способ моделирования отека капсул больших слюнных желез

Формула изобретения

Способ моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс путем перегревания экспериментального животного в термокамере с температурой воздуха 45°С в течение 9-36 мин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной морфологии. Оно может быть использовано для изучения патоморфологии больших слюнных желез белых крыс, для разработки лекарственных средств - термопротекторов и определения эффективности их терапевтического действия на доклиническом этапе исследования данных фармацевтических средств.

Методы моделирования отека капсул больших слюнных желез в доступной литературе не обнаружены.

Сущность способа моделирования отека капсул больших слюнных желез состоит в том, что экспериментальных животных подвергают острой внешней гипертермии при температуре 45°С в течение 9-36 минут.

В зависимости от времени перегревания получают модель отека капсул исследуемых органов разной степени выраженности.

В результате проведенного эксперимента на макроскопическом уровне был установлен отек названных структур. Большие слюнные железы ярко-розового цвета и находятся в прозрачной, бесцветной жидкости.

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Половозрелых белых крыс самцов весом от 180 до 200 г помещали в тепловую камеру с температурой воздуха +45°С. Температура в камере регулировалась автоматически по контрольному термометру. Точность поддержания температуры - не менее ±0,75°С. Отклонение температуры любой точки рабочего объема от заданной температуры по контрольному термометру - ±1,5°С.

В качестве камеры использовали отечественный термостат для парафиновых заливок с электроподогревом и водяной рубашкой (Ц-1281). Размеры внутренней рабочей камеры термостата - 250 мм × 250 мм × 400 мм, объем - 0,025 м³.

Экспериментальных животных перегревали всегда в утренние часы суток (с 9.00 до 12.00). Длительность пребывания крысы в термостате зависела от задач эксперимента и состояния животного и составила 9-36 минут. По общему состоянию подопытных крыс (физиологии поведения животного) и повышению их ректальной температуры судили о степени гипертермии животных. Всех использованных в работе подопытных животных подразделили на 6 групп: контрольная группа (Ко), включающая 15 животных, и 5 экспериментальных групп, каждая из которых состоит из 17 животных: животные, выведенные из эксперимента на стадии безразличия (Ст.Б, в термокамере находились 9-10 минут), стадии возбуждения (Ст.В, в термокамере находились 14-18 минут), начальной стадии теплового удара (НТУ, в термокамере находились 21-25 минут), разгаре теплового удара (РТУ, в термокамере находились 28-32 минуты), и крысы, погибшие от теплового удара (ТУ, в термокамере находились 34-36 минут). Градацию стадий эксперимента проводили на основании литературных данных (Фаращук Н.Ф., Рахманин Ю.А., 2004) и физиологии поведения животного. Животных выводили из эксперимента с учетом правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (приказ Минздрава № 724 от 13 ноября 1984 г.).

Фотографировали субмандибулярную область шеи, затем препарировали шкурку этой области и снова фотографировали эту область с помощью цифрового аппарата «Nikon coolpix 4600». Далее удаляли фасцию шеи и обнажали субмандибулярный комплекс желез. Фотографировали и изучали его с помощью лупы. После удаления кожи в субмандибулярной области обнаружили отек подлежащей соединительной ткани. После удаления этой ткани и поверхностной фасции был выявлен резко выраженный отек соединительнотканных структур больших слюнных желез и особенно их субмандибулярного комплекса: а - контроль; б - стадия безразличия; в - стадия возбуждения, г - начальная стадия ТУ; д - разгар ТУ; е - смерть от ТУ (фиг.1). Производили экстирпацию всего блока слюнных желез, затем разрезали этот блок в продольном и поперечном направлениях, стараясь, чтобы в одном кусочке были фрагменты всех трех БСЖ. Это хорошо получалось на поперечных разрезах. Кусочки слюнных желез одновременно фиксировали в жидкости Буэна, жидкости Карнуа. Срезы окрашивали гематоксилином Бемера - эозином; гематоксилином Ганзена - эозином; альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми; импрегнировали серебром по Гомори.

Морфометрические исследования проводили с помощью окуляр-микрометра (MOB 1-15*): измеряли толщину капсул больших слюнных желез (в микрометрах) в местах их наибольших и наименьших размеров (контрольная выборка n=90; экспериментальные выборки n=102).

Предложенным способом произведена качественная и количественная морфометрическая оценка динамики морфологических изменений в капсулах больших слюнных желез белых крыс на разных стадиях острого перегревания организма.

При исследовании препаратов больших слюнных желез на первой стадии перегревания, стадии безразличия выявлен незначительный отек капсулы: например, в капсуле околоушной слюнной железы и междолевой соединительной ткани на препарате, окрашенном альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, - незначительный отек, увеличение 7×8 (фиг.2). Определяется разволокнение коллагеновых волокон, истончение эластических и ретикулиновых волокон, наиболее выраженное в наружном и внутреннем слоях капсулы. На последующих стадиях перегревания наблюдается усиление всех вышеописанных морфологических изменений в строении капсул больших слюнных желез, которое максимально проявляется у животных, погибших от теплового удара. Так, в околоушной слюнной железе в разгар теплового удара определяется резкий отек капсулы, который представлен на микрофотографии препарата, окрашенного альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, увеличение 7×40 (фиг.3)

Отек ведет к достоверному увеличению толщины капсулы: как минимального, так и максимального размеров. Количественные данные изменения толщины капсул в местах их наибольших и наименьших размеров рассчитаны с помощью определения статистических показателей результативного признака для каждой группы животных: среднее значение (М), дисперсия ( ²), стандартная ошибка среднего (m), 95% доверительный интервал для среднего значения, коэффициент вариации (CV %) (Автандилов Г.Г., 2002), проводили дисперсионный анализ, вычисляли F-критерий (Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б., 2000).

Пример 1

Крыса № 19, вес - 190 г, перегрета до стадии безразличия, находилась в термокамере в течение 9 минут, вела себя спокойно, ректальная температура до перегревания - 36,8°С, после перегревания - 39,5°С. После выведения животного из эксперимента определен слабовыраженный отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1, б), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - незначительный отек капсул больших слюнных желез: околоушной слюнной железы (ОКЖ), подчелюстной слюнной железы (ПЧЖ), подъязычной слюнной железы (ПЯЖ). На стадии безразличия при остром перегревании организма имеет место начинающийся отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс (фиг.1б, 2), проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.1).

Пример 2

Крыса № 1, вес - 180 г, перегрета до смерти от теплового удара, находилась в термокамере в течение 36 минут, ректальная температура до перегревания - 36,6°С, после перегревания - 44°С. Определен резкий отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1е), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - значительный отек капсул больших слюнных желез. У животных, погибших от теплового удара, имеет место резкий отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс, проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.2).

Результаты оценки количественных параметров толщины капсул контрольной и экспериментальных групп представлены в таблицах 3-8. Они свидетельствуют, что острое перегревание организма приводит к отеку капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей их. Степень выраженности этого отека нарастает по мере перегревания организма и достигает максимальной величины у животных, погибших от теплового удара.

Таким образом, острое внешнее перегревание организма может использоваться в качестве способа моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярного комплекса.

Табл.1
ОКЖ № 19	Min, мкм	Max, мкм	ПЧЖ № 19	Min, мкм	Max, мкм	ПЯЖ № 19	Min, мкм	Max, мкм
поле зрения 1	34,89	192,04	поле зрения 1	25,23	167,66	поле зрения 1	21,65	144,13
2	33,05	192,38	2	25,65	166,34	2	20,56	144,25
3	33,58	190,67	3	27,18	166,87	3	21,72	144,89
4	31,08	193,67	4	27,56	166,03	4	21,71	145,12
5	32,17	189,99	5	29,45	166,07	5	21,84	145,11
6	31,43	189,06	6	29,34	165,99	6	21,45	145,01

Табл.2
ОКЖ № 1	Min, мкм	Max, мкм	ПЧЖ № 1	Min, мкм	Max, мкм	ПЯЖ № 1	Min, мкм	Max, мкм
поле зрения 1	38,08	266,12	поле зрения 1	45,18	314,56	поле зрения 1	34,71	226,84
2	38,09	265,12	2	44,67	310,56	2	35,62	220,02
3	39,24	257,34	3	43,23	310,31	3	35,78	220,56
4	39,71	257,54	4	45,12	311,23	4	35,12	227,89
5	40,01	258,12	5	45,67	311,45	5	34,71	230,45
6	40,03	264,76	6	45,78	311,76	6	34,83	227,65

Табл.3
Стадия опыта	ОКЖ, Min М±m, мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	30,81±0,16	4,92	30,49	31,13	2,29
Ст.Б	34,08±0,16*	4,62	33,78	34,39	2,48
Ст.В	35,87±0,05*	1,35	35,78	35,97	0,24
НТУ	37,03±0,09*	2,37	36,85	37,2	0,77
РТУ	38,29±0,08*	2,04	38,15	38,45	0,61
ТУ	39,45±0,08*	1,94	39,30	39,60	0,58
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.4
Стадия опыта	ПЧЖ, Min М±m, мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	23,98±0,09	3,66	23,79	24,17	0,77
Ст.Б	27,46±0,16*	5,88	27,14	27,78	2,61
Ст.В	36,51±0,13*	3,47	36,26	36,76	1,61
НТУ	38,88±0,06*	1,48	38,77	38,99	0,33
РТУ	41,31±0,09*	2,37	41,12	41,50	0,33
ТУ	45,01±0,07*	1,55	44,87	45,15	0,49
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.5
Стадия опыта	ПЯЖ, Min М±m, мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	20,16±0,08	3,78	19,99	20,32	0,58
Ст.Б	21,18±0,04*	1,83	21,10	21,26	0,15
Ст.В	25,13±0,03*	1,25	25,07	25,19	0,09
НТУ	30,98±0,06*	2,07	30,86	31,11	0,41
РТУ	33,49±0,06*	1,82	33,37	33,61	0,37
ТУ	34,97±0,04*	1,22	34,89	35,06	0,18
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.6
Стадия опыта	ОКЖ, Мах М±m, мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	167,0±0,33	1,88	166,34	167,66	9,89
Ст.Б	187,57±0,38*	2,06	186,81	188,33	14,94
Ст.В	196,77±0,33*	1,69	196,12	197,42	11,03
НТУ	204,98±0,29*	1,45	204,39	205,57	8,84
РТУ	216,62±0,93*	4,33	214,77	218,46	88,05
ТУ	262,59±0,26*	1,02	262,06	263,11	7,10
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.7
Стадия опыта	ПЧЖ, Мах М±m,мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	141,17±0,17	1,12	140,84	141,49	2,48
Ст.Б	166,53±0,11*	0,657	166,32	166,74	1,19
Ст.В	182,3±0,12*	0,686	182,06	182,55	1,56
НТУ	213,31±0,13*	0,61	213,05	213,56	1,69
РТУ	278,79±0,22*	0,79	278,36	279,22	4,86
ТУ	312,66±0,15*	0,477	312,37	312,95	2,22
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией

Табл.8
Стадия опыта	ПЯЖ, Мах М±m, мкм	Cv, %	95% доверительный интервал	2
Нижняя граница	Верхняя граница
Ко	134,41±0,05	0,38	134,31	134,52	0,26
Ст.Б	144,94±0,07*	0,49	144,79	145,08	0,52
Ст.В	149,33±0,12*	0,82	149,09	149,57	1,51
НТУ	151,43±0,09*	0,61	151,25	151,61	0,85
РТУ	206,17±0,11*	0,53	205,95	206,39	1,18
ТУ	223,51±0,28*	1,27	222,95	224,06	8,02
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией