средство для профилактики рака

Формула изобретения

Средство для профилактики рака на основе антиоксидантных витаминов и микроэлементов и производных глюкаровой кислоты, отличающееся тем, что использована комбинация ретинола ацетата - 90-270 мг %, -токоферола ацетата - 1,3-4 г %, селенита натрия - 1,3-4 мкг % и глюкарата кальция - 4-12 г %.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к профилактической онкологии.

Известно использование в качестве средств для профилактики рака антиоксидантных витаминов и минералов: А, Е и селена, а также - глюкарата кальция.

В эпидемиологических исследованиях было показано, что потребление витамина А с пищей или в составе витаминных препаратов снижает риск рака органов верхнего отдела дыхательного и пищеварительного тракта, толстой кишки, молочной железы, простаты [IARC Working Group on the Evaluation of Cancer Preventive Agents. Vitamin A. - IARC Handbooks of Cancer Prevention. - Vol.3. - France: International Agency for Research on Cancer, 1998. - 261 ps.], пищевода и желудка [Chen H., Tucker K.L., Graubard B.I. et al. Nutrient intakes and adenocarcinoma of the esophagus and distal stomach // Nutr. Cancer. - 2002. - Vol.42. - P.33-40], тела матки [Petridou Е., Kedikoglou S., Koukoulomatis P. et al. Diet in relation to endometrial cancer risk: a case-control study in Greece // Nutr. Cancer. - 2002. - Vol.44.- P. 16-22], шейки матки [Shannon J., Thomas D.B., Ray R.M. et al. Dietary risk factors for invasive and in-situ cervical carcinomas in Bangkok, Thailand // Cancer Causes Control. - 2002. - Vol.13. - P.691-699], меланомы кожи [Feskanich D., Willett W.C., Hunter D.J., Colditz G.A. Dietary intakes of vitamins A, C and E and risk of melanoma in two cohorts of women // Br.J.Cancer.- 2003.- Vol.88. - P.1381-1387]. В рандомизированных клинических исследованиях витамин А, применяемый в течение длительного времени в больших дозах, уменьшал число случаев мезотелиомы плевры у рабочих асбестовой промышленности [De Klerk N.H., Musk A.W., Ambrosini G.L. et al. Vitamin A and cancer prevention II: Comparison of the effects of retinol and -carotene // Int. J. Cancer. 1998. - Vol.75. - P.362-367], плоскоклеточного рака кожи у пациентов из группы риска рака кожи, вторых первичных опухолей у больных немелкоклеточным раком легкого после хирургического лечения [IARC Working Group on the Evaluation of Cancer Preventive Agents. Vitamin A. - IARC Handbooks of Cancer Prevention. - Vol.3. - France: International Agency for Research on Cancer, 1998. - 261 ps.].

Ретинол или ретинил ацетат или пальмитат - синтетические лекарственные формы витамина А. Ретинил ацетат или пальмитат, даваемые с кормом или с помощью внутрижелудочного зонда как в фазу инициации, так и промоции, тормозили канцерогенез легких, индуцированный 3-метилхолантреном; молочной железы, вызываемый N-метил-N-нитрозомочевиной (МНМ), 7,12-диметилбенз(а)антраценом (ДМБА), бензо(а)пиреном (БП) или 17-этинилэстрадиолом; мочевого пузыря, индуцированный N-нитрозобутил(4-гидроксибутил)амином, у крыс; преджелудка, индуцированный БП; кожи, вызываемый ДМБА + 12-O-тетрадеканоилфорбол 13-ацетатом (ТПА), у мышей [IARC Working Group on the Evaluation of Cancer Preventive Agents. Vitamin A. - IARC Handbooks of Cancer Prevention. - Vol.3. - France: International Agency for Research on Cancer, 1998. - 261 ps.]. Ретинол пальмитат предупреждал развитие плоскоклеточных карцином десен и преджелудка, индуцированных МНМ у хомяков [Kohgo Т., Mezawa F., lizuka Т., Shindoh M. The enhancing effect of excess retinol palmitate on induction of odontogenic tumors and inhibitory effect on squamous cell carcinoma of the gingiva in hamsters treated with N-methylnitrosourea // Histol. Histopathol. - 1999. - Vol.14. - P.157-163].

Механизмы антиканцерогенного действия витамина А объясняются его антиоксидантными свойствами [Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. - СПб.: ЭЛБИ-СПб., 2003. - 128 с.], а также способностями поддерживать дифференцировку эпителиальных клеток, индуцировать апоптоз, стимулировать процессы межклеточного обмена и иммунные реакции, тормозить клеточную пролиферацию и ангиогенез, ингибировать липоксигеназную активность [Okuno M., Kojima S., Matsushima-Nishiwaki R. et al. Retinoids in cancer chemoprevention // Curr. Cancer Drug Targets. - 2004. - Vol.4. - P.285-298].

Витамин Е включает 8 различных химических форм, синтезируемых растениями; чаще всего встречающимся и наиболее активным является D- -токоферол. DL- -токоферол ацетат - синтетическая форма витамина Е [Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. - СПб.: ЭЛБИ - СПб., 2003. - 128 с.]. В эпидемиологических исследованиях потребление витамина Е с пищей или в виде диетических добавок ассоциировалось со снижением риска рака ротовой полости и глотки, пищевода, желудка, толстой кишки, гортани, легкого, мочевого пузыря, простаты, молочной железы, яичников, базалиомы кожи [Dutta A., Dutta S.K. Vitamin E and its role in the prevention of atherosclerosis and carcinogenesis: a review // J. Am. Coll. Nutr. - 2003. - Vol.22. - P. 258-268; Sung L., Greenberg M.L., Koren G. et al. Vitamin E: the evidence for multiple roles in cancer // Nutr. Cancer. - 2003. - Vol.46. - P.1-14]. У мужчин-курильщиков прием -токоферола ацетата по 50 мг в день в среднем в течение 6 лет уменьшал частоту рака простаты на 34% и смертность от рака простаты на 41% [Pak R.W., Lanteri V.J., Scheuch J.R., Sawczuk I.S. Review of vitamin E and selenium in the prevention of prostate cancer: implications of the selenium and vitamin E chemoprevention trial // Integr. Cancer Ther. - 2002. - Vol.1. - P.338-344]. В китайской провинции Ланкшон прием -токоферола по 30 мг в день в течение 5,5 лет в комбинации с -каротином и селеном уменьшал частоту и смертность от рака желудка, а также смертность от всех опухолей [Yang C.S. Vitamin nutrition and gastroesophageal cancer // J. Nutr. - 2000. - Vol.130 (Suppl. 2). - P.338-339].

В экспериментах -токоферол или -токоферил при пероральном применении как в фазу инициации, так и промоции тормозили развитие опухолей молочной железы, индуцированных ДМБА; опухолей толстой кишки, индуцированных 1,2-диметилгидразином, у крыс и мышей; подкожных сарком, индуцированных 3-метилхолантреном; опухолей желудка, индуцированных ДМБА, у мышей; опухолей слухового прохода, индуцированных ДМБА; опухолей печени, индуцированных 3'-метил-4-диметиламиноазобензолом, у крыс [Knekt P. Role of vitamin E in the prophylaxis of cancer // Ann. Med. - 1991. - Vol.23. - P.3-12]; опухолей кожи, индуцированных ультрафиолетом, у мышей; опухолей печени, развивающихся спонтанно или индуцированных N-нитрозодиэтиламином, у трансгенных мышей; плоскоклеточных карцином защечного мешка, индуцированных ДМБА, у хомяков; аденокарцином пищевода, вызываемых путем создания эзофагодуоденального анастомоза; аберрантных крипт и опухолей толстой кишки, индуцированных азоксиметаном; опухолей молочной железы, индуцированных 2-амино-1-метил-6-фенилимидазо[4,5-b]-пиридином; опухолей почек, индуцированных железом, у крыс; опухолей легких, индуцированных 4-(метилнитрозамино)-1-(3-пиридил)-1-бутаноном у мышей [Dutta A., Dutta S.K. Vitamin E and its role in the prevention of atherosclerosis and carcinogenesis: a review // J. Am. Coll. Nutr. - 2003. - Vol.22. - P. 258-268; Sung L., Greenberg M.L., Koren G. et al. Vitamin E: the evidence for multiple roles in cancer // Nutr. Cancer. - 2003. - Vol.46. - P. 1-14]; карцином ротовой полости, вызываемых у хомяков табаком и дибензопиреном [Schwartz J., Baker V., Larios E. et al. Inhibition of experimental tobacco carcinogen induced head and neck carcinogenesis // Oral. Oncol. - 2004.- Vol.40. - P.611-623].

Главным в антиканцерогенных механизмах витамина Е является его антиоксидантный эффект в клеточных мембранах, способность предупреждать переокисление полиненасыщенных липидов [Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. - СПб.: ЭЛБИ - СПб., 2003. - 128 с.]. Витамин Е также усиливает репарацию ДНК, ингибирует активацию онкогенов ras, увеличивает межклеточное взаимодействие, тормозит пролиферацию, индуцирует дифференцировку и вызывает апоптоз опухолевых клеток, ингибирует ангиогенез, вмешивается в активность ферментов цитохрома Р450, тормозит метаболизм арахидоновой кислоты и формирование нитрозаминов, стимулирует Т-систему иммунитета и активность естественных клеток-киллеров, нормализует баланс половых гормонов [Dutta A., Dutta S.K. Vitamin Е and its role in the prevention of atherosclerosis and carcinogenesis: a review // J. Am. Coll. Nutr. - 2003. - Vol.22. - P.258-268].

В эпидемиологических исследованиях показано, что в регионах с низким содержанием селена в почве, воде и продуктах питания частота рака, прежде всего, молочной железы и толстой кишки среди населения выше. Низкое содержание селена в пище, крови, ногтях, волосах ассоциировалось с повышением риска злокачественных опухолей различных локализаций: языка, пищевода, желудка, толстой кишки, печени, поджелудочной железы, гортани, легкого, молочной железы, матки, почек, простаты, мочевого пузыря, кожи, лейкозов, лимфогранулематоза [Whanger P.D. Selenium and its relationship to cancer: an update dagger // Br. J. Nutr. - 2004. - Vol.91. - P.11-28].

В мире к настоящему времени завершены несколько крупных интервенционных клинических исследований, в которых доказано, что прием селена снижает риск возникновения злокачественных опухолей. В американском исследовании было набрано 1312 пациентов, перенесших базальноклеточный или плоскоклеточный рак кожи, больные принимали по 200 мкг селена в день в виде пивных дрожжей в течение 4,5 лет; по сравнению с группой плацебо смертность от всех злокачественных опухолей уменьшилась на 50%, наиболее существенно снижались частота рака простаты (относительный риск 0,37), толстой кишки (0,42) и легкого (0,54). В китайском исследовании участвовали 226 больных вирусным гепатитом В, ежедневное применение 200 мкг селена с таблетированными пивными дрожжами в течение 4 лет снижало частоту рака печени на 35% по сравнению с группой пациентов, принимавших плацебо. В другом китайском исследовании было набрано 2065 человек, проживающих в провинции с высоким риском рака печени и обнаруженным антигеном вируса гепатита В в крови; применение селенита натрия по 500 мкг в день в течение 3 лет уменьшало число новых случаев рака печени на 50% по сравнению с группой плацебо [Tsao A.S., Kim E.S., Hong W.K. Chemoprevention of cancer // CA Cancer J. Clin. - 2004. - Vol.54. - P.150-180].

Селенит или селенат натрия, даваемые перорально, как в фазу инициации, так и промоции тормозили развитие аберрантных крипт и опухолей толстой кишки, индуцированных 1,2-диметилгидразином, азоксиметаном или 3,2'-диметил-4-аминобифенилом; печени, вызываемых 3'-метил-4-диметиламиноазобензолом, 2-ацетиламинофлуореном или N-нитрозодиэтиламином; поджелудочной железы, индуцированных азазерином; носоглотки, вызываемых динитропиперазином, у крыс; преджелудка, вызываемых БП, у мышей; молочной железы, индуцированных ДМБА, МНМ или онкогенными вирусами, у крыс и мышей; кожи, индуцированных БП, ДМБА, 3-метилхолантреном, 2'-(4-нитрофенокси)оксираном и ТПА или ультрафиолетом, у мышей; спонтанных злокачественных лимфом у мышей; холангиокарцином, индуцированных N'-нитрозобис(2-оксопромил)амином, у хомяков; опухолей молочной железы, гипофиза, щитовидной железы и лейкозов, индуцированных ионизирующей радиацией, у крыс [Whanger P.D. Selenium and its relationship to cancer: an update dagger // Br. J. Nutr. - 2004. - Vol.91. - P.11-28].

Антиканцерогенные эффекты селена обусловлены, в первую очередь, его антиоксидантным действием; ферменты, содержащие селен, - глутатион пероксидазы - защищают ДНК и другие клеточные компоненты от повреждения свободными радикалами кислорода [Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. - СПб.: ЭЛБИ - СПб., 2003. - 128 с.]. Селен также обладает антимутагенным действием, подавляет экспрессию онкогенов, ингибирует активность протеинкиназы С, тормозит ангиогенез; селеносодержащие ферменты участвуют в метаболизме и детоксификации канцерогенов, контроле клеточного деления, стимулируют иммунные реакции, индуцируют апоптоз [Whanger P.D. Selenium and its relationship to cancer: an update dagger // Br. J. Nutr. - 2004. - Vol.91. - P.11-28].

D-глюкаровая кислота является нормальным метаболитом D-глюкозы, способным ингибировать активность фермента -глюкуронидазы. Повышенный уровень -глюкуронидазы в тканях ассоциируется с увеличением риска рака, особенно молочной железы, простаты и толстой кишки [Calcium-D-glucarate // Altern. Med. Rev. - 2002. - Vol.7. - P.336-339]. В экспериментах глюкарат кальция при введении как в фазу инициации, так и промоции тормозил развитие опухолей молочной железы, индуцированных ДМБА, пренеопластических очагов печени, вызываемых N-нитрозодиэтиламин и фенобарбиталом, аберрантных крипт толстой кишки, индуцированных азоксиметаном, у крыс; опухолей кожи, вызываемых ДМБА и ТПА; опухолей легких, индуцированных БП, у мышей. Антиканцерогенные механизмы глюкарата кальция объясняются его способностью ингибировать активность -глюкуронидазы, в результате чего стимулируется детоксификация канцерогенов и промоторов, кроме того, в процессе промоции канцерогенеза в тканях накапливается -глюкуронидаза; а также вмешательством в стероидогенез, гормональный баланс и подавлением пролиферативной активности клеток, способностью повышать внутриклеточный уровень циклической АМФ и подавлять активность протеинкиназы С [Hanausek M., Walaszek Z., Slaga T.J. Detoxifying cancer causing agents to prevent cancer // Integr. Cancer Ther. - 2003. - Vol.2. - P.139-144; Walaszek Z., Szemraj J., Narog M. et al. Metabolism, uptake, and excretion of a D-glucaric acid salt and its potential use in cancer prevention // Cancer Detect. Prev. - 1997. - Vol.21. - P.178-190].

Однако использование витамина А, витамина Е, селена или глюкарата кальция в виде моноагентов для профилактики рака нецелесообразно из-за недостаточной эффективности в терапевтических дозах и токсичности при применении в дозах, оказывающих антиканцерогенное действие. Витамин А в дозах, предупреждающих возникновение опухолей, обладает значительным токсическим действием. При гипервитаминозе А наблюдаются поражения кожи, слизистых оболочек, волос, печени, нервной системы, деминерализация костей, потеря веса [IARC Working Group on the Evaluation of Cancer Preventive Agents. Vitamin A. - IARC Handbooks of Cancer Prevention. - Vol.3. - France: International Agency for Research on Cancer, 1998. - 261 ps.]. Витамин Е в дозах, предупреждающих возникновение опухолей, обладает антикоагулянтным действием и препятствует агрегации тромбоцитов, что может приводить к кровоизлияниям в различных органах и кровотечениям [Bartlett H., Eperjesi F. Possible contraindications and adverse reactions associated with the use of ocular nutritional supplements // Ophthalmic Physiol. Opt. - 2005. - Vol.25. - P.179-194]. Органические и неорганические соединения селена - известные антиканцерогенные агенты. Однако их широкое применение для химиопрофилактики рака сдерживает маленькая терапевтическая широта, при уже небольшом превышении физиологической потребности селен оказывает токсическое действие на миокард, кровь, центральную нервную систему, печень, почки [Whanger P.D. Selenium and its relationship to cancer: an update dagger // Br. J. Nutr. - 2004. - Vol.91. - P.11-28]. Глюкарат кальция в дозах, предупреждающих возникновение опухолей, повышает свертываемость крови, может вызвать тромбофлебиты и прогрессирование атеросклероза [Абрамов В.В., Андронова Т.А., Белов А.А. и др. Регистр лекарственных средств России / Под ред. Г.Л.Вышковского, Ю.Ф.Крылова, Е.Г.Лобанова и др. - М.: РЛС-Патент, 2004. - 1503 с.].

Профилактическая онкология нуждается в новых антиканцерогенных средствах, обладающих способностью эффективно тормозить возникновение и развитие злокачественных опухолей, но лишенных токсического действия. Целью изобретения является создание нового средства для профилактики рака, обладающего выраженным антиканцерогенным (онкопрофилактическим) действием и не имеющего значимого токсического действия.

Наиболее близкими аналогами к заявляемому изобретению являются ретинол ацетат, -токоферол ацетат, селенит натрия и глюкарат кальция, применяемые в виде моноагентов для профилактики рака. Недостатками ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция являются их низкая эффективность при применении для профилактики рака в терапевтических дозах и токсичность при применении в дозах, оказывающих антиканцерогенное действие.

Технический результат состоит в создании нового средства для профилактики рака, обладающего выраженным антиканцерогенным действием и отсутствием токсических свойств. Технический результат достигается тем, что в качестве средства для профилактики рака предложена комбинация антиканцерогенных агентов: антиоксидантных витаминов ретинола ацетата и -токоферола ацетата, антиоксидантного микроэлемента селенита натрия и глюкарата кальция. Антиканцерогенные агенты использованы в следующих соотношениях: ретинол ацетат - 90-270 мг%, -токоферол ацетат - 1,3-4 г%, селенит натрия - 1,3-4 мкг%, глюкарат кальция - 4-12 г%. Суточные дозы отдельных антиканцерогенных веществ в составе комбинации применяются в 5-10 раз меньше, чем обычно используются для профилактики рака по данным литературы, а также в проведенных собственных опытах. При этом эффективность комбинации в небольших дозах выше антиканцерогенной активности отдельных компонентов, применяемых в терапевтических дозах, а токсические свойства компонентов не проявляются. Происходит суммирование и синергизм антиканцерогенного действия отдельных агентов при их применении в составе комбинации. При использовании антиканцерогенных агентов в меньшей дозировке вероятность токсического действия уменьшается, в комплексе происходят также взаимные антитоксические эффекты.

Заявляемое техническое решение по сравнению с аналогами имеет отличительные существенные признаки, что позволяет это решение считать отвечающим условию патентоспособности - новизна. Анализ известных в науке и технике аналогичных технических решений показывает, что заявляемое средство для профилактики рака не обнаружено и совокупность отличительных существенных признаков не известна. Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности - изобретательский уровень.

Ниже приведены примеры получения и использования в качестве средства для профилактики рака комбинации ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция.

Пример 1. Получение комбинации антиканцерогенных веществ. Ретинол ацетат и -токоферол ацетат использовали производства фармацевтического предприятия «Ай Си Эн Октябрь», Санкт-Петербург; селенит натрия получали от фирмы «Химмед», Москва. Глюкарат кальция синтезировали в лаборатории органического синтеза НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова в соответствии с описанной методикой [Патент №2159109 (РФ). Средство для профилактики рака / В.А.Александров, В.Г.Беспалов, А.С.Петров. - Заявл. 29.03.99, №99106294; Опубл. в БИ, 2000, №32]. Чистота синтезированного глюкарата кальция составляла более 99%; формула C₁₂H₁₈O ₁₆Ca, мол.м. 228,2, точка плавления > 230°С (разложение). Антиканцерогенные вещества в порошкообразной форме тщательно перемешивали с крахмалом. Состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат - 90 или 270 мг; -токоферол ацетат - 1,3 или 4 г; селенит натрия - 1,3 или 4 мкг; глюкарат кальция - 4 или 12 г; крахмал - остальное до 100 г.

