производные разветвленного полиаминостероида

Формула изобретения

1. Стероидное соединение формулы I

в которой указывает на возможность двойной связи;

R1 представляет насыщенный или ненасыщенный С_2-10алкил с прямой или разветвленной цепью или метил;

R2 представляет собой СООН или фрагменты формул VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XVI, XVII, XVIII, XIX, XX, XXI, XXII или XXIII

R3 представляет собой водород или O-R19, где R19 представляет водород или C_1-6ацил;

R4 представляет собой водород; R5 представляет собой водород или метил; R6 представляет собой водород или метил; R7 представляет собой водород; R8 представляет собой водород; R9 представляет собой водород; R10 представляет собой водород или метил; R11 представляет собой гидрокси, OSO₃, -O-ацил, -(Z)_n-(NR-Z)_p-N(R) ₂, где Z представляет собой линейный углеводородный дирадикал, n равно 0 или 1, p равно 1, R представляет собой водород, С _1-6алкил или С_1-6аминоалкил, каждый из которых необязательно замещен С_1-6алкилом;

R12 представляет собой водород; R13 представляет собой водород; R15 представляет собой водород; R16 представляет собой водород или гидрокси; R17 представляет собой водород; R18 представляет собой водород или метил;

каждый из R9, R15 и R18 независимо отсутствует в случае, когда одно из конденсированных колец В, С и D является ненасыщенным для того, чтобы все валентности соответствующего углеродного атома были заняты;

при условии, что, по меньшей мере, один из R2 и R11 представляют -(Z)_n -(NR-Z)_p-N(R)₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂,

и его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры.

2. Соединение по п.1, в котором R11 представляет собой - (Z)_n-(NR-Z) _p-N(R)₂.

3. Соединение по п.1, в котором R1 представляет собой метил.

4. Соединение по п.1, в котором R1 представляет собой фрагмент формулы II

где углерод-углеродная связь обозначенная символом "*" представляет собой простую или двойную связь.

5. Соединение по любому из пп.1-4, в котором R19 представляет собой C_1-6ацил.

6. Соединение по любому из пп.1-4, в котором R11 и/или R16 представляет ОН.

7. Соединение по п.5, в котором R11 и/или R16 представляет ОН.

8. Соединение по любому из пп.1-4, в котором R11 представляет группу -OSO₃.

9. Соединение по любому из пп.1-4, в котором R11 представляет группу -O-ацил.

10. Соединение по п.1, представляющее соединение общей формулы Ia

11. Соединение по п.1, представляющее соединение общей формулы Ib

12. Соединение по п.10 или 11, в котором R11 и R16 оба представляют собой гидроксигруппу.

13. Соединение по п.10 или 11, в котором R3 представляет собой -OR19, где R19 представляет С_1-6ацил.

14. Соединение по п.10 или 11, в котором R1 представляет собой метил.

15. Соединение по п.10 или 11, в котором R1 представляет насыщенный или ненасыщенный С_2-10алкил с прямой или разветвленной цепью.

16. Соединение по п.10 или 11, в котором R1 представляет фрагмент формулы II

в которой углерод-углеродная связь, обозначенная символом "*" представляет собой простую или двойную связь.

17. Соединение по п.10 или 11, в котором R11 представляет собой -(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂.

18. Соединение по п.17, в котором R2 представляет собой СООН.

19. Соединение по п.17, в котором R3 представляет собой -OR19, где R19 представляет С _1-6ацил.

20. Соединение по п.17, в котором R1 представляет собой метил.

21. Соединение по п.17, в котором R1 представляет собой насыщенный или ненасыщенный С_2-10 алкил с прямой или разветвленной цепью.

22. Соединение по п.17, в котором R1 представляет собой фрагмент формулы II

в которой углерод-углеродная связь, обозначенная символом "*" представляет собой простую или двойную связь.

23. Соединение по любому из пп.1, 10 или 11, в котором R2 и/или R11 представляют фрагмент формул XI, XIII,XVI, XVIII, XX или XXII

24. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис[2'-аминоэтил)амино]этил}-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-13(17)-ен-17,20,24,25-тетрагидрофусидан-21-карбоксамид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3 -дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-9(11)-ен-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

24-N-[2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3 -гидрокси-5 -холан-24-амид,

22-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-23,24-биснор-5-холеник-22-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}фусид-21-амид,

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}фусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3-OSO ₃-11-дезокси-17,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

22-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-23,24-биснор-5-холеник-22-амид,

21-Н-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-3-ОАс-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-3-OSO ₃-11-дезокси-17,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-11-дезокси-16-дезацетокси-17R,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

3-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}фусидовая кислота,

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

24-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-3 -гидрокси-5 -холан-24-амид,

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-11-дезокси-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

3-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-фусидовая кислота,

3-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}фусидовая кислота,

21-N-{3-({4'-[(3'-аминопропил)метиламино]бутил}метиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-({3'-[(3'-аминопропил)этиламино]пропил}этиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-({4'-[(3'-аминопропил)этиламино]бутил}этиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3-({3'-[(3'-аминопропил)этиламино]пропил}этиламино)пропил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид,

21-N-{3'-({4'-[(3'-аминопропил)циклопропилметиламино]бутил}циклопропилметиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид, и

21-N-{3'-({3'-[(3'-аминопропил)-(3'-диметиламинопропил)амино]пропил}11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид.

25. Антибактериальная фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по любому из пп.1-24 в эффективном количестве, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, и необязательно другие терапевтически активные агенты.

26. Применение соединения по любому из пп.1-24 для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики бактериальных инфекций.

27. Способ профилактики или лечения бактериальных инфекционных заболеваний, включающий введение пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-24.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым соединениям, обладающим широким спектром антибактериальной активности, конкретно к стероидам, содержащим разветвленные полиаминовые боковые цепи, а также к применению таких соединений в качестве бактерицидных средств для лечения различных инфекций.

Устойчивость к действию лекарственных средств при использовании антибиотиков становится все большей проблемой, связанной с угрозой для здоровья. Существующее в течение многих лет убеждение в том, что инфекционные заболевания можно контролировать современным арсеналом антибактериальных лекарственных средств, обусловило разработку немногочисленных новых и более эффективных лекарств. Однако последние данные о полирезистентности патогенных бактерий возродили интерес к разработке новых антибиотиков. Хотя устойчивость к действию многих антибиотиков, например бета-лактамов, макролидов, тетрациклинов и аминогликозидов, и быстрый рост такой устойчивости известен в течение многих лет, предполагалось, что такие резервные лекарственные средства, как гликопептиды и фторхинолоны, способны эффективно противодействовать большинству инфекций. Однако, в связи с большим числом тревожных сообщений об устойчивости к действию ванкомицина, множественной лекарственной устойчивости и примерами переноса резистентных генов между различными видами, появившимися в конце восьмидесятых и в начале девяностых годов, проблема лекарственной резистентности становится предметом внимания здравоохранительных учреждений и фармацевтической промышленности. В связи с этим важной задачей остается выявление новых соединений, обладающих антибактериальной активностью.

Стероиды представляют собой группу соединений, обнаруженных в живых организмах, основным примером которых являются гормоны. Все стероиды имеют общую основу или ядра, включающие три шестичленных кольца и одно пятичленное кольцо, и в связи с этим могут считаться производными циклопентанонпергидрофенантрена. Стероиды обладают важнейшими биологическими свойствами. Они оказывают решающее влияние на катаболизм и анаболизм всех основных биохимических веществ, таких как протеины, карбогидраты и липиды, и их действие заключается в индуцировании синтеза ферментов, регулирующих уровень содержания указанных биохимических соединений. Гормоны могут быть классифицированы на эстрогены, андрогены, прогестины, минералокортикоиды и глюкокортикоиды. Они регулируют важнейшие аспекты биологической деятельности, например рост и функционирование костной и мышечной ткани, давление крови, уровень содержания глюкозы в крови и развитие половых признаков. Выполняя множество биологических функций, стероиды в виде гормонов, или в виде их близких по химическим свойствам производных, сами по себе являются мощными лекарственными средствами в отношении различных заболеваний. Стероиды используют в заместительной терапии при лечении пациентов с недостаточной выработкой стероидов; глюкокортикоиды в больших концентрациях применяются системно и локально в качестве противовоспалительных и иммуносупрессорных агентов; эстрогенные и прогестиновые стероиды используются для лечения дисфункций репродуктивной системы и, чаще, в качестве контрацептивов.

Антибиотическим действием обладает ограниченное число стероидов, например фусидовая кислота. Фусидовая кислота, являющаяся продуктом ферментации Fusidium coccineum, известна с начала 1960 гг. (патент США 3072531). Фусидовая кислота (например, Fucidin®, LEO Pharmaceutical Products Ltd, Denmark) используется в клинических условиях для лечения инфекционных заболеваний, например стафилококковых инфекций, и этот препарат применяют как местно, так и системно (Kuchers et al., 1997 и цитированные в документе ссылки; Duvold et al., 2001 и цитированные в документе ссылки; Christiansen, 1999, и цитированные в документе ссылки). Обычно этот препарат применяют совместно с традиционными антибиотиками, такими как пенициллины, эритромицины или клиндамицин.

Недавно стероидный антибиотик был выделен из желудка акулы-dogfish, Squalus acanthias (Moore et al., 1993; Rao et al., 2000). Такое соединение со стероидной основой, содержащей линейный полиамин и сульфатную функциональную группу, было названо скваламином (squalamine) и было установлено, что это вещество обладает широким спектром бактерицидных свойств в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибков и простейших организмов. Использование природного скваламина в качестве противомикробного средства раскрыто в US 5192756. Был осуществлен химический синтез скваламина, хотя для этого использовали достаточно сложную методику. Ряд скваламиновых аналогов и их использование в качестве антибиотиков раскрыты в WO 00/09137.

Другие скваламиновые аналоги, содержащие полиаминовые боковые цепи, раскрыты в WO 02/14342, а также в работе B. Ding et al., J. Med. Chem. 45, 2002, pp. 663-669.

Об антибиотических свойствах самих разветвленных полиаминов не сообщается.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что стероидные производные, содержащие стероидную основу, соединенную с разветвленным полиамином, представляют собой соединения с широким спектром антимикробной и, особенно, бактерицидной активности. Разветвленный полиаминовый фрагмент придает антибактериальную активность стероидам, не обладающим такой активностью, и усиливает бактерицидную активность стероидов, обладающих ею изначально.

Таким образом, настоящее изобретение относится к соединению формулы I

в которой конденсированные кольца А, В, С и D, независимо друг от друга, являются насыщенными или частично или полностью ненасыщенными кольцами;

связь между С-17 и С-20 изображена сплошной и пунктирной линией для обозначения того, что указанная связь может быть одинарной или двойной;

R1 представляет водород, галоген, липофильную группу, -(Z) _n-(NR-Z)_p-N(R)₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂, где n равно 0 или 1, а р представляет целое число от 1 до 5;

каждый Z, независимо друг от друга, представляет углеводородный бирадикал с прямой или разветвленной цепью, необязательно замещенный С_1-6алкилом, С_1-6алкенилом, С_1-6 алкинилом, гидрокси, алкокси, амино, С_1-6 аминоалкокси, С_1-6аминоалкилом, С _1-6аминоалкиламинокарбонилом, С_1-6 алкилС_3-8циклоалкилом или С _1-6алкилгетероарилом;

каждый R, независимо друг от друга, представляет водород или С_1-6алкил, С_1-6аминоалкил, С_1-6 аминоалкокоси или С_1-6аминоалкиламинокарбонил, причем все перечисленные группы необязательно замещены алкилом или С_1-6аминоалкилом;

при условии, что, по меньшей мере, один Z замещен С_1-6 алкилом, С_1-6алкенилом, С _1-6алкинилом, гидрокси, алкокси, С_1-6 аминоалкокси, С_1-6аминоалкилом, С _1-6аминоалкиламинокарбонилом, С_1-6 алкилС_3-8циклоалкилом или С _1-6алкилгетероарилом, или, по меньшей мере, один R отличается от водорода;

R2 представляет галоген, С _1-4алкил, необязательно замещенный СООН; С _1-4алкокси, -СООН, -(Z)_n-(NR-Z) _p-N(R)₂ или C(O)-(Z) _n-(NR-Z)_p-N(R)₂ ;

R3 представляет водород, галоген или О-R19, где R19 представляет водород, -SO₃, C_1-6 алкил, С_1-6ацил или -(Z) _n-(NR-Z)_p-N(R)₂ ;

каждый из R4, R7, R8, R10, R11, R12, R13, R16 и R17, независимо друг от друга, представляет водород, галоген, гидрокси, -OSO₃, -O-ацил, -(Z)_n -(NR-Z)_p-N(R)₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂;

каждый из R5, R6, R9, R14, R15 и R18, независимо друг от друга, представляет водород или метил, или каждый независимо отсутствует в том случае, когда одно из конденсированных колец А, В, С и D является ненасыщенным, для того чтобы все валентности соответствующего углеродного атома были заняты;

при условии, что, по меньшей мере, один, но не более трех из заместителей R1, R2, R4, R7, R8, R10, R11, R12, R13, R16 и R17 представляют -(Z)_n-(NR-Z) _p-N(R)₂ или C(O)-(Z) _n-(NR-Z)_p-N(R)₂ ;

а также к его фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам.

Точный механизм действия соединений настоящего изобретения в настоящее время неизвестен. Не ограничиваясь конкретной гипотезой, предполагается, что эти соединения способны перфорировать клеточные мембраны, и в результате образования пор может осуществляться лизис мембран. Предполагается, что соединения настоящего изобретения способны влиять на два основных механизма резистентности к лекарственным средствам, оказывающим воздействие на некоторые другие антибиотики, которые касаются деградации клеток под действием ферментов и маршрутов экспорта (Sadownik et al., 1995; Savage and Li, 2000 и ссылки в этой работе).

Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом или разбавителем.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы I в производстве лекарственного средства для профилактики или лечения инфекций.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения инфекций, включающему введение пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества соединения формулы I.

На Фиг.1 представлена кинетика изменения минимальной бактерицидной концентрации (MBC) соединения 102 в отношении S.aureus.

На Фиг.2 представлена кинетика изменения минимальной бактерицидной концентрации (MBC) соединения 102 в отношении S.pyogenes.

В контексте настоящего описания термин «углеводород» относится к соединению, содержащему только углерод и водород, в котором углеродные атомы образуют линейную или разветвленную цепь.

Термин «алкил» используется для обозначения одновалентного радикала, образующегося из алкана с прямой или разветвленной цепью в результате удаления атома водорода от любого углеродного атома. Такой термин включает подклассы первичных, вторичных и третичных алкилов, таких как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, н-гексил и изогексил.

Термин «алкенил» относится к одновалентному радикалу, полученному из алкена с прямой или разветвленной цепью в результате удаления атома водорода от любого углеродного атома. Этот термин включает подклассы первичных, вторичных и третичных алкенилов, таких как винил, 1-пропенил, изопропенил, бутенил, трет-бутенил, пентенил и гексенил.

Термин «алкинил» относится к одновалентному радикалу, полученному из алкина с прямой или разветвленной цепью в результате удаления атома водорода от любого углеродного атома. Этот термин включает этинил, пропинил, изопропинил, трет-бутинил, пентинил и гексинил.

Термин «алкокси» используется для обозначения радикала формулы OR', в которой R' представляет указанный выше углеводородный радикал, например метокси, этокси, пропокси, бутокси и т.п.

Термин «алкоксикарбонил» используется для обозначения радикала формулы -COOR', в которой R' представляет указанный выше углеводородный радикал, например метоксикарбонил, этоксикарбонил, н-пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил и т.п.

Термин «циклоалкил» используется для обозначения насыщенного циклоалканового радикала, например циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила. Аналогичным образом, термин «циклоалкенил» используется для обозначения циклоалкенового радикала, например циклопропенила, циклобутенила, циклопентенила или циклогексенила.

Термин «арил» используется для обозначения радикалов карбоциклических ароматических колец, необязательно конденсированных бициклических колец, например фенила или нафтила. Термин «гетероарил» используется для обозначения радикалов гетероциклических ароматических колец, в частности 5- или 6-членных колец с 1-3 гетероатомами, выбранными из O, S и N, или необязательно конденсированных бициклических колец с 1-4 гетероатомами, примерами которых являются пиридил, тетразолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиенил, пиразинил, изотиазолил, бензимидазолил и бензофуранил.

Термин «ацил» относится к радикалу формулы -СО-R', в которой R' представляет определенный выше углеводородный радикал.

Термин «аралкил» используется для обозначения ароматического кольца с алкильной боковой цепью, например бензила.

Термин «галоген» используется для обозначения фтора, хлора, брома или йода.

Термин «амино» используется для обозначения радикала формулы -NR"₂, в которой каждый R", независимо друг от друга, представляет водород или углеводородный радикал.

Термин «аминоалкокси» относится к радикалу формулы -OR'-NR"₂, в которой R' представляет углеводородный бирадикал, а каждый R", независимо друг от друга, представляет водород или углеводородный радикал.

Термин «аминоалкил» относится к радикалу формулы -R'-NR"₂, в которой R' представляет углеводородный бирадикал, а каждый R", независимо друг от друга, представляет водород или углеводородный радикал.

Термин «аминоалкиламинокарбонил» относится к радикалу формулы -С(О)-NR"-R'-NR"₂, в которой R' представляет углеводородный бирадикал, а каждый R", независимо друг от друга, представляет водород или углеводородный радикал.

Термин «разветвленный полиамин» используется для обозначения соединения общей формулы NHR-(Z)_n -(NR-Z)_p-N(R)₂, в которой n и р, и каждый R и Z, независимо друг от друга, определены выше, причем, по меньшей мере, один R имеет значение, отличное от водорода и, по меньшей мере, один Z замещен С _1-6алкилом, С_1-6алкенилом, С _1-6алкинилом, гидрокси, алкокси, С_1-6 аминоалкилом, С_1-6аминоалкокоси, С _1-6аминоалкиламинокарбонилом, С_1-6 алкилС_3-8циклоалкилом или С _1-6алкилгетероарилом.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» используется для обозначения солей щелочных и щелочно-земельных металлов, например солей натрия, калия, магния или кальция, а также солей серебра и солей с такими основаниями, как аммоний или подходящие нетоксичные амины, например низшие алкиламины, например триэтиламин, гидроксисодержащие низшие алкиламины, например 2-гидроксиэтиламин или бис-(2-гидроксиэтил)амин, циклоалкиламины, например дициклогексиламин, или бензиламины, такие как N,N-дибензилэтилендиамин и дибензиламин, а также солей присоединения подходящих органических или неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, йодистоводородная, серная, азотная, фосфорная, уксусная, молочная, малеиновая, фталевая, лимонная, пропионовая, бензойная, глутаровая, глюконовая, метансульфоновая, салициловая, янтарная, винная, толуолсульфоновая, сульфаминовая или фумаровая кислоты.

Термин «фармацевтически приемлемые эфиры» используется для обозначения таких легко гидролизуемых сложных эфиров, как алканоилоксиалкиловые, аралканоилоксиалкиловые, ароилоксиалкиловые эфиры, например ацетоксиметиловый, пивалоилоксиметиловый, бензоилоксиметиловый эфиры и соответствующие 1'-оксиэтиловые производные, или алкоксикарбонилоксиалкиловые эфиры, например метоксикарбонилоксиметиловые и этоксикарбонилоксиметиловые эфиры и соответствующие 1'-оксиэтиловые производные, или лактониловые эфиры, например фталидиловые эфиры, или диалкиламиноалкиловые эфиры, например диметиламиноэтиловые эфиры. Легко гидролизуемые сложные эфиры включают in vivo гидролизуемые сложные эфиры соединений формулы I. Такие сложные эфиры могут быть получены общепринятыми способами, известными специалистам в данной области, например способом, раскрытым в GB Patent № 1490852, включенном в настоящее описание в виде ссылки.

Термины «антибиотический» и «антибактериальный (антимикробный)» взаимозаменяемы и имеют одинаковое значение.

Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения R2, R7, R11 и/или R16 представляют-(Z)_n -(NR-Z)_p-N(R)₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂.

Конкретными примерами R19 являются С_1-6алкил и С_1-6 ацил.

Конкретным примером R7, R11 и R16 является -ОН. Соединения формулы I, в которой R11 представляет O-SO₃ или О-ацил, также считаются особенно подходящими. Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению общей формулы Ia или Ib

в которых R1, R2, R3, R4, R7, R8, R10, R11, R12, R13, R16 и R17 имеют указанные выше значения.

Конкретными примерами соединений настоящего изобретения являются соединения формулы Ia или Ib, в которых R2 представляет -(Z) _n-(NR-Z)_p-N(R)₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z)_p -N(R)₂, особенно те, в которых R7 и R11 оба представляют гидрокси; R11 и R16 оба представляют гидрокси; или R3 представляет -OR19, где R19 представляет С _1-6алкил или С_1-6ацил.

Еще более характерными примерами соединений настоящего изобретения являются соединения формулы Ia или Ib, в которой R11 представляет -(Z)_n-(NR-Z)_p-N(R) ₂ или C(O)-(Z)_n-(NR-Z) _p-N(R)₂, особенно в том случае, когда R2 представляет С_1-4алкил, необязательно замещенный СООН; С_1-4алкокси или -СООН; или когда R3 представляет -OR19, где R19 представляет С _1-6алкил или С_1-6ацил.

В соединениях формулы I и, более конкретно, формулы Ia или Ib, R1 предпочтительно представляет липофильную группу, т.е. преимущественно неполярную группу. Предполагается, что неполярный характер заместителей R1 ответственен за способность соединений настоящего изобретения к размещению в клеточной мембране, которая также имеет липофильную природу. Примерами таких липофильных групп являются C _1-10алкил, арил, С_3-8циклоалкил, аралкил с 1-10 углеродными атомами в алкильном фрагменте, С _1-10алкиларил, С_1-10алкилС _3-8циклоалкил, С_1-10алкокси и гетероарил. Предпочтительно, R1 представляет насыщенный или ненасыщенный С_1-10углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, например фрагмент формулы II

в которой углерод-углеродная связь, обозначенная символом "*", является одинарной или двойной связью.

Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения R2 и/или R11 представляют фрагмент формул VIII, IX, X, XI, XII или XIII, приведенных ниже:

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения соединения формулы I выбирают из группы, включающей

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 101),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 102),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 103),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-13(17)-ен-17,20,24,25-тетрагидрофусидан-21-карбоксамид (соединение 104),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3 -дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 105),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-9(11)-ен-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 106),

24-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3 -гидрокси-5 -холан-24-амид (соединение 107),

22-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-23,24-биснор-5-холеник-22-амид (соединение 108),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}фусид-21-амид (соединение 109),

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}фусид-21-амид (соединение 110),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-3-OSO ₃-11-дезокси-17,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 111),

21-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}-11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 112),

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 113),

22-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-23,24-биснор-5-холеник-22-амид (соединение 114),

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-3-ОАс-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 115),

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-3-OSO ₃-11-дезокси-17,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 116),

21-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}-}-11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 117),

3-N-{2'-[бис(2'-аминоэтил)амино]этил}фусидовая кислота (соединение 118),

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 119),

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 120),

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 121),

24-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-3 -гидрокси-5 -холан-24-амид (соединение 122),

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}-11-дезокси-16-дезацетокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 123),

3-N-{3'-[бис(3'-аминопропил)амино]пропил}фусидовая кислота (соединение 124),

3-N-{3'-[(3'-аминопропил)(метил)амино]пропил}фусидовая кислота (соединение 125),

21-N-{3-({4'-[(3'-аминопропил)метиламино]бутил}метиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 126),

21-N-{3'-({3'-[(3'-аминопропил)этиламино]пропил}этиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 127),

21-N-{3'-({4'-[(3'-аминопропил)этиламино]бутил}этиламино)пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 128),

21-N-{3-({3'-[(3'-аминопропил)этиламино]пропил}этиламино)пропил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 129),

21-N-{3'-({4'-[(3'-аминопропил)циклопропилметиламино]бутил}циклопропилметиламино)-пропил}-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 130),

21-N-{3'-[(3'-аминопропил)-(3'-диметиламинопропил)амино]пропил}-11-дезокси-17R,20S,24,25-тетрагидрофусид-21-амид (соединение 131),

и их фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры.

Наименования перечисленных выше соединений даны в соответствии с номенклатурой IUPAC для разветвленной полиаминовой боковой цепи и конвенциями по названию фусидана и стероида для стероидных фрагментов. Для обозначений использовалась программа, доступная на http://www2.acdlabs.com/ilab/.

Соединения формулы I содержат хиральные центры и углерод-углеродные двойные связи, что предусматривает существование стерео- и геометрических изомеров. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение относится ко всем изомерным и таутомерным формам соединений, охватываемым формулой I, как в виде чистых соединений, так и в виде их смесей.

Фармацевтические композиции

Композиции настоящего изобретения содержат в качестве активного компонента, по меньшей мере, одно соединение формулы I (на которое далее ссылаются как на активный ингредиент), включая его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры, вместе, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем.

Отношение активного ингредиента к носителю в указанной композиции может изменяться от 0,5% до 100% масс, главным образом, от 0,1 до приблизительно 50% масс. Композиции могут быть приготовлены в форме различных фармацевтических рецептур, таких как грануляты, таблетки, пилюли, драже, суппозитории, капсулы, таблетки с замедленным высвобождением, суспензии, препараты для инъекций, и могут быть помещены в пузырьки, тубы или аналогичные контейнеры в соответствии с общепринятыми принципами составления фармацевтических рецептур, например, описанных в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Ed., Mack Publishing Company, 2000. Для составления композиций, содержащих соединения настоящего изобретения, можно использовать следующие фармацевтически приемлемые органические или неорганические, твердые или жидкие носители и/или разбавители, подходящие для перорального, энтерального, парентерального или местного применения: вода, желатин, лактоза, крахмал, стеарат магния, тальк, растительные и животные масла и жиры, бензиловый спирт, камедь, полиалкиленгликоль, вазелин, масло какао, ланолин и другие эмульгирующие агенты, в качестве дополнительных агентов можно использовать соли для регулирования осмотического давления или буферы, обеспечивающие соответствующее значение рН.

Кроме того, композиция может содержать другие терапевтически активные компоненты, которые можно применять вместе с соединениями изобретения для лечения инфекционных заболеваний, например другие подходящие антибиотики, в частности такие антибиотики, которые способны повышать активность композиции и/или препятствовать развитию резистентности. Такие антибиотики включают пенициллины, цефалоспорины, тетрациклины, рифамицины, эритромицины, линкомицин, клиндамицин и фторхинолоны. Другие соединения, которые можно успешно комбинировать с соединениями изобретения, особенно в препаратах для местного применения, включают, например, кортикостероиды, такие как гидрокортизон или триамцинолон. Альтернативно, другие такие терапевтически активные компоненты можно вводить (либо одновременно, либо последовательно) в качестве средств, сопутствующих применению композиции настоящего изобретения.

В случае гранулятов, таблеток, капсул или драже фармацевтическая композиция настоящего изобретения содержит от 25 до 98% активного ингредиента изобретения, а в случае пероральных суспензий соответствующее количество активного ингредиента составляет от 2 до 20%.

Когда активный ингредиент вводят в виде солей фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот или оснований, желательно, чтобы предпочтительные соли легко или умеренно растворялись в воде с целью обеспечения соответствующей скорости поглощения.

Как отмечалось выше, соединения формулы I и их соли могут содержаться в фармацевтических препаратах, включая суспензии, мази и кремы. Фармацевтический препарат для перорального применения также может быть в виде суспензии активного ингредиента, как такового или в виде фармацевтически приемлемой соли с умеренной растворимостью в воде, причем такой препарат содержит носитель в количестве от 20 до 100 мг/мл. Фармацевтический препарат для местного применения может быть в виде мази или крема, с содержанием активного ингредиента в количестве от 0,5 до 50% от количества препарата. Препараты для местного применения являются особенно подходящими благодаря устойчивости к действию солнечного света и соответствующей липофильной природе соединений настоящего изобретения.

Дозировка соединений настоящего изобретения может быть выбрана таким образом, чтобы достигалась желаемая активность без серьезных побочных эффектов. При системной терапии человека соединения настоящего изобретения и их соли обычно вводят (для взрослых) в дозированных единицах, содержащих не менее 50 мг и до 1000 мг, предпочтительно от 200 до 750 мг, в расчете на соединение формулы I.

Термин «дозированная единица» обозначает единичную дозу, которая может быть введена пациенту и которая может быть легкой в обращении и при упаковке, оставаясь физически и химически стабильной единичной дозой, содержащей либо только активный ингредиент, либо его смесь с одним или несколькими твердыми или жидкими фармацевтическими разбавителями или наполнителями.

Соединение в виде дозированной единицы можно вводить один или несколько раз в день, через определенные интервалы времени, однако всегда в зависимости от состояния пациента и в соответствии с предписанием врача.

При системном лечении дневная дозированная единица предпочтительно составляет 0,5-3 г активного ингредиента.

Термин «используемая единица» применительно к местному применению обозначает используемую, т.е. единичную, дозу, которая может быть введена локально пациенту в количестве от 0,1 до 10 мг, предпочтительно, от 0,2 до 1 мг активного ингредиента в расчете на квадратный сантиметр инфицированной площади.

Для применения рассматриваемой композиции путем инъекции предусматриваются закрытая ампула, пробирка или аналогичный контейнер, содержащий парентерально применимый стерильный водный или масляный раствор для инъекций или дисперсию активного ингредиента в виде единичной дозы.

Парентеральные препараты особенно полезны для лечения таких состояний, при которых желательна быстрая реакция на лечение. При непрерывной терапии пациентов, страдающих инфекционными заболеваниями, подходящей формой фармацевтического препарата могут быть таблетки или капсулы, что связано с продолжительным действием лекарства при пероральном применении, особенно в виде таблеток пролонгированного действия.

При лечении инфекционных заболеваний предпочтительны таблетки, содержащие другие активные компоненты, как указано выше.

Согласно способу лечения пациентов, страдающих инфекционными заболеваниями, соединение формулы I или эквивалентное количество его соли или эфира можно вводить пациентам в дозе по 0,03-0,7 г/кг массы тела 1-3 раза в день, предпочтительно 0,5-3 г в день. Активный ингредиент предпочтительно вводить в указанных выше дозированных единицах.

Пациентами, которых могут лечить или лечат согласно изобретению, могут быть животные, включая млекопитающих, и особенно люди. Животные могут также включать таких домашних животных, как лошади, коровы, свиньи, овцы, домашняя птица, рыбы, кошки, собаки и другие зоологические животные.

Лечение инфекционных заболеваний часто включает установление резистентности указанного заболевания к предполагаемому лечению, которое часто проводят до фактического начала лечения. Так, например, у пациента могут брать образцы, содержащие инфицирующие микробы, например образцы крови или мочи, после чего образец подвергают культивации и воздействию лечения с целью выяснения реакции организма на лечение указанной инфекции. Соответственно, настоящее изобретение также обеспечивает способ идентификации соединений с бактерицидным действием, включающий контактирование микроорганизма с соединением формулы I, необязательно вместе с другими терапевтически активными агентами, и установление токсического или статического действия указанного соединения или смеси соединений на изучаемый микроорганизм.

Композиции настоящего изобретения не ограничиваются фармацевтическими препаратами, но также могут применяться в не терапевтическом контексте для контроля микробного роста. Так, например, селективность бактерицидных агентов делает их полезными веществами, усиливающими рост конкретных микроорганизмов (таких как непатогенные микроорганизмы) за счет роста других микроорганизмов в многовидовой культуре.

Далее настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами получения соединений изобретения и примерами их применения, не ограничивающими заявленную область изобретения.

Примеры получения и применения соединений изобретения

Способы получения соединений изобретения

Исходные стероидные соединения

Исходные карбоксозамещенные стероидные аналоги могут быть приобретены коммерческим путем или получены способами, описанными в литературе. Стероиды, родственные фусидовой кислоте, могут быть получены по различным литературным методикам из природных фусиданов, таких как фусидовая кислота, фумигацин, виридоминовые кислоты, и соединений семейства цефалоспорина Р (см., например, Godtfredsen and Vangedal, 1962; Arigoni et al., 1964; Godtfredsen et al., 1965_a и 1965_b; Godtfredsen et al., 1966; Diassi et al., 1979; von Daehne и цитированные в этих документах ссылки, содержание которых включено в настоящее описание в виде ссылки), или хорошо известной для специалиста простой химической модификацией перечисленных выше фусиданов, включающей гидрирование двойных связей, реакции дегидратации, сульфирования и окисления.

Сульфирование гидроксильных групп:

Согласно имеющимся литературным данным (Kinney et al., 2000) все соединения настоящего изобретения, содержащие одну или несколько свободных гидроксильных групп, могут быть подвергнуты селективному сульфированию либо по одной гидроксильной группе, либо по нескольким гидроксильным группам, с использованием стехиометрического количества или избытка комплекса триоксид серы-пиридин. Сульфирование проводят перед реакциями сочетания А, В и С.

Ацилирование гидроксильных групп

Ацилирование свободных гидроксильных групп стероидных производных проводят, используя избыток уксусного ангидрида в пиридине, при комнатной температуре в безводных условиях.

Восстановление двойных связей

Восстановление двойных связей стероидных производных осуществляют каталитическим гидрированием с использованием палладия на угле в качестве катализатора и уксусной кислоты, МеОН, EtOH или этилацетата в качестве растворителя. Реакции проводят при встряхивании в течение 6-20 часов при комнатной температуре.

Дегидратация гидроксильных групп

Дегидратацию 11-ОН группы производных фусидовой кислоты осуществляют путем их обработки избыточным количеством тионилхлорида в пиридине и дихлорметане при 0°C в безводных условиях.

Удаление 16-ацетоксигруппы

16-Ацетоксигруппа производных фусидовой кислоты может быть удалена в безводных условиях, при нагревании с обратным холодильником соответствующего метилового эфира в безводном метаноле в присутствии избыточного количества магниевой стружки. Метиловый эфир затем удаляют нагреванием с обратным холодильником в течение 1 часа в водном растворе гидроксида натрия.

Окисление гидроксильных групп

Стероиды, содержащие кето- или альдегидные функциональные группы, могут быть получены из соответствующих спиртов различными методами окисления, которые хорошо известны специалисту в данной области.

Исходные вещества на основе разветвленного полиамина

Разветвленные полиамины обычно выбирают из коммерчески доступных веществ, например, имеющихся в базе данных Available Chemicals Directory (ACD), однако такие вещества могут быть также синтезированы известными в литературе методами (избранные ссылки: Goodnow et al., 1990; Bergeron et al., 1994; Stromgaard et al., 1999; Gaell and Blagbrough, 2000; Kuksa et al., 2000 и ссылки, цитированные в указанных работах; Karigiannis and Papaioannou, 2000 и ссылки, цитированные в этой работе, причем все перечисленные работы включены в настоящее описание в виде ссылки).

Синтез стероидов с разветвленным полиаминовым фрагментом, присоединенным посредством амидной связи (Способ А, Схема 1)

Соединения изобретения, в которых разветвленный полиаминовый фрагмент присоединен к стероидным ядрам посредством амидной связи, могут быть получены из различных стероидов, содержащих карбоксильную группу, например из тетрагидрофусидовой кислоты по схеме 1, и разнообразных разветвленных полиаминовых соединений. Карбоксильную группу стероидного производного подвергают этерификации с получением реакционноспособного сложного эфира, например сукцинимидового сложного эфира, путем взаимодействия карбоксильной группы с N-гидроксисукцинимидом в безводном ТГФ в присутствии дициклокарбодиимида (DCC). Сукцинимидовый сложный эфир затем можно подвергнуть взаимодействию с разветвленным полиамином путем растворения избытка разветвленного полиамина в безводном хлороформе в атмосфере аргона и последующего медленного добавления раствора активированного эфира в хлороформе. Реакцию проводят при комнатной температуре и завершают через 6-24 часа. Затем реакционную смесь можно концентрировать без дополнительных стадий промывки и непосредственно очистить методом ВЭЖХ c обращенной фазой, используя в качестве элюента смесь ацетонитрила и воды, забуференную трифторуксусной кислотой, или методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь дихлорметана, метанола и водного аммиака. Такой способ иллюстрируется примером, приведенным на схеме 1, где стероидные ядра представлены тетрагидрофусидовой кислотой. Тетрагидрофусидовую кислоту сначала превращают в соответствующий N-сукцинимидовый эфир взаимодействием с N-гидроксисукцинимидом в безводном ТГФ в присутствии дициклокарбодиимида. Затем сложный эфир тетрагидрофусидовой кислоты взаимодействует с N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамином в результате растворения избытка (3 эквивалента) N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамина в безводном хлороформе в атмосфере аргона и последующего медленного (в течение 30 минут) добавления раствора активированного сложного эфира в хлороформе. Растворители выпаривают при пониженном давлении и полученное неочищенное масло очищают на силикагеле, используя в качестве элюента смесь дихлорметана, метанола и 25% водного раствора аммиака. После лиофильной сушки очищенного продукта получают белый порошок, соединение 101.

Способ А

Схема 1

Синтез стероидов с разветвленным полиаминовым фрагментом, присоединенным посредством амидной связи (Способ В, Схема 2)

Альтернативно соединения настоящего изобретения формулы V можно получить взаимодействием ангидридов стероидной кислоты, например ангидрида фусидовой кислоты на схеме 2, с избытком разветвленного полиамина, например N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамина, используя те же условия реакции, что указаны для метода А, и сукцинимидовый сложный эфир в качестве исходного вещества (Схема 2)

Схема 2

Восстановление амидных связей

Амидные связи, образовавшиеся в результате взаимодействия разветвленного полиамина и сукцинимидового сложного эфира или ангидрида карбоновой кислоты, указанных на схеме 1 и 2, соответственно (например, соединения формулы IV и V), могут быть восстановлены в соответствующий амин путем взаимодействия амида с 10-кратным избытком диборана при кипении с обратным холодильником в ТГФ в течение 5-10 часов. Реакционную смесь затем подкисляют 4N водным раствором хлористоводородной кислоты до рН 1 и интенсивно перемешивают в течение 2-4 часов. Далее реакционную смесь сушат лиофилизацией и полученный белый порошок очищают на силикагеле, используя в качестве элюента смесь дихлорметана, метанола и 25% водного раствора аммиака. После лиофилизации очищенного продукта получают белый порошок.

Схема 3. Получение С-21 полиаминированных аналогов фусидовой кислоты формулы IV, в которой W представляет радикал формулы -(Z)_n-(NR-Z) _p-NR₂.

Введение разветвленных полиаминов восстановительным аминированием кетонов (Метод С, Схема 4)

Соединения настоящего изобретения, в которых разветвленный полиаминовый фрагмент присоединен к различным участкам стероидных ядер, могут быть получены из стероидных аналогов, содержащих кето- или альдегидные функциональные группы, которые желательно заместить разветвленным полиамином. Соответствующий стероид может быть получен из коммерческих источников или может быть синтезирован различными способами, известными специалисту (например, различными методами окисления, восстановлением эфиров карбоновых кислот и т.п.). Стероид с карбонильной группой может быть подвергнут взаимодействию непосредственно с незащищенным полиаминовым блоком путем восстановительного аминирования с использованием методов, описанных для получения синтетических скваламинов (Pechulis et al., 1995; Weis et al., 1999; Kinney at al., 2000). Альтернативно, стероид, содержащий аминогруппу, может быть подвергнут взаимодействию с соответствующими Вос-защищенными полиаминовыми фрагментами, содержащими альдегидную группу, путем восстановительного аминирования, как описано в литературе для получения скваламиновых эквивалентов, замещенных по атому С-3 спермидиновой цепью (Hon-Seok Kim et al., 2000). Наконец, Вос-защитные группы можно расщепить трифторуксусной кислотой и очистить, как описано выше.

Рассматриваемый способ иллюстрируется примером на схеме 4, в котором ядро фусидовой кислоты представлено 3-кетофусидовой кислотой. К раствору 3-кетофусидовой кислоты (1 эквивалент) в метаноле последовательно добавляли N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин (3 эквивалента), уксусную кислоту и NaBH(OAc) ₃ (3 эквивалента), полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6-16 часов, после чего метанол выпаривали при пониженном давлении с образованием бледно-желтого масла. Чистое соединение 118 получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметана, метанола и 25% водного раствора аммиака в качестве элюента. Соединение 118 в виде белого порошка получали после лиофилизации очищенного продукта с выходом 70-85%.

Способ С

Схема 4. Репрезентативные примеры введения разветвленных полиаминовых фрагментов в стероидные ядра, содержащие карбонильную группу, посредством восстановительного аминирования с использованием NaBH(OAc)₃ в качестве восстановительного агента (Abdel-Magid, 1996).

Очистка соединений настоящего изобретения

Соединения настоящего изобретения могут быть очищены с помощью колоночной хроматографии на силикагеле 60 (E. Merck), 230-400 меш, c использованием смесей дихлорметана, метанола и водного аммиака в качестве элюента. Альтернативно соединения настоящего изобретения могут быть очищены препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией с обращенной фазой (ВЭЖХ) с использованием трифторуксусной или уксусной кислоты в качестве элюента.

Примеры соединений настоящего изобретения, полученных в соответствии с общими способами А, В и С

№ соед.	Способ	Исходное стероидное соединение	Исходный разветвленный полиамин	Структура соединения
101	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,5; 172,6; 80,2; 72,4; 68,9; 57,6; 54,9; 51,3; 50,3; 50,2; 41,5; 41,4; 41,1; 40,1; 40,1; 38,5; 38,3; 38,0; 37,1; 36,4; 33,1; 31,7, 31,1; 29,1; 26,4; 23,9, 23,3; 23,1; 23,0; 22,6; 21,4; 17,1; 16,5
102	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,4; 172,6; 80,4; 72,5; 57,7; 55,0; 51,7; 50,9; 50,5; 46,4; 45,9; 41,0; 40,4; 40,2; 40,1; 39,0; 38,5; 37,4; 36,4; 34,5; 32,0; 31,1; 29,9; 29,1; 26,8; 26,4; 24,4; 23,1; 22,9; 21,6; 21,4; 21,3; 20,7; 17,8; 16,5
103	A	N-сукцинимидовый эфир 16-дезацетокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,6; 72,5; 69,3; 57,2; 54,7; 53,9; 51,8; 51,7; 43,8; 42,4; 41,5; 40,2; 40,0; 38,3; 38,3; 38,0; 37,1; 36,8; 33,1; 32,6; 31,7; 31,2; 31,1; 29,1; 28,7; 26,5; 23,8; 23,2; 23,2; 22,9; 22,7; 16,6; 16,4
104	A	N-сукцинимидовый эфир 13(17)-ен-16-дезацетокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 175,9; 143,4; 133,9; 72,5; 70,2; 58,6; 57,6; 56,1; 52,8; 45,3; 44,3; 40,0; 39,9; 39,1; 38,6; 37,9; 36,4; 35,6; 31,9; 31,8; 30,9; 30,7; 30,6; 29,2; 29,0; 25,9; 24,9; 24,1; 23,2; 23,1; 22,9; 22,9; 16,5
105	A	N-сукцинимидовый эфир 3 -тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,5; 172,6; 80,2; 77,3; 68,8; 57,1; 54,8; 51,3; 51,0; 50,3; 50,2; 44,3; 41,5; 41,3; 41,2; 41,1; 40,1; 40,0; 38,4; 37,8; 36,6; 35,3; 33,7; 32,7; 31,7; 29,1; 26,4; 24,5; 23,6; 23,2; 23,0; 22,7; 21,4; 17,1; 16,0
106	A	N-сукцинимидовый эфир 9(11)-ен-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,2; 172,6; 153,4; 118,6; 81,2; 71,9; 57,5; 55,0; 52,1; 42,9; 42,4; 40,7; 40,0; 39,3; 39,1; 38,5; 35,1; 34,4; 32,5; 30,8; 29,9; 29,1; 26,4; 26,3; 24,5; 23,1; 22,9; 22,5; 22,4; 21,3; 18,2; 16,1
107	A	N-сукцинимидовый эфир дезоксихолевой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,0; 74,0; 72,6; 57,6; 57,1; 55,2; 48,1; 47,6; 43,7; 40,5; 40,0; 38,7; 37,5; 37,3; 36,9; 36,5; 35,3; 34,9; 34,2; 33,4; 31,1; 30,0; 28,7; 28,4; 27,5; 24,9; 23,7; 17,7; 13,2
108	A	N-сукцинимидовый эфир 23,24-биснор-5-холеновой кислоты-3 -ола	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 179,8; 142,3; 122,4; 72,4; 57,9; 57,7; 57,4; 55,1; 54,1; 51,7; 45,1; 43,5; 43,1; 41,0; 40,1; 38,6; 38,3; 37,7; 33,3; 33,0; 32,3; 28,5; 25,4; 22,2; 19,9; 18,0; 12,6
109	B	ангидрид фусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 171,4; 171,1; 140,8; 135,6; 132,1; 123,5; 73,6; 71,4; 68,3; 56,5; 53,1; 49,3; 48,7; 43,1; 39,6; 39,5; 39,3; 37,7; 37,1; 36,3; 36,2; 35,6; 32,4; 30,3; 30,0; 29,4; 28,0; 25,7; 24,2; 22,8; 21,2; 20,8; 17,9; 17,6; 16,0
110	B	ангидрид фусидовой кислоты	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 174,3; 172,4; 143,4; 135,8; 133,3; 124,6; 75,3; 72,5; 68,6; 52,8; 50,7; 44,6; 40,9; 40,7; 40,3; 39,1; 38,2; 37,9; 37,4; 36,9; 32,9; 31,1; 31,0; 30,5; 29,7; 28,8; 27,5; 25,9; 23,9; 23,8; 22,4; 21,3; 18,0; 17,9; 16,5
111	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-3-OSO3H-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,6; 172,6; 81,6; 80,7; 54,8; 52,0; 50,9; 50,6; 46,5; 46,0; 41,0; 40,5; 40,1; 39,7; 39,4; 38,2; 37,1; 36,1; 34,1; 32,3; 30,3; 29,1; 28,4; 26,9; 26,4; 24,5; 23,1; 23,0; 21,7; 21,4; 21,2; 21,0; 17,8; 16,4
112	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,6; 72,5; 57,4; 55,0; 54,3; 52,0; 47,4; 46,4; 44,5; 40,6; 40,1; 40,1; 39,0; 38,4; 37,5; 36,3; 34,6; 32,7; 31,7; 31,1; 30,0; 29,1; 28,7; 27,3; 26,5; 24,7; 23,2; 22,9; 21,5; 21,4; 20,7; 17,2; 16,6
113	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,4; 172,6; 80,1; 72,5; 68,9; 53,0; 52,9; 51,5; 51,3; 50,3; 50,1; 41,5; 41,4; 41,1; 41,0; 40,1; 38,9; 38,3; 37,9; 37,0; 36,4; 33,1; 31,8; 31,1; 30,0; 29,2; 27,7; 26,4; 23,9; 23,3; 23,2; 23,0; 22,6; 21,4; 17,1; 16,5
114	A	N-сукцинимидовый эфир 23,24-биснор-5-холеновой кислоты-3 -ола	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 179,6; 142,3; 122,3; 72,4; 57,9; 54,1; 52,9; 52,7; 51,7; 45,1; 43,5; 43,0; 41,0; 40,9; 38,6; 38,5; 37,7; 33,3; 33,0; 32,3; 29,8; 28,5; 27,7; 25,4; 22,2; 19,9; 18,0; 12,5
115	A	N-сукцинимидовый эфир 3-OAc-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,3; 172,9; 172,6; 80,1; 76,2; 68,6; 52,9; 51,4; 51,1; 50,3; 50,2; 41,5; 41,3; 41,1; 40,9; 40,1; 38,9; 38,0; 36,6; 33,5; 31,7; 30,0; 29,1; 28,3; 27,7; 26,4; 23,7; 23,4; 23,2; 23,0; 22,3; 21,4; 21,2; 17,2; 16,1
116	A	N-сукцинимидовый эфир 3-OSO3H-11-дезокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,1; 172,6; 81,7; 81,4; 52,9; 52,5; 52,3; 51,1; 50,7; 46,5; 46,2; 40,9; 40,6; 40,3; 40,0; 39,3; 38,7; 38,6; 37,0; 36,2; 33,5; 32,7; 30,5; 29,1; 28,3; 27,8; 27,5; 27,0; 26,4; 24,8; 23,1; 22,9; 21,6; 21,3; 21,3; 21,2; 17,9; 16,4
117	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(3-амино-пропил)пропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,4; 72,5; 54,5; 52,9; 52,0; 47,4; 46,4; 44,5; 41,0; 40,6; 40,1; 38,9; 38,8; 37,5; 36,3; 34,6; 32,9; 31,7; 31,2; 30,2; 30,1; 29,1; 28,8; 27,7; 27,3; 26,5; 24,7; 23,2; 22,9; 21,5; 21,4; 20,7; 17,2; 16,6
118	C	3-кетофусидовая кислота	N,N-бис(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,8; 173,2; 139,4; 138,5; 132,6; 125,3; 75,8; 69,0; 61,8; 52,6; 51,6; 50,0; 50,7; 45,9; 43,9; 40,9; 40,2; 38,2; 37,5; 37,4; 37,0; 31,3; 30,9; 30,5; 29,3; 25,9; 24,9; 24,8; 23,3; 22,8; 21,1; 18,0; 17,5; 16,0
119	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,4; 172,6; 80,2; 72,5; 68,9; 56,6; 56,5; 51,6; 51,3; 50,4; 50,2; 42,3; 41,6; 41,4; 41,1; 40,9; 40,1; 38,7; 38,3; 38,0; 37,1; 36,4; 33,1; 31,8; 31,1; 29,9; 29,2; 27,8; 26,4; 23,9; 23,3; 23,2; 23,0; 22,6; 21,4; 17,1; 16,5
120	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 177,4; 172,6; 80,5; 72,4; 56,6; 56,6; 52,0; 50,9; 50,5; 46,6; 45,9; 42,3; 41,0; 40,4; 40,0; 39,0; 38,7; 37,4; 36,3; 34,5; 32,1; 31,1; 30,3; 30,0; 29,1; 27,7; 26,8; 26,4; 24,5; 23,1; 22,9; 21,6; 21,3; 21,3; 20,7; 17,8; 16,5
121	A	N-сукцинимидовый эфир 16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусидовой кислоты	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,5; 72,5; 69,2; 56,6; 56,5; 54,1; 51,8; 51,6; 43,8; 42,4; 42,3; 41,5; 40,9; 40,1; 38,7; 38,3; 37,9; 37,1; 36,8; 33,1; 32,6; 31,6; 31,1; 31,1; 30,0; 29,1; 28,6; 27,7; 26,5; 23,8; 23,2; 22,9; 22,7; 16,6; 16,4
122	A	N-сукцинимидовый эфир дезоксихолевой кислоты	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 176,8; 74,0; 72,6; 56,5; 56,3; 47,6; 43,7; 42,3; 40,9; 38,7; 37,5; 37,2; 36,9; 36,5; 35,3; 34,9; 34,2; 33,4; 31,1; 30,0; 30,0; 28,7; 28,4; 27,8; 27,5; 24,9; 23,7; 17,7; 13,3
123	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-16-дезацетокси-17S,20,24,25-тетрагидрофусидовой кислоты	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 178,5; 72,5; 56,7; 56,6; 54,6; 52,0; 47,5; 46,4; 44,5; 42,3; 41,0; 40,6; 40,1; 39,0; 38,7; 37,5; 36,3; 34,6; 32,9; 31,7; 31,2; 30,0; 29,1; 28,9; 27,7; 27,3; 26,6; 24,7; 23,2; 22,9; 21,5; 21,4; 20,7; 17,2; 16,6
124	C	3-кетофусидовая кислота	N,N-бис(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 179,6; 173,3; 139,7; 137,8; 132,4; 125,5; 75,9; 69,0; 60,8; 53,1; 52,5; 50,9; 50,0; 49,9; 47,9; 43,7; 40,8; 40,2; 37,6; 37,3; 31,8; 31,1; 30,6; 29,3; 27,7; 26,4; 25,9; 25,6; 24,8; 23,4; 22,7; 21,2; 18,0; 17,6; 16,5
125	C	3-кетофусидовая кислота	N-(3-аминопропил)-N-метилпропан-1,3-диамин
13C-ЯМР (CD3OD), /м.д.: 179,6; 173,3; 139,7; 137,5; 132,3; 125,6; 76,0; 69,0; 61,3; 57,3; 56,2; 50,8; 50,0; 43,6; 42,2; 40,8; 40,3; 37,5; 37,4; 37,0; 31,7; 31,1; 30,5;29,2; 27,6; 25,9; 25,4; 25,0; 24,7; 23,3; 22,7; 21,2; 18,0; 17,6; 16,4
126	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N,N-бис(3-аминопропил)-N,N'-диметилбутан-1,4-диамин
127	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N'1'-{3-[(3-аминопропил)этиламино]пропил}-N'1'-этилпропан-1,3-диамин
128	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N,N'-бис(3-аминопропил)-N,N'-диэтилбутан-1,4-диамин
129	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N'1'-{3-[(3-аминопропил)этиламино]пропил}-N'1'-этилпропан-1,3-диамин
130	A	N-сукцинимидовый эфир тетрагидрофусидовой кислоты	N,N'-бис(3-аминопропил)-N,N'-бисциклопропил-метилбутан-1,4-диамин
131	A	N-сукцинимидовый эфир 11-дезокси-тетрагидрофусидовой кислоты	N'1'-(3-аминопропил)-N'1'-(3-диметиламино-пропил)пропан-1,3-диамин

Бактерицидная активность

В результате проведения in vitro исследований было установлено, что соединения изобретения обладают значительной активностью в отношении большого числа бактерий, включая грамположительные и грамотрицательные штаммы (Staphylococci, Streptococci, Corynebacteriae, Mycobacteriae, Proteus, Propionibacterium, Pseudomonas, Neisseriae, E.coli) и грибковые штаммы (Candida и Aspergillus). Биологические тесты показали, что активность соединений изобретения превосходит известную активность некоторых природных аналогов скваламина (WO 00/09137). Антибактериальная активность соединений настоящего изобретения также сравнима с активностью родственных соединений, описанных в литературе (Moore et al., 1993; Kikuchi et al., 1997; Rao et al., 2000) и с широким спектром активности таких известных антибиотиков, как ампициллин (Kikuchi et al., 1997). Кроме этого, изучение пост-антибиотического действия позволило установить, что соединения изобретения обладают сильным бактерицидным эффектом. В Таблице приведены значения MIC (минимальная ингибирующая концентрация) соединений настоящего изобретения в отношении ряда бактериальных и грибковых штаммов. Минимальные ингибирующие концентрации определяли с использованием анализа на чашках с агаром. Бактериальные штаммы получали от American Type Culture Collection или брали из коллекции клинических изолятов, принадлежащей авторам изобретения. Колонии со свежей ночной культуры ресуспендировали в соленой воде до значения 0,5 MacFarland, соответствующего 10⁸ CFU/мл. 200 мл Mueller Hinton агара (Oxoid) при 48°C инокулировали в концентрации 10⁶ CFU/мл и выливали в квадратные чашки Петри (245х245 мм). В инокулированных чашках проделывали отверстия и в каждом отверстии размещали по 200 мкл испытуемых соединений. Серии разбавления соединений содержали шесть разбавлений в интервале 0,25-125 мкг/мл. При использовании Streptococci агар Mueller Hinton дополняли 5% овечьей крови. Пластины инкубировали и диаметры зон ингибирования роста измеряли с помощью электронного кронциркуля. Значения MIC определяли с использованием кривой линейной регрессии, построенной в координатах диаметр зоны ингибирования роста-log₂ концентрации образца. Параметры микробиологического анализа соответствовали European Pharmacopoeia 3^rd edition (1997). Зоны ингибирования роста функционально зависели от концентрации используемых соединений. В качестве эталонных соединений использовали известные антибиотики, включающие фусидовую кислоту (FA), мупироцин и линезолид.

Соединения изобретения и их in vitro активности MIC (мг/л)
Микроорганизм/ штамм	101	102	103	104	105	106	107	114	117	112	111	115	116	FA	Линезолид	Мупироцин
S.aureus CJ247	4	4	1	16	16	4	16	16	1	1	--	--	--	0,02	1	0,5
S.aureus CJ200	4	4	1	16	16	--	16	16	1	1	16	4	4	0,02	4	1
S.aureus CJ234R	4	4	1	16	16	4	16	16	1	1	16	4	4	0,02	16	1
S.aureus CJ234F	4	4	1	16	16	4	16	16	1	1	16	--	4	16	1	0,5
S.aureus N6	4	4	1	16	16	4	16	16	1	1	--	--	--	16	--	--
S.epidermis CK5	4	4	1	16	16	4	16	16	1	1	4	4	4	0,02	0,25	0,04
Propionibacterium acnesFN33	4	4	1	16	16	4	16	16	--	--	4	4	16	0,2	1	--
Corynebacterium xerosis FF	4	4	1	16	16	4	16	64	0,25	0,25	16	64	4	0,1	--	--
Streptococcus pyogenes EC88	16	16	4	16	64	4	16	64	--	--	16	4	16	16	4	1
Streptococcus faeclum EС88	16	16	16	>64	64	16	16	--	--	--	--	--	--	--	--	--
E.coli HA 165	16	16	4	>64	64	16	16	16	--	--	16	16	64	>64	--	--
Pseudomonas aeruginosa BA17	64	16	16	>64	16	16	16	>125	--	--	>125	16	125	>64	--	--
Saccaromyces cervisiae ZZ7	4	16	4	16	64	16	4	64	--	--	64	16	16	>64	--	--
Candida albicans ZA	16	4	1	16	16	16	16	>125	--	--	125	16	64	>64	--	--
Aspergillus niger ZM35	4	4	>125	>64	64	63	16	--	--	--	64	125	64	>64	--	--

Примечания к таблице:

Очень четкие зоны ингибирования для всех соединений, перечисленных в таблице, указывают на бактерицидное действие.

FA = фусидовая кислота

-- = пропущенное значение MIC

Штаммы:

FF = Corynebacterium xerosis	BA17 = Pseudomonas
EC88 = Streptococcus pyrogenes	HJ = Proteus
CJ234(F) = Staphylococcus aureus (MRSA#, Fus. устойчивый)	EI119(P)=Streptococcus faecium (пенициллин-устойчивый)
CJ(N6) = Staphylococcus aureus (Fus. устойчивый)	ZA= Candida albicans
CJ247 = Staphylococcus aureus	HA165 = E.coli
CJ234(R) = Staphylococcus aureus (MRSA#, рифампицин-устойчивый)	ZZ7 = Saccharomyces cerevisiae
CJ1200 = Staphylococcus aureus	FN33 = Propionibacterium
CK5 = Staphylococcus epidermidis	ZM6 = Aspergillus flavus
#MRSA: метициллин-устойчивый S.aureus	ZM35 = Aspergillus niger

Минимальная бактерицидная концентрация (МВС) для соединения 102

10⁶ бактерий инокулировали в 3 мл ростовой среды (S.aureus - LB бульон, S.pyogenes - ТН бульон), содержащей соединение 102 в концентрациях 2хMIC, 1xMIC, 0,5xMIC и 0xMIC (MIC относительно испытуемого штамма). Штаммы S.aureus выращивали в аэробных условиях, а S.pyogenes - в анаэробных условиях в атмосфере инкубатора, обогащенной диоксидом углерода. Образцы разбавляли и высевали на LA-пластины (S.aureus) или на пластины с кровяным агаром (S.pyogenes), затем перед подсчетом образовавшихся колоний проводили инкубацию при 37°C в течение 24 часов.

Соединение 102 оказывает сильный бактерицидный эффект на разновидности staphylococci и streptococci, уничтожая бактерии при концентрации, равной удвоенному значению MIC, как показано на Фиг.1 и 2.

Данные, представленные в Таблице, показывают, что соединения настоящего изобретения обычно характеризуются широким спектром активности в отношении испытуемых микроорганизмов. Более того, они оказываются активными в отношении штаммов, устойчивых к действию таких стандартных антибиотиков, как фусидовая кислота, рифампицин и пенициллин. Отсутствие кросс-резистентности позволяет предположить, что механизм бактерицидного действия соединений настоящего изобретения и известных антибиотиков различен. Для преодоления насущной проблемы резистентности к действию антибиотиков жизненно важно разработать новые антибиотики с новым механизмом действия.

Литература

Abedel-Magdid, A.F., Carcon, K.G., Harris, B.D., Maryanoff, C.A., Shah, R.D., J. Org. Chem., 1996, 3849-3862.

Arigoni, D., von Daehne, W., Godtfredsen, W.O., Malera, A., Vangedal, S., 1964, Experimentia, 1-4.

Bergeron, R.J., McManis, J.S., Liu, C.Z., Feng, Y., Weimar, W.R., Luchetta, G.R., Wu, Q., Ortiz-Ocasio, J., Vinson, J.R.T., Kramer, D. and Porter, C., J. Med. Chem, 1994, 3464-3476.

Christiansen, K., 1999, Int. J. Antimicrob. Agents, S73-S78.

Diassi, P.A., Bacso, I., Krakower, G.W., Ann Van Dine, H., 1966, Tetrahedron, 3459-3467.

Duvold, T., Sorensen, S.D., Bjorkling, F., Henriksen, A.S. and Rastrup-Andersen, N., 2001, J. Med. Chem., 44, 3125-3131.

Gaell, A.J., Blagbrough, I.S., 2000, Tetrahedron, 2449-2460.

Godtfredsen, W.O., Vangedal, S., 1962, Tetrahedron, 1029-1048.

Godtfredsen, W.O., Albrethsen, C., von Daehne, W., Tybring, L, Vangedal, S., 1965_a, Antimicrob. Agents Chemotherapy, 132-137.

Godtfredsen, W.O., von Daehne, W., Vangedal, S., Marquet, A., Arigoni, D., Melera, A., 1965 _b, Tetrahedron, 3505-3530.

Godtfredsen, W.O., von Daehne, W., Tybring, L, Vangedal, S., 1966, J. Med. Chem., 15-22.

Goodnov, Jr., R., Konno, K., Niwa, M., Kallimopoulos, T., Bukownik, R., Lenares, D., Nakanishi, K., Tetrahedron, 1990, 3267-3286.

Hong-Seok Kim, H.-S., Bo-Seung Choi, B.-S., Kyung-Chan Kwon, K.-C., Sang-Ok Lee, S.-O, Hyun Jung Kwak, H.J., Cheol Hae Lee, C.H., 2000, Bioorg. Med. Chem,, 2059-2065.

Karagiannis, G., Papaioannou, D., Eur. J. Org. Chem., 2000, 1841-1863.

Kikuchi, K., Bernard, E.M., Sadownik, A., Regen, S.L, Armstrong, D., 1997, Antimicrob. Agents Chemoterap., 1433-1438.

Kinney, W.A., Zhang, X., Williams, J.I., Johnston, S., Michalak, R.S., Deshpande, M., Dostal, L, Rosazza, J.P.N., 2000, Org. Lett., 2921-2922.

Kuchers A., Crove, S., Grayson, M.L., Hoy, J., in The Use of Antibiotics, 5.ed., Butterworth Heinemann, Oxford, 1997.

Kuksa, V., Buchan, R., Kong Thoo Lin, P., 2000, Synthesis, 1189-1207.

Moore, K.S., Wehrli, S., Roder, H., Rogers, M., Forrest, Jr., J.N., McCrimmon, D., Zasloff, M., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1354-1358.

Pechulis, A.D., Bellevue III, F.H., Cioffi, C.L, Trapp, S.G., Fojtik, J.P., McKitty, A.A., Kinney, W.A., Frye, L.L., 1995, J. Org. Chem., 5121-5126.

Rao, M.N., Shinnar, A.E., Noecker, LA., Chao, T.L, Feibush, B., Snyder, B., Sharkansky, I., Sarkahian, A, Zhang, X., Jones, S.R., Kinney, W.A., Zasloff, M., 2000, J. Nat. Prod., 631-635.

Sadownik, A., Deng, G., Janout, V., Regen, S.L., 1995, J. Am. Chem. Soc., 6138-6139.

Savage, P.B., Li, C., 2000, Exp. Opin. Invest. Drugs, 263-272.

Stromgaard, K., Brierley, M.J., Andersen, K., Slik, F.A., Mellor, I.R., Usherwood, P.N.R., Krogsgaard-Larsen, P., Jaroszewski, J.W., 1999, J. Med. Chem., 5224-5234.

von Daehne, W., Godtfredsen, W.O., Rasmussen, P., 1979, Adv. Appl. Microbiol., 95-145.

Weis, A.L, Bakos, T., Alferiev, I., Zhang, X., Shao, B., Kinney, W.A., 1999, Tetrahedron Lett., 4863-4864.