штамм л-1-23 eimeria tenella (возбудителя кокцидиоза) для производства вакцин, диагностикумов и проведения научных исследований

Формула изобретения

Штамм Л-1-23 Eimeria tenella (коллекция Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства, КЭ №1) для производства диагностикумов и вакцин и для проведения научных исследований.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и биотехнологии, а точнее к производству диагностикумов и вакцинных препаратов против кокцидиозов кур, вызываемых Eimeria tenella (E. tenella), а также может быть использовано и для проведения научных исследований.

Кокцидиоз кур, вызываемый Е. tenella, имеет широкое распространение во всех странах и наносит существенный экономический ущерб промышленному птицеводству.

Многие научно-исследовательские центры занимаются изучением как самого паразита, так и вызываемого им заболевания у птиц. Основной целью научных исследований является создание средств и методов диагностики, химио- и специфической профилактики болезни.

Важным методом борьбы с кокцидиозом кур является специфическая иммунопрофилактика. Технология производства и применения вакцин такова, что используемые при их изготовлении штаммы должны обладать высокой иммуногенной активностью, репродуктивностью, не быть устойчивыми к действию различных антикокцидийных препаратов (химиопрепараты и ионофорные антибиотики).

Известен ряд штаммов E. tenella, используемых для производства вакцин [1, 2, 3, 4]. Эти штаммы выделены в других странах и используются при проведении научных исследований и производстве вакцин. Несмотря на то, что антигенные различия у разных штаммов на сегодняшний день не установлены, нельзя исключить, что они существуют. Поэтому появилась необходимость выделения такого штамма Е. tenella, который можно было бы использовать для указанных целей.

В качестве прототипа использован штамм E. tenella Л-1, выделенный из помета больных кокцидиозом цыплят с одной из птицефабрик Ленинградской области [5]. Штамм Л-1 в дозе от 5000 и выше ооцист на голову вызывает у зараженных восприимчивых цыплят острое переболевание с характерными клиническими (угнетенный вид, взъерошенные перья, бледность гребешков и слизистых оболочек, жажда, отказ от корма, кровянистый помет) и патолого-анатомическими признаками (у павших птиц отмечается сильное вздутие и геморрагические поражения слизистой оболочки слепых отростков кишечника). У переболевших цыплят образуется иммунитет к повторному заражению.

Таблица 1 Характеристика штамма Л-1 Е. tenella
Показатели
Размеры ооцист, мкм	19,0-26,0 (средняя 22,6-18,8)
Индекс формы ооцист	1,16
Препатентный период, час	138
Место локализации в кишечнике	Слепые отростки
Вирулентность, ЛД50	50000 ооцист на 1 голову
Чувствительность к кокцидиостатикам	Чувствителен к ампролиуму, никарбазину, фармкокциду, химкокциду, клинакоксу, ко всем ионофорным антибиотикам

Однако штамм Л-1 Е. tenella обладает высокой вирулентностью, так как вакцинация птицы против кокцидиоза основана на введении в организм строго дозированного количества ооцист паразита, в связи с чем возможные нарушения при вакцинации могут вызывать вспышки кокцидиоза у иммунизированных цыплят.

Задачей изобретения является получение вакцинного штамма Е. tenella, со слабой степенью вирулентности, обладающего высокими иммуногенными свойствами в сочетании со способностью к высокому уровню репродуктивности в организме цыплят.

Поставленная задача достигается штаммом Л-1-23 Eimeria tenella для производства вакцин, диагностикумов и проведения научных исследований. Штамм Л-1-23 Eimeria tenella выделен путем заражения восприимчивого цыпленка одной ооцистой из штамма Л-1 Eimeria tenella.

Штамм Л-1-23 Eimeria tenella депонирован в коллекции Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства Россельхозакадемии под номером 1.

Характеристика штамма Л-1-23 Eimeria tenella

Систематическое положение. Штамм Л-1-23 Е. tenella относится к роду Eimeria, семейству Eimeriidae, отряду Coccidiida.

Морфологическая характеристика. Имеет широкоовальные ооцисты длиной 19,0-26,0 мкм, шириной 16,0-22,0 мкм (средняя 22,6-18,8 мкм).

Биологические свойства. Препатентный период развития паразита составляет 130 часов. Место эндогенного развития паразита в кишечнике инвазированных цыплят - слепые отростки.

Вирулентные свойства. При заражении 15-дневных цыплят ооцистами, хранившимися не более 2-х месяцев, в дозе 800000 ооцист на голову летальность составляет 50% (ЛД ₅₀).

Иммуногенные свойства. Заражение цыплят ооцистами вызывает формирование специфического иммунитета (гуморального и клеточного).

Культурально-биохимические свойства. Штамм Л-1-23 Е. tenella не культивируется на питательных средах. Поддерживается путем пассирования на цыплятах, вызывая через 72-96 часов характерные поражения в кишечнике с выделением ооцист, начиная с 130-го часа после заражения.

Штамм чувствителен к антикокцидийным препаратам - ампролиуму, никарбазину, фармкокциду, химкокциду, клинакоксу, ко всем ионофорным антибиотикам.

Специфичность. Штамм Л-1-23 Е. tenella специфичен только для кур. Паразит может проходить полный цикл развития также в куриных эмбрионах.

Пример 1. Использование штамма Л-1-23 Е. tenella для наработки культуры кокцидий для иммунохимиопрофилактики кокцидиозов кур.

Для иммунизации птицы используются специально подобранные штаммы кокцидий, обладающие слабой вирулентностью и высокой иммуногенностью, в дозах, не вызывающих клинического переболевания кокцидиозом. Такими свойствами обладает штамм Л-1-23 Е. tenella. Иммуногенный материал получают следующим образом. 14-дневных цыплят, свободных от кокцидий, заражают перорально ооцистами штамма Л-1-23 Е. tenella из матричной расплодки в дозе 2-3 тысячи на 1 голову. На 6-10 сутки после заражения из собранного от цыплят помета выделяют ооцисты методом флотации в насыщенном растворе поваренной соли. Споруляцию ооцист проводят в 2%-ном растворе двухромовокислого калия при температурном режие 26±2°С в течение 3-5 суток. Спорулированные ооцисты штамма Л-1-23 Е. tenella используют при изготовлении культуры кокцидий, предназначенной для вакцинации цыплят.

Культура кокцидий представляет собой гомогенную стерильную смесь серовато-оранжевого цвета без посторонних примесей, плесени, неразбивающегося осадка, безвредную для цыплят. Пероральное применение культуры кокцидий вызывает субклиническое переболевание цыплят с последующим выделением ооцист во внешнюю среду, что создает возможность естественного реинвазирования хозяина и формирования у него иммунитета, напряженность которого может быть определена с иммуноферментной тест-системы на основе штамма Л-1-23 Е. tenella.

Пример 2. Изучение в экспериментальных условиях антикокцидийной активности препаратов.

В настоящее время основным методом профилактики кокцидиозов кур является использование антикокцидийных препаратов. Первым этапом изучения эффективности (антикокцидийной активности) вновь синтезированных препаратов является проведение экспериментов с использованием интактных цыплят, зараженных лабораторными штаммами кокцидий с известной вирулентностью. К таким штаммам относится штамм Л-1-23 E. tenella.

Интактных цыплят заражают перорально ооцистами штамма Л-1-23 Е. tenella в дозе ЛД ₅₀ и сразу начинают давать с кормом изучаемые препараты. Наблюдения за птицей ведут в течение 10 дней. Для оценки антикокцидийной активности препарата используют показатели летальности/выживаемости и привесов, которые служат для определения противококцидиозного индекса (ПКИ).

Таблица 2 Сравнительная оценка эффективности различных кокцидиостатиков при заражении цыплят кокцидиями штамма Л-1-23 Е. tenella
Назначение групп	Наименование препаратов	Доза препарата, % к корму	Доза ооцист, тысяч	Процент		ПКИ
				выживаемости	привеса
Подопытная	химкокцид	0,07	800	100	81,2	190
Подопытная	никарбазин	0,125	800	100	79,7	185
Контрольная зараженная, без препарата			800	53,3	28,8
Контрольная незараженная	0	0	0	100	90,4	200

В данном опыте установлено, что и химкокцид и никарбазин обладают выраженной антикокцидийной активностью при заражении цыплят кокцидиями штамма Л-1-23 Е. tenella.

Таким образом, штамм Л-1-23 Е. tenella обладает такими иммунобиологическими свойствами, которые позволяют использовать его для проведения экспериментальных исследований, а также в целях получения антигенного и иммуногенного материала, используемого для диагностики и специфической профилактики заболевания.

Источники информации

1. P.L.Long. Further studies on the patogenicity and immunogenicity of the embrio-adapted strain of Eimeria tenella. Avian Pathology, vol.3, №4, 1975.

2. T.K.Jeffers. Attenuation of Eimeria tenella through selection for precocciousness. J. Parasitol., vol.61, №6, 1975.

3. J. Johnson, W.M.Reid, T.K.Jeffers. Practical immunizatin of chickens against coccidiosis using an attenuated strain of Eimeria tenella. Poultry sciense, vol.58, №1, 1979.

4. T.C.Ivore, P.L.Long, M.Kogut and Joyce Johnson. Attenuation of Eimeria necatrix and E. tenella of U.S. origin by serial embryo passage. Avian Diseases, vol.27, №3, 1983.

5. ТУ-10-07-445-87 "Культура кокцидий для иммунохимиопрофилактики кокцидиозов кур", утверждены Начальником Главного управления ветеринарии Государственного агропромышленного Комитета СССР 20.07.1987.