7 Гц, 2H), 1,99 (м, 2H), 2,05 (м, 1H), 2,21 (м, 1H), 2,33 (ддд, J=16,5, 7,3, 3,7 Гц, 1Н), 2,50 (дт, J=9,2, 1,8 Гц, 1Н), 2,83 (м, 1H), 3,36 (дд, J=12,2, 6,1 Гц, 1H), 3,90 (дд, J=12,2, 9,8 Гц, 1H) 4,12 (т, J=7,9 Гц, 2H), 4,55 (м, 1H), 5,15 (дкв, J=6,7, 1,8 Гц, 1H), 5,35 (дд, J=15,3, 3,7 Гц, 1Н), 5,53 (ддд, J=15,3, 4,3, 1,8 Гц, 1Н), 6,55 (с, 1H), 11,90 (с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 14,2 (кв), 20,3 (кв), 23,2 (т), 26,3 (т), 29,3 (т), 29,5 (т), 31,1 (т), 32,2 (т), 36,5 (т), 40,3 (т), 57,2 (д), 58,3 (д), 70,0 (т), 70,5 (д), 70,6 (д), 100,9 (д), 107,8 (с), 116,7 (с), 127,8 (д), 133,4 (д), 140,4 (с), 159,9 (с), 164,5 (с), 171,8 (с)
43		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,88 (т, J=7,3 Гц, 3H), 0,90 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,07 (м, 1H), 1,31 (м, 4H), 1,35 (м, 4H), 1,38 (м, 1H), 1,43 (м, 2H), 1,46 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,51 (м, 2H), 1,69 (дт, J=14,8, 6,7 Гц, 2H), 1,81 (дт, J=15,2, 6,1 Гц, 2H), 2,11-2,21 (м, 3H), 2,34 (ддд, J=14,6, 7,3, 3,7 Гц, 1Н), 2,71 (дд, J=7,3, 1,8 Гц, 1H), 2,73 (дд, J=13,4, 5,5 Гц, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,29 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1Н), 4,03 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,11 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,49 (дд, J=12,5, 5,5 Гц, 1H), 5,18 (двойной квинтет, J=6,1, 2,4 Гц, 1Н), 5,54 (дд, J=15,9, 6,1 Гц, 1Н), 5,59 (дд, J=15,9, 4,9 Гц, 1H), 6,71 (с, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 14,2 (кв×2), 19,9 (кв), 23,2 (т×2), 26,3 (т), 26,4 (т), 28,6 (т), 29,8 (т), 29,9 (т), 32,2 (т×2), 33,6 (т), 39,1 (т), 41,0 (т), 56,1 (д), 57,9 (д), 69,6 (т), 69,9 (т), 71,5 (д), 73,3 (д), 98,1 (д), 115,3 (с), 120,1 (с), 130,2 (д), 136,0 (д), 136,0 (с), 156,2 (с), 156,8 (с), 167,4 (с)
44		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,97 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,05 (т, J=7,3 Гц, 3H), 1,08 (м, 1H), 1,38 (ддд, J=14,0, 8,5, 2,4 Гц, 1H), 1,46 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,71 (дт, J=13,4, 7,3 Гц, 2H), 1,82 (дт, J=13,4, 7,3 Гц, 2H), 2,11-2,20 (м, 3H), 2,33 (ддд, J=14,6, 7,3, 3,6 Гц, 1H), 2,71 (дт, J=7,9, 2,4 Гц, 1H), 2,73 (дд, J=13,4, 5,5 Гц, 1Н), 2,82 (ддд, J=8,5, 3,6, 2,4 Гц, 1Н), 3,30 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1Н), 3,99 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,07 (т, J=6,1 Гц, 2H), 4,49 (квинтет, J=6,1 Гц, 1H), 5,18 (двойной квинтет, J=6,1, 2,4 Гц, 1Н), 5,54 (дд, J=15,9, 6,1 Гц, 1Н), 5,59 (дд, J=15,9, 5,5 Гц, 1Н), 6,70 (с, 1Н)	(Ацетон-d6 , 125 МГц) ч/млн: 10,8 (кв×2), 19,9 (кв), 23,2 (т×2), 28,6 (т), 33,6 (т), 39,1 (т), 41,0 (т), 56,1 (д), 57,9 (д), 71,1 (т), 71,3 (т), 71,5 (д), 73,3 (д), 98,1 (д), 115,4 (с), 120,1 (с), 130,2 (д), 136,0 (д), 136,0 (с), 156,2 (с), 156,7 (с), 167,4 (с)
45		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,06 (м, 1H), 1,07-1,34 (м, 10H), 1,39 (ддд, J=14,6, 8,6, 2,4 Гц, 1H), 1,47 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,63-1,85 (м, 10H), 1,90 (м, 2H), 2,11-2,21 (м, 3H), 2,34 (ддд, J=14,6, 7,9, 4,3 Гц, 1Н), 2,70 (м, 1Н), 2,73 (дд, J=13,4, 5,5 Гц, 1Н), 2,83 (ддд, J=8,6, 3,7, 1,8 Гц, 1Н), 3,30 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1Н), 3,84 (д, J=6,1 Гц, 2H), 3,91 (д, J=6,7 Гц, 2H), 4,49 (дд, J=12,5, 5,5 Гц, 1H), 5,19 (двойной квинтет, J=6,1, 2,4 Гц, 1Н), 5,53 (дд, J=15,9, 6,7 Гц, 1Н), 5,55 (дд, J=15,9, 5,5 Гц, 1Н), 6,70 (с, 1Н)	(Ацетон-d6 , 125 МГц) ч/млн: 20,0 (кв), 26,5 (т×2), 27,2 (т×2), 28,5 (т), 30,2 (т×2), 30,3 (т×2), 30,4 (т×2), 33,6 (т), 38,6 (д), 38,7 (д), 39,1 (т), 41,0 (т), 56,2 (д), 57,9 (д), 71,6 (д), 73,3 (д), 74,8 (т), 75,1 (т), 97,9 (д), 115,3 (с), 119,9 (с), 130,1 (д), 136,0 (д), 136,0 (с), 156,3 (с), 156,9 (с), 167,5 (с)
46		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,38 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,92 (ддд, J=14,6, 9,2, 3,7 Гц, 1H), 2,05 (м, 1Н), 2,08 (м, 1H), 2,18 (ддд, J=14,6, 9,8, 3,0 Гц, 1H), 2,28 (м, 1H), 2,38 (м, 1H), 3,30 (м, 1H), 3,45 (дд, J=12,2, 9,2 Гц, 1H), 4,10 (дд, J=9,2, 3,7 Гц, 1H), 4,25 (дд, J=9,2, 3,7 Гц, 1H), 4,37 (м, 1H), 5,30 (м, 1H), 5,31 (м, 1H), 5,61 (ддд, J=15,9, 9,2, 6,7 Гц, 1Н), 6,43 (с, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,7 (кв), 32,9 (т), 32,2 (т), 40,0 (т), 42,9 (т), 61,4 (д), 67,8 (д), 71,4 (д), 71,6 (д), 103,5 (д), 111,5 (с), 115,6 (с), 129,6 (д), 133,6 (д), 138,3 (с), 158,5 (с), 160,8 (с), 171,0 (с)
47		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,08 (м, 1H), 1,40 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,49 (м, 2H), 1,52 (м, 1Н), 1,62 (м, 1Н), 1,87 (ддд, J=15,5, 5,5, 2,4 Гц, 1Н), 1,96 (м, 1Н), 2,14 (ддд, J=15,5, 6,4, 4,0 Гц, 1Н), 2,49 (м, 2H), 2,59 (дт, J=9,1, 2,4 Гц, 1Н), 2,78 (ддд, J=5,5, 4,0, 2,4 Гц, 1Н), 3,70 (д, J=17,4 Гц, 1H), 4,32 (д, J=17,4 Гц, 1H), 5,21 (двойной квинтет, J=6,4, 2,4 Гц, 1H), 6,24 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,28 (д, J=2,4 Гц, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 19,4 (кв), 22,8 (т), 24,2 (т), 31,8 (т), 37,0 (т), 40,8 (т), 50,5 (т), 55,4 (д), 57,7 (д), 71,2 (д), 102,8 (д), 106,4 (с), 113,6 (д), 140,7 (с), 163,2 (с), 166,1 (с) 171,5 (с), 207,7 (с)
48		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,31 (м, 1H), 1,33 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,32-1,36 (м, 7H), 1,43 (м, 1H), 1,53 (ддд, J=9,2, 7,3, 2,4 Гц, 1H), 1,80 (м, 1H), 1,85 (м, 1H), 2,54 (ддд, J=18,3, 5,5, 3,7 Гц, 1H), 2,77 (ддд, J=18,3, 11,0, 3,7 Гц, 1Н), 3,79 (д, J=17,7 Гц, 1Н), 4,61 (д, J=17,7 Гц, 1Н), 5,15 (дкв, J=6,7, 3,7 Гц, 1Н), 6,19 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,30 (д, J=2,4 Гц, 1Н)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 21,2 (кв), 22,4 (т), 23,3 (т), 23,8 (т), 24,6 (т), 27,4 (т), 35,2 (т), 39,4 (т), 50,5 (т), 74,4 (д), 102,6 (д), 106,3 (с), 113,8 (д), 140,9 (с), 163,0 (с), 166,4 (с), 172,2 (с), 207,0 (с)
