применение антибиотиков в качестве адъювантов вакцин

Формула изобретения

1. Адъювантная композиция, содержащая по меньшей мере один азалид, выбранный из группы, состоящей из 8а-азалида и 9а-азалида, где указанный азалид действует в качестве адъюванта.

2. Адъювантная композиция по п.1, где указанный азалид представляет собой 9а-азалид, выбранный из соединений формулы I

3. Адъювантная композиция по п.2, дополнительно включающая в себя соединение формулы II

4. Адъювантная композиция по п.1, включающая в себя (а) смесь соединений I и II в соотношении от 90%±10% до 10%±10% соответственно (b) воду; и (с) одну или несколько кислот, присутствующих в общей концентрации примерно от 0,2 ммоль до примерно 1,0 ммоль на мл композиции.

5. Адъювантная композиция по любому из пп.1-4- для использования в составе вакцины для животного, отличного от человека.

6. Вакцина для животного, отличного от человека, содержащая по меньшей мере два компонента, вводимых либо одновременно, либо совместно в пределах месяца, где первый компонент представляет собой адъювантную композицию по любому из пп.1-5, а второй компонент представляет собой один или несколько антигенных факторов.

7. Вакцина по п.6, предназначенная для животных, отличных от человека, где адъювантная композиция содержит макролидный антибиотик тулатромицин, и где антигенный фактор выбран из одного или более компонентов, выбранных из группы, состоящей из антигена М. haemolytica, лейкотоксина М. haemolytica, капсульного антигена М. haemolytica, растворимого антигена М. haemolytica или их смеси.

8. Вакцина по п.7, где указанная адъювантная композиция представляет собой композицию, содержащую (а) (i) смесь соединений формул I и II в соотношении примерно от 90%±10% примерно до 10%±10% соответственно (ii) воду; и (iii) одну или несколько кислот, присутствующих в общей концентрации примерно от 0,2 ммоль примерно до 1,0 ммоль на мл композиции; и (b) один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей, присутствующих в количестве примерно от 250 примерно до 750 мг на мл композиции.

9. Применение макролидного антибиотика тулатромицина в производстве адъюванта для вакцины.

10. Набор, включающий в себя адъювант или вакцины по пп.1-8 и инструкции и по применению, где компоненты набора содержат либо противомикробное средство, либо антигенное средство, либо оба указанных средства, и где указанные компоненты могут вводиться совместно или одновременно.

Описание изобретения к патенту

Изобретение связано с адъювантной композицией, включающей в себя по меньшей мере одно противомикробное средство, в частности, азалид, где противомикробное средство или азалид выступает в качестве адъюванта. Точнее, адъювантная композиция представляет собой адъювантную вакцину. Изобретение предоставляет также вакцину, включающую в себя (а) по меньшей мере один антиген и (b) по меньшей мере одно противомикробное средство, включая азалид, где указанное средство действует как адъювант. Адъювантная композиция или вакцина согласно изобретению применима для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых патогенными факторами, такими как бактерии, например, M. haemolytica, простейшие, гельминты, вирусы, грибы, раковая клетка или аллерген. Применение азалида в качестве адъюванта до настоящего изобретения в литературе описано не было.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Среднее геометрическое титров антитела против лейкотоксина для каждой из опытных групп.

Фиг.2. Средние значения титров антитела против цельной клетки, полученные методом наименьших квадратов, для каждой из опытных групп.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к адъювантной композиции, включающей в себя по меньшей мере одно противомикробное средство или антибиотик, в частности азалид, где указанное противомикробное средство или указанный антибиотик выступает в качестве адъюванта. Указанное противомикробное средство или указанный антибиотик может также обеспечивать терапевтические свойства (например, свойства антибиотиков); однако в предпочтительном варианте осуществления согласно изобретению указанное средство обеспечивает уровни противомикробных терапевтических свойств, от незначительных уровней до отсутствия таковых. Точнее, адъювантная композиция представляет собой адъювантную вакцину. Изобретение связано также с вакциной, которая содержит два компонента, включающих в себя (а) по меньшей мере один антиген и (b) по меньшей мере одно противомикробное средство, где противомикробное средство выступает в качестве адъюванта.

Противомикробное средство при применении в настоящем изобретении выступает в качестве адъюванта, т.е. повышает, усиливает, модулирует по мере усиления, развивает или иным образом способствует иммунной реакции на антиген. Для применения в настоящем изобретении подходит большое количество противомикробных средств, включая противомикробные средства, приведенные в описании. В одном варианте осуществления изобретения азалид представляет собой 15-членный 9а-азалид формулы I:

Химическим названием соединения формулы I является (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-((2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-4-C-((пропиламино)-метил)- -L-рибо-гексопиразолил)окси-2-этил-3,4,10-тригидрокси-3,5,8,10,12,14-гексаметил-11-((3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- -D-ксило-гексопиранозил)окси)-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он.

В другом варианте осуществления согласно изобретению азалид представляет собой смесь азалидов. В частности, азалид представляет собой смесь 9а-азалидов. Точнее, азалид представляет собой смесь 13-членного и 15-членного 9а-азалидов. Еще точнее, смесь 9а-азалидов содержит (а) соединение формулы I, представленное выше, и (b) соединение формулы II:

Химическим названием 13-членного 9а-азалида формулы II является (3R,6R,8R,9R,10S,11S,12R)-11-((2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-4-C-((пропиламино)метил- -L-рибо-гексопиранозил)окси)-2-((1R,2R)-1,2-дигидрокси-1-метилбутил)-8-гидрокси-3,6,8,10,12-пентаметил-9-((3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)- -D-ксило-гексопиранозил)окси)-1-окса-4-азациклотридекан-13-он.

Точнее, смесь 9а-азалидов представляет собой композицию, включающую в себя (а) смесь соединений формулы I и II, которые представлены выше, в соотношении, соответственно, примерно от 90%±10% и примерно до 10%±10%; предпочтительно от 90%±4% и примерно до 10%±4%; (b) воду; и (с) одну или несколько кислот, присутствующих в суммарной концентрации примерно от 0,2 ммоль и примерно до 1,0 ммоль на мл композиции. Такая композиция может быть получена при нагревании до температуры в интервале примерно от 50°С и примерно до 90°С смеси, включающей в себя (i) соединение формулы (I), (ii) воду и (iii) одну или несколько кислот в суммарном количестве в интервале примерно от 0,2 ммоль и примерно до 1,0 ммоль на мл смеси.

Более точно, смесь 9а-азалидов представляет собой композицию, включающую в себя (а) (i) смесь соединений формул I и II, которые представлены выше, в соотношении, соответственно, примерно от 90%±10% и примерно до 10%±10%; предпочтительно от 90%±4% и примерно до 10±4%; (ii) воду; и (iii) одну или несколько кислот, присутствующих в общей концентрации примерно от 0,2 ммоль и примерно до 1,0 ммоль на мл композиции; и (b) один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей в количестве примерно от 250 и примерно до 750 мг на мл композиции. Такая композиция может быть получены при нагревании до температуры в интервале примерно от 50°С и примерно до 90°С смеси, содержащей соединение формулы I или II, представленных выше, воду и одну или несколько кислот в количестве в интервале примерно от 0,2 ммоль и примерно до 1,0 ммоль на мл смеси, где один или несколько смешивающихся в водой сорастворителей добавляются перед, в процессе или после стадии нагревания в количестве примерно от 250 и примерно до 750 мг на мл композиции. В предпочтительном варианте осуществления смешивающийся с водой сорастворитель добавляют перед стадией нагревания.

Согласно настоящему изобретению концентрация соединения формулы I в композиции смеси 9а-азалидов, описанной выше, перед стадией нагревания составляет примерно от 50 мг на мл примерно до 500 мг на мл смеси. В предпочтительном варианте концентрация составляет примерно от 50 мг/мл примерно до 200 мг/мл.

Согласно настоящему изобретению концентрация первой смеси соединения I и соединения II в композиции смеси 9а-азалида, представленной выше, составляет примерно от 50 мг/мл примерно до 200 мг/мл композиции. В частности, концентрация первой смеси соединения I и соединения II в композициях 9а-азалидов, представленных выше, составляет примерно от 75 примерно до 150 мг/мл, точнее примерно от 90 мг/мл примерно до 110 мг/мл композиции.

Значение рН смеси заключено в интервале примерно от 5,0 примерно до 8,0, точнее, примерно от 5,0 примерно до 6,0. Нагревание производят в течение примерно от 0,5 примерно до 24 часов, точнее, примерно от 1 примерно до 8 часов.

Примеры подходящих кислот для композиций смесей 9а-азалидов, представленных выше, включают в себя, без ограничения, уксусную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, лимонную кислоту, бромистоводородную кислоту, соляную кислоту, D- и L-молочную кислоту, метансульфоновую кислоту, фосфорную кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, D- и L-винную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, адипиновую кислоту, аспаргиновую кислоту, камфорсульфоновую кислоту, 1,2-этандисульфоновую кислоту, лаурилсерную кислоту, глюкогептоновую кислоту, глюконовую кислоту, 3-гидрокси-2-нафтоновую кислоту, 1-гидрокси-2-нафтоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, яблочную кислоту, слизевую кислоту, азотную кислоту, нафталинсульфоновую кислоту, пальмитиновую кислоту, D-глюкаровую кислоту, стеариновую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, фумаровую кислоту, бензойную кислоту, холевую кислоту, этансульфоновую кислоту, глюкуроновую кислоту, глутаминовую кислоту, гиппуровую кислоту, лактобионовую (lactobionic) кислоту, лизиновую кислоту, миндальную кислоту, нападизиловую (napadisylic) кислоту, никотиновую кислоту, полигалактуроновую кислоту, салициловую кислоту, сульфосалициловую кислоту, триптофановую кислоту и их смеси. В частности, кислота представляет собой лимонную кислоту. В более конкретном варианте осуществления изобретения лимонная кислота присутствует в количестве примерно от 0,02 ммоль и примерно до 0,3 ммоль на мл композиции. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения, кислота представляет собой смесь лимонной кислоты и соляной кислоты. В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения лимонная кислота присутствует в количестве примерно от 0,02 ммоль и примерно до 0,3 ммоль на мл композиции, и соляная кислота присутствует в количестве, достаточном для достижения значения рН композиции в интервале примерно от 5 до 6.

Примеры подходящих смешивающихся с водой сорастворителей для композиций смесей 9а-азалидов, представленных выше, включают в себя, без ограничения, этанол, изопропанол, диэтилгликольмонометилэфир, диэтиленгликольбутилэфир, диэтиленгликольмоноэтилэфир, диэтиленгликольдибутилэфир, полиэтиленгликоль-300, полиэтиленгликоль-400, пропиленгликоль, глицерин, 2-пирролидон, N-метил-2-пирролидон, глицеринформаль, диметилсульфоксид, дибудилсебекат, полисорбат 80 и их смеси. В частности, один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей представляет собой пропиленгликоль. Точнее, пропиленгликоль присутствует в количестве примерно от 450 до 550 мг на мл композиции.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения одна или несколько кислот представляют собой лимонную кислоту, присутствующую в количестве примерно от 0,02 ммоль до 0,3 ммоль на мл композиции, и соляную кислоту, присутствующую в количестве, достаточном для достижения значения рН композиции в интервале примерно от 5 до 6; один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей представляет(ют) собой пропиленгликоль, присутствующий в количестве примерно от 450 до 550 мг на мл композиции; и композиция азалидов дополнительно включает антиоксидантный монотиоглицерин, присутствующий в количестве примерно от 4 мг/мл до 6 мг/мл композиции.

Цефтиофур представляет собой другой антибиотик, который особенно подходит в качестве адъюванта. Это видно из таблицы 8, представленной ниже, а также из других данных, представленных в описании. Цефтиофур представляет собой антибиотик, который доступен в различных солевых формах и кристаллах; таких, например, как натриевая соль, гидрохлорид и форма длительного действия, описанная как кристаллическая форма свободной кислоты, или CCFA. Форма длительного действия представляет собой форму лекарственного средства, особенно подходящую для применения в качестве адъюванта благодаря ее свойствам, включая длительный полупериод существования в организме.

Каждый антибиотик, представленный в таблицах данного описания, как отдельно, так и в сочетании с 1, 2, 3, 4 или 5 другими противомикробными средствами, конкретно описаны и заявлены в данном изобретении как применимые в качестве адъювантной вакцины или компонента вакцины.

Согласно изобретению антиген может представлять собой любой антиген, который в сочетании с противомикробным средством или, в частности, макролидом, в частности, азалидом или, точнее, бэта-лактамом, и более конкретно - цефтиофуром, вызывает повышенный, усиленный, модулируемый по мере усиления, развитый или иным образом облегченный иммунный ответ. В частности, антиген стимулирует продуцирование специфического антитела или антител, которые могут объединяться с антигеном; и/или антиген стимулирует генерирование лимфоцитов, специфичных в отношении антигена, причем указанные лимфоциты способны затем действовать против антигена путем продуцирования лимфокинов, регулирующих и стимулирующих функции эффектора, который может быть нацелен на антиген, или продуцированием клеток, которые могут специфически взаимодействовать с антигеном. Квалифицированный специалист может без труда определить подходящие антигены, и в распоряжении практикующего специалиста имеются следующие ссылки: Clinical Microbiology and Infectious Diseases of the Dog and Cat, Greene, Craig E. 1984. W.B. Saunders Co. Diseases of Feedlot Cattle. Jensen, R., and Makay, Donald R. 1965. Lea and Febiger. Virus Infections of Carnivores. Appel, M. J. ed. 1987. Elsevier Science Publishers B.V. Virus Infections of Ruminants. Dinter, Z. and Morein, B. 1990. Elsevier Science Publishers B.V. Veterinary Virology (2nd edition) Fenner, F.J. et al., 1993. Academic Press, Inc. Infectious Diseases. A Treatise of Infectious Processes. Hoeprich, P.D. et al., 1994. J.B. Lippincott Co. Diseases of Swine. Leman, A.D. et al., 1992. Iowa State University Press. Diseases of Poultry. Calnek, B.W. (ed) 1997. Iowa State University Press. Feline and Canine Infectious Diseases. Gaskell, R.M. and Bennett, M. 1996. Blackwell Science Ltd. Diseases and Disorders of Cattle. Blowey, R.W. and Weaver, A. D. 1991. Wolfe Publishing Ltd.

Примеры подходящих антигенов также определены в описании. В частности, антиген может представлять собой антиген M. haemolytica , лейкотоксин M. haemolytica, капсульный антиген M. haemolytica или растворимый антиген M. haemolytica, каждый из которых определен в настоящем описании, или их смесь (например, антиген One Shot®, коммерчески доступный от Pfizer, Inc., New York).

Изобретение связано со способом повышения, усиления, модулирования по мере усиления, развития или иным образом способствования иммунной реакции на антиген, включающий в себя введение адъювантной композиции или адъювантной вакцины согласно изобретению.

Изобретение связано со способом повышения, усиления, модулирования по мере усиления, развития или иным образом способствования иммунной реакции на антиген, включающий в себя введение вакцины согласно изобретению.

Изобретение связано также со способом лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном, включающим в себя стадию введения адъювантной композиции или адъювантной вакцины согласно изобретению.

Изобретение связано также со способом лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном, включающим в себя стадию введения вакцины согласно изобретению.

Изобретение связано также со способом профилактики заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном, включающим в себя стадию введения адъювантной композиции или адъювантной вакцины согласно изобретению.

Изобретение связано также со способом профилактики заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном, включающим в себя стадию введения вакцины согласно изобретению.

Адъювантная композиция или адъювантная вакцина согласно изобретению может применяться при производстве лекарственного средства для превентивного лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном.

Адъювантная композиция или адъювантная вакцина согласно изобретению может применяться при производстве лекарственного средства для терапевтического лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном.

Вакцина согласно изобретению может применяться при производстве лекарственного средства для превентивного лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном.

Вакцина согласно изобретению может применяться в производстве лекарственного средства для терапевтического лечения заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном.

Изобретение описано для применения в вакцинах для человека и вакцинах для животных, отличных от человека.

Адъювантная композиция может включать в себя одно или несколько противомикробных средств. Вакцина для человека или для животных, отличных от человека, может включать в себя по меньшей мере два компонента, вводимых либо одновременно, либо совместно в течение месяца, где первый компонент представляет собой адъювант, включающий в себя одно или несколько противомикробных средств, а второй компонент представляет собой один или несколько антигенных факторов.

В вакцине с адъювантом адъювант является противомикробным средством, которое представляет собой макролидный антибиотик. В вакцине для животных, отличных от человека, противомикробное средство представляет собой Draxxin® или тултрамицин, а антигенный фактор представляет собой одно или несколько средств, выбранных из группы, включающей в себя антиген M. haemolytica , лейкотоксин M. haemolytica, капсульный антиген M. haemolytica, растворимый антиген M. haemolytica или их смесь.

Адъювантная композиция, которая может применяться в вакцине и вводиться одновременно или совместно с антигеном, выбранным из любого антигена M. haemolytica, представляет собой адъювантную композицию по п. 10, где указанный 9а-азалид представляет собой композицию, включающую в себя (а) (i) смесь соединений формул I и II в соотношении примерно от 90%±10% и примерно до 10%±10%, соответственно; (ii) воду; и (iii) одну или несколько кислот, присутствующих в суммарной концентрации примерно от 0,2 ммоль до 1,0 ммоль на мл композиции; и (b) один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей, присутствующих в количестве примерно от 250 до 750 мг на мл композиции.

Вакцина, включающая в себя любую из противомикробных адъювантных композиций, описанных в данном изобретении, вводится одновременно или совместно с антигеном.

Способ повышения, усиления, модулирования по мере усиления, развития или иного способствования иммунной реакции в организме животного на антиген, включающий в себя введение противомикробного средства животному.

Вакцина, где противомикробное средство представляет собой по меньшей мере один адъювантный компонент из одновременно или совместно вводимых противомикробных средств и антигена, где противомикробное средство выбрано из противомикробных средств, описанных в изобретении, и где антигенные средства представляют собой антигенные средства, описанные в настоящем изобретении.

Способ профилактики заболевания, вызываемого патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном у животного, включающий в себя стадию введения адъювантной композиции или вакцин, описанных в настоящем изобретении, животному, чувствительному к указанному заболеванию. Препарат лекарственного средства такого типа, как описано в настоящем изобретении, для создания вакцины или набора препаратов. Применение такого препарата вакцины или набора для вакцинации животных от заболевания.

Набор, включающий в себя адъювант или вакцины, описанные в настоящем изобретении, и инструкции по их применению, где компоненты набора содержат противомикробное средство или антигенное средство или оба указанных средства и где указанные компоненты могут вводиться совместно или одновременно.

Подробное описание изобретения

Определения

Используемое в описании единственное число в равной степени можно отнести к существительным во множественном числе.

Термин "адъювант", используемый в описании, за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому веществу или смеси веществ, которое(ые) повышает(ют), усиливает(ют), модулирует(ют) по мере усиления, развивает(ют) или иным образом способствует(ют) иммунному ответу (например, гуморальному или клеточному иммунному ответу) на антиген.

Термин "антиген" или "антигенное средство", за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому средству, которое при введении в организм иммунологически зрелого человека или животного стимулирует гуморально и/или клеточно опосредуемую иммунную реакцию. Антиген может представлять собой чистое вещество, смесь веществ или особый материал (включая клетки, клеточные фрагменты или фрагменты, полученные из клеток) или живой, обычно аттенуированный организм или вирус. Примеры подходящих антигенов включают в себя, без ограничения, белок, гликопротеид, липопротеид, пептид, углевод/полисахарид, липополисахарид, токсин, вирус, бактерию, гриб или паразит. Другие подходящие антигены включают в себя компоненты антигенов млекопитающих, такие как, без ограничения, антигенную детерминанту, эпитоп или пептид. Другие подходящие антигены включают в себя антигены, описанные в Патенте США № 5855894. Антиген может быть природным (природно экспрессируемым или природно созданным), синтетическим или полученным с помощью методик с использованием рекомбинатной ДНК, известных специалистам в данной области.

Термин "противомикробное средство" относится к любому средству, которое поражает или подавляет размножение или рост микроорганизма, включая бактерию, например M. haemolytica, простейшие, гельминты, вирусы, грибы, раковую клетку или аллерген. Оно представляет собой химическое соединение, которое является в достаточной степени нетоксичным по отношению к организму хозяину и предназначено для внутреннего или наружного введения. Примеры противомикробных средств представлены и подробно описаны ниже, но изобретение распространяется также на любое подобное средство, будь то средство, описанное ниже, или средство, открытое позже. Одним конкретным типом противомикробного средства является антибиотик, в особенности применимый в качестве адъюванта, которыми являются азалиды. Другим предпочтительным противомикробным средством являются бета-лактамы, в частности цефтиофур, более конкретно - цефтиофур длительного действия. Период введения или продолжительность приема противомикробного средства зависит от его эффективности и частоты введения для противомикробного применения. Обычно оно будет вводиться от 1 до 3 раз в день в течение примерно недели плюс или минут несколько дней. В предпочтительном варианте осуществления изобретения необходимо только одно введение адъюванта, содержащего антибиотик. В более предпочтительном варианте одно введение может осуществляться примерно в одно время с вакциной в одном шприце или аппликаторе или в отдельном шприце или аппликаторе примерно в одно время с другим компонентом или вакциной. В различных вариантах осуществления временной период может быть любым в интервале примерно от нуля (при одновременном введении), примерно от 1 до 2 часов или от 1 до 10 дней, со специфическими периодами в пределах примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 часов или примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней, которые конкретно и отдельно описаны и заявлены в данном изобретении. Специалист может без труда определить длительность введения противомикробного средства.

Термин "азалид", за исключением особо оговоренных случаев, относится к классу соединений, характеризующихся сахарозамещенными азотсодержащими макроциклическими лактоновыми циклами. Примеры подходящих азалидов включают в себя, без ограничения, 8а- и 9а-азалиды и их смеси. В частности, азалид представляет собой 8а-азалид, 9а-азалид или их смеси. Примеры подходящих 8а-азалидов включают в себя, без ограничения, азалиды, описанные в Патенте США № 6054434. Примеры подходящих 9а-азалидов включают в себя, без ограничения, 9а-азалиды, описанные в Патентах США №№ 6339063 и 6514945.

Термин "капсульный антиген", за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому из антигенов, обычно полисахариду по природе, которые находятся на поверхности бактериальных капсул. Капсульный антиген может также называться капсульным полисахаридом или капсульным соединением. Например, капсульный антиген может представлять собой растворимый капсульный полисахарид из M.(Р) haemolytica , которые описаны в литературе (см., например, Inzana, T.J., "Capsules and Virulence in the HAP Group of Bacteria" Can. J. of Vet. Research, 54:S22-S27 (1990); Adlam et al., "Purification, characterization and immunological properties of serotype-specific capsular polysaccharide of Pasteurella haemolytica (serotype A1) organisms" J. Gen. Microbiol ., 130:2415-2426 (1984).

Термин "цефтиофур" относится к противомикробному антибиотику цефалоспориновых типов. Все цефалоспорины заявлены и описаны в настоящем изобретении. Концентрация цефалоспорина в препарате согласно изобретению может изменяться в интервале примерно от 1 мг/мл до 500 мг/мл. Например, для цефтиофура гидрохлорида предпочтительная концентрация составляет примерно 50 мг/мл. Обычно верхний предел концентрации определяется концентрацией, при которой масляная композиция становится слишком вязкой для введения шприцем. Дополнительная информация по дозировке и способу введения антибиотика цефтиофура гидрохлорида приводится в Патенте США № 4902683, который введен в данное описание в виде ссылки.

Доступны также препараты цефтиофура гидрохлорида с концентрацией 12,5 мг/мл. Когда антибиотиком является цефтиофур или его фармацевтически приемлемая соль, интервал его предпочтительных концентраций в композиции согласно изобретению составляет примерно от 1 примерно до 1000 мг/мл, более предпочтительно, примерно от 5 примерно до 750 мг/мл, еще более предпочтительно, примерно от 10 примерно до 100 мг/мл. Для антибактериальных средств, отличных от цефтиофура, подходящие интервалы концентраций, которые обеспечивают эквивалентную антибактериальную активность, могут определяться специалистом на основании данных, приведенных в литературе.

Цефтиофур является высокоэффективным антибиотиком, поставляемым в нескольких формах, таких как натриевая соль, HCl и свободная кислота, а также полиформы, и все они заявлены в настоящем изобретении. Наиболее предпочтительной для применения в настоящем изобретении является кристаллическая свободная кислота (CCFA). Отмечается, что желаемый уровень содержания метаболитов цефтиофура в плазме крови пациентов должен составлять примерно 0,2 мкг/мл или выше. В одном варианте осуществления согласно изобретению разовая доза CCFA в носителе с поддерживаемым высвобождением действующего вещества поддерживается на уровне содержания метаболитов цефтиофура в плазме крови, составляющем примерно 0,2 мг/мл или выше в течение по меньшей мере трех дней, предпочтительно в течение по меньшей мере примерно четырех дней, и наиболее предпочтительно в течение по меньшей мере примерно четырех дней после введения (поддерживаемая доставка CCFA). Сравнения по степени поддерживаемой доставки биоактивных средств проводили для эквивалентных форм, т. е. натриевые соли сравнивали с натриевыми солями, свободные основания - со свободными основаниями. Поддерживаемая доставка действующего вещества должна быть специфически выверена с общепринятым определением для этого термина, в соответствии с которым необходимо, чтобы профиль концентрации во времени имел три различимых фазы (т.е. фазу возрастания концентрации, фазу поддерживания постоянной концентрации и фазу уменьшения концентрации). Хотя термин "поддерживаемая доставка" может включать в себя указанное выше общепринятое определение, это не означает, что он не включает композициями с поддерживаемой доставкой действующего вещества, которые не обладают тремя различимыми фазами (например, композиция может иметь фазу повышения концентрации и увеличенную фазу снижения концентрации). Количество композиции согласно изобретению, предназначенное для введения, является таким, что будет обеспечивать доставку биоактивного средства в количестве и в течение периода, при которых осуществляется терапевтически полезное действие, необходимое для лечения или профилактики заболевания, без побочного токсикологического воздействия на пациента. Считается, что квалифицированный специалист без труда подберет точные необходимые количества. Например, когда в качестве биоактивного средства выбран CCFA, он вводится в лекарственной форме стандартной дозы для внутримышечного или подкожного введения, включающей в себя примерно от 0,5 до 10,0 мг CCFA/кг массы тела пациента, с предпочтительными дозами для домашнего скота в интервале от 4,4 до 6,6 мг/кг и для свиньи - интервале от 5,0 до 7,5 мг/кг. Подробное описания дозировок приведено в Патентах США №№ 5721359 и 6074657, которые введены в данное описание в виде ссылок.

Термин "одновременное введение", за исключением особо оговоренных случаев, относится к введению одного компонента согласно изобретению, такого как адъювант, в пределах некоторого периода времени относительно введения другого компонента, такого как вакцина. Место введения двух компонентов в организм животного может быть любым подходящим местом или способом введения. Обычно временной интервал между введениями составляет 10 дней или менее, более предпочтительно - неделю плюс-минус несколько дней, более предпочтительно - 2, 3, 4, 5, 6 дней. В различных вариантах осуществления согласно изобретению временной период может быть любым в интервале от 2 до 10 дней, с конкретно описанными периодами примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней. Компоненты могут вводиться в одном, двух или нескольких шприцах.

Термин "совместное введение", за исключением особо оговоренных случаев, относится к введению одного компонента согласно изобретению, такого как адъювант, в пределах некоторого периода относительно введения другого компонента, такого как вакцина. Место введения двух компонентов в организме животного может быть любым подходящим местом или способом введения. Обычно период между введением двух компонентов может составлять примерно от введения в одно и тоже время до периода в пределах часа. В различных вариантах осуществления согласно изобретению период может составлять примерно 0, 1 или 2 часов, предпочтительно, а также конкретно описаны и заявлены примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 часов в тот же день, и каждый возможный период конкретно и отдельно описан и заявлен в настоящем изобретении. Период времени может составлять до 1 дня для совместного введения двух компонентов. Компоненты могут вводиться в одном, двух или нескольких шприцах или аппликатора. Более предпочтительно, компоненты могут вводиться в одном или двух шприцах в пределах часа, более предпочтительно, примерно в одно и то же время. Два компонента могут находиться в одном или разных шприцах.

Термин "набор" относится к любому набору или комплекту изделий для специального назначения, в данном случае для иммунизации человека или животного. Он может включать в себя и относиться к контейнеру для такого набора. Он может относиться к упакованному набору материалов, включающему в себя ампулы и инструкции или руководства. Он может быть в одной или нескольких частях в наборе, разделенном на отдельные секции. Набор может состоять из одной или нескольких упаковок, которые образуют или составляют любой конкретный набор.

Термин "лейкотоксин", за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому соединению, токсичному в отношении лейкоцитов. Например, лейкотоксин может представлять собой растворимый токсин, полученный активным выращиванием Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, как описано в литературе (см., например, Патент США 5055400; Заявку на патент Канады 91000097 и публикацию Gentry et al., "Neutralizing monoclonal antibodies to P. haemolytica leukotoxin affinity-purify the toxin from crude culture supernatants" Microbial Pathogenesis, 10: 411 - 417 (1991). Термин "лейкотоксоид" используется для описания инактивированного лейкотоксина. Иначе лейкотоксин называется в литературе, в соответствии с другими определениями, экзотоксином или цитотоксином.

Термин "растворимый антиген", за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому(ым) антигену(ам) из любого источника, который(е) существует(ют) или может(гут) существовать в растворимом состоянии. Например, растворимый антиген может представлять собой растворимый антиген, выделяемый в процессе роста M.(P.) haemolytica и отличный от лейкотоксина и капсулированного антигена, такого как глюкопротеаза и нейраминидаза (см., например, Reggie et al. "Molecular Studies of Ssal, a Serotype-Specific Antigen of Pasteurella haemolytica A1", Infection and Immunity, Vol. 59 No.103398-3406 (1991).

Термин "тулатромицин", за исключением особо оговоренных случаев, относится к смесевой композиции 9а-азалидов, содержащей (а) (i) смесь соединений формул I и II, каждая из которых описана выше, в соотношении примерно от 90%±4% до 10%±4%, соответственно; (ii) воду; и (iii) одну или несколько кислот, присутствующих в суммарной концентрации примерно от 0,2 ммоль до 1,0 ммоль на мл композиции; и (b) один или несколько смешивающихся с водой сорастворителей, присутствующих в количестве примерно от 250 до 750 мг на мл композиции.

Термин "вакцина", за исключением особо оговоренных случаев, относится к любому препарату антигенного или иммуногенного материала, подходящему для стимулирования активного иммунитета у животных или человека. Противомикробное средство или адъювантная композиция вакцины и, в частности, композиция азалида или адъювантной вакцины согласно изобретению может применяться в таком препарате.

