способ получения биологически активного продукта, обладающего гипотензивным действием

Формула изобретения

Способ получения биологически активного продукта пантового оленеводства, обладающего гипотензивным действием, включающий измельчение сырья, экстрагирование водным раствором этилового спирта, периодическое перемешивание смеси и фильтрацию конечного продукта, отличающийся тем, что в качестве сырья используют пенисы и/или семенники пантовых оленей, а экстракцию проводят подкисленным 60%-ным раствором этилового спирта при температуре 20-25°С и соотношении спирт: сырье 5:1 в течение 144-240 ч, перемешивают смесь каждые 8 ч по 5 мин, при этом после окончания процесса экстракции экстракт подвергают вымораживанию при температуре -15 -20°С в течение 5 суток с последующей фильтрацией конечного продукта.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к переработке оленеводческой продукции, в частности к способам получения биологически активного продукта типа пантокрина из свежих половых органов пантовых оленей, а именно из пенисов и семенников пантовых оленей.

Известен способ получения биологически активного продукта из пантов и/или крови, и/или внутренних органов пантовых оленей, включающий измельчение сырого сырьевого компонента, сушку полученного фарша под вакуумом и помол до порошкообразного состояния. Сушку, совмещенную с помолом, проводят при температуре не выше 60°С и вакууме 10-60 мм рт.ст. Однако полученный данным способом порошок может быть использован только для приема ванн (см. патент РФ 2130777, А61К 35/32).

Известен способ получения биологически активного продукта из пантов марала (пантокрина) путем гидролиза пантовой муки (размолотые панты) 6 н. соляной кислотой при температуре 160°С в течение 24 часов. Однако данный способ позволяет извлекать лишь 0,8% сосредоточенных в панте свободных аминокислот, в основном определяющих биологическую активность продукта (см. кн. «Пантокрин», Горно-Алтайск, 1969, с.30-32). Кроме этого, использование в данном способе соляной кислоты (HCl) обуславливает в дальнейшем ее нейтрализацию и трудоемкое выведение из гидролизата образовавшейся соли.

Известен способ получения пантокрина, включающий обработку пантов острым паром, измельчение, четырехкратную экстракцию спиртом в закрытом аппарате с паровым обогревом, обратным холодильником и механической мешалкой. Первую экстракцию ведут четырехкратным (соотношение спирт:сырье 4:1) количеством 96°-ного этилового спирта, подкисленного 1%-ной уксусной кислотой, в течение 6 часов. После охлаждения 2, 3, 4-ю экстракции ведут в тех же условиях 80%-ным спиртом, но при соотношении спирт:сырье 3:1 при температуре 78°С. Из объединенного экстракта отгоняют спирт, остаток используют для изготовления таблеток (см. патент РФ № 195049, А61К 19/02).

Однако высокая концентрация этилового спирта, используемого в данном способе, и температура 78°С способствуют денатурации большей части белка, в том числе и белковой части гормонов и ферментов, снижая биологическую активность экстракта.

Известен способ получения биологически активного экстракта (пантокрина) из пантов марала, изюбра и пятнистого оленя (в соответствии с ФС-42-2323-85), включающий измельчение пантов, трехкратную экстракцию (по 72 часа каждая) 50%-ным этиловым спиртом с периодическим (по 5 минут через каждый час) перемешиванием и последующей фильтрацией целевого продукта (см. Промышленный регламент № 35 на производство пантокрина, Минмедбиопром, Московский эндокринный завод, 1986) прототип.

Однако, как показали исследования, при использовании в качестве сырья половых органов пантовых оленей (пенисы и/или семенники), применение 50%-ного водного спиртового раствора не обеспечивает полноты экстракции, а 3-кратное воздействие новой порцией спирта также ухудшает биологическую активность конечного продукта и усложняет процесс.

Необходима разработка способа получения биологически активного продукта, позволяющего расширить сырьевую базу, упростить процесс при режиме, обеспечивающем высокую биологическую активность конечного продукта.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения биологически активного продукта пантового оленеводства, включающем измельчение сырья и экстракцию этиловым спиртом, в качестве сырья используют пенисы и/или семенники пантовых оленей, а экстракцию проводят подкисленным до рН 4,7 60%-ным раствором этилового спирта при комнатной температуре 20-25°С и соотношении спирт:сырье 5:1 в течение 144-240 часов. После окончания процесса экстракции экстракт подвергают вымораживанию при температуре от - 15 до 18°С в течение 5 суток с последующей фильтрацией конечного продукта.

Для выявления оптимальных параметров процесса было исследовано влияние факторов: концентрации этилового спирта (50, 60, 70%), соотношения компонентов спирт:сырье - 3:1; 4:1; 5:1, времени экстрагирования - от 48 до 240 часов при проведении процесса экстракции при комнатной температуре 20-25°С.

В таблице 1 приведены суммарные значения аминокислот (г/кг) (изо-лейцин, треонин, серин, глицин, аланин, валин, метионин, лейцин, глутамин, пролин, фенилаланин, лизин, аргинин) при экстрагировании 60- и 70%-ным этиловым спиртом измельченных до состояния фарша пенисов.

Таблица 1
Длительность экстрагирования, часов	Соотношение спирт:сырье
3:1	4:1	5:1
60%	70%	60%	70%	60%	70%
48	15,08	16,00	15,56	16,63	16,30	16,71
72	15,61	16,67	16,40	16,83	16,81	16,16
144	15,79	16,90	16,82	17,08	17,38	15,40
240	16,68	17,06	17,21	17,26	18,36	15,30

Как видно из таблицы 1, содержание аминокислот при экстрагировании 60%-ным спиртом увеличивалось по мере увеличения длительности экстракции и количества спирта в экстракте. В связи с тем, что интенсивность нарастания (процент увеличения от экспозиции к экспозиции) суммы аминокислот значительно снижалось при смене экспозиции, дальнейшее расширение области исследования параметров процесса нецелесообразно. Так, при соотношении 3:1 и 48 часах экстракции суммарная величина аминокислот составила 15,08 г/кг, при соотношении 4:1 - 15,56 г/кг (увеличение на 3,2%), в то время как при переходе с соотношения 4:1 к соотношению 5:1 увеличение суммы аминокислот составило всего 1%. Аналогичная ситуация наблюдалась при исследовании оптимальной длительности экстракции. Результат экстракции 70%-ным спиртом при соотношении спирт:сырье 3:1 и 4:1 был несколько выше, чем 60%-ным, и достигал своего максимального значения 17,26 г/кг при соотношении 4:1. Однако дальнейшее увеличение количества спирта (5:1) и длительности экстракции с 72 до 240 часов значительно снижало (вероятно, из-за процесса денатурации белков) суммарную величину аминокислот. Поэтому оптимальными параметрами режима экстрагирования пенисов являются 60%-ный спирт в качестве экстрагента при соотношении спирт:сырье 5:1 и времени (длительности) экстрагирования 144-240 часов. Суммарное значение аминокислот в экстракте при данных параметрах - 17,38-18,36 г/кг.

В таблице 2 приведены суммарные значения аминокислот при экстрагировании 60- и 70%-ным этиловым спиртом измельченных до состояния фарша пенисов с семенниками при тех же параметрах длительности экстракции и соотношении компонентов.

Таблица 2.
Длительность экстрагирования, часов	Соотношение спирт:сырье
3:1	4:1	5:1
60%	70%	60%	70%	60%	70%
48	13,52	13,66	14,80	14,10	15,38	14,18
72	13,72	13,84	15,92	15,81	15,97	15,96
144	14,45	14,68	16,44	16,27	17,56	15,61
240	14,83	15,55	17,25	17,73	19,16	15,63

Как видно из таблицы 2, при экстрагировании пенисов с семенниками протекание процесса экстракции было аналогично процессу экстракции пенисов. Оптимальные суммарные показатели аминокислот были несколько выше (17,56-19,16 г/кг) при тех же параметрах процесса: экстрагент - 60%-ный спирт, длительность экстрагирования 144-240 часов при соотношении спирт:сырье 5:1. Опыты проводились в обоих случаях при комнатной температуре 20-25°С. Результаты экстракции пенисов и/или семенников 50%-ным этиловым спиртом при всех трех исследуемых соотношениях были значительно ниже. Содержание витаминов в 60%-ных экстрактах из пенисов при соотношении спирт:сырье 3:1; 4:1; 5:1 превышало этот показатель в 70%-ных экстрактах на 16,05; 18,30; 20,90% соответственно, в экстрактах из пенисов с семенниками - на 4,90; 4,20; 3,60%. В связи с тем, что при первом перемешивании фарша из пенисов и/или семенников образовывалась долго неоседающая взвесь, перемешивание производилось 3 раза в сутки по 5 минут.

Результаты исследования по использованию семенников в качестве сырья при получении биологически активного продукта не приведены в описании в связи с тем, что данные по использованию в качестве сырья пенисов с семенниками были выше, чем при использовании пенисов, а значит, одни семенники заведомо более эффективны в качестве сырья по результативности, что и подтверждено в описании (табл.3).

Подкисление экстрактов до рН 4,7 обеспечивало в дальнейшем выпадение длинноциклических белковых молекул в осадок при вымораживании. Температура вымораживания от -15 до -20°С обусловлена тем, что при температуре выше -15°С процесс выпадения белков более длительный, а ниже -20°С происходит кристаллизация связанной воды, что в дальнейшем снижает активность препарата.

Результаты по проверке эффективности предлагаемого способа приведены в таблице 3.

Таблица 3
Сырье и способ экстрагирования	Скорость извлечения, часов	Биологическая активность экстрактов по стандарту ФС 42-2323-85
Панты марала, способ-прототип	216	25%-стандарт
Пенисы, предлагаемый способ	144-240	25-27%
Пенисы с семенниками, предлагаемый способ	144-240	26-29%
Семенники, предлагаемый способ	144-240	29-32%
Пенисы с семенниками по способу-прототипу	216	23%

Активность препаратов определялась биологическим методом по их способности снижать кровяное давление у кроликов.

Пример. Измельченные (например, на куттере) свежие (собранные в день убоя маралов) пенисы с семенниками смешивали с 60%-ным водным раствором этилового спирта (подкисленного 1%-ной уксусной кислотой до рН 4,7) в соотношении спирт:сырье 5:1 и экстрагировали в течение 168 часов при комнатной температуре +23°С. При этом каждые 8 часов производили перемешивание смеси в течение 5 минут. По истечении необходимого времени экстракции экстракт помещали в холодильник с температурой -18°С на 3 суток для вымораживания с последующей фильтрацией конечного продукта.

Таким образом, использование заявленного способа получения биологически активного продукта из пенисов и/или семенников пантовых оленей позволяет получить лекарственное средство на уровне и выше по гипотензивному действию с пантокрином, упростить процесс экстракции (одноразовое смешивание спирта с сырьем вместо 3-кратного по прототипу при 3-кратном в сутки перемешивании смеси вместо 24-кратного по прототипу), расширить арсенал средств, обладающих биологической активностью и более полно и рационально использовать продукцию пантового оленеводства.