49		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,37 (д, J=6,1 Гц, 3H), 2,02 (м, 2H), 2,12 (м, 2H), 2,29 (ддд, J=14,0, 7,3, 6,1 Гц, 1Н), 2,56 (ддд, J=14,0, 6,1, 3,7 Гц, 1Н), 3,23 (дд, J=15,3, 5,5 Гц, 1Н), 3,25 (дд, J=15,3, 5,5 Гц, 1H), 4,25 (кв, J=6,1 Гц, 1H), 5,23 (двойной квинтет, J=6,1, 3,7 Гц, 1Н), 5,27 (дд, J=15,9, 6,1 Гц, 1Н), 5,28 (дд, J=15,9, 8,5 Гц, 1Н), 5,39 (дд, J=15,9, 6,1 Гц, 1Н), 5,43 (дд, J=15,9, 6,7 Гц, 1Н), 6,24 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,53 (д, J=2,4 Гц, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,5 (кв), 31,1 (т), 32,2 (т), 38,3 (т), 42,4 (т), 72,8 (д), 73,4 (д), 102,0 (д), 107,4 (с), 112,6 (д), 127,0 (д), 130,6 (д), 133,3 (д), 134,5 (д), 144,4 (с), 162,2 (с), 164,6 (с), 171,2 (с)
50		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,39 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,94 (м, 1H), 2,09 (м, 1H), 2,12 (м, 2H), 2,29 (дт, J=15,3, 6,7 Гц, 1H), 2,67 (ддд, J=15,3, 7,3, 3,7 Гц, 1Н), 2,85 (дд, J=13,4, 6,1 Гц, 1Н), 3,72 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1Н), 4,17 (дд, J=11,0, 7,3 Гц, 1Н), 5,20 (ддд, J=15,3, 6,1, 3,7 Гц, 1Н), 5,22 (кв, J=6,7 Гц, 1Н), 5,33 (дд, J=15,3, 4,3 Гц, 1H), 5,35 (ддд, J=15,3, 11,0, 5,5 Гц, 1H), 5,43 (ддд, J=15,3, 9,2, 7,3 Гц, 1Н), 6,23 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,50 (д, J=2,4 Гц, 1H), 9,05 (ушир.с, 1H), 11,87 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,5 (кв), 31,0 (т), 31,9 (т), 37,8 (т), 43,4 (т), 73,3 (д), 75,0 (д), 102,0 (д), 105,9 (с), 112,1 (д), 126,4 (д), 128,3 (д), 133,8 (д), 135,0 (д), 145,5 (с), 162,8 (с), 166,2 (с), 172,4 (с)
51		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,23 (ддт, J=14,0, 9,2, 3,7 Гц, 1H), 1,40 (д, J=6,1 Гц, 3H), 2,05 (м, 1H), 2,11 (м, 2H), 2,13 (м, 1H), 2,25 (м, 1H), 2,57 (дт, J=9,2, 2,4 Гц, 1H), 2,74 (дд, J=12,2, 6,7 Гц, 1H), 2,91 (дд, J=6,1, 2,4 Гц, 1H), 3,77 (дд, J=12,2, 7,9 Гц, 1Н), 4,13 (дд, J=12,8, 6,7 Гц, 1Н), 5,16 (двойной квинтет, 6,1, 1,8 Гц, 1Н), 5,43 (дд, J=15,9, 4,9 Гц, 1Н), 5,54 (ддд, J=15,9, 4,9, 1,2 Гц, 1Н), 6,20 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,30 (д, J=2,4 Гц, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,9 (кв), 29,4 (т), 31,8 (т), 36,9 (т), 43,2 (т), 58,2 (д), 58,9 (д), 70,5 (д), 74,9 (д), 102,5 (д), 106,2 (с), 113,3 (д), 129,7 (д), 133,3 (д), 144,6 (с), 163,5 (с), 166,4 (с), 172,6 (с)
52		(ДМСО-d6 , 500 МГц) (вращ.изомер примерно 1:1) ч/млн: 1,39 (д, J=6,7 Гц, 1,5H), 1,41 (д, J=6,7 Гц, 1,5H), 1,50-1,57 (м, 1,0H), 2,28 (дт, J=14,6, 3,7 Гц, 0,5H), 2,37 (дт, J=14,0, 3,7 Гц, 0,5H), 3,01 (дт, J=7,9, 3,0 Гц, 0,5H), 3,13 (дт, J=8,6, 2,4 Гц, 0,5H), 3,35 (м, 0,5H), 3,38 (м, 0,5H), 3,63 (д, J=15,9 Гц, 0,5H), 3,76 (д, J=16,5 Гц, 0,5H), 3,78 (с, 4H), 3,85 (д, J=15,9 Гц, 0,5H), 3,97 (д, J=16,5 Гц, 0,5H), 5,17 (м, 0,5H), 5,20 (м, 0,5H), 5,70 (дд, J=11,0, 4,9 Гц, 0,5H), 5,74 (дд, J=11,0, 3,7 Гц, 0,5H), 6,04 (д, J=15,9 Гц, 0,5H), 6,09 (д, J=16,5 Гц, 0,5H), 6,22 (т, J=11,6 Гц, 0,5H), 6,25 (т, J=10,4 Гц, 0,5H), 6,54 (с, 0,5H), 6,70 (с, 0,5H), 7,18 (м, 2H), 7,28-7,38 (м, 7H), 7,42 (д, J=7,9 Гц, 2H)	(ДМСО-d 6, 125 МГц) (вращ.изомер примерно 1:1) ч/млн: 18,1 (кв), 18,2 (кв), 34,7 (т), 34,9 (т), 36,3 (т), 36,4 (т), 44,6 (т), 44,9 (т), 54,2 (д×2), 55,0 (д), 55,1 (д), 69,6 (д), 70,8 (д), 109,4 (д), 110,1 (д), 119,4 (с×2), 119,5 (с×2), 125,8 (д), 126,5 (д), 127,7 (д×2), 128,4 (д×2), 129,0 (д×2), 129,1 (д×2), 129,6 (д), 129,7 (д), 130,5 (д×2), 133,1 (д), 134,5 (с), 136',1 (д), 136,2 (д), 138,2 (д), 138,4 (д), 146,6 (с), 146,7 (с), 154,9 (с), 155,3 (с), 163,8 (с×2), 166,1 (с), 167,8 (с), 170,5 (с×2), 195,4 (с), 195,8 (с)
53		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,22 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,31 (ддд, J=14,0, 8,5, 2,4 Гц, 1Н), 2,24 (ддд, J=14,0, 9,8, 3,7 Гц, 1Н), 2,94 (ддд, J=8,5, 4,3, 2,4 Гц, 1Н), 2,99 (д, J=7,9 Гц, 2H), 3,05 (дд, J=8,5, 2,4 Гц, 1Н), 3,61 (т, J=8,5 Гц, 1Н), 3,84 (д, J=1,8 Гц, 2H), 5,08 (дкв, J=6,7, 2,4 Гц, 1Н), 5,55 (дд, J=15,3, 8,5 Гц, 1H), 5,84 (дт, J=15,3, 7,9 Гц, 1H), 6,48 (с, 1H), 7,25 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,31 (т, J=7,3 Гц, 2H), 7,40 (т, J=7,3 Гц, 2H), 9,91 (с, 1H), 10,39 (с, 1H)	(ДМСО-d 6, 125 МГц) ч/млн: 20,0 (кв), 37,3 (т), 43,5 (т), 45,1 (т), 52,2 (д), 54,6 (д), 59,3 (д), 70,3 (д), 102,2 (д), 112,0 (с), 115,0 (с), 126,9 (д), 127,2 (д), 128,9 (д×2), 130,6 (д), 131,2 (д×2), 132,0 (с), 133,5 (с), 154,0 (с), 154,6 (с), 166,9 (с), 203,1 (с)
54		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,22 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,30 (ддд, J=14,6, 8,5, 2,3 Гц, 1Н), 2,23 (ддд, J=14,6, 10,4, 3,7 Гц, 1Н), 2,35 (с, 3H), 3,00 (м, 2H), 3,07 (дд, J=15,3, 7,3 Гц, 1H), 3,11 (дд, J=7,9, 1,8 Гц, 1H), 3,76 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,87 (с, 2H), 5,10 (дкв, J=6,1, 3,7 Гц, 1Н), 5,63 (дд, J=15,3, 7,9 Гц, 1Н), 5,91 (ддд, J=15,3, 7,9, 7,3 Гц, 1H), 6,48 (с, 1H), 9,91 (с, 1H), 10,37 (с, 1H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 20,1 (кв), 30,6 (кв), 37,3 (т), 43,4 (т), 45,2 (т), 48,1 (д), 55,3 (д), 58,0 (д), 70,2 (д), 102,2 (д), 112,1 (с), 115,0 (с), 127,2 (д), 130,0 (д), 132,0 (с), 153,9 (с), 154,6 (с), 166,9 (с), 193,6 (с), 203,0 (с)
55		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,22 (д, J=5,5 Гц, 3H), 1,30 (м, 1H), 2,08 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 2,58 (м, 1H), 3,06 (ушир.с, 1H), 3,20 (дд, J=18,3, 4,9 Гц, 1Н), 3,71 (дд, J=18,3, 11,0 Гц, 1Н), 3,98 (ушир.д, J=3,7 Гц, 2H), 4,80 (д, J=10,4 Гц, 1H), 5,13 (кв-подобный, J=5,5 Гц, 1Н), 5,17 (дд, J=11,0, 10,4 Гц, 1Н), 5,67 (дт, J=11,0, 4,9 Гц, 1H), 6,49 (с, 1H), 9,87 (с, 1H), 10,39 (с, 1H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 20,3 (кв), 30,6 (кв), 37,8 (т), 40,4 (т), 40,8 (д), 44,2 (т), 52,9 (д), 58,8 (д), 70,2 (д), 102,3 (д), 112,0 (с), 114,6 (с), 126,1 (д), 126,7 (д), 132,5 (с), 154,4 (с), 154,7 (с), 167,2 (с), 193,9 (с), 203,8 (с)
56		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,10 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,15-1,24 (м, 1H), 2,04 (дт, J=14,0, 3,1 Гц, 1H), 2,79 (дт, J=6,1, 2,4 Гц, 1H), 2,97 (с, 1H), 3,10-3,20 (м, 1H), 3,33 (с, 3H), 3,35 (с, 3H), 3,56 (д, J=15,9 Гц, 1H), 4,55 (д, J=11,6 Гц, 1H), 4,63 (д, J=11,6 Гц, 1H), 4,60-4,68 (м, 2H), 4,86-4,92 (м, 1H), 5,38 (дд, J=10,4, 4,9 Гц, 1H), 5,75 (д, J=15,9 Гц, 1H), 5,89 (т, J=10,4 Гц, 1H), 6,46 (с, 1H), 7,00-7,06 (м, 1H)	(ДМСО-d 6, 125 МГц) ч/млн: 18,1 (кв), 36,4 (т), 44,7 (т), 51,8 (кв), 51,9 (кв), 54,8 (д), 54,9 (д), 65,3 (т), 65,4 (т), 70,4 (д), 98,6 (д), 114,6 (с), 118,6 (с), 129,7 (д), 130,4 (д), 131,7 (с), 136,4 (д), 138,3 (д), 154,2 (с), 154,6 (с), 165,0 (с), 168,3 (с), 168,4 (с), 195,0 (с)
57		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,66-0,73 (м, 1Н), 1,02 (ддд, J=14,7, 9,2, 2,4 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,76-1,84 (м, 3H), 1,98 (ддд, J=1,7, 7,3, 4,3 Гц, 1Н), 2,28 (дд, J=13,4, 6,1 Гц, 1Н), 2,41 (д-подобный, J=9,2 Гц, 1Н), 2,50 (ддд, J=8,5, 3,7, 2,4 Гц, 1Н), 2,86 (дд, J=13,4, 7,3 Гц, 1Н), 3,38 (с, 3H), 3,42 (с, 3H), 3,94-3,98 (м, 1H), 4,52 (с, 2H), 4,68 (с, 2H), 4,78 (ддд, J=13,4, 6,7, 2,4 Гц, 1H), 5,08-5,18 (м, 2H), 6,36 (с, 1H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,1 (кв), 27,5 (т), 32,1 (т), 37,6 (т), 39,0 (т), 51,8 (кв), 51,9 (кв), 55,0 (д), 56,8 (д), 65,4 (т), 65,5 (т), 70,9 (д), 71,5 (д), 97,8 (д), 114,5 (с), 119,3 (с), 128,9 (д), 134,9 (с), 135,2 (д), 153,4 (с), 154,2 (с), 165,9 (с), 168,4 (с), 168,5 (с)
58		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,86-0,95 (м, 1Н), 0,93 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,84 (дт, J=14,7, 3,7 Гц, 1Н), 2,73 (дт, J=7,9, 3,1 Гц, 1H), 2,97 (с, 1H), 3,60 (д, J=15,9 Гц, 1H), 3,87 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 4,76-4,83 (м, 1Н), 5,44 (дд, J=10,4, 4,3 Гц, 1Н), 5,78 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 5,94 (т, J=10,4 Гц, 1Н), 7,00 (дд, J=15,9, 10,4 Гц, 1Н), 7,35 (дт, J=7,9, 4,9 Гц, 2H), 7,54 (с, 1H), 8,10 (дт, J=7,9, 1,8 Гц, 1H), 8,17 (дт, J=7,9, 1,8 Гц, 1Н), 8,60 (дт, J=4,3, 1,2 Гц, 2H), 8,88 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 8,94 (д, J=2,4 Гц, 1Н)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 18,1 (кв), 36,2 (т), 44,5 (т), 54,3 (д), 54,8 (д), 71,7 (д), 119,0 (д), 123,8 (с), 124,0 (с), 124,3 (д), 124,4 (д), 126,0 (с), 127,3 (с), 129,6 (д), 130,4 (д), 133,6 (с), 136,5 (д), 137,6 (д), 137,8 (д), 138,5 (д), 146,5 (с), 148,1 (с), 150,5 (д), 150,7 (д), 154,8 (д), 154,9 (д), 162,2 (с), 163,0 (с), 163,2 (с), 194,7 (с)
59		(ДМСО-d6 , 500 МГц) ч/млн: 0,93 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,42-1,50 (м, 1H), 2,23-2,40 (м, 1H), 2,79-2,84 (м, 1H), 2,94 (с, 1H), 3,26-3,33 (м, 2H), 4,32 (с, 2H), 4,48 (с, 2H), 4,86-4,94 (м, 1H), 5,34-5,46 (м, 1H), 5,65 (д, J=16,5 Гц, 1H), 6,06 (т, J=10,4 Гц, 1H), 6,37 (с, 1H), 6,70 (дд, J=16,5, 11,0 Гц, 1H), 12,60 (ушир.с, 2H)	(ДМСО-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,7 (кв), 36,0 (т), 44,1 (т), 59,6 (д), 59,7 (д), 65,7 (т), 65,9 (т), 70,8 (д), 99,8 (д), 115,1 (с), 118,6 (с), 130,1 (д), 130,8 (с), 131,7 (д), 132,0 (д), 132,8 (д), 154,1 (с), 166,2 (с), 169,0 (с), 169,1 (с), 169,3 (с), 199,0 (с)
60		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,60 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,85 (ддд, J=14,9, 8,5, 3,7 Гц, 1Н), 2,44 (дт, J=14,9, 3,7 Гц, 1Н), 3,12 (дт, J=8,5, 2,7 Гц, 1Н), 3,32 (квинтет, J=2,7 Гц, 1Н), 3,56 (д, J=14,0 Гц, 1Н), 4,97 (д, J=14,0 Гц, 1Н), 5,83 (дд, J=10,7, 2,7 Гц, 1Н), 5,97 (д, J=16,1 Гц, 1Н), 6,28 (д, J=2,7 Гц, 1Н), 6,29 (д, J=2,7 Гц, 1Н), 6,30 (ддд, J=11,3, 10,7, 1,5 Гц, 1Н), 7,83 (ддд, J=16,1, 11,3, 1,5 Гц, 1Н), 9,16 (ушир.с, 1H), 10,94 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 18,9 (кв), 36,9 (т), 43,9 (т), 55,7 (д), 56,0 (д), 72,0 (д), 102,8 (д), 106,0 (с), 110,1 (д), 130,6 (д), 131,7 (д), 137,2 (д), 140,3 (с), 141,6 (д), 162,9 (с), 165,5 (с), 170,4 (с), 198,9 (с)
61		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,23 (д, J=6,4 Гц, 3H), 2,04 (м, 1H), 2,12 (м, 1H), 2,12-2,25 (м, 3H), 2,39 (дт, J=10,4, 3,0 Гц, 1H), 3,50 (д, J=15,2 Гц, 1H), 3,90 (д, J=15,2 Гц, 1H), 5,09 (двойной секстет, J=6,4, 3,0 Гц, 1Н), 5,29 (ддд, J=15,2, 7,0, 4,3 Гц, 1Н), 5,31 (ддд, J=15,2, 7,6, 4,9 Гц, 1Н), 5,86 (д, J=16,1 Гц, 1Н), 6,09 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,20 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,64 (ддд, J=16,1, 7,6, 6,4 Гц, 1H), 9,92 (ушир.с, 1H), 10,27 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 19,2 (кв), 30,3 (т), 30,4 (т), 37,9 (т), 45,2 (т), 71,0 (д), 101,4 (д), 108,8 (д), 110,3 (с), 128,3 (д), 129,7 (д), 131,2 (д), 136,6 (с), 148,2 (д), 159,5 (с), 160,2 (с), 168,4 (с), 196,6 (с)
62		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,19 (м, 1H), 1,37 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,63 (ддд, J=16,1, 5,2, 4,0 Гц, 1Н), 2,06 (дт, J=16,1, 4,0 Гц, 1Н), 2,27 (м, 1H), 2,29 (м, 1H), 2,47 (дд, J=8,8, 4,6 Гц, 1H), 2,51 (дт, J=9,4, 2,7 Гц, 1Н), 2,80 (ддд, J=5,5, 4,0, 2,7 Гц, 1Н), 3,65 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,65 (д, J=17,7 Гц, 1H), 5,18 (м, 1H), 6,02 (д, J=15,8 Гц, 1H), 6,24 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,27 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,91 (ддд, J=15,8, 11,0, 4,6 Гц, 1H), 9,23 (ушир.с, 1H), 11,91 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 18,1 (кв), 29,8 (т), 31,8 (т), 37,0 (т), 48,2 (т), 55,7 (д), 57,0 (д), 72,5 (д), 102,8 (д), 105,9 (с), 113,9 (д), 131,9 (д), 141,3 (с), 148,6 (д), 163,4 (с), 167,1 (с), 171,9 (с), 196,9 (с)
63		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,36 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,50 (м, 2H), 1,59 (м, 2H), 2,03 (м, 1H), 2,10 (м, 1H), 2,30 (дт, J=14,0, 5,5 Гц, 1H), 2,49 (м, 2H), 2,56 (ддд, J=14,0, 3,7, 3,0 Гц, 1H), 3,56 (д, J=17,1 Гц, 1H), 4,36 (д, J=17,1 Гц, 1Н), 5,28 (двойной квинтет, J=6,7, 3,7 Гц, 1Н), 5,45 (дд, J=15,9, 5,5 Гц, 1Н), 5,48 (дд, J=15,9, 5,5 Гц, 1Н), 6,24 (д, J=2,4 Гц, 1H), 6,31 (д, J=2,4 Гц, 1H), 9,19 (ушир.с, 1H), 11,76 (ушир.с, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 19,1 (кв), 22,9 (т), 26,0 (т), 33,0 (т), 38,1 (т), 41,1 (т), 50,4 (т), 73,5 (д), 102,7 (д), 106,2 (с), 113,2 (д), 125,8 (д), 135,2 (д), 140,9 (с), 163,1 (с), 166,4 (с), 171,8 (с), 207,3 (с)
64		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,26 (дд, J=12,2, 9,2 Гц, 1H), 1,44 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,76 (д, J=15,9 Гц, 1H), 2,54 (д, J=12,2 Гц, 1H), 2,61 (д, J=9,2 Гц, 1H), 2,87 (ушир.с, 1H), 4,36 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,53 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,21 (ушир.с, 1H), 6,14 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 6,46 (с, 1Н), 6,82 (дд, J=15,9, 9,2 Гц, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,0 (кв), 37,4 (т), 41,2 (т), 45,7 (т), 55,4 (д), 56,8 (д), 70,5 (д), 73,4 (д), 104,3 (д), 107,8 (с), 116,8 (с), 129,4 (д), 137,2 (с), 150,6 (д), 160,0 (с), 164,2 (с), 171,3 (с), 198,5 (с)
65		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,19 (д, J=6,4 Гц, 3H), 2,16 (ддд, J=14,3, 7,6, 6,7 Гц, 1Н), 2,25 (дт, J=12,8, 8,2 Гц, 1Н), 2,36 (ддд, J=12,8, 7,3, 3,4 Гц, 1Н), 2,47 (ддд, J=14,3, 6,7, 3,7 Гц, 1Н), 4,10 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,14 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,24 (м, 1H), 5,20 (м, 1H), 5,23 (дд, J=15,5, 6,1 Гц, 1H), 5,38 (дт, J=15,5, 7,6 Гц, 1H), 5,80 (д, J=15,8 Гц, 1H), 6,35 (с, 1H), 6,69 (дт, J=15,8, 8,2 Гц, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,9 (кв), 38,0 (т), 40,8 (т), 45,8 (т), 72,6 (д), 73,5 (д), 104,1 (д), 109,6 (с), 116,7 (с), 126,3 (д), 132,1 (д), 136,6 (с), 137,1 (д), 146,1 (д), 159,9 (с), 162,3 (с), 170,7 (с), 198,7 (с)
66		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,28 (д, J=6,4 Гц, 3H), 2,15 (м, 2H), 2,24 (м, 1H), 2,28 (м, 2H), 2,57 (ддд, J=14,6, 8,2, 4,3 Гц, 1H), 4,10 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,33 (д, J=17,7 Гц, 1H), 5,23 (дд-подобный, J=15,2, 7,3 Гц, 1Н), 5,36 (ддд, J=15,2, 8,8, 5,8 Гц, 1Н), 5,37 (дкв, J=6,4, 3,7 Гц, 1H), 5,81 (д, J=15,5 Гц, 1H), 6,57 (с, 1H), 6,65 (дт, J=15,5, 7,3 Гц, 1H), 9,85 (ушир.с, 1H), 11,46 (с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 18,1 (кв), 31,8 (т×2), 37,3 (т), 46,2 (т), 73,4 (д), 103,8 (д), 108,4 (с), 116,1 (с), 127,7 (д), 131,0 (д), 133,0 (д), 138,0 (с), 147,3 (д), 158,8 (с), 163,5 (с), 170,7 (с), 195,2 (с)
67		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,42 (д, J=6,4 Гц, 3H), 1,85 (м, 2H), 3,12 (с, 3H), 3,70 (д, J=16,4 Гц, 1H), 3,86 (м, 1H), 4,20 (д, J=16,4 Гц, 1Н), 4,41 (дд, J=7,9, 4,6 Гц, 1Н), 5,36 (секстет, J=6,4 Гц, 1Н), 5,70 (дд, J=10,0, 9,7 Гц, 1Н), 5,90 (д, J=16,4 Гц, 1H), 6,29 (дд, J=11,3, 10,0 Гц, 1H), 6,43 (с, 1H), 7,29 (дд, J=16,4, 11,3 Гц, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,4 (кв), 37,9 (т), 45,8 (т), 57,4 (кв), 70,1 (д), 71,0 (д), 82,0 (д), 103,6 (д), 114,4 (с), 116,2 (с), 131,7 (д), 132,5 (д), 135,1 (с), 140,8 (д), 142,5 (д), 157,0 (с), 157,2 (с), 168,1 (с), 200,2 (с)
68		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,28 (д, J=6,7 Гц, 3H), 2,24 (ддд, J=12,8, 7,3, 4,3 Гц, 1Н), 2,34 (дт, J=14,0, 8,5 Гц, 1Н), 2,48 (ддд, J=14,0, 7,3, 4,9 Гц, 1Н), 2,65 (ддд, J=14,0, 7,3, 4,3 Гц, 1Н), 3,98 (д, J=16,5 Гц, 1Н), 4,04 (д, J=16,5 Гц, 1Н), 4,41 (квинтет, J=4,9 Гц, 1H), 5,37 (м, 1H), 5,38 (м, 1H), 5,52 (дт, J=15,3, 7,9 Гц, 1Н), 5,89 (д, J=15,9 Гц, 1Н), 6,29 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,31 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,73 (ддд, J=15,9, 8,5, 7,3 Гц, 1Н)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 18,7 (кв), 37,2 (т), 40,7 (т), 48,3 (т), 72,1 (д), 72,8 (д), 102,8 (д), 106,6 (с), 113,2 (д), 125,2 (д), 132,5 (д), 137,6 (д), 141,2 (с), 144,9 (д), 163,0 (с), 165,8 (с), 171,0 (с), 196,8 (с)
69		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,37 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,65 (м, 1H), 1,75 (м, 1H), 1,91 (м, 1H), 2,00 (дд, J=15,3, 7,9 Гц, 1H), 2,10 (ддд, J=15,3, 7,9, 3,0 Гц, 1Н), 2,18 (м, 1Н), 2,30 (ддд, J=19,5, 6,7, 3,0 Гц, 1Н), 2,58 (ддд, J=19,5, 10,4, 3,0 Гц, 1Н), 4,12 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,23 (дт, J=7,9, 3,0 Гц, 1Н), 4,42 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 5,24 (дд, J=15,3, 7,9 Гц, 1Н), 5,45 (квинтет, J=6,7 Гц, 1Н), 5,50 (ддд, J=15,3, 10,4, 4,3 Гц, 1Н), 6,45 (с, 1H)	(Ацетон-d6, 125 МГц) ч/млн: 20,5 (кв), 21,0 (т), 32,4 (т), 40,2 (т), 43,1 (т), 47,3 (т), 71,2 (д), 71,8 (д), 104,0 (д), 109,0 (с), 116,6 (с), 133,0 (д), 134,4 (д), 137,2 (с), 159,8 (с), 163,4 (с), 171,5 (с), 208,5 (с)
70		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,38 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,46 (м, 1Н), 1,59 (м, 2H), 1,65 (м, 1H), 2,02 (м, 1H), 2,10 (м, 1H), 2,34 (дт, J=14,6, 6,1 Гц, 1H), 2,52 (м, 1H), 2,56 (м, 2H), 4,09 (д, J=17,7 Гц, 1H), 4,48 (д, J=17,7 Гц, 1H), 5,34 (двойной квинтет, J=6,7, 3,0 Гц, 1Н), 5,49 (д, J=15,3, 5,5 Гц, 1Н), 5,50 (дд, J=15,3, 5,5 Гц, 1Н), 6,54 (с, 1Н)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 19,1 (кв), 23,0 (т), 26,3 (т), 32,8 (т), 38,3 (т), 41,4 (т), 46,9 (т), 73,8 (д), 103,7 (д), 108,4 (с), 115,9 (с), 125,8 (д), 135,4 (д), 137,9 (с), 158,8 (с), 163,3 (с), 171,0 (с), 206,0 (с)
71		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,34 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,56 (дт, J=13,4, 1,8 Гц, 1Н), 2,15 (дт, J=12,1, 4,3 Гц, 1Н), 2,96 (дд, J=14,0, 5,5 Гц, 1Н), 3,27 (дд, J=14,0, 6,1 Гц, 1Н), 3,81 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,65 (дт, J=11,0, 4,3 Гц, 1Н), 4,68 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,78 (ддд, J=12,1, 6,1, 1,8 Гц, 1Н), 5,26 (т, J=11,0 Гц, 1Н), 5,78 (дт, J=15,3, 6,1 Гц, 1Н), 6,04 (дд, J=15,3, 11,0 Гц, 1H), 6,15 (т, J=11,0 Гц, 1H), 6,47 (с, 1H)	(CD 3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,6 (кв), 44,0 (т), 44,6 (т), 45,2 (т), 65,4 (д), 71,6 (д), 104,0 (д), 114,3 (с), 115,9 (с), 128,4 (д), 129,0 (д), 130,5 (д), 133,9 (д), 135,1 (с), 157,3 (с), 157,7 (с), 168,7 (с), 206,3 (с)
72		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,34 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,73 (ддд, J=14,0, 10,0, 3,4 Гц, 1Н), 2,20 (ддд, J=14,0, 11,6, 5,5 Гц, 1Н) 3,06 (дд, J=15,5, 8,2 Гц, 1Н), 3,29 (ддд, J=15,5, 6,7, 1,8 Гц, 1Н), 3,91 (д, J=18,3 Гц, 1Н), 4,14 (секстет, J=5,5 Гц, 1Н), 4,48 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,03 (дкв, J=6,1, 3,4 Гц, 1H), 5,64 (м, 1H), 5,65 (м, 1H), 6,10 (дд, J=14,9, 10,7 Гц, 1H), 6,18 (т, J=10,7 Гц, 1H), 6,47 (с, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,6 (кв), 42,5 (т), 42,7 (т), 45,0 (т), 71,3 (д), 71,8 (д), 104,1 (д), 113,4 (с), 116,0 (с), 124,9 (д), 128,2 (д), 132,1 (д), 135,8 (с), 136,9 (д), 157,9 (с), 158,5 (с), 168,9 (с), 208,3 (с)
73		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,40 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,43 (м, 1H), 1,60 (м, 1H), 1,77 (м, 1H), 1,80 (м, 1H), 1,89 (м, 1H), 1,99 (м, 1H), 2,10 (м, 1H), 2,43 (м, 1H), 2,69 (м, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,75 (м, 1H), 4,17 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,25 (д, J=18,3 Гц, 1H), 5,25 (двойной квинтет, J=6,7, 3,0 Гц, 1H), 6,42 (с, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,2 (кв), 31,5 (т), 37,8 (т), 38,3 (т), 39,6 (т), 47,5 (т), 55,2 (д), 55,7 (д), 68,2 (д), 72,6 (д), 104,0 (д), 110,0 (с), 116,1 (с), 136,5 (с), 159,2 (с), 162,4 (с), 170,8 (с), 209,2 (с)
74		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,36 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,75-1,84 (м, 2H), 2,03 (ддд, J=15,3, 7,3, 1,8 Гц, 1Н), 2,10 (ддд, J=15,9, 7,9, 3,0 Гц, 1Н), 2,29 (ддд, J=19,5, 6,7, 3,0 Гц, 1Н), 2,54 (ддд, J=19,5, 9,8, 3,0 Гц, 1Н), 3,92 (секстет, J=4,9 Гц, 1Н), 4,08 (д, J=17,7 Гц, 1Н), 4,27 (дт, J=9,8, 2,4 Гц, 1Н), 4,37 (д, J=17,7 Гц, 1Н), 5,33 (дд, J=15,3, 8,5 Гц, 1Н), 5,43 (дд, J=15,3, 8,5 Гц, 1Н), 5,49 (квинтет, J=6,7 Гц, 1H), 6,47 (с, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 20,6 (кв), 29,3 (т), 38,0 (т), 43,2 (т), 47,4 (т), 70,9 (д), 71,7 (д), 73,7 (д), 104,1 (д), 108,1 (с), 116,6 (с), 134,6 (д), 135,1 (д), 137,3 (с), 159,9 (с), 163,9 (с), 171,6 (с), 207,7 (с)
75		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,34 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,58 (ддд, J=15,5, 7,3, 4,3 Гц, 1H), 1,74 (м, 1Н), 1,91 (м, 1H), 1,94 (м, 1H), 2,05 (м, 1H), 2,18 (дт, J=15,5, 2,4 Гц, 1H), 2,40 (дд, J=15,5, 4,0 Гц, 1Н), 2,65 (дд, J=15,5, 10,0 Гц, 1Н), 3,42 (ддд, J=10,0, 7,3, 2,4 Гц, 1H), 3,58 (м, 1H), 3,85 (д, J=18,3 Гц, 1H) 4,27 (д, J=18,3 Гц, 1H), 4,38 (ддд, J=13,4, 6,7, 3,0 Гц, 1H), 5,32 (м, 1H) 5,98 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,14 (д, J=2,4 Гц, 1Н)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 19,0 (кв), 29,2 (т), 31,5 (т), 41,1 (т), 47,9 (т), 52,7 (т), 72,9 (д), 73,0 (д), 77,2 (д), 83,0 (д), 102,9 (д), 108,2 (с), 113,0 (д), 139,2 (с), 163,2 (с), 165,1 (с), 171,8 (с), 208,6 (с)
76		(CD3OD, 500 МГц) ч/млн: 1,52 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1, 65 (ддд, J=14,6, 8,5, 3,7 Гц, 1Н), 2,43 (дт, J=14,6, 3,7 Гц, 1Н), 3,06 (дт, J=8,5, 2,4 Гц, 1H), 3,35 (м, 1H), 3,64 (дд, J=12,2, 3,7 Гц, 1H), 3,68 (дд, J=12,2, 3,7 Гц, 1Н), 3,92 (д, J=16,5 Гц, 1Н), 4,01 (д, J=16,5 Гц, 1Н), 4,08 (дд, J=6,7, 3,0 Гц, 1Н), 4,17 (дд, J=6,7, 3,0 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=6,7, 4,9 Гц, 1H), 5,38 (м, 1H), 5,64 (д, J=4,9 Гц, 1Н), 5,75 (дд, J=10,4, 4,3 Гц, 1Н), 6,06 (д, J=15,9 Гц, 1H), 6,20 (т, J=10,4 Гц, 1H), 6,85 (с, 1H), 7,57 (дд, J=15,9, 10,4 Гц, 1H)	(CD3OD, 125 МГц) ч/млн: 18,7 (кв), 37,9 (т), 46,3 (т), 56,5 (д), 56,8 (д), 63,1 (т), 71,0 (д), 72,3 (д), 73,5 (д), 88,4 (д), 103,3 (д), 105,3 (д), 117,1 (с), 117,2 (с), 130,9 (д), 131,7 (д), 134,4 (с), 137,2 (д), 140,7 (д), 156,6 (с), 157,8 (с), 168,4 (с), 199,1 (с)
77		(Ацетон-d6 , 500 МГц) ч/млн: 1,38 (ддд, J=14,0, 9,2, 3,7 Гц, 1H), 1,40 (д, J=6,1 Гц, 1Н), 2,13 (дд, J=15,3, 7,9 Гц, 1Н), 2,38 (ддд, J=14,0, 11,0, 4,3 Гц, 1Н), 2,75 (ддд, J=8,5, 3,7, 1,8 Гц, 1Н), 2,94 (ддд, J=8,5, 3,7, 2,4 Гц, 1Н), 3,24 (дд, J=15,3, 3,7 Гц, 1Н), 4,24 (д, J=15,3 Гц, 1H), 4,58 (д, J=15,3 Гц, 1H), 5,15 (двойной секстет, J=6,1, 3,7 Гц, 1Н), 5,50 (ушир.д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,17 (ушир.д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,52 (с, 1Н)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 20,5 (кв), 28,6 (т), 32,1 (т), 38,3 (т), 54,9 (д), 56,5 (д), 72,3 (д), 103,6 (д), 107,3 (д), 108,3 (д), 113,7 (с), 114,7 (с), 137,6 (с), 150,4 (с), 151,7 (с), 156,4 (с), 156,9 (с), 168,3 (с)
78		(Ацетон-d6, 500 МГц) ч/млн: 1,38 (д, J=6,1 Гц, 3H), 2,25 (дт, J=13,7, 10,7 Гц, 1Н), 2,39 (дд, J=13,7, 4,6 Гц, 1Н), 3,18 (д, J=7,3 Гц, 2H), 4,17 (д, J=14,3 Гц, 1H), 4,58 (д, J=14,3 Гц, 1H), 5,40 (м, 1Н), 5,42 (двойной квинтет, J=6,1, 1,8 Гц, 1Н), 5,61 (ддд, J=15,2, 10,4, 4,6 Гц, 1Н), 5,86 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 6,08 (д, J=3,0 Гц, 1H), 6,47 (с, 1H)	(Ацетон-d 6, 125 МГц) ч/млн: 21,1 (кв), 27,9 (т), 31,4 (т), 39,9 (т), 71,7 (д), 103,2 (д), 106,4 (д), 107,1 (д), 113,5 (с), 114,4 (с), 128,3 (д), 131,7 (д), 138,8 (с), 151,7 (с), 151,9 (с), 156,2 (с), 156,7 (с), 167,0 (с)

Пример испытания 1

Экспрессия мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы:

Клетки сосочков дермы человека, которые были закуплены у фирмы Toyobo, культивировали в MEM (Invitrogen), содержащей 12% FBS. Клетки волосяных фолликул человека отделяли от волос в соответствии со способом Arase et al. (J. Dermatol. Sci., 2, 66-70 (1991)) и культивировали с использованием KGM-2 (Sanko Junyaku).

Клетки сосочков дермы в пассаже 5 и клетки волосяных фолликул в пассаже 2 высевали в 10-см чашку с получением плотности 2×10⁶ клеток/лунка и культивировали в течение 2 ночей. После удаления среды клетки промывали PBS(-) и всю РНК экстрагировали при помощи реагента TRIzol (Invitrogen). Используя 50 нг от всего количества РНК, 0,4 мкМ праймеров, специфических к WNT-5A или глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе (GAPDH) [WNT-5A прямой: AATGTCTTCC AAGTTCTTCC TAGTGGC (SEQ ID NO:8), WNT-5A обратный: GATGTCGGAA TTGATACTGG CA (SEQ ID NO:9), GAPDH прямой: ACCACAGTCC ATGCCATCAC (SEQ ID NO:10) и GAPDH обратный: TCCACCACCC TGTTGCTGTA (SEQ ID NO:11)], и SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq (Invitrogen), осуществляли ОТ-ПЦР в соответствии с протоколом, прилагаемым к SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq. Вкратце, синтез первой цепи осуществляли при 50°C в течение 30 минут в реакционной системе общим объемом 25 мкл. После нагревания до 94°C в течение 2 минут, каждый фрагмент кДНК амплифицировали в 23 или 20 циклах, при этом каждый цикл включал 30 секунд при 94°C, 30 секунд при 55°C и 30 секунд при 72°C.

Каждый реакционный раствор подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле и окрашивали бромидом этидия. Результаты представлены на Фиг. 1.

В случае использования РНК, извлеченной из клеток сосочков дермы (DPC), наблюдали замечательную амплификацию фрагмента кДНК в 23-цикловой ПЦР при использовании WNT-5A-специфических праймеров. В случае использования РНК, выделенной из клеток волосяных фолликул (HFC), никакого продукта амплификации не наблюдали в аналогичных условиях.

Пример испытания 2

Измерение активности по снижению количества мРНК WNT-5A:

Клетки сосочков дермы человека, которые были закуплены у фирмы Toyobo, культивировали в MEM (Invitrogen), содержащей 12% FBS.

Клетки сосочков дермы в пассаже 5 высевали в 12-луночный планшет с получением плотности 1,6×10⁵ клеток/лунка и культивировали в течение ночи. Затем среду заменяли средой, к которой не было добавлено никакого соединения, или средой, содержащей Соединение 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9 или 24, и культивирование продолжали еще в течение 24 часов. После завершения культивирования каждую среду удаляли и клетки промывали PBS(-). Затем всю РНК экстрагировали при помощи реагента TRIzol (Invitrogen). Используя 50 нг от всего количества РНК, 0,4 мкМ праймеров, специфических к WNT-5A или GAPDH [WNT-5A прямой: AATGTCTTCC AAGTTCTTCC TAGTGGC (SEQ ID NO:8), WNT-5A обратный: GATGTCGGAA TTGATACTGG CA (SEQ ID NO:9), GAPDH прямой: ACCACAGTCC ATGCCATCAC (SEQ ID NO:10) и GAPDH обратный: TCCACCACCC TGTTGCTGTA (SEQ ID NO:11)], и SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq (Invitrogen), осуществляли ОТ-ПЦР в соответствии с протоколом, прилагаемым к SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq. Вкратце, синтез первой цепи осуществляли при 50°C в течение 30 минут в реакционной системе общим объемом 25 мкл. После нагревания до 94°C в течение 2 минут, фрагмент кДНК WNT-5A или GAPDH амплифицировали в 23 или 20 циклах, при этом каждый цикл включал 30 секунд при 94°C, 30 секунд при 55°C и 30 секунд при 72°C.

Каждый реакционный раствор подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле и окрашивали бромидом этидия. Результаты представлены на Фиг. 2.

В 23-цикловой ПЦР с использованием WNT-5A-специфических праймеров амплификация фрагментов кДНК WNT-5A заметно уменьшалась в культурах с соединениями в сравнении с культурой, к которой не добавляли никакого соединения.

В 20-цикловой ПЦР с использованием GAPDH-специфических праймеров, с другой стороны, не наблюдали никакого изменения в количестве амплифицированных фрагментов кДНК, независимо от присутствия или отсутствия соединений.

Пример испытания 3

Испытание активности по промотированию роста клеток сосочков дермы:

Клетки сосочков дермы человека, которые были закуплены у фирмы Toyobo, культивировали в MEM (Invitrogen), содержащей 12% FBS.

Клетки сосочков дермы в пассаже 5 высевали в 96-луночный планшет для сфероидальной культуры с получением a плотности 1,5×10 ⁴ клеток/лунка и культивировали в течение ночи. Затем среду заменяли средой, к которой не было добавлено никакого соединения, или средой, содержащей Соединение 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9 или 24, и культивирование продолжали еще в течение 72 часов. После завершения культивирования клетки подсчитывали, используя набор для подсчета клеток (Wako Pure Chemicals). За пять часов до завершения культивирования к каждой среде добавляли реагент WST-1 в количестве 1/10 от количества среды и затем по окончании культивирования измеряли оптическую плотность (О.П. 450 нм/620 нм) среды. Положительную корреляцию между количеством клеток и оптической плотностью наблюдали в пределах от 0,25 до 4×10⁴ клеток/лунка.

В результате было выяснено, что соединение, обладающее активностью по снижению количества мРНК WNT-5A, обладает активностью промотирования роста клеток сосочков дермы (Фиг. 3). На этой Фиг. каждое цифровое значение представляет собой среднее значение для 6 лунок (контрольная группа) или 3 лунок (группы испытания). Для сравнения контрольной группы с группами испытания использовали t-критерий Стьюдента:

*: P<0,05, **: P<0,01, ***: P<0,001.

Описанные выше Примеры испытаний показывают, что WNT-5A экспрессируется в клетках сосочков дермы человека, количество мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы снижается при использовании соединения по настоящему изобретению, и соединение, обладающее активностью снижения количества мРНК WNT-5A, обладает активностью промотирования роста клеток сосочков дермы.

Пример испытания 4

Активность соединений (Таблица 2) по снижению количества мРНК WNT-5A (определение количества мРНК методом QuantiGene)

Клетки сосочков дермы человека, которые были закуплены у фирмы Toyobo, культивировали в MEM (Invitrogen), содержащей 12% FBS.

Клетки сосочков дермы в пассаже 5 высевали в 96-луночный планшет с получением плотности 1×10 ⁴ клеток/лунка и культивировали в течение ночи. Затем среду заменяли средой, к которой не было добавлено никакого соединения, или средой, содержащей соединения, и культивирование продолжали еще в течение 24 часов. После завершения культивирования количество мРНК WNT-5A или GAPDH измеряли, используя набор QuantiGene High Volume Kit (Bayer Medical), методом амплификации сигнала разветвленной ДНК (рДНК) (Drug Metabolism and Disposition, 28(5), 608-616(2000)). В соответствии с протоколом, прилагаемым к набору QuantiGene High Volume Kit, клетки лизировали, используя Lysis Mixture, и лизисный раствор добавляли к чашке для улавливания микроорганизмов. Затем добавляли набор зондов, специфических к WNT-5A или GPDH, и давали прореагировать при 53°C в течение 20 часов. После промывки чашки при помощи 0,1×SSC, содержащего 0,03% лаурилсульфат, добавляли зонд для амплификации, включающий рДНК, и давали прореагировать при 46°C в течение 1 часа. После промывки чашки добавляли зонд для мечения, меченный щелочной фосфатазой, и давали прореагировать при 46°C в течение 1 часа. После промывки чашки добавляли субстрат Lumi-Phos Plus и давали прореагировать при 46°C в течение 30 минут. Затем измеряли флуоресценцию, используя WALLAC 1420ARVO _SX.

Был сконструирован набор WNT-5A-специфических зондов на основе последовательности кодирующей области мРНК WNT-5A человека. В качестве распространителей захвата (CEs) использовали 10 зондов (SEQ ID NO:12-21); в качестве распространителей метки (LEs) использовали 31 зонд (SEQ ID NO:22-52) и в качестве блокаторов использовали 9 зондов (SEQ ID NO:53-60).

В качестве набора GAPDH-специфических зондов использовали набор зондов рДНК для GAPDH человека (XenoTech LLC, B0960).

Количества мРНК WNT-5A и GAPDH выражали в относительных величинах (%) по отношению к контролю, где не было добавления соединения, и концентрацию соединения, при которой количество мРНК уменьшалось наполовину (ИК ₅₀), рассчитывали как показатель активности по снижению количества мРНК WNT-5A для соответствующего соединения.

Таблица 3 показывает эффект соединений на количество мРНК WNT-5A и GDPH. Каждое цифровое значение в таблице представляет собой среднее значение для 2 лунок. Эти соединения снижали количество мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы. Значение ИК ₅₀ для наиболее активного соединения составило 0,12 мкМ. При ИК₅₀ концентрации каждого соединения для подавления мРНК WNT-5A, не наблюдалось никакого снижения количества мРНК GAPDH, измеренного в это же время.

Таблица 3
	ИК 50 (мкМ)
Соединение №	WNT-5A	GAPDH
1	0,20	28,25
2	0,39	26,41
3	3,16	57,95
4	3,46	>30
5	3,47	>30
7	4,07	>120
18	0,63	6,58
24	4,74	21,07
35	0,46	4,29
38	6,42	>120
52	0,12	13,47
53	0,12	45,45
54	2,37	>30
55	0,74	>30
58	0,50	79,95
65	8,28	109,16
68	10,69	50,63
73	9,37	>120
76	8,56	55,94
77	8,13	>120
79	0,90	38,16

Пример испытания 5

Активность соединений по промотированию роста клеток сосочков дермы (Таблица 2):

Клетки сосочков дермы человека, которые были закуплены у фирмы Toyobo, культивировали в MEM (Invitrogen), содержащей 12% FBS.

Клетки сосочков дермы в пассаже 5 высевали в 96-луночный планшет для сфероидальной культуры с получением плотности 1,5×10 ⁴ клеток/лунка и культивировали в течение ночи. Затем среду заменяли средой, к которой не было добавлено никакого соединения, или средой, содержащей соединение, и культивирование продолжали еще в течение 72 часов. После завершения культивирования клетки подсчитывали, используя набор для подсчета клеток (Wako Pure Chemicals). За пять часов до завершения культивирования к каждой среде добавляли реагент WST-1 в количестве 1/10 от количества среды и затем по окончании культивирования измеряли оптическую плотность (О.П. 450 нм/620 нм) среды. Положительную корреляцию между количеством клеток и оптической плотностью наблюдали в пределах от 0,25 до 4×10⁴ клеток/лунка.

Таблица 4 показывает эффект соединений, обладающих активностью снижения количества мРНК WNT-5A на рост клеток сосочков дермы. В этой таблице каждое цифровое значение представляет собой среднее значение для 6 лунок (контрольная группа) или 3 лунок (группы испытания). Для сравнения контрольной группы с группами испытания использовали t-критерий Стьюдента:

*: P<0,05, **: P<0,01, ***: P<0,001.

Каждое из соединений, обладающих активностью снижения количества мРНК WNT-5A, показало замечательную активность промотирования роста клеток сосочков дермы при концентрации 16 мкМ. Каждое из соединений 1, 2, 18, 35, 52, 53 и 58 показало сильную активность по снижению количества мРНК WNT-5A (т.е., ИК₅₀ ниже, чем 1 мкМ), а также показало значительную активность по промотированию роста при 1 мкМ.

Таблица 4
Соед.№	О.П. 450 нм/620 нм (% от контроля
	1	4	16 (мкМ)
1	132,9±11,6***	183,7±12,1***	144,7±13,0***
2	142,6±10,1***	167,3±8,5***	241,0±25,3***
3	92,9±1,6	92,9±9,9	244,2±33,4***
4	97,4±24,4	148,2±4,9***	180,2±6,9***
5	110,2±45,0	174,7±29,2***	236,4±26,4***
7	82,6±3,9	169,7±10,4***	194,8±12,7***
18	115,6±9,0*	147,1±11,3***	210,9±25,9***
24	108,2±6,9	104,3±10,5	119,7±3,7**
35	160,8±3,5***	181,6±3,7***	158,6±18,3***
38	103,5±2,6	89,6±7,3	124,9±5,1**
52	124,5±1,0***	143,2±9,5***	197,0±5,4***
53	126,6±14,3**	149,5±12,8***	184,4±3,6***
54	80,0±2,4	97,1±5,6	135,0±0,9***
55	89,0±1,8	126,9±7,2***	175,6±9,8***
58	123,3±1,8***	150,4±9,4***	217,4±14,5***
65	92,1±6,7	87,6±8,7	141,0±5,3***
73	91,7±5,7	81,2±7,8	205,6±9,2***
76	80,0±5,6	77,1±7,0	120,7±6,3*
77	81,6±4,4	86,3±5,0	180,8±21,7***
79	87,5±9,9	98,6±3,6	120,0±4,1**

*: p<0,05, **: p<0,01, ***: p<0,001

Пример испытания 6

Уменьшение количества мРНК WNT-5A в органной культуре кожи обезьяны

Кожу спины обезьяны Cynomolgus (Macaca fascicularis) (самцы возраста 6 лет) собирали и разделяли на кусочки (5 мм × 8 мм) под стереоскопическим микроскопом. Затем каждый кусок ткани кожи культивировали в среде Е William (Invitrogen), к которой не добавляли никакого соединения или добавляли Соединение 7 или Соединение 3 и которая содержала 10 мкг/мл инсулина (Sigma) и 10 нг/мл гидрокортизона (Kurabo).

На 11-й день культивирования волосяные фолликулы отделяли от каждого куска ткани кожи и экстрагировали всю РНК при помощи реагента TRIzol (Invitrogen). Используя части по 200 нг от общего количества РНК, по 0,4 мкМ праймеров, специфических к WNT-5A или глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе (GAPDH) [WNT-5A смысловой: AATGTCTTCC AAGTTCTTCC TAGTGGC (SEQ ID NO:8), WNT-5A антисмысловой: GATGTCGGAA TTGATACTGG CA (SEQ ID NO:9), GAPDH смысловой: ACCACAGTCC ATGCCATCAC (SEQ ID NO:10) и GAPDH антисмысловой: TCCACCACCC TGTTGCTGTA (SEQ ID NO:11)], и SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq (Invitrogen), осуществляли ОТ-ПЦР в соответствии с протоколом, прилагаемым к SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq. Вкратце, синтез первой цепи осуществляли при 50°C в течение 30 минут в реакционной системе общим объемом 25 мкл в соответствии с протоколом, прилагаемым к SUPERSCRIPT One-Step RT-PCT с PLATINUM Taq. После нагревания до 94°C в течение 2 минут, фрагмент кДНК WNT-5A или GPDH амплифицировали в 40 или 30 циклах, при этом каждый цикл включал 30 секунд при 94°C, 30 секунд при 55°C и 30 секунд при 72°C.