Противомикробное средство или адъювантная композиция вакцины и, в частности, азалида, для применения в настоящем изобретении, как показано выше, могут быть коммерчески доступными или могут быть получены с применением реакций органической химии и способов, известных в данной области, включая способы, описанные выше. Например, азалид формулы I, которая представлена выше, может быть получен с помощью реакции транслактонизации азалида формулы II, которая представлена выше. Аналогично, азалид формулы II может быть получен в результате реакции транслактонизации азалида формулы I. Смеси азалидов формул I и II могут быть получены из соединения формулы I или формулы II при обеспечении состояния равновесия в водном растворе. Способы получения азалида формулы I описаны в публикации Международной заявки на патент WO 98/56802. Способы получения азалида формулы II описаны в Патенте США № 6514945. Другие способы получения азалидов описаны в Патентах США №№ 6054434 и 6339063, а также в примерах, представленных ниже.

Вакцина согласно изобретению может быть получена любым из способов, известных в данном области, включая методику, представленную в примере 1 ниже. В частности, вакцина может быть получена при объединении по меньшей мере одного азалида по меньшей мере с одним антигеном, как описано в изобретении. Точнее, антиген находится в лиофилизированной форме и восстанавливается по меньшей мере одним раствором азалида, выступающим в качестве адъюванта, непосредственно перед применением. Альтернативно твердый (например, порошкообразный) азалид (например, соединение формулы I или соединение формулы II) объединяется с водным раствором антигена, с получением вакцины.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может также содержать дополнительные средства. Например, могут присутствовать дополнительные антигены. В частности, адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может содержать сочетание антигенов из Pasteurella multocida, Haemophilus somni, Clostridial species, Mycoplasma species, респираторный вирус синцития крупного рогатого скота (Bovine Respiratory Syncytial Virus), вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (Bovine Viral Diarrhea Virus) и вирус парагриппа 3 типа крупного рогатого скота (Bovine Parainfluenza Type 3 virus) или любое другое инфекционное средство или его производное. Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может также содержать антиген(ы), относящийся(еся) к антигену из раковой клетки или аллергену, полученному(ым) из нее или идентичному(ым) ей.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может дополнительно включать в себя один или несколько антиоксидантов, присутствующих в количестве примерно от 0,01 мг до 10 мг на мл композиции. В частности, один или несколько антиоксидантов, выбранных из группы, включающей в себя бисульфит натрия, сульфит натрия, метабисульфит натрия, тиосульфит натрия, натрийформальдегидсульфоксилат, L-аскорбиновую кислоту, эриторбиновую (erythorbic) кислоту, ацетилцистеин, цистеин, монотиоглицерин, тиогликолевую кислоту, тиомолочную кислоту, тиомочевину, дитиотрейтол, дитиоэритрейтол, глутатион, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, нордигидрогваяретовую кислоту, пропилгаллат, альфа-токоферол и их смеси. В частности, один или несколько антиоксидантов представляют собой монотиоглицерин. В другом конкретном варианте осуществления изобретения монотиоглицерин присутствует в количестве примерно от 4 мг/мл и примерно до 6 мг/мл композиции.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может дополнительно включать в себя один или несколько консервантов в количестве примерно от 0,01 и примерно до 10 мг на мл композиции. Примеры подходящих консервантов включают в себя, без ограничения, хлорид бензалкония, хлорид бензэтония, бензойную кислоту, бензиловый спирт, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, бензоат натрия, фенол и их смеси. Для квалифицированного специалиста в данной области понятно, что наличие или отсутствие консерванта будет зависеть от антигена. Например, если антиген представляет собой живой бактериальный антиген, тогда добавлять консервант не следует.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может также включать в себя дополнительный адъювант, который не является противомикробным средством, в частности не противомикробный и не азалидный адъювант. Примеры подходящих адъювантов, которые не являются противомикробными средствами и не являются азалидными адъювантами, включают в себя адъюванты, известные в данной области.

Адъювантную композицию согласно изобретению можно вводить как часть препарата вакцины, который может необязательно содержать дополнительный адъювант. Альтернативно, адъювантную композиция согласно изобретению можно вводить в дополнение к вакцине (например, отдельно), которая может необязательно содержать "дополнительный адъювант", отличный от адъюванта композиции согласно изобретению. Независимо от способа введения, противомикробное средство, в частности, азалид выступает в качестве адъюванта или обеспечивает вспомогательное действие, т.е. повышает, усиливает, модулирует по мере усиления, развивает или иным образом способствует иммунной реакции и на антиген.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может применяться для профилактики или лечения заболеваний человека или животных, вызываемых патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном, введением терапевтически эффективного количества адъювантной композиции или вакцины человеку или животному, чувствительному к заболеванию.

Согласно изобретению патогенный фактор может представлять собой любой патогенный фактор, включая, без ограничения, бактерии, простейшие, гельминты, вирусы и грибы. Заболевания, вызываемые у животных такими патогенами, включают в себя, без ограничения респираторное заболевание крупного рогатого скота, респираторное заболевание свиней, пневмонию, пастереллез, кокцидиоз, анаплазмоз, инфекционный кератит. Таким образом, адъювантные композиции и адъювантные вакцины согласно изобретению можно применять для профилактики или лечения, помимо прочего, респираторного заболевания крупного рогатого скота, респираторного заболевания свиней, пневмонии, пастереллеза, кокцидиоза, анаплазмоза и инфекционного кератита.

Согласно изобретению раковая клетка может быть раковой клеткой любого типа, известного в данной области. Согласно изобретению аллерген может представлять собой любой аллерген, известный в данной области техники.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может применяться для защиты или лечения человека или животных, отличных от человека, таких домашний скот или домашние животные, включая, без ограничения, крупный рогатый скот, лошадей, овец, свиней, коз, кроликов, кошек, собак и других млекопитающих, нуждающихся в лечении. Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может также применяться для защиты или лечения человека. Специалисту понятно, что адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению будут выбраны с учетом конкретного пациента, подлежащего защите или лечению. Таким образом, квалифицированному специалисту понятно, что адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению, применяемые для защиты или лечения животных, может отличаться от адъювантной композиции, адъювантной вакцины или вакцины согласно изобретению, применяемых для защиты или лечения человека.

Адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может вводиться пероральным, внутримышечным, внутривенным, подкожным, внутриглазным, парентеральным, местным, вагинальным или ректальным способами. Для введения крупному рогатому скоту, свиньям или другим домашним животным адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению может быть включена в состав пищи или введена перорально в виде композиции для перорального введения.

Для целей согласно изобретению терапевтически эффективное количество представляет собой такое количество, которое повышает, усиливает, модулирует по мере усиления, развивает или иным способом облегчает иммунную реакцию на антиген. В частности, терапевтически эффективное количество представляет собой такое количество, которое индуцирует иммунитет у животного, восприимчивого к заболеванию, вызываемому патогенным фактором, раковой клеткой или аллергеном. Специалисту в данной области понятно, что терапевтически эффективное количество будет изменяться и определяться для каждого случая отдельно. Факторы, которые будут учитываться, являются такими же, как и факторы, представленные ниже для определения подходящих дозировок. Например, терапевтически эффективное количество может легко определяться при испытании различных композиций адъювантов или препаратов вакцины, изготовленных согласно данному изобретению, на крупном рогатом скоте и подборе композиции или препарата вакцины, которая индуцирует иммунитет у статистически значимого количества особей крупного рогатого скота, в борьбе с M. (P.) haemolytica . Иммунитет, индуцируемый вакциной, может определяться стойкостью к экспериментальному контрольному заражению, что находит отражение в снижении или отсутствии смертности, отсутствии или минимальных клинических показаниях, снижении или полном исключении характерных повреждений легкого, которые известны в данной области.

Обычно дозировки и количества противомикробных средств, предназначенных для применения, могут определяться специалистом данной области. Более сильные и обладающие более длительным действием противомикробные средства не должны вводиться в таком же большом количестве, как антибиотики, которые обладают более коротким периодом полужизни или являются менее сильными. Специально для пользователей авторы включили в описание таблицы с типичными дозировками и интервалами межу их введением. Количество такого адъюванта, предназначенное для применения, и частота его введения также определены в данном документе. Для примера, но без ограничения данного изобретения конкретными рекомендациями, в описании представлены дозировки для противомикробных азалидов одного типа.

В частности, азалидная адъювантная композиция или адъювантная вакцина, независимо от того, вводится ли она одновременно или совместно, и в частности, Draxxin®, может вводиться в дозировках в интервале примерно от 0,01 мг равновесной смеси соединений на кг массы тела (мг/кг) и примерно до 20 мг/кг. Точнее, адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению, независимо от того, вводится ли она совместно или одновременно, может вводиться в дозировках в интервале примерно от 1 мг/кг до 10 мг/кг. Еще более точно, адъювантная композиция, адъювантная вакцина или вакцина согласно изобретению вводится в дозировках в интервале примерно от 1,25 мг/кг до 5,0 мг/кг.

Цефтиофур представляет собой другой антибиотик, который особенно подходит для целей, описанных в настоящем документе. Это видно из данных таблицы 8, приведенной ниже, а также других разделов описания, в частности из абзаца в разделе "Определения", относящегося к определению термина "цефтиофур". Цефтиофур представляет собой антибиотик, который доступен в различных солевых формах и кристаллах, таких, например, как натриевая соль, форма гидрохлорида и форма длительного действия, описанная как кристаллическая форма свободной кислоты или CCFA. Форма длительного действия является особенно подходящей формой лекарственного средства для применения в качестве адъюванта благодаря ее свойствам, включая длительный полупериод жизни лекарственного средства в организме пациента.

Представлены некоторые названия и формулы для цефтиофура. Гидрохлорид цефтиофура имеет следующую структуру:

Данное соединение представляет собой кристаллическую гидрохлоридную соль 7-[2-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-2-метоксиимино)ацетамидо]-3-[(фур-2-илкарбонил)тиометил]-3-цефем-4-карбоновой кислоты. Данное соединение цефалоспориновой кислоты известно под общим названием цефтиофур. Его получение описано в Патенте США № 4902683 (Amin et al., от 20 февраля 1990 г.), который включен в настоящее описание в виде ссылки.

Структура свободной кислоты цефтиофура представлена формулой II:

Данное соединение представляет собой кристаллическую форму свободной кислоты цефтиофура. Ее получение описано в Международной публикации № WO 94/20505, опубликованной 15 сентября 1994 года (Dunn et al.), которая включена в настоящее описание в виде ссылки.

Адъювантная композиция или адъювантная вакцина, не зависимо от того, вводится ли он совместно или одновременно, может вводиться непрерывно, периодически или в виде разовой дозы. Специалист без труда поймет, что дозировки и длительность лечения могут изменяться в зависимости от вида, массы тела и состояния субъекта, подлежащего лечению, его индивидуальной восприимчивости к адъювантным композициям и вакцинам и, в частности, от выбранного способа введения. В некоторых примерах уровни дозировок, которые ниже низшего предела указанных выше интервалов значений, могут быть терапевтически эффективны, в то время как в других случаях могут применяться более высокие дозы без проявления каких бы то ни было побочных эффектов, при условии, что такие более высокие дозы сначала подразделяются на несколько небольших доз для введения в течение дня. Считается, что повторная иммунизация является желательной в любом случае, когда вероятен повторный стресс или экспозиция. Способ введения адъювантной композиций или адъювантной вакцины, независимо от того, вводится ли она совместно или одновременно, может представлять собой любой подходящий способ, который доставляет адъювантные композиции, независимо от того, вводятся ли они совместно или одновременно в организм хозяина. Подкожное введение или введение внутримышечной инъекцией является предпочтительным.

Приведенные ниже примеры дополнительно иллюстрируют композиции и способы согласно изобретению. Следует учесть, что настоящее изобретения не ограничивается специфическими подробностями примеров, представленных ниже.

Пример 1

Препараты вакцины и способы лечения

В качестве модели антигена в данных исследования используют экспирированную коммерческую вакцину Mannheimia haemolytica (One Shot®, коммерчески доступна от Pfizer, Inc., New York). Данный антиген восстановлен с использованием адъюванта One Shot®, стерильной воды или тулатромицина. В качестве отрицательного контроля используют физиологический раствор. Эффективность вакцины оценивают серологически и антигенной стимуляцией вирулентным изолятом М. haemolytica . Для исследования отбирают сорок телят массой в среднем 478 фунтов в -1 день. Телят отбирают на основании наличия низких титров антител к лейкотоксину. Описание лечения групп показано в таблице 1.

Таблица 1
Группа лечения	Вакцина	Объем дозы	Способ введения	Количество вакцинированных животных
Т01	Физиологический раствор	2 мл	Подкожн.	10
Т02	Вакцина One Shot®	2 мл	Подкожн.	10
Т03	One Shot® антиген, восстановленный в стерильной воде	2 мл	Подкожн.	10
Т04	One Shot® антиген, восстановленный в тулатромицине	5,3 мл	Подкожн.	10

Данное исследование разработано для оценки свойств адъюванта 9а-азалидного тулатромицина путем замещения адъюванта в коммерческой вакцине Mannheimia haemolytica (One Shot®) тулатромицином.

Каждому животному подкожные инъекции осуществляют в левую сторону шеи в 0 день. Каждому животному в группе Т01 вводят дозу 2 мл физиологического раствора. Анатоксин One Shot® Mannheimia (Pasteurella) haemolytica восстанавливают в One Shot®-адъюванте и вводят телятам Т02 группы. Вакцину восстанавливают с использованием стерильной воды и вводят животным группы Т03. Бактерийный анатоксин вакцины One Shot®Mannheimia (Pasteurella) haemolytica восстанавливают в тулатромицине. Средняя масса тела телят в группе Т04 в -1 день составляет 471,1 фунтов. Каждому теленку группы Т04 вводят дозу объемом 5,3 мл восстановленной в тулатромицине вакцины.

Для данных исследований животных отбирают для лечения по схеме рандомизированных блоков. Фактор блокировки основан на серологических титрах лейкотоксина, полученных перед началом исследования. Данные серологического анализа суммируют на данную временную точку. Значения титра логарифмически преобразуют {ln (n+1)} перед анализом. Линейные комбинации параметрических оценок используют в априорных контрастах после испытания на любой значимый ( 0,05) эффект лечения или эффект взаимодействия между временной точкой и лечением. Сравнение результатов обработки (лечения) производят в каждой временной точке. Для оценки статистических отклонений используют уровень значимости 5% ( 0,05). Для каждого среднего значения рассчитывают также 95% доверительные интервалы. Для значений титров в каждой временной точке отбора рассчитывают величины средних геометрических с помощью метода наименьших квадратов ln(значения титров+1).

Пример 2

Серология после вакцинации

Содержание в сыворотке антител против лейкотоксина контролируют после вакцинации (См. таблицу 2; фиг.1). После проведения вакцинации средний уровень антител против лейкотоксина в нг IgG (См. Confer, et al., "Serum antibody responses of cattle to iron-regulated outer membrane proteins of Pasteurella haemolytica Al" Vet Immunol Immunopathol Vol. 47, pp 101-110 (1995)) является повышенным на 7 день в группах T02 и T04 по сравнению с контролем и сохраняется повышенным на протяжении всего исследования (P 0,05). По состоянию на 14 и 21 дни, средние значения уровня содержания антител против лейкотоксина в группе Т04 значительно выше, чем в группе Т02 (P 0,05). Хотя средние значения уровней содержания антител оставались в группе Т04 более высокими по сравнению с группой Т02 на протяжении всего оставшегося периода исследования, их разность уменьшается. Уровень содержания антител против лейкотоксина в группе T01 сохраняется относительно неизменным в течение исследования. Уровни содержания антител в группе T03 незначительно отличаются от уровней содержания в группе Т01 в любой из дней (P 0,05).

Анализируют также содержание антител против цельных клеток (таблица 3 и фиг.2). На 7 и 14 дни уровни содержания антител против цельных клеток в группах T02 и T04 в нг IgG значительно выше, чем в группе T01 (P 0,05). Средние значения уровней содержания антител для группы T04 сохраняются значительно более высокими, чем в группе T01 в течение остального периода исследования (P 0,05). На 14 и 21 день средние значения уровней содержания антител в группе T04 значительно выше, чем в группе T02 (P 0,05). Как видно и для уровней содержания антител против лейкотоксина, разность между уровнями содержания антител против цельных клеток в группах T02 и T04 в дальнейшем снижается. Средние уровни содержания антител в группе T01 в процессе исследования незначительно повышаются. Уровни содержания антител против цельных клеток в группе Т03 незначительно отличаются от уровней в группе Т01 в любой из дней отбора образцов (P 0,05).

Таблица 2 Среднее геометрическое титра антител против лейкотоксина для каждой группы
Группа	День исследования
	0	7	14	21	28
Т01	0,122 a	0,141a	0,127a	0,263a	0,201 a
Т02	0,131a	0,573 b	0,892b	0,778b	0,701b
Т03	0,101a	0,263ab	0,388 a	0,468ab	0,293a
Т04	0,114a	0,479b	1,542 c	1,382c	1,078b

Средние значения в колонках с различными верхними индексами значительно отличаются (P 0,05).

Таблица 3 Средние геометрические значения титров антитела против цельных клеток для каждой группы
Группа	День исследования
	0	7	14	21	28
Т01	0,149 a	0,154a	0,164a	0,222a	0,249 a
Т02	0,125a	0,399 b	0,562b	0,541a	0,524ab
Т03	0,158a	0,262ab	0,320 ab	0,382a	0,208a
Т04	0,151a	0,413b	1,236 c	1,180b	0,907b

Средние значения в колонках с различными верхними индексами значительно отличаются (P 0,05).

Пример 3

Клинические наблюдения после антигенной стимуляции

Для стимуляции вакциной 5 мл вирулентной культуры M. haemolytica (линия Oklahoma State) вводятся транстораккальной инъекцией в правые и левые каудальные доли легкого каждого теленка (10 мл культуры на теленка) в 34 день исследования. Посевной материал содержит приблизительно 5,6×10⁸ CFU/мл.

Клинические показатели (приложение 2) определяют до стимуляции на 33 день и один раз в день в течение последующего исследования. Эти показатели отражают оценку состояния и напряженности. Средние количества дней после стимуляции по меньшей мере с одним клиническим показанием >0, полученные с использованием метода наименьших квадратов и выраженные в процентах, представлены в таблице 4. Средние количества дней в процентах для различных групп по состоянию не различаются в группах, хотя в группе Т04 этот показатель самый низкий (P>0,05). Процент дней с показателями затрудненного дыхания > 0 был значительно меньше в группе T04 по сравнению с другими группами (P 0,05).

Таблица 4 Средние значения количества дней с клиническим показателем >0, полученные методом наименьших квадратов с использованием клинических признаков болезни
Группа	% дней с клиническими признаками болезни
	Состояние	Затруднение дыхания
Т01	63,1	48,2а
Т02	56,4	45,8 а
Т03	52,7	48,9а
Т04	41,6	19,4b

Средние значения в колонке с различными верхними индексами значительно отличаются (P 0,05).

Средние значения случаев наличия легочной консолидации в процентном выражении для каждой группы представлены в таблице 5. Одно животное в группе Т01 погибает сразу после стимуляции вследствие легочного кровоизлияния в результате стимулирующей инъекции; поэтому его легочная консолидация исключена из анализа. Одно животное в группе Т03 умирает на 37 день в результате тяжелой пневмонии, но его вскрывают, и данные по его легким анализируют наряду с данными, полученными на других животных. Значительных различий между группами нет (P 0,05). В группах Т02 и Т04 имеет место несколько меньшее количество патологических изменений легких по сравнению с контролем, в то время как в группе Т03 выявлено немного большее количество патологий легких.

Таблица 5 Полученные методом наименьших квадратов средние значения количеств патологических изменений легких
Группа	N	Среднее количество патологических изменений в легких в процентах, полученное методом наименьших квадратов	Интервал значений процента патологии легких
Т01	9	12,8	3,6-30,0
Т02	10	10,0	4,6-32,8
Т03	10	21,2	8,8-61,8
Т04	10	9,1	2,5-31,5

После стимуляции у всех животных проявлялись типичные симптомы респираторного заболевания. В группах, принимавших полную вакцину или антиген плюс тулатромицин, наблюдалось меньшее количество патологических изменений в легких по сравнению с контрольной группой. В группе, принимавшей только антиген без адъюванта, наблюдалось большее количество патологий легких по сравнению с другими группами. Тулатромицин, как выяснилось, эффективно заменяет адъювант в вакцине One Shot®, что свидетельствует об адъювантном действии булатромицина.

Таблица 6 Приложение
Клинический признак	Клинические показатели
Состояние	0 = нормальное состояние. Живой, активный, стоит, двигается и реагирует на стимуляцию быстро и стабильно, проявляя непрерывный интерес к окружающему. 1 = Слабое заболевание. Вялый и сонный, стоит, двигается и реагируют на стимуляцию медленно и нестабильно, голову держит низко, иногда ложится. 2 = Умеренное заболевание. Часто стремится лечь, вялый и сонный, стоит, движется и реагирует на стимуляцию неохотно и нестабильно, голову держит низко, крутит головой, проявляет слабый интерес к окружающему. 3 = Тяжелое заболевание. Лежит и слабо реагирует или не реагирует на стимуляцию или стоит/двигается с трудом. Животное должно быть безболезненно умерщвлено по соображениям гуманности.
Затрудненность дыхания	0 = Нормальное дыхание. Дыхание поверхностное и главным образом грудное (плохо заметно на расстоянии приблизительно 10 футов). 1 = Слабо затруднено. Дыхание глубокое и в значительной степени патологическое (что легко заметить на расстоянии примерно 10 футов). 2 = Заметно затруднено . Дыхание затруднено и полностью патологическое. 3 = Тяжелое. Дыхание очень затруднено или животное дышит с хрипами. Животное должно быть безболезненно умерщвлено по соображениям гуманности.

Заключение

Как показано в примерах 1-4, группа Т04 демонстрирует хорошие, если и не лучшие, показатели по сравнению с группой Т02, о чем свидетельствуют более высокая продукция антител, лучшее состояние и показатели затрудненности дыхания и меньшее количество патологических изменений в легких - которые являются показателями иммунного ответа на антиген. Дополнительное подтверждение свойств адъюванта у тулатромицина иллюстрируется сравнением результатов группы Т04 с результатами группы Т03. В результатах групп Т01 и Т03 можно найти еще одно подтверждение по определению продукции антител, которые показывают и согласно которым в течение одного и того же периода (по сравнению с группами Т02 и Т04) имеет место небольшое изменение продукции антител или же оно отсутствует.

Пример 5

Получение азалида

Одну тысячу литров фармацевтической композиции для инъекций, содержащей 100 миллиграммов равновесной смеси соединений формулы I и II в 1 мл композиции, получают следующим образом.

Приблизительно 400 литров воды для инъекций (с маркировкой "Фармакопея США (USP)/Фармакопея Европы(Ph.Eur.)) загружают в реактор из нержавеющей стали. Азот (с маркировкой (NF)/Ph.Eur. (Национальный фармакологический справочник США) барботируют через воду, и начинают перемешивание. Азот (с маркировкой NF/Ph. Eur.) также используют в качестве инертной атмосферы для снижения воздействия кислорода на раствор в реакторе в процессе получения. Раствор перемешивают в процессе получения, за исключением стадии отбора проб и проверки объема. В воду добавляют 19,2 кг безводной лимонной кислоты (с маркировкой USP/Ph. Eur.). Полученную смесь перемешивают до растворения кислоты. Добавляют 7,8 кг концентрированной соляной кислоты (с маркировкой NF/Ph. Eur.) и диспергируют ее в смеси. К полученному раствору добавляют 103,0 кг смеси, содержащей приблизительно 97% соединения I и соединения II в соотношении 99:1 и приблизительно 3% одной или нескольких примесей, и полученную смесь перемешивают примерно в течение одного часа. Общее количество соединения I и соединения II, добавленное к раствору, составляет 100,0 кг. Препарат перемешивают до полного растворения смеси соединения I, соединения II и одной или нескольких примесей. Перемешивание продолжают примерно в течение одного часа после полного растворения. Значение рН полученного раствора доводят до 7,0±0,3 путем добавления небольшими порциями 0,25 кг концентрированной соляной кислоты (с маркировкой NF/Ph.Eur.). Получение равновесной смеси соединения I и соединения II проводят при повышенной температуре. Температуру раствора поднимают до 60±3°С примерно в течение 15 минут. Раствор выдерживают при 60±3°С примерно в течение 120 минут. На завершающей стадии этого периода соотношение соединения I и соединения II составляет приблизительно 90:10, как определено ВЭЖХ. Раствор после этого охлаждают приблизительно до 25°С примерно в течение 45 минут. К полученному раствору добавляют 500 кг пропиленгликоля (с маркировкой USP/Ph.Eur.) и диспергируют его в растворе. Через раствор барботируют азот (с маркировкой NF/Ph.Eur.). К раствору добавляют 5,0 кг монотиоглицерина (с маркировкой NF) и диспергируют его в растворе. К смеси добавляют 10,5 кг концентрированной соляной кислоты (с маркировкой NF/Ph.Eur.) и диспергируют. Значение рН раствора доводят до 5,4±0,3, добавляя небольшими порциями приблизительно 0,85 кг концентрированной соляной кислоты (с маркировкой NF/Ph.Eur.). Объем полученного препарата доводят до 1000 литров, добавляя необходимое для этого количество воды для инъекции (с маркировкой USP/Ph.Eur.). Полученная композиция содержит 100 миллиграммов равновесной смеси соединения I и соединения II на мл композиции, 500 миллиграммов пропиленгликоля на мл композиции, 5,0 миллиграммов монотиоглицерина на мл композиции и 19,2 миллиграммов (0,100 миллимоля) лимонной кислоты на мл композиции.

Композицию фильтруют через микрофильтр с размером пор 0,2 микрона Millipore Milligard (Millipore Corporation, Billerica, Massachusetts, USA) в емкость из нержавеющей стали и выдерживают в ней приблизительно в течение 60 часов. Композицию стерилизуют, фильтруя через стерилизационные фильтры с размером пор 0,2 микрона Millipore Durapore (Millipore SA, Molsheim France). Стерилизационные фильтры предварительно стерилизуют термическим автоклавированием в течение 45 минут при 122°С. Фильтры проверяют на целостность с использованием методов определения начала кипения и диффузии перед их стерилизацией и после использования для фильтрования раствора. Серологические емкости объемом 20 мл, изготовленные из флинта типа I (Saint Gobain des Jonqueres, Mers les Bains, France), стерилизуют и подвергают депирогенированию в туннеле сухого нагрева с установленной температурой нагрева 350°С. Минимальное время экспозиции составляет 31 минуту. Пробки из хлорбутилового полимера диаметром 20 мм с покрытием из смолы Daikyo Fluoro Resin-D (Daikyo-Seiko, Tokyo, Japan) подвергают депирогенированию, промывают и стерилизуют в автоклаве влажного нагрева в течение 60 минут при 124°С. Каждую из 1444 20-мл емкостей заполняют в стерильных условиях 20,6 мл полученной композиции. Каждая емкость содержит 2,06 г равновесной смеси соединений I и II. Верхнее свободное пространство в емкостях быстро продувают азотом, и емкости герметично закрывают пробками и затем алюминиевыми покрытиями (Helvoet Pharma, Alken, Belgium). Серологические емкости из флинта I типа объемом 500 мл (Saint Gobain des Jonqueres, Mers les Bains, France) стерилизуют и подвергают депирогенированию в туннеле сухого нагрева с установленной температурой 350°С. Минимальное время экспозиции составляет 38 минут. Пробки из хлорбутилового полимера диаметром 32 мм с покрытием из смолы Daikyo Fluoro Resin-D (Daikyo-Seiko, Tokyo, Japan) подвергают депирогенированию, промывают и стерилизуют в автоклаве с влажным нагревом в течение 60 минут при 124°С. Каждую из 1537 500-мл емкостей наполняют в стерильных условиях 510 мл полученной композиции. Каждая емкость содержит 51 г равновесной смеси соединений I и II. Верхнее свободное пространство в пробирках быстро продувают азотом и пробирки герметично закрывают пробками и подходящим алюминиевыми покрытиями (Helvoet Pharma, Alken, Belgium).

Дополнительные противомикробные компоненты

В дополнение к примерам, представленным выше, в качестве противомикробного компонента согласно изобретению может применяться большое количество других противомикробных средств, которые конкретно описаны ниже. Вводимые количества и продолжительность введения средств, представленных ниже, может быть легко определена. Противомикробные компоненты с эффективностью краткого действия обычно должны будут приниматься более часто и в течение более продолжительного периода. Противомикробные компоненты с более продолжительным полупериодом жизни могут вводиться реже. Интервал дозировки, представленный ниже для животных и человека, будет обеспечивать контроль относительно эффективной дозы адъюванта. В данное описание включены как грамположительные, так и грамотрицательные антибиотики.

Противомикробные средства обычно применяются для животных, отличных от человека.

Таблица 7 Перечень пенициллинов:
Лекарственное средство	Доза (МЕд./кг или мг/кг)	Способ введения	Интервал (час.)
Пенициллин G - натриевая соль-водный	15000-20000 МЕд./кг	в/м, в/в	6-8
Прокаин-пенициллин G	25000 МЕд./кг	в/м	24
Бензатин-пенициллин	40000 МЕд./кг	в/м	72
Пенициллин V	10 мг/кг	РО (перорально)	6-8
Клоксациллин, диклоксациллин, метициллин, оксациллин	15-25 мг/кг	РО	6-8
Ампициллин-натрий	10-20 мг/кг	в/м, в/в	6-8
Ампициллин (гетациллинг)	10-20 мг/кг	РО	8
Амоксициллин	10-20 мг/кг	РО	8-12
Амоксициллин	10 мг/кг	в/м (п/к)	12
Амоксициллин длительного действия	15 мг/кг	в/м	48
Амоксициллина тригидрат	10-20 мг/кг	в/м	12
Пивампициллин	25 мг/кг	РО	12
Карбенициллин-инданил-натрий	33 мг/кг	РО	6-8
Карбенициллин	33 мг/кг	в/м, в/в	6-8
Пиперациллин	50 мг/кг	в/в (в/м)	8
Тикарциллин	25-40 мг/кг	в/в (в/м, п/к)	8
Уреидопенициллин Трикарциллин Дзлоциллин Темоциллин Нафциллин Аминобензилпенициллин Мециллинам Карбоксипенициллин

Таблица 8 Бэта-лактамовые антибиотики Цефалоспорины-Цефалоспорины, парентеральная дозировка (в/в, в/м, п/к)
Лекарственное средство	Доза (мг/кг)		Виды животных		Способ введения		Интервал (час.)
Цефрадин	22		Собаки, кошки				6-8
Цефалотин	20-40		Собаки, кошки				6-8
Цефазолин	15-30		Собаки, кошки				12
Цефапирин	20		Лошади				8
Цефазолин	15-20		Лошади				8
Цефалексин	10		Лошади				8-12
Цефазолин	15-20		Крупн.рог. скот, овцы				12
Цефапирин	10		Крупн.рог. скот, овцы				8-12
Цефалоспорины для перорального введения
Цефадроксил	22		Собаки, кошки				12
Другие формы	10-15		Собаки, кошки				8
Цефадроксил	25		Телята (молочные)				12
Цефаклор	3,5		Телята (молочные)				12
Цефадрин	7		Телята (молочные)				12
Цефадроксил	20-40		Лошади				8
Другие цефалоспорины для парентерального введения
Цефотаксим	20-40		Собаки, кошки		в/м		8
Цефотаксим	20-40		Собаки, кошки		п/к		12
Цефоперазон	20-25		Собаки, кошки		в/в, в/м		6-8
Цефокситин	15-30		Собаки, кошки		в/м		6-8
Цефтиофур	2,2		Собаки, кошки		в/м		24
Цефтизоксим	25-40		Собаки, кошки		в/в, в/м		8-12
Цефтриаксон	25		Собаки, кошки		в/в, в/м		12-24
Цефуроксим аксетил	10-15		Собаки, кошки		РО		8-12
Цефуроксим	10-15		Собаки, кошки		в/в		8-12
Цефтиофур	1-2,2		Крупн.рог. скот		в/м		24
Цефквином	1		Крупн.рог. скот		в/м		24
Цефотаксим	20-40		Козы		в/в, в/м		12
Цефотаксим	20-30		Лошади		в/в, в/м		6-8
Цефокситин	20		Лошади		в/в, в/м		8
Цефтиофур	2,2		Лошади		в/м		12-24
Цефтриаксон	25		Лошади		в/в, в/м		12-24
Цефтиофур	2,2		Свиньи		в/м		24
Противопсевдомональные цефалоспорины для парентерального введения
Цефоперазон	30		Собаки, кошки		в/м		6-8
Цефтазидим	25-50		Собаки, кошки		в/м		8-12
Цефоперазон	30		Крупн.рог. скот		в/м		6-8
Цефтазидим	20-40		Крупн.рог. скот		в/м		12-24
Цефоперазон	30		Лошади (профилактика)		в/м		6-8
Цефтазидим	25-50		Лошади (профилактика)		в/м		8-12
Пенициллины, усиленные клавуланиновой кислотой, сулбактамом, тазобактамом
Клавуланат-амоксициллин		12,5-20		Собаки, кошки		РО		8-12
		10		Собаки, кошки		п/к		8
		7		Крупн.рог. скот		в/м		12-24
		5-10		Молочн.детеныши		РО		12
		8,75		Овцы		в/м		12-24
Клавуланат-тикарциллин		40-50		Собаки, кошки		в/в		6-8
		50		Лошади		в/в		6
Сулбактам-ампициллин		10		Крупн.рог. скот		в/м		24
Пиперациллин-тазобактам		4		Собаки, кошки		в/в		6

Таблица 9 Аминогликозиды и аминоциклитолы
Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Виды животных	Способ введения	Интервал (час)
Амикацин b	21	Лошади	в/м (в/в)b	24
	15-20	Собаки, кошки	в/м, п/к	24
Апрамицин	20	Кишечная инфекция	РО	12
	20	Крупн.рог. скот, свиньи	в/м	24
Гентамицин	7-10		в/м, п/к (в/в)	24
Канамицин	10	Кишечная инфекция	РО	6
	18		в/м, п/к	24
Неомицин	10	Кишечная инфекция	РО	6
Спектомицин	20-40	Кишечная инфекция	РО	12
	20-30	Телята, поросята	в/м, п/к	12
Стрептомицин	20		в/м	24
Тобрамицин	6		в/м, п/к (в/в)	24

Таблица 10 Линкозамиды, плеуромутилиум, хлорамфениколы и макролиды
Линкозамиды	Линкомицин, клиндамицин и пирлимицин
Плеуромутилины	Тиамулин, валнемулин, хлорамфеникол, тиафеникол и флорфеникал
Макролиды	Этитромицин, тилазин, спирамицин, тилмикозин, рокситромицин, азитромицин, кларитромицин, кетолид и тулатромицин, также описанный выше

Таблица 11 Тетрациклины для животных
Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Виды животных	Способ введения	Интервал (час)
Татрациклин-окситетрациклин	10	Собаки, кошки	в/в, в/м	12
Доксициклин	5-10		в/в, не в/м	12
Тетрациклин	10	Лошади	в/в	12
Окситетрациклин	3-5		в/в	12
Тетрациклин-окситетрациклин	10	Жвачные	в/в, в/м	12-24
Тетрациклин длительного действия	20		в/м	48
Тетрациклин-окситетрациклин	10-20	поросята	в/м	12-24
Тетрациклин длительного действия	20		в/м	48
Тетрациклин-HCl	15	Свиньи	200-800 м.д. (ppm)	6-8
Окситетрациклин-HCl	20			8-12
Миноциклин-HCl				12
Доксициклин-гиклат	5	Свиньи	200-250 м.д. (ppm)	12

Таблица 12 Сульфонамиды для животных
Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Виды животных	Способ введения	Интервал (час)
Сульфадиазин краткого действия, сульфаметазин, трисульфапиримидин (тройные-сульфапроизводные)	50-60		в/в, РО	12
Сульфаметоксазол	50		РО	12
средней продолжительности действия	27,5		РО, в/в, в/м, п/к	24
сульфадиметоксин	137,5		РО	96
(поддерживаемого высвобождения, крупн.рог.скот), сульфадиазин	50	Крупн.рог. скот	РО, в/в	12
Сульфизоксазол фталилсульфатиазол	50 100		РО РО (кишечноактивн.)	8 12
Специальное применение салицилазосульфапиридин	25	РО		12
Сульфадиазин серебра		Местное

Таблица 13 Фторхинолоны
Энрофлоксацин	Собаки, кошки, куры, индейки, скот, лошади, поросята
Орбифлоксацин	Собаки, кошки
Дифлоксацин	Собаки, куры, индейки
Данофлоксацин	Крупный рогатый скот, поросята
Марбофлоксацин	Собаки, кошки, поросята, крупный рогатый скот
Сарафлоксацин	Куры, индейки

Противомикробные средства, обычно вводимые людям

Таблица 14

Авторы согласно изобретению конкретно заявляют амикацин, гентамицин, спестиномицин, тобрамицин, имипенем, меропенем, цефадроксил, цефазолин, цефалексин, цефаклор, цефотетан, цефокситин, цефпрозил, цефуроксим, лоракарбеф, цефдинир, цефиксим, цефоперазон, цефотаксим, цефподоксим, цефтазидим, цефтибутен, цефтозоксим, цефтриаксон, цефепим, азитромицин, кларитромицин, диритромицин, пенициллин G, клоксациллин, диклоксациллин, нафциллин, оксациллин, амоксициллин, амоксициллин, ампициллин, мезлоциллин, пиперациллин, налидиксиновая кислота, ципрофлоксацин, эноксацин, ломефлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, левофлоксацин, спарфлоксацин, алатрофлоксацин, катифлоксацин, моксифлоксацин, триметоприм, сульфисоксазол, сульфамтоксазол, доксициклин, миноциклин, тетрациклин, азтреонам, хлорамфеникол, клиндамицин, квинупристин, фосфомицин, метронидазол, нитрофурантоин, рифампин, триметоприм и ванкомицин. Все эти вещества известны. Они могут быть коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии с данными, приведенными в публикациях PHYSICIANS' DESK REFERENCE, the 53 ^nd Edition (1999) и US FDA's Orange book.

Термин "грамположительный антибиотик" относится к бактериицидному средству, активному в отношении грамположительных бактериальных организмов. Термин "грамотрицательный антибиотик" относится к бактерицидному средству, активному в отношении грамотрицательных бактериальных организмов.

Таблица 15 Грамположительные антибиотики, которые могут применяться в комбинированной терапии с соединением формулы I
Лекарственные средства	Низкая доза	Высокая доза	Стандартная доза
АМИНОГЛИКОЗИДЫ
Амикацин			15 мг/кг/день
Гентамицин	1 мг/кг/день	5 мг/кг/день
	0,5 мг/кг	2,5 мг/кг
Спектиномицин			40 мг/кг
Тобрамицин	1 мг/кг/день	5 мг/кг/день
	0,5 мг/кг/день	5 мг/кг/день
ПЕНЕМЫ
Имипенем/циластатин	62,5 мг	1 г
	6,25 мг/кг	25 мг/кг
Меропенем			40 мг/кг
	0,5 мг/кг	2,5 мг/кг
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 1-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефадроксил	0,25 г/день	2 г/день
			30 мг/кг/день
Цефазолин	62,5 мг	1,5 г
	6,25 мг/кг/день	100 мг/кг/день
Цефалексин	62,5 мг	500 мг
	6,25 мг/кг/день	50 мг/кг/день
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 2-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефаклор	62,5 мг	500 мг
	5 мг/кг/день	40 мг/кг/день
Цефотетан	0,125 г	3 г
	10 мг/кг/день	80 мг/кг/день
Цефокситин	0,25 г	3 г
	20 мг/кг/день	160 мг/кг/день
Цефпрозил	62,5 мг	500 мг
	1,87 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
Цефуроксим	187,5 мг	3 г
	31,25 мг	500 мг
	12,5 мг/кг/день	150 мг/кг/день
	31,25 мг/кг/день	500 мг/кг/день
Лоракарбеф	50 мг	400 мг
	3,75 мг/кг/день	500 мг/кг/день
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефдинир	75 мг		600 мг
Цефиксим	50 мг		400 мг
Цефоперазон	0,5 г/день	12 г/день
	25 мг/кг/день	150 мг/кг/день
Цефотаксим	0,25 г	2 г
	12,5 мг/кг/доза	300 мг/кг/день
Цефподоксим	25 мг	400 мг	10 мг/кг/день
Цефтазидим	62,5 мг	2 г q8
	25 мг/кг/день	150 мг/кг/день
Цефтибутен	2,25 мг/кг	400 мг	400 мг
Цефтозоксим	0,25 г	4 г
	12,5 мг/кг/день	200 мг/кг/день
Цефтриаксон	31,25 мг	2 г
	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефепим	0,125 г	2 г
	12,5 мг/кг	50 мг/кг q8
МАКРОЛИДЫ
Азитромицин	62,5 мг	500 мг
	62,5 мг	500 мг
Кларитромицин	62,5 мг	500 мг	7,5 мг/кг/день
Диритромицин			500 мг
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 1-го ПОКОЛЕНИЯ
Пенициллин G	2 миллиона единиц/день	30 миллионов единиц/день
	2000 единиц/кг/день	400000 единиц/кг/день
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 2-го ПОКОЛЕНИЯ
Клоксациллин	62,5 мг	500 мг
	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
Диклоксациллин	31,25мг	500 мг
	3,125 мг/кг/день	100 мг/кг/день
Нафциллин	125 мг	2 г
	2,5 мг/кг	25 мг/кг
Оксациллин	62,5 мг	2 г
	125 мг	1000 мг
	25 мг/кг/день	200 мг/кг/день
	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Амоксициллин	62,5 мг	875 мг
	5 мг/кг/день	45 мг/кг
Амоксициллин/клавуланиновая кислота	62,5 мг	875 мг
	6,25 мг/кг/день	45 мг/кг/день
Ампициллин	62,5 мг	12 г/день q4
	6,25 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Ампициллин/сулбактам	0,375 г	3 г	300 мг/кг/день
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Мезлоциллин	0,375 г	4 г	75 мг/кг
Пиперациллин	1,5 г/день	24 г день
	25 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Пиперациллин/тазобактам			240 мг/кг/день
Тикарциллин	0,25 г	4г
	12,5 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Тикарциллин/клавуланат	50 мг/кг/день	300 мг/кг/день
	0,775 г	3,1 г
ХИНОЛОНЫ 1-го ПОКОЛЕНИЯ
Налидиксиновая кислота			55 мг/кг/день
ХИНОЛОНЫ 2-го ПОКОЛЕНИЯ
Ципрофлоксацин	50 мг	750 мг
	2,5 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
	62,5 мг	750 мг
	2,5 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
Эноксацин	50 мг	400 мг
Ломефлоксацин			400 мг
Норфлоксацин			400 мг
Офлоксацин	50 мг	400 мг
ХИНОЛОНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Левофлоксацин	62,5 мг	750 мг
Спарфлоксацин	50 мг	400 мг
ХИНОЛОНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Алатрофлоксацин	50 мг	300 мг
Гатифлоксацин	50 мг	400 мг
Моксифлоксацин			400 мг
СУЛЬФАНИЛАМИДЫ
Триметоприм/сульфаметоксазол	15 мг	800 мг
	3,75 мг/день	150 мг/день
Сульфизоксазол	18,75 мг	150 мг
Сульфаметоксазол	0,25 г	2 г
ТЕТРАЦИКЛИНЫ
Доксициклин	5 мг	100 мг
Миноциклин	25 мг	200 мг
Тетрациклин	62,5 мг	500 мг
ПРОЧИЕ
Хлорамфеникол	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
Клиндамицин	150 мг	900 мг
	37,5 мг	450 мг
	5 мг/кг/день	40 мг/кг/день
	2 мг/кг/день	25 мг/кг/день
Квинупристин/далфопристин	1,875 мг/кг	7,5 мг/кг q8
Фосфомицин			3 г
Нитрофурантоин	12,5 мг	100 мг
	1,25 мг/кг/день	7 мг/кг/день
Рифампин	2,5 мг/кг	600 мг/кг
	2,5 мг/кг	600 мг/кг
Триметоприм	25 мг	200 мг	10 мг/кг/день
Ванкомицин			l г
	2,5 мг/кг q6	15 мг/кг q8

Для борьбы с инфекционными заболевания, вызываемыми грамположительными и грамотрицательными организмами, соединения формулы I могут применяться в сочетании с другими антибиотиками, которые активны в отношении грамотрицательных организмов. Примеры таких грамотрицательных антибиотиков представлены в таблице 2. Некоторые из грамотрицательных антибиотиков могут также обладать активностью в отношении грамположительных организмов.

Таблица 16 Грамотрицательные антибиотики
Лекарственные средства	Низкая доза	Высокая доза	Стандартная доза
АМИНОГЛИКОЗИДЫ
Амикацин			15 мг/кг/день
Гентамицин	0,75 мг/кг/день	5 мг/кг/день
	0,5 мг/кг	2,5 мг/кг
Спектиномицин			40 мг/кг
Тобрамицин	0,75 мг/кг/день	5 мг/кг/день
	0,5 мг/кг/день	5 мг/кг/день
ПЕНЕМЫ
Имипенем/циластатин	62,5 мг	1 г
	6,25 мг/кг	25 мг/кг
Меропенем			40 мг/кг
	0,5 мг/кг	2,5 мг/кг
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 2-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефаклор	62,5 мг	500 мг
	5 мг/кг/день	40 мг/кг/день
Цефотетан	0,125 г	3 г
	10 мг/кг/день	80 мг/кг/день
Цефокситин	0,25 г	3 г
	20 мг/кг/день	160 мг/кг/день
Цефпрозил	62,5 мг	500 мг
	1,875 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
Цефуроксим	187,5мг	38
	31,25мг	500 мг
	12,5 мг/кг/день	150 мг/кг/день
	31,25 мг/кг/день	500 мг/кг/день
Лоракарбеф	50 мг	400 мг
	3,75 мг/кг/день	500 мг/кг/день
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефдинир	75 мг		600 мг qd
Цефиксим	50 мг		400 мг
Цефоперазон	0,25 г/день	12 г/день
	25 мг/кг/день	150 мг/кг/день
Цефотаксим	0,25 г	2 г
	12,5 мг/кг/доза	300 мг/кг/день
Цефподоксим	25 мг	400 мг	10 мг/кг/день
	62,5 мг	2 г q8
Цефтазидим	25 мг/кг/день	150 мг/кг/день

2,25 мг/кг

400 мг

400 мг

Цефтибутен	0,25 г	4 г
Цефтозоксим	12,5 мг/кг/день	200 мг/кг/день
	31,25мг	2 г
Цефтриаксон	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
ЦЕФАЛОСПОРИНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Цефепим	0,125 г	2 г
	12,5 мг/кг	50 мг/кг q8
МАКРОЛИДЫ
Азитромицин	62,5 мг	500 мг
	62,5 мг	500 мг
Кларитромицин	62,5 мг	500 мг	7,5 мг/кг/день
Диритромицин			500 мг
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Амоксициллин	62,5 мг	875 мг
	5 мг/кг/день	45мг/кг
Амоксициллин/клавулановая кислота	62,5 мг	875 мг
	6,25 мг/кг/день	45 мг/кг/день
Ампициллин	62,5 мг	12 г/день q4
	6,25 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Ампициллин/сулбактам	0,375 г	3 г	300 мг/кг/день
ПЕНИЦИЛЛИНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Мезлоциллин	0,375 г	4 г	75 мг/кг
Пиперациллин	1,5 г/день	24 г день
	25 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Пиперациллин/тазобактам			240 мг/кг/день
Тикарциллин	0,25 г	4 г
	12,5 мг/кг/день	300 мг/кг/день
Тикарциллин/клавуланат	50 мг/кг/день	300 мг/кг/день
	0,775 г	3,1 г
ХИНОЛОНЫ 1-го ПОКОЛЕНИЯ
Налидиксиновая кислота			55 мг/кг/день
ХИНОЛОНЫ 2-го ПОКОЛЕНИЯ
Ципрофлоксацин	50 мг	750 мг
	2,5 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
	62,5 мг	750 мг
	2,5 мг/кг/доза	15 мг/кг/доза
Эноксацин	50 мг	400 мг
Ломефлоксацин			400 мг
Норфлоксацин			400 мг
Офлоксацин	50 мг	400 мг
ХИНОЛОНЫ 3-го ПОКОЛЕНИЯ
Левофлоксацин	62,5 мг	750 мг
Спарфлоксацин	50 мг	400 мг
ХИНОЛОНЫ 4-го ПОКОЛЕНИЯ
Алатрофлоксацин	50 мг	300 мг
Гатифлоксацин	50 мг	400 мг
Моксифлоксацин			400 мг
СУЛЬФАНИЛАМИДЫ
Триметоприм/сульфаметоксазол	15/200 мг
	3,75 мг/день	150 мг/день
Сульфизоксазол	18,75 мг	150 мг
Сульфаметоксазол	0,25 г	2 г
ТЕТРАЦИКЛИНЫ
Доксициклин	5 мг	100 мг
Миноциклин	25 мг	200 мг
Тетрациклин	62,5 мг	500 мг
ПРОЧИЕ
Хлорамфеникол	12,5 мг/кг/день	100 мг/кг/день
Азтреонам	125 мг	2 г
	37,5 мг	450 мг
	5 мг/кг/день	40 мг/кг/день
	2 мг/кг/день	25 мг/кг/день
Фосфомицин			3 г
Нитрофурантоин	12,5 мг	100 мг
	1,25 мг/кг/день	7 мг/кг/день
	2,5 мг/кг	600 мг/кг
Триметоприм	25 мг	200 мг	10 мг/кг/день

В таблицах 15 и 16 термин "низкая доза" означает рекомендованную более низкую дозировку для комбинированной терапии согласно изобретению. Она может дополнительно снижаться в зависимости от потребностей каждого субъекта, подлежащего лечению, и тяжести бактериального заражения. Самая низка дозировка может составлять 0,1 мг при объединении с соединением формулы I согласно изобретению. Термин "высокая доза" означает рекомендованную наивысшую дозировку в комбинированной терапии. Она может изменяться после этого в соответствии с FDA-стандартном США. Термин "стандартная доза" означает рекомендованную стандартную дозировку для комбинированной терапии согласно изобретению. Она может быть даже занижена, в зависимости от потребностей каждого субъекта, подлежащего лечению, и тяжести бактериальной инфекции. Конкретный антибиотик может иметь более одного интервала рекомендованных дозировок.

Все публикации, включая, без ограничения, изданные патенты, заявки на патенты и статьи в журналах, цитируемые в данном описании, полностью включены в настоящее описание в виде ссылки.

Хотя изобретение было описано выше со ссылкой на раскрытые варианты осуществления, специалисту будет понятно, что подробные эксперименты являются только иллюстративными примерами согласно изобретению. Следует иметь в виду, что возможны различные модификации настоящего изобретения, не выходящие за рамки объема, охватываемого настоящим изобретением. Соответственно, изобретение ограничено только представленной ниже формулой изобретения.