штамм bifidobacterium bifidum ov-19, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств
Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них A23C9/12 сброженные молочные продукты; обработка с использованием микроорганизмов и(или) ферментов A61K35/74 бактерии A23L1/29 изменение питательных свойств пищевых продуктов; диетические продукты A61K8/99 из микроорганизмов |
Автор(ы): | Алешкин Владимир Андрианович (RU), Амерханова Аделаида Михайловна (RU), Афанасьев Станислав Степанович (RU), Алешкин Андрей Владимирович (RU), Жиленкова Ольга Геннадьевна (RU), Воронина Ольга Львовна (RU), Субботина Марина Евгеньевна (RU), Кунда Марина Сергеевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2008-07-15 публикация патента:
10.12.2009 |
Штамм Bifidobacterium bifidum OV-19 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, находящегося на грудном вскармливании, депонирован и хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора под № 216. Штамм высокотехнологичен, накапливает биомассу на питательных средах в короткие сроки с высокой концентрацией бифидобактерии, обладает кислотообразующими и антагонистическими свойствами в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры, устойчив к широкому спектру антибиотиков, повышенной кислотности. Сквашивает молоко с образованием ровного сгустка. Нетоксичен. Это позволяет использовать штамм В. bifidum OV-19 в производстве бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, обеспечивающих пробиотический эффект и нормализацию микробиоценозов организма человека, в т.ч. желудочно-кишечного и урогенитального трактов, кожных и слизистых покровов и расширяет арсенал средств коррекции микрофлоры человеческого организма. 4 табл.
Формула изобретения
Штамм Bifidobacterium bifidum OV-19 коллекционный номер № 216, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии, пищевой, косметической и медицинской промышленности и может быть использовано в производстве бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств.
Средства, содержащие в своем составе бифидобактерии с пробиотическими свойствами, предназначены для нормализации микрофлоры различных биотопов человеческого организма, поврежденных под влиянием неблагоприятных воздействий экологических факторов, перенесенных заболеваний, длительного приема антибиотиков и прочих лекарственных препаратов, лучевой и химиотерапии и многих других причин [1, 4].
Эффективность лечебных продуктов и биопрепаратов зависит прежде всего от характеристик штамма-продуцента, его технологических свойств и специфической активности. Большой ассортимент производственных штаммов, обладающих ценными медико-биологическими свойствами, делает возможным конструирование новых средств коррекции микрофлоры как моно-, так и многокомпонентных, способных обеспечивать высокую колонизационную резистентность микробиоценоза желудочно-кишечного тракта, кожных покровов, урогенитальной сферы и устранять дисбиотические нарушения.
Вместе с тем, рационализация подхода к конструированию и применению новых средств коррекции микрофлоры должна основываться на закономерностях, связанных с процессами стабилизации нормобиоценоза, в особенности, учитывать такое явление, как аутогенная сукцессия - последовательная смена микробиоценозов в процессе онтогенеза, в результате которой происходит вытеснение одних видов микроорганизмов другими вследствие их биоэкологических преимуществ в данных условиях. При этом образуется сукцессионный ряд - серия с конечным формированием относительно стабильного биоценоза. Данная закономерность прослеживается в смене видового состава бифидофлоры в процессе онтогенеза, совпадающей с критическими периодами развития в детском и подростковом возрасте; в то же время у взрослых людей состав бифидофлоры относительно стабилен [8].
Исследования видового состава бифидофлоры, проводившиеся ранее с применением биохимических методов идентификации, позволили сделать заключение о том, что бифидобактерии в организме человека представлены пятью основными видами - Bifidobacterium bifidum, В. longum, В. adolescentis, В. breve и В. infantis (патенты РФ 1347221, 849779, 2108383, 2152993, 863639, 2120991, 2078814, 2111248). При этом анализ полученных данных показал, что виды В. bifidum и В. longum выявляются у здоровых людей всех возрастных групп; вид В. adolescentis свойственен только взрослым людям и детям старшего возраста; у пожилых людей он становится преобладающим. Виды В. infantis и В. breve обнаруживаются только у детей грудного возраста [3, 6].
Анализ ДНК, начатый в 70-е годы, позволил идентифицировать новые виды бифидобактерии (В. catenulatum, В. pseudocatenulatum, В. dentium, В. animalis, В. angulatum.) и расширить представления о видовом составе бифидофлоры человека и закономерностях ее становления. [2, 5, 8, 9].
Виды В. catenulatum, В. pseudocatenulatum, В. dentium, В. animalis, В. angulatum характерны для микробиоценоза детей младшего возраста. Вместе с тем, уже на новом методическом уровне подтверждены данные о том, что виды В. bifidum и В. longum остаются доминантными представителями бифидофлоры человека во все возрастные периоды жизни. Это означает, что оптимальная формула пробиотического средства должна включать как «подвижную», меняющуюся в процессе онтогенеза часть, которая комплементарна микробиоценозу определенной возрастной категории людей, так и «консервативную», состоящую из видов, стабильно сохраняющихся в процессе онтогенеза. В связи с этим селекция перспективных штаммов бифидобактерии, относящихся к видам В. bifidum и В. longum, как универсальных и наиболее распространенных, представляет особый интерес при создании средств коррекции микрофлоры.
Задачей настоящего изобретения является получение штамма В. bifidum OV-19, обладающего антагонистической активностью, устойчивостью к внешним воздействиям и средствам антибактериальной терапии, высокой кинетикой накопления биомассы на питательных средах при промышленном выращивании.
Штамм В. bifidum OV-19 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, находившегося на грудном вскармливании, и депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора под № 216.
Заявляемый штамм может быть использован при производстве бактерийных препаратов в различных формах (капсулы, таблетки, суспензии, суппозитории, аэрозоли), биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, в том числе детского питания, соков, напитков и т.д. Также штамм В. bifidum OV-19 может быть применен в производстве гигиенических и косметических средств, например кремов, гелей, косметических масок.
Техническим результатом заявленного изобретения является получение штамма В. bifidum OV-19, который может быть использован в качестве биологически активного начала пробиотической направленности в составе бактерийных препаратов, биологически активных добавок, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств. Штамм В. bifidum OV-19 в ходе технологического процесса на производственных средах в короткие сроки накапливает биомассу с высоким содержанием бифидобактерии, обладает антагонистической активностью по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, широким спектром устойчивости к антибактериальным средствам, кислой среде, нетоксичен, что обеспечивает активную колонизацию биотопа и восстановление резидентной микрофлоры.
Применение данного штамма расширит номенклатуру разрабатываемых бифидосодержащих средств коррекции микрофлоры человека и позволит создать формулу симбиотической ассоциации видов бифидобактерии, наиболее приближенную к составу микробиоценоза кишечника современного человека.
Заявляемый штамм обладает следующими свойствами.
Морфологические свойства
Клетки штамма В. bifidum OV-19 представляют собой Грам+полиморфные, бесспоровые неподвижные тонкие, слегка изогнутые палочки с утолщениями на обоих концах, расположенные одиночно, попарно под углом в 60° друг к другу или в виде тетраэдра.
В полужидких питательных средах клетки растут по всему объему, кроме зоны аэробиоза; отдельно выросшие колонии через 16-24 часа роста имеют форму гвоздиков.
Физиолого-биохимические свойства
Облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37-38°С. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду до pH 3,5-4,0. Ферментирует галактозу, эскулин, раффинозу, арабинозу, ксилозу. Не ферментирует мальтозу, фруктозу, лактозу, мелецитозу, сахарозу, салицин, трегалозу, маннитол, рамнозу, маннозу, целлобиозу, сорбитол. На уреазу, нитраты и индол - тест отрицательный.
Генотипирование штамма B. bifidum OV-19 осуществлялось на основе амплификации, клонирования и последующего секвенирования фрагментов генов, кодирующих 16S рибосомальную РНК и трансальдолазу. Прочитанные последовательности ДНК зарегистрированы в GenBank под номерами EU 272013 и EU 272019.
Культуральные свойства
Штамм активно накапливает биомассу на различных производственных средах до высоких показателей содержания КОЕ/мл бифидобактерии и органических кислот (таблица 1). Логарифмическая фаза роста заканчивается к 16-24 часам.
Таблица 1. | ||
Показатели содержания бифидобактерии и органических кислот при культивировании штамма B. bifidum OV-19 на разных средах выращивания | ||
Питательная среда | КОЕ/мл | 0T |
Среда для культивирования бифидобактерии (БС) | 5,0×109 | 174 |
МРС | 5,6×109 | 205 |
Гидролизатно-молочная среда | 6,0×10 9 | 210 |
Печеночная среда | 5,8×109 | 210 |
Молоко восстановленное обезжиренное | 5,0×10 8 | 90 |
Данные, представленные в таблице 1, показывают, что штамм В. bifidum OV-19 накапливает на производственных средах биомассу бифидобактерии с содержанием КОЕ/мл не ниже lg 9. При этом отмечаются также высокие показатели титруемой кислотности, что говорит об активном накоплении органических кислот. Молоко сквашивает к 18 часам культивирования с образованием ровного без сыворотки сгустка с кисломолочным запахом и вкусом. При культивировании в молоке значение кