поглощение макромолекул

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, содержащая смесь

(a) активного макромолекулярного компонента, который представляет собой полипептид или белок, полинуклеотид, полисахарид или их смесь; и (b) несопряженной желчной кислоты или ее соли; и (c) добавки, выбранной из (i) пропилгаллата или линейных или разветвленных C_1-12алкиловых, C_1-12 алкилокси, C_1-12алкилтио или C _2-12алкенильных эфиров галловой кислоты, и такие соединения могут быть необязательно замещены галогеном, линейными или разветвленными C_1-12алкилом, C_1-12 алкилокси, C_1-12алкилтио или C _2-12алкенилом;

(ii) бутилгидроксианизола, аналога или производного гидроксианизола, в котором метильная или метоксигруппа, связанная с ароматическим кольцом, и/или атом водорода в ортоположении по отношению к гидроксильной группе, заменены на линейный или разветвленный C_1-12алкил, C _1-12алкилокси, C_1-12алкилтио или C_2-12алкенил, незамещенный или замещенный в любом положении атомами галогена; и

(iii) смеси (i) и (ii),

в которой смесь содержит по меньшей мере 1 мас.% добавки (с) и отношение (b) и (с) составляет от 1:1 до 5:1.

2. Композиция по п.1, содержащая менее 5 мас.% воды.

3. Композиция по п.1, в которой на композицию наносят энтеросолюбильное покрытие, приобретающее проницаемость при рН 3-7.

4. Композиция по п.1, в которой массовое отношение смеси соль несопряженной желчной кислоты/добавка (b+с) к активному макромолекулярному компоненту составляет по меньшей мере 5:1.

5. Композиция по п.1, в которой смесь находится в виде раствора или дисперсии микрочастиц.

6. Композиция по п.1, в которой смесь находится в виде твердого вещества.

7. Композиция по п.1, в котором активный макромолекулярный компонент выбирают из инсулина, кальцитонина, гормона роста, паратиреоидного гормона, или эритропоэтина, а также из их производных и аналогов синтетического или природного происхождения, структура которых имеет человеческое или животное происхождение.

8. Композиция по п.7, в которой активный макромолекулярный компонент представляет собой инсулин, кальцитонин, паратиреоидный гормон, их аналоги или производные синтетического или природного происхождения, структуры которых имеют человеческое или животное происхождение.

9. Композиция по п.8, в которой активный макромолекулярный компонент представляет собой инсулин или его производное или аналог синтетического или природного происхождения, структура которого имеет человеческое или животное происхождение, причем композиция дополнительно содержит сенсибилизатор инсулина.

10. Композиция по п.1, в которой несопряженная желчная кислота или ее соль представляет собой хенодезоксихолат.

11. Композиция по п.1, предназначенная для терапевтического лечения или диагностики человека или животного.

12. Применение несопряженнои желчной кислоты или ее соли вместе с добавкой, выбранной из

(i) пропилгаллата или линейных или разветвленных C_1-12алкиловых, C_1-12 алкилокси, C_1-12алкилтио или C _2-12алкенильных эфиров галловой кислоты, и такие соединения могут быть необязательно замещены галогеном, линейными или разветвленными C_1-12 алкилом, C_1-12 алкилокси, C_1-12алкилтио или C _2-12алкенилом;

(ii) бутилгидроксианизола, аналога или производного гидроксианизола, в котором метильная или метоксигруппа, связанная с ароматическим кольцом, и/или атом водорода в ортоположении по отношению к гидроксильной группе, заменены на линейный или разветвленный C_1-12алкил, C _1-12алкилокси, C_1-12алкилтио или C_1-12алкенил, незамещенный или замещенный в любом положении атомами галогена; и

(iii) их смеси;

в качестве усилителя всасывания активного макромолекулярного компонента, который представляет собой полипептид или белок, полинуклеотид, полисахарид или их смесь, через стенки кишечника, где указанное применение включает использование композиции по любому из пп.1-11.

13. Применение несопряженной желчной кислоты или ее соли вместе с добавкой, выбранной из

(i) пропилгаллата или линейных или разветвленных С _1-12алкиловых, C_1-12алкилокси, C _1-12алкилтио или C_2-12алкенильных эфиров галловой кислоты, и такие соединения могут быть необязательно замещены галогеном, линейными или разветвленными C _1-12алкилом, C_1-12алкилокси, C _1-12алкилтио или C_2-12алкенилом;

(ii) бутилгидроксианизола, аналога или производного гидроксианизола, в котором метильная или метоксигруппа, связанная с ароматическим кольцом и/или атом водорода в ортоположении по отношению к гидроксильной группе, заменены на линейный или разветвленный C _1-12алкил, C_1-12алкилокси, C _1-12алкилтио или C_2-12алкенил, незамещенный или замещенный в любом положении атомами галогена; и

(iii) их смеси,

для производства лекарственного средства, содержащего активный макромолекулярный компонент, который представляет собой полипептид или белок, полинуклеотид, полисахарид или их смесь, через стенки кишечника, для усиления поглощения активного макромолекулярного компонента организмом человека или животного, где указанное лекарственное средство представляет собой композицию по любому из пп.1-11.

14. Способ усиления поглощения активного макромолекулярного компонента организмом пациента, включающий введение указанному пациенту композиции по любому из пп.1-11.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармацевтической композиции и применению материалов, обладающих эффективностью в усилении поглощения макромолекул из кишечной полости через стенки кишок и их направлении к другим частям организма в ходе приготовления лекарственных средств. В частности, описываются рецептуры, в которых соли желчной кислоты соединяются с другими материалами таким образом, что происходит улучшение свойств солей желчной кислоты (в том, что касается эффективности, воспроизводимости результатов или стабильности) по сравнению с рецептурами, используемыми ранее.

Желчные кислоты хорошо известны как эффективные усилители проникновения в кишечник. Они представляют собой поверхностно-активные вещества, которые легко внедряются в фосфолипидные мембраны клеток и вызывают изменения в поведении и морфологии клеток. Хотя точный механизм такого действия неизвестен, возможно, он заключается в кратковременном размыкании плотного соединения между эритроцитами, что обеспечивает проход близкорасположенных материалов между клетками через внеклеточную жидкую основу в слой энтероцитов. Доказательства такого предположения были получены в лабораторных экспериментах, демонстрирующих понижение электрического сопротивления эпителия (TEER) монослоев энтероцитных клеток, что свидетельствует об образовании водных каналов между клетками, способных беспрепятственно проводить электричество.

Поскольку перистальтическое действие кишечника способствует быстрому рассредоточению фармацевтических рецептур по большой площади поверхности, важно, чтобы соли желчной кислоты в рецептуре быстро подвергались растворению и как можно дольше оставались в виде раствора, в результате чего может поддерживаться максимально высокая локальная концентрация солей желчной кислоты, что обеспечивает их максимальный эффект. По этой причине большинство исследователей использовали такие конъюгированные соли желчной кислоты, как таурохолат или тауродезоксихолат, поскольку эти вещества легко растворяются в широком интервале значений рН, включая низкий рН, равный 3, который может существовать в кишечнике. Однако такие соли желчной кислоты не столь эффективны, как несопряженные системы, в частности соли дезоксижелчной кислоты, такие как хенодезоксихолат или дезоксихолат, хотя последние часто нерастворимы при значениях рН значительно меньших, чем нейтральные. Таким образом, можно ожидать, что свойства несопряженных (неконъюгированных) желчных солей в качестве усилителя проникновения могут значительно изменяться в зависимости от значения рН в той области кишечника, где действуют эти вещества, что в свою очередь будет определять наличие рассматриваемых солей в виде раствора (эффективность) или осадка (недостаточная эффективность).

Описаны подходы повышения воспроизводимости результатов, в которых соли желчной кислоты объединяют с агентом, поддерживающим рН в пищеварительном канале на значении выше 7,5 с целью гарантии присутствия соли желчной кислоты в растворимой форме. К сожалению, включение таких веществ в рецептуру может оказывать отрицательное влияние на целостность и стабильность чувствительных активных веществ, входящих в состав рецептуры, таких, как пептиды и белки. Кроме этого, известно, что оптимальный рН для кишечных протеаз имеет значение, близкое 8, вследствие чего указанный подход может повышать деградацию, связанную с активностью эндогенной протеазы.

В настоящем изобретении предлагается альтернативный подход, согласно которому соли желчных кислот объединяют с добавками, которые проявляют неожиданную способность к сохранению солей желчной кислоты в растворенном состоянии при значении рН менее 7, что эквивалентно обычным значениям рН в тонких кишках. В частности, было установлено, что составление совместных рецептур из солей желчной кислоты с пропилгаллатом или его производными либо с солями органических кислот может приводить к образованию твердых порошков, которые при добавлении в модельные кишечные среды в различных количествах легко растворяются даже в том случае, когда исходное значение рН среды составляет всего 5. Подходящие имитационные кишечные среды, которые могут использоваться в качестве моделей внутрипросветного содержимого кишечника, как при приеме пищи, так и натощак, описаны Dressman с сотр. (Dressman, B Jennifer & Reppas, Christos. European Journal of Pharmaceutical Sciences 11 Suppl 2 (2000) S73-S80 "In vitro - in vivo correlations for lipophilic, poorly water-soluble drugs").

Композиции, описанные в настоящем изобретении, особенно полезны при приготовлении рецептур в виде твердой дозы, предназначенной для перорального применения в виде капсул или таблеток с энтеросолюбильным покрытием. Твердые компоненты такой композиции также могут вводиться в фармацевтическую рецептуру в виде дисперсии в неводной жидкости.