Пример 2. Применение комбинации антиканцерогенных веществ для предупреждения рака шейки матки и влагалища.

Эксперименты проведены на мышах SHR разводки питомника Рапполово РАМН (Ленинградская область). Животные получали стандартный кормовой рацион и питьевую водопроводную воду. Канцероген ДМБА получали от фирмы Sigma, США. Самкам мышей с начальным весом 20-22 г вводили внутривлагалищно 0,1% раствор ДМБА в триэтиленгликоле на полиуретановых тампонах, 2 раза в неделю в течение 4, 6 или 8 недель; доза ДМБА на 1 аппликацию составляла 25 мкг, суммарная доза - 200, 300 или 400 мкг. Окончательный подсчет опухолей проводили в конце экспериментов - через 6, 8 или 11 месяцев от начала воздействия ДМБА. Каждая серия экспериментов была со своей контрольной группой. В контрольных группах мышей дополнительным воздействиям не подвергали, в опытных группах давали антиканцерогенные вещества. Погибших и забитых в терминальном состоянии или по окончании экспериментов животных подвергали полной аутопсии. Животных забивали парами эфира. Органы с опухолями фиксировали в 10% растворе формалина. Гистологическую обработку тканей производили по стандартной методике с окраской гематоксилин/эозином. Патоморфологический анализ материала осуществляли при световой микроскопии. Патоморфологическую диагностику опухолей крыс и мышей проводили согласно классификации Международного агентства по изучению рака.

Антиканцерогенные вещества давали ежедневно в фазу промоции канцерогенеза: начинали давать сразу после окончания воздействия ДМБА и продолжали до конца экспериментов. Использовали состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат - 90 мг; -токоферол ацетат - 1,3 г; селенит натрия - 1,3 мкг; глюкарат кальция - 4 г; крахмал - остальное до 100 г; которую добавляли в кормовую смесь в концентрации 9750 мг/кг корма. Среднее суточное потребление отдельных агентов составляло у мышей для ретинола ацетата 4,5, -токоферола ацетата - 60, селенита натрия - 0,065, глюкарата кальция - 200 мг/кг массы тела. Для сравнения изучена также антиканцерогенная активность отдельных агентов комбинации. Ретинол ацетат добавляли в корм в дозе 300000 МЕ/кг корма, среднее суточное потребление составляло 150000 ME (45,5 мг)/кг массы тела. -Токоферол ацетат давали в дозе 600 мг/кг корма, среднее суточное потребление - 300 мг/кг массы тела. Селенит натрия давали с питьевой водой в концентрации 4 мг/л, среднее суточное потребление - 0,6 мг/кг массы тела. Глюкарат кальция замешивали в корм животных в дозе 2 г/кг корма, среднее суточное потребление - 1000 мг/кг массы тела. Таким образом, при расчете на среднесуточное потребление дозы антиканцерогенных веществ в составе комбинации была в 5-10 раз меньше, чем при изучении данных веществ по отдельности.

Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми статистическими методами с использованием критериев ², точного метода Фишера, t (Стьюдента) на персональном компьютере IBM, с использованием программ Statistica, Mstat и Excel.

У тестируемых веществ рассчитывали % ингибирования канцерогенеза в органах-мишенях по формуле L.W. Wattenberg:

,

где И - % ингибирования, МО - среднее число опухолей по отношению ко всем животным в опытной группе, МК - среднее число опухолей по отношению ко всем животным в контрольной группе.

Результаты экспериментов представлены в таблице 1.

Таблица 1
Влияние антиканцерогенных агентов на развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных ДМБА, у мышей
Группа	Число мышей	Частота, количество и множественность опухолей	% ингибирования
ДМБА-контроль	61	41(67,2%); 41; 0,67±0,06
ДМБА + комбинация	52	14 (26,9%)*; 14; 0,27±0,07*	59,7
ДМБА + ретинол ацетат	35	16 (45,7%)*; 16; 0,46±0,08*	31,3
ДМБА + токоферол ацетат	33	15 (45,5%)*; 15; 0,45±0,09*	32,8
ДМБА-контроль	33	16 (48,5%); 16; 0,48±0,09
ДМБА + селенит натрия	32	8 (25%)*; 8; 0,25±0,07*	47,9
ДМБА-контроль	50	28 (56%); 28; 0,56±0,07
ДМБА + глюкарат кальция	45	16 (35,6%)*; 16; 0,36±0,07*	35,7

По гистологической структуре: опухоли шейки матки и влагалища в большинстве случаев плоскоклеточные карциномы, в единичных случаях - аденосквамозные карциномы и аденокарциномы.

*Разница с контролем по критериям ² и t статистически достоверна, р<0,001-0,05.

Ретинол ацетат, -токоферол ацетат, селенит натрия и глюкарат кальция, даваемые по отдельности, статистически достоверно тормозили канцерогенез шейки матки и влагалища, % ингибирования составлял от 31,3 до 47,9. В группах с ретинол ацетатом и селенитом натрия наблюдались токсические эффекты: некоторое снижение прибавки массы тела, изменение шерстного покрова. Несмотря на то, что среднесуточные дозы отдельных агентов в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, комбинация антиканцерогенных веществ более эффективно статистически достоверно тормозила канцерогенез шейки матки и влагалища; % ингибирования составил 59,7 - в 1,2-1,9 раз больше по сравнению с отдельными агентами (табл.2). Токсических эффектов в группе с комбинацией антиканцерогенных веществ не зарегистрировано. Таким образом, выявлено, что при применении комбинации антиканцерогенных веществ - ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция - наблюдается суммация или синергизм антиканцерогенного действия в отношении опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных химическим канцерогеном ДМБА, и отсутствие токсических свойств.

Пример 3. Применение комбинации антиканцерогенных веществ для предупреждения опухолей пищевода и преджелудка.

Эксперименты проведены на крысах ЛИО разводки НИИ онкологии им проф. Н.Н.Петрова. Животные получали стандартный кормовой рацион и питьевую водопроводную воду. Канцерогены синтезировали в лаборатории органического синтеза НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова: этиловый эфир N-нитрозосаркозина (ЭЭНС) из саркозина этерификацией этиловым спиртом в присутствии хлористого тионила с последующим нитрозированием нитритом натрия в кислой среде; N-метил-N-бензилнитрозамин (МБНА) - путем нитрозирования метилбензиламина в кислой среде согласно описанным в литературе методикам [Druckrey В., Preussmann R., Ivankovic S. Organotrope carcinogene Wirkungen bei 65 verschiedenen N-Nitroso-Verbindungen an BD-Ratten // Z. Krebsforsch. - 1967. - Bd 69. - S. 103-201]. Чистота синтезированных ЭЭНС и МБНА составляла более 99%. Крысам-самцам с начальным весом 120-130 г вводили внутрижелудочно зондом ЭЭНС, 5 раз в неделю в ежедневной дозе 100 мг/кг массы тела в течение 8 нед; по 200 мг/кг - 12 недель; суммарные дозы ЭЭНС составляли соответственно 4 и 12 г/кг массы тела. Крысам-самцам с начальным весом 150-170 г давали также МБНА с питьевой водой в концентрации 10 мг/л в течение 1 месяца (суммарная доза 30 мг/кг массы тела). В контрольных группах крыс дополнительным воздействиям не подвергали, в опытных группах давали антиканцерогенные вещества. Каждая серия экспериментов была со своей контрольной группой. Регистрацию опухолей проводили через 8-12 месяцев от начала воздействия канцерогенов.

Антиканцерогенные вещества давали ежедневно в фазу промоции канцерогенеза:

начинали давать сразу после окончания воздействия ЭЭНС и продолжали до конца экспериментов. Использовали состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат - 270 мг; -токоферол ацетат - 4 г; селенит натрия - 4 мкг; глюкарат кальция - 12 г; крахмал - остальное до 100 г; которую добавляли в кормовую смесь в концентрации 3250 мг/кг корма. Среднее суточное потребление отдельных агентов составляло у крыс для ретинола ацетата - 1,3, -токоферола ацетата - 20, селенита натрия - 0,02, глюкарата кальция - 60 мг/кг массы тела. Для сравнения изучена также антиканцерогенная активность отдельных агентов комбинации. Ретинол ацетат добавляли в корм в дозе 300000 МЕ/кг корма, среднее суточное потребление составляло 45000 ME (13,6 мг)/кг массы тела. -Токоферол ацетат давали в дозе 600 мг/кг корма, среднее суточное потребление - 90 мг/кг массы тела. Селенит натрия давали с питьевой водой в концентрации 4 мг/л, среднее суточное потребление - 0,2 мг/кг массы тела. Глюкарат кальция замешивали в корм животных в дозе 2 г/кг корма, среднее суточное потребление - 300 мг/кг массы тела. Таким образом, при расчете на среднесуточное потребление дозы антиканцерогенных веществ в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, чем при изучении данных веществ по отдельности.

Аутопсию животных, гистологическую обработку органов и тканей, статистическую обработку результатов экспериментов, расчет % ингибирования канцерогенеза проводили также, как в примере 2.

Результаты экспериментов представлены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние антиканцерогенных агентов на развитие опухолей пищевода и преджелудка, индуцированных ЭЭНС, у крыс
Группа	Число крыс	Частота, количество и множественность опухолей	% ингибирования
ЭЭНС-контроль	41	40 (97,6%); 209; 5,1±0,5
ЭЭНС + комбинация	36	18 (50%)*, 62; 1,72±0,27*	66,3
ЭЭНС + ретинол ацетат	24	22 (91,7%); 115; 4,79±0,48	6,1
ЭЭНС + токоферол ацетат	28	17 (60,7%)*; 68; 2,43±0,38*	52,4
ЭЭНС-контроль	30	30 (100%); 644; 21,47±2
ЭЭНС + селенит натрия	25	24 (96%); 382; 15,28±2,6	28,8
МБНА-контроль	19	13 (68,4%); 75; 3,95±0,71
МБНА + глюкарат кальция	20	10 (50%); 44; 2,2±0,53*	44,3

По гистологической структуре опухоли пищевода и преджелудка были плоскоклеточными карциномами и папилломами.

*Разница с контролем по критериям ² и t статистически достоверна, р<0,001-0,05.

Из отдельных антиканцерогенных агентов только -токоферол ацетат и глюкарат кальция статистически достоверно тормозили канцерогенез пищевода и преджелудка, индуцированный ЭЭНС или МБНА, у крыс; % ингибирования составил соответственно 52,4 и 44,3. Ретинол ацетат и селенит натрия проявили лишь статистически недостоверную тенденцию к торможению канцерогенеза пищевода и преджелудка, индуцированного ЭЭНС, у крыс; % ингибирования составил соответственно 6,1 и 28,8. В группах с ретинол ацетатом и селенитом натрия наблюдались токсические эффекты: некоторое снижение прибавки массы тела, изменение шерстного покрова. Несмотря на то что среднесуточные дозы отдельных агентов в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, комбинация антиканцерогенных веществ более эффективно статистически достоверно тормозила канцерогенез пищевода и преджелудка, индуцированный ЭЭНС, у крыс; % ингибирования составил 66,3 - в 1,3-10,9 раз больше по сравнению с отдельными агентами. Токсических эффектов в группе с комбинацией антиканцерогенных веществ не зарегистрировано. Таким образом, выявлено, что при применении комбинации антиканцерогенных веществ - ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция - наблюдается суммация или синергизм антиканцерогенного действия в отношении опухолей пищевода и преджелудка, индуцированных химическими канцерогенами ЭЭНС или МБНА, и отсутствие токсических свойств.

Предлагаемое для профилактики рака средство - комбинация ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция - обеспечивает следующие преимущества по сравнению с аналогами: 1) более сильное антиканцерогенное (онкопрофилактическое) действие; 2) менее выраженные токсические свойства.