средство для профилактики и лечения алкоголизма и способ его применения

Формула изобретения

1. Средство для профилактики и лечения алкоголизма, содержащее активное начало на основе цианамида и вспомогательные вещества, отличающееся тем, что оно содержит смесь цианамида и полилактида в соотношении (мас.) от 10:90 до 40:60.

2. Способ профилактики и лечения алкоголизма путем введения в организм смеси, содержащей цианамид, отличающийся тем, что больному вводят внутримышечно раствор, содержащий смесь цианамида и полилактида по п.1 в разовой дозе 0,5-1,5 г.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что средство вводят 1 раз в месяц.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что средство вводят в виде раствора, содержащего карбоксиметилцеллюлозу - 0,3-1,0 мас.%, твин 80 - 0,05-0,2 мас.%, маннозу - 3-10 мас.%, натрий хлористый 0,5-2,0 мас.%, смесь цианамида и полилактида 20-40 мас.%, вода апирогенная - остальное.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к средствам для профилактики и лечения алкоголизма и способам их применения.

Для России злоупотребление алкоголем, алкоголизм является общенациональной проблемой. По официальным данным, в России на душу населения в 2001 году потреблялось 10.7 литров чистого алкоголя в год (World Health Organization. Global Alcohol Database. 2006) и является одним из самых высоких в мире (Немцов А.В. Алкогольный урон регионов России. М.: "NALEX", 2003). В 2005 году специализированными учреждениями Росздрава зарегистрировано 3 млн. 445 тысяч больных наркологическими расстройствами, или 2,4% общей численности населения. 84,2% от общего числа зарегистрированных - это больные алкогольной зависимостью. Алкоголь служит важнейшим деструктивным фактором демографического, социального и экономического развития России. Как показывают исследования, тяжелые алкогольные проблемы являются главной причиной того, что уровень смертности россиян катастрофически высок. (Халтурина Д.А., Коротаев А.В. Русский крест. Факторы, механизмы и пути преодоления демографического кризиса в России. М.: УРСС, 2006; Немцов А.В. Алкогольная смертность в России 1980-90-е гг. М.: "NALEX", 2001; Немцов А.В. 2006. География связанной с алкоголем смертности в России. Доклад на всероссийской конференции "Концепция алкогольной политики России", Москва, 18 мая 2006).

Основой лечебных мероприятий при алкоголизме, как и при любом другом хроническом заболевании, является формирование и максимальное продление терапевтических ремиссий, то есть периодов полного воздержания пациентов от употребления алкоголя. Несмотря на разнообразие психотерапевтических методов и социальных программ, направленных на стабилизацию ремиссий у больных алкоголизмом, эффективность терапии этого заболевания продолжает оставаться недостаточной (Крупицкий Е.М., Звартау Э.Э. Применение фармакологических средств для стабилизации ремиссий и профилактики рецидивов при акоголизме. Ученые записки Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова. СПб., 2003. Т.X. №2. С.12-23). У 75% пациентов происходит срыв в первый год, а у 50% - в первые три месяца лечения (Ерышев О.Ф., Рыбакова Т.Г., Шабанов П.Д. Алкогольная зависимость: формирование, течение, противорецидивная терапия. - СПб.: Издательство «ЭЛБИ-СПб», 2002. - 192 c.; Niederhofer, H., Staffen, W. and Mair, A. (2003) Comparison of cyanamide and placebo in the treatment of alcohol dependence of adolescents. Alcohol and Alcoholism, 38, 50-53).

В настоящее время основными лекарственными препаратами, применяемыми при лечении алкоголизма, являются naltrexone, acamprosate, disulframum, cyanamide и ряд других лекарственных средств, недостаточно изученных из-за ограниченного количества обоснованных данных клинических наблюдений (Крупицкий Е.М., Звартау Э.Э. Применение фармакологических средств для стабилизации ремиссий и профилактики рецидивов при акоголизме. Ученые записки Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова. СПб., 2003. Т.X. №2. С.12-23).

NALTREXONE. Эффективность налтрексона, антагониста опиатных рецепторов, в лечении алкоголизма изучалась в многочисленных двойных слепых рандомизированных плацебо-контролируемых исследованиях. Выявлена большая эффективность налтрексона по сравнению с плацебо по таким показателям, как период времени до рецидива алкоголизма и процент трезвых дней, в то время как по продолжительности периода полной абстиненции (т.е. полного воздержания от алкоголя) опиатные антагонисты значимо не отличались от плацебо. Есть исследования, указывающие на то, что налтрексон эффективнее, чем плацебо, стабилизирует ремиссию и предотвращает наступление развернутого рецидива алкоголизма вслед за срывом (единичным эпизодом употребления алкоголя). Однако в одном из недавних рандомизированных исследований, в котором сравнивались налтрексон, нефазодон и плацебо, были получены негативные результаты относительно эффективности налтрексона. По-видимому, отмеченный ими низкий комплайенс с приемом препарата обусловлен наличием у него нежелательного побочного действия. Мультицентровое двойное слепое рандомизированное исследование, проведенное в США учеными Йельского университета в нескольких госпиталях для ветеранов войн на больных с хронической тяжелой алкогольной зависимостью, также не выявило у налтрексона преимуществ по сравнению с плацебо (Volpicelli JR, et al. Naltrexone in the treatment of alcohol dependence. Arch Gen Psychiatry 1992; 49(11): 876-880; Volpicelli JR, et al. Naltrexone and alcohol dependence: role of subject compliance. Arch Gen Psychiatry 1997; 54: 737-742; Mason BJ, et al. A double-blind, placebo-controlled pilot study to evaluate the efficacy and safety of oral nalmefene HCl for alcohol dependence. Alcohol Clin Exp Res 1994; 18(5): 1162-1167; Oslin D, et al. Naltrexone as an adjunctive treatment for older patients with alcohol dependence. Am J Geriatr Psychiatry 1997; 5(4): 324-332; Anton RF, et al. Naltrexone and cognitive behavioral therapy for the treatment of outpatient alcoholics: results of a placebo-controlled trial. Am J Psychiatry 1999; 156(11): 1758-1764; Kranzler HR, et al. Naltrexone vs. Nefazodone for treatment of alcohol dependence. A placebo-controlled trial. Neuropsychopharmacology 2000; 22(5): 493-503.; Krysati J.H., et al. Naltrexone in the treatment of alcohol dependence. New England Journal of Medicine 2001; 345(24): 1734-1739; Крупицкий Е.М. Различные стратегии применения налтрексона для лечения алкоголизма: краткий обзор результатов научных исследований. Новые лекарственные препараты. М., 2006. Вып.2. С.44-47).

В 2006 в США зарегистрирован длительно действующий препарат Vivitrol компании Alkermes^® на основе антагониста опиатов налтрексона как средство лечения алкоголизма. Многоцентровые исследования показывают, что в зависимости от дозы препарата и пола пациентов на 20-35% снижается количество случаев тяжелого пьянства, 30% больных получавших Vivitrol в течение 3-х месяцев, оставались в ремиссии (James С. Garbutt, Henry R. Kranzler, Stephanie S. O'Malley, David R. Gastfriend, Helen М. Pettinati, Bernard L. Silverman, John W. Loewy, Elliot W. Ehrich, for the Vivitrex Study Group. JAMA, April 6, 2005 - Vol 293, No.13, 1617-1625).

ACAMPROSATE официально зарегистрирован в качестве средства для лечения алкоголизма в большинстве стран Европы, а также в Австралии и ЮАР. Акампросат (ацетил-гомотауринат кальция) имеет структурное сходство с ГАМК и таурином. В многочисленных лабораторных исследованиях было показано, что, помимо системы опиоидных нейропептидов, этанол непосредственно воздействует на ГАМК-ергическую и глутаматергическую нейротрансмиссию, и в особенности на рецепторы N-метил-D-аспартата (NMDA) (Berton F, et al. Acamprosate enhances N-methyl-D-apartate receptor-mediated neurotransmission but inhibits presynaptic GABA(B) receptors in nucleus accumbens neurons. Alcohol Clin Exp Res 1998; 22(1): 183-191.; Dahchour A, et al. Central effects of acamprosate: part 1. Acamprosate blocks the glutamate increase in the nucleus accumbens microdialysate in ethanol withdrawn rats. Psychiatry Res 1998; 82(2): 107-114).

Преклинические исследования показали, что лиганд NMDA-рецепторов акампросат вызывает дозозависимое уменьшение потребления этанола животными и полностью подавляет его в дозе 400 мг/кг (Wilde MI, Wagstaff AJ. Acamprosate. A review of its pharmacology and clinical potential in the management of alcohol dependence after detoxification. Drugs 1997; 53(6): 1038-53).

Клиническая эффективность акампросата изучалась в достаточно большом количестве двойных слепых рандомизированных клинических испытаний. (Lhuintre JP, et al. Acamprosate appears to decrease alcohol intake in weaned alcoholics. Alcohol Alcohol 1990; 25(6): 613-622.; Paille FM, et al. Double-blind randomized multicentre trial of acamprosate in maintaining abstinence from alcohol. Alcohol Alcohol 1995; 30(2): 239-247.; Sass H, et al. Relapse prevention by acamprosate. Results from a placebo-controlled study on alcohol dependence. Arch Gen Psychiatry 1996; 53(8): 673-680.; Whitworth AB, et al. Comparison of acamprosate and placebo in long-term treatment of alcohol dependence. Lancet 1996; 347(9013); 1438-1442.; Roussaux JP, Hers D, Ferauge M. Does acamprosate diminish the appetite for alcohol in weaned alcoholics? J Pharm Beig 1996; 51(2): 65-68.; Geerlings PJ, Ansoms C, van den Brink W. Acamprosate and prevention of relapse in alcoholics. Eur Addict Res 1997; 3: 129-137.; Barrias JA, et al. Acamprosate: multicenter Portugese efficacy and tolerance evaluation study. Psiquiatr Clin 1997; 18: 149-160.; Pelc I, et al. Efficacy and safety of acamprosate in the treatment of detoxified alcohol-dependent patients. A 90-day placebo-controlled dose-finding study. Br J Psychiatry 1997; 171: 73-77.; Poldrugo F. Acamprosate treatment in a long-term community-based alcohol rehabilitation program. Addiction 1997; 92(11): 1537-1546).

Большинство исследований продемонстрировало двойное превосходство акампросата над плацебо по таким параметрам, как продолжительность периода полного воздержания (время от включения в исследование до первого случая употребления алкоголя) и общее количество дней полной трезвости. 30% пациентов, получающих акомпресат в течение 3-х месяцев, остаются в ремиссии (Lhuintre JP, et al. Acamprosate appears to decrease alcohol intake in weaned alcoholics. Alcohol Alcohol 1990; 25(6): 613-622.; Ladewig D, et al. Acamprosate-a stabilizing actor in long-term withdrawal of alcoholic patients. Ther Umsch 1993; 50(3): 182-188.; Paille FM, et al. Double-blind randomized multicentre trial of acamprosate in maintaining abstinence from alcohol. Alcohol Alcohol 1995; 30(2): 239-247.; Roussaux JP, Hers D, Ferauge M. Does acamprosate diminish the appetite for alcohol in weaned alcoholics? J Pharm Beig 1996; 51(2): 65-68.; Geerlings PJ, Ansoms C, van den Brink W. Acamprosate and prevention of relapse in alcoholics. Eur Addict Res 1997; 3:129-137.; Barrias JA, et al. Acamprosate: multicenter Portugese efficacy and tolerance evaluation study. Psiquiatr Clin 1997; 18: 149-160.; Peic I, et al. Calcium acetyl homotaurinate for maintaining abstinence in weaned alcoholic patients; a placebo controlled double-blind multi-centre study. In: Naranjo C, Sellers E, eds. Novel pharmacological interventions for alcoholism. New York: Springer-Verlag, 1992: 348-352.; Poldrugo F. Acamprosate treatment in a long-term community-based alcohol rehabilitation program. Addiction 1997; 92(11) 1537-1546).

DISULFRAMUM является аверсивным препаратом, использующимся в наркологической практике с середины XX века. Дисульфирам ингибирует альдегид-дегидрогеназу, катализирующую окисление ацетальдегида, продукта окисления этанола, оказывающего токсическое действие. Таким образом, употребление алкогольных напитков на фоне действия дисульфирама приводит к ацетальдегидной интоксикации и аверсивным эффектам. Несмотря на продолжительное использование дисульфирама в лечении алкоголизма, корректных научных исследований эффективности его применения сравнительно немного. В рандомизированных контролируемых клинических испытаниях, выполненных в 80-е годы в США, было показано, что в отсутствии непосредственного контроля за приемом препарата дисульфирам не отличается значимо по клинической эффективности от плацебо, что, возможно, обусловлено, в первую очередь, низким комплайенсом с проводимой терапией (Fuller RK, et al. Disulfiram treatment of alcoholism. A Veterans Administration cooperative study. JAMA 1986; 256(11): 1449-1455).

В случае контроля комплайенса и использования специального вознаграждения больных за регулярный прием дисульфирама эффективность лечения существенно повышалась (Chick J, et al. Disulfiram treatment of alcoholism. Br J Psychiatry 1992; 161: 84-89).

В качестве альтернативы подобным методам улучшения комплайенса было предложено использовать пролонг дисульфирама в виде импланта (препарат «Эспераль»). Однако ни в одном из проведенных исследований эффективность пролонгированных форм дисульфирама не была продемонстрирована, возможно, в силу того, что имплант не обеспечивал стабильную и высокую концентрацию дисульфирама в крови, достаточную для развития дисульфирам-алкогольной реакции. Кроме того, при пероральном лечении дисульфирамом выявлен ряд недостатков: 1) его действие проявляется очень медленно; 2) возможны труднопрогнозируемые, чрезмерно сильные реакции «дисульфирам-алкоголь»; 4) толерантное количество алкоголя трудно определить; 5) в случае превышения дозы возможно возникновение дисульфирамовых психозов (Johnsen J, Morland J. Disulfiram implant: a double-blind placebo controlled follow-up on treatment outcome. Alcohol Clin Exp Res 1991; 15(3): 532-536.; Wilson A, et al. Disulfiram implantation: a dose response trial. J Clin Psychiatry 1984; 45(6): 242-247).

Важно отметить, что создание пролонгированных форм лекарственных препаратов на основе дисульфирама технологически затруднительно, поскольку при формировании длительно действующего депо необходимо использовать большое количество (десятки и сотни грамм, в зависимости от срока действия) лекарственной субстанции. Также остается высокий риск возникновения дисульфирамовых психозов при неравномерном высвобождении препарата.

CIANAMIDE (Temposil, Dipsan, Abstem, Coime). Подобно дисульфираму, препарат подавляет активность ацетальдегиддегидрогеназы, принимающей участие в двухзвенном окислительном метаболизме этанола: этанол-ацетальдегид-ацетат (Sina JF, Bean CL, Dysart GR, et al. Evaluation of the alkaline elution/rat hepatocyte assay as a predictor of carcinogenic/mutagenic potential. Mutat Res 1983; 113: 357-91.; Brien JF, Loomis CW. Disposition and pharmacokinetics ofdisulfiram and calcium carbimide (calcium cyanamide). Drug Metab Rev 1983; 14: 113-26.; Colom, H., Prunonosa, J., Peraire, С., Domenech, J., Azcona, O., Torrent, J. and Obach, R. (1999) Absolute bioavailability and absorption profile of cyanamide in man. Journal of Pharmacokinetic Biopharmacology 27, 421-436.)

Цианамид обладает надежным и быстрым, в сравнении с дисульфирамом, антиалкогольным эффектом. Прием алкоголя на фоне лечения этим препаратом вызывает аверсивную реакцию (приливы крови к лицу, тошноту, тахикардию, одышку и т.п.). Цианамид безопасен и вызывает меньше вредных побочных эффектов, чем дисульфирам (Mokasa. H.: Clinical study on the anti-alcoholic action of Cyanamide (I). The Journal of the Kurume Medical Association. 22, 1632. 1959.; Mokasa. H.: Studies on the physiological anti alcoholic effects of Cyanamide and its clinical application. Psychiatr. Neurol. Jap., 64,469. 1962.; Lancet (Apr.24, 1976): 911-912).

Сравнительное исследование клинической эффективности цианамида и дисульфирама вывило: более быстрое формирование сенсибилизации к алкоголю, мягкую, но достаточную выраженность аверсивной реакции, отсутствие грубых побочных расстройств, подавление влечению к алкоголю (Альтшулер В.Б., Кравченко С.Л., Русинов А.В. Препарат Колме (Colme) как средство аверсионной терапии больных алкоголизмом. ННЦН Росздрава. 2006. www.colme.ru). Цианамид лучше стабилизирует ремиссию, чем дисульфирам, тем самым уменьшая количество рецидивов (Иванец Н.Н. Отчет о результатах сравнительного открытого клинико-катамнестического исследования препарата КОЛМЕ в комплексном лечении больных с зависимостью от алкоголя. Национальный научный центр. 2006, С.26).

Главное преимущество цианамида перед дисульфирамом заключается в его более низкой собственной токсичности и в большей специфичности действия. В отличие от дисульфирама, цианамид не обладает гипотензивным эффектом (Biochem. Pharmacol. 25: 2733-2737), тормозит только альдегиддегидрогеназу, не влияет на дофамин-бета-гидроксилазу, тем самым не вызывая психозов (Иванец Н.Н. Отчет о результатах сравнительного открытого клинико-катамнестического исследования препарата КОЛМЕ в комплексном лечении больных с зависимостью от алкоголя. Национальный научный центр. 2006, С.26). В двойных слепых рандомизированных плацебо-контролируемых исследованиях выявлена большая эффективность цианамида по сравнению с плацебо по показателю продолжительности периода полной абстиненции (Niederhofer, H., Staffen, W. and Mair, A. (2003) Comparison of cyanamide and placebo in the treatment of alcohol dependence of adolescents. Alcohol and Alcoholism 38, 50-53).

Сенсибилизационное воздействие цианамида на алкоголь проявляется примерно через 45-60 минут и длится около 12 часов. Недостатками препарата является необходимость ежедневного приема, а также термолабильность активного начала, которое легко разрушается горячей пищей. Длительно действующих зарегистрированных лекарственных форм цианамида в настоящее время в мире не существует.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому средству является препарат циамид, применяемый в виде таблеток и представляющий собой смесь 0.05 мг цианамида кальция (активного начала) и 0.1 г лимонной кислоты. Препарат принимают перорально ежедневно по 1-2 таблетки в течение нескольких месяцев (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1985, т.2, с.197).

Недостатками препарата является необходимость длительного ежедневного приема таблеток, а также термолабильность активного начала. Цианамид применяют перорально, в виде раствора, два раза в день по 36-75 мг, сроком 1-6 месяцев и более.

Технической задачей, решаемой авторами, являлось создание средства длительного действия для профилактики и лечения алкоголизма, не менее эффективного и более удобного в применении.

Указанная задача решалась созданием композиции на основе цианамида, вводимого в организм внутримышечно.

Технический результат был достигнут созданием средства на основе цианамида, содержащего смесь цианамида и полилактида в соотношении (мас.) от 10:90 до 40:60 и способа его введения в организм путем внутримышечного введения суспензии, содержащей данную смесь в разовой дозе 0.5-1.5 г.

Полученная смесь, представляющая собой микрокапсулы из цианамида, обеспечивает медленное выделение цианамида в организм, что создает устойчивый пролонгирующий эффект в течение по крайней мере 30 дней. Использование более низких концентраций цианамида в смеси не обеспечивает необходимую его концентрацию в организме после введения. Применение смеси с концентрацией полилактида менее 60 мас.% не позволяет получать стабильную суспензию и понижает пролонгирующий эффект препарата.

Как правило, средство вводят 1 раз в месяц, однако в ряде случаев по индивидуальным показаниям возможно его введение более часто (например, раз в 1-2 недели) или более редко (1 раз в 2 месяца).

Оптимально для введения использовать раствор, содержащий карбоксиметилцеллюлозу - 0.3-1.0 мас.%, твин 80-0.05-0.2 мас.%, манноза - 3-10 мас.%, натрий хлористый 0.5-2.0 мас.%, смесь цианамида и полилактида 20-40 мас.%, вода апирогенная - остальное. Указанный раствор обеспечивает стабильность суспензии при ее введении в организм и состоит из компонентов, разрешенных для использования в здравоохранении для внутримышечного введения.

Сущность заявляемого изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение средства.

1.1. Приготовление раствора полилактида. Навеску полилактида массой 1 грамм растворяли в 20 мл этилацетата при перемешивании на магнитной мешалке в холодном шкафу при температуре +40°С в течение 2 час. Концентрация полилактида составила 5%.

1.2. Приготовление раствора поливинилового спирта. Навеску поливинилового спирта (ММ ˜80 кДа) массой 4.2 г растворяли в 200 мл апирогенной воды при нагревании на водяной бане до температуры +900°С при периодическом помешивании. Затем раствор охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через вукуум-фильтр с пропусканием 0.44 мкм.

1.3. Приготовление раствора цианамида

Навеску цианамида массой 360 мг суспендировали в 15 мл этилацетата при перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре. Затем добавляли к раствору 20 мл дистиллированной воды и титровали с добавлением 1 N едкого натра до рН 8.2 при перемешивании. После стабилизации значения рН 8.2 суспензию центрифугировали со скоростью вращения 1000 об/мин и отбирали верхний слой раствора цианамида основания.

1.4. Приготовление средства.

Полученные в стадиях 1.1 и 1.3 растворы цианамида соединяли в заданном соотношении и доводили общий объем до 40 мл добавлением этилацетата. К полученному раствору добавляли 200 мл раствора поливинилового спирта, полученного по п.1.2, и перемешивали на механической мешалке со скоростью вращения 500 об/мин в течение 2 час.

Полученную суспензию микрокапсул центрифугировали со скоростью вращения 5000 об/мин в течение 15 мин. Затем промывали микрокапсулы апирогенной водой путем суспендирования и последующего центрифугирования. Супернатант отбрасывали. Цикл промывки повторяли 3 раза. После последнего центрифугирования к микрокапсулам добавляли 30 мл апирогенной воды, энергично взбалтывали и размещали в стерильные флаконы из полипропилена, после чего замораживали в течение 5 мин, поместив контейнер с флаконами в жидкий азот. Замороженные флаконы с микрокапсулами сушили в сублимационной машине в течение суток.

Были получены образцы с содержанием цианамида 10%, 25% и 40%.

Пример 2. Приготовление суспензии для инъекции.

В 200 мл апирогенной воды были последовательно растворены навески карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), твин 80, маннозы, и хлористого натрия. После растворения всех компонентов раствор был стерильно профильтрован через фильтр с порами 0.44 мкм. Раствор хранили при комнатной температуре.

Перед введением средства в организм в раствор вводили заданные количества смеси, полученной по примеру 1, из расчета 1 г микрокапсул на 3 мл раствора и тщательно перемешивали.

Были получены суспензии следующего состава (табл.1)

Таблица 1. Состав полученных композиций
Состав композиции	Содержание компонента, мас.%
	Образец 1	Образец 2	Образец 3	Образец 4	Образец 5
КМЦ	0.3	0.5	0.5	0.5	1.0
Твин 8	0.05	0.1	0.1	0.2	0.2
Манноза	5.0	10.0	5.0	5.0	5.0
NaCl	0.5	1.0	0.9	2.0	1.0
Цианамид	2.0	5.0	7.5	10.0	16.0
Полилактид	18.0	15.0	22.0	20.0	24.0
Вода	74.15	68.4	64.0	62.3	52.8

Пример 3. Опыты проведены на крысах-самцах линии Вистар массой 190-240 грамм. Животных получали из селекционной станции Рапполово (Санкт-Петербург). Крыс размещали по 6 особей в стандартных клетках. Животные привыкали к условиям лаборатории в течение минимум 1 недели при неограниченном доступе к пище (гранулированный корм) и воде в виварии с регулируемым световым режимом (12 ч свет - с 8 часов утра / 12 ч темнота), температурой воздуха 22:1:1°С и влажностью 60%.

Каждая экспериментальная группа состояла из 6 животных. Всего было 4 группы животных: контрольная группа 1 (растворитель с повторным введением изотонического раствора NaCl), контрольная группа 2 (растворитель с повторным введением цианамида, группы 3-7 (однократное внутримышечное введение образцов 1-5 в дозе 30 мг/кг в сут) и группа 4 (однократное внутримышечное введение образца 3 в дозе 60 мг/кг).

Эффект от введения препарат оценивали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительной дериватизацией цианамида путем превращения его в дансильное производное (J.Chromatogr. 1991 Sep 27; 558(1) p.141-146).

Животным контрольных групп однократно вводили внутримышечно (в/м) раствор апирогенной воды, содержащий 0.5 мас.% КМЦ; 0.1 мас.% твин 80; 5.0 мас.% маннозы, 0.9% NaCl, животным экспериментальных групп - растворы средства, состав которых указан в табл.1.

Обработку полученных результатов производили с использованием прикладной программы "INSTAT". Результаты экспериментов анализировали с использованием дисперсионного анализа (Repeated Measures Analysis of Variance) с последующим выявлением достоверных отличий между группами (Post hoc анализ с помощью Tukey-Kramer Multiple Comparisons test). Результаты по группам животных усредняли. Полученные результаты приведены в табл.2 в виде процентов от исходного введенного препарата цианамида.

Таблица 2. Данные по пролонгированному действию заявляемого средства
Группа животных	Содержание цианамида в плазме после
	1 суток	7 суток	14 суток	21 суток	28 суток
1 (контроль)	нет	нет	нет	нет	нет
2 (цианамид)	100	12	нет	нет	нет
3 (обр.1)	100	68	65	60	56
4 (обр.2)	100	74	70	55	52
5 (обр.3)	100	87	67	56	54
6 (обр.4)	100	87	70	64	57
7 (обр.5)	100	92	72	62	59
8 (обр.3)	100	98	76	75	68

Полученные результаты исследования влияния пролонгации цианамида, представленные в таблице, показывают на значительный эффект задержки и медленного высвобождения действующего начала при внутримышечном введении микрогранулированной формы антиалкогольного средства.