гликозидное пролекарство 5-аминосалициловой кислоты

Формула изобретения

1. 5-Амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота или 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота или их фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая терапевтическим действием при язвенном колите, включающая в качестве активного ингредиента 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойную кислоту или 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойную кислоту или их фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Терапевтическое средство для применения при язвенном колите, включающее в качестве активного ингредиента 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойную кислоту, 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойную кислоту или 5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензойную кислоту или их фармацевтически приемлемую соль.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойной кислоте (далее обозначаемой как «соединение [1]», описываемой общей формулой [1], или к 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойной кислоте (далее обозначаемой как «соединение [2]», описываемой общей формулой [2], или к их фармацевтически приемлемой соли

Далее, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей в качестве активного ингредиента соединение [1], или соединение [2], или их фармацевтически приемлемую соль.

Кроме того, настоящее изобретение относится к терапевтическому средству для применения при язвенном колите, включающему в качестве активного ингредиента соединение [1], соединение [2] или 5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензойную кислоту (далее обозначаемую как «соединение [3]», описываемую общей формулой [3], или их фармацевтически приемлемую соль.

Уровень техники

5-аминосалициловая кислота (далее обозначаемая как «5-АСК») обладает активностью в отношении восстановления свободных радикалов (DPPHL), связывания пероксида водорода, связывания иона гипохлорита, ингибирования перекисного окисления липидов и биосинтеза лейкотриена В ₄, в связи с чем она используется как терапевтическое средство при язвенном колите (ЯК) и болезни Крона (БК), в целом относимых к воспалительным заболеваниям кишечника (ВЗК), которые представляют собой воспалительные заболевания, трудно поддающиеся лечению, требующие длительных курсов терапии, в течение которых периоды ремиссии и обострения могут чередоваться (см., например, не патентный документ 1).

Однако, известно, что перорально вводимая 5-АСК, как таковая, быстро и полностью всасывается в верхней части тонкой кишки и лишь небольшое количество 5-АСК, которое оказывает эффект путем локального воздействия на участок воспаления, доставляется в зону толстой кишки к месту поражения (см., например, не патентный документ 3).

В этой связи, для целей доставки 5-АСК к нужному участку воздействия в толстой кишке, была изучена система лекарственной доставки (далее называемая как СЛД) для 5-АСК и пролекарств 5-АСК (см., например, непатентные документы 1, 2 и 4).

Имеется СЛД-препарат на основе 5-АСК, торговое название Пентаза (Pentase) (зарегистрированная торговая марка), производимый компанией Nisshin Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd., который изготавливается в виде, позволяющем достичь постепенного высвобождения 5-АСК в области, простирающейся от тонкой кишки до ободочной кишки, за счет нанесения на 5-АСК покрытия из пористой пленки этилцеллюлозы (см., например, не патентные документы 1 и 2). Однако известно, что значительное количество 5-АСК переносится в плазму после перорального введения Пентазы взрослому человеку в состоянии натощак в дозе 1000 мг в виде 5-АСК, хотя концентрация в плазме неизмененного лекарственного вещества снижается в минимальной точке до уровня одной четырнадцатой (С_max = 1448,6±586,4 нг/мл) в сравнении с вариантом перорального введения одной 5-АСК, как таковой (см., например, непатентный документ 5).

Далее, имеется препарат салазосульфапиридин, представляющий собой пролекарство 5-АСК (далее называемый как «САСП») (торговое наименование: салазопирин (зарегистрированная торговая марка), производимый компанией Pfizer Inc.), в котором аминогруппа 5-АСК азотирована (см., например, непатентный документ 3). Данное соединение метаболизируется до 5-АСК кишечными бактериями, имеющимися в толстой кишке, которые содержат фермент, осуществляющий восстановление азогруппы. Несмотря на то, что была установлена эффективность САСП при язвенном колите, имеются проблемы, определяемые разными неблагоприятными реакциями, такими как гиперчувствительность к препарату, мужское бесплодие, тошнота и головная боль, которые вызываются сульфапиридином (СП), образуемым после разложения САСП кишечными бактериями (см., например, непатентный документ 3).

Дополнительно, в качестве других пролекарств, известны метил-5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензоат и метил-2-ацетокси-5-( -D-глюкопиранозиламино)бензоат, которые являются глюкозными гликозидами метил-5-аминосалицилата, обладающими высокой водорастворимостью (см., например, непатентные документы 6 и 7). Несмотря на то, что безопасность данных соединений установлена, их терапевтическое действие при язвенном колите исследовано не полностью.

Дополнительно, сообщается, что, кроме 5-АСК, в качестве пролекарства стероидного соединения при лечении язвенного колита применяется такое терапевтическое средство, как гликозид дексаметазона, или преднизолона с глюкозой, или аналогичным компонентом (см., например, непатентный документ 1). Целью использования данного соединения является получение специфического лекарственного средства, доставляемого в толстую кишку. Однако сообщалось, что после внутрижелудочного введения крысам только 60% глюкозного производного дексаметазона доставляется в слепую кишку и только 15% или менее глюкозного производного преднизолона доставляется в слепую кишку.

Как указывалось выше, в настоящее время неизвестны лекарственные средства для лечения язвенного колита, которые были бы безопасны, могли вводиться в течение длительного периода времени и которые могли бы эффективно доставлять 5-АСК, применяемую в качестве терапевтического средства при язвенном колите, в толстую кишку, к месту поражения, практически без абсорбции или метаболизации в желудке или в верхней части тонкой кишки.

[Патентный документ 1] JP-B-60-501105

[Непатентный документ 1] Folia Pharmacol. Jpn. 104, pp. 447-457 (1994)

[Непатентный документ 2] Folia Pharmacol. Jpn. 104, pp. 303-311 (1994)

[Непатентный документ 3] Scandinavian Journal of Gastroenterology, 23, pp. 107-112 (1988)

[Непатентный документ 4] Advanced Drug Delivery Reviews, 7, pp. 143-199 (1991)

[Непатентный документ 5] Yakuri To Chiryo, 22 (Suppl. 10), pp. S2467-2495 (1994)

[Непатентный документ 6] Magyar Kemiai Folyoirat, 97 (4), pp. 143-148 (1991)

[Непатентный документ 7] Archiv der Pharmazie An International Journal Pharmaceutical and Medicinal Chemistry, 332 (9), pp. 321-326 (1999)

Раскрытие изобретения

Проблемы, которые решает изобретение

Целью настоящего изобретения является разработка терапевтического средства для лечения язвенного колита, с помощью которого возможно доставлять 5-АСК, применяемую в качестве терапевтического средства при язвенном колите, в толстую кишку, к месту поражения, без ее абсорбции или метаболизации в желудке или в верхней части тонкой кишки, и который можно безопасно вводить в течение длительного периода времени.

Средства для решения существующих проблем

В результате широкомасштабных исследований авторы настоящего изобретения нашли соединение, с помощью которого могут быть достигнуты указанные выше цели, что и составило предмет настоящего изобретения.

Настоящее изобретение может включать соединение [1], или соединение [2], или их фармацевтически приемлемую соль.

Далее, настоящее изобретение может включать фармацевтическую композицию, содержащую соединение [1], или соединение [2], или их фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, а также терапевтическое средство для лечения язвенного колита, включающее соединение [1], соединение [2] или соединение [3] (для удобства, далее в описании все они будут называться в целом как «соединение по настоящему изобретению») или их фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

Поскольку соединение по настоящему изобретению метаболизируется до 5-АСК кишечной бактериальной флорой, то при использовании соединения по настоящему изобретению системные побочные эффекты могут быть снижены и становится возможным длительное введение относительно высокой дозы.

Ниже дается определение терминов, использованных в настоящем изобретении.

Термин «язвенный колит» относится к эрозивному неспецифическому воспалению толстой кишки неизвестной этиологии, которое в основном поражает слизистую оболочку и часто приводит к образованию эрозий и язв.

Ниже настоящее описание описывается более детально.

Соединение по настоящему изобретению может быть получено, например, в соответствии с приведенным ниже способом из известного соединения или промежуточного соединения, которое может быть легко получено. При получении соединения по настоящему изобретению, если исходное вещество содержит заместитель, который может оказать влияние на ход реакции, в соответствии с общей стратегией, реакцию проводят после защиты исходного вещества соответствующей защитной группой по известной методике. Далее, после завершения реакции указанная защитная группа может быть удалена по известной методике.

Способ получения 1

Схема 3

(В приведенных формулах R¹ означает линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода; R² означает D-глюкопиранозил или D-галактопиранозил (каждая гидроксильная группа в R ² может быть защищена защитной группой, такой как ацетил); и Х означает атом галогена, такой как атом фтора, хлора, брома и иода).

Стадия 1

Данная стадия представляет собой этерификацию известного соединения [4] и может быть проведена по известной методике (см. не патентный документ 7). Температура реакции поддерживается в приемлемом диапазоне от 20°С до 200°С. В основном растворитель, применяемый в реакции, может варьироваться в зависимости от типа получаемого эфира карбоновой кислоты, и его примеры могут включать спирты, такие как метанол и этанол. Примеры кислоты могут включать неорганические кислоты, такие как хлористоводородная кислота и серная кислота. Время реакции варьирует в зависимости от типа используемого исходного вещества, температуры реакции и в основном составляет от 1 часа до 72 часов.

Стадия 2

Данная стадия представляет собой конденсацию соединения [5] с соединением, полученным при галогенировании глюкозы или галактозы по аномерному положению, которая может быть проведена по известной методике per se (см. непатентный документ 7). Данная реакция протекает при инверсии конфигурации в присутствии катализатора. Примеры катализатора для данной реакции могут включать оксид серебра (I), оксид ртути (II) и AgOCOR³ (R ³ обозначает линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода). В основном, применяемый в реакции растворитель конкретно не ограничивается, главное, чтобы он не участвовал в данной реакции, и в качестве его примера может быть назван хинолин. Температура реакции поддерживается в приемлемом диапазоне от 0°С до 100°С. Время реакции может варьировать в зависимости от типа используемого исходного вещества, температуры реакции и т.п., и составляет от 1 часа до 72 часов. Далее, если желательно, защитная группа для каждой гидроксильной группы в R² полученного соединения [6] может быть удалена по известной методике.

Дополнительно, несмотря на то, что соединение [9], представляющее собой исходное вещество, коммерчески доступно, оно может быть также получено, например, по указанной ниже методике. Данная реакция представляет собой реакцию галогенирования по аномерному положению сахара, такого как глюкоза или галактоза, и может быть проведена по известной методике per se. Примеры галогенирующего агента могут включать в основном раствор бромистого водорода в уксусной кислоте, оксибромид фосфора, оксихлорид фосфора и т.п. В основном, применяемый в реакции растворитель конкретно не ограничивается, главное, чтобы он не участвовал в данной реакции, и его примеры могут включать галогенсодержащие растворители, такие как метиленхлорид, хлороформ и 1,2-дихлорэтан. Температура реакции поддерживается в приемлемом диапазоне от 0°С до 100°С. Время реакции может варьировать в зависимости от типа используемого исходного вещества или температуры реакции и составляет от 1 часа до 72 часов.

Стадия 3

Данная стадия представляет собой гидрирование соединения [6] и может быть проведена по известной методике per se (см. не патентный документ 7). Данная реакция может быть проведена, например, в присутствии металлического катализатора в соответствующем растворителе, в основном в атмосфере водорода при давлении от 1 до 10 атм и при температуре от 0°С до 100°С. Примеры металлического катализатора могут включать в основном палладий на угле, палладиевую чернь, диоксид платины, платину на угле и т.п. Выбор растворителя, применяемого в данной реакции, особо не ограничивается, при условии, что он не участвует в реакции, и примеры подходящего растворителя могут включать простые эфиры, такие как тетрагидрофуран, 1,4-диоксан и 1,2-диметоксиэтан, спирты, такие как метанол и этанол, амиды, такие как N,N-диметилформамид и N,N-диметилацетамид, углеводороды, такие как бензол, толуол и ксилол, а также смесь указанных растворителей. Время реакции может варьировать в зависимости от типа используемого в реакции исходного вещества, температуры реакции и в целом составляет от 1 часа до 48 часов.

Дополнительно, если требуется, в полученном соединении [7] защитная группа для каждой гидроксильной группы в R² может быть удалена в соответствии с известной для этого методикой.

Стадия 4

Данная стадия представляет собой гидролиз сложного эфира карбоновой кислоты соединения [7] и может быть осуществлена по известной методике per se. Температура реакции поддерживается в соответствующем диапазоне от 0°С до 100°С. Выбор растворителя, применяемого в данной реакции, особо не ограничивается, при условии, что он не участвует в реакции, и примеры подходящего растворителя могут включать спирты, такие как метанол и этанол. Примеры основания могут включать неорганические основания, такие как гидроксид натрия и гидроксид калия. Время реакции может варьировать в зависимости от типа используемого в реакции исходного вещества или температуры реакции и в целом составляет от 1 часа до 72 часов.

Дополнительно, в качестве примера другого способа, используемого для получения соединения [6], ниже описывается еще одна методика.

Схема 4

[В приведенных формулах R¹ и R² описаны выше. Х¹ обозначает атом галогена, такой как атом фтора, хлора, брома или иода].

Стадия 1

Данная стадия представляет собой реакцию этерификации известного соединения [10] и может быть осуществлена по известной методике (см. непатентный документ 7). Температура реакции поддерживается в соответствующем диапазоне от 20°С до 200°С. В основном применяемый в реакции растворитель может варьировать, в зависимости от типа получаемого эфира карбоновой кислоты, и его примеры могут включать спирты, такие как метанол и этанол. Примеры кислоты могут включать неорганические кислоты, такие как хлористоводородная кислота и серная кислота. Время реакции может варьировать, в зависимости от типа используемого в реакции исходного материала или температуры реакции и в целом составляет от 1 часа до 72 часов.

Стадия 2

Данная стадия представляет собой реакцию конденсации соединения [11] с производным глюкозы или галактозы [12] и может быть осуществлена по известной методике per se. В указанной реакции, в связи с тем, что конфигурация аномерного положения не может контролироваться, необходимо отделять и очищать отдельный диастереомер с помощью хроматографии на силикагеле или подобного. При использовании такой процедуры разделения могут быть получены соединения с обеими конфигурациями аномерного положения ( -форма и -форма). Примеры используемого в данной реакции основания включают 1,5-диазабицикло[4.3.0]-5-нонен, 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан и 1,8-диазабицикло[5.4.0]-7-ундецен. В основном, используемый в реакции растворитель особо не ограничивается, при условии, что он не участвует в данной реакции, и его примеры включают ацетонитрил и диметилсульфоксид. Температура реакции поддерживается в соответствующем диапазоне от 0°С до 100°С. Время реакции может варьировать в зависимости от типа используемого в реакции исходного вещества, температуры реакции и т.п., и в целом составляет от 1 часа до 72 часов. Далее, если требуется, в полученном соединении [6] защитная группа для каждой гидроксильной группы в R² может быть удалена в соответствии с известной для этого методикой.

Соединение по настоящему изобретению, полученное описанным способом, может быть выделено и очищено с использованием известной методики per se, такой как концентрирование, замена растворителя, фазовый перенос, экстракция растворителем, кристаллизация, перекристаллизация, фракционная дистилляция или хроматография.

Соединение по настоящему изобретению может быть использовано в качестве лекарственного средства в полученном виде или может быть преобразовано в его фармацевтически приемлемую соль известным методом.

Термин "соль" соединения по настоящему изобретению в контексте данного описания может включать фармацевтически приемлемую соль, например, соли неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, фтористоводородная кислота и бромистоводородная кислота, соли органических кислот, таких как уксусная кислота, винная кислота, молочная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота и камфорсульфоновая кислота, а также соли щелочных или щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий и кальций. Предпочтительна соль хлористоводородной кислоты (гидрохлорид).

Гидрохлорид по настоящему изобретению может быть получен при обработке соединения по настоящему изобретению спиртовым раствором хлороводорода или его раствором в диэтиловом эфире, с последующим получением осажденных кристаллов с помощью фильтрования или в том случае, когда кристаллы не осаждаются, путем концентрирования раствора, что приводит к осаждению кристаллов, и далее получения кристаллов, например, фильтрованием.

Как будет показано далее в экспериментальных примерах, соединение по настоящему изобретению характеризуется одним замечательным свойством, состоящим в том, что оно с трудом переносится в плазму, которым не обладают доступные в настоящее время продукты на основе 5-АСК, и благодаря которому 5-АСК, являющаяся активным ингредиентом, эффективно доставляется после введения к пораженным местам, т.е. в слепую кишку, и в толстую кишку, в проксимальный и дистальный участки кишки и в прямую кишку при пероральном введении. В этой связи, соединение по настоящему изобретение полезно в качестве терапевтического средства при язвенном колите, которое является безопасным и может вводиться в течение длительного периода времени. В частности, соединение [1] обладает выраженным эффектом.

На модели крыс с колитом, индуцированным тринитробензолсульфоновой кислотой (ТНБС), как будет описано ниже в соответствующих примерах, соединение [1] по настоящему изобретению существенно подавляет поражение, оцениваемое в баллах, и снижает сырой вес толстой кишки, что указывает на возможность его применения в качестве прекрасного терапевтического средства при язвенном колите.

Что касается введения соединения по настоящему изобретению в качестве лекарственного препарата, то соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль может вводиться млекопитающим, включая человека, в виде самого по себе данного соединения или в виде его фармацевтической композиции, содержащей соединение в фармацевтически приемлемом нетоксичном и неактивном носителе, в количестве, например, от 0,1% до 99,5%, предпочтительно от 0,5% до 90%.

Фармацевтически приемлемый носитель может включать разбавители и наполнители в виде твердых, полутвердых или жидких или другого рода добавок, применяемых при создании композиций, и по меньшей мере одна из них используется. Фармацевтическую композицию вводят предпочтительно в дозированной форме. Фармацевтическая композиция может вводиться перорально или парентерально (например, путем трансректального введения и т.п.). И, разумеется, для введения используют дозированную форму, подходящую для данных способов введения. Например, предпочтительно пероральное введение.

Дозировка соединения по настоящему изобретению предпочтительно может корректироваться на основании состояния пациента, с учетом таких факторов, как возраст, вес тела, характер и тяжесть заболевания, а также путь введения, и обычно эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 10 мг на взрослого человека до 10 г на взрослого человека, предпочтительно от 1 г до 4 г на взрослого человека в день, при пероральном введении. В некоторых случаях может быть достаточна дозировка, меньшая, чем указанный диапазон дозировок, или может потребоваться дозировка, превышающая указанный диапазон. Обычно дневная доза вводится один раз в день или несколько раз, при разделении ее на несколько порций.

Для перорального введения может использоваться твердая или жидкая дозированная форма, такая как препарат из частиц, порошок, таблетка, таблетка, покрытая сахарной оболочкой, капсула, гранула, суспензия, жидкость, сироп, капли, сублингвальная таблетка или другие дозированные формы.

Препарат из частиц может быть получен путем распыления соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли до частиц соответствующего размера.

Порошок может быть получен путем распыления соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической соли до частиц соответствующего размера с последующим смешиванием его с фармацевтическим носителем, таким как пищевой углевод, такой как крахмал или маннит или т.п. Для смешивания могут быть взяты, если требуется, отдушки, консерванты, средства, способствующие диспергированию, красители, ароматизаторы или т.п.

Капсула может быть получена при введении в оболочку капсулы, такой как желатиновая капсула, для ее заполнения частиц или порошка, которые были получены путем распыления, как описано выше, или путем гранулирования, что будет описано применительно к таблеткам в соответствующем разделе. К порошку может быть добавлен замасливатель или средство, способствующее текучести материала, например, коллоидный кремнезем, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, твердый полиэтиленгликоль, и затем может быть проведена процедура заполнения. В случае добавления средства, способствующего разложению, или солюбилизатора, например, карбоксиметилцеллюлозы, кальций-карбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, с низкой степенью замещения, натрий-кросскармелолозы, натрий-карбоксиметилкрахмала, карбоната кальция или карбоната натрия, эффективность лекарственного препарата, для которого выбрана форма капсулы, может быть повышена.

Таблетка может быть получена путем приготовления порошковой смеси с эксципиентом, ее гранулирования или комкования, добавления в нее разрыхлителя или замасливателя, с последующим прессованием в таблетки. Порошковая смесь может быть получена путем смешивания распыленного соответствующим образом материала с указанным выше разбавителем или основой и, при необходимости, в сочетании с ними может использоваться связующее вещество (например, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, желатин, поливинилпирролидон или поливиниловый спирт), средство, задерживающее растворение (например, парафин), реабсорбент (например, четвертичная соль) или адсорбент (например, бентонит, каолин, фосфат дикальция). Порошковая смесь может быть вначале подвергнута увлажнению связующим веществом, таким как сироп, крахмальный клей, аравийская камедь, раствор целлюлозы и раствор полимера, с последующими объединением при перемешивании, сушкой и размолом. Вместо описанной выше процедуры гранулирования порошка, после обработки на машине для прессования таблеток образовавшиеся полуготовые комочки размалывают с получением гранул. Не допускают, чтобы сформированные таким образом гранулы слипались, добавляя стеариновую кислоту, стеаратную соль, тальк, минеральное масло или другое вещество, действующее в качестве замасливателя. Обработанную замасливателем смесь подвергают далее таблетированию. Получаемые при этом таблетки без покрытия могут быть подвергнуты процедуре нанесения пленочного покрытия или сахарного покрытия.

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль могут быть непосредственно спрессованы в таблетки после перемешивания с жидким неактивным носителем, без введения стадий гранулирования и формирования комков, описанных выше. Может также использоваться прозрачная или полупрозрачная защитная пленка, имеющая вид защитной пленки из шеллака, пленки из сахарного полимерного материала, глянцевой пленки, состоящей из воска. Другие перорально вводимые формы, такие как раствор, сироп и эликсир, могут быть изготовлены в виде стандартной дозированной формы так, чтобы определенное ее количество содержало соответствующее количество лекарственного средства. Сироп может быть изготовлен путем растворения соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли в водном растворе с соответствующими отдушками, а эликсир может быть получен при использовании нетоксичного спиртового носителя.

При необходимости, стандартная дозированная форма для перорального введения может быть подвергнута микроинкапсулированию. Могут быть также достигнуты более длительный срок действия и пролонгированное высвобождение активного ингредиента при нанесении покрытия на композицию или путем погружения ее в полимер, воск или т.п.

При парентеральном введении может использоваться суппозиторий или аналогичная форма. Для трансректального введения может использоваться суппозиторий, полученный путем растворения или суспендирования соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли в водорастворимом или нерастворимом в воде твердом веществе с низкой температурой плавления, таком как полиэтиленгликоль, масло какао, полусинтетические масло и жир (например, Витепсол (Witepsol) (зарегистрированная торговая марка)), высшие сложные эфиры (например, миристилпальмитат) или их смесь.

Краткое описание чертежей

[Фиг.1] На фиг.1 показано изменение концентрации 5-АСК в плазме. Вертикальная ось обозначает концентрацию 5-АСК в плазме (нг/мл), а горизонтальная ось обозначает время (час). Черные кружочки, белые ромбы, белые треугольники и белые кружки обозначают изменение концентрации 5-АСК после введения соединения [1], соединения [2], соединения [3] и Пентазы (зарегистрированная торговая марка), соответственно.

[Фиг.2] На фиг.2 показано изменение количества 5-АСК в содержимом слепой кишки. На вертикальной оси показано количество 5-АСК (в % от дозы), присутствующее в содержимом слепой кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Черные кружочки, белые кружочки и черные треугольники показывают изменение количества 5-АСК после введения соединения [1], Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и 5-АСК, соответственно.

[Фиг.3] На фиг.3 показано изменение количества 5-АСК в содержимом проксимальной кишки. На вертикальной оси показано количество 5-АСК (в % от дозы), присутствующее в содержимом проксимальной кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Черные кружочки, белые кружочки и черные треугольники показывают изменение количества 5-АСК после введения соединения [1], Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и 5-АСК, соответственно.

[Фиг.4] На фиг.4 показано изменение количества 5-АСК в содержимом дистальной кишки. На вертикальной оси показано количество 5-АСК (в % от дозы), присутствующее в содержимом дистальной кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Черные кружочки, белые кружочки и черные треугольники показывают изменение количества 5-АСК после введения соединения [1], Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и 5-АСК, соответственно.

[Фиг.5] На фиг.5 показано изменение количества 5-АСК в содержимом прямой кишки. На вертикальной оси показано количество 5-АСК (в % от дозы), присутствующее в содержимом прямой кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Черные кружочки, белые кружочки и черные треугольники показывают изменение количества 5-АСК после введения соединения [1], Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и 5-АСК, соответственно.

[Фиг.6] На фиг.6 показано изменение концентрации 5-АСК в ткани ободочной кишки. Вертикальная ось обозначает концентрацию 5-АСК в плазме (мкг/г), имеющуюся в 1 г ободочной кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Белые ромбы и белые кружки обозначают изменение концентрации 5-АСК после введения соединения [2] и Пентазы (зарегистрированная торговая марка), соответственно.

[Фиг.7] На фиг.7 показано изменение концентрации 5-АСК в ткани прямой кишки. Вертикальная ось обозначает концентрацию 5-АСК (мкг/г), имеющуюся в 1 г прямой кишки крысы, а горизонтальная ось обозначает время (час). Белые ромбы и белые кружки обозначают изменение концентрации 5-АСК после введения соединения [2] и Пентазы (зарегистрированная торговая марка), соответственно.

[Фиг.8] На фиг.8 проиллюстрирован терапевтический эффект Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и соединения [1] у крыс с ТНБС(TNBS)-индуцированным колитом, с использованием оценки балльного показателя развития поражения. На вертикальной оси показан показатель выраженности поражения, в баллах, а на горизонтальной оси показана доза каждого из исследуемых лекарственных средств (мг/кг/на однократное введение).

[Фиг.9] На фиг.9 проиллюстрирован терапевтический эффект Пентазы (зарегистрированная торговая марка) и соединения [1] у крыс с ТНБС-индуцированным колитом, оцениваемый по сырому весу ткани, имеющей отношение к развитию колита. На вертикальной оси показан сырой вес толстой кишки (u), а на горизонтальной оси показана доза каждого из исследуемых лекарственных средств (мг/кг/на однократное введение).

Наилучший способ осуществления изобретения

Настоящее изобретение ниже поясняется более детально с помощью иллюстрирующих его примеров, тест-примеров и примеров составления композиции, но данное изобретение не ограничивается указанными вариантами реализации.

Пример 1: 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота

Стадия 1: Метил-5-нитросалицилат

К раствору 30 г 5-нитросалициловой кислоты в 500 мл безводного метанола добавляют по каплям концентрированную серную кислоту и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении и разбавляют 500 мл этилацетата и далее добавляют еще 500 мл воды. Затем при охлаждении льдом к реакционной смеси медленно добавляют насыщенный раствор бикарбоната натрия до щелочной реакции (рН 9). Отфильтровывают образовавшийся желтый осадок и водный слой фильтрата экстрагируют этилацетатом. Объединенный органический слой промывают водой и насыщенным раствором соли, после чего сушат над безводным сульфатом магния и затем фильтруют. После этого растворитель концентрируют, получая 31,26 г метил-5-нитросалицилата.

Стадия 2-1: 2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилбромид

Раствор 1',2',3',4',6'-пента-О-ацетил- -D-галактопиранозы в 500 мл метиленхлорида охлаждают льдом и добавляют к нему по каплям 177,5 г 30% раствора бромоводорода в уксусной кислоте. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 14 часов и затем выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия, содержащий лед. Органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. После этого растворитель концентрируют, получая 68,7 г 2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилбромида.

Стадия 2-2: Метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоат

К раствору 30,55 г метил-5-нитросалицилата, полученного на стадии 1, и 63,7 г 2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилбромида, полученного на стадии 2-1, в 250 мл хинолина добавляют 35,92 г оксида серебра и указанную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 62 часов. Реакционную смесь разбавляют 1000 мл этилацетата и затем проводят фильтрацию через целит. Этилацетатный слой промывают дважды с использованием по 1000 мл 2н. хлористоводородной кислоты, после чего проводят двукратную экстракцию этилацетатом. Объединенный органический слой промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом натрия и затем фильтруют. Далее растворитель концентрируют, получая 71,7 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 2-3: Метил-5-нитро-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоат

Метанольный раствор, содержащий 10,55 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 2-2, перемешивают при температуре 60°С и добавляют к нему метоксид натрия. Смесь перемешивают в течение 30 минут, после чего добавляют 5,0 г Амберлита IRC-50 (Amberlite IRC-50) для нейтрализации. Полученный после фильтрования органический слой концентрируют с образованием 4,90 г метил-5-нитро-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 3: Метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоат

К раствору 4,90 г метил-5-нитро-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 2-3, в 100 мл метанола добавляют 0,49 г 10% палладия на угле и проводят каталитическое восстановление при комнатной температуре в атмосфере водорода под давлением 1 атм. Через 20 часов реакционный раствор фильтруют для удаления катализатора и концентрируют органический слой, получая 4,18 г метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 4: 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота

К суспензии 4,18 г метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 2-4, в 120 мл безводного метанола добавляют по каплям 12,7 мл 1н. раствора гидроксида натрия. Смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 16 часов. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении и остаток разбавляют дистиллированной водой. Затем раствор нейтрализуют при добавлении 6,4 мл 2н. раствора хлористоводородной кислоты. Далее смесь концентрируют, получая 3,41 г требуемого соединения.

Бесцветный порошок

MS (EI): m/z = 338 [M + Na]⁺

Вращение: [ ]_D ²⁰ = -19,84 (С = 1,28, Н₂О)

Элементный анализ (С₁₃Н₁₇NO ₈)

Расчет (в %): С - 49,52; Н - 5,43; N - 4,44;

Найдено (в %): С - 49,12; Н - 5,37; N - 4,38

¹Н ЯМР (D₂O): 3,74-4,01 (м, 6H, H-2 до 6), 5,04 (д, 1H, J_1,2= 7,4 Гц, H-1), 7,30-7,39 (м, 3H, Ph)

Пример 2: 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота

Стадия 1: Метил-2-фтор-5-нитробензоат

Раствор, содержащий 12,0 г 2-фтор-5-нитробензойной кислоты, 60 мл безводного тетрагидрофурана и 60 мкл диметилформамида, охлаждают льдом и по каплям добавляют к нему 9,05 г оксалилхлорида. После окончания добавления капель смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. К реакционному раствору добавляют по каплям 30 мл безводного тетрагидрофурана и 30 мл метанольного раствора, после чего смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении и разбавляют 240 мл этилацетата. Затем разбавленный раствор промывают 5% водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Затем растворитель концентрируют и к концентрированному остатку добавляют 24 мл изопропилового эфира для растворения остатка. Далее раствор охлаждают до 5°С для осаждения кристаллов. Осажденные кристаллы отфильтровывают при пониженном давлении и сушат при комнатной температуре и при пониженном давлении с получением 10,5 г метил-2-фтор-5-нитробензоата.

Стадия 2: Метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоат

К раствору 7,13 г метил-2-фтор-5-нитробензоата, полученного на стадии 1, и 12,50 г 2',3',4',6'-тетра-О-ацетил-D-галактопиранозы в 70 мл ацетонитрила добавляют по каплям 4,95 г DBU и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении, разбавляют 300 мл этилацетата, промывают 150 мл 1н. хлористоводородной кислоты, 150 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия и 150 мл насыщенного раствора соли, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Затем концентрируют растворитель. Концентрат подвергают очистке хроматографией на колонке (Wako гель (зарегистрированная торговая марка) С-200 (производство Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), н-гексан: этилацетат = от 4 до 1,5), получая 7,51 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата и 7,92 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 3-1: Метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоат

К раствору 7,00 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 2-1, в 210 мл метанола добавляют 0,70 г 10% палладия на угле и проводят каталитическое восстановление при комнатной температуре в атмосфере водорода под давлением 1 атм. Через 18 часов реакционный раствор фильтруют для удаления катализатора и органический слой концентрируют. Концентрат подвергают очистке хроматографией на колонке (Wako гель (зарегистрированная торговая марка) С-200 (производство Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), н-гексан:этилацетат = 3:1 - 3:2), получая 5,73 г метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 3-2: Метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоат

К 5,52 г метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 3-1, в 100 мл безводного тетрагидрофурана и безводного метанола (1:1), добавляют 307 мг карбоната калия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении и концентрат подвергают очистке хроматографией на колонке (Wako гель (зарегистрированная торговая марка) С-200 (производство Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), хлороформ:метанол = 10:1 - 5:1), получая 2,71 г метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата.

Стадия 4: 5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензойная кислота

К суспензии 2,00 г метил-5-амино-2-( -D-галактопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 3-2, в 40 мл воды добавляют по каплям 6,07 мл 1н. водного раствора гидроксида натрия и смесь перемешивают при температуре 50°С в течение 2 часов. Реакционный раствор фильтруют для удаления нерастворимых веществ и фильтрат нейтрализуют добавлением к нему 6,07 мл 1н. хлористоводородной кислоты. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении, получая 1,34 г требуемого соединения.

Слегка желтый порошок

MS (FAB): m/z = 338 [M + 1] ⁺

Вращение: [ ]_D ²⁰ = 79,37 (С = 1,28, Н₂О)

Элементный анализ (С₁₃Н₁₇NO ₈·0,8Н₂О))

Расчет (в %): С - 47,36; Н - 5,69; N - 4,22;

Найдено (в %): С - 47,20; Н - 5,48; N - 4,22

¹Н ЯМР (D ₂O): 3,70-4,10 (м, 6H, H-2 до 6), 5,76 (д, 1H, J _1,2= 3,6 Гц, H-1), 7,37-7,40 (м, 3H, Ph)

Справочный пример 1: 5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензойная кислота

Стадия 1: Метил-5-нитросалицилат

Синтез проводят по методике, описанной применительно к стадии 1 примера 1.

Стадия 2: Метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоат

К раствору 6,0 г метил-5-нитросалицилата, полученного на стадии 1, и 18,8 г 2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилбромида, в 60 мл хинолина добавляют 10,5 г оксида серебра и раствор энергично перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционный раствор разбавляют 300 мл этилацетата и затем фильтруют через целит. Этилацетатный слой промывают дважды 2 мл 2н. хлористоводородной кислоты и затем проводят двукратную экстракцию водного слоя с использованием по 300 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом натрия и затем фильтруют. Далее растворитель концентрируют, получая 15,63 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоата.

Стадия 3-1: Метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоат

К суспензии 12,0 г метил-5-нитро-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 2, в 400 мл метанола добавляют 2,4 г 10% палладия на угле и проводят каталитическое восстановление при 30°С в атмосфере водорода под давлением 3 атм. Через 3 часа проводят фильтрование через целит. Растворитель концентрируют, получая 11,2 г метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоата.

Стадия 3-2: Метил-5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензоат

К 16 мл раствора безводного тетрагидрофурана и метанола (1:1), содержащего 0,68 г метил-5-амино-2-(2',3',4',6'-тетра-О-ацетил- -D-глюкопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 3-1, добавляют 37,8 мг карбоната калия и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. К реакционному раствору добавляют по каплям 0,14 мл 4н. раствора хлористого водорода/этилацетата и концентрируют растворитель. Полученный неочищенный продукт подвергают очистке с использованием хроматографии на колонке с силикагелем (Wako гель (зарегистрированная торговая марка) С-200 (производство Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), метиленхлорид:метанол = от 10:1 до 8:1 и до 5:1), получая 332 мг метил-5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензоата.

Стадия 4: 5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензойная кислота

К суспензии 100 мг метил-5-амино-2-( -D-глюкопиранозилокси)бензоата, полученного на стадии 3-2, в 3 мл метанола добавляют по каплям 0,3 мл 1н. водного раствора гидроксида натрия и смесь перемешивают при температуре 50°С. Через 5 часов температуру снова доводят до комнатной и растворитель отгоняют при пониженном давлении. Полученный маслянистый остаток растворяют в 1 мл воды и добавляют к нему по каплям 0,3 мл 1н. хлористоводородной кислоты, при перемешивании и охлаждении льдом. Данный раствор далее концентрируют примерно до 1/3 его исходного объема и осевший материал отделяют фильтрованием, получая 93 мг требуемого соединения.

Элементный анализ (C ₁₃H₁₇NO₈·0,2H ₂O)

Расчет (в %) С - 48,97; Н - 5,50; N - 4,39

Найдено (в %): С - 48,80; Н - 5,35; N - 4,31

Тест-пример 1: Определение концентрации 5-АСК в плазме

7-недельным самцам крыс SD вводят внутривенно 5-АСК в качестве исследуемого лекарственного средства и вводят перорально соединение [1], соединение [2], соединение [3] или Пентазу в дозе 50 мг/кг в качестве 5-АСК. Концентрацию в плазме 5-АСК определяют с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В случае Пентазы (зарегистрированная торговая марка) используют гранулы, полученные распылением таблеток Пентазы (зарегистрированная торговая марка).

Полученные результаты показаны в таблице.

Таблица Значения фармакокинетических параметров, определяемые на основании уровней 5-АСК в плазме крыс
Соединение	Способ введения	Доза (50 мг/кг)	Время достижения максимальной концентрации в плазме (Т мах) (час)	Максимальная концентрация в плазме (Смах) (нг/мл)	Площадь под кривой концентрации (AUC) (нг·час/мл)	Биологическая доступность1) (БД) (в %)
5-АСК	в/в	1	-	-	1417	-
Пентаза	Перорально	50	2	4958	10441	15
Соединение [1]	Перорально	50	0,5	435	1504	2
Соединение [2]	Перорально	50	8	160	571	0,8
Соединение [3]	Перорально	50	1	1962	4235	6
n = 2-3 1) (AUC после перорального введения каждого исследуемого соединения / AUC после внутривенного введения 5-АСК) × (количество внутривенно введенного 5-АСК / количество перорально введенного каждого исследуемого соединения) × 100

Из приведенные выше данных видно, что 5-АСК выявляется в плазме в относительно высокой концентрации после перорального введения Пентазы (зарегистрированная торговая марка) (см. фиг.1), из чего следует, что 5-АСК высвобождается из части введенной Пентазы в верхней части тонкой кишки в месте всасывания.

С другой стороны, концентрации 5-АСК в плазме после перорального введения соединения [1], соединения [2] и соединения [3], каждое из которых представляет собой гликозид 5-АСК, остается низкой в сравнении с концентрацией Пентазы (зарегистрированная торговая марка) (см. фиг.1). Кроме того, в случае введения соединения [1] или соединения [2] концентрации 5-АСК в плазме остаются низкими в сравнении с вариантом введения соединения [3], когда выявляются малые концентрации 5-АСК (см. фиг.1). Вычисляют показатели биологической доступности 5-АСК (см. таблицу) после перорального введения соединения [1], соединения [2], соединения [3] и Пентазы (зарегистрированная торговая марка), которые составляют 2, 0,8, 6 и 15%, соответственно. А именно, найдено, что соединение [1], соединение [2] и соединение [3] имеют более низкую скорость абсорбции из желудочно-кишечного тракта по сравнению с Пентазой. Таким образом, показано, что соединение [1], соединение [2] и соединение [3] характеризуются относительно низкими показателями биологической доступности.

Вероятная причина этого заключается в том, что соединение [1] и соединение [2] не могут быть легко гидролизованы в желудке и в тонкой кишке, в отличие от соединения [3] и, в этой связи, они не приводят к образованию 5-АСК в желудке и в верхней части тонкой кишки.

Тест-пример 2: Изменение концентрации 5-АСК в содержимом желудочно-кишечного тракта

7-недельным самцам крыс SD вводят перорально соединение [1], Пентазу (зарегистрированная торговая марка) в дозе 50 мг/кг в качестве 5-АСК и затем гомогенизируют и центрифугируют содержимое слепой кишки, проксимальной кишки, дистальной кишки и прямой кишки. Далее определяют с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) количество 5-АСК в соответствующих местах толстой кишки. Что касается Пентазы (зарегистрированная торговая марка), то для анализа используют гранулы, полученные распылением таблеток Пентазы (зарегистрированная торговая марка).

Полученные результаты проиллюстрированы на фиг.2 - фиг.5.

Данные по содержанию 5-АСК в соответствующих местах толстой кишки показывают, что наивысшие его количества выявляются при введении соединения [1] (см. фиг. 2, 3, 4 и 5).

Далее вводят перорально соединение [2] и Пентазу (зарегистрированная торговая марка) в дозе 50 мг/кг в качестве 5-АСК и гомогенизируют и центрифугируют ободочную кишку и прямую кишку. Затем определяют с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) концентрации 5-АСК в ткани ободочной кишки и в ткани прямой кишки. Что касается Пентазы (зарегистрированная торговая марка), то для анализа используют гранулы, полученные распылением таблеток Пентазы (зарегистрированная торговая марка).

Полученные результаты проиллюстрированы на фиг.6 и фиг.7.

В случае введения соединения [2] концентрации 5-АСК в ткани ободочной кишки и в ткани прямой кишки были также выше, чем в варианте введения Пентазы (зарегистрированная торговая марка) (см. фиг.6 и фиг.7).

Результаты тест-примера 1 подтверждают, что соединение [1] и соединение [2] не подвергаются быстрому гидролизу в желудке и тонкой кишке, не образуют 5-АСК в желудке и верхнем отделе тонкой кишки и в небольшом количестве абсорбируются из желудочно-кишечного тракта.

Из результатов тест-примера 2 следует также, что соединение [1] и соединение [2] доставляются в место поражения в толстой кишке и метаболизируются до 5-АСК бактериями кишечника. В частности, в случае соединения [1], 5-АСК, которая эффективна при язвенном колите, обнаруживается в высоких концентрациях в соответствующих местах толстой кишки.

Тест-пример 3: Исследование воздействия соединения [1] на колит у крыс, индуцированный тринитробензолсульфоновой кислотой (далее сокращенно ТНБС (TNBS))

Самкам крыс SD после 24-часового голода для индукции колита вводят в толстую кишку водный раствор ТНБС/50% этанол (30 мг/0,25 мл/крысу) на расстоянии 8 см от ануса с использованием зонда для перорального введения под анестезией пентобарбиталом. Через 3 дня после введения ТНБС вырезают толстую кишку и определяют взвешиванием вес толстой кишки в сыром состоянии на расстоянии 8 см от ануса. Степень развития колита оценивают по балльной системе по методу Валласа с соавт. (Wallace et al., Gastroenterology, 96, 29-36 (1989)). В качестве исследуемых соединений вводят перорально два раза в день Пентазу (зарегистрированная торговая марка) в дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг и соединение [1] в дозах 61,8 мг/кг и 205,9 мг/кг (что соответствует по расчетам 30 мг/кг и 100 мг/кг 5-АСК) (в день применения ТНБС вводят один раз в день за 4 часа до введения ТНБС). Пентазу (зарегистрированная торговая марка), вводят в виде гранул, полученных распылением таблеток Пентазы (зарегистрированная торговая марка).

Полученные результаты проиллюстрированы на фиг.8 и фиг.9.

Соединение [1] существенно снижает степень поражения (по системе балльной оценки) при использовании его в дозе 61,8 мг/кг (что соответствует 30 мг/кг 5-АСК) и в значительной мере ингибирует увеличение сырого веса толстой кишки в дозе 205,9 мг/кг (что соответствует 100 мг/кг 5-АСК) (см. фиг. 8 и 9). Тогда как Пентаза (зарегистрированная торговая марка) не демонстрирует явного воздействия ни на степень поражения (по балльной оценке), ни на уровень увеличения сырого веса толстой кишки.

Пример приготовления композиции 1: Порошковая форма лекарственного препарата (для внутреннего применения)

При весе препарата 700 мг
Соединение [1]	500 мг
Кукурузный крахмал	127 мг
Кристаллическая целлюлоза	35 мг
Поливиниловый спирт	35 мг
Стеарат магния	3 мг

250 мг соединения [1], 63,5 г кукурузного крахмала и 17,5 г кристаллической целлюлозы вводят в псевдоожиженный слой гранулятора/сушилки и распыляют 175 мл 10% водного раствора поливинилового спирта для гранулирования. Затем к указанному слою добавляют стеарат магния (0,4% об./об.), получая порошковый препарат весом 700 мг, содержащий 500 мг данного соединения.

Пример приготовления композиции 2: Таблетка (препарат для внутреннего применения)

При весе препарата 600 мг
Соединение [1]	400 мг
Кукурузный крахмал	153 мг
Кристаллическая целлюлоза	42 мг
Стеарат магния	5 мг

Порошковую смесь 400 г соединения [1], 153 г кукурузного крахмала и 42 г кристаллической целлюлозы прессуют с использованием сухого гранулятора и распыляют до гранул. Затем к указанной смеси добавляют стеарат магния (0,8% об./об.) и смесь формуют в таблетки весом 600 мг и диаметром 11 мм, получая таким образом таблетки, содержащие, каждая, по 400 мг данного соединения.

Пример приготовления композиции 3: Капсула (для внутреннего применения)

При весе препарата 500 мг
Соединение [1]	250 мг
Безводный гидрофосфат кальция	222,5 мг
Натрийкроскармеллоза	25 мг
Стеарат магния	2,5 мг

Порошковую смесь 250 г соединения [1], 222,5 г безводного гидросфата кальция и 25 г натрийкроскармеллозы прессуют с использованием сухого гранулятора и распыляют до гранул. Затем к указанной смеси добавляют стеарат магния (0,5% об./об.) и 500 мг смеси вводят для заполнения в твердую капсулу No. 0, получая таким образом капсулу, содержащую 250 мг данного соединения.

Пример приготовления композиции 4: Цилиндрические гранулы (препарат для внутреннего применения)

При весе препарата 1000 мг
Соединение [1]	750 мг
Кукурузный крахмал	170 мг
Кристаллическая целлюлоза	50 мг
Поливиниловый спирт	30 мг

375 г соединения [1], 85 г кукурузного крахмала и 25 г кристаллической целлюлозы вводят в месильную машину и добавляют 125 мл 12% водного раствора поливинилового спирта и смесь перемешивают. Затем замешанный материал подвергают экструзии через формовочный экструдер, снабженный ситом с отверстиями диаметром 0,7 мм. Экструдированный материал сушат и просеивают, получая гранулы весом 1000 мг, содержащие, каждая, по 750 мг данного соединения.

Пример приготовления композиции 5: Сферические покрытые оболочкой гранулы (препарат для внутреннего применения)

При весе препарата 1000 мг
Нонпарель	200 мг
Соединение [1]	500 мг
Кукурузный крахмал	170 мг
Низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза	40 мг
Гидроксипропилцеллюлоза	50 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	30 мг
Пропиленгликоль	6 мг
Оксид титана	4 мг

200 мг нонпареля (24-32 меш) вводят в устройство для нанесения покрытия путем гранулирования в псевдоожиженном слое, снабженное центрифугой, и при распылении 8% водного раствора гидроксипропилцеллюлозы (в 50% этаноле), медленно добавляют порошковую смесь 500 г соединения [1], 170 г кукурузного крахмала и 40 г низкозамещенной гидроксипропилцеллюлозы для гранулирования и полученные гранулы сушат с образованием примерно 900 г основы для сферических гранул.

Затем 400 г указанной основы для сферических гранул вводят в псевдоожиженный слой гранулятора/сушилки и распыляют 250 мл водного раствора, содержащего 12,5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 2,5 г пропиленгликоля и 1,7 г оксида титана, получая покрытые оболочной сферические гранулы весом 1000 мг, содержащие, каждая, по 500 мг данного соединения.

Промышленная применимость

Соединение по настоящему изобретению характеризуется определенными свойствами, позволяющими эффективно доставлять 5-АСК, используемую в качестве терапевтического средства при язвенном колите, непосредственно в толстую кишку, как месту его воздействия, так что при этом не допускается перенос 5-АСК в плазму. Иными словами, в этом случае возможно снизить системные побочные эффекты и, соответственно, повышать дозу, необходимую для получения максимального терапевтического эффекта.