В случае пропилгаллата, являющегося материалом с очень низкой растворимостью в воде, неожиданно было установлено, что совместная рецептура с желчными солями, включающая хенодезоксихолат, заметно повышает растворимость пропилгаллата в воде и особенно в средах, имитирующих кишечные жидкости. Так, хенодезоксихолат и пропилгаллат способны совместно повышать растворимость в воде каждого из указанных веществ при рН ниже 7. Учитывая тот факт, что сам пропилгаллат обладает крайне низкой растворимостью в воде, нельзя предвидеть, что при добавлении хенодезоксихолата образуется рецептура, обладающая более высокой растворимостью, в связи с чем у специалиста нет мотивации к использованию рассматриваемого подхода.

Настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, включающую смесь, содержащую:

(а) активный макромолекулярный компонент;

(b) неконъюгированную желчную кислоту или ее соль; и

(с) добавку, выбранную из пропилгаллата и бутилгидроксианизола, их аналогов, производных или смесей.

Кроме этого, изобретение предусматривает использование в фармацевтической композиции неконъюгированной желчной кислоты или ее соли совместно с добавкой, выбранной из пропилгаллата и ВНА, их аналогов и производных, или их смесей в качестве усилителя абсорбции макромолекул через стенки кишечника.

В соответствие с дополнительным воплощением настоящее изобретение предусматривает использование несопряженной желчной кислоты или ее соли совместно с добавкой, выбранной из пропилгаллат и ВНА, их аналогов и производных, или их смесей в производстве лекарственного средства, содержащего активный макромолекулярный компонент, с целью усиления поглощения активного макромолекулярного компонента организмом человека или животного.

Активные макромолекулярные компоненты, охватываемые областью изобретения, включают все молекулы, способные оказывать полезное действие при поглощении организмом человека или животного, особенно через стенки кишечника. Полезное действие может представлять собой терапевтический, косметический или превентивный эффект, например профилактический или контрацептивный. Активные макромолекулярные компоненты могут иметь природное (биологическое), синтетическое или полусинтетическое происхождение.

Макромолекулы предпочтительно характеризуют как молекулы с молекулярной массой 1000 Da, предпочтительно 2000 Da и наиболее предпочтительно 3000 Da. Примерами макромолекул, включающих активные макромолекулярные компоненты, могут служить:

1. Такие полипептиды и белки, как инсулин; кальцитонин; альбумин человеческой сыворотки; гормон роста; факторы, выделяющие ростовой гормон; галанин; паратироидный гормон; кровесвертывающие белки, например киноген, протомбин, фибриноген, Фактор VII, Фактор VIII, или Фактор IX; эритропоэтины и ЕРО миметики; факторы, стимулирующие рост колоний, включающие GCSF и GMCSF; тромбоцитпроизводные факторы роста; эпидермальные факторы роста; факторы роста фибробласта; трансформирующие факторы роста; GLP-1; GAG; цитокины; инсулиноподобные факторы роста; факторы индуцирующие рост костной и хрящевой ткани; нейротрофные факторы; интерлейкины, включающие IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; интерфероны, включающие гамма-интерферон, интерферон -1а, альфа-интерфероны; TNF альфа; TNF бета; А и В фрагменты холерного токсина; А и В фрагменты энтеротоксина E. coli; секретин; ферменты, включающие гистондеацетилазу, супероксид дисмутазу, каталазу, аденозиндеаминазу, тимидинкиназу, цитозиндеаминазу, протеазы, липазы, карбогидразы, нуклеотидазы, полимеразы, киназы и фосфотазы; транспортные или строительные белки, особенно те, что связывают и/или переносят витамин, ион металла, аминокислоту, липид или липопротеин, например белок переносящий эфир холестерина, белок переносящий фосфолипид, HDL связывающий белок; белки соединительной ткани такие, как коллаген, эластин или фибронектин; мышечный белок такой, как актин, миозин, дистрофин или мини-дистрофин; нейронный, печеночный, кардиальный или адипоцитный белок; цитотоксичный белок; цитохром; белок, способный вызывать репликацию, рост или дифференциацию клеток; сигнальные молекулы такие, как внутриклеточный сигнальный белок или внеклеточный сигнальный белок (например, гормон); такие трофические факторы, как BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, VEGF, NT3, T3 и HARR; аполипопротеины; молекулы антител; рецепторы в растворимом виде, например Т-клеточные рецепторы и рецепторы цитокинов, интерфероны или хемокины; белки или пептиды, содержащие антигенные эпитопы и фрагменты; а также производные, конъюгаты и варианты последовательности любого из указанных веществ. Указанные выше и другие белки могут иметь человеческое, растительное, животное, бактериальное или грибковое происхождение и могут экстрагироваться из природных источников, формироваться в виде рекомбинантов ферментацией или синтезироваться химически.

2. Полинуклеотиды такие, как длиноцепные линейные или кольцевые одно-, двух- или трехспиральные ДНК, одно-, двух- или трехспиральные РНК, такие олигонуклеотиды, как антисмысловая ДНК или РНК, а также их аналоги, включающие PNA и фосфотиоатные дериваты. В соответствие с одним из воплощений предпочтительно, чтобы полинуклеотиды, используемые в настоящем изобретении, содержали CpG мотив. Кодирующая последовательность полинуклеотида может кодировать терапевтический продукт, в частности кодирующая последовательность может кодировать внеклеточный белок (например, секретированный белок); внутриклеточный белок (например, цитозольный, ядерный или мембранный белок); белок, присутствующий в клеточной мембране; белок крови, например свертывающий белок (например, киноген, протромбин, фибриноген, фактор VII, фактор VIII или фактор IX); фермент, например катаболический, анаболический желудочно-кишечный, метаболический (например, влияющие на гликолиз или цикл Кребса), или клеточный сигнальный фермент, фермент, разрушающий или модифицирующий липиды, жирные кислоты, гликоген, аминокислоты, белки, нуклеотиды, полинуклеотиды (например, ДНК или РНК) или карбогидрат (например, протеазу, липазу или карбогидразу), или белок-модифицирующий фермент, такой, как фермент, добавляющий или удаляющий химические фрагменты из белка (например, киназа или фосфатаза); транспортный или связывающий белок (например, белок, связывающий и/или переносящий витамин, ион металла, аминокислоты или липид, такой, как белок, переносящий эфир холестерина, фосфолипид-переносящий белок или HDL связывающий белок); белок соединительной ткани (например, коллаген, эластин или фибронектин); мышечный белок (например, актин, дистрофин или минидистрофин); нейронный, кардиальный или адипоцитный белок; цитотоксичный белок; цитохром; белок, способный вызывать репликацию, рост или дифференцировку клеток; белок, способствующий транскрипции или трансляции гена или регулирующий транскрипцию или трансляцию (например, фактор транскрипции или белок, связывающий фактор транскрипции или полимеразу); сигнальная молекула, например, внутриклеточная или внеклеточная сигнальная молекула (например, гормон); такие белки иммунной системы, как антитело, рецептор Т клеток, молекула МНС, цитокин (например, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, TNF-, NGF-), интерферон, например, IFN-, хемокин (например, MIP-1, RANTES), иммунный рецептор (например, рецептор цитокина, интерферона или хемокина такой, как рецептор любого из вышеупомянутых цитокинов, интерферонов или хемокинов) или маркер клеточной поверхности (например, маркер поверхности макрофага, Т клетки, В клетки, NK клетки или дендритных клеток) (например, CD 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 16, 18, 19, 28, 40 или 45; или их лиганды), трофический фактор (например, BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, VEGF, NT3, T3 и HARR или аполипопротеин); супрессор опухоли (например, р53, Rb, Rap1A, DCC или k-rev); суицидный белок (тимидинкиназа или цитозиндеаминаза; или репрессор гена). Белки и пептиды, закодированные полинуклеотидами настоящего изобретения, могут быт иммуногенными, т.е. содержать антиген, специфичный к активности белка, против которого иммунной системой вырабатываются антитела.

Полинуклеотид может содержать контрольные последовательности, связанные с кодирующей последовательностью. Обычно контрольными последовательностями служат последовательности эукариота или вируса, инфицирующего такие эукариоты. Полинуклеотиды могут содержать сайт инициации репликации.

Полинуклеотиды могут быть подвергнуты химической модификации. Такая операция могут усилить их устойчивость к нуклеазам или их способность вхождения в клетки. Так, например, могут использоваться фосфоротиоатные олигонуклеотиды. Другие дезоксинуклеотидные аналоги включают метилфосфонаты, фосфорамидаты, фосфородитиоаты, N3'P5'-фосфорамидаты и олигорибонуклеотидные фосфоротиоаты, а также их 2'-O-алкильные аналоги и 2'-O-метилрибонуклеотидные метилфосфонаты. Могут использоваться другие смешанные скелетные олигонуклеотиды (MBO). МВО содержат сегменты фосфотиоатных олигодезоксинуклеотидов и соответствующим образом размещенные сегменты модифицированных олигодезокси- или олигорибонуклеотидов. МВО содержат сегменты фосфоротиоатных связей и прочие сегменты других модифицированных олигонуклеотидов таких, как метилфосфонат, являющийся неионным веществом, обладающим высокой устойчивостью к действию 2'-O-алкилолигорибонуклеотидов.

В настоящем изобретении предпочтительно использовать полинуклеотид, который практически не ассоциирован с клетками или с клеточным, прокариотным, эукариотным, ядерным, хроматиновым, гистоновым или белковым материалом. Рассматриваемый материал может использоваться практически в изолированном виде или в достаточно очищенном виде, и в этом случае препарат обычно содержит более 90%, например (более или, по меньшей мере) 95, 98 или 99% полинуклеотида или сухой массы. Так, полинуклеотид может иметь форму «бесскелетной (naked) ДНК».

3. Такие полисахариды, как гепарин, низкмолекулярный гепарин, полиманноза, циклодекстрины и липополисахарид.

4. Любое из указанных выше веществ по отдельности или в комбинации друг с другом (например, в виде гетероконъюгата) либо в присутствии дополнительных веществ.

В соответствие с предпочтительными воплощениями изобретения активный макромолекулярный компонент, подлежащий абсорбции, выбирают из кальцитонинов, инсулина, низкомолекулярного гепарина, эритропоэтина, человеческого гормона роста и паратиреоидного гормона.

Более предпочтительный макромолекулярный элемент представляет собой инсулин, кальцитонин или паратиреоидный гормон. В том случае, когда макромолекулярный элемент представляет собой инсулин, композиция дополнительно включает инсулин-сенсибилизирующий компонент. Сенсибилизаторы инсулина способны усиливать реакцию организма на абсорбированный инсулин. Подходящие сенсибилизаторы известны в данной области техники и их примерами могут служить троглитазон, пиоглитазон, росиглитазон и другие представители молекул глитазонового класса.

Неконъюгированную желчную кислоту или ее соль выбирают из хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты, холевой кислоты или их натриевых солей. Предпочтительная соль желчной кислоты представляет собой хенодезоксихолат.

Добавку выбирают из пропилгаллата и бутилгидроксианизола, их аналогов и производных, органической кислоты или ее фармацевтически применимой соли, их смесей, причем рассматриваемая добавка способствует тому, чтобы соль неконъюгированной желчной кислоты оставалась в растворенном состоянии при добавлении в кишечную среду при рН 5-6,5 и чтобы при введении в кишечник значение рН кишечной среды не превышало 7,5.

В качестве добавки может использоваться пропилгаллат или его производное. Подходящие производные пропилгаллата включают сложные эфиры галловой кислоты. Такие сложные эфиры могут представлять собой линейные или разветвленные С _1-12 алкиловые, С_1-12 алкилокси, С_1-12 алкилтио или С_1-12 алкенильные сложные эфиры. Такие соединения представляют собой необязательно замещенные галогеном, линейные или разветвленные С_1-12 алкиловые, С_1-12 алкилокси, С_1-12 алкилтио или С _1-12 алкенильные сложные эфиры.

Добавка также может представлять собой ВНА, его аналог или производное. Подходящие аналоги или производные включают аналоги и производные гидроксианизола, в которых метильная или метоксигруппа, связанные с ароматическим кольцом, и/или атом водорода в ортоположении по отношению к гидроксильной группе заменены линейным или разветвленным С_1-12 алкилом, С_1-12 алкилокси, С _1-12 алкилтио или С_2-12 алкенилом, незамещенными или замещенными в любом положении, в особенности атомами галогена.

Массовое отношение между солью желчной кислоты и добавкой, например пропилгаллатом, предпочтительно составляет 1:1-5:1, более предпочтительно 4:3-5:2 и наиболее предпочтительно 2:1.

Предпочтительной добавкой служит пропилгаллат и наиболее предпочтительное массовое соотношение между солью желчной кислоты и пропилгаллатом составляет 2:1.

В соответствие с предпочтительным воплощением настоящего изобретения неконъюгированная соль желчной кислоты представляет собой хенодезоксихолат, а добавка представляет собой пропилгаллат.

Количество соли неконъюгированной желчной кислоты/добавки (усилитель абсорбции) и активного макромолекулярного элемента в композиции изобретения выбирают таким образом, чтобы в области барьерного слоя кишечных клеток обеспечить эффективную концентрацию смеси соль неконъюгированной желчной кислоты/дополнительный усилитель абсорбции и вызвать усиленное поглощение при совместном присутствии подходящего количества активного макромолекулярного элемента, при абсорбции которого будет проявляться обычный полезный эффект. При практической реализации изобретения следует выбирать количества системы соль неконъюгированой желчной кислоты/дополнительный усилитель абсорбции и макромолекулярного элемента, основываясь на количестве (например, концентрация в крови) рассматриваемого активного макромолекулярного элемента, что необходимо для достижения терапевтической эффективности. Так, например, массовое отношение между количеством системы соль неконъюгированной желчной кислоты/усилитель абсорбции и количеством активного макромолекулярного элемента в смеси, содержащейся в капсуле, может составлять 1:1-200:1, более предпочтительно 3:1-100:1 и наиболее предпочтительно 5:1-50:1.

Абсолютное количество активного макромолекулярного элемента следует выбирать на основе дозы вещества, требующейся для проявления обычного полезного эффекта, с учетом схемы приема лекарственного средства и состояния пациента. Определение таких доз является прерогативой специалиста, использующего настоящее изобретение.

Композиция настоящего изобретения может дополнительно включать одно или более соединений, усиливающих поглощение, например, моноглицеридов со средней длиной цепи, хелатирующих агентов и т.п.

Композиция изобретения может необязательно содержать любую традиционную добавку, используемую при составлении рецептур фармацевтических препаратов, включающую, например, антиоксиданты, противомикробные вещества, суспендирующие агенты, наполнители, разбавители, абсорбенты, глиданты, связующие компоненты, противоспекающие добавки, смазочные компоненты, дезинтеграторы, вещества, вызывающие набухание, модификаторы вязкости, пластификаторы и регуляторы кислотности (в особенности такие, которые регулируют рН кишечной среды в интервале 7-7,5). Подходящие вещества, вызывающие набухание, включают гликолят натрий-крахмала, прежелатинированный крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, кросповидон и алюмосиликат магния или их смеси. Гликолят натрий-крахмала и другие агенты набухания на основе полисахаридов могут присутствовать в количестве 5-10 мас.%. Кросповидон может присутствовать в количестве 5-30 мас.%.

В композиции настоящего изобретения, в которой смесь содержится в капсуле или таблетке, рецептура является практически безводной. Согласно более предпочтительным воплощениям изобретения вся композиция является практически безводной. Термин «в основном безводная» в контексте настоящего изобретения означает, что содержание воды составляет менее 5%, предпочтительно менее 1% и более предпочтительно менее 0,5% масс от массы смеси.

Композиция настоящего изобретения, в зависимости от типа используемого активного макромолекулярного элемента, может использоваться для терапевтического лечения разнообразных болезненных состояний и заболеваний человека или животного, либо для введения макромолекул, необходимых для диагностики заболеваний и болезненных состояний человека или животного. Предпочтительные композиции настоящего изобретения представляют собой фармацевтические или косметические препараты.

В композиции настоящего изобретения смесь, содержащаяся в капсуле, может представлять собой жидкость, полутвердое вещество или гель, который находится в виде раствора или дисперсии микрочастиц. Активные макромолекулярные элементы для абсорбции вводят в рецептуру либо в виде раствора или дисперсии микрочастиц. С другой стороны композиция может находиться в виде твердого вещества.

Композиции изобретения могут быть получены приготовлением практически безводной смеси из активного макромолекулярного элемента и системы соль желчной кислоты/усилитель абсорбции с последующим заполнением смесью непокрытых капсул и их последующим покрытием соответствующей полимерной смесью с достижением желаемой проницаемости. В зависимости от природы используемых дополнительных эксипиентов фармацевтическая композиция изобретения может находиться в жидкой, твердой, полутвердой форме или в виде геля. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения подходит для применения любым маршрутом, обеспечивающим доступ к различной слизистой ткани такой, как щечная и подъязычная слизистая ткань, носовому небу, легким, прямой кишке, кишечнику (включая толстые и тонкие кишки), а также влагалище. В случае жидкой, полутвердой и гелевой рецептур такие препараты могут быть как водными, так и безводными.

В том случае, когда предполагаемой областью действия композиции изобретения является кишечник, желательно, чтобы композиция помещалась внутрь кишечного покрытия, способного выдерживать действие желудочного сока, в результате чего компоненты рецептуры удерживаются вместе в неразбавленном состоянии и в непосредственной связи друг с другом до контакта с тканями тонких кишок или толстой кишки. Предпочтительно, чтобы такие рецептуры были безводными. Жидкие формы рассматриваемых композиций предпочтительно применять в виде капсул с энтеросолюбильным покрытием, тогда как твердые рецептуры можно применять внутри капсул с энтеросолюбильным покрытием или в виде таблеток, предпочтительно с энтеросолюбильным покрытием.

Энтеросолюбильное покрытие выбирают для обеспечения устойчивости к естественной желудочной среде и проницаемости при желаемом расположении в кишечнике. Такие условия предпочтительно определяются значением рН, которые модулируются по длине кишечника. В том случае, когда препарат применяют в тонких кишках предпочтительно, чтобы энтеросолюбильное покрытие становилось проницаемым и выделяло содержимое при рН 3-7, предпочтительно 5,5-7, более предпочтительно 5,5-6,5. При применении препарата в толстой кишке предпочтительно, чтобы энтеросолюбильное покрытие становилось проницаемым и выделяло содержимое при рН 6,8 и выше.

Подходящие энтеросолюбильные покрытия хорошо известны в данной области и включают ацетат целлюлозы, шеллак и полиметакрилаты, например, выбранные из L и S серий Eudragits в особенности Eudragits L12.5P, L125, L100, L100-55, L30, D-55, S12.5P, S12.5 и S100. В покрывающую смесь могут вводиться подходящие пластификаторы и смачивающие агенты такие, как триэтилцитрат и полисорбат 80.

Выбор соответствующего покрытия для капсул, предпочтительно представляющих собой НРМС или желатиновые капсулы, может быть легко осуществлен специалистом на основе собственных знаний и доступной литературы, касающейся Eudragit продуктов.

В том случае, когда желаемым местом применения является назальная слизистая ткань, рецептура может использоваться в виде водного раствора или сухого порошка, который может применяться в виде спрэя.

В том случае, когда желаемым местом воздействия является прямая кишка, соответствующий способ применения предусматривает использование безводной жидкости или твердого вещества, заключенного в оболочку капсулы или внедренного в матрицу рассасываемой свечи. При вагинальном использовании также предусматривается применение рецептуры в виде геля.

На прилагаемых чертежах:

Фиг.1А и 1В иллюстрируют растворимость смеси хенодезоксихолат/пропилгаллат (Фиг.1А) и одного хенодезоксихолата (Фиг.1В) в модельной кишечной среде.

Фиг.2 демонстрирует растворимость смеси хенодезоксихолат/капроат в жидкости, имитирующей кишечную среду.

Фиг.3 демонстрирует растворимость смеси дезоксихолат/пропилгаллат в жидкости, имитирующей кишечную среду.

Фиг.4 демонстрирует растворимость смеси холат/капроат натрия в модельной кишечной среде.

Следующие ниже Примеры приведены в целях иллюстрации и не ограничивают область настоящего изобретения.

Примеры

Пример 1. Приготовление смеси хенодезоксихолат/пропилгаллат, содержащей инсулин в качестве активного макромолекулярного элемента

1 г хенодезоксихолевой кислоты при нагревании растворяли в 3,4 г раствора гидроксида натрия (30 мг/мл). Раствор охлаждали до комнатной температуры и устанавливали рН 7,85 в результате добавления дополнительного количества раствора гидроксида натрия. После этого добавляли 500 мг пропилгаллата, который растворяли встряхиванием системы при комнатной температуре. рН устанавливали равным 7,45 и при перемешивании при 37°С добавляли рекомбинатный человеческий инсулин. После растворения всего твердого вещества общую массу раствора доводили до 8 г с помощью дистиллированной воды, раствор замораживали и лиофилизировали в течение ночи с образованием сухого кристаллического порошка.

Рецептуру, содержащую только хенодезоксихолат, готовили аналогичным способом, за исключением того, что в нужных случаях не использовали пропилгаллат. Как и ранее, рН конечного раствора перед сушкой устанавливали в интервале 7,4-7,5.

Пример 2. Приготовление смеси хенодезоксихолат/бутилированный гидроксианизол

Применяли способ, аналогичный способу примера 3 за исключением того, что вместо пропилгаллата использовали бутилированный гидроксианизол.

Пример 3. Растворение хенодезоксихолата в присутствии пропилгаллата или без него, в модельной кишечной среде

Модельные кишечные среды готовили согласно приведенному ниже рецепту, в котором символы "-", 'L' и 'H' относятся к различным концентрациям соли в жидких средах - нулевой, низкой и высокой, соответственно.

Буфер с низким значением рН (после еды)
Компонент	рН 5,0/-	рН 5,0/L	рН 5,0/H
Уксусная кислота	8,65 г	8,65 г	8,65 г
Таурохолат натрия	8,12 г	8,12 г	8,12 г	15 мМ
Лецитин	2,8 г	2,8 г	2,8 г	3,75 мМ
Хлористый калий	-	7,7 г	15,2 г
Дистиллированная вода	1 литр	1 литр	1 литр
Гидроксид натрия	до рН 5	до рН 5	до рН 5

Буфер с низким значением рН (натощак)
Компонент	рН 6,5/-	рН 6,5/L	рН 6,5/H
Первичный кислый фосфат калия	3,9 г	3,9 г	3,9 г
Таурохолат натрия	1,6 г	1,6 г	1,6 г	3 мМ
Лецитин	0,6 г	0,6 г	0,6 г	0,75 мМ
Хлористый калий	-	7,7 г	15,2 г
Дистиллированная вода	1 литр	1 литр	1 литр
Гидроксид натрия	до рН 6,5	до рН 6,5	до рН 6,5

6х10 мг сухих порошков, приготовленных в примере 1, помещали в отдельные лунки плоскодонного 96-луночного микротитрометрического планшета и в условиях инкубации при 37°С, через 15-минутные интервалы добавляли последовательные 25 мкл аликвоты SIF. Растворимость оценивали после осторожного перемешивания, определяя оптическую прозрачность содержимого пробирок на спектрофотометре для прочтения планшетов при длине волны 620 нм. Повышенные значения оптической плотности (>0,5) на графиках, приведенных на Фиг.1А и 1В, свидетельствуют о наличии осадков. Как можно видеть из представленных результатов, при растворении 10 мг хенодезоксихолата до объема 150 мкл осаждение происходит при любых условиях испытания в отличие от смеси хенодезоксихолат/пропилгаллат, которая остается в растворенном состоянии при испытании любых вариантов модельной кишечной жидкости.

Пример 4. Растворение смеси хенодезоксихолат/бутилированный гидроксианизол в модельной кишечной жидкости

Использовали условия, аналогичные описанным в Примере 3, за исключением того, что применяли смесь хенодезоксихолат/бутилированный гидроксианизол из Примера 2. При разбавлении 10 мг в 200 мкл во всех описанных буферах кишечной среды получали чрезвычайно прозрачные растворы.

Пример 5. Растворение смеси дезоксихолат/пропилгаллат в модельной кишечной жидкости

Использовали те же условия, что описаны в Примере 3, за исключением того, что вместо хенодезоксихолевой кислоты применяли дезоксихолевую кислоту, а соотношение между количеством соли желчной кислоты и пропилгаллатом составляло 1:1 мас./мас. При растворении 10 мг в 200 мкл буфера кишечной жидкости при рН 6,5 получали чрезвычайно прозрачные растворы в отличие от рецептур, в которых использовали только дезоксихолат натрия. Полученные результаты представлены на Фиг.3.

Пример 6. In vivo эффективность использования смеси хенодезоксихолат/пропилгаллат/инсулин на поросятах

Рецептуры, полученные по способу примера 1 (содержащие 100 iu инсулина, 66 мг хенодезоксихолевой кислоты и 33 мг пропилгаллата или 100 iu инсулина и хенодезоксихолевую кислоту), применяли в виде сухих уплотненных порошков через отверстие в тощей кишке у восьми поросят (масса каждого ˜ 40 кг). Содержание глюкозы измеряли через определенные интервалы времени в течение шестичасового периода и среднее изменение в AUC глюкозы плазмы выражали в ч.ммоль/л. Как следует из приведенных ниже данных, включение PG в рецептуру обеспечивает более высокую воспроизводимость результатов и более высокую эффективность.

	Число респондентов	AUC
Инсулин/хено/PG	8/8	-3,23
Инсулин/хено	4/8	-1,40

Пример 7. In vivo эффективность таблеток, содержащих смесь хенодезоксихолат/пропилгаллат/кальцитонин при применении на поросятах

Рецептуры, полученные по способу примера 1 (содержащие 1 мг лососевого кальцитонина (sCT, 5000 iu), 66 мг хенодезоксихолевой кислоты, 33 мг пропилгаллата, 1 мг коллоидального диоксида кремния и 20 мг кросповидона) применяли в виде уплотненных таблеток через отверстие в тощей кишке восьми поросят (масса каждого ˜ 40 кг). Содержание кальция в крови измеряли через определенные интервалы времени в течение шестичасового периода и рассчитанное среднее изменение в AUC плазмы выражали в ч.ммоль/л. Как видно из представленных ниже данных, рецептура обеспечивает значительное, связанное с sCT, снижение содержания кальция по сравнению с контрольным опытом.

Обработка	AUC	Стандартное отклонение
Имитация	-0,03	0,23
400 iu лососевого кальцитонина s.c.	-1,79	1,18
Рецептура i.j.	-2,35	1,03

Пример 8. In vivo эффективность капсул, содержащих смесь хенодезоксихолат/пропилгаллат/инсулин при применении на поросятах

Рецептуры, полученные по способу примера 1 (содержащие 100 iu инсулина, 66 мг хенодезоксихолевой кислоты, 33 мг пропилгаллата, 1 мг коллоидального диоксида кремния, 22 мг кросповидона и 13 мг алюмосиликата магния), применяли в виде сухого порошка, помещенного внутрь капсулы из гидроксипропилметилцеллюлозы через отверстие в тощей кишке четырех поросят (масса каждого ˜ 40 кг). Животным контрольной группы через отверстие вводили только PBS. Содержание глюкозы в крови измеряли через определенные интервалы в течение шестичасового периода и среднее изменение в AUC глюкозы плазмы рассчитывали в ч.ммоль/л; полученные результаты представлены в следующей таблице:

Обработка	Число респондентов	AUC
Имитация	4/4	-4,2
Рецептура i.j.	0/4	-1,4

Пример 9. In vivo эффективность смеси хенодезоксихолат/пропилгаллат/инсулин при применении на добровольцах из числа здоровых людей

Рецептуры, приготовленные в Примере 1, содержали следующие количества активных веществ и наполнителей:

Инсулин	87 iu
Пропилгаллат	33 мг
Хенодезоксихолат	66 мг
Коллоидальный оксид кремния	1 мг
Гликолят натрий-крахмала	0,5 мг

Количества рецептуры, содержащие 170 iu и 340 iu, растворяли, соответственно, в 2 мл и 4 мл дистиллированной воды и вводили здоровым добровольцам через трубочку в носовую полость. В течение первых десяти минут применения наблюдали повышение уровня содержания инсулина; максимальные значения, полученные для лечебных и контрольных групп, представлены в следующей таблице:

Обработка	Среднее значение (пмоль/л)	Стандартное отклонение
Контрольная группа (все субъекты без обработки)	6,0	1,7
170 iu (3 субъекта)	25,0	3,6
340 iu (2 субьекта)	553,5	283,5