увлажняющий кожу агент для перорального введения и функциональные продукты питания и напитки

Формула изобретения

1. Увлажнитель кожи для перорального введения, содержащий в качестве активного компонента ферментированную молочную сыворотку, полученную путем ферментации молока с помощью штамма Lactobacillus helveticus CM-4 (депонированного в Международном патентном депозитарии, Национальный институт прогрессивной индустриальной науки и технологии, под инвентарным номером FERM ВР-6060).

2. Функциональный продукт питания и напиток, содержащий увлажнитель кожи для перорального введения по п.1 и имеющий увлажняющий эффект.

3. Применение ферментированной молочной сыворотки, полученной путем ферментации молока с помощью штамма Lactobacillus helveticus CM-4 (депонированного в Международном патентном депозитарии, Национальный институт прогрессивной индустриальной науки и технологии, под инвентарным номером FERM ВР-6060) для получения увлажнителя кожи для перорального введения или функционального продукта питания и напитка, имеющего увлажняющий кожу эффект.

4. Способ увлажнения кожи, включающий пероральное введение ферментированной молочной сыворотки, полученной путем ферментации молока с помощью штамма Lactobacillus helveticus CM-4 (депонированного в Международном патентном депозитарии, Национальный институт прогрессивной индустриальной науки и технологии, под инвентарным номером FERM ВР-6060) пациенту.

5. Увлажнитель кожи для перорального введения по п.1, в котором указанная молочная сыворотка имеет эффект стимуляции синтеза филаггрина.

6. Средство для лечения сухой кожи путем перорального введения, содержащее в качестве активного компонента ферментированную молочную сыворотку, полученную путем ферментации молока с помощью штамма Lactobacillus helveticus CM-4 (депонированного в Международном патентном депозитарии, Национальный институт прогрессивной индустриальной науки и технологии, под инвентарным номером FERM ВР-6060).

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к увлажнителю кожи для перорального введения, который вызывает увлажняющий кожу эффект посредством перорального пути поступления в организм, к функциональному продукту питания и напитку, обладающим таким эффектом, и к их применению.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Известно, что проявление увлажняющего эффекта для стимуляции задержки влаги в кожных тканях включает: удержание влаги в роговом слое эпидермиса посредством усиления так называемых природных увлажняющих факторов, которые большей частью состоят из особых аминокислот; удержание влаги в корнеоцитах путем повышения уровня межклеточных липидов, которые действуют как барьер для удержания влаги в роговом слое; предотвращение вымывания природных увлажняющих факторов; и т.п. Аминокислоты, составляющие существенную часть природных увлажняющих факторов, поставляются путем переваривания филаггрина, который является белком, продуцируемым эпидермальными кератиноцитами. Таким образом, стимуляция выработки филаггрина играет важную роль в проявлении увлажняющего эффекта. С другой стороны, межклеточные липиды, которые включают целый ряд липидов, генерируются рядом ферментативных реакций в эпидермисе. Среди прочего, генерация церамида является особенно важной там, где формирование сфингозинового каркаса с помощью сериновой пальмитоилтрансферазы играет важную роль.

До настоящего времени многими исследователями были получены компоненты, имеющие увлажняющий кожу эффект, в частности, в области косметологии и кожных препаратов для наружного применения. Например, было внесено много предложений по добавлению ферментированной молочной сыворотки или выделенных из нее и очищенных продуктов в косметические средства или т.п. с ожиданием продуцирования увлажняющего эффекта. А именно, в патентных публикациях 1 и 2 сообщается, что наружное применение ферментированной молочной сыворотки продуцирует увлажняющий эффект. В патентной публикации 3 раскрыто, что кожный препарат для наружного применения, содержащий протеиназу и культуральный супернатант молочнокислой бактерии, имеет увлажняющий эффект, и Lactobacillus helveticus раскрывается как пример молочнокислой бактерии.

Однако ни в одной из ссылок, включая патентную публикацию 3, не раскрыто, что увлажняющий эффект подтвержден при действительно наружном применении ферментированной Lactobacillus helveticus молочной сыворотки. В патентной публикации 4 раскрыто, что культура или метаболит штамма MIKI-020 Lactobacillus helveticus (FERM P-13678) обладает ингибирующим меланогенез эффектом и стимулирующим коллагеногенез эффектом, но в этой ссылке не упоминается об увлажняющем эффекте.

В патентных публикациях 2 и 3 также содержится описание того, что кожный препарат для наружного применения, содержащий ферментированную молочную сыворотку, может быть использован в продукте питания и напитке. Однако не указано, каким образом кожный препарат для наружного применения может быть использован в продукте питания и напитке и какой эффект получается при таком использовании.

Помимо ферментированной молочной сыворотки было предложено несколько компонентов, которые продуцируют увлажняющий эффект как при пероральном введении, так и при наружном применении. Однако не приемлемо как общее правило то, что компонент, подтвердивший эффект в одном пути поступления в организм, будет также проявлять сходный эффект при другом пути поступления в организм. Существует много компонентов, которые не имеют сравнимых эффектов при обоих путях поступления в организм.

Патентная публикация 1: JP-2001-31557-A

Патентная публикация 2: JP-11-228339-A

Патентная публикация 3: WO-01-019324-A

Патентная публикация 4: JP-2002-80340-A

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Объект настоящего изобретения представляет функциональный продукт питания и напиток, которые продуцируют увлажняющий кожу эффект посредством перорального введения, и увлажнитель кожи для перорального введения для использования в данном функциональном продукте питания и напитке.

В соответствии с настоящим изобретением предлагается увлажнитель кожи для перорального введения, содержащий в качестве активного компонента ферментированную молочную сыворотку, полученную путем ферментации молока с помощью Lactobacillus helveticus.

В соответствии с настоящим изобретением также предлагается функциональный продукт питания и напиток, содержащие вышеупомянутый увлажнитель кожи для перорального введения и имеющие увлажняющий эффект.

В соответствии с настоящим изобретением также предлагается применение ферментированной молочной сыворотки, полученной путем ферментации молока с помощью Lactobacillus helveticus, для приготовления увлажнителя кожи для перорального введения или функционального продукта питания и напитка, имеющего увлажняющий эффект.

В соответствии с настоящим изобретением предлагается способ увлажнения кожи, включающий пероральный прием пациентом ферментированной молочной сыворотки, полученной путем ферментации молока с помощью Lactobacillus helveticus.

Активным компонентом увлажнителя кожи для перорального введения и функционального продукта питания и напитка, содержащих увлажнитель в соответствии с настоящим изобретением, является ферментированная молочная сыворотка, полученная путем ферментации молока с помощью Lactobacillus helveticus, безопасность которого подтверждена при пероральном введении. Таким образом, превосходный увлажняющий эффект может быть достигнут посредством перорального пути поступления в организм без риска, и можно ожидать, что длительное введение обеспечит подавление сухости кожи, вызванной изменениями времен года или климата и улучшит состояние кожи.

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение далее будет объяснено детально.

Увлажнитель кожи для перорального введения в соответствии с настоящим изобретением содержит в качестве активного компонента ферментированную молочную сыворотку, полученную путем ферментации молока с помощью Lactobacillus helveticus.

Предпочтительно использовать штамм Lactobacillus helveticus, имеющий высокую внеклеточную протеиназную активность. Например, предпочтительны штаммы, имеющие значение U/OD590 не ниже чем 400, как измерено в соответствии со способом Yamamoto с сотр. (Yamamoto N. с сотр., J. Biochem. (1993) 114, 740), основанном на способе Twining с сотр. (Twining S., Anal. Biochem. 143, 3410 (1984)). Особенно могут быть использованы штаммы Lactobacillus helveticus, имеющие следующие бактериологические свойства.

Бактериологические свойства

1. Морфологические свойства

1) форма клетки: палочковидная

2) подвижность: нет

3) формирование спор: нет

4) окрашивание по Грамму: положительное

2. Физиологические свойства

1) продуцирование каталазы: отсутствует

2) продуцирование индола: отсутствует

3) восстановление нитрата: отсутствует

4) рост в аэробных условиях: факультативный анаэроб

5) образование DL(-)-молочной кислоты из глюкозы путем гомомолочной ферментации без образования газов

6) расщепление углеводов:

глюкоза: +

лактоза: +

манноза: +

фруктоза: +

галактоза: +

сахароза: -

мальтоза: -

ксилоза: -

рамноза: -

целлобиоза: -

трегалоза: -

мелибиоза: -

раффиноза: -

стахиоза: -

манит: -

сорбит: -

эскулин: -

салицин: -

Примером таких предпочтительных штаммов Lactobacillus helveticus является штамм CM-4 Lactobacillus helveticus (депонированный в Международном патентном депозитарии, Национальный институт прогрессивной индустриальной науки и технологии, Tsukuba Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba-shi, Ibaraki, Japan, под инвентарным номером FERM BP-6060 от 15 августа 1997) (ссылка как на CM-4 здесь и ниже). CM-4 депонирован под вышеупомянутым инвентарным номером по Будапештскому договору о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры и уже был запатентован.

Ферментированная молочная сыворотка может быть получена путем добавления ферментированной молочной закваски, содержащей Lactobacillus helveticus в молоке, в соответственно подобранных условиях ферментации, таких как температура, и ферментации молока в селективных условиях.

Ферментированная молочная сыворотка как активный компонент может быть получена путем отделения сыворотки от полученного ферментированного молока посредством обычного процесса отделения, такого как центрифугирование или фильтрование. Ферментированное молоко само по себе без отделения или отделенная сыворотка могут быть использованы с или без соответствующего фракционирования, концентрирования, очистки и тому подобного, или сыворотка или ее концентрат могут быть измельчены в порошок путем лиофилизации или аэрозольного высушивания.

Lactobacillus helveticus предпочтительно находится в форме пре-культивированной закваски, имеющей достаточно высокую активность. Первоначальное число клеток предпочтительно может составлять около 10⁵ -10⁹ клеток/мл.

Ферментированная молочная сыворотка как активный компонент также может быть получена путем коферментирования с помощью Lactobacillus helveticus и дрожжей для улучшения аромата и вкуса, когда ферментированную молочную сыворотку используют в функциональном продукте питания и напитке, таком как продукты, применяемые для специализированного поддержания здоровья. Штамм дрожжей специально не ограничен и может быть предпочтительно, например, дрожжами рода Saccharomyces, такими как Saccharomyces cerevisiae. Содержание дрожжей может быть соответственно выбрано в зависимости от цели.

Заквасочный материал молока может быть, например, молоком животного, таким как коровье молоко, кобылье молоко, овечье молоко или козье молоко; растительным молоком, таким как соевое молоко; или обработанным молоком, таким как снятое молоко, восстановленное молоко, порошковое молоко или сгущенное молоко. Среди них коровье молоко, соевое молоко и обработанное молоко являются предпочтительными с особенным предпочтением коровьего молока и полученного из него обработанного молока.

Содержание твердого вещества в молоке практически не ограничено, и, например, для снятого молока содержание твердого нежирового вещества может обычно оставлять около 3-15% и может составлять 6-15% от продуктивности.

Ферментация может быть проведена обычно путем статического культивирования или культивирования со встряхиванием, например, при 25-45°C, предпочтительно при 30-45°C в течение 3-72 часов, предпочтительно 12-36 часов, и ферментация может быть закончена, когда кислотность молочной кислоты достигнет 1,5 или выше.

Увлажнитель в соответствии с настоящим изобретением может необязательно содержать в дополнение к активному компоненту, ферментированной молочной сыворотке, другие стандартные компоненты, имеющие увлажняющий эффект, и различные добавки, такие как наполнители, зависящие от его формы.

Важным активным компонентом увлажнителя в соответствии с настоящим изобретением является ферментированная молочная сыворотка, и ее пероральное дозирование может быть соответственно выбрано так, что желательный эффект может быть достигнут, принимая во внимание длительность введения, непрерывность или подобные факторы. Суточная доза обычно составляет 1-1000 мл ферментированной молочной сыворотки на человека, предпочтительно 10-200 мл на человека.

Увлажнитель в соответствии с настоящим изобретением может приниматься даже после проявления симптомов, таких как снижение влажности кожи, или постоянно ежедневно, или периодически.

Функциональный продукт питания и напиток по настоящему изобретению является продуктом питания или напитком, содержащим представленный увлажнитель, и может представлять собой, например, продукт питания для специфического поддержания здоровья, который претендует на предотвращение или улучшение в отношении удержания влаги.

Представленный функциональный продукт питания и напиток может необязательно содержать добавки, такие как сахара, белки, липиды, витамины, минералы, ароматические агенты или их смеси. Также могут быть включены молочные компоненты, из которых выделяют ферментированную молочную сыворотку.

В функциональном продукте питания и напитке по настоящему изобретению содержание представленного увлажнителя может соответственно быть выбрано в зависимости от формы или типа продукта питания и напитка. Содержание также может быть выбрано в зависимости от длительности потребления функционального продукта питания и напитка или подобных факторов и практически не ограничено. Подходящее содержание может составлять обычно 0,1-100%, предпочтительно 10-90% в единицах активного компонента ферментированной молочной сыворотки.

Функциональный продукт питания и напиток может быть в форме, например, ферментированных молочных продуктов, таких как йогурт или напиток, содержащий молочнокислую бактерию, разных обработанных продуктов питания и напитков, содержащих ферментированную молочную сыворотку или ее концентрат, сухих порошков, таблеток, капсул, гранул и т.п.

Доза и время введения функционального продукта питания и напитка по настоящему изобретению практически не ограничены, и предпочтительно принимать функциональный продукт питания и напиток в таком количестве, при котором в целом достигается вышеупомянутая доза активного компонента. Например, представленный функциональный продукт питания и напиток может приниматься постоянно или периодически до или после воздействия обработки окружающей средой, которая предусмотрена для увлажнения кожи.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение будет далее объяснено более детально ссылаясь на примеры, которые только иллюстрируют, но не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

Пример 1 и сравнительные примеры 1 и 2

(Приготовление ферментированной молочной сыворотки и водного раствора молочной кислоты)

В молочную среду, содержащую снятое молоко с 9% твердого вещества, вносили 3% закваску CM-4 (число клеток 5×10⁸ клеток/мл) и проводили ферментацию в статических условиях при 37°C в течение 24 часов для получения ферментированного молока. Ферментированное молоко центрифугировали при 12000 G в течение 20 минут, и осадок удаляли для получения ферментированной молочной сыворотки (ссылка как на ферментированную молочную сыворотку (A) здесь и ниже).

Для сравнения готовили 2,67% водный раствор молочной кислоты (ссылка как на водный раствор молочной кислоты (a) здесь и ниже) (сравнительный пример 1).

(Оценивание способности стимуляции синтеза SPT и филаггрина)

1) Клетки эпидермиса (нормальные кератиноциты человека, изготовленные KURABO INDUSTRIES LTD.) культивировали в среде HuMedia-KG2 (торговое наименование, изготовлена KURABO INDUSTRIES LTD.) и подвергали исследованиям в тестах. Чашки для культивирования диаметром 35 мм засевали эпидермальными клетками при клеточной концентрации 5×10⁵ клеток на чашку и подвергали культивированию в течение 24 часов. Затем среду замещали на аналогичную среду, содержащую ферментированную молочную сыворотку (A) или водный раствор молочной кислоты (a) в концентрации, указанной в таблице 1, и далее ферментировали в течение 24 часов.

2) После культивирования клетки промывали с помощью PBS(-) и лизировали путем внесения 500 мкл на чашку реагента Тризол (торговое наименование, изготовлен Gibco BRL). Добавляли 100 мкл на чашку хлороформа и тщательно перемешивали. Водную фазу супернатанта извлекали путем центрифугирования, и РНК осаждали 2-пропанолом для получения общей РНК. Полученную общую РНК промывали 75% охлажденным этанолом и растворяли в воде, обработанной диэтилпирокарбонатом (DEPC).

3) 1 мкг РНК, растворенной в DEPC-обработанной воде, подвергали ОТ-ПЦР (обратной транскрипции-ПЦР) с использованием набора для одноэтапной ОТ-ПЦР (торговое наименование, изготовлен Qiagen) в соответствии с протоколом в условиях и с праймерами, указанными в таблице 2, для реверсии транскрипта и амплификации кДНК, соответствующей мРНК сериновой пальмитоилтрансферазы (SPT), мРНК филаггрина или РНК циклофилина.

4) После проведения реакции реакционный продукт фракционировали посредством электрофореза в 1% агарозном геле. Электрофорезный гель окрашивали этидийбромидом и фотографировали при УФ-облучении на транс-иллюминаторе для определения интенсивности окрашивания полос.

5) Интенсивность полос, полученных от мРНК SPT или от мРНК филаггрина, стандартизировали путем распределения их с учетом интенсивности полосы, полученной от мРНК циклофилина, которая, как считается, генерируется в одинаковом количестве в любых клетках, и полученное значение выражали в относительной величине по отношению к величине, полученной при концентрации 0% ферментированной молочной сыворотки в среде в вышеупомянутом пункте (1) (контроль), которая принята за 100. Тест проводили дважды. Результаты каждого теста представлены в таблице 1.

6) Отдельно клетки эпидермиса культивировали в среде HuMedia-KG2, содержащей ферментированную молочную сыворотку (A) или водный раствор молочной кислоты (a) в различных концентрациях, полученных путем серийного разведения, и была определена максимальная концентрация в среде ферментированной молочной сыворотки (A) или водного раствора молочной кислоты(a), которая не обладает цитотоксичностью. Максимальная концентрация составила 1,25% в обоих случаях.

Таблица 1
	Концентрация(%)	Влияние на экспрессию мРНК SPT нормальных клеток эпидермиса человека	Влияние на экспрессию мРНК филаггрина нормальных клеток эпидермиса
1-й тест	2-й тест	1-й тест	2-й тест
Контроль	0	100	100	100	100
Сравнительный пример 1 Водный раствор молочной кислоты (a)	0,63	91	111	15	132
1,25	84	129	87	116
Пример 1 Ферментированная молочная сыворотка (A)	0,63	153	171	509	196
1,25	156	154	543	168

Таблица 2
Ген	Последовательность	Условия ПЦР
Температура (°C)	Цикл
SPT	Смысловая	5'-GAG GCT CAC AGT ATT GGC GC-3'	58	30
Антисмысловая	5'-GGC CTG TCC AGT AGA GGT AC-3'
Филаггрин	Смысловая	5'-CAA GCA GAG AAA CAC GTA ATG AGG-3'	56	30
Антисмысловая	5'-CGC ACT TGC TTT ACA GAT ATC AGA-3'
Циклофилин	Смысловая	5'-CCG GGT GAT CTT TGG-3'	58	30
Антисмысловая	5'-GGC GAT GGC AAA GGG-3'

(Приготовление напитка, содержащего ферментированную молочную сыворотку (A), и напитка, содержащего неферментированную молочную сыворотку)

Для получения описанной выше ферментированной молочной сыворотки (A), пригодной для питья, 90 частей по массе ферментированной молочной сыворотки (A), 0,25 части по массе ароматических агентов, 0,05 части по массе аспартама и 9,70 части по массе воды смешивали для приготовления напитка, содержащего ферментированную молочную сыворотку (A) (Пример 1).

Для сравнения к снятому молоку с 9% по массе твердого вещества, использованного выше для приготовления ферментированной молочной сыворотки (A), добавляли молочную кислоту для получения кислотности 2,2%. Смесь центрифугировали при 12000 G в течение 20 минут для удаления твердого вещества, так получали неферментированную молочную сыворотку. Затем 90 частей по массе полученной неферментированной молочной сыворотки, 0,25 части по массе ароматическеских агентов, 0,05 части по массе аспартама и 9,70 части по массе воды смешивали для приготовления напитка, содержащего неферментированную молочную сыворотку (сравнительный пример 2).

(Оценивание перорального введения)

У тридцати двух испытуемых мужского пола в возрасте 24-43 года со средним возрастом 29,4 года измеряли содержание влаги в эпидермисе на правой щеке. В соответствии с результатами испытуемых разделили на две группы по 16 испытуемых в каждой, так что две группы имели приблизительно сходное среднее значение измеряемых величин.

Одной из групп давали напиток, содержащий ферментированную молочную сыворотку(A), другой давали напиток, содержащий неферментированную молочную сыворотку, обеим в количестве 150 г в день на человека непрерывно в течение трех недель, и вслед за этим проводили оценивание.

(Оценивание содержания влаги в эпидермисе)

У испытуемых измеряли содержание влаги в эпидермисе правой щеки с использованием SKICON 200 (торговое наименование, изготовлен I.B.S.Co., Ltd.) до и спустя три недели после введения соответствующего напитка. Измерения проводили три раза и были получены средние значения результатов как содержание влаги в эпидермисе данной области. Результаты представлены в таблице 3.

Испытуемые каждой группы были разделены в зависимости от сухой и нормальной кожи, и результаты до введения и спустя три недели после введения представлены отдельно в таблице 4.

Таблица 3
	До потребления	Через три недели после потребления
Среднее ±SD	Среднее ±SD
Напиток, содержащий ферментированную молочную сыворотку (A) (пример 1)	128,8±56,4	90,3±76,7
Напиток, содержащий неферментированную молочную сыворотку (сравнительный пример 2)	117,5±87,7	53,6±35,5

Единица: µS

Таблица 4
		До потребления	Через три недели после потребления
Среднее ±SD	Среднее ±SD
Напиток, содержащий ферментированную молочную сыворотку (A) (пример 1)	Сухая кожа	82,8±30,2	85,3±86,6
Нормальная кожа	169,0±40,1	94,8±72,7
Напиток, содержащий неферментированную молочную сыворотку (сравнительный пример 2)	Сухая кожа	69,4±41,9	48,0±28,1
Нормальная кожа	197,7±87,0	62,9±46,8

Единица: µS

Из таблицы 3 видно, что содержание влаги в коже снижалось с течением времени по сравнению с таковым до перорального введения как в примере 1, так и в сравнительном примере 2, которое оценивали вследствие изменения времен года. В этом свете оказалось, что скорость снижения содержания влаги в коже является более низкой в примере 1, чем в сравнительном примере 2. В этом тесте показали, что введение напитка, содержащего ферментированную молочную сыворотку (A), ингибирует снижение содержания влаги в эпидермисе, то есть дает увлажняющий кожу эффект.

Из таблицы 4 видно, что аналогичный увлажняющий кожу эффект обеспечивается как для пациентов, имеющих сухую кожу, так и для тех, у кого нормальная кожа.

Эталонный пример

(Приготовление крема)

3,00 части по массе 1,3-бутиленгликоля, 0,10 частей по массе эфира p-гидроксибензоата (метилпарабен), 40,00 частей по массе карбоксивинилового полимера (торговое наименование Carbopol 980, изготовлен NIKKO CHEMICALS CO., LTD.), 5,00 частей по массе ферментированной молочной сыворотки (A) и 25,90 частей по массе воды перемешивали до образования смеси, добавляли 12,00 частей по массе 10% водного раствора L-аргинина и 14,00 частей по массе воды и перемешивали до гомогенности для приготовления крема, содержащего ферментированную молочную сыворотку (A) (ссылка как на крем, содержащий сыворотку (A), здесь и ниже).

С другой стороны, 3,00 части по массе 1,3-бутиленгликоля, 0,10 частей по массе эфира p-гидроксибензоата (метилпарабен), 40,00 частей по массе карбоксивинилового полимера (торговое наименование Carbopol 980, изготовлен NIKKO CHEMICALS CO., LTD.) и 30,90 частей по массе воды перемешивали до образования смеси, добавляли 12,00 частей по массе 10% водного раствора L-аргинина и 20,00 частей по массе воды и перемешивали до гомогенности для приготовления крема без ферментированной молочной сыворотки (ссылка как на сравнительный крем здесь и ниже).

(Оценивание посредством наложения)

У пятнадцати испытуемых мужского пола в возрасте 24-43 года со средним возрастом 31,4 года измеряли содержание влаги в эпидермисе на правой щеке. В соответствии с результатами испытуемые были разделены на две группы по 8 или 7 испытуемых в каждой, так что две группы имели приблизительно сходное среднее значение измеряемых величин.

В одной из групп применяли крем, содержащий сыворотку (A), в другой применяли сравнительный крем, в обоих случаях на правой щеке, как будет обсуждаться позднее, дважды в день, утром и в полдень, продолжительностью три недели, и вслед за этим проводили оценивание.

(Оценивание содержания влаги в эпидермисе)

У испытуемых измеряли содержание влаги в эпидермисе на правой щеке с использованием SKICON 200 (торговое наименование, I.B.S. Co., Ltd.) до и спустя три недели после нанесения соответствующего крема. Измерения проводили три раза и получили среднее значение результатов содержания влаги в эпидермисе данной области. Результаты представлены в таблице 5.

Таблица 5
	До применения	Через три недели после применения
Среднее ±SD	Среднее ±SD
Крем, содержащий сыворотку (A)	142,1±100,3	72,4±59,5
Сравнительный крем	144,9±97,6	77,8±46,9

Из таблицы 5 видно, что ингибиторный эффект на снижение содержания влаги в эпидермисе не наблюдали для крема, содержащего сыворотку (A), по сравнению со сравнительным кремом без ферментированной молочной сыворотки (A). Таким образом, показано, что ферментированная молочная сыворотка (A) не вызывает увлажняющий эффект через нанесение на кожу.