способ диагностики аскаридоза у человека

Формула изобретения

Способ диагностики аскаридоза у человека, отличающийся тем, что в качестве флотационной системы используется трехингредиентная смесь насыщенных растворов хлористого цинка, сахарозы и хлористого натрия в соотношении 1,5:1:1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике при постановке диагноза аскаридоза.

Аскаридоз - (синоним - аскариоз) возбудитель Ascaris lumbricoides - пероральный геогельминтоз, антропоноз, вызываемый круглым червем из семейства Ascaridae, подотряда Ascaridata, класса Nematoda. Клинические проявления аскаридоза в ранней фазе болезни отличаются полиморфизмом, варьируют от латентных до тяжелых клинических форм, с поражением легких (синдром Леффлера) и развитием хронической фазы с симптомами поражения желудочно-кишечного тракта. Вместе с тем в клинической практике при диагностике важно оценить степень инвазированности организма.

Для диагностики аскаридоза используются гельминтоовоскопические и серологические методы.

Наиболее близким к нашему изобретению является флотационный метод Фюллеборна, использующий в качестве флотационного раствора насыщенный раствор хлорида натрия с плотностью 1,19-1,22 (Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). Руководство для врачей. - под ред. Сергиева В.П., Лобзина Ю.В., Козлова С.С. // Санкт-Петербург, «Фолиант», 2006.). Существенными недостатками этого метода являются: низкая диагностическая эффективность и практически полная нечувствительность данного метода при выявлении неоплодотворенных яиц A.lumbricoides.

Целью изобретения является оптимизация гельминтоовоскопической диагностики аскаридоза, заключающаяся в увеличении выявляемости яиц в исследуемой пробе фекалий и количественной оценке степени инвазии.

Способ осуществляется следующим образом: используется трехингредиентная флотационная система, состоящая из хлористого цинка, сахарозы и хлористого натрия в соотношении 1,5:1:1 (объем/объем/объем). Для приготовления флотационных смесей ингредиентами служат насыщенные водные растворы хлорида цинка (ZnCl₂, - 1,82), хлорида натрия (NaCl, - 1,19) и сахарозы. Удельный вес приготовленных флотационных растворов определяют с помощью денсиметра при t 125°С.

Свежую пробу фекалий массой 1 грамм суспендируют в 10 мл воды, фильтруют через металлический фильтр с величиной пор 0,5×0,5 мм. Полученный фильтрат центрифугируют при 1500 g в течение 5 мин, полученный осадок суспендируют во флотационном растворе и центрифугируют при 1500 g в течение 5 мин. Всплывающие яйца гельминтов, концентрирующиеся в поверхностной пленке раствора, снимают при помощи стандартной металлической петли и подсчитывают их количество в объеме 0,2 мл флотационной жидкости без покровного стекла при окуляре с увеличением кратным ×10 и объективе с увеличением кратным ×20.

За счет использования патентуемого способа исследования фекалий с многокомпонентной флотационной системой удалось решить следующие задачи:

- увеличение времени кристаллизации (за счет сахарозы), что позволяет при использовании насыщенных растворов увеличить время просмотра образцов;

- подбор оптимальной для выявления яиц аскарид удельной плотности флотационной жидкости за счет хлористого цинка;

- уменьшение себестоимости анализа за счет использования хлористого натрия и сахарозы;

- возможность количественного учета степени инвазированности организма за счет стандартизации забора проб фекалий и просмотра материала.

Заявленный способ позволяет обеспечить эффективную выявляемость яиц Ascaris lumbricoides в фекалиях и количественно оценить степень инвазии.

В условиях клинической лаборатории поликлиники при ФГУН «КНИИЭМ» Роспотребнадзора проведен сравнительный анализ гельминтоовоскопического метода Фюллеборна и патентуемого способа выявления яиц аскарид в фекалиях. По результатам сравнительного анализа (Таблица) были получены следующие результаты.

№ пробы фекалий пациентов	Количество яиц в 1 г фекалий
Фюллеборна	Патентуемый метод
1.	4±1,0	23±1,4
2.	5±1,2	30±1,4
3.	5±1,5	35±1,5
4.	8±1,8	44±1,7
5.	3±1,0	18±1,6
6.	2±1,1	15±1,7
М±m	4,5±1,3	27,5±1,6

Патентуемый нами способ позволил дополнительно выявить 23 яйца Ascaris lumbricoides, по сравнению с методом Фюллеборна, что обусловлено использованием сочетания этапов седиментации и флотации в многокомпонентной флотационной системе, применение которой было положено в основу данного способа. Компоненты предлагаемой нами флотационной системы не нарушают морфологию яиц паразитов и не создают затруднений с морфологической идентификацией возбудителя. Таким образом, предлагаемый способ позволяет в 6 раз повысить диагностическую эффективность выявления яиц в пробах фекалий человека по сравнению с методом Фюллеборна и может использоваться в клинической практике и при проведении научных исследований.

Пример (лабораторный номер - № 116). Ребенок, 10 лет, обратился в клинико-диагностический центр при ФГУН КНИИЭМ Роспотребнадзора. Периодический сухой кашель с астматическим компонентом, приступы сухого ночного кашля с уртикарными зудящими высыпаниями на коже туловища и конечностей, боли в животе, сниженный аппетит, повышенная утомляемость.

Из анамнеза: 5 месяцев назад перенес пневмонию, месяц назад обструктивный бронхит, лечился стационарно. При обследовании в клинико-диагностическом центре были выявлены: умеренный лейкоцитоз L-10,9×10⁹/л, эозинофилия 21%.

Из анамнеза жизни: ребенок от первой беременности, протекавшей с гестозом первой половины, родители здоровы, мать 28 лет, отец 30 лет.

Роды в срок, закричал сразу, вес при рождении 3100 г, рост 52 см, грудное вскармливание до 3 месяцев. Перенес пневмонию, обструктивный бронхит, ветряную оспу. На первом году жизни отмечены признаки диатеза. Семья живет в частном доме. Мальчик контактирует с землей.

При осмотре состояние ближе к удовлетворительному. Кожа бледная, на туловище уртикарные зудящие высыпания. Со стороны внутренних органов при пальпации болезненность в области пупка.

Проведено обследование: OAK: лейкоциты - 9,0×10⁹/л, Нb 100 г/л. В лейкоформуле эозинофилия. Уровень общего IgE 450 ед/мл, уровень специфических IgE (панель Allergo dip - ингаляционная и пищевая) 18 ед/мл.

При исследовании методом Фюллеборна пробы фекалий (1 грамм) пациента помещали в 30 мл насыщенного раствора поваренной соли (в 1 л кипяченой воды растворяют 400 г соли). Взвесь процеживали через металлическое сито или марлю в коническую колбу и оставляли для отстаивания. Через 30-45 мин основная часть яиц в силу меньшего удельного веса по сравнению с насыщенным раствором поваренной соли всплывала на поверхность.

Препарат рассматривали при окуляре с увеличением кратным ×10 и объективе ×20. При этом были выявлены отдельные яйца аскарид.

Далее был применен патентуемый нами метод: пробу фекалий массой 1 грамм суспендировали в 10 мл воды, фильтровали через металлический фильтр с величиной пор 0,5×0,5 мм. Полученный фильтрат центрифугировали при 1500 g в течение 5 мин. Затем полученный осадок суспендировали во флотационном растворе и центрифугировали при 1500 g в течение 5 мин. Всплывающие яйца гельминтов, концентрирующиеся в поверхностной пленке раствора, снимали при помощи стандартной металлической петли и подсчитывали их количество в объеме 0,2 мл флотационной жидкости без покровного стекла при окуляре с увеличением кратным ×10 и объективе с увеличением кратным ×20.

Нами была выявлена аскаридозная инвазия (приблизительно 30 яиц на грамм).

Заключение: Высокая степень инвазии аскаридами, кишечная форма. В данном клиническом случае проявления пневомнии и абструктивного бронхита были расценены как ранние формы аскаридоза. Приступы астматического и ночного кашля оценивались как аллергические проявления на фоне кишечной формы аскаридоза.

Была проведена дегельминтизация (декарис, немазол) и лечение заместительной терапией. После лечения произошло отхождение аскарид (Ascaris lumbricoides).