способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов

Формула изобретения

1. Способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, включающий забор крови пациента, выращивание лимфоцитов и внутривенное введение их пациенту, отличающийся тем, что забор цельной крови пациента осуществляют накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивают ее в течение 100-140 мин, отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента, разливают полученную клеточную взвесь в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10%-ного раствора фитогемоаглютинина в культуральной среде RPMI-1640, емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 ч, затем полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин по 10 мин, при этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов, затем после окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 с, при этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно или через 2-3 дня после оперативного вмешательства.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии, ортопедии и реабилитации, к способам профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, и может быть использовано для профилактики гнойно-воспалительных осложнений у пациентов в условиях хирургических, травматологических и других стационаров.

Известен способ лечения гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, включающий забор крови пациента, выращивание лимфоцитов и внутривенное введение их пациенту (см. Г.А.Кесян и др. Ремоделирование защитных свойств организма при обширных оперативных вмешательствах в травматологии и ортопедии. Медицинский вестник Эребуни, Национальная академия наук Армении, Ереван, 2006 г., № 3 (27), с.140-141).

Однако известный способ при своем использовании обладает следующими недостатками:

- не обеспечивает надежного лечения и профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов после перенесенной высокой хирургической агрессии,

- не обеспечивает достаточно благоприятное течение травматической болезни,

- не обеспечивает необходимого и достаточного увеличения количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии,

- не достаточно обеспечивает повышение клеточного иммунитета,

- не достаточно обеспечивает у пациента необходимое повышение иммуноглобулинов.

Задачей изобретения является создание способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов.

Техническим результатом является возможность обеспечения надежной профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов после перенесенного оперативного вмешательства, обеспечение необходимого и достаточного увеличения количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенного оперативного вмешательства, а также обеспечение достаточно благоприятного течения травматической болезни пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии. Кроме того, техническим результатом является обеспечение у пациента необходимого повышения иммуноглобулинов.

Технический результат достигается тем, что в предлагаемом способе профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов забор цельной крови пациента проводят накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивают ее в течение 100-140 минут, отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента, разливают полученную клеточную взвесь в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640, емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 часов, затем полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 1000 об/мин по 10 минут, при этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов, затем после окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд, при этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после оперативного вмешательства. При этом внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Способ осуществляется следующим образом. Накануне оперативного вмешательства выполняют забор цельной крови пациента из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациента отстаивают в течение 100-140 минут. Отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента. Полученную клеточную взвесь разливают в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин в течение 10 минут каждое центрифугирование. При этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов. После окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд. При этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после выполнения оперативного вмешательства. Внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, отличительными являются:

- осуществление забора цельной крови пациента накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивание ее в течение 100-140 минут,

- отбор лимфоцитарной фракции пациента в количестве 0,5-1,5 мл и введение в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента,

- разливание полученной клеточной взвеси в стерильные емкости по 2 мл и введение в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640,

- размещение емкостей с культурой лимфоцитов в термостате и их выдерживание при температуре 37°С в течение 72 часов,

- выполнение центрифугирования полученной в каждой емкости клеточной культуры аутологичных лимфоцитов 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин в течение 10 минут для каждого центрифугирования,

- удаление после каждого центрифугирования надосадочной жидкости и добавление в каждую емкость по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов,

- забор после окончания центрифугирования из всех емкостей в шприц клеточной массы аутологичных лимфоцитов, добавление в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и введение содержимого шприца внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд,

- выполнение внутривенного введения пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после оперативного вмешательства,

- выполнение дополнительного повторного внутривенного введения пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Экспериментальные исследования предложенного способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ при своем использовании обеспечивает необходимое и достаточное увеличение количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенного оперативного вмешательства, а также обеспечивает достаточно благоприятное течение травматической болезни пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии. Кроме того, достигнуто обеспечение у пациента необходимого повышения иммуноглобулинов, отсутствует реакция отторжения, а также отсутствуют аллергические реакции организма пациента.

Реализация предложенного способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент А., 47 лет, поступил в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Сочетанная травма. Закрытая черепно-мозговая травма. Сотрясение головного мозга. Закрытый оскольчатый перелом правой бедренной кости со смещением отломков». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 1,0×10 ⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,68×10 ⁹/л.

Пациенту на 7 сутки после травмы выполнили оперативное вмешательство - остеосинтез правой бедренной кости пластиной.

Накануне оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациента из его центральной вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациента отстаивали в течение 100 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 1,5 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 5 раз с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 800 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациенту в кубитальную вену предплечья в течение 70 секунд, причем внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе провели через 2 дня после выполнения оперативного вмешательства. При этом осуществили дополнительное повторное внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе через 12 дней после ее первоначального введения.

Послеоперационный период - гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациента составило 1,3×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,8×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,013×10⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациента составило 1,4×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 1,0×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,018×10⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 14 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациента не наблюдалось. Перелом сросся. Аллергические реакции отсутствуют.

Пример 2. Пациентка К., 65 лет, поступила в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Правосторонний гонартроз 3-4 степени, выраженная вальгусная деформация нижней конечности, анкилоз правого тазобедренного сустава». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 0,95×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,64×10⁹/л.

Пациентке выполнили оперативное вмешательство - надмыщелковая остеотомия бедра и надкостный остеосинтез из расширенного латерального доступа.

До оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациентки из ее центральной вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациентки отстаивали в течение 120 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 1,0 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациентки. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 4 раза с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 1200 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациентке в кубитальную вену предплечья в течение 50 секунд, причем внутривенное введение пациентке клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществили интраоперационно.

Послеоперационный период - гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,25×10⁹ /л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,75×10 ⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,012×10 ⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,4×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило

1,0×10 ⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,017×10 ⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 16 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациентки не наблюдалось. Аллергические реакции отсутствуют.

Пример 3. Пациентка Д., 69 лет, поступила в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Левосторонний гонартроз 3-4 степени, выраженная вальгусная деформация нижней конечности, анкилоз левого тазобедренного сустава». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 0,9×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,60×10⁹/л.

Пациентке выполнили оперативное вмешательство - надмыщелковая остеотомия бедра и надкостный остеосинтез из расширенного латерального доступа.

До оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациентки из ее периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациентки отстаивали в течение 100 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациентки. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 3 раза с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 1000 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациентке в кубитальную вену предплечья в течение 30 секунд, причем внутривенное введение пациентке клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществили за один день до выполнения оперативного вмешательства.

Послеоперационный период - гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,25×10⁹ /л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,78×10 ⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,011×10 ⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,3×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило

0,9×10 ⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,017×10 ⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 14 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациентки не наблюдалось. Аллергические реакции отсутствуют.

Предложенный способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов применен при лечении 40 пациентов с различной патологией и переломами трубчатых костей скелета. Случаев гнойно-воспалительных осложнений у пациентов не наблюдалось. Переломы срослись у всех пациентов. При этом отмечено обеспечение усиления иммунной реактивности организма пациентов. Предложенный способ не вносит чужеродной информации, так как основывается на вызванных собственными клетками реакциях.