способ выбора лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи

Формула изобретения

Способ выбора лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи, включающий исследование биопсийного материала, отличающийся тем, что проводят иммуногистохимическое исследование, при этом определяют локализацию экспрессии Е-кадгерина и при преобладании мембранного или мембранно-редуцированного типа экспрессии Е-кадгерина в клетках опухоли в качестве способа лечения рекомендуют криодеструкцию, при преобладании цитоплазматического типа экспрессии Е-кадгерина, либо полного отсутствия экспрессии Е-кадгерина, в качестве способа лечения рекомендуют внутритканевую интерферонотерапию с последующей криодеструкцией.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматоонкологии.

Известен способ выбора метода лечения базальноклеточного рака кожи, включающий патогистологическое исследование биопсийного материала, определение гистологического типа опухоли, на основании которого рекомендуют проводить криодеструкцию базалиомы или иной метод лечения (Kuflik E.G., Gage A.A. Cryosurgical treatment for skin cancer. New York: Igaku-Shoin, 1990, c.243-249).

Недостатком этого способа является то, что при выборе метода лечения не устанавливается иммунофенотип клеток, определяющий их способность к инвазии, которая характеризует подвижность клеток, и без учета данной характеристики выбор лечения может быть неадекватным, что ведет к рецидивам.

Наиболее близким является способ выбора лечения базальноклеточного рака кожи, включающий исследование биопсийного материала базалиомы, создание клеточной модели данной опухоли, по которой определяют чувствительность клеток к цитостатику и выбор лечения корректируют по степени реакции на препарат (Давыдова И.Л., Молочков В.А., Васильев А.В., Воротеляк Е.А., Терских В.В. Применение культуры клеток базальноклеточного рака для выбора индивидуальной противоопухолевой терапии. Российский журнал кожных и венерических болезней, 1998, № 2, с.16-21).

Недостатком этого способа является его трудоемкость (необходимость выращивания клеточной модели для каждого конкретного больного), не учитывает индивидуальные особенности иммунофенотипа клеток, а следовательно, их инвазивную способность и агрессивность. Данное исследование сужает круг выбора методов лечения, т.к. применимо только для цитостатической терапии.

Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков за счет установления иммунофенотипа клеток конкретной опухоли, определения ее инвазивного потенциала и, в зависимости от полученных результатов, индивидуальный выбор соответствующего метода лечения.

Для этого в способе выбора лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи, включающем патоморфологическое исследование биопсийного материала, предложено дополнительно проводить иммуногистохимическое исследование. При этом определяют локализацию экспрессии Е-кадгерина и при преобладании мембранного или мембранно-редуцированного типа экспрессии Е-кадгерина в клетках опухоли в качестве способа лечения рекомендуют криодеструкцию, при преобладании цитоплазматического типа экспрессии Е-кадгерина либо полного отсутствия экспрессии Е-кадгерина в качестве способа лечения рекомендуют внутритканевую интерферонотерапию с последующей криодеструкцией.

Предлагаемый способ выбора метода лечения позволяет индивидуально подходить к назначению лечения с учетом инвазивной способности опухолевых клеток. При поверхностной форме базальноклеточного рака кожи имеются опухоли с высоким инвазивным потенциалом, проведение при подобных опухолях только криодеструкции недостаточно и может приводить к рецидивированию. Предлагаемый способ выбора метода лечения позволяет значительно повысить эффективность лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследование проводили в соответствии с методикой Taylor С.R., Cote R. и Sternberger L.A.

Для исследования биопсийный материал фиксировали в 10%-ном забуференном формалине (рН 7,2), проводили по батарее спиртов и ксилолов, заливали в парафин по стандартной методике. Использовали парафин с температурой плавления 54°С.

Затем с помощью одноразовых лезвий марки R35 готовили серийные парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм и наносили их на стекла с адгезивным покрытием (полилизиновые), депарафинировали по стандартному протоколу.

Далее срезы по 5 минут промывали в деионизированной дистиллированной воде и фосфатном буфере (рН 7,4). (Все использованные растворы готовили только на деионизированной воде).

Перед инкубацией с первичными антителами применяли метод восстановления антигенных детерминант ткани (по методике Shi S.R. и соавт.) с помощью предварительной обработки срезов, погруженных в цитратный буфер (рН 6,0) в микроволновой печи при мощности 690 Вт 2 раза по 5 минут.

Затем срезы охлаждались 20 минут при комнатной температуре, аккуратно подсушивались, и на них наносились первичные антитела к Е-кадгерину (Клон 36В5, Разведение 1:50, Novocastra). Антитела применяли в рабочих разведениях, а для усиления специфической реакции применялась более длительная инкубация с первичными антителами: 30 минут при комнатной температуре, затем 14-18 часов при 4°С.

Использовались соответствующие позитивные и негативные контроли - иммунные и неиммунные сыворотки.

Срезы тщательно отмывались в буфере, подсушивались, затем на них наносили на 30-40 мин комплекс En Vision (anti-mouse и anti-rabbit, фирмы DAKO, Дания) при комнатной температуре.

Срезы тщательно промывали в фосфатном буфере при рН 7,4-7,6, подсушивали вокруг, затем, для визуализации реакции, на них наносили раствор DAB+ (3, 3^r- диаминобензидин) (фирма DAKO), что позволяло получать специфическую коричневую окраску.