Каждый реакционный раствор подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле и окрашивали Cyber Green (Takara). Результаты представлены на Фиг. 4.

В 40-цикловой ПЦР с использованием WNT-5A-специфических праймеров количество амплифицированного фрагмента кДНК WNT-5A заметно снижалось в культуре при добавлении Соединения 7 или Соединения 3 в сравнении с культурой, к которой не добавляли никакого соединения.

В 30-цикловой ПЦР с использованием GAPDH-специфических праймеров, с другой стороны, не наблюдалось никакого изменения количества амплифицированного фрагмента кДНК, независимо от присутствия или отсутствия соединений.

Пример испытания 7

Увеличение пролиферативных клеточно-нуклеарный антиген(PCNA)-положительных клеток в органной культуре кожи обезьяны:

Кожу спины обезьяны Cynomolgus (Macaca fascicularis) (самцы возраста 6 лет) собирали и разделяли на кусочки (5 мм × 8 мм) под стереоскопическим микроскопом. Затем каждый кусок ткани кожи культивировали в среде Е William (Invitrogen), к которой не добавляли никакого соединения или добавляли Соединение 7 или Соединение 3 и которая содержала 10 мкг/мл инсулина (Sigma) и 10 нг/мл гидрокортизона (Kurabo).

На 30-й день культивирования каждый кусочек кожи фиксировали с использованием 10% нейтрализованного формалина при комнатной температуре. Готовили срез, погруженный в парафин. После добавления 1% BSA-содержащего PBS давали выстояться при комнатной температуре в течение 30 минут и затем кипятили в 0,1 M растворе цитратного буфера. Затем осуществляли взаимодействие с анти-PCNA антителом (Dako Japan, 200-кратное разбавление) при 4°C в течение ночи и затем осуществляли взаимодействие с биотинилированным анти-мышиным IgG антителом. Затем осуществляли взаимодействие со стандартным набором ABC (vector) и воздействовали веществом AEC (Sigma) для проявления цвета.

В результате, наблюдали положительную реакцию в клетках в волосяных фолликулах и эпидермальном базальном слое. В фолликулах наблюдали сильно заметное увеличение количества PCNA-положительных клеток в сосочках дермы и верхнем слое кожи, как в телогенных, так и анагенных волосяных фолликулах (Фиг. 5).

Пример испытания 8

Увеличение диаметра волосяной луковицы в органной культуре кожи обезьяны:

Кожу спины обезьяны Cynomolgus (Macaca fascicularis) (самцы возраста 6 лет) собирали и разделяли на кусочки (5 мм × 8 мм) под стереоскопическим микроскопом. Затем каждый кусок ткани кожи культивировали в среде Е William (Invitrogen), к которой не добавляли никакого соединения или добавляли Соединение 7 или Соединение 3 и которая содержала 10 мкг/мл инсулина (Sigma) и 10 нг/мл гидрокортизона (Kurabo).

На 30-й день культивирования все фолликулы, содержащиеся в каждом кусочке ткани кожи, отделяли, и диаметр луковиц измеряли под стереоскопическим микроскопом.

Результаты представлены на Фиг. 6 и 7. На этих фигурах каждое цифровое значение представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка (S.E.) диаметра луковиц всех фолликул, содержащихся в каждом кусочке ткани кожи. Для сравнения контрольной группы с группами испытания использовали t-критерий Стьюдента:

*: P<0,05.

На этих фигурах также представлены гистограммы, показывающие распределение диаметра луковиц. Все фолликулы, содержащиеся в каждом кусочке ткани кожи, распределены на группы по диаметру луковиц, как показано на фигурах, и количество фолликул в каждой группе представляет собой относительную величину (%) от общего числа фолликул, выделенных их куска ткани. Фиг. 6 показывает эффект, достигаемый после культивирования в присутствии Соединения 7. После культивирования в присутствии Соединения 7 в течение 30 дней средний диаметр луковиц фолликул, содержащихся в кусочке ткани кожи, был значительно больше, чем у контрольной группы, где не добавляли никакого соединения. Как показывает дистрибуция, контрольная группа, к которой не добавляли никакого соединения, показала наибольшее число фолликул в группе с диаметром 140 мкм или больше, но меньше чем 170 мкм, тогда как группа, к которой добавляли Соединение 7, показала наибольшее число фолликул в группе с диаметром 170 мкм или больше, но меньше чем 200 мкм. Доля фолликул с диаметром луковицы 170 мкм или больше в группе, которой не добавляли никакого соединения, составила 57,6%, тогда как эта доля в группе, которой добавляли Соединение 7, увеличивалась до 82,4%.

С другой стороны, Фиг. 7 показывает эффект, достигаемый после культивирования в присутствии Соединения 3. Аналогично случаю с Соединением 7, после культивирования в присутствии Соединения 3 в течение 30 дней средний диаметр луковиц фолликул, содержащихся в кусочке ткани кожи, был значительно больше, чем у контрольной группы, которой не добавляли никакого соединения. Как показывает дистрибуция, контрольная группа, к которой не добавляли никакого соединения, показала наибольшее число фолликул в группе с диаметром 140 мкм или больше, но меньше чем 170 мкм, тогда как группа, которой добавляли Соединение 3, показала наибольшее число фолликул в группе с диаметром 200 мкм или больше, но меньше чем 230 мкм. Доля фолликул с диаметром луковицы 170 мкм или больше в группе, которой не добавляли никакого соединения, составила 55,8%, тогда как эта доля в группе, которой добавляли Соединение 7, увеличивалась до 74,5%.

Пример испытания 9

Испытание роста волос у медвежьих макак:

На лоб медвежьих макак (Macaca arctoides ) (самцы возраста 14 лет), страдающих алопецией, наносили 1 мл лосьона, содержащего 0,3% Соединения 7, раз в день в течение 6 месяцев по 5 раз в неделю. До начала применения участок алопеции в области лба помечали татуировкой. Часть кожи, включающую татуировку, фотографировали до начала применения и после применения в течение 6 месяцев.

На Фиг. 8 представлены увеличенные фотографии кожи до и после применения лосьона, содержащего Соединение 7, в течение 6 месяцев. До применения наблюдали много волос, представляющих собой тонкий пушок. На этом же участке после применения в течение 6 месяцев, наоборот, уменьшилось количество тонкого пушка и увеличилось количество толстых у основания волос. То есть, подтверждается, что алопеция в области лба у медвежьих макак явно уменьшалась при применении лосьона, содержащего Соединение 7, в течение 6 месяцев.

Результаты приведенных выше Примеров испытаний показывают, что WNT-5A экспрессируется в клетках сосочков дермы человека, количество мРНК WNT-5A в клетках сосочков дермы человека уменьшается при применении соединения по настоящему изобретению, и соединение, обладающее активностью по снижения количества мРНК WNT-5A, обладает активностью промотирования роста клеток сосочков дермы.

Также показано, что соединение по настоящему изобретению вызывает снижение количества мРНК WNT-5A также и в органной культуре кожи обезьяны, это соединение вызывает замечательное увеличение количества положительных к PCNA-окрашиванию пролиферативных клеток, как в телогенных, так и в анагенных волосяных фолликулах, и это соединение увеличивает размер луковиц фолликул.

Кроме того, показано, что соединение по настоящему изобретению обладает эффектом уменьшения алопеции у медвежьих макак, которые являются животной моделью алопеции мужского типа.

Таким образом, можно сказать, что соединение, промотирующее рост клеток сосочков дермы, будет повышать способность роста клеток, которая была понижена в сосочках дермы в фолликулах на участке алопеции и, таким образом, способствует образованию хорошо развитой ткани сосочков дермы, промотируя, тем самым, рост волос.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Ингибитор функции WNT-5A, например, соединение, обладающее активностью снижения количества мРНК WNT-5A, или его фармацевтически приемлемая соль обладает активностью промотирования роста клеток сосочков дермы и, поэтому, является полезным в качестве стимулятора роста волос/тоника для роста волос с новым функциональным механизмом.

Настоящее изобретение предлагает совершенно новую идею использования соединения, ингибирующего функцию WNT-5A, в качестве средства уменьшения или предотвращения алопеции, которое было до сих пор неизвестно, и скрининг такого соединения, ингибирующего функцию WNT-5A, является полезным для разработки нового стимулятора роста волос/тоника для роста волос.