новая кристаллическая модификация 2-(3, 5-бис-трифторметилфенил)-n-[6-(1, 1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида

Формула изобретения

1. Новая кристаллическая модификация 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330017/955.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида, отличающаяся следующими параметрами рентгеновской дифрактограммы, полученной с использованием Cu_{K ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330011/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle">} излучения, при 2 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330017/920.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> (угол 2 тэта): 4,5; 6,4; 7,5; 7,7; 8,0; 8,2; 10,0; 10,2; 10,9; 11,1; 12,9; 13,4; 14,0; 14,5; 15,1; 15,6; 16,2; 16,5; 17,3; 17,5; 18,0; 18,9; 19,3; 19,5; 19,9; 20,1; 20,6; 21,0; 21,4; 22,7; 23,1 и 23,6, а также инфракрасным спектром с характеристическими полосами при 2925, 2854, 1637, 1604, 1484, 1395, 1375, 1285, 1230, 1172, 1125, 1082, 999, 943, 893, 868, 860, 782, 705, 684 см^-1, и обладающая экстраполированной температурой плавления по данным дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), составляющей 137,2°С.

2. Фармацевтически приемлемая композиция, обладающая активностью в отношении NK1 рецептора, включающая кристаллическую модификацию 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330017/955.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Фармацевтически приемлемая композиция по п.2, где кристаллическую модификацию 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330017/955.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида вводят в виде порошка в желатиновых капсулах.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новой кристаллической форме

⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-2.gif" height=100 BORDER="0">

2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида (модификация А).

Было обнаружено, что 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид может быть выделен в зависимости от способа получения в трех различных кристаллических модификациях (модификации А, В и С) и в аморфном состоянии, эти формы различаются по инфракрасным спектрам, порошковым рентгеновским дифрактограммам и по тому, как протекает процесс плавления.

2-(3,5-бис-Трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид в виде модификации В известен и описан в заявке РСТ/ЕР02/08311.

2-(3,5-бис-Трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид описан как соединение, обладающее активностью в отношении NK1 рецептора и предназначенное для лечения заболеваний, связанных с этим рецептором, например, таких как мигрень, прогрессирующий деформирующий артрит, астма, бронхиальная гиперреактивность, воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта, или для лечения заболеваний, включающих болезнь Паркинсона, беспокойство, страх, тревогу, депрессию, боль, головную боль, болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, отек, аллергический ринит, болезнь Крона, офтальмологические травмы, воспалительные заболевания глаз, психоз, морскую болезнь; тошноту, возникающую при езде или в полете, рвоту, непроизвольное мочеиспускание (энурез), психоиммунологические или психосоматические нарушения или расстройства, рак, синдром отмены у лиц, употреблявших наркотические лекарственные средства, седативные средства или никотин, травматические повреждения мозга или доброкачественная гиперплазия предстательной железы.

В настоящее время обнаружено, что модификация А вышеуказанного соединения обладает улучшенным фармакологическим профилем, особенно в случае перорального введения. Это соединение может входить в высокой концентрации в состав композиции, дополнительно включающей некоторые выбранные вспомогательные вещества. Такие композиции характеризуются лучшей ресорбцией соединения и, таким образом, имеют повышенную биодоступность по сравнению с композициями, которые содержат 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид в виде его модификаций В или С.

Соединение в аморфном состоянии также обладает повышенной биодоступностью в виде микросуспензии, но такая форма не подходит для перорального введения человеку.

2-(3,5-бис-Трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид в виде модификации В может быть получен в соответствии с заявкой РСТ/ЕР02/08311 или в виде модификаций А, В и С или в аморфном состоянии новым способом, характеризующимся высоким выходом, этот способ описан ниже.

⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0"> N-трет-Бутил-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)никотинамид

Магний (3,4 г, 137,5 ммоль) суспендируют в атмосфере аргона в 12,0 мл тетрагидрофурана и обрабатывают при кипячении с обратным холодильником раствором 17,6 мл (137,3 ммоль) 2-бром-5-фтортолуола в 20 мл тетрагидрофурана. После добавления первой порции этого раствора объемом 3 мл полученную смесь подогревают до начала реакции Гриньяра (Grignard). Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при кипячении с обратным холодильником, охлаждают до 50°С и добавляют в течение 10 минут к раствору 10,0 г (97%, 45 ммоль) N-трет-бутил-6-хлорникотинамида в 50 мл тетрагидрофурана (экзотермическая реакция). Полученную смесь перемешивают при 70°С в течение 2 часов, охлаждают до комнатной температуры и затем медленно добавляют раствор 17,4 г (68,6 ммоль, 1,5 экв.) иода в 100 мл тетрагидрофурана (экзотермическая реакция). Полученную суспензию перемешивают в течение 1,7 часа при 50°С, обрабатывают при комнатной температуре, используя 50 мл воды, выливают в 150 мл 2 Н водного раствора серной кислоты и обрабатывают, используя 150 мл трет-бутилметилового простого эфира. После энергичного перемешивания фазы разделяют и органическую фазу промывают водным раствором, насыщенным наполовину бикарбонатом и насыщенным наполовину хлоридом натрия. Водные фазы экстрагируют трет-бутил-метиловым простым эфиром. Объединенные органические экстракты высушивают, концентрируют в роторном испарителе и высушивают под высоким вакуумом при комнатной температуре, получая при этом 17,3 г желтого маслянистого вещества. Это маслянистое вещество растворяют в дихлорметане и фильтруют через силикагель, элюируя гексаном и затем дихлорметаном. Фракции, содержащие продукт, собирают и концентрируют при пониженном давлении до объема приблизительно 200 мл, к которому добавляют 400 мл гексана. Полученный раствор концентрируют в роторном испарителе до объема приблизительно 150 мл, затем полученную суспензию обрабатывают, используя 200 мл гексана, и перемешивают в течение 2 часов при 4°С. Полученный осадок отфильтровывают, промывают холодной смесью гексан/этилацетат в соотношении 19/1 (-20°С) и высушивают под высоким вакуумом, получая при этом 8,0 г (выход 55%) N-трет-бутил-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)никотинамида в виде светло-бежевого порошкообразного вещества. Маточный раствор концентрируют в роторном испарителе, получая при этом 8,5 г оранжевого твердого вещества, которое очищают посредством хроматографии на силикагеле, элюируя гексаном и затем смесью гексан/этилацетат в соотношении 9/1. Собирают фракции, содержащие продукт, концентрируют и высушивают под высоким вакуумом, получая при этом 3,8 г (выход 25%) N-трет-бутил-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)никотинамида в виде светло-бежевого порошкообразного вещества.

Масс-спектр (ISP):m/e=321 (M+H⁺, 36), 273 (N-трет-Bu, 100).

N-трет-Бутил-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамид

9,3 г (29,0 ммоль) N-трет-бутил-6-хлор-4-(4-фтор-2-метилфенил)никотинамида растворяют в 28,0 мл диметилсульфоксида и 7,0 г (50,7 ммоль) карбоната калия, а затем добавляют 4,2 мл (43,5 ммоль) тиоморфолина. Полученную суспензию перемешивают при 130°С в течение 17 часов, охлаждают до комнатной температуры и разделяют между 120 мл этилацетата и 250 мл насыщенного наполовину водного раствора хлорида натрия. Фазы разделяют и затем органическую фазу промывают насыщенным наполовину водным раствором хлорида натрия. Водные фазы экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают и концентрируют в роторном испарителе, получая при этом 21,4 г желтого маслянистого вещества. Это маслянистое вещество нагревают до 80°С, после чего добавляют по каплям 214 мл н-гексана, получая при этом кипящую суспензию, которой дают остыть до комнатной температуры, после чего дополнительно перемешивают при 0°С в течение одного часа. Полученный осадок отфильтровывают, промывают холодной смесью н-гексан/этилацетат в соотношении 9:1 и высушивают в вакуумном шкафу, получая при этом 10,1 г (выход 90%)N-трет-бутил-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамида в виде светло-бежевого порошкообразного вещества, имеющего т.пл. 163,7-168,7°С.

Масс-спектр (ISP): m/e=388 (М+Н ⁺, 100).

4-(4-Фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамид

9,7 г (25 ммоль) N-трет-бутил-4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамида суспендируют в 48,5 мл толуола, нагревают до 95°С и добавляют по каплям 24,0 г метансульфоновой кислоты, получая при этом эмульсию, которую перемешивают при 100°С в течение двух часов. После охлаждения до комнатной температуры фазы разделяют и затем органическую фазу промывают деионизированной водой. Объединенные водные фазы охлаждают до 0°С, после чего медленно добавляют 28%-ный водный раствор гидроксида натрия для повышения величины рН до приблизительно 12,5. Полученную суспензию экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические экстракты высушивают и концентрируют в роторном испарителе. Добавляют 100 мл пропилацетата, после чего полученный раствор концентрируют в роторном испарителе. Добавляют вторую порцию, составляющую 100 мл пропилацетата, и полученный раствор концентрируют до приблизительно 23 г, при этом образуется суспензия, к которой добавляют 8,3 мл н-гексана. Суспензию перемешивают при 0°С в течение одного часа. Полученный осадок отфильтровывают, промывают смесью н-гексан/пропилацетат в соотношении 9:1 и высушивают в вакуумном шкафу, получая при этом 8,0 г (выход 97%) 4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамида в виде светло-желтого порошкообразного вещества, имеющего т.пл. 198-202°С.

Масс-спектр (ISP):m/e=332 (М+Н ⁺, 100).

Метиловый эфир [4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]карбаминовой кислоты

10,5 г (31,7 ммоль) 4-(4-Фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илникотинамида добавляют к раствору 5,8 г (88,9 ммоль) гидроксида калия в 60 мл метанола, охлажденного до 0°С. Дополнительно в один прием добавляют 40 мл метанола и 11,5 г (35 ммоль) (диацетоксииод)бензола (экзотермический процесс). Через 2 часа выдерживания при 0°С реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры, разбавляют 250 мл деионизированной воды и концентрируют в роторном испарителе. Полученный остаток разбавляют, используя 200 мл этилацетата, фазы разделяют и затем водную фазу дополнительно экстрагируют этилацетатом. Органические фазы промывают насыщенным наполовину водным раствором хлорида натрия. Объединенные органические экстракты высушивают и концентрируют при пониженном давлении, после чего высушивают под высоким вакуумом, получая при этом 14,9 г метилового эфира [4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]карбаминовой кислоты в виде коричневого вязкого маслянистого вещества, которое используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Масс-спектр (ISP):m/e=362 (М+Н⁺, 100).

Метил-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]амин

43,7 мл Red-Al (3,5 М в толуоле) разбавляют, используя 25 мл толуола и добавляют по каплям к раствору 13 г (30,6 ммоль) метилового эфира [4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]карбаминовой кислоты в 55 мл толуола при 10°С (процесс экзотермичный). Полученный желтый раствор перемешивают в течение 40 минут при комнатной температуре и 1,5 часа при 50°С. Затем охлаждают до 0°С и медленно выливают в смесь 150 мл 4 Н водного раствора гидроксида натрия и 50 мл льда (очень сильное выделение тепла). После перемешивания в течение 10 минут фазы разделяют, водную фазу экстрагируют трет-бутилметиловым простым эфиром, после чего органические фазы промывают насыщенным раствором соли. Объединенные органические экстракты высушивают и концентрируют при пониженном давлении, получая при этом 10 г метил-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-илпиридин-3-ил]амина в виде коричневого маслянистого вещества, которое используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Масс-спектр (ISP):m/e=350 (М+Na⁺, 17), 318 (М+Н ⁺, 100).

2-(3,5-Бис-трифторметилфенил)-N-метил-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]изобутирамид

Раствор 8,5 г (26,6 ммоль) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-2-метил-пропионилхлорида в 12 мл дихлорметана добавляют по каплям при комнатной температуре к раствору 8,0 г (24,2 ммоль) метил-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]амина и 4,7 мл (33,9 ммоль) триэтиламина в 65 мл дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа и выливают в 50 мл 1 Н водного раствора гидроксида натрия. После экстракции фазы разделяют, водную фазу экстрагируют дихлорметаном, после чего органические фазы промывают водой. Объединенные органические экстракты концентрируют при пониженном давлении и затем растворитель заменяют на 150 мл этанола. Из этого раствора при 40°С выращивают некоторые кристаллы, медленно добавляют 30 мл воды и перемешивают систему в течение 1 часа при комнатной температуре и в течение 1 часа при 0°С. Полученный осадок отфильтровывают, промывают холодным этанолом (0°С) и высушивают под высоким вакуумом, получая при этом 13,0 г (выход 76% после 3-х стадий) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-метил-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]изобутирамида в виде не совсем белого порошкообразного вещества.

Т.пл.=168-170°С.

Масс-спектр (ISP):m/e=600 (М+Н⁺, 100), 279 (31).

2-(3,5-Бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид

5,0 г (8,3 ммоль) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-метил-N-[4-(4-фтор-2-метилфенил)-6-тиоморфолин-4-ил-пиридин-3-ил]изобутирамида суспендируют в 50 мл метанола и обрабатывают при комнатной температуре, используя 6,4 г (10,4 ммоль) оксона. Полученную суспензию перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре, охлаждают до 0°С и добавляют по каплям 3,4 мл (16,7 ммоль) раствора гидросульфита натрия. Перемешивание продолжают в течение 30 минут при комнатной температуре и затем доводят величину рН до приблизительно 8,5, используя насыщенный водный раствор карбоната натрия. Метанол упаривают при пониженном давлении и затем полученный остаток экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу промывают насыщенным наполовину водным раствором хлорида натрия. Растворитель заменяют при пониженном давлении с использованием роторного испарителя на 60 мл изопропанола и объем уменьшают до приблизительно 40 мл. Раствор охлаждают до комнатной температуры при перемешивании в течение 2 часов и перемешивают дополнительно в течение 1 часа. Полученный осадок отфильтровывают, промывают 5 мл изопропанола и высушивают под высоким вакуумом, получая при этом 4,4 г (выход 83,5%) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в виде белого порошкообразного вещества, имеющего т.пл. 135-138°С.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 8,02 [s, 1H], 7,78 [s, 1H], 7,65 [s, 2H], 6,97 [s _br, 3H], 6,58 [s, 1H, 8 H_arom]; 4,17 [m, 4H, СН_2-N-CH₂ ; 3,07 [t, 4H, CH_2-SO₂ -CH₂]; 2,60-2,12 [m, 6H], 1,52-1,20 [m, 6H, 4 СН₃].

Масс-спектр (ISP): m/e=673 (M+CH₃CN+H⁺, 36), 650 (29), 649 (M+NH₄ ⁺ , 94), 633 (34), 632 (М+Н⁺, 100), 279 (73).

Различные модификации А, В и С и соединение в аморфном состоянии могут быть получены из 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида следующим образом:

Получение 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида (модификация А):

10,0 г 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида растворяют в 78,5 г 2-пропанола при кипячении с обратным холодильником. После тонкой очистки фильтрацией раствор перемешивают и в режиме линейного охлаждения охлаждают от 75°С до 10°С в течение 6 часов. Полученную суспензию перемешивают дополнительно в течение 4 часов при 10°С перед тем, как собрать кристаллы посредством фильтрации. Бесцветную жидкость промывают, используя 8,0 г холодного 2-пропанола (10°С) и высушивают в вакууме (5 мбар) при 80°С в течение 12 часов, получая при этом 9,1 г (выход 91%) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в виде кристаллической модификации А.

Кристаллическая модификация А также может быть получена с использованием 1-пропанола вместо 2-пропанола, но в остальном в соответствии с вышеприведенной методикой. В качестве альтернативы кристаллическую модификацию А получают из какой-либо другой известной модификации с выдерживанием в 1-пропаноле, 2-пропаноле или смеси этанол/дихлорметан/вода.

Получение 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида (модификация В):

4,0 г 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида растворяют в 19,8 г этанола при 75°С. После тонкой очистки фильтрацией полученный раствор перемешивают и в режиме линейного охлаждения охлаждают от 75°С до 20°С в течение 48 часов. После фильтрации бесцветное твердое вещество промывают, используя 4,75 г этанола, и высушивают в вакууме (5 мбар) при 60°С в течение 6 часов, получая при этом 3,4 г (выход 84%) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в виде кристаллической модификации В.

В качестве альтернативы кристаллическую модификацию В получают посредством выдерживания какой-либо другой модификации с использованием ацетонитрила, циклогексана, этанола, н-гексана, метанола, метил-трет-бутилового простого эфира или воды.

Получение 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида (модификация С):

3,0 г 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в виде модификации А выдерживают при 120°С в вакууме (5 мбар) в течение трех дней. После охлаждения до температуры окружающей среды получают 2,9 г (выход 97%) светло-бежевых кристаллов 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в виде кристаллической модификации С.

Получение 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида (аморфное состояние):

Раствор 40 г 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в 400 г дихлорметана быстро концентрируют в вакууме при комнатной температуре, используя роторный испаритель. Полученное светло-бежевое твердое вспененное вещество дополнительно высушивают в вакууме (5 мбар) при температуре окружающей среды в течение 12 часов, получая при этом 39 г (выход 98%) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида в аморфном состоянии.

В качестве альтернативы аморфное соединение получают посредством быстрого упаривания растворов в диоксане, этилацетате, изопропилацетате, метилэтилкетоне или тетрагидрофуране.

Кристаллические модификации и соединение в аморфном состоянии могут быть легко различимыми по физико-химическим характеристикам, как это описано ниже.

Исследование физико-химических характеристик различных кристаллических модификаций:

Порошковая рентгеновская дифракция

Порошковые рентгеновские дифрактограммы регистрируют на дифрактометре "Bruker D8" при отражении. Время измерения для одного шага составляет 1 секунду, шаг 0,02 градуса, Cu К-альфа 1 излучение (1,54056 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0" TI="CF" HE="7" WI="3"> ) при 40 кB, 50 мА. Измерение проводят при углах от 2 до 42 2 тэта (2 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ).

Кристаллические модификации А, В и С и соединение в аморфном состоянии можно четко различить по соответствующим порошковым рентгеновским дифрактограммам (фиг.1).

На рентгеновской дифрактограмме модификации А имеются максимумы при значениях углов 2 тэта (2 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), равных 4,5, 6,4, 7,5, 7,7, 8,0, 8,2, 10,0, 10,2, 10,9, 11,1, 12,9, 13,4, 14,0, 14,5, 15,1, 15,6, 16,2, 16,5, 17,3, 17,5, 18,0, 18,9, 19,3, 19,5, 19,9, 20,1, 20,6, 21,0, 21,4, 22,7, 23,1 и 23,6.

Инфракрасная спектроскопия (ПК-спектроскопия)

ИК-спектры образцов в виде пленки суспензии в нуйоле (Nujol), состоящей из приблизительно 15 мг образца и приблизительно 15 мг нуйола, между двумя пластинками из хлорида натрия, регистрируют, используя ИК-спектрометр с преобразованием Фурье (ИК-ПФ) при пропускании. Спектрометр представляет собой спектрометр "Nicolet 20SXB" или эквивалентный (разрешение 2 см ^-1, 32 или более сопряженных сканирований, детектор "МСТ").

Кристаллические модификации А, В, С и соединение в аморфном виде легко различить по ИК-спектрам соединения в твердом состоянии (фиг.2, 3).

Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК)

ДСК-термограммы регистрируют, используя дифференциальный сканирующий калориметр "Mettler-Toledo" (DCS-820, DSC-821 соответственно с сенсорами FRS05, калибровка с использованием бифенила, бензойной кислоты, индия и цинка).

Для проведения измерения образец 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида величиной приблизительно от 2 мг до 6 мг помещают в алюминиевые тигли, взвешенные с высокой точностью и герметично закрытые перфорированными крышками. До начала измерения крышки автоматически прокалывают с получением при этом приблизительно 1,5 мм прорезей. Образцы затем нагревают в потоке азота, приблизительно 100 мл/мин, при скорости нагрева 5 К/мин до максимальной температуры, составляющей 180°С (фиг.4).

Различие кристаллических модификаций А, В и С может быть установлено по соответствующей температуре плавления. Для соединения в аморфном состоянии наблюдается стеклование.

Таблица 1
Термические характеристики типичных образцов модификаций А, В, С и аморфного состояния соединения 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 6-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> 6-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид.
Кристаллическая модификация	Модификация А	Модификация В	Модификация С	Аморфное состояние
Температура плавления (экстраполированный максимум [°С] по данным ДСК)	137,2	166,7	166,0	-
Температура стеклования (средняя точка второго нагревания), [°С]	-	-	-	81,5
Энтальпия плавления, [Дж/г]	43,0	60,8	46,4	-
Потеря массы (ТГА), [мас./мас.%]	1,3	<0,1	<0,1	0,21

Температуры плавления отдельных партий для модификации А могут варьироваться в пределах 128,3-148,5°С, для модификации В в пределах 161,8-171,3 и для модификации С в пределах 164,8-169,7 в зависимости от содержания в них остаточного растворителя.

Динамическая сорбция паров (DVS)

Кристаллические модификации В и С проявляют весьма схожее DVS-поведение (обратимое поглощение, составляющее<0,1 мас./мас.% воды при от 0 до 90% относительной влажности), которое отличается от поведения соединения в аморфном состоянии (обратимое поглощение, составляющее 0,8 мас./мас.% воды при от 0 до 90% относительной влажности) и от поведения кристаллической модификации А (обратимое поглощение, составляющее 3,1 мас./мас.% воды при от 0 до 90% относительной влажности) (фиг.5).

Показано, что различные физико-химические свойства приводят к различию фармакологических свойств, в особенности, к отличию фармакокинетических параметров, как показано ниже.

Материалы и методы

Кристаллическое вещество, модификации А, В, и С:

Единичные пероральные дозы 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида, модификация А и модификация В, составляющие 2 мг/кг, вводили четырем гончим собакам-самцам (возраст от 5 до 6 лет, масса тела от 11 до 14 кг, перекрестная методика исследования). Композиция представляет собой гранулят тонко измельченного соединения с 20% додецилсульфата натрия (SDS) в желатиновых капсулах.

В дополнение, четырем гончим собакам-самцам (возраст от 4 до 7 лет, масса тела от 11 до 14 кг) вводят единичные пероральные дозы, составляющие 2 мг/кг соединения 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид, модификация С, в виде тонко измельченного соединения с 10% додецилсульфата натрия (SDS) в желатиновых капсулах.

Собаки получают 200 г коммерчески доступного корма для собак (Pal® с содержанием жира приблизительно 7%) примерно за 30 минут перед введением соединения.

Соединение в аморфном состоянии:

Две собаки (возраст 8 лет, масса тела от 12 до 14 кг) получают 5 мг/кг соединения 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид в аморфном состоянии перорально в виде микросуспензии. Собак кормят до эксперимента и во время проведения эксперимента.

Образцы плазмы отбирают в различные моменты времени. Концентрацию в плазме 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида определяют с использованием селективного ЖХ-МС метода (жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектроскопией), чувствительность метода 10 нг/мл. Фармакокинетические параметры (например, AUC (сокр. от англ. area under the curve - площадь под кривой), C _max) определяют посредством математического анализа без использования модели с камерами (non-compartmental analysis) с использованием программы WinNonlin 3,1®.

Результаты (фиг.6-8)

Средние значения C_max и пероральной биодоступности в 1,7 и 1,9 раз выше после введения кристаллической модификации - формы А по сравнению с модификацией В. По наблюдениям за отдельными животными, 3 из 4 животных проявляют значительные различия по воздействию 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида на плазму после введения кристаллической модификации - формы А (от 2,1-кратного до 3,8-кратного различия в отношении пероральной биодоступности модификации А и модификации В).

Модификация С характеризуется приблизительно теми же средними значениями С_max и AUC (0-24 час), что и модификация А.

После введения соединения в аморфном состоянии (в виде микросуспензии) средняя экспозиция (количество) 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида является более высокой, чем в случае введения кристаллического соединения в желатиновых капсулах (приблизительно в 1,3-2 раза).

⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="" height=100 BORDER="0">

Суммируя, можно отметить, что, как и ожидалось, введение соединения в аморфном состоянии в виде микросуспензии приводит к более высокой экспозиции 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамида после перорального введения гончим собакам.

Модификация А проявляет наиболее высокую биодоступность среди трех кристаллических полиморфных модификаций А, В, и С после введения соединения в виде порошка в желатиновых капсулах (содержащих додецилсульфат натрия).

В случае перорального введения кристаллическая модификация А является предпочтительной.

Модификация А соединения 2-(3,5-бис-трифторметилфенил)-N-[6-(1,1-диоксо-1 ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-n-метилизобутирамида, патент № 2330022" SRC="/images/patents/135/2330022/2330022-5.gif" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ⁶-тиоморфолин-4-ил)-4-(4-фтор-2-метилфенил)пиридин-3-ил]-N-метилизобутирамид и фармацевтически приемлемые соли этого соединения могут быть использованы в качестве лекарственного средства, например в виде фармацевтического препарата. Фармацевтические препараты могут быть введены перорально, например в виде таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий.

Модификация А может быть использована вместе с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических препаратов. В качестве носителей для приготовления таблеток, например в качестве носителей для таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул, могут быть использованы лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновые кислоты или их соли и подобные им соединения. Подходящие носители для мягких желатиновых капсул представляют собой, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и подобные им вещества. В случае мягких желатиновых капсул в зависимости от природы активного соединения носитель может и не использоваться.

Фармацевтические композиции, кроме того, могут содержать консерванты, агенты, улучшающие растворимость, стабилизаторы, агенты, улучшающие смачиваемость, эмульгаторы, подсластители, подкрашивающие вещества, агенты, улучшающие вкус и запах, соли для регулирования осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Композиции также могут содержать и другие терапевтически значимые вещества.

Лекарственные средства, содержащие модификацию А или ее фармацевтически приемлемую соль и терапевтически инертный носитель, также являются объектом настоящего изобретения, так же как и способ их получения, который включает введение модификации А в состав фармацевтической формы вместе с одним или более терапевтически инертным носителем.

В соответствии с настоящим изобретением модификация А, а также ее фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы для контроля или профилактики заболеваний, связанных с NK1 рецепторами, например, таких как мигрень, прогрессирующий деформирующий артрит (ревматоидный артрит), астма, бронхиальная гиперреактивность, воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта или для лечения заболеваний, включающих болезнь Паркинсона, беспокойство, страх, тревогу, депрессию, боль, головную боль, болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, отек, аллергический ринит, болезнь Крона, травмы глаз, воспалительные заболевания глаз, психоз, морскую болезнь; тошноту, возникающую при езде или в полете, рвоту, непроизвольное мочеиспускание (энурез), психоиммунологические или психосоматические нарушения или расстройства, рак, синдром отмены у лиц, употреблявших наркотические лекарственные средства, седативные средства или никотин, травматические повреждения мозга или доброкачественная гиперплазия предстательной железы.

Наиболее подходящими показаниями в соответствии с настоящим изобретением являются такие, которые включают нарушения или расстройства центральной нервной системы, например, лечение или профилактика некоторых депрессивных расстройств.

Дозировка может варьироваться в широких пределах и безусловно должна подбираться с учетом индивидуальных требований в каждом конкретном случае. В случае перорального введения дозировка для взрослых может варьироваться в день от приблизительно 0,01 мг до приблизительно 1000 мг соединения общей формулы I или соответствующего количества его фармацевтически приемлемой соли. Дневная доза может быть введена в виде единичной дозы или разделенной на несколько дозировок, причем, в дополнение, верхний предел может быть превышен, если будет установлено, что для этого имеются показания.

Получение таблеток (влажное гранулирование)
Позиция	Ингредиенты, мг/таблетка
	5 мг	25 мг	100 мг	500 мг
1. Модификация А	5	25	100	500
2. Безводная лактоза "DTG"	125	105	30	150
3. "Sta-Rx 1500"	6	6	6	30
4. Микрокристаллическая целлюлоза	30	30	30	150
5. Стеарат магния	1	1	1	1
Суммарное количество	167	167	167	831

Методика приготовления

1. Смешать компоненты согласно позициям 1, 2, 3 и 4 и гранулировать, используя очищенную воду.

2. Высушить гранулы при 50°С.

3. Обработать гранулы с использованием подходящего оборудования для размола.

4. Добавить компонент согласно позиции 5 и перемешивать в течение 3 минут; прессовать с использованием подходящего пресса.

Получение капсул
Позиция	Ингредиенты		мг/капсула
	5 мг	25 мг	100 мг	500 мг
1. Модификация А	5	25	100	500
2. Водная лактоза	159	123	148	---
3. Кукурузный крахмал	25	35	40	70
4. Тальк	10	15	10	25
5. Стеарат магния	1	2	2	5
Суммарное количество	200	200	300	600

Методика приготовления

1. Смешать компоненты согласно позициям 1, 2 и 3 в подходящем смесителе в течение 30 минут.

2. Добавить компоненты согласно позициям 4 и 5 и перемешивать в течение 3 минут.

3. Поместить в подходящие капсулы.