Интенсивность иммуногистохимической реакции в каждом препарате контролировалась под микроскопом: после достижения необходимой интенсивности окрашивания срезы отмывали в дистиллированной воде, а затем в течение 2-5 минут докрашивали гематоксилином Майера.

Затем их снова промывали и погружали в проточную воду, в которую, для получения щелочной среды, добавляли несколько капель нашатырного спирта.

После того как срезы приобретали голубой оттенок, стекла извлекались, обезвоживались в батарее спиртов и ксилолов по стандартной схеме, заключались в бальзам и исследовались под микроскопом.

Оценка экспрессии Е-кадгерина проводилась по следующим критериям:

- мембранный, или нормальный тип экспрессии - равномерное распределение иммунореактивности по всей клеточной мембране;

- мембранно-редуцированный тип экспрессии - распределение иммунореактивности только на отдельных участках клеточной мембраны;

- смешанный мембранно-цитоплазматический тип экспрессии - равномерная цитоплазматическая экспрессии в сочетании с мембранной;

- мелко- и крупногранулярный цитоплазматический - экспрессия Е-кадгерина в виде гранул, рассеянных в цитоплазме клеток;

- отсутствие экспрессии Е-кадгерина.

Характер экспрессии Е-кадгерина оценивался в 100 опухолевых клетках. Преобладающим считали тип или типы экспрессии, определяющиеся в 70% и более опухолевых клеток.

В случае преобладания мембранного или мембранно-редуцированного типа экспрессии Е-кадгерина в клетках поверхностной формы базальноклеточного рака кожи в качестве метода лечения предлагается криодеструкция. В случае преобладания цитоплазматического типа экспрессии Е-кадгерина либо полного отсутствия экспрессии Е-кадгерина в качестве метода лечения предлагается внутритканевая интерферонотерапия с последующей криодеструкцией.

Для подтверждения обоснованности выявленных критериев были проведены сравнительные исследования эффективности выбранной терапии у больных контрольной и исследуемой группы. В контрольную группу вошли 125 пациентов с поверхностной формой базальноклеточного рака кожи. Выбор терапии осуществлялся по патоморфологическому исследованию, без учета иммунофенотипических особенностей клеток. У данных пациентов в сроки наблюдения до 3-х лет отмечены рецидивы в 9,8% случаев. Исследуемая группа состояла из 25 больных, выбор лечения которым осуществлялся по предлагаемому способу. Отдаленные результаты лечения прослежены в течение 3 лет, рецидивов новообразования не отмечено.

Сравнение отдаленных результатов лечения больных основной и контрольных групп свидетельствует, что предлагаемый способ выбора метода лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи патогенетически обоснован и клинически высокоэффективен.

Сравнение отдаленных результатов лечения больных основной и контрольных групп свидетельствует, что предлагаемый способ выбора метода лечения поверхностной формы базальноклеточного рака кожи патогенетически обоснован и клинически высокоэффективен. Он позволяет выбирать индивидуальное лечение с учетом инвазивного потенциала клеток опухоли, позволяет проводить таргетную терапию, направленную на конкретную «мишень».

Пример 1.

Больной К., 62 лет. Поступил в отделение дерматовенерологии и дерматоонкологии с диагнозом базальноклеточный рак, поверхностная форма.

При осмотре на коже туловища определяется бляшка размером 1,8×1,5 см розового цвета с чешуйками на поверхности, по периферии бляшки определяется прерывистый валик, состоящий из отдельных узелков.

При патоморфологическом исследовании - базальноклеточный рак, поверхностно-мультицентрический тип. При иммуногистохимическом исследовании с антителами к Е-кадгерину определяется мембранный (70% клеток) и мембранно-редуцированный (30% клеток) тип экспрессии. Учитывая нормальную адгезивную способность клеток данной опухоли, в качестве метода лечения достаточно проведения криодеструкции.

Через год после лечения признаков рецидива не выявлено.

Пример 2.

Больной Ч., 59 лет. Поступил в отделение дерматовенерологии и дерматоонкологии с диагнозом базальноклеточный рак, поверхностная форма.

При осмотре на коже туловища определяется бляшка неправильной формы розового цвета размером 1,5×1,6 см. На поверхности очага наслоение корочек, по периферии определяется прерывистый валик, состоящий из отдельных узелков. При патоморфологическом исследовании - базальноклеточный рак, поверхностно-мультицентрический тип.

При иммуногистохимическом исследовании с антителами к Е-кадгерину во всех клетках опухоли (100%) отрицательная реакция - Е-кадгерин не экспрессируется. Больному назначен реаферон 1,5 млн ME в очаг через день, на курс 13,5 млн ME. Отмечалось уменьшение опухоли в размере на 0,2 см. Затем выполнена криодеструкция. Через год после лечения признаков рецидива не выявлено.

Предлагаемый способ выбора метода лечения применялся нами у 25 больных поверхностной формой базальноклеточного рака кожи. 16 больным, с учетом экспрессии Е-кадгерина, в качестве метода лечения выбрана криодеструкция, 9 больным - внутритканевая интерферонотерапия с последующей криодеструкцией. Излечение наступило у всех пациентов. Отдаленные результаты лечения прослежены в течение 3 лет, рецидивов новообразования не отмечено.

Предлагаемый способ выбора метода лечения значительно повышает эффективность лечения поверхностной формы базальноклеточного рака, который является самой распространенной злокачественной эпителиальной опухолью человека.