способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней

Формула изобретения

Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida сероваров А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров 1 и П, грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных клеток с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных клеток, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных клеток с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип).

Однако данный способ экономически нецелесообразен: во-первых, не всегда в хозяйстве имеют место три вида инфекции: гемофилез, стрептококкоз и пастереллез; во-вторых, срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет.

Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа.

Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более одного раза в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел (млрд м.т), а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.

Гипериммунизацию волов проводят 7-10 внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд м.т. с интервалом 2-3 дня.

В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см³ крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т. каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.

Примеры выполнения грундиммунизации.

Пример 1. Для создания грундиммунитета волам двукратно подкожно в разные участки тела вводили инактивированные и концентрированные гемофилезные и пастереллезные антигены: сначала по 10 млрд м.т., а через 14 дней - по 20 млрд м.т. с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	A 1:2	1:2
реакция пассивной	В 1:4	1:4
гемагглютинации (РПГА)	D 1:2	1:2
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:8	1:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-19	1:16	1:16

Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 15 млрд м.т., а через 14 дней - по 25 млрд м.т. с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	A 1:2	1:2
реакция пассивной	В 1:4	1:4
гемагглютинации (РПГА)	D 1:2	1:2
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:8	1:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-19	1:16	1:16

Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации сначала до 15 млрд м.т., а через 14 дней до 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования.

Пример 3. Увеличили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 16 млрд м.т., а через 14 дней - по 26 млрд м.т. с добавлением 10 см ³ гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	A 1:2	1:2
реакция пассивной	В 1:4	1:4
гемагглютинации (РПГА)	D 1:2	1:2
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:8	1:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-19	1:16	1:16

Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации свыше сначала 15 млрд м.т., а через 14 дней - свыше 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования.

Увеличение дозы антигенов не выгодно с экономической точки зрения.

Пример 4. Уменьшили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 9 млрд м.т., а через 14 дней - по 19 млрд м.т. с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	А нет антител	1:2
реакция пассивной	В 1:2	1:4
гемагглютинации (РПГА)	D нет антител	1:2
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:2	1:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-19	1:2	1:16

Уменьшение дозы антигенов меньше сначала 10 млрд м.т., а через 14 дней - меньше 20 млрд м.т. привело к снижению титра антител после грундирования.

Таблица 1
Примеры			I	II	III	IV	Контроль(прототип свиньи)
Доза антигенов		I инъекция	10	15	16	9	1-2 (пастерелла)
(млрд м.т.)							2-3 (гемофилы)
		II инъекция	20	25	26	19	2-4 (пастерелла)
							6-8(гемофилы)
Активность	P.multocida
сыворотки	РПГА А		1:2	1:2	1:2	0	1:2
	В		1:4	1:4	1:4	1:2	1:4
	D		1:2	1:2	1:2	0	1:2
	H.pleuropneum.
	РА 5870		1:8	1:8	1:8	1:2	1:8
	ГУ-19		1:16	1:16	1:16	1:2	1:16

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Грундиммунизацию осуществляли подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 млрд м.т., а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см ³ гидроокиси алюминия.

Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т. каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме:

40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500 млрд м.т.

Результаты определения активности.

Титры полученной сыворотки составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	A 1:128	1:128
реакция пассивной	В 1:512	1:512
гемагглютинации (РПГА)	D 1:128	1:128
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:320	1:320
Реакция агглютинации (РА) ГУ-19	1:640	1:640

Пример 2. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т. каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 - 2-х недельный перерыв - 200-300-500-600 млрд м.т.

Результаты определения активности.

Титры получаемой сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida		A 1:128	1:128
РПГА		В 1:512	1:512
		D 1:128	1:128
H.pleuropneumoniae	5870	1:320	1:320
PA	ГУ-19	1:640	1:640

Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т. не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения.

Пример 3. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 7 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1800 миллиардов:

40-60-100-200-300-500-600 млрд м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida	A	1:128	1:128
РПГА	В	1:512	1:512
	D	1:128	1:128
H.pleuropneumoniae	5870	1:320	1:320
PA	ГУ-19	1:640	1:640

Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т.не привело к снижению титра антител в сыворотке.

Пример 4. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 6 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1300 каждого антигена по схеме:

40-60-150-250-350-450 млрд м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida	A	1:64	1:128
РПГА	В	1:256	1:512
	D	1:64	1:128
H.pleuropneumoniae	5870	1:160	1:320
PA	ГУ-19	1:320	1:640

Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т. каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.

Таблица 2
Примеры		I	II	III	IV	Контроль(прототип свиньи)
Количество инъекций антиген		10	11	7	6	10
Кол-во микробных тел (млрд)	P.multocida H.pleuropneum.	2400 2400	3000 3000	1800 1800	1300 1300	1000 1000
Активность	P.multocida
сыворотки	РПГА А	1:128	1:128	1 128	1:64	1:128
	В	1:512	1:512	1 512	1:256	1:512
	D	1:128	1:128	1 128	1:64	1:128
	H.pleuropneum.
	PA 5870	1:320	1:320	1:320	1:160	1:320
	ГУ-19	1:640	1:640	1:640	1:320	1:640

Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.

Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами:

1/ увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.3).

Таблица 3
Вид продуцента	Вес (кг)	Кол-во крови с 1 кг живого веса животного (мл)	Выход (мл)
свиньи волы	150-160 400-450	13 16	1950-2080 6400-7200

2/ более прост в исполнении и менее трудоемок.

Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов - не менее 5 лет.

Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время, как волов - раз в 5 лет.

3/ более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза в хозяйствах, в которых отсутствует стрептококковая инфекция.

Источник информации

RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип.