новые нитрофенилипритные и нитрофенилазиридиновые спирты и их соответствующие фосфаты и их применение в качестве нацеленных цитотоксических средств

Формула изобретения

1. Фосфатное соединение формулы (I)



где X представляет в любом доступном положении кольца -CONH-;

R представляет низший C_1-6алкил;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH ₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ или -SO₂ Me;

и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Фосфатное соединение формулы (I) по п.1, которое выбрано из соединения, представленного формулами (Ia), (Ib) или (Iс)







где Y представляет

или

и где n равен 1-6

Z представляет -NO ₂ или -SO₂Me; и

где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей.

3. Фосфатное соединение формулы (I) по п.1, которое выбрано из группы, включающей:

2-[[2-[бис(2-бромэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

3-[[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат;

3-[[5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат;

2-[[2-[бис(2-хлорэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

3-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-6-[[[(2-фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-({2-[бис(2-бромпропил)амино]-3,5-динитробензоил}амино)этилдигидрофосфат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-[[2-[бис(2-йодэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-6-({[2-(фосфоноокси)этил]амино}карбонил)амино]этилметансульфонат;

2-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

3-({3-[бис(2-бромэтил)амино]-2,6-динитробензоил}амино)пропилдигидрофосфат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат и

2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат.

4. Способ получения фосфата, представленного общей формулой (I)



где Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH;

R представляет низший С_1-6алкил;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил, или -N(CH₂CH₂W)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ или -SO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей;

включающий стадии

(i) фосфорилирования соединения формулы (II)



где Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂ W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ или -SO₂Me; и

R представляет низший C _1-6алкил.

5. Способ получения соединения формул (Ia), (Ib) или (Iс)







где Y может представлять

или

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂ или -SO₂Me; и

где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей, включающий стадию

фосфорилирования соединения, представленного формулами (IIа), (IIb) или (IIc)







где Y представляет

или

и где n равен 1-6

Z представляет -NO ₂ или -SO₂Me; и

где W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей.

6. Способ противоракового лечения, включающий стадию введения субъекту эффективного количества соединения формулы (I), как определено в п.1.

7. Способ уничтожения гипоксических клеток опухоли, включающий стадию введения субъекту с опухолью эффективного количества соединения формулы (I), как определено в п.1.

8. Фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I), как определено по п.1, и фармацевтичеси приемлемый эксципиент, адъювант, носитель, буфер или стабилизатор.

9. Соединение, выбранное из:

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфоната;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфоната;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфоната и

2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфоната.

10. Соединение 2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат.

11. Фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая терапевтически эффективное количество соединения по п.10 и фармацевтически приемлемый эксципиент, адъювант, носитель, буфер или стабилизатор.

12. Применение эффективного количества соединения формулы (I) по п.10 при изготовлении лекарственного средства для лечения рака у субъекта.

13. Способ противоракового лечения, включающий стадию введения субъекту эффективного количества соединения формулы (I), как определено в п.10.

14. Способ уничтожения гипоксических клеток опухоли, включающий стадию введения субъекту с опухолью эффективного количества соединения формулы (I), как определено в п.10.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новым нитрофенилипритным и нитрофенилазиридиновым спиртам, к их соответствующим фосфатам, к их применению в качестве нацеленных цитотоксических средств; в качестве биовосстановительных препаратов при гипоксических опухолях и к их применению при деструкции клеток, включая направленную на гены ферментно-пролекарственную терапию (GDEPT) и направленную на антитела ферментно-пролекарственную терапию (ADEPT) в сочетании с нитроредуктазными ферментами.

Применение селективных к опухолям пролекарств (относительно неактивных соединений, которые могут быть селективно превращены в более активные соединения in vivo) представляет собой ценную концепцию при терапии рака (см., например, Denny, Eur. J. Med. Chem. (2001) 36, 577).

Например, пролекарство может быть превращено в противоопухолевое средство под влиянием фермента, который может соединяться с моноклональным антителом, которое будет связываться с антигеном, ассоциированным с опухолью. Комбинация такого пролекраства с таким ферментом и конъюгатом моноклонального антитела представляет очень активное клиническое средство. Этот подход к терапии рака, часто именуемый как «направленная на антитела ферментно-пролекарственная терапия» (ADEPT), раскрыт в WO88/07378.

Еще один терапевтический подход, называемый «направленная на вирус ферментно-пролекарственная терапия» (VDEPT), был предложен в качестве способа обработки опухолевых клеток у пациентов, используя пролекарства. Опухолевые клетки нацеливаются вирусным вектором, несущим ген, кодирующий фермент, способный активировать пролекарство. Ген может быть транскрипционно регулируемым тканеспецифическими промоторными или усилительными последовательностями. Вирусный вектор входит в опухолевые клетки и экспрессирует фермент, чтобы пролекарство превратилось в активный препарат внутри опухолевых клеток (Huber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) 88, 8039). Альтернативно, использовались невирусные способы доставки генов. Такие способы включают совместное осаждение фосфата кальция, микроинъекцию, липосомы, прямой захват ДНК и опосредованный рецепторами перенос ДНК. Их обзор представлен в публикации Morgan & French, Annu. Rev. Biochem., 1993, 62; 191. Термин «GDEPT» (направленная на гены ферментно-пролекарственная терапия) используется для включения как вирусных, так и невирусных систем доставки (Denny et al. US 6310237).

4-Нитроароматические соединения восстанавливаются флавопротеидными ферментами как млекопитающих, так и бактерий, которые воздействуют на ступенчатое добавление электронов в количестве до 6. Основной ферментный метаболит представляет собой обычно 4-электронный восстановленный вид (гидроксиламин).

Сообщалось о ряде нитрофенилипритов и нитрофенилазиридинов в качестве пролекарств для применения при направленной на гены ферментно-пролекарственной терапии (GDEPT) в сочетании с ферментами нитроредуктазы. В частности, сообщается, что CB 1954 [5-(азиридин-1-ил)-2,4-динитробензамид] (1) [показано ниже] представляет собой субстрат для аэробной нитроредуктазы NTR (продукт гена nfsB), выделенный из E.coli B (Boland et al., Biochem. Pharmacol. 1991, 41, 867-875; Anlezark et al., Biochem. Pharmacol, 1992, 44, 2289-2295; Parkinson et al., J. Med. Chem. 2000, 43, 3624). Это соединение применялось в качестве пролекарства, применяемого как при ADEPT (Knox et al., Biochem. Pharmacol., 1995, 49, 1641-1647), так и при GDEPT (Bridgewater et al.,. Eur. J. Cancer, 1995, 31A, 2362-2370; Bailey et al., Gene Ther., 1996, 3, 1143-1150; Bailey and Hart, Gene Ther., 1997, 4,80-81; Green et al., Cancer Gene Ther., 1997, 4, 229-238), включая клиническое испытание (Chung-Faye et al., Clin. Cancer Res., 2001, 7, 2662-2668).

Аналогичным образом, динитрофенилиприт SN 23862 (2) представляет собой также субстрат для NTR и проявляет селективную токсичность в отношении линий клеток, которые эксперссируют фермент. Он активируется восстановлением нитрогруппы (Palmer et al., J. Med. Chem., 1995, 38, 1229; Kestell et al., Cancer Chemother. Pharmacol., 2000, 46, 365-374). Производное 4-SO₂Me (3) также представляло собой субстрат (Atwell et al., Anti-Cancer Drug Des., 1996, 11, 553), как и региоизомеры (4) и (5) (Friedlos et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 1270).

Однако соединения этого типа не были очень эффективными в качестве биовосстановительных пролекарств, когда эти соединения активировались в гипоксической опухолевой ткани ферментами эндогенной редуктазы, проявляющими соотношения активности 2-5 в гипоксических условиях относительно гипоксических условий в линии клеток дикого типа АА8, используя клоногенный анализ (Palmer et al., J. Med. Chem. 1996, 39, 2518-2528).

Были описаны некоторые фосфатные аналоги ипритов, предназначенные для солюбилизации соединений. Самым известным является эстрамустинфосфат (эстрацит; 6), который, как было показано, связывается с доменами, связывающими тубулин, на различных белках, связанных с микротрубочками (Moraga et al., Biochem. Biophys. Acta, 1992, 1121, 97-103), и которые, как было показано, активны при запущенном раке молочной железы (Keren-Rosenberg et al., Semin. Oncol., 1997, 24 (Suppl. 3), 26-29), но, как было показано, активируется NTR или гипоксией. Другое исследование также показало, что эстрамустинфосфат является сенсибилизатором к облучению (Kim et al., Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 1994, 29, 555-557). Аналог фенолипритфосфата 7 представляет собой субстрат карбоксипептидазы, которая не активируется в гипоксических условиях (Matsui et al., патент Японии 07082280 А2, 1995), и солюбилизированный иприт 8 был описан в качестве ингибитора фосфатазы, но не было показано, что он активируется в гипоксических условиях (Workman, Chem.-Biol. Interact., 1978, 20, 103-112).

Целью настоящего изобретения является предоставление специфического класса нитрофенилипритов и азиридинов, несущих короткоцепочечные спирты и их соответствующих фосфатов для применения в качестве нацеливаемых цитотоксических средств или биовосстановительных пролекарств, или, по меньшей мере, предоставление общественности полезной альтернативы.

В первом аспекте настоящее изобретение предоставляет новые фосфатные соединения формулы I

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂ CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂, галоген, -CN, -CF ₃ или -SO₂Me;

и их фармацевтически приемлемые соли и производные.

В предпочтительном варианте осуществления фосфатное соединение формулы (I) выбрано из соединения, представленного формулами (Ia), (Ib) или (Ic)

где Y может представлять

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей и производных.

Предпочтительно, фосфатное соединение формулы (I) выбрано из группы, включающей:

2-[[2-[бис(2-бромэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

3-[[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат;

3-[[5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат;

2-[[2-[бис(2-хлорэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

2-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(2-фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-({2-[бис(2-бромпропил)амино]-3,5-динитробензоил}амино)этилдигидрофосфат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-[[2-[бис(2-йодэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат;

2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-6-({[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил)анилино]этилметансульфонат;

2-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

3-({3-[бис(2-бромэтил)амино]-2,6-динитробензоил}амино)пропилдигидрофосфат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат;

2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат и

2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат.

Во втором аспекте настоящее изобретение предоставляет спиртовые соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемые соли и производные, при условии, что когда Z представляет NO₂ и Y представляет -N(CH₂CH₂ Cl)₂, X и R вместе не могут представлять -CONHCH ₂(CHOH)CH₂-, и, кроме того, при условии, что следующие соединения

исключаются.

В предпочтительном варианте осуществления соединение, содержащее спиртовую группу, формулы (II) выбрано из соединения, представленного формулами (IIa), (IIb) или (IIc)

где Y может представлять

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и их фармацевтически приемлемые соли и производные, при условии, что когда Z представляет -NO₂ и Y представляет -N(CH ₂CH₂Cl)₂, X и R вместе не могут представлять -CONHCH₂(CHOH)CH₂-, и, кроме того, при условии, что следующие соединения

исключаются.

Предпочтительно, соединение формулы (II) выбрано из группы, включающей:

N-(2-гидроксиэтил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид;

N-(4-гидроксибутил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид;

N-(5-гидроксипентил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид;

N-(6-гидроксигексил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид;

5-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-4-(метилсульфонил)-2-нитробензамид;

2-[(2-бромэтил)-5-[[(3-гидроксипропил)амино]карбонил]-2,4-динитроанилино]этилметансульфонат;

5-[бис(2-йодэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-2,4-динитробензамид;

2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(4-гидроксибутил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(4-гидроксибутил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(5-гидроксипентил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(5-гидроксипентил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид;

2-[бис(2-бромпропил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид;

2-((2-бромэтил)-2-{[(2-гидроксипропил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат;

2-((2-бромэтил)-2-{[(2-гидроксипропил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат;

2-((2-хлорэтил)-2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат;

2-[бис(2-йодэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид;

2-((2-йодэтил)-2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат;

2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-2,6-динитробензамид;

2-((2-бромэтил)-3-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат;

3-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-2,6-динитробензамид;

2-((2-бромэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат;

3-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(4-гидроксибутил)-2,6-динитробензамид;

2-((2-бромэтил)-3-{[(4-гидроксибутил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат;

2-((2-хлорэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат и

2-((2-йодэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат.

В третьем аспекте изобретения предоставляется способ получения фосфатов, представленных общей формулы (I)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил или -N(CH ₂CH₂W)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

и их фармацевтически приемлемых солей и производных;

включающий стадии

(i) фосфорилирования соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды.

В четвертом аспекте предоставляется способ получения соединений формул (IIa), (IIb) или (IIc)

где Y может представлять

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

где W₁ представляет собой галоген, и W₂ представляет собой -OSO₂ Me;

и их фармацевтически приемлемых солей и производных;

включающий стадию

взаимодействия соединения формул (IIa'), (IIb') или (IIc'), необязательно при нагревании

где Y может представлять

где каждый W'₁ и W' ₂ представляет собой галоген;

с эффективным количеством метансульфоната серебра (AgOMs) в растворителе с получением определенного выше соединения формул (IIa), (IIb) или (IIc).

Следует понимать, что в способе, определенном непосредственно выше, где W'₁ и

W'₂ представляют собой или йод, и/или бром, указанный йод и/или бром может быть частично или полностью замещен -ОSO ₂Me. В ситуации, где каждый или оба из W'₁ и W'₂ представляют собой хлор, указанный хлор является инертным и не может быть замещен -ОSO₂Me.

Предпочтительно, растворитель выбирают из MeCN или другого полярного апротонного растворителя.

В пятом аспекте предоставляется способ получения соединения формул (Ia), (Ib) или (Ic)

где Y может представлять

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей и производных,

включающий стадию

фосфорилирования соединения, представленного формулами (IIa), (IIb) или (IIc)

где Y представляет

и где

n равен 1-6

Z представляет -NO₂, галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me; и

где W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

и его фармацевтически приемлемых солей и производных.

В шестом аспекте предоставляется соединение формулы (I), формулы (Ia), (Ib) или (Ic) или формулы (IIa), (IIb) или (IIc), полученное любым из определенных выше способов получения.

В седьмом аспекте настоящее изобретение предоставляет способ применения в качестве пролекарств, подходящих для

(i) GDEPT (направленной на гены ферментно-пролекарственной терапии) или ADEPT (направленной на антитела ферментно-пролекарственной терапии) в сочетании, по меньшей мере, с одним нитроредуктазным ферментом; или

(ii) применения в качестве одного или нескольких селективных для гипоксии цитотоксинов,

включающий стадию введения соединения формулы (I), как определено выше, или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных;

или их смесь в терапевтически эффективном количестве для нацеливания на опухолевые клетки у субъекта.

Предпочтительно, нитроредуктазный фермент кодируется геном nfsB или E.coli, или ортологичными генами у вида Clostridia.

Предпочтительно, способ включает дополнительную стадию облучения опухолевых клеток.

В восьмом аспекте настоящее изобретение предоставляет способ применения в качестве пролекарств, подходящих для GDEPT (направленной на гены ферментно-пролекарственной терапии) или ADEPT (направленной на антитела ферментно-пролекарственной терапии) в сочетании, по меньшей мере, с одним нитроредуктазным ферментом, в качестве противоракового средства, включающий стадию введения соединения формулы (I), как определено выше, или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных;

или их смесь в терапевтически эффективном количестве для нацеливания на опухолевые клетки у субъекта.

Предпочтительно, нитроредуктазный фермент кодируется геном nfsB или E.coli, или ортологичными генами у вида Clostridia.

Предпочтительно, способ включает дополнительную стадию облучения опухолевых клеток.

Следует понимать, что при ADEPT может быть необходимой подача восстанавливающего ко-фактора, поскольку они могут не присутствовать в значительных концентрациях снаружи клеток. Предусматривается, что синтетический ко-фактор можно использовать для стимуляции активации пролекарства аналогами внутриклеточного фермента. Аналогичная проблема не возникает при GDEPT, потому что в значительных концентрациях имеется несколько внутриклеточных восстанавливающих ко-факторов, таких как аналоги NADH и NADPH.

В девятом аспекте настоящее изобретение предоставляет способ обеспечения противоракового лечения, где соединение формулы (I), как определено выше, вводят в эффективном количестве субъекту.

Предпочтительно, количество указанного соединения составляет примерно от 20% до 100% от максимально переносимой дозы для указанного субъекта.

Предпочтительно, способ включает еще одну стадию воздействия на опухолевые клетки облучением или химиотерапевтическими средствами.

В десятом аспекте настоящего изобретения предоставляется способ деструкции клеток с использованием, по меньшей мере, одного нитроредуктазного фермента, включающий стадию введения соединения формулы (I), как определено выше, или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных; или их смесь в количестве, эффективном для разрушения клеток, где указанные клетки экспрессируют, по меньшей мере, один нитроредуктазный фермент.

Предпочтительно, клетки, которые являются мишенью для деструкции, являются опухолевыми клетками в ткани у субъекта.

Предпочтительно, способ деструкции клеток с использованием, по меньшей мере, одного нитроредуктазного фермента обеспечивается технологией ADEPT или GDEPT.

В одиннадцатом аспекте настоящего изобретения предоставляется фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных, или их смеси и фармацевтически приемлемый эксципиент, адъювант, носитель, буфер или стабилизатор.

Фармацевтически приемлемый эксципиент, адъювант, носитель, буфер или стабилизатор должен быть предпочтительно нетоксичным и не должен мешать эффективности активности ингредиента. Точная природа носителя или другого вещества будет зависеть от пути введения, который может быть пероральным или путем инъекции, такой как кожная, подкожная или внутривенная. Следует понимать, что эти факторы могут быть легко определены специалистом в данной области без ненужного экспериментирования.

Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в форме таблетки, капсулы, порошка или жидкости. Таблетка может включать твердый носитель или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции в целом включают жидкий носитель, такой как воду, вазелиновое масло, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Могут быть включены физиологический солевой раствор, декстроза или другой раствор сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может включать твердый носитель, такой как желатин.

Для внутривенной, кожной или подкожной инъекции активный ингредиент должен быть в форме парентерально приемлемого водного раствора, который свободен от пирогенов и имеет подходящие рН, изотоничность и устойчивость. Специалисты в данной области вполне способны получить соответствующие растворы, используя, например, изотонические носители, такие как раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, молочнокислый раствор Рингера для инъекций. При необходимости могут быть включены консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки.

В двенадцатом аспекте настоящего изобретения предоставляется применение при изготовлении лекарственного средства эффективного количества соединения формулы (I), как определено выше, или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных, или их смеси для применения при (i) GDEPT или (ii) ADEPT в качестве селективного для гипоксии цитотоксина для нацеливания на раковые клетки у нуждающегося в этом субъекта.

В тринадцатом аспекте настоящего изобретения предоставляется применение при изготовлении лекарственного средства эффективного количества соединения формулы (I), как определено выше, или соединения формулы (II)

где

Х представляет в любом доступном положении кольца -CONH-, -SO₂NH-, -O-, -CH₂-, -NHCO- или -NHSO₂-;

Y представляет в любом доступном положении кольца -N-азиридинил,

-N(CH₂CH₂W)₂ или -N(CH₂CHMeW)₂, где каждый W независимо выбран из галогена или -OSO₂Me;

Z представляет в любом доступном положении кольца -NO₂ , галоген, -CN, -CF₃ или -SO₂Me;

R представляет низший С_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, включая гидрокси, амино и их N-оксиды или диалкиламино и их N-оксиды; и их фармацевтически приемлемых солей и производных, или их смеси для применения при терапии для деструкции клеток для нацеливания на раковые клетки у нуждающегося в этом субъекта.

Хотя соединения настоящего изобретения обычно используются для нацеливания на опухолевые клетки или опухолевые ткани у людей, их можно применять для нацеливания на опухолевые клетки или ткани у других субъектов теплокровных животных, таких как другие приматы, сельскохозяйственные животные, такие как крупный рогатый скот, спортивные животные и домашние животные, такие как лошади, собаки и кошки.

Используемый во всем описании термин «терапевтически эффективное количество» следует понимать как количество соединения формулы (I) или формулы (II), как определено выше, или любого из соединений Ia-Ic или IIa-IIc, как определено выше, или их смеси, которое достаточно для проявления благоприятного эффекта на субъект с раковыми клетками. Действительное количество, частота и динамика введения будут зависеть от природы и тяжести подвергаемого лечению заболевания. Назначение лечения находится в сфере ответственности врачей общей практики и других врачей.

Используемый во всем описании термин «галоген» включает хлор, бром или йод.

Следует понимать, что соединения изобретения, определенные выше, можно вводить отдельно или в комбинации с другими видами лечения, в частности, лучевой терапией и цитотоксическими химиотерапевтическими препаратами, или одновременно, или последовательно, в зависимости от подлежащего лечению состояния.

Используемый во всем описании термин «их фармацевтически приемлемые производные и соли» включают соли, производные кислот, образованные из хлористоводородной, серной, фосфорной, уксусной, лимонной, щавелевой, малоновой, салициловой, яблочной, фумаровой, янтарной, аскорбиновой, малеиновой, метансульфоновой, изетионовой кислот и им подобных, и соли, производные оснований, образованные из карбоната натрия и калия, гидроксида натрия и калия, аммиака, триэтиламина, триэтаноламина и им подобных.

Используемый во всем описании термин «деструкция клеток» следует понимать как уничтожение клеток, которые были подвергнуты генной инженерии для экспрессии фермента, такого как нитроредуктаза, введением пролекарства, которое активировано этим ферментом. В результате, деструкцию клеток можно использовать для селективной деструкции определенных клеток или тканей-мишеней посредством, например, специфической ферментативной экспрессии нитроредуктазы, которая специфически экспрессирована тканью и которую затем можно использовать для активации пролекарства в активный метаболит для деструкции определенных клеток или тканей-мишеней (Gusterson et al. Endocrine Related Cancer, 1997, 4, 67-74).

Выражение «по существу минимальный побочный эффект» следует понимать как означающий, что уничтожение примыкающих, не являющихся мишенью клеток является минимальным из-за наличия небольшой или отсутствия диффузии между клетками, являющимися и не являющимися мишенью активированного метаболита, который возникает в результате ферментативной активации соединения формулы (I) или формулы (II), определенного выше, или любого из соединений Ia-Ic или IIa-IIc, определенных выше, или их смеси.

Фармацевтически приемлемые соли формулы (I) включают основные или кислотные соединения формулы (I), которые образуют фармацевтически приемлемые соли и с органическими, и с неорганическими кислотами и/или органическими и неорганическими основаниями. Примерами подходящих кислот для образования солей являются хлористоводородная, серная, фосфорная, уксусная, лимонная, щавелевая, малоновая, салициловая, яблочноая, фумаровая, янтарная, аскорбиновая, малеиновая, метансульфоновая, изетионовая кислоты и им подобные. Примерами подходящих оснований для образования соли являются карбонат натрия и калия, гидроксид натрия и калия, аммиак, триэтиламин, триэтаноламин и им подобные.

Дальнейшие аспекты настоящего изобретения станут очевидными из следующего описания, представленного только в виде примера и со ссылкой на сопровождающие схемы синтеза.

Примеры соединений формулы (I), где Х представляет собой -CONH-, можно получить способами, приведенными на схеме 1, где Z является таким, как определено выше для формулы (I).

В следующих таблицах 1а и 2а представлены физические данные для соединений общей формулы (I) и (II), представляющих их и способных быть полученными способами изобретения.

где Y может представлять

Таблица 1а Репрезентативные примеры исходных спиртов
No	Z	Y	Y (W1,W2)	n	Т.пл.	Формула или ссылка	Анализы
IIa-1	NO2	азиридины		2	192-193	Ссылка 1	C,H,N
IIa-2	NO 2	-	Cl,Cl	2		Ссылка 2
IIa-3	NO 2	-	Cl,Cl	3	90-91	Ссылка 4	C,H,N,Cl
IIa-7	NO2	-	Br,Br	2	151-152	C13H16Br2N4O 6	C,H,N,Br
IIa-7s	SO2Me	-	Br,Br	2	126-127	C14 H19Br2N3O6S	C,H,N
IIa-8	NO 2	-	Br,Br	3	85-86	Ссылка 4	C,H,N,Br
IIa-9	NO2	-	Br,Br	4	123-124	C15H20Br2N4O 6	C,H,N,Br
IIa-10	NO2	-	Br,Br	5	смола	C15 H22Br2N4O6	HRMS
IIa-11	NO2	-	Br,Br	6	смола	C17H24Br2N4O 6	HRMS
IIa-12	NO2	-	Br,OMs	2		Ссылка 2
IIa-13	NO 2	-	Br,OMs	3	смола	C16 H21BrN4O9S	HRMS
IIa=l4	NO 2	-	I,I	2	142-143	C13 H16I2N4O6	C,H,N,I
IIb-1		азиридины		6	189-192	C15 H20N4O6	C,H,N
IIb-2		-	Cl,Cl	2	109-111	Cl3 H16Cl2N4O6	C,H,N
IIb-3	-	-	Cl,Cl	3	89-91	Cl4Hl8Cl2N4O 6	C,H,N,C1
IIb-4	-	-	Cl,Cl	4	смола	C15H20Cl2N4O 6	HRMS
IIb-5	-	-	Cl,Cl	5	смола	C16H22Cl2N4O 6	HRMS
IIb-6	-	-	Cl,Cl	6	смола	C17H24Cl2N4O 6	HRMS
IIb-2m			Cl,OMs	2	смола	C14 H19ClN4O9S	HRMS
IIb-7	-	-	Br,Br	2	105-108	C13H16Br2N4O 6	C,H,N,Br
IIb-7a	-	-	Br,BrA	2	127-130	C15 H20Br2N406	C,H,N
IIb-8	-	-	Br,Br	3	89-94	C14 H18Br2N4O6	C,H,N,Br
IIb-9	-	-	Br,Br	4	смола	C15 H20Br2N406	HRMS
IIb-10	-	-	Br,Br	5	смола	C16H22Br2N4O 6	HRMS
IIb-11	-	-	Br,Br	6	смола	C17H24Br2N4O 6	HRMS
IIb-12	-	-	Br,OMs	2		Ссылка3
IIb-13	-	-	Br,OMs	3	смола	C15 H21BrN4O9S	HRMS
IIb-14	-	-	I,I	2	129-131	C13H16I2N4O6	C,H,N
IIb-15	-	-	I,OMs	2	смола	C14 H19IN4O9S	HRMS
IIc-6			Cl,OMs	3	104-109	C15 H21ClN4O9S	C,H,N
IIc-7	-	-	Br,Br	2	смола	C13 H16Br2N4O6	HRMS
IIc-8	-	-	Br,Br	3	смола	C14H18Br2N4O 6	HRMS
IIc-9	-	-	Br,Br	4	смола	C15H20Br2N4O 6	HRMS
IIc-12	-	-	Br,OMs	2	94-97	C14H18BrN4O9S	C,H,N
IIc-13	-	-	Br,OMs	3	115-117	Ссылка3	C,H,N
IIc-14	-	-	Br,OMs	4	114-117	C16 H23BrN4O9S	C,H,N
IIc-15			I,OMs	3	100-103	C15H21IN4O9S	C,H,N
A -метилиприт

Примечания

Ссылки на известные соединения.

1. Khan AH, Ross WC J. Tumor-growth inhibitory nitrophenylaziridines and related compounds. Structure-activity relations. II. Chem.-Biol. Int., 1971, 4, 11-22.

2. NZ Patent No.240785.

3. Co-pending NZ Application No. 521851.

4. Wilson WR, Pullen SM, Hogg A, Helsby NA, Hicks KO, Denny WA. Quantitation of bystander effects in nitroreductase suicide gene therapy using three-dimensional cell. Cancer Res., 2002, 62, 1425-1432.

Соединения таблицы 1а можно получить общими способами, представленными на схемах 2а-2k и проиллюстрированными ниже в примерах 1-20.

где Y может представлять

Таблица 1b Примеры фосфатов формул Ia-Ic
No	Z	Y (Wi,W2)	n	Т.пл.	Формула	Анализы
Ia-3P	NO2	Cl,Cl	3	195-200	C14H19Cl2N4O 9P	HRMS
Ia-8P	NO2	Br,Br	3	170-174	C14H19Br2N4O 9P	HRMS
Ib-2P	-	Cl,Cl	2	пена	C13 H17Cl2N4O9P	HRMS
Ib-2mP		Cl,OMs	2	132-134	C14 H20ClN4O12PS	C,H,N
Ib-7P	-	Br,Br	2	пена	C13H17Br2N4O 9P	HRMS
Ib-7aP	-	Br,BrA	2	157-161	C15H21Br2N4O 9P	C,H,N
Ib-12P	-	Br,OMs	2	пена	C14 H20BrN4O12PS	HRMS
Ib-14P	-	I,I	2	пена	C13H17I2N4O9 P	HRMS
Ib-15P	-	I,OMs	2	147-150	C14 H20IN4O12PS	C,H,N
Ic-6P		Cl,OMs	3	88-92	C15 H22ClN4O12PS	C,H,N
Ic-8P	-	Br,Br	3	пена	C14H19Br2N4O 9P	HRMS
Ic-12P		Br,OMs	2	93-97	C14 H20BrN4O12PS	C,H,N
Ic-13P	-	Br,OMs	3	пена	C15H22BrN4O12PS	HRMS
Ic-15P		I,OMs	3		C15 H22IN4O12PS
Aальфа-Me

Соединения таблицы 1b можно получить общими способами, представленными на схеме 3 и проиллюстрированными ниже в примерах 26-39.

Схема 2а

Схема 2b

Схема 2с

Схема 2d

Схема 2е

Схема 2f

Схема 2g

Схема 2h

Схема 2i

Схема 2j

Схема 2k

Схема 3

На схеме 3 X, Y, Z и R являются такими, как определено выше для формулы (I) и (II).

Примеры

Изобретение и лучший способ его осуществления проиллюстрированы следующими примерами 1-25 (спирты) и примерами 26-39 (фосфаты).

Пример 1 (схема 2а) N-(3-гидроксипропил)-5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-3)

Суспензию 5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензойной кислоты [Palmer et al., J. Med. Chem., 1994, 37, 2175] (1) (2,50 г, 7,1 ммоль) в SOCl₂ (20 мл), содержащую ДМФА (2 капли) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч, затем концентрируют досуха при пониженном давлении и повторно выпаривают с бензолом. Полученный неочищенный бензоилхлорид растворяют в Me₂CO (50 мл) и охлаждают (-5°С), раствор обрабатывают холодным раствором 3-амино-1-пропанола (1,09 г, 14,5 ммоль) в воде (25 мл). Реакционную смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 5 мин, затем разбавляют водой (25 мл), концентрируют до половины объема и экстрагируют CH₂Cl₂ (2×). Органический экстракт промывают 0,1н. HCl и водой, затем подвергают дальнейшей обработке с получением твердого вещества, которое хроматографируют на силикагеле, элюируя EtOAc, с получением соединения IIa-3 (2,37 г, 82%): т.пл. (EtOAc/i-Pr₂ O) 90-91°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,63 (т, J=5,6 Гц, 1H, CONH), 8,53 (с, 1H, H-3), 7,42 (с, 1H, H-6), 4,46 (т, J=5,1 Гц, 1H, OH), 3,82 (т, J=5,9 Гц, 4H, N(CH₂CH₂Cl)₂), 3,68 (т, J=5,9 Гц, 4H, N(CH₂CH₂Cl)₂), 3,49 (кв, J=6,0 Гц, 2H, CH₂OH), 3,29 (кв, частично невидим, J=5,9 Гц, 2H, CONHCH₂), 1,68 (пент, J=6,7 Гц, 2H, CH₂Cl/2CH₂). Анализ (C₁₄ H₁₈Cl₂N₄O₆) C,H,N,Cl.

Пример 2 (схема 2а) N-(3-гидроксипропил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-8)

Суспензию порошкообразной 5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензойной кислоты (2) (1,10 г, 2,49 ммоль) в бензоле (170 мл) обрабатывают при 20°С оксалилбромидом (1,10 мл, 11,7 ммоль) и ДМФА (2 капли). Смесь перемешивают при 20°С в течение 2 ч, затем концентрируют при пониженном давлении и повторно выпаривают досуха в присутствии бензола в высоком вакууме. Полученный бромангидрид кислоты растворяют в Me₂CO (20 мл) и раствор обрабатывают при -5°С холодным раствором 3-амино-1-пропанола (0,39 г, 5,19 ммоль) в воде (10 мл). Смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 5 мин, затем разбавляют водой и экстрагируют EtOAc (2×). Органический экстракт подвергают дальнейшей обработке и полученный остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя EtOAc, с получением соединения IIa-8 (1,06 г, 85%): т.пл. (EtOAc/i-Pr ₂O) 85-86°C; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,64 (т, J=5,6 Гц, 1H, CONH), 8,53 (с, 1H, H-3), 7,41 (с, 1H, H-6), 3,77-3,64 (м, 8H, N(CH₂CH₂ Cl)₂), 4,46 (уш.с,, 1H, OH), 3,49 (т, J=6,3 Гц, 2H, CH₂OH), 3,33-3,25 (м, частично невидим, 2H, CONHCH ₂), 1,68 (пент, J=6,72 Гц, 2H, CH₂CH₂ CH₂). Анализ

(C₁₄H ₁₈Br₂N₄O₆) C,H,N,Br.

Пример 3 (схема 2а) N-(2-гидроксиэтил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-7)

Аналогичная реакция бромангидрида кислоты примера 2 с 2-аминоэтанолом дает соединение IIa-7 (0,78 г, 46%): т.пл. (MeOH/EtOAc/петролейный эфир) 151-152°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,73 (т, J=5,7 Гц, 1H, CONH), 8,53 (с, 1H, H-3), 7,43 (с, 1H, H-6), 4,76 (т, J=5,6 Гц, 1H, OH), 3,77-3,64 (м, 8H, N(CH ₂CH₂Br)₂), 3,53 (кв, J=6,6 Гц, 2H, CH₂OH), 3,31 (кв, частично невидим, J=6,1 Гц, 2H, CONHCH₂). Анализ (C₁₃H₁₆Br ₂N₄O₆) C,H,N,Br.

Пример 4 (схема 2а) N-(4-гидроксибутил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-9)

Аналогичная реакция бромангидрида кислоты примера 2 с 4-амино-1-бутанолом в холодном Me₂ CO с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании EtOAc дает соединение IIa-9 (69%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/iPr₂O) 123-124°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,62 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,53 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 4,39 (т, J=5,1 Гц, 1H), 3,78-3,64 (м, 8H), 3,47-3,40 (м, 2H), 3,27-3,20 (м, 2H), 1,61-1,44 (м, 4H). Анализ (C₁₅H₂₀ Br₂N₄O₆) C,H,N,Br.

Пример 5 (схема 2а) N-(5-гидроксифенил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-10)

Аналогичная реакция бромангидрида кислоты примера 2 с 5-амино-1-пентанолом в холодном Me₂ CO с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании EtOAc дает соединение IIa-10 (66%) в виде желтой пены: ¹ H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,62 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,53 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 4,34 (т, J=5,1 Гц, 1H), 3,79-3,64 (м, 8H), 3,44-3,37 (м, 2H), 3,26-3,18 (м, 2H), 1,59-1,29 (м, 4H). HRMS (FAB) Вычислено для C₁₆ H₂₃ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 524,9984, найдено 524,9964.

Пример 6 (схема 2а) N-(6-гидроксигексил)-5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензамид (IIa-11)

Аналогичная реакция бромангидрида кислоты примера 2 с 6-амино-1-гексанолом в холодном Me₂ CO с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании EtOAc дает соединение IIa-11 (72%) в виде желтой пены: ¹ H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,61 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,53 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 4,31 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,79-3,64 (м, 8H), 3,43-3,36 (м, 2H), 3,27-3,19 (м, 2H), 1,58-1,26 (м, 4H). HRMS (FAB) Вычислено для C₁₇ H₂₅ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 539,0141, найдено 539,0137.

Пример 7 (схема 2b) 5-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-4-(метилсульфонил)-2-нитробензамид (IIa-7s)

5-фтор-4-(метилсульфонил)-2-нитробензойную кислоту [Atwell et al., ACDD, 1996, 11, 553] (3) нагревают в избытке SOCl₂/каталитического ДМФА с получением хлорангидрида кислоты, который подвергают взаимодействию с сухим MeOH с получением 5-фтор-4-(метилсульфонил)-2-нитробензоата (4): т.пл. (EtOAc/гексан) 134-135°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,49 (д, J=5,9 Гц, 1H), 8,14 (д, J=9,3 Гц, 1H), 3,92 (с, 3H), 3,46 (с, 3H). Анализ (C₉H₈FNO ₆S) C,H,N.

Смесь соединения 4 (1,48 г, 5,34 ммоль) и диэтаноламина (1,40 г, 13,3 ммоль) в DMA (6 мл) перемешивают при 30°С в течение 1 ч и затем разбавляют EtOAc (60 мл). Раствор промывают насыщенным раствором соли (2×) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюируя EtOAc/MeOH с последующей перекристаллизацией из EtOAc/iPr₂O с получением метил-5-[бис(2-гидроксиэтил)амино]-4-(метилсульфонил)-2-нитробензоата (5) (1,41 г, 73%): т.пл. 99-100°C; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,56 (с, 1H), 7,73 (с, 1H), 4,62 (т, J=4,9 Гц, 2H), 3,89 (с, 3H), 3,59-3,49 (м, 8H), 3,45 (с, 3H). Анализ (C₁₃ H₁₈N₂O₈S) C,H,N.

Раствор соединения 5 (1,48 г, 4,08 ммоль) в сухом пиридине (15 мл) обрабатывают по каплям при 0°С MsCl (0,80 мл, 10,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч, затем выливают в 10% водный NaBr. Полученный неочищенный димесилат собирают, тщательно промывают водой, сушат, растворяют в ДМФА (15 мл) и перемешивают с NaBr (21,6 г, 25 ммоль) при 70°С в течение 1,5 ч. Охлажденную смесь выливают в воду и полученное твердое вещество очищают хроматографией на силикагеле, элюируя CH₂Cl₂, затем перекристаллизовывают из CH₂Cl₂/iPr₂O с получением метил-5-[бис(2-бромэтил)амино]-4-(метилсульфонил)-2-нитробензоата (6) (1,47 г, 74%): т.пл. 161-162°C; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,58 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 3,90 (с, 3H), 3,82 (т, J=7,0 Гц, 4H), 3,63 (т, J=6,9 Гц, 4H), 3,48 (с, 3H). Анализ (C ₁₃H₁₆Br₂O₆S) C,H,N.

Раствор соединения 6 (1,00 г, 2,05 ммоль) в смеси диоксан/MeOH (1:1, 20 мл) обрабатывают при 10°С 4N водным КОН (5 мл) и перемешивают при 10°С в течение 45 мин. Смесь подкисляют до рН 2 1н. водным HBr, концентрируют до маленького объема при пониженном давлении и затем разбавляют насыщенным водным NaBr (20 мл). Полученное полутвердое вещество выделяют и кристаллизуют дважды из MeOH/H₂O с получением 5-[бис(2-бромэтил)амино]-4-(метилсульфонил)-2-нитробензойной кислоты (7) (0,70 г, 72 т.пл. 174-176°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,50 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 3,79 (т, J=7,0 Гц, 4H), 3,62 (т, J=7,0 Гц, 4H), 3,48 (с, 3H). Анализ (C₁₂H ₁₄Br₂N₂O₆S) C,H,N.

Тонко измельченную суспензию соединения 7 (260 мг, 0,55 ммоль) в сухом бензоле (50 мл) обрабатывают (COBr)₂ (2,13 мл, 0,20 ммоль) и каталитическим ДМФА. Смесь перемешивают в течение 2 ч, затем концентрируют досуха при пониженном давлении и повторно выпаривают с бензолом в высоком вакууме. Полученный неочищенный бромангидрид кислоты растворяют в Me₂CO (10 мл) и обрабатывают при -5°С холодным раствором 2-аминоэтанола (101 мг, 1,65 ммоль) в воде (5 мл). Смесь перемешивают при 0°С в течение 5 мин, затем подкисляют до рН 4 1н. водным HBr и концентрируют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя EtOAc, с получением соединения IIa-7s (222 мг, 78%): т.пл. (EtOAc/iPr₂O) 126-127°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,75 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,51 (с, 1H), 7,68 (с, 1H), 4,79 (т, J=5,4 Гц, 1H), 3,76 (т, J=7,1 Гц, 4H), 3,62 (т, J=7,0 Гц, 4H), 3,54 (кв, J=5,9 Гц, 2H), 3,48 (с, 3H), 3,31 (после замены D₂O, т, J=6,0 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для

C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br₂N₃O₆S (MH⁺) m/Z 515,9440; найдено 515,9425.

Пример 8 (Схема 2с) 2[(2-бромэтил)-5-[[(3-гидроксипропил)амино]карбонил]-2,4-динитроанилино]этилметансульфонат (IIa-13) и 5-[бис(2-йодэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-2,4-динитробензамид (IIa-14)

5-(бис{2-[(метилсульфонил)окси]этил}амино)-2,4-динитробензойную кислоту [Способ получения этого соединения раскрыт в одновременно поданной заявке на патент Новой Зеландии № 521851] (9) нагревают при кипячении с обратным холодильником в избытке SOCl₂ (60 мл) и каталитическом ДМФА в течение 1 ч. Выпаривание при пониженном давлении с последующей азеотропной перегонкой с бензолом дает неочищенный хлорангидрид кислоты. Его растворяют в сухом Me₂CO и обрабатывают при 0°С 3-амино-1-пропанолом в течение 5 мин. Смесь подкисляют до рН 2-3 0,2 н. HCl, концентрируют до половины объема и затем добавляют твердый NaBr с последующей экстракцией EtOAc (2×). Выпаривание и хроматография остатка на силикагеле при элюировании EtOAc/MeOH (9:1) дает 2-(5-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (8) (68%) в виде желтой смолы; ¹H ЯМР

[(CD₃)₂SO] 8,54 (т, J=5,7 Гц, 1H), 8,53 (с, 1H), 7,45 (с, 1H), 4,43 (т, J=5,1 Гц, 1H), 4,33 (т, J=5,2 Гц, 4H), 3,69 (т, J=5,2 Гц, 4H), 3,57 (кв, J=5,9 Гц, 2H), 3,26 (после замены D₂ O, т, J=7,0 Гц, 2H), 3,12 (с, 6H), 1,66 (пент, J=6,7 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₆H₂₅N₄ O₁2S (MH⁺) m/z 529,0910; найдено 529:0904.

Раствор соединения 8 в ДМФА обрабатывают в LiBr (1,4 эквивалента), подвергают дальнейшей обработке, как указано выше, и продукт хроматографируют на силикагеле. Элюирование EtOAc дает небольшое количество дибромиприта, тогда как элюирование смесью EtOAc/MeOH (19:1) дает соединение IIa-13 (31%) в виде желтой смолы: ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,60 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,54 (с, 1H), 7,44 (с, 1H), 4,45 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,33 (т, J=5,1 Гц, 2H), 3,74 (т, J=5,2 Гц, 2H), 3,72-3,66 (м, 4H), 3,49 (кв, J=5,9 Гц, 2H), 3,27 (после замены D₂O, т, J=7,0 Гц, 2H), 3,14 (с, 3H), 1,68 (пент, J=6,7 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₅H₂₂ ⁷⁹BrN₄O₉S (MH⁺ ) m/z 515,0270; найдено 515,0283.

Аналогичная обработка хлорангидрида кислоты 9 (активация (COCl₂ /ДМФА) с 2-аминоэтанолом дает 2-(5-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (10). Перемешиваемую смесь соединения 10 (1,42 г, 2,76 ммоль) и NaI (3,3 г, 22 ммоль) в сухом MeCN (45 мл) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток распределяют между EtOAc и водой и органический слой промывают водой и выпаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя CH₂Cl₂/EtOAc (1:4), с последующей перекристаллизацией из MeOH/EtOAc/i-Pr₂ O с получением соединения IIa-14 (2,9 г, 81%): т.пл. 142-143°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,73 (т, J=5,7 Гц, 1H), 8,53 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 4,76 (т, J=5,5 Гц, 1H), 3,68 (т, J=6,9 Гц, 4H), 3,57-3,49 (м, 2H), 3,39 (т, J=6,9 Гц, 4H), 3,34-3,26 (м, частично невидим, 2H). Анализ (C₁₃H₁₆I₂N₄ O₆) C,H,N.

Пример 9. 2-(азиридин-1-ил)-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид (IIa-1)

Раствор 2-хлор-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамида (16) [получение см. пример 14 ниже] (118 мг, 0,34 ммоль) и Et ₃N (200 мг) в EtOAc (200 мл) обрабатывают азиридином (100 мг) при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь разбавляют EtOAc и промывают 3 раза водой, затем сушат, концентрируют при пониженном давлении до примерно 20 мл, желтое твердое вещество собирают и получают 101 мг продукта (84%); ¹H ЯМР Р[(CD₃)₂SO] 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,63 (м, 1H), 8,29 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,31 (м, 1H), 3,39 (м, 2H), 3,25 (м, 2H), 2,37 (с, 4H), 1,56 (м, 2H), 1,43 (м, 2H), 1,33 (м, 4H). Анализ (C₁₅ H₂₀N₄O₆) C,H,N.

Пример 10 (Схема 2d) 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид (IIb-2) и 2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид (IIb-7)

2-хлор-3,5-динитробензойную кислоту (1) (18 г, 81 ммоль) обрабатывают SOCl₂ (250 мл), содержащим 1 каплю ДМФА и нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 6 ч. Выпаривание реагента с последующей азеотропной перегонкой с бензолом дает неочищенный хлорангидрид кислоты, который растворяют в ТГФ (200 мл) и добавляют по каплям к раствору, приготовленному из 25 мл 2-аминоэтанола в ТГФ (400 мл) и охлаждают на бане сухой лед-ацетон. После перемешивания в течение 20 мин реакционную смесь подкисляют до рН 4-5 1н. HCl, большую часть растворителя выпаривают и остаток распределяют между водой (250 мл) и EtOAc (300 мл). Водную фазу экстрагируют EtOAc и объединенные органические фазы промывают соответственно насыщенным NaHCO₃, 1н. HCl и насыщенным раствором соли, затем концентрируют с получением 2-хлор-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамида (2) (21,34 г, 91%) в виде белого твердого вещества: т.пл. (EtOAc) 159-160°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,99 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-4), 8,86 (м, 1H, CONH), 8,56 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-6), 4,83 (м, 1H, OH), 3,54 (м, 4H). Анализ (C₉H₈ClN₃O₆) C,H,N.

Раствор соединения 12 (1,52 г, 5,3 ммоль) и Et ₃N (4 мл) в п-диоксане (60 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-бис(2-хлорэтил)амина (3,0 г, 16,5 ммоль) при 50°С в течение 24 ч. Смесь выливают в воду и экстрагируют EtOAc с получением неочищенного продукта, который хроматографируют на силикагеле. Элюирование смесью EtOAc/петролейный эфир (4:1) и концентрирование элюата при пониженном давлении дает маслянистый остаток, который растворяют в минимальном количестве EtOAc. Петролейный эфир медленно добавляют до начала образования мути и раствор оставляют на ночь для осаждения 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамида (IIb-2) (2,07 г, 100%) в виде желтых кристаллов: т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 109-111°С; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,73 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-4), 8,72 (м, 1H, CONH), 8,34 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-6), 4,83 (м, 1H, OH), 3,72 (м, 4H, 2×CH ₂Cl), 3,55 (м, 2H), 3,42 (м, 4H, 2×CH₂N), 3,34 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,3, 145,8, 145,3, 141,0, 136,3, 127,5, 122,1, 59,1, 54,1, 42,1, 41,5. HRMS (FAB) [MH⁺] Вычислено для C ₁₃H₁₇ ³⁵Cl₂N₄O₆ m/z 395,0525, Найдено 395,0525.

Раствор соединения IIb-2 (1,20 г, 3,0 ммоль) и LiBr (5,0 г, 58 ммоль) в 3-метил-2-бутаноне (20 мл) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 6 ч, затем охлаждают и выливают в воду. Экстракция EtOAc дает неочищенный продукт (чистота <95%), который повторно обрабатывают LiBr (5,0 г, 58 ммоль) в 3-метил-2-бутаноне в течение еще 4 ч, затем подвергают дальнейшей обработке и хроматографируют на силикагеле, элюируя смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0), с получением соединения IIb-7 (1,39 г, 95%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 105-108°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,73 (м, 1H, CONH), 8,34 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,83 (м, 1H, OH), 3,59-3,29 (м, 12H); ¹³C ЯМР 165,3, 145,4, 145,3, 141,1, 136,5, 127,4, 122,1, 59,3, 53,9, 42,1, 30,0. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₃H ₁₇ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 482,9515, найдено 482,9492. Анализ

(C₁₃H₁₆Br₂N₄O ₆) H,N,Br; C: найдено, 32,9; вычислено 32,3%.

Пример 11 (Схема 2d) 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-3,5-динитробензамид (IIb-3) и 2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-3,5-динитробензамид (IIb-8)

Реакция хлорангидрида кислоты 11 (17 г) с 3-аминопропанолом (7,5 г) в Me₂CO (120 мл) при 0°С, как описано выше, дает 2-хлор-N-(3-гидроксипропил)-3,5-динитробензамид (13) (5,06 г, 26%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 120-121°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,99 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-4), 8,79 (м, 1H, CONH), 8,51 (д, J=2,6 Гц, 1H, H-6), 4,50 (м, 1H, OH), 3,49 (м, 2H), 3,32 (м, 2H), 1,70 (м, 2H). Анализ (C₁₀H₁₀ClN ₃J₆) C,H,N.

Раствор соединения 13 (1,39 г, 4,58 ммоль) и Et₃N (4 мл) в п-диоксане (60 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-бис(2-хлорэтил)амина (2,9 г, 16,0 ммоль) при 50°С в течение 24 ч. Последующая обработка, как описано выше, дает соединение IIb-3 (1,84 г, 100%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 89-91°С; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,71 (м, 1H, CONH), 8,30 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,52 (м, 1H, OH), 3,71 (м, 4H, 2×CH ₂Cl), 3,50 (м, 2H), 3,42 (м, 4H, 2×CH₂N), 3,32 (м, 2H), 1,71 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,1, 145,7, 145,5, 141,0, 136,4, 127,3, 122,1, 58,4, 54,1, 41,5, 36,7, 31,8. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₄ H₁₉ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 409,0682. Найдено; 409,0678.

Обработка соединения IIb-3 LiBr в 3-метил-2-бутаноне дважды, как описано выше, дает соединение IIb-8 (выход 74%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 89-94°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,72 (м, 1H, CONH), 8,30 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 3,77-3,44 (м, 12H), 1,70 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,1, 145,5, 145,3, 141,2, 136,5, 127,3, 122,1, 58,4, 54,0, 36,7, 31,8, 29,9. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₄ H₁₉ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 496,9671, Найдено; 496,9658.

Пример 12 (Схема 2d) 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(4-гидроксибутил)-3,5-динитробензамид (IIb-4) и 2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксибутил)-3,5-динитробензамид (IIb-9)

Реакция хлорангидрида кислоты 11 (2,65 г, 10 ммоль) с 4-аминобутанолом (1,9 г), как описано выше, с последующим подкислением до рН 4-5 1н. HCl и выпаривание большей части растворителя дает остаток. Его распределяют между водой (50 мл) и EtOAc (100 мл). Водную фазу экстрагируют EtOAc и объединенную органическую фазу промывают соответственно насыщенным NaHCO ₃, 1н. HCl и насыщенным раствором соли, затем концентрируют с получением 2-хлор-N-(4-гидроксибутил)-3,5-динитробензамида (14) (1,11 г, 35%): т.пл. (EtOAc) 121-124°C; ¹ H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,98 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,79 (м, 1H), 8,52 (д, J=2,7 Гц, 1H), 4,43 (м, 1H), 3,43 (м, 2H), 3,26 (м, 2H), 1,54 (м, 4H); ¹³C ЯМР 162,6, 148,4, 145,9, 140,4, 128,2, 125,8, 120,4, 60,2, 39,1, 29,8, 25,3. Анализ (C₁₁H₁₂ClN ₃O₆) C,H,N.

Раствор соединения 14 (0,75 г, 2,3 ммоль) и Et₃N (2 мл) в п-диоксане (30 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-бис(2-хлорэтил)амина (1,5 г, 8,0 ммоль) при 50°С в течение 24 ч. Смесь выливают в воду и экстрагируют EtOAc с получением неочищенного продукта, который хроматографируют на силикагеле. Элюирование смесью EtOAc/петролейный эфир (4:1) дает соединение IIb-4 (0,99 г, 100%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,71 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,69 (м, 1H), 8,27 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,37 (м, 1H), 3,70 (м, 4H), 3,38 (м, 6H), 3,25 (м, 2H), 1,56 (м, 2H), 1,47 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,0, 145,7, 145,5, 141,0, 136,4, 127,2, 122,0, 60,2, 54,2, 41,5, 39,2, 29,8, 25,2. HRMS (FAB) Вычислено для C ₁₅H₂₁ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 423,0838, Найдено; 423,0847.

Раствор соединения IIb-4 (0,96 г, 3,04 ммоль) и LiBr (5 г) в 3-метил-2-бутаноне (15 мл) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 6 ч, затем охлаждают и выливают в воду. Экстракция EtOAc дает неочищенный продукт (чистота <95%), который повторно обрабатывают LiBr (5 г) в 3-метил-2-бутаноне в течение еще 4 ч, затем подвергают дальнейшей обработке и хроматографируют на силикагеле, элюируя смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 3:1), с получением соединения IIb-9 (1,01 г, 87%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,72 (м, 1H), 8,28 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,60-3,26 (м, 12H), 1,58 (м, 2H), 1,49 (м, 2H); ¹³ C ЯМР 165,0, 145,6, 145,2, 141,2, 136,5, 127,2, 122,0, 60,2, 54,1, 39,2, 29,9, 29,8, 25,2. HRMS (FAB) Вычислено для C ₁₅H₂₁ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 510,9828, Найдено; 510,9832.

Пример 13 (Схема 2d) 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(5-гидроксипентил)-3,5-динитробензамид (IIb-5) и 2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(5-гидроксипентил)-3,5-динитробензамид (IIb-10)

Аналогичная реакция хлорангидрида кислоты 11 с 5-аминопентанолом, как описано выше, дает 2-хлор-N-(5-гидроксипентил)-3,5-динитробензамид (15), 1,3 (39%): т.пл. (EtOAc) 105-108°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,98 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,79 (м, 1H), 8,50 (д, J=2,7 Гц, 1H), 4,35 (м, 1H), 3,39 (м, 2H), 3,26 (м, 2H), 1,54 (м, 2H), 1,44 (м, 2H), 1,36 (м, 2H); ¹³C ЯМР 162,7, 148,4, 145,9, 140,4, 128,2, 125,8, 120,4, 60,5, 39,1, 32,0, 28,4, 22,8. Анализ (C₁₂H₁₄ClN ₃O₆) C,H,N.

Раствор соединения 15 (0,63 г, 2,3 ммоль) и Et₃N (2 мл) в п-диоксане (30 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-бис(2-хлорэтил)амина (1,5 г, 8,0 ммоль) при 50°С в течение 24 ч. Смесь выливают в воду и экстрагируют EtOAc с получением неочищенного продукта, который хроматографируют на силикагеле. Элюирование смесью EtOAc/петролейный эфир (4:1) дает соединение IIb-5 (0,82 г, 100%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,73 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,69 (м, 1H), 8,28 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,32 (м, 1H), 3,70 (м, 4H), 3,40 (м, 6H), 3,25 (м, 2H), 1,55 (м, 2H), 1,47 (м, 2H), 1,37 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,0, 145,7, 145,5, 141,0, 136,4, 127,2, 122,0, 60,5, 54,2, 41,5, 39,3, 32,0, 28,3, 22,9. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₆H₂₃ ³⁵ClN₄O₆ [M+H⁺ ] m/z 437,0995, Найдено; 437,0991.

Аналогичная реакция соединения IIb-5 с LiBr дает соединение IIb-10 (1,35 г, 86%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,74 (д, 7=2,8 Гц, 1H), 8,71 (м, 1H), 8,28 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,60-3,26 (м, 12H), 1,55 (м, 2H), 1,48 (м, 2H), 1,37 (м, 2H); ^l3C ЯМР 165,0, 145,6, 145,2, 141,2, 136,5, 127,2, 122,0, 60,5, 54,1, 39,3, 32,0, 29,8, 28,4, 22,9. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₆H₂₃ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 524,9984. Найдено; 524,9975.

Пример 14 (Схема 2d) 2-[бис(2-хлорэтил)амино]-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид (IIb-6) и 2-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид (IIb-11)

Аналогичная реакция хлорангидрида кислоты 11 с 6-аминогексанолом, как описано выше, дает 2-хлор-N-(6-гидроксигексил)-3,5-динитробензамид (16), 0,9 г (26%): т.пл. (EtOAc) 88-91°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,98 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,78 (м, 1H), 8,49 (д, J=2,7 Гц, 1H), 4,32 (м, 1H), 3,39 (м, 2H), 3,26 (м, 2H), 1,54 (м, 2H), 1,44 (м, 2H), 1,34 (м, 4H); ¹³C ЯМР 162,7, 148,4, 145,9, 140,4, 128,2, 125,8, 120,4, 60,5, 39,1, 32,3, 28,6, 26,2, 25,1. Анализ (C₁₃H₁₆ ClN₃O₆) C,H,N.

Раствор соединения 16 (0,67 г, 2,5 ммоль) и Et₃N (2 мл) в п-диоксане (30 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-бис(2-хлорэтил)амина (1,5 г, 8,0 ммоль) при 50°С в течение 24 ч. Смесь выливают в воду и экстрагируют EtOAc с получением неочищенного продукта, который хроматографируют на силикагеле. Элюирование смесью EtOAc/петролейный эфир (4:1) дает соединение IIb-6 (0,87 г, 100%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,73 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,70 (м, 1H), 8,28 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,31 (м, 1H), 3,70 (м, 4H), 3,38 (м, 6H), 3,25 (м, 2H), 1,54 (м, 2H), 1,40 (м, 2H), 1,32 (м, 4H); ¹³C ЯМР 165,0, 145,7, 145,6, 141,0, 136,4, 127,2, 122,0, 60,5, 54,2, 41,5, 39,2, 32,3, 28,5, 26,3, 25,1. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₇H₂₅ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 451,1151. Найдено; 451,1154.

Аналогичная реакция соединения IIb-6 с LiBr дает соединение IIb-11 (0,96 г, 81%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,70 (м, 1H), 8,28 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,60-3,26 (м, 12H), 1,54 (м, 2H), 1,43 (м, 2H), 1,32 (м, 4H); ¹³C ЯМР 165,0, 145,6, 145,2, 141,2, 136,5, 127,2, 122,0, 60,6, 54,1, 39,2, 32,4, 29,9, 28,5, 26,3, 25,1. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₇H₂₅ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 539,0141, Найдено; 539,0135.

Пример 15 (Схема 2е) 2-[бис(2-бромпропил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид (IIb-7а)

Реакция 2-хлор-3,5-динитро-N-[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил]бензамида (17) (1,02 г) [Способ получения см. в одновременно поданной заявке на патент Новой Зеландии № 521851] с диизопропаноламином (0,8 г), как описано выше, дает 2-[бис(2-гидроксипропанил)амино]-3,5-динитро-N-[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил]бензамид (18) (1,29 г, 100%) в виде желтой пены: ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 9,22 (ушир., 1H), 8,66 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,29 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,99 (м, 1H), 4,85 (ушир., 1H), 4,62 (ушир., 1H), 3,94 (м, 2H), 3,77 (м, 2H), 3,53 (м, 4H), 3,26 (м, 2H), 1,48 (м, 10H), 0,98 (м, 6H); ¹³C ЯМР 166,5, 147,8, 142,4, 138,2, 132,6, 128,8, 123,8, 98,1, 64,8, 63,5, 61,5, 60,1, 30,1, 25,0, 20,5, 20,2, 19,1. HRMS (FAB) Вычислено для C₂₀H₃₁N₄O ₉ [M+H⁺] m/z 471,2091. Найдено; 471,2089.

Реакция соединения 18 с MsCl, как описано выше, дает 1-метил-2-[{2-[(метилсульфонил}-2,4-динитро-6-({[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этил]амино}карбонил)анилино]

этилметансульфонат (19) (2,52 г, 100%) в виде желтой пены, которое используют непосредственно для следующей стадии.

Раствор соединения 19 (2,52 г, 4,03 ммоль) в ТГФ (15 мл) обрабатывают 1н. HCl (100 мл) и раствор перемешивают при 20°С в течение 1 ч, затем разбавляют водой (100 мл), нейтрализуют насыщенным NaHCO₃ и экстрагируют EtOAc (3×80 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором соли и сушат, растворитель выпаривают и остаток очищают, хроматографируют на силикагеле, элюируя смесью EtOAc/MeOH (100:1), с получением 2-(2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]пропил}-4,6-динитроанилино)-1-метилэтилметансульфоната (20) (0,80 г, 37%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,94 (м, 1H), 8,72 (м, 1H), 8,35 (м, 1H), 4,92 (м, 2H), 3,56 (м, 2H), 3,30 (м, 6H), 3,16 (с, 6H), 1,32 (м, 6H); ¹³C ЯМР 165,9, 145,8, 143,4, 139,4, 133,6, 128,0, 123,1, 76,3, 59,2, 57,3, 42,2, 37,7, 18,6. HRMS (FAB) Вычислено для C ₁₇H₂₇N₄O₁₂S₂ [M+H⁺] m/z 543,1067. Найдено; 543,1074.

Обработка соединения 20 (0,52 г, 0,96 ммоль) LiBr (0,5 г, 5,8 ммоль) в EtOAc (50 мл) при 60°С в течение 3 ч и хроматография продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 2:1 до 1:0) дает соединение IIb-7а (0,31 г, 62%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 127-130°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,91 (м, 1H, CONH), 8,70 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-4), 8,32 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-6), 4,80 (м, 1H), 4,42 (м, 2H), 3,55 (м, 4H), 1,62 (м, 6H); ¹³C ЯМР 165,8, 144,8, 143,5, 139,6, 133,6, 128,0, 122,9, 60,6, 59,2, 47,9, 42,2, 23,4. Анализ (C₁₅H₂₀Br ₂N₄O₆) C,H,N.

Пример 16 (схема 2f) 2-((2-бромэтил)-2-{[(2-гидроксипропил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат (IIb-13)

Раствор соединения 13 (1,22 г, 4,0 ммоль) в 50 мл CH₂Cl₂ охлаждают на ледяной бане и добавляют 3,4-дигидро-2Н-пиран (1,0 мл) и п-толуолсульфоновую кислоту (0,1 г). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч, затем концентрируют при пониженном давлении. Хроматография остатка на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:2 до 2:1) дает 2-хлор-3,5-динитро-N-[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)пропил]бензамид (21) (1,45 г, 94%) в виде бледно-желтого масла; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,99 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,81 (м, 1H, CONH), 8,51 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,57 (м, 1H), 3,72 (м, 2H), 3,46-3,25 (м, 4H), 1,82-1,44 (м, 8H). ¹³C ЯМР 162,7, 148,4, 145,9, 140,3, 128,2, 125,8, 120,5, 98,0, 64,2, 61,3, 36,5, 30,2, 28,9, 24,9, 19,1. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₅H₁₉ ³⁵ClN₃O₇ [M+H⁺ ] m/z 388,0912. Найдено; 388,0915.

Реакция соединения 21 (1,45 г, 3,75 ммоль) с диэтаноламином (1,67 г), как описано выше, дает 2-[бис(2-гидроксиэтил)амино]-3,5-динитро-N-[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)пропил]бензамид (22) (1,62 г, 95%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,96 (м, 1H, CONH), 8,66 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-4), 8,31 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-6), 4,95 (м, 2H), 4,56 (м, 1H), 3,79-3,16 (м, 14H), 1,80-1,45 (м, 8H); ¹³C ЯМР 166,2, 148,1, 143,6, 139,3, 133,8, 128,9, 123,8, 98,5, 64,8, 61,7, 58,5, 54,6, 37,3, 30,6, 29,2, 25,4, 19,6. HRMS (FAB) Вычислено для С₁₉H₂₉N₄O ₆ [M+H*] m/z 457,1935. Найдено; 457,1939.

Реакция соединения 22 (1,62 г, 3,55 ммоль) с MsCl (2 мл), как описано выше, дает 2-[{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-4,6-динитро-6-({[2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)пропил]амино}карбонил)анилино]этилметансульфонат (23) (2,17 г, 100%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,71 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,71 (м, 1H), 8,31 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,26 (м, 4H), 3,71-3,37 (м, 10H), 3,13 (с, 6H), 3,10 (м, 2H), 1,82-1,43 (м, 8H); ¹³C ЯМР 165,1, 146,3, 145,4, 140,9, 135,9, 127,4, 122,2, 98,0, 67,2, 64,3, 51,4, 45,7, 36,5, 30,2, 28,7, 24,9, 19,1, 8,5. HRMS (FAB) Вычислено для C₂₁H₃₃N₄ O₁₃S₂ [M+H⁺] m/z 613,1486. Найдено; 613,1481.

Раствор соединения 23 (2,95 г, 3,55 ммоль) в ТГФ (120 мл) обрабатывают 1н. HCl (80 мл), и раствор перемешивают при 20°С в течение 1 ч, затем разбавляют водой (100 мл), нейтрализуют насыщенным NaHCO₃ и экстрагируют EtOAc (3×80 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором соли и сушат, растворитель выпаривают и остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью EtOAc/MeOH (100:1), с получением 2-(2-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат (24) (1,4 г, 75%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 130-133°С; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,74 (4-7-2,8 Гц, 1H), 8,72 (м, 1H), 8,32 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,29 (м, 4H), 3,47 (м, 8H), 3,14 (с, 6H), 1,71 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,2, 146,3, 145,3, 140,8, 135,9, 127,5, 122,3, 67,3, 58,4, 51,4, 36,8, 36,5, 31,7. Анализ (C₁₆H₂₄ N₄O₁₂S₂) C,H,N.

Обработка соединения 24 (0,25 г, 0,45 ммоль) LiBr (53 мг, 0,61 ммоль) в EtOAc (50 мл) при 60°С в течение 3 ч и хроматография продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 2:1 до 1:0) дает соединение IIb-13 (0,16 г, 66%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,73 (м, 1H), 8,31 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,28 (м, 2H), 3,65-3,44 (м, 10H), 3,13 (с, 3H), 1,70 (м, 2H); ¹³C ЯМР 165,1, 145,7, 145,4, 141,0, 136,2, 127,3, 122,1, 67,5, 58,4, 51,1, 36,7, 36,5, 31,7, 29,6. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₅H₂₂ ⁷⁹BrN₄O₉S [M+H⁺ ] m/z 513,0291. Найдено; 513,0281.

Пример 17 (Схема 2g). 2-((2-бромэтил)-2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат (IIb-12)

Твердое соединение IIb-7 (300 мг, 0,62 ммоль) и метансульфонат серебра (130 мг, 0,65 ммоль) в сухом MeCN (15 мл) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждают и фильтруют. Твердый AgBr промывают EtOAc с получением AgBr с выходом 98%. Раствор удаляют при пониженном давлении и остаток отделяют хроматографией на силикагеле, элюируя смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0), с получением последовательно:

- исходного соединения (IIb-7) (28 мг, 9%);

- соединения IIb-12 (123 мг, 38%) в виде желтой пены; ¹ H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,77 (м, 1H, CONH), 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,36 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,28 (м, 2H, CH₂OMs), 3,58 (м, 4H), 3,44 (м, 4H), 3,14 (с, 3H, OSO₂CH₃ ); ¹³C ЯМР 165,3, 145,8, 145,2, 140,9, 135,1, 127,5, 122,2, 67,5, 59,2, 54,2, 51,0, 42,1, 36,4, 29,7; HRMS m/z вычислено для

C₁₄H₂₀ ⁷⁹BrN₄O₉S 499,01344. Найдено 499,01324.

Колонку окончательно элюируют EtOAc/MeOH (9:1) с получением 2-(2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфоната 25 (159 мг, 53%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. 128-132°С (EtOAc/петролейный эфир); ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO]] 8,78 (м, 1H, CONH), 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,36 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,29 (м, 4H, 2×CH₂OMs), 3,56 (м, 2H), 3,45 (м, 6H), 3,14 (с, 6H, 2×OSO₂ CH₃); ¹³C ЯМР 165,4, 146,3, 145,1, 140,6, 135,8, 127,6, 122,3, 67,3, 59,2, 51,3, 42,1, 36,4; HRMS: C₁₅H₂₃N ₄O₁₂S₂ вычислено m/z 515,0754. Найдено: 515,0744.

Пример 18 (Схема 2h) 2-((2-хлорэтил)-2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-4,6-динитроаналино)этилметаносульфонат (IIb-2m)

Раствор соединения 25 (5,3 г, 10,3 ммоль) в ДМФА (100 мл) обрабатывают LiCl (524 мг, 12,4 ммоль) при 60°С в течение 2 ч, затем охлаждают, выливают в разбавленную HCl и экстрагируют EtOAc (3×150 мл). Последующая обработка и хроматография продукта на силикагеле при элюировании EtOAc/петролейный эфир от 1:1 до 1:0 дает соединение IIb-2 (2,4 г, 59%), и затем соединение IIb-2m (1,94 г, 41%) в виде желтого масла; ¹ H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,77 (м, 1H, CONH), 8,74 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-4), 8,36 (д, J=2,7 Гц, 1H, H-6), 4,28 (м, 2H, -CH₂O-Ms), 3,58 (a, 4H), 3,44 (м, 4H), 3,14 (с, 3H, -OSO₂CH₃ ); ^l3C ЯМР 165,3, 145,8, 145,2, 140,9, 135,1, 127,5, 122,2, 67,5, 59,2, 54,2, 51,0, 42,1, 36,4, 29,7.

Соединение IIb-2m получают альтернативным способом следующим образом. Раствор соединения IIb-2 (12,50 г, 31,6 ммоль) в 3-метил-2-бутаноне (150 мл) обрабатывают при 25°С NaI (5,69 г, 38,0 ммоль), смесь перемешивают при 70°С в течение 2 ч и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток распределяют между водой (250 мл) и EtOAc (250 мл) и отделенный органический слой промывают водой, сушат (Na₂SO₄) и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученное масло (15,23 г) растворяют в CH₃CN (80 мл), обрабатывают метансульфонатом серебра (9,63 г, 47,4 ммоль), смесь перемешивают при 25°С в течение 1 ч и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток экстрагируют EtOAc (100 мл), раствор EtOAc выпаривают и маслянистую смесь отделяют хроматографией на силикагеле, получая исходное вещество (3,61 г, 29%), соединение IIb-2m (4,55 г, 32%) и соединение 25 (4,98 г, 31%). Когда NaI замещают LiBr, реакция дает аналогичный результат.

Пример 19 (Схема 2i) 2-[бис(2-йодэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-3,5-динитробензамид (IIb-14) и 2-((2-йодэтил)-2-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-4,6-динитроанилино)этилметансульфонат (IIb-15)

Обработка соединения 25 (6,7 г, 13,0 ммоль) NaI (2,9 г, 20 ммоль) в EtOAc (200 мл) при 60°С в течение 3 ч и хроматография продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 2:1 до 1:0) дает соединение IIb-14 (3,3 г, 44%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 129-131°С; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,72 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-4), 8,70 (м, 1H, CONH), 8,32 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-6), 4,80 (м, 1H), 3,55 (м, 2H), 3,43 (м, 4H), 3,31 (м, 6H); ¹³C ЯМР 165,3, 145,2, 144,7, 141,0, 136,3, 127,3, 122,0, 59,3, 54,7, 42,1, 2,94. Анализ (C₁₃H₁₆N₄ I₂O₆) C,H,N.

Более поздние элюаты дают соединение IIb-15 (1,35 г, 19%) в виде желтой пены; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-4), 8,74 (м, 1H, CONH), 8,34 (д, J=2,8 Гц, 1H, H-6), 4,28 (м, 2H), 3,56 (м, 2H), 3,43 (м, 2H), 3,31 (м, 6H), 3,13 (с, 3H); ¹³C ЯМР 165,3, 145,5, 145,2, 140,8, 136,1, 127,4, 122,1, 67,5, 59,2, 55,4, 50,6, 42,1, 36,5, 2,6. HRMS (FAB) вычислено для C ₁₄H₂₀IN₄O₉S [M+H⁺ ] m/z 546,9996. Найдено; 546,9997.

Пример 20 (Схема 2i) 3-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(2-гидроксиэтил)-2,6-динитробензамид (IIс-7) и 2-((2-бромэтил)-3-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (IIс-12)

Обработка 2-(3-{[(2-гидроксиэтил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфоната (26) [способ получения см. заявку на патент Новой Зеландии № 521851] (310 мг, 0,6 ммоль) в EtOAc (50 мл) LiBr (78 мг, 0,9 ммоль) с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0) дает соединение IIс-7 (70 мг, 25%); ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,80 (м, 1H, CONH), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,63 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,66 (м, 1H), 3,70 (м, 4H), 3,60 (м, 4H), 3,45 (м, 2H), 3,22 (м, 2H); ¹³C ЯМР 161,4, 145,8, 140,2, 137,5, 129,2, 127,6, 122,6, 59,0, 52,6, 41,7, 30,0. HRMS (FAB) Вычислено для

C ₁₃H₁₇ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 482,9515. Найдено; 482,9508.

Дальнейшее элюирование смесью EtOAc/MeOH (50:2) дает соединение IIс-12 (118 мг, 39%): т.пл. 94-97°С; ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,80 (м, 1H, CONH), 8,25 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,64 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,67 (м, 1H), 4,27 (м, 2H), 3,63 (м, 4H), 3,57 (м, 2H), 3,45 (м, 2H), 3,26 (м, 2H), 3,15 (с, 3H); ¹³C ЯМР 161,4, 146,2, 140,5, 137,7, 129,2, 127,5, 122,9, 66,8, 59,0, 50,0, 41,7, 36,6, 29,9. Анализ (C₁₄H₁₉ BrN₄O₉S) C,H,N.

Пример 21 (Схема 2j) 3-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(3-гидроксипропил)-2,6-динитробензамид (IIс-8) и 2-((2-бромэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (IIс-13)

Обработка 2-(3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфоната (27) [способ получения см. заявку на патент Новой Зеландии № 521851] (716 мг, 1,36 ммоль) в EtOAc (200 мл) LiBr (175 мг, 2,0 ммоль) с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0) дает соединение IIс-8 (289 мг, 42%) в виде желтого твердого вещества; т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 142-144°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,75 (т, J=5,8 Гц, 1H, CONH), 8,23 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-5), 7,62 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-6), 4,47 (м, 1H, CHOH), 3,68 (м, 4H), 3,57 (м, 4H), 3,43 (м, 2H), 3,20 (м, 2H), 1,60 (м, 2H); ¹³C ЯМР 161,2, 146,9, 140,2, 137,5, 129,4, 127,7, 122,6, 58,3, 52,6, 36,4, 31,6, 30,1. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₄ H₁₉ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 496,9671. Найдено: 496,9667.

Дальнейшее элюирование смесью EtOAc/MeOH (50:2) дает соединение IIс-13 (270 мг, 39%): т.пл. 115-117°С; ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,75 (т, J=5,8 Гц, 1H, CONH), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-5), 7,64 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-6), 4,43 (м, 1H, CH.OH), 4,27 (м, 2H, CH₂OMs), 3,66 (м, 4H, 2×CH₂N), 3,59 (м, 2H), 3,44 (м, 2H), 3,22 (м, 2H), 3,15 (с, 3H, CH₃ SO₃), 1,60 (м, 2H); ¹³C ЯМР 161,1, 146,2, 140,5, 137,7, 129,2, 127,6, 122,9, 66,8, 58,2, 52,9, 50,0, 36,6, 36,4, 31,6, 30,0. Анализ (C₁₅ H₂₁BrN₄O₉S) C,H,N.

Пример 22 (Схема 2j) 3-[бис(2-бромэтил)амино]-N-(4-гидроксибутил)-2,6-динитробензамид (IIс-9) и 2-((2-бромэтил)-3-{[(4-гидроксибутил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (IIс-14)

Обработка 2-(3-{[(4-гидроксибутил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфоната (28) [способ получения см. заявку на патент Новой Зеландии № 521851] (500 мг, 0,92 ммоль) в EtOAc (100 мл) LiBr (110 мг, 1,4 ммоль) с последующей хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0) дает соединение IIс-9 (100 мг, 21%) в виде пены; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,73 (м, 1H, CONH), 8,25 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,63 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,38 (м, 1H), 3,69 (м, 4H), 3,57 (м, 4H), 3,40 (м, 2H), 3,14 (м, 2H), 1,47 (м, 4H); ¹³C ЯМР 161,0, 145,8, 140,2, 137,6, 129,3, 127,6, 122,6, 60,2, 52,6, 30,0, 29,6, 24,8. HRMS (FAB) Вычислено для C₁₅ H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H ⁺] m/z 510,9828. Найдено; 510,9819.

Дальнейшее элюирование смесью EtOAc/MeOH (50:2) дает соединение IIс-14 (117 мг, 30%): т.пл. 114-117°С; ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,74 (м, 1H, CONH), 8,25 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,37 (м, 1H), 4,27 (м, 2H), 3,65 (м, 4H), 3,57 (м, 2H), 3,35 (м, 2H), 3,16 (м, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,47 (м, 4H); ¹³C ЯМР 160,0, 146,1, 140,6, 137,8, 129,2, 127,5, 122,9, 66,8, 60,2, 52,9, 50,0, 36,6, 29,9, 29,6, 24,9. Анализ (C₁₆ H₂₃BrN₄O₉S) C,H,N.

Пример 23 (Схема 2k) 2-(3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}{2-[(метилсульфонил)окси]этил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (27)и 2-((2-бромэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроанилино)этилметансульфонат (IIс-13)

Твердое вещество IIc-8 (2,15 г, 4,3 ммоль) добавляют к горячему раствору метансульфоната серебра (0,992 г, 4,9 ммоль) в сухом MeCN (40 мл). Смесь нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждают и фильтруют. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток отделяют хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (от 1:1 до 1:0) с получением последовательно соединения IIс-13 (0,5 г, 25%), соединения IIc-8 (0,3 г, 14%) и соединения 27 (0,4 г, 18%).

Пример 24 (Схема 2k). 2-((2-хлорэтил)-2-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроаналино)этилметаносульфонат (IIс-6)

Раствор соединения 27 (9,0 г, 17,0 ммоль) в ДМФА (110 мл) обрабатывают LiCl (860 мг, 20,4 ммоль) при 60°С в течение 2 ч, затем охлаждают, выливают в разбавленную HCl и экстрагируют EtOAc (3×150 мл). Последующая обработка и хроматография продукта на силикагеле при градиентном элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир от 1:1 до 1:0 дает соединение IIс-6 (4,0 г, 50%) в виде желтых кристаллов: т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 104-109°С; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,75 (т, J=5,8 Гц, 1H, CONH), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-5), 7,64 (д, J=9,4 Гц, 1H, H-6), 4,44 (м, 1H, CROH), 4,26 (м, 2H), 3,72 (м, 2H), 3,65 (м, 2H), 3,59 (м, 2H), 3,43 (м, 2H), 3,20 (м, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,60 (м, 2H); ¹³C ЯМР 161,1, 146,4, 140,5, 137,7, 129,2, 127,6, 122,9, 66,8, 58,2, 52,9, 50,1, 41,4, 36,6, 36,4, 31,6. Анализ (C₁₅ H₂₁ClN₄O₉S) C,H,N.

Пример 25 (Схема 2k) 2-((2-йодэтил)-3-{[(3-гидроксипропил)амино]карбонил}-2,4-динитроаналино)этилметаносульфонат (IIс-15)

Раствор соединения 27 (5,28 г, 10,0 ммоль) в EtOAc (250 мл) обрабатывают NaI (1,8 г, 12,0 ммоль) при 60°С в течение 2 ч, продукт хроматографируют на силикагеле при градиентном элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир от 1:2 до 1:0 с получением соединения IIс-15 (2,29 г, 41%) в виде желтых кристаллов: т.пл. 100-103°С; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 10,05 (с, 1H), 7,40 (д, J=11,5 Гц, 1H), 7,09 (с, 1H), 6,70 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,50 (м, 2H), 2,21 (м, 2H), 2,03 (с, 3H), 1,52 (м, 4H); ¹³C ЯМР 161,1, 145,8, 140,5, 137,7, 129,2, 127,6, 122,9, 66,8, 58,2, 53,9, 49,9, 41,4, 36,6, 36,4, 31,6. Анализ (C_i5 H₂₁IN₄O₉S) C,H,N.

Получение фосфатов (Схема 3)

Пример 26 2-[[2-[бис(2-бромэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат (Ib-7P)

Раствор спирта IIb-7 (2,58 г, 5,33 ммоль) и ди-трет-бутилдиэтилфосфорамидита (93%, 2,0 мл, 6,9 ммоль) в сухом ДМФА (20 мл) в атмосфере N₂ обрабатывают 1Н-тетразолом (3% мас. в CH₃CN, 55 мл, 18,7 ммоль) и перемешивают при 20°С в течение 1,5 ч. Реакционную смесь затем охлаждают до -50°С и быстро добавляют раствор 3-хлорфеноксибензойной кислоты (55%, 2,68 г, 8,54 ммоль) таким образом, чтобы температура поддерживалась ниже -5°С. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и разбавляют CH₂Cl₂ (150 мл). Раствор промывают 5% водным Na₂S₂ O₅ (2×50 мл), водой (2×50 мл), сушат, концентрируют при пониженном давлении при температуре ниже 30°С, остаток встряхивают с i-Pr₂O/гексаном и помещают в холодильник. Полученное твердое вещество очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью CH₂Cl₂/гексан (ниже 40°С), с получением ди-трет-бутил-2-[[2-[бис(2-бромэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфата (Ib-7E) (2,59 г, 72%) в виде желтого нестабильного твердого вещества: т.пл. 99-101°С(разл.); ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,93 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,76 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,33 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,01 (г, J=6,1 Гц, 2H), 3,62-3,42 (м, 10H), 1,43 (с, 18H). HRMS (FAB) вычислено для C₂₁H₃₄ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 675,0430, найдено 675,0398; вычислено для C₂₁H₃₄ ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉ P (MH⁺) m/z 677,0410, найдено 677,0397; вычислено для C₂₁H₃₄ ⁸¹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 679,0389, найдено 679,0398. Анализ (C ₂₁H₃₃Br₂N₄O₉ P).

Раствор соединения Ib-7E (2,80 г, 4,14 ммоль) и TFA (15 мл) в сухом CH₂Cl₂ (15 мл) перемешивают при 20°С в течение 1 ч, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаточную TFA удаляют азеотропной перегонкой с CH ₃CN (2×) и полученный остаток растворяют в EtOAc. Добавление избытка гексана осаждает полутвердое вещество, которое сушат в небольшом вакууме при 20°С с получением соединения Ib-7P (98%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,93 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,75 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,36 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,97 (кв, J=6,3 Гц, 2H), 3,62-3,43 (м, 10H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₃H₁₈ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 562,9178, найдено 562,9171; вычислено для C₁₃H_I8 ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉ P (MH⁺) m/z 564,9158, найдено 564,9152; вычислено для C₁₃H₁₈ ⁸¹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 566,9137, найдено 566,9121. Обработка двухосновной кислоты (Ib-7P) NaHCO₃ (2,0 эквивалента) дает динатриевую соль.

Пример 27 3-[[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат (Iа-3P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIa-3 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании CH₂Cl₂/EtOAc (2:3) дает ди-трет-бутил-3-[[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилфосфат (Iа-3E) (76%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/i-Pr ₂O/гексан) 120-121°С (разлож.); ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,70 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,55 (с, 1H), 7,45 (с, 1H), 3,96 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,82 (т, J=5,8 Гц, 4H), 3,69 (т, J=5,8 Гц, 4H), 3,34 (после замены D₂O, т, J=6,8 Гц, 2H), 1,86 (пент, J=6,6 Гц, 2H), 1,42 (с, 18H). Анализ (C₂₂H ₃₅Cl₂N₄O₉P) C,H,N.

Аналогичная обработка сложного эфира Ia-3E TFA дает двухосновную кислоту Ia-3P (99%) в виде желтого гигроскопичного твердого вещества. ¹H ЯМР [(CD₃)₂ SO] 8,71 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,54 (с, 1H), 7,45 (с, 1H), 3,92 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,82 (т, J=5,8 Гц, 4H), 3,69 (т, J=5,8 Гц, 4H), 3,31 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 1,84 (пент, J=6,6 Гц, 2H). HRMS (FAB) Вычислено для C₁₄H₂₀ ³⁵Cl₂N₄O₉P [M+H⁺] m/z 489,0345; найдено 489,0344. Вычислено для C₁₄H₂₀ ³⁵Cl³⁷ClN₄O₉ P [M+H]⁺ m/z 491,0316; найдено 491,0317. Вычислено для

C₁₄H₂₀ ³⁷Cl₂N₄O₉P [M+H]⁺ m/z 493,0286; найдено 493,0312. Обработка двухосновной кислоты Iа-3P NaHCO₃ (2,0 эквивалента) дает динатриевую соль.

Пример 28 3-[[5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилдигидрофосфат (Iа-8P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIa-8 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании CH₂Cl₂/EtOAc (1:1) дает ди-трет-бутил-3-[[5-[бис(2-бромэтил)амино]-2,4-динитробензоил]амино]пропилфосфат (Iа-8E) (66%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/i-Pr ₂O/гексан) 110-111°С (разлож.); ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,70 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,55 (с, 1H), 7,44 (с, 1H), 3,96 (кв, J=6,1 Гц, 2 25H), 3,79-3,63 (м, 84H), 3,35 (после замены D₂O, т, J=6,8 Гц, 2H), 1,86 (пент, J=6,6 Гц, 2H), 1,42 (с, 18H). Анализ (C₂₂H₃₅Br₂ N₄O₉P) C,H,N.

Аналогичная обработка сложного эфира Ia-8E TFA дает двухосновную кислоту Ia-8P (99%) в виде желтого гигроскопичного твердого вещества. ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,71 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,55 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 3,93 (кв, J=6,1 Гц, 2H), 3,79-3,63 (м, 8H), 3,31 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 1,85 (пент, J=6,6 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₄ H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 576,9335, найдено 576,9314; вычислено для C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉ P (MH⁺) m/Z 578,9314, найдено 578,9305; вычислено для C₁₄H₂₀ ⁸¹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z 580,9294, найдено 580,9297. Обработка двухосновной кислоты Iа-3P NaHCO₃ (2,0 эквивалента) дает динатриевую соль.

Пример 29 2-[[2-[бис(2-хлорэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат (Ib-2P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIb-2 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании CH₂Cl₂/EtOAc (13:7) дает ди-трет-бутил-2-[[2-[бис(2-хлорэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилфосфат (Ib-2E) (72%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/i-Pr ₂O/гексан) 107-108°С (разлож.); ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,90 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,75 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,33 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,01 (кв, J=6,1 Гц, 2H), 3,72 (т, J=6,8 Гц, 4H), 3,53 (кв, J=5,5 Гц, 2H), 3,43 (т, J=6,8 Гц, 4H), 1,43 (с, 18H). Анализ (C₂₁H₃₃Cl₂N₄ O₉P) C,H,N,P. CRL 11363.

Аналогичная обработка сложного эфира Ib-2E TFA дает двухосновную кислоту Ib-2P (98%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,89 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,36 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,98 (кв, J=6,2 Гц, 2H), 3,72 (т, J=6,7 Гц, 4H), 3,51 (кв, J=5,6 Гц, 2H), 3,43 (т, 7=6,7 Гц, 4H). HRMS (FAB) Вычислено для C₁₃H₁₈ ³⁵Cl₂N₂O₉P [M+H]⁺ m/Z 475,0189; найдено 475,0189. Вычислено для C₁₃H₁₈ ³⁵Cl³⁷ClN₂O₉ P [M+H]⁺ m/z 477,0159; найдено 477,0167. Вычислено для C₁₃H₁₈ ³⁵Cl₂N₂O₉P [M+H]⁺ m/z 479,0130; найдено 479,0160. Обработка двухосновной кислоты Ib-2P NaHCO₃ (1,0 эквивалент) дает мононатриевую соль.

Пример 30 3-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Ib-2mP)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIb-2m с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании EtOAc дает 2-[(2-хлорэтил)-2-(6-трет-бутокси-8,8-диметил-6-оксид-5,7-диокса-2-аза-6-фосфанон-1-аноил)-4,6-динитроанилино]этилметансульфонат (Ib-2mP) (80%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,94 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,75 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,34 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,4 Гц, 2H), 4,02 (кв, J=6,2 Гц, 2H), 3,74-3,43 (м, 8H), 3,13 (с, 3H), 1,43 (с, 18H). ¹³ C ЯМР 265,6, 146,2, 145,3, 140,8, 135,6, 127,5, 122,4, 81,7, 67,5, 64,2, 54,3, 51,3, 41,4, 36,5, 29,5.

Аналогичная обработка сложного эфира Ib-2mP TFA дает двухосновную кислоту Ib-2mP (68%) в виде желтого твердого вещества. Т.пл. (EtOAc/CH ₂Cl₂): 132-134°C; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,92 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,37 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,29 (т, J=5,4 Гц, 2H), 3,98 (кв, J=6,0 Гц, 2H), 3,58-3,40 (после замены D₂O, м, 8H), 3,13 (с, 2H). ¹³C ЯМР 165,5, 146,1, 145,3, 140,8, 135,7, 127,6, 122,3, 67,5, 63,3, 63,2, 54,3, 51,3, 41,3, 36,5. Анализ (C₁₄H ₂₀ClN₄O₁₂PS) C,H,N.

Пример 31 2-({2-[бис(2-бромпропил)амино]-3,5-динитробензоил}амино)этилдигидрофосфат (Ib-7aP)

Аналогичное фосфорилирование спирта IIb-7a (0,67 г, 1,3 ммоль) ди-трет-бутилдиэтилфосфорамидитом (93%, 489 мг, 2,0 ммоль) с последующей колоночной флэш-хроматографией продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (1:1) дает соединение Ib-7aE в виде желтого твердого вещества (0,74 г, 81%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 121-123°С;. ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 9,09 (м, 1H), 8,73 (м, 1H), 8,32 (м, 1H), 4,44 (м, 2H), 4,00 (м, 2H), 3,39 (м, 2H), 3,60 (м, 4H), 1,62 (м, 6H), 1,44 (с, 18H). ¹³C ЯМР 165,9, 144,8, 143,6, 139,6, 133,2, 128,0, 123,1, 81,6, 64,0, 60,4, 39,9, 29,4, 23,5. Анализ (C₂₃H₃₇ Br₂N₄O₉P) C,H,N.

Аналогичная обработка соединения Ib-7аE (100 мг) TFA с последующей кристаллизацией из CH₂Cl₂/EtOAc дает соединение Ib-7aP в виде желтого твердого вещества (70 мг, 85%). Т.пл. 157-161°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 9,07 (м, 1H), 8,72 (м, 1H), 8,36 (м, 1H), 4,43 (м, 2H), 4,00 (м, 2H), 3,52 (м, 6H), 1,62 (м, 6H). ¹³C ЯМР 165,9, 144,8, 143,6, 139,7, 133,4, 128,1, 123,1, 63,2, 60,4, 47,9, 39,9, 23,5. Анализ (C₁₅H₂₁Br ₂N₄O₉P) C,H,N.

Пример 32 2-[(2-[бромэтил)-2,4-динитро-6-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Ib-12P)

Аналогичное фосфорилирование IIa-12 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании EtOAc дает 2-[(2-бромэтил)-2-(6-трет-бутокси-8,8-диметил-6-оксид-5,7-диокса-2-аза-6-фосфанон-1-аноил)-4,6-динитроанилино]этилметансульфонат (Ib-12E) (66%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,94 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,75 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,34 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,4 Гц, 2H), 4,02 (кв, J=6,2 Гц, 2H), 3,62-3,43 (м, 8H), 3,13 (с, 3H), 1,43 (с, 18H). HRMS (FAB) вычислено для C₂₂H₃₇ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M+H] ⁺ m/z 693,1029; найдено 693,1010.

Аналогичная обработка сложного эфира Ib-12E TFA дает двухосновную кислоту Ib-12P (98%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,92 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,37 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,4 Гц, 2H), 3,98 (кв, J=6,0 Гц, 2H), 3,58-3,40 (после замены D₂O, м, 8H), 3,13 (с, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₄H₂₁ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M+H] ⁺ m/z 578,9798; найдено 578,9784; вычислено для C₁₄ H₂₁ ⁸¹Br⁸¹BrN₄O₁₂ PS [M+H]⁺ m/z 580,9777; найдено 580,9784. Обработка двухосновной кислоты Ib-12P NaHCO₃ (1,0 эквивалент) дает мононатриевую соль.

Пример 33 2-[[2-[бис(2-йодэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилдигидрофосфат (Ib-14P)

Аналогичное фосфорилирование соединения Ib-14 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании СH₂Cl₂/EtOAc (3:1) дает ди-трет-бутил-2-[[2-[бис(2-йодэтил)амино]-3,5-динитробензоил]амино]этилфосфат (Ib-14E) (67%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (СH ₂Cl₂/i-Pr₂O/гексан) 108-110°С (разлож.); ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,91 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,30 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,01 (кв, J=6,3 Гц, 2H), 3,53 (кв, J=5,7 Гц, 2H), 3,45 (т, J=7,8 Гц, 4H), 3,24 (после замены D₂O, т, J=7,6 Гц, 4H), 1,44 (с, 18H). Анализ (C₂₁H₃₃ I₂N₄O₉P) C,H,N,P.

Аналогичная обработка сложного эфира Ib-14E TFA дает двухосновную кислоту Ib-14P (97%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,90 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,73 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,34 (д, J=2,8 Гц, 1H), 3,98 (кв, J=6,4 Гц, 2H), 3,49 (после замены D ₂O т, J=5,6 Гц, 2H), 3,45 (т, J=7,8 Гц, 4H), 3,29 (т, J=7,7 Гц, 4H). HRMS (FAB) Вычислено для C₁₃H₁₈ I₂N₄O₉ [M+H]⁺ m/z 658,3911; найдено 658,3907. Обработка двухосновной кислоты Ib-14P NaHCO₃ (2,0 эквивалента) дает мононатриевую соль.

Пример 34 2-[(2-йодэтил)-2,4-динитро-6-({[2-(фосфоноокси)этил]амино}карбонил)амино]этилметансульфонат (Ib-15P)

Аналогичное фосфорилирование спирта IIb-15 (1,68 г, 3,1 ммоль) ди-трет-бутилдиэтилфосфорамидитом (93%, 1,15 г, 4,5 ммоль) с последующей колоночной флэш-хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (1:1) и кристаллизацией из смеси EtOAc/петролейный эфир дает соединение Ib-15Е в виде желтого твердого вещества (2,23 г, 97%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 109-111°С;. ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,98 (м, 1H), 8,76 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,33 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,27 (м, 2H), 4,00 (м, 2H), 3,53 (м, 2H), 3,46 (м, 4H), 3,14 (с, 3H), 1,43 (с, 18H). ¹³C ЯМР 165,5, 145,6, 145,2, 140,8, 135,6, 127,4, 122,4, 81,7, 67,5, 64,2, 55,4, 50,7, 39,9, 36,5, 29,3, 2,6. Анализ (C ₂₂H₃₆IN₄O₁₂PS), C,H,N.

Аналогичная обработка соединения Ib-15E (405 мг) TFA с последующей кристаллизацией продукта из смеси CH₂ Cl₂/петролейный эфир дает соединение Ib-15P в виде желтого твердого вещества (306 мг, 89%). Т.пл. 147-150°С; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,93 (м, 1H), 8,74 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,36 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,27 (м, 2H), 4,00 (м, 2H), 3,46 (м, 6H), 3,31 (м, 2H), 3,12 (с, 3H). ¹³C ЯМР 165,5, 145,6, 145,2, 140,8, 135,7, 127,6, 122,3, 67,6, 63,3, 55,5, 50,7, 39,9, 36,5, 2,7. Анализ (C₁₄H ₂₀IN₄O₉PS), C,H,N.

Пример 35 2-[(2-хлорэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Iс-6P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIc-6 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOA/петролейный эфир (от 1:2 до 1:1) дает 2-[(2-хлорэтил)-3-(7-трет-бутокси-9,9-диметил-7-оксид-6,8-диокса-2-аза-7-фосфагекс-1-аноил)-2,4-динитроанилино]этилметансульфонат (Iс-6E) (98%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOA/петролейный эфир) 98-102°С; ¹H ЯМР [(CD₃) ₂SO] 8,83 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,26 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,29 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,92 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,62-3,55 (м, 2H), 3,23 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,79 (пент, J=6,1 Гц, 2H), 1,42 (с, 18H). ¹³C ЯМР 161,3, 146,4, 140,4, 137,6, 129,1, 127,6, 123,0, 81,2, 66,8, 64,1, 64,0, 52,9, 50,1, 41,4, 36,6, 35,9, 29,3. Анализ (C₂₃H₃₈ClN₄O₁₂PS) C,H,N.

Аналогичная обработка сложного эфира Iс-6E TFA дает двухосновную кислоту Iс-6P (94%) в виде желтого твердого вещества. Т.пл. (EtOAc/CH₂Cl₂) 98-102°C; ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,84 (т, J=5,7 Гц, 1H), 8,26 (д, 7=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,88 (кв, J=6,8 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,53 (после замены D₂O, т, J=6,0 Гц, 2H), 3,23 (кв, J=6,6 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,76 (пент, J=6,7 Гц, 2H). Анализ (C₁₅H₂₂ClN₄O ₁₂PS) C,H,N.

Пример 36 3-({3-[бис(2-бромэтил)амино]-2,6-динитробензоил}амино)пропилдигидрофосфат (Iс-8P)

Аналогичное фосфорилирование спирта IIс-8 (1,41 г, 2,83 ммоль) ди-трет-бутилдиэтилфосфорамидитом (93%, 1,25 г, 5,0 ммоль) с последующей колоночной флэш-хроматографией на силикагеле при элюировании смесью EtOAc/петролейный эфир (1:1) дает соединение Iс-8Е в виде желтого твердого вещества (1,77 г, 91%): т.пл. (EtOAc/петролейный эфир) 112-114°С;. ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,86 (м, 1H), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,63 (д, J=9,4 Гц, 1H), 3,92 (м, 2H), 3,70 (м, 4H), 3,60 (м, 4H), 3,22 (м, 2H), 1,78 (м, 2H), 1,41 (с, 18H). ¹³C ЯМР 161,4, 145,9, 139,9, 137,3, 129,2, 127,8, 122,5, 81,3, 64,1, 52,5, 35,9, 30,1, 29,4, 29,1. Анализ (C₂₂H ₃₅Br₂N₄O₉P), C,H,N.

Аналогичная обработка соединения Iс-8E (900 мг) TFA дает соединение Iс-8P в виде желтой пены (754 мг, 100%). ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,83 (м, 1H), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,63 (д, J=9,4 Гц, 1H), 3,86 (м, 2H), 3,73 (м, 4H), 3,60 (м, 4H), 3,22 (м, 2H), 1,76 (м, 2H). ¹³C ЯМР 161,3, 145,9, 140,1, 137,4, 129,2, 127,6, 122,5, 62,9, 52,5, 36,0, 30,0, 29,3. HRMS (FAB) вычислено для C₁₄ H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₉P [M+H]⁺ m/z 576,9335, найдено 576,9326.

Пример 37 2-[(2-бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[2-(фосфоноокси)этил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Iс-12P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIc-12 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании смесью EtOA/петролейный эфир (от 1:2 до 1:1) дает соединение (Iс-12E) (99%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOA/петролейный эфир) 82-86°С (разлож.); ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 9,00 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,26 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,92 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,62-3,55 (м, 2H), 3,23 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,42 (с, 18H). Анализ (C₂₂H₃₆ BrN₄O₁₂PS) C,H,N.

Аналогичная обработка сложного эфира Iс-12E TFA дает двухосновную кислоту Iс-12P (100%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/CH ₂Cl₂) 93-97°C; ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,99 (т, J=5,7 Гц, 1H), 8,26 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,88 (кв, J=6,8 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,53 (после замены D₂O, т, J=6,0 Гц, 2H), 3,23 (кв, J=6,6 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H). Анализ (C ₁₄H₂₀BrN₄O₁₂PS) C,H,N.

Пример 38 2-[(2-[бромэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Iс-13P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIс-13 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании CH₂Cl₂/EtOAc (1:3) дает 2-[(2-бромэтил)-3-(7-трет-бутокси-9,9-диметил-7-оксид-6,8-диокса-2-аза-7-фосфагекс-1-аноил)-2,4-динитроанилино]этилметансульфонат (Iс-13E) (70%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (CH ₂Cl₂/i-Pr₂O) 95-96°C (разлож.). ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,83 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,26 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,92 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,62-3,55 (м, 2H), 3,23 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,79 (пент, J=6,7 Гц, 2H), 1,42 (с, 18H). Анализ (C₂₃H₃₈BrN₄O₁₂PS) C,H,N,P.

Аналогичная обработка сложного эфира Iс-13E TFA дает двухосновную кислоту Iс-13P (98%) в виде гигроскопичного желтого твердого вещества. ¹H ЯМР [(CD₃ )₂SO] 8,84 (т, J=5,7 Гц, 1H), 8,26 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,65 (д, J=9,4 Гц, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 2H), 3,88 (кв, J=6,8 Гц, 2H), 3,72-3,62 (м, 4H), 3,53 (после замены D₂O, т, J=6,0 Гц, 2H), 3,23 (кв, J=6,6 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,76 (пент, 7=6,7 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₅H₂₃ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M*+H] ⁺ m/z 592,9954; найдено 592,9956. Обработка двухосновной кислоты Iс-13P NaHCO₃ (1,0 эквивалент) дает мононатриевую соль.

Пример 39 2-[[2-(йодэтил)-2,4-динитро-3-[[[3-(фосфоноокси)пропил]амино]карбонил]анилино]этилметансульфонат (Iс-15P)

Аналогичное фосфорилирование соединения IIс-15 с последующей хроматографией продукта на силикагеле при элюировании CH₂Cl₂/EtOAc (1:3) дает 2-[(2-йодэтил)-3-(7-трет-бутокси-9,9-диметил-7-оксид-6,8-диокса-2-аза-7-фосфагекс-1-аноил)-2,4-динитроанилино]этилметансульфонат (Iс-15E) (58%) в виде желтого твердого вещества: т.пл. (EtOAc/i-Pr ₂O) 90-100°C (разлож.). ¹H ЯМР [(CD ₃)₂SO] 8,86 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,25 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,63 (д, J=9,5 Гц, 1H), 4,27 (т, J=5,2 Гц, 2H), 3,91 (кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,67 (т, J=5,2 Гц, 2H), 3,60 (т, J=7,1 Гц, 2H), 3,26-3,17 (после замены D₂O, м, частично невидим, 2H), 3,23 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 3,15 (с, 3H), 1,78 (пент, J=6,6 Гц, 2H). Анализ (C ₂₃H₃₈IN₄O₁₂PS) C,H,N,P.

Аналогичная обработка сложного эфира Iс-15E TFA дает двухосновную кислоту Iс-15P (97%) в виде желтого гигроскопичного твердого вещества. Т.пл. (CH₃CN/EtOAc) 84-86°C. ¹H ЯМР [(CD₃)₂SO] 8,90 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,24 (д, J=9,4 Гц, 1H), 7,57 (д, J=9,5 Гц, 1H), 4,25 (т, J=5,2 Гц, 2H), 3,81 (после замены D ₂O, кв, J=6,7 Гц, 2H), 3,62 (после замены D₂ O, т, J=5,2 Гц, 2H), 3,56 (т, J=7,1 Гц, 2H), 3,26 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,20 (кв, J=6,5 Гц, 2H), 3,09 (с, 3H), 1,73 (пент, J=6,6 Гц, 2H). HRMS (FAB) вычислено для C₁₅H₂₂ IN₄O₁₂PS (MH⁺) 640,9816, Найдено; 640,9795. Анализ (C₁₅H₂₂IN₄O ₁₂PS) C,H.

Таблица 2 Данные элементного анализа новых соединений, представленных в таблицах 1а и 1b
No	Найдено	Вычислено
	C	H	N	Другие	C	H	N	Другие
IIа-1	44,5	3,9	18,6		44,6	4,1	18,9
IIа-3	41,3	4,3	13,7	17,4 (Cl)	41,1	4,4	13,7	17,3 (Cl)
IIа-7	32,6	3,3	11,6	33,3 (Br)	32,3	3,3	11,6	33,0 (Br)
IIа-7s	33,4	3,7	7,8		32,5	3,7	8,1
IIа-8	33,9	3,6	11,4	32,1 (Br)	33,8	3,6	11,3	32,1 (Br)
IIа-9	35,5	3,8	10,7	31,2 (Br)	35,2	3,9	10,9	31,2 (Br)
IIа-14	27,3	2,6	9,6	43,8 (I)	27,0	2,8	9,7	43,9 (I)
IIb-1	51,2	5,7	15,9		51,3	5,7	15,9
IIb-3	41,6	4,5	13,6	17,1 (Cl)	41,1	4,4	13,7	17,3 (Cl)
IIb-7	32,9	3,3	11,5	33,3 (Br)	32,3	3,3	11,6	33,0 (Br)
IIb-7a	35,3	3,8	10,9		35,2	3,9	10,9
IIb-8	34,9	3,7	11,3	32,3 (Br)	33,8	3,6	11,3	33,3 (Br)
IIb-14	27,8	3,1	9,5		27,0	2,8	9,7
IIс-12	33,8	3,7	11,0		33,7	3,8	11,2
IIс-13	35,4	3,9	11,0		35,2	4,1	10,9
IIс-14	36,7	4,5	10,2		36,4	4,4	10,6
Ib-7E	37,7	4,9	8,3	4,6 (P)	37,3	4,9	8,3	4,6 (P)
Ib-2E	44,8	6,2	9,0	5,1 (P)
Ib-14E	32,9	4,2	7,2	3,8 (P)	32,7	4,3	7,3	4,0 (P)
Ia-3E	44,2	5,9	9,3		43,9	5,9	9,3
Ia-8E	38,5	5,0	8,2		38,3	5,1	8,1
Ic-13E	39,0	5,4	8,9	4,4 (P)	39,2	5,4	7,9	4,4 (P)
Ic-15E	37,0	5,0	7,3	4,2 (P)	36,7	5,1	7,5	4,1 (P)
Ic-15P	28,1	3,5			28,3	3,5

Репрезентативные спирты формулы (I) (перечисленные в таблице 1а) проявляют селективную цитотоксичность в отношении линий клеток рака человека, трансфицированных или цДНК нитроредуктазы E.coli (NTR) (таблица 3, колонки 2 и 3), или редуктазой человеческого цитохрома P450 (Р450R) в гипоксических условиях (таблица 3, столбцы 4 и 5). В этой таблице соотношения чувствительности представлены для указания степени селективности или к экспрессии NTR (колонка 3), или к гипоксии (колонка 5). Однако избыточная экспрессия Р450R не требуется для гипоксической селективности.

Величины IC₅₀ получены из экспериментов клеточной пролиферации после 4-часового контакта с препаратом в газовой фазе или 20% кислорода, или 0% кислорода (аноксии, достигаемой с использованием анаэробной камеры). Клетки выращивали в анаэробных условиях еще в течение 5 дней, и плотность клеток оценивали, используя анализ сульфорфодамина В для определения концентрации пролекарства, требуемой для ингибирования роста до 50% контроля.

Таблица 3 Показатели селективной цитотоксичности репрезентативных примеров спиртов, представленных в таблице 1а
No	Толстая кишка человека (4 час)	Легкое человека(4 час)
	WiDr (NTR +ve) IC50 (мкM)	WiDr WT:NTR IC50 соотношение	A549 (P450R+ve) аноксия IC 50 (мкM)	A549 (P450R+ve) 20% О 2/аноксия IC50 соотношение
IIa-1	5,2	34	3,7	28
IIa-2	48	26	25	3,7
IIa-3	47	36	54	23
IIa-7	1,5	99	6,7	49
IIa-7s	9,3	35	2,1	109
IIa-8	1,6	224	23	6,6
IIa-9	6,4	58	22	9,4
IIa-10	10	22	-	-
IIa-11	11	9	-	-
IIa-12	4,2	116	73	10
IIa-13	5	90	32	18
IIa-14	2,9	49	13	4,5
IIb-1	61	2	384	<1,3
IIb-2	11,8	47	18	20
IIb-3	13,6	59	30	9
IIb-4	14	18	-	-
IIb-5	13	19	-	-
IIb-6	27	5	-	-
IIb-7	0,3	61	0,8	56
IIb-7a	0,5	27	1,0	5,3
IIb-8	0,4	13	1,1	24
IIb-9	0,9	5	1,4	20
IIb-10	0,9	2	2,3	11
IIb-11	1,0	2	6,6	4,5
IIb-12	0,4	48	0,28	133
IIb-13	0,3	27	0,15	138
IIb-14	0,8	12	1,0	27
IIb-15	0,3	31	0,28	118
IIc-7	10	46	3,9	40
IIc-8	5,0	70	6,6	24
IIc-9	31	6	7,3	21
IIc-12	5,0	84	2,6	173
IIc-13	4,3	95	4,5	134
IIc-14	20	16	7,1	57

Активность фосфатаз в качестве гипоксических цитотоксинов демонстрируется данными на фиг.1 для репрезентативного примера соединения (Ib-7P). Это используется в анализе эксцизии in vivo с опухолью Rif-1, где снабжаемые кислородом опухолевые клетки стерилизуются с использованием 15 Gy облучения, и можно количественно определить цитотоксичность агента против остающихся гипоксических клеток. Неожиданно обнаружено, что активность фосфата Ib-7P превышает активность его исходного спирта (IIb-7) в их соответствующих максимально переносимых дозах (Ib-7P=750 мкмоль/кг; IIb-7=1000 мкмоль/кг). Этот эксперимент демонстрирует, что фосфат Ib-7P более активен против гипоксических клеток, чем эталонный гипоксический цитотоксин тирапазамин, и что он более активен против гипоксических клеток, чем против клеток, снабжаемых кислородом (т.е. при введении после облучения, чем при введении без облучения). Таким образом, соединение Ib-7P действует в качестве селективного в отношении гипоксии цитотоксина in vivo. Несмотря на низкую активность против опухолевых клеток, снабжаемых кислородом, эта активность значимо демонстрирует, что соединение также можно использовать в качестве единственного средства (без облучения).

Заметная активность фосфатов формулы (I) против гипоксических клеток в ксенотрансплантатах опухоли человека проиллюстрирована данными таблицы 4. В этих экспериментах клетки карциномы шейки матки человека SiHa выращивали подкожно на «голых» мышах CD-1 (с иммунодефицитом). Соединения вводили в дозах, соответствующих 75% или 20% максимально переносимой дозы (MTD) через 5 мин после дозы ионизирующего облучения всего тела (гамма-излучение кобальта-60), достаточной для стерилизации клеток, снабжаемых кислородом (15 Gy). Опухоли иссекали через 18 ч, фрагментировали смесью протеаз и выживание клеток определяли, используя клоногенный анализ. Логарифмы уничтожения клеток рассчитывали по разности количества клоногенов на 1 г опухолевой ткани между обработанными и контрольными опухолями. Все испытанные фосфаты проявили большие эффекты против гипоксических клеток при 75% MTD (таблица 4, солонка 4). Этот показатель был селективным для гипоксии, как продемонстрировано меньшим уничтожением клеток в отсутствие облучения. Однако уничтожение клеток одними соединениями было значимым во всех случаях (таблица 4, колонка 5), демонстрируя то, что соединения также обладают противоопухолевой активностью в качестве единственных средств. Активность против гипоксических клеток была также продемонстрирована для тех же соединений в дозах, соответствующих только 20% MTD (таблица 4, колонка 7). У эталонного гипоксического цитотоксина тирапазамина и эталонных азотистых ипритов (мелфалана, хлорамбуцила и циклофосфамида) отсутствовала активность при 20% их соответствующих MTD.

Репрезентативный пример фосфатов формулы (I), в качестве NTR активных цитотоксинов, предоставлен на фиг.2. В анализе задержки роста WiDr in vivo, ксенотрансплантаты, содержащие смеси клеток WiDr^WT и ViDr^NTR, выращивают до 300 мм³ и обрабатывают одной дозой пролекарства в его MTD. Рост опухоли контролируют во времени и животных подвергают эвтаназии, когда средний объем опухоли составляет >1600 мм ³. Данные представлены в виде времени до гибели. Неожиданно наблюдается, что активность фосфата (Ib-7P) превышает активность его исходного спирта (IIb-7) при введении в их соответствующих максимально переносимых дозах (750 мкмоль/кг). Соединение Ib-7P превосходит соединение IIb-7 в отношении (i) времени до первой несостоятельности лечения (77 д, в сравнении с 17 д) и (ii) общей выживаемости (40%, в сравнении с 6%).

На следующем графике показана фармакокинетика сложных эфиров фосфатов Ib-2mP, Ib-7P, Ib-12P и Ic-12P после введения самкам голых мышей CD-1 внутрибрюшинной инъекцией в дозе, соответствующей 75% максимально переносимой дозы. Мононатриевые соли соединений растворяли в забуференном фосфатом солевом растворе с при рН 7,4 с добавлением 1 эквивалента бикарбоната натрия. Серийные образцы крови получали небольшими кровопусканиями из хвостовой вены, и 10 мкл плазмы готовили из каждого взятого образца крови. Белки осаждали добавлением 3 объемов метанола, и концентрации сложных эфиров фосфатов и соответствующих спиртов определяли ВЭЖХ, используя или УФ-, или масс-спектрометрическое проявление.

Данные показывают, что сложные эфиры фосфатов эффективно превращаются у мышей в соответствующие спирты. Спирты представляют собой виды, активируемые нитровосстановлением в гипоксических или экспрессирующих NTR клетках.

Когда в приведенном выше описании делается ссылка на реагенты или целые числа, имеющие их известные эквиваленты, то эти эквиваленты включены в данное описание, как если бы они были представлены отдельно.

Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на определенные варианты осуществления и примеры, следует понимать, что в варианты осуществления и примеры можно внести дальнейшие модификации, не отходя от объема изобретения.