способ дифференциальной диагностики ювенильного невуса

Формула изобретения

Способ диагностики ювенильного невуса с использованием гистологических срезов опухоли и их окрашивания, отличающийся тем, что гистологические срезы опухоли окрашивают фуксинсернистой кислотой, определяют количество дезоксирибонуклеиновой кислоты по площади ядер меланоцитов ювенильного невуса и оптической плотности проходящего через них монохроматического света длиной волны 570 нм с последующим вычислением плоидности ядер меланоцитов путем деления количества дезоксирибонуклеиновой кислоты ядер меланоцитов на количество дезоксирибонуклеиновой кислоты ядер лимфоцитов и при значении плоидности 4,0-4,6 диагностируют ювенильный невус.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, дерматологии и патологической анатомии и может быть использовано для определения нозологической формы пигментного меланоцитарного новообразования кожи - ювенильного невуса.

Известно, что дифференциальная диагностика этого новообразования в большинстве наблюдений чрезвычайно сложна и помимо традиционных классических методов диагностики требует применения дополнительных методов исследования для уточнения диагноза, а, следовательно, для выбора наиболее эффективного метода лечения.

В практической медицине затруднена диагностика и типирование ювенильного невуса как врачами онкологами и дерматологами, так и патоморфологами (патологоанатомами) из-за своеобразных свойств этой доброкачественной опухоли и сходством ее со злокачественной меланомой. Ювенильный невус относится к доброкачественным новообразованиям. В то же время новообразование имеет синоним "ювенильная меланома" вследствие особых микроскопических проявлений: меланоциты опухоли выявляют выраженные признаки пролиферации и атипии без признаков "созревания", то есть не проявляют признаков трансформации в невусные клетки, отсутствует процесс фибротизации.

Отсутствие четких патогномоничных признаков ювенильного невуса влечет ошибочную трактовку макроскопических и микроскопических характеристик, ведет к различной оценке биологических особенностей опухолей, невозможности определения течения и прогноза патологического процесса.

Известны способы диагностики и типирования меланоцитарных опухолей кожи по клиническим признакам при помощи международной классификации болезней (МКБ-10, 1995) и гистологическим проявлениям по гистологической классификация опухолей кожи (ВОЗ, 1996).

Их недостатками можно считать различный подход к диагностике меланоцитарных новообразований кожи без их сопоставлений по клиническим и морфологическим признакам, а также разные терминологические определения одних и тех же патологических процессов. Кроме того, не учитываются некоторые важные особенности и характеристики различных вариантов невусов, что не позволяет подчас объяснить их макроскопические проявления и биологическую суть (например: ювенильный и диспластический невусы), что приводит к неправильной тактике их лечения.

Наиболее близким к предложенному является традиционный гистологический способ диагностики ювенильного невуса, основанный на световой микроскопии гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином [Г.А.Меркулов, Курс патологоанатомической практики, Медгиз, 1956, с.182-184].

Недостатком этого метода являются субъективизм в оценке патологического процесса, отсутствие возможности дифференциренциации ювенильного невуса и злокачественной меланомы, вследствие чего возникают серьезные ошибки в выборе тактики лечения.

В связи с этим приходится применять большой комплекс дополнительных гистохимических, иммуногистохимических, молекулярно-генетических исследований опухолей, чтобы уточнить природу новообразования. Однако использование этих методов в учреждениях практической медицины пока остается недоступным и не всегда информативным при дифференциальной диагностике ювенильного невуса и меланомы.

Техническим результатом данного изобретения является повышение точности и объективности диагностики ювенильного невуса.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики ювенильного невуса с использованием гистологических срезов опухоли и их окрашивания отличительной особенностью является то, что гистологические срезы опухоли окрашивают фуксинсернистой кислотой и определяют количество дезоксирибонуклеиновой кислоты по площади ядер меланоцитов ювенильного невуса и оптической плотности, проходящего через них монохроматического света с длиной волны 570 нм с последующим вычислением плоидности ядер меланоцитов путем деления количества дезоксирибонуклеиновой кислоты ядер меланоцитов на количество дезоксирибонуклеиновой кислоты ядер лимфоцитов и при значении плоидности 4,0-4,6 диагностируют ювенильный невус.

В настоящее время в литературе не встречаются данные дифференциальной диагностики по количественному определению ДНК в ядрах меланоцитов ювенильного невуса в плоидометрическом выражении, то есть нет данных, характеризующих плоидность этого новообразования.

Проведенные исследования необходимы для получения объективных показателей по количественному содержанию ДНК (в плоидометрическом выражении) в ядрах меланоцитов ювенильного невуса в сравнении с количеством ДНК в ядрах меланоцитов злокачественной меланомы. Результаты плоидометрического исследования показали стабильные различия между доброкачественными, диспластическими и злокачественными меланоцитами. Эти исследования легли в основу данного изобретения и являются основополагающими критериями в дифференциальной диагностике ювенильного невуса.

Существо предлагаемого способа заключается в следующем. После тотальной (эксцизионной) биопсии биоптат фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживают в спиртах восходящей крепости и заливают в парафин, изготавливают гистологические срезы опухоли и окрашивают их фуксинсернистой кислотой (по методу Фельгена) с целью количественного определения содержания дезоксирибонуклеиновой кислоты в ядрах меланоцитов. При этом количество дезоксирибонуклеиновой кислоты в ядрах определяют путем умножения измеренной оптической плотности проходящего через них монохроматического света длиной волны 570 нм на площадь ядер. Для диагностики ювенильного невуса вычисляют плоидность путем деления количества ДНК в ядрах меланоцитов на количество ДНК в ядрах нормальных, не опухолевых клеток - лимфоцитов (стандарт плоидности лимфоцита равен 2 с).

Вычисление средних значений плоидности ядер меланоцитов ювенильного невуса проводят по исследованию не менее 20 полей зрения в 10 срезах. Определение плоидометрии можно проводить с помощью компьютерной программы для ЭВМ № 2001610675. Плоидность ядер меланоцитов выводится на экран дисплея различными псевдоцветами, общая характеристика клеток дополняется гистограммами их распределений. На экране появляются и табличные данные статистической обработки результатов измерений различных параметров меланоцитов: количество ядер в изучаемом поле зрения препарата, средние значения оптической плотности (интегральной яркости) и площади ядер; стандартные отклонения от средних показателей и ошибки выборки. Далее, полученные параметры количественных показателей дезоксирибонуклеиновой кислоты в ядрах опухолевых меланоцитов (в пересчете на плоидность) сравнивают со стандартными показателями, характерными для ювенильного невуса и злокачественной меланомы (см. таблицу). При значении плоидности в ядрах меланоцитов, равной 4,0-4,6 диагностируют ювенильный невус (табл.1).

таблица 1.
Плоидометрические показатели ювенильного невуса и злокачественной меланомы
Гистологические варианты меланоцитарных опухолей кожи	Уровни плоидности ядер клеток в ед. плоидности (с)
Ювенильный невус	4,0-4,6
Злокачественная меланома	5,94-6,78

Таким образом, предлагаемое изобретение решает важную задачу дифференцировки доброкачественного ювенильного невуса и злокачественного новообразования - меланомы, использование которого позволяет на основании объективных количественных показателей диагностировать ювенильный невус, получая достоверную информацию о доброкачественном характере этого новообразования.

Пример.

В Институт пластической хирургии и косметологии обратились родители мальчика 7 лет с жалобами на новообразование кожи левой щеки. Со слов родителей, они неоднократно посещали различные медицинские учреждения с целью установления диагноза. Для установления диагноза была проведена тотальная биопсия новообразования в пределах здоровых тканей. При традиционном гистологическом исследовании при окраске гистологических срезов гематоксилином и эозином выявлялась картина меланоцитарного новообразования с выраженными признаками пролиферации, атипии и полиморфизма меланоцитов. Патогномоничных гистологических признаков, характерных для ювенильного невуса или для меланомы в световом микроскопе не обнаруживалось. Для дифференциальной диагностики использовали предлагаемый нами способ диагностики. Для этого из новообразования, удаленного в виде тотальной биопсии, были изготовлены гистологические срезы, их окрасили фуксинсернистой кислотой по методу Фельгена для количественного выявления дезоксирибонуклеиновой кислоты в ядрах опухолевых клеток и с помощью компьютерного анализатора провели подсчет количества дезоксирибонуклеиновой кислоты (в пересчете на плоидность) в ядрах меланоцитов. Было исследовано 20 гистологических препаратов и в каждом из них в 10 ядрах опухолевых клеток подсчитано количество дезоксирибонуклеиновой кислоты. Полученные количественные показатели ДНК в пересчете на плоидность равнялись 4,5 с. При сравнении полученных результатов с показателями диагностической гистоплоидометрической таблицы 1 выявленные количественные показатели соответствовали диагнозу - «ювенильный невус».

Таким образом, предлагаемый способ дифференциальной диагностики ювенильного невуса с помощью количественного определения ДНК в ядрах меланоцитов позволяет значительно снизить процент диагностических ошибок у пациентов с пигментными меланоцитарными новообразованиями кожи.

Предлагаемый способ дифференциальной диагностики ювенильного невуса объективен, экономичен, позволяет значительно снизить процент диагностических ошибок и может быть использован в практической медицине.