вакцина против ньюкаслской болезни

Классы МПК:A61K39/17 вирус болезни Ньюкастла
A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):, , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное учреждение "Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ "ВГНКИ") (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2007-11-22
публикация патента:

Изобретение относится к области биотехнологии. Вакцина содержит вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2. При этом в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» вакцина содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации. Также вакцина дополнительно содержит вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации - 10,73 - 12,47, сахароза - 4,16 - 4,60, пептон ферментативный - 2,50 - 3,06, казеин - 0,83 - 1,53, вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол - 0,04 -0,08, аэросил AM-1-300 - 1,00 - 2,00, смола КБ-4П-2 - остальное. Вакцина обладает высокой иммуногенностью, безвредна для птицы и экологически безопасна для обслуживающего персонала. 4 табл.

Формула изобретения

Вакцина против ньюкаслской болезни, содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил АМ-1-300 и смолу КБ-4П-2, отличающаяся тем, что она в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации, и дополнительно вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия из целых куриных яиц с развитыми  
12-13-дневными эмбрионами, инфицированными 
культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день  
их инкубации 10,73-12,47
Сахароза 4,16-4,60
Пептон ферментативный2,50-3,06
Казеин0,83-1,53
вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол0,04-0,08
Аэросил АМ-1-3001,00-2,00
Смола КБ-4П-2Остальное

Описание изобретения к патенту

Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии вирусных ветеринарных препаратов, в частности к вакцине против ньюкаслской болезни птицы «ОРОВАК-НБ-2», предназначенной для пероральной иммунизации при проведении ветеринарных мероприятий по борьбе с указанным заболеванием.

Известна вакцина против ньюкаслской болезни, содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2 при определенном соотношении компонентов [1].

Недостатком данной вакцины являются низкая эффективность при пероральной иммунизации птицы, а использование ее для аэрозольного применения является экологически небезопасным для обслуживающего персонала из-за высокой концентрации аэросила (9% по массе).

Известна также вакцина против ньюкаслской болезни «Оровак-НБ», содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота» - экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2 при определенном соотношении компонентов [2].

Данная вакцина недостаточна активна при пероральной иммунизации, так как для получения надлежащего эффекта требуется значительный расход биопрепарата, что сказывается на себестоимости проводимых мероприятий при ньюкаслской болезни.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины и ее эффективности.

Указанная цель достигается тем, что вакцина в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированных культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации и дополнительно вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия из целых куриных  
яиц с развитыми 12-13-дневными
эмбрионами, инфицированных  
культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 
день их инкубации10,73-12,47
Сахароза4,16-4,60
Пептон ферментативный 2,50-3,06
Казеин 0,83-1,53
вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол0,04-0,08
Аэросил АМ-1-3001.00-2,00
Смола КБ-4П-2Остальное

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Для получения вакцины против ньюкаслской болезни «Оровак-НБ-2» используют оплодотворенные куриные яйца. На 9-10 день инкубации их инфицируют заражающей дозой культуры вакцинного штамма «Ла-Сота» и продолжают инкубирование в течение 3 дней. На 12-13 день развития эмбриона целые куриные яйца в необходимом количестве помещают в колбу аппарата РТ-1 для их измельчения вместе со скорлупой.

Измельчение осуществляют при 4000-8000 об/мин в течение 1,5-2 мин.

К 14-15 л полученной суспензии вирусного материала добавляют 5-6 кг сахарозы, 3-4 кг пептона ферментативного, 1-2 кг казеина и 0,05-0,10 кг вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферола с последующим их смешиванием в том же режиме.

Суспензию вирусного материала со стабилизирующими веществами помещают в шаровой барабан, в котором осуществляют его смешивание и обезвоживание, в соотношении 1:4, с ионнообменной смолой КБ-4П-2 с нанесенным на поверхность ее частиц гидрофобного аэросила AM-1-300, взятого по массе в количестве 1,25-2,50%.

Смешение указанных компонентов и получение сухого биопрепарата осуществляют в режиме работы скорости вращения шарового барабана на обкаточном станке, равной 60-90 об/мин, в течение 5-7 мин.

Готовят 3 состава предложенной вакцины. Компонентный состав вариантов вакцины «Оровак-НБ-2» приведен в таблице 1.

Вакцину расфасовывают по 100-200 г в стерильные флаконы или двойные полиэтиленовые пакеты. Флаконы укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, а пакеты герметично запаивают. Срок годности вакцины 12 месяцев при условии хранения в темном и сухом помещении, при температуре 6±2°С.

Готовая вакцина «Оровак-НБ-2» представляет собой сыпучий порошок серого цвета. Биологическая активность препарата 8-8,6 lg ЭИД50 -1, массовая доля влаги в пределах 10-14%. В 1,0 г биопрепарата содержится 14-18 доз.

Пример 2.

Изучают биологическую активность 3 составов вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1 и хранившихся в течение 3, 6 и 12 месяцев при температуре 6±2°С и минус 10±2°С.

Биологическую активность определяют титрованием на 9-10-дневных куриных эмбрионах и выражают в lg ЭИД50 -1. Специфичность ответа РЭК определяют постановкой реакции гемагглютинации.

Результаты по изучению биологической активности вакцины «Оровак-НБ-2» в зависимости от условий хранения, представлены в таблице 2.

Из данных таблицы 2 следует, что биологическая активность вакцины сохраняется на исходном уровне в течение 12 мес при температуре хранения минус 10±2°С, а температура 6±2°С способствует незначительному ее снижению на 0,15-0,25 lg ЭИД50-1.

Пример 3.

Оценку иммуногенности 2 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1, с исходной биологической активностью 8,0 lg ЭИД50-1 проводят на 40 цыплятах бройлерах 12-14-дневного возраста. Готовят последовательно десятикратные разведения вакцины.

Дозу вакцины скармливают в течение 2 суток, один раз в день (утром из расчета 5 г корма на 1 гол.). Эффективность иммунизации устанавливают через 7, 14 и 21 день по титрам антител, выявляемым в РТГА и по результатам контрольного заражения привитых цыплят культурой вирулентного штамма «Т-53» вируса НБ в дозе 3,0 lg ЛД 50/см3.

Результаты по иммунизации цыплят бройлеров вакциной «Оровак-НБ-2» в дозе 6-7 lg ЭИД 50-1/гол обеспечивают надежную защиту цыплят от контрольного заражения.

Далее по методу Рида-Менча рассчитывают наиболее приемлемую для применения, обеспечивающую защиту не менее 90% поголовья от контрольного заражения дозу, которая в данном случае составляет 6,8·10 6,0 ЭИД50-1 (6,83 lg) или 71 мг/гол.

Пример 4.

Исследуют безвредность 1 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1.

Вакцину скармливают цыплятам 20-270-дневного возраста (по 30 голов в каждой возрастной группе), в оттитрованной 10-кратной дозе (7,83 lg ЭИД50-1 или 710 мг на одного цыпленка). Цыплят предварительно выдерживают на голодной диете в течение 8 часов. Вакцину скармливают 2 дня подряд в утреннее кормление. Наблюдение за птицей ведут в течение 10 суток, проводят выборочное взвешивание цыплят по 5 голов в каждой группе. Все подопытные цыплята остались живыми.

Устанавливают отсутствие признаков токсикоза и остаточной вирулентности вакцины. Клиническое состояние подопытных цыплят не отличалось от контрольных-интактных. Отмечают увеличение живой массы у подопытных цыплят на 1-2% по сравнению с контролем.

Пример 5.

Проводят изучение иммуногенных свойств 3 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1, а также двух образцов этой вакцины, хранившихся в течение 3 и 12 месяцев при температуре 6±2°С.

Испытание 3 образцов вакцины проводят аналогично, как описано в примере 3 на группах цыплят бройлеров 12-14-дневного возраста (по 100 голов в каждой группе). Всех цыплят прививают испытуемыми образцами вакцины в одной дозе 6,8·106,0 ЭИД50-1.

Результаты представлены в таблице 3.

Результаты таблицы говорят, что все испытанные образцы предложенной вакцины высокоиммуногенны: иммунный ответ цыплят на введение вакцины «Оровак-НБ-2» достигает максимума через 2-3 недели после прививки (уровень антител на 21 сутки колеблется в пределах 5,1-5,8 log2 ), а используемая иммунизирующая доза вакцины обеспечивает во всех группах защиту 100% поголовья цыплят от контрольного заражения культурой вирулентного штамма «Т-53».

Вакцина «Оровак-НБ-2» из штамма «Ла-Сота», изготовленная по технологии методом контактного обезвоживания для перорального применения, безвредна для птицы, не вызывает поствакцинальных реакций, задержку начала яйцекладки и динамику нарастания продуктивности кур; высокоиммуногенна (защита от вируса НБ на 80-100%) и экологически безопасна для обслуживающего персонала.

Использование в качестве вируссодержащего материала суспензии из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 их инкубации, позволяет увеличить объем производства вакцины, обеспечить птицу дополнительной белково-минеральной подкормкой, повысить продуктивность птицы и тем самым снизить экономические затраты на безотходное производство вакцины и на ветеринарные мероприятия по профилактике ньюкаслской болезни птицы за счет снижения прививной дозы.

Таблица 1
КомпонентыСодержание компонентов, мас.%
Состав 1 Состав 2Состав 3
Суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированных культурой штамма "Ла-Сота" на 9-10 день их инкубации10,73 11,56512,47
Сахароза4,604,387 4,16
Пептон ферментативный 3,062,792 2,50
Казеин 1,531,1960,83
вакцина против ньюкаслской болезни, патент № 2347584 -токоферол0,08 0,060,04
Аэросил АМ-1-3001,001,5 2,0
Смола КБ-4П-2 ОстальноеОстальное Остальное

Таблица 2
Вакцина «Оровак-НБ-2»Биологическая активность составов, Ig ЭИД50 -1
После приготовления Хранение при температуре (°С) в течение, мес
3 612
6±2Минус 10±26±2 Минус 10±26±2 Минус 10±2
Состав 1 8,68,458,6 8,358,68,35 8,6
Состав 2 8,07,98,0 7,858,07,8 8,0
Состав 3 8,58,458,6 8,328,58,35 8,5

Таблица 3
Разведение вакциныДоза вакцины, lgСредний геометрический титр антител (log2)Результаты контрольного заражения
7 сут 14 сут21 сутПало (гол.)Выжило (гол.) Защитный эффект (%)
10 -170,4 78 05100
10-2 60,44 4,814 80
10-3 50 1,823 240
10 -440 1,21,83 240
10 -530 0,20,25 00
10 -620 005 00
10 -710 005 00

Таблица 4
Срок хранения вакцины, месСредний геометрический титр антител (log2) Результаты контрольного заражения
7 сут14 сут21 сут Пало (гол.)Выжило (гол.) Защитный эффект (%)
Свежеприготовленная2,5 4,85,80 100100
3 2,54,4 5,60100 100
122,0 4,15,1 0100100

Источники информации

1. SU 1785098 A, 10.08.1995.

2. RU 2159129 C, 31.03.1999.

Класс A61K39/17 вирус болезни Ньюкастла

способ профилактики онкологических заболеваний -  патент 2500392 (10.12.2013)
композиция, содержащая хитозан, для глазного введения вакцины (вакцин) птицам -  патент 2498818 (20.11.2013)
штамм вируса болезни ньюкасла для использования при серодиагностике болезни ньюкасла в ртга -  патент 2482184 (20.05.2013)
штамм вируса болезни ньюкасла для создания на его основе кандидатного противоракового препарата и изучения механизмов онколизиса -  патент 2482129 (20.05.2013)
вакцина ассоциированная против ньюкаслской болезни, реовирусного теносиновита и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированная эмульсионная -  патент 2480238 (27.04.2013)
вакцина ассоциированная против ньюкаслской болезни птиц, инфекционного бронхита кур, синдрома снижения яйценоскости-76, инфекционной бурсальной болезни и реовирусного теносиновита птиц инактивированная эмульсионная -  патент 2443429 (27.02.2012)
лечение рака с применением вирусов, фторпиримидинов и камптотецинов -  патент 2435586 (10.12.2011)
способ вакцинации птицы против гриппа -  патент 2408370 (10.01.2011)
способ профилактики болезни ньюкасла -  патент 2403060 (10.11.2010)
способ лечения онкологических заболеваний -  патент 2379055 (20.01.2010)

Класс A61P31/12 противовирусные средства

способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с) -  патент 2526799 (27.08.2014)
средство для снижения репродукции вируса гепатита с -  патент 2526179 (20.08.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
пептидные производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусное действие -  патент 2524216 (27.07.2014)
способ получения противовирусного средства и противовирусное средство -  патент 2522880 (20.07.2014)
способ изготовления вакцины против ящура -  патент 2522868 (20.07.2014)
способ получения антирабической вакцины -  патент 2522866 (20.07.2014)
Наверх