композиции, содержащие частицы резвератрола, и способ их получения (варианты)

Формула изобретения

1. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, характеризующийся тем, что резвератрол диспергируют в органическом растворе сополимера молочной и гликолевой кислот 50:50 в метиленхлориде, образовавшуюся суспензию диспергируют во внешней фазе, содержащей Плюроник F127, удаляют органический растворитель, суспензию очищают центрифугированием или фильтрацией, полученные частицы резвератрола размером 100-3000 нм лиофилизируют.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что дополнительно используют полимеры, в частности Плюроник F127, сополимеры метакриловой кислоты и ее производных (Eudragit RL, RS, L, S) или их комбинации.

3. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, характеризующийся тем, что спиртовый раствор резвератрола и лецитина при их соотношении 1 к 10 соответственно добавляют к 0,1%-ному раствору хитозана, удаляют органический растворитель, суспензию центрифугируют, супернатант, содержащий частицы, лиофилизируют.

4. Способ по п.3, характеризующийся тем, что при получении композиции с резвератролом в качестве лецитина используют лецитин с массовым содержанием фосфатидилхолина 40-80%.

5. Способ по п.3, характеризующийся тем, что при получении композиции с резвератролом в спиртовую фазу дополнительно вводят глицерил капромиристат (Radia 7104 ).

6. Способ по п.3, характеризующийся тем, что после удаления органического растворителя суспензию дополнительно подвергают фильтрованию.

7. Способ по п.3, характеризующийся тем, что размер частиц составляет 100-3000 нм.

8. Композиция, содержащая частицы резвератрола, полученная способом по любому из пп.1-7, и фармацевтически приемлемый разбавитель или наполнитель.

9. Композиция по п.8, отличающиеся тем, что размер частиц находится в диапазоне 100-3000 нм.

10. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что содержание резвератрола находится в диапазоне от 1,5 до 10%.

11. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что в среде, имитирующей кишечный сок:

а. в течение 1 ч высвобождается не менее 6 и не более 15% резвератрола.

b. в течение 3 ч высвобождается не менее 20 и не более 45% резвератрола.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Изобретение относится к фармакологии, медицине и представляет собой способ получения композиций, содержащих частицы резвератрола, с целью его контролируемого высвобождения.

Уровень техники

Резвератрол (3,5,4-trihydroxystilbene) - вещество растительной природы, фитоалексин, содержащийся во многих растительных источниках. Наибольшее его содержание - в кожуре красного винограда и корне растения Polygonum Cuspidatum. На животных моделях показано, что резвератрол обладает антиоксидантными, противовоспалительными, хемопротективными свойствами и может использоваться в профилактике инфаркта миокарда, сахарного диабета, опухолевых заболеваний. Получение резвератрола описано, в частности, в патенте ЕР 1884508. Известно, что резвератрол, во-первых, не полностью всасывается из желудочно-кишечного тракта (на 70%), во-вторых, интенсивно метаболизируется. Решением указанных проблем может стать разработка новой транспортной формы резвератрола.

Частицы являются одним из способов повысить всасывание из желудочно-кишечного тракта веществ с низкой биодоступностью. Так, например, микро- и наносомальные лекарственные формы обеспечивают контролируемое и/или рН-зависимое высвобождение активной субстанции. В качестве вспомогательных веществ для получения таких частиц используют различные вещества, в том числе биодеградируемые и бионедеградируемые полимеры, фосфолипиды, растительные масла.

В патенте US 6967028 описан способ получения нано- и микрочастиц на основе биодеградируемых полимеров размером 0,1-150 нм. В качестве активного компонента заявлено вещество исключительно пептидной природы. Скорость высвобождения активного компонента не указана.

В патенте US 2004247870 описан способ получения микро- и частиц на основе различных носителей, в том числе сополимеров молочной и гликолевой кислот. Лекарственное вещество и полимер-носитель растворяются в смешивающемся с водой растворителе, то есть спектр полимеров ограничивается теми, которые растворимы в этих растворителях, в частности, по описанной технологии затруднительно получение композиций на основе полимеров с высокой молекулярной массой. В качестве активной субстанции резвератрол не заявлен.

В работе Hong Kee Kim с соавторами (2006) продемонстрирована зависимость высвобождения активной субстанции из микрочастиц на основе сополимера молочной и гликолевой кислот от размера пор частиц. Предложенный принцип можно использовать для контроля высвобождения любой субстанции, в том числе резвератрола. Вместе с тем, в указанной работе не описан процесс удаления как органического растворителя, так и водной фазы, т.е. технология получения такой композиции требует дальнейших исследований.

Sonvico, F. с соавторами (2006) предложили способ получения частиц на основе ионного связывания лецитина и хитозана. В качестве единственного модельного лекарственного вещества использовали нерастворимый в воде, но растворимый в спирте прогестерон. Недостатком данного способа является низкая эффективность включения прогестерона, которая не превышала 50%.

В работе Maestrelli, F. с соавторами (2004) описан способ получения частиц на основе хитозана, лецитина, растительного масла (Миглиол 840) для вещества, нерастворимого в воде, но растворимого в спирте - триклозана. Триклозан и Миглиол 840 - единственные описанные активная субстанция и растительное масло для получения микроэмульсий соответственно. Недостатком данного способа является тот факт, что стадия высушивания наноэмульсии не проводилась, что может оказать существенное влияние на стабильность готовой формы.

В патенте WO 2007/112366 описан способ повышения биодоступности резвератрола с использованием различных вспомогательных компонентов, в том числе сополимеров молочной и гликолевой кислот, хитозанов, полиметакрилатов, а также микро- и частиц. Не уточняется состав композиции; не указана возможность использования полиэтиленгликолей, растительных масел, фосфатидилхолина. Не обсуждается профиль высвобождения резвератрола.

Прототипом, наиболее близким к предлагаемому изобретению, является патент US 7316818, в котором описано получение липосомальной формы резвератрола для перорального введения. Недостатком данного способа получения является выбор вспомогательных компонентов, не обеспечивающих стабильность формы в желудочно-кишечном тракте, в связи с чем форму, полученную заявленным способом, рекомендовано использовать в виде таблеток и капсул с защитной оболочкой.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом является получения частиц с резвератролом с высоким выходом резвератрола и с контролируемым его высвобождением.

При использовании так называемого метода «эмульгирования - диффузии» полимер или смесь полимеров растворяют в органическом растворителе, резвератрол диспергируют в образовавшемся растворе с помощью ультразвука, после чего дисперсию гомогенизируют в водной фазе, содержащей поверхностно-активное вещество.

В качестве полимеров можно использовать все биосовместимые полимеры: сополимеры молочной и гликолевой кислот с соотношением звеньев от 100:0 к 0:100 и с молекулярной массой от 2000 кДа до 2000000 кДа, предпочтительно с соотношением звеньев 50:50 и с характеристической вязкостью в гексафторизопропаноле 0,37; поликапролактоны; сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники); сополимеры метакриловой кислоты и ее производных (Eudragit RL, RS, L, S), а также их комбинации.

В качестве органической фазы можно использовать летучие, не смешивающиеся с водой органические растворители: дихлорметан, хлороформ, этилацетат, а также смесь смешивающихся и не смешивающихся с водой растворителей, таких как ацетон, этанол, изопропанол. Предпочтительно использование дихлорметана.

В качестве поверхностно-активного вещества водной фазы используют сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники), хитозаны, поливиниловые спирты. Предпочтительно использование Плюроников, особенно предпочтительно использование Плюроника F127.

При использовании метода соосаждения резвератрол и вспомогательные вещества растворяют в органическом растворителе, смешивающемся с водой, и образовавшийся раствор смешивают с водной фазой, содержащей поверхностно-активное вещество.

В качестве растворителя, смешивающегося с водой, используют любые нетоксичные летучие и нелетучие растворители, такие как диметилсульфоксид, ацетон, этанол, изопропанол, бензиловый спирт. Предпочтительно использовать этанол.

В качестве вспомогательных веществ органической фазы используют любые биосовместимые вспомогательные вещества, в частности лецитины с массовым содержанием фосфатидилхолина от 40 до 100%, триацилглицеролы с длиной боковой цепи от 4 до 22 атомов углерода, с длиной боковой цепи 8-10 атомов углерода, их комбинации.

В качестве водной фазы можно используют воду, раствор сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники), а также раствор хитозана с молекулярной массой от 2 до 200 кДа, предпочтительно с молекулярной массой от 5 до 100 кДа, еще более предпочтительно с молекулярной массой 20-50 кДа.

Изобретение касается также частиц, получаемых заявленными способами. Частицы имеют размер в диапазоне 100 нм-3 мкм, содержание резвератрола в готовой форме составляет 2-10%. В среде, имитирующей кишечный сок, в течение 3 часов высвобождается до 45% резвератрола.

Краткое описание чертежей

Ф.1 - получение частиц с резвератролом на основе полимеров PLGA, Eudragit RL, Pluronic F127.

Фиг.2 - получение частиц с резвератролом на основе лецитина, хитозана, растительных масел.

Фиг.3 - высвобождение резвератрола в среде, имитирующей кишечный сок (фосфатный буфер, рН 7.2).

Фиг.4 - размер и распределение частиц по размеру.

Примеры осуществления изобретения.

Пример 1. Способ получения композиций резвератрола в виде частиц из сополимеров молочной и гликолевой кислот.

Во флакон вместимостью 10 мл взвешивали 10-20 мг резвератрола, 50-200 мг сополимера молочной и гликолевой кислот 50:50 с характеристической вязкостью в гексафторизопропаноле 0.37,0-100 мг Плюроника F127, 0-200 мг Eudragit RL, 1-2 г дихлорметана (фиг.1). Флакон герметично закрывали подходящей пробкой, перемешивали на шейкере до растворения полимеров. Суспензию подвергали первичной гомогенизации (Гомогенизатор ультразвуковой, Bandelin Sonopuls, UW 2070, максимальная выходная мощность 70 Вт) - 30 секунд, 10% от максимальной мощности. После этого суспензию автоматической пипеткой количественно переносили в 20 мл водного раствора Pluronic F127 1% и подвергали второй гомогенизации - 1 минута, 100% от максимальной мощности. Хлористый метилен удаляли при перемешивании на магнитной мешалке (400 оборотов в минуту) в течение 3-4 часов. Суспенизию а) центрифугировали 20000 оборотов в минуту, удаляли супернатант, суспендировали осадок в 1-2 мл дистиллированной воды, лиофилизовали; б) фильтровали через бумажный фильтр с размером пор 3 мкм, фильтрат лиофилизовали.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет от 1 до 5%. Средний размер частиц составляет от 180 до 510 нм (фиг.4).

Пример 2. Способ получения частиц из лецитина и хитозана, содержащих резвератрол.

Готовили раствор, содержащий 9.36 мг резвератрола, 93,6 мг лецитина (Lipoid S80 или Lipoid S40), в качестве растворителя использовали этанол (фиг.2). При необходимости использовали легкое нагревание - до 40 градусов. Объем раствора составлял 2 мл. Затем при комнатной температуре спиртовую фазу автоматической пипеткой по каплям добавляли к 40 мл 0.1% раствора хитозана с ММ 29,7 kDа и степенью дезацетилирования 79%. Спирт удаляли при перемешивании на магнитной мешалке, после чего суспензию подвергали центрифугированию 3000 об/мин 5 минут для осаждения крупных частиц и не связанного с частицами резвератрола. Супернатант отделяли и лиофилизовали. Частицы, полученные заявленным способом, содержат 3- 6% резвератрола, что определено спектрофотометрически.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет от 3 до 6%. Средний размер частиц составляет от 800 до 1000 нм.

Пример 3. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, на основе лецитина, хитозан и жидкого растительного масла.

При легком нагревании (до 40 градусов) готовили спиртовую фазу: 8.9 мг резвератрола, 35.7 мг лецитина Lipoid S80, 130 мг глицерол-три-С8-С10 (Radia 7104), общий объем этанольного раствора - 2 мл (фиг.2). Затем при комнатной температуре спиртовую фазу автоматической пипеткой по каплям вводили в 20 мл 0.1% раствора хитозана. Спирт удаляли при перемешивании на магнитной мешалке, после чего суспензию подвергали центрифугированию 3000 об/мин 5 минут для осаждения крупных частиц и не связанного с частицами резвератрола. Супернатант отделяли и лиофилизовали.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет около 2%. Размер частиц - 3000 нм.

Пример 4. Высвобождение резвератрола в среде, имитирующей кишечный сок.

Точную навеску образца (10-20 мг) суспендировали в фосфатном буфере (рН 7,2) до концентрации резвератрола 10-20 мг/л и инкубировали в термостате-шейкере (37°С, перемешивание 150 оборотов в минуту). Через 1 и 3 часа аликвоту образца отбирали; частицы и высвободившийся резвератрол отделяли ультрафильтрацией (микроцентрифужные фильтры Microcon 10 kDa, Millipore, 13200 оборотов в минуту). Фильтрат лиофильно высушивали, количество резвератрола определяли спектрофотометрически в диметилсульфоксиде при длине волны 328 нм (фиг.3).

Составы 1-7 обеспечивают контролируемое высвобождение резвератрола, в течение 1 часа и 3 часов высвобождается от 6% до 15% и от 20% до 45% соответственно.

Пример 5. Определение размера частиц.

Навеску лиофилизованных образцов составов 1-7 взбалтывали в дистиллированной воде, фильтровали через обеззоленный фильтр "белая лента"; размер частиц в фильтрате определяли методом фотонной корреляционной спектроскопии в дистиллированной воде (наносайзер Coulter N4MD, Coulter Electronics, U.K) при следующих рабочих параметрах прибора: угол рассеяния 90 градусов, температура 25 градусов, вязкость среды 0,01 пуаз, показатель преломления среды 1,333. Приведенные в примерах результаты отражают размер основного пика образца (фиг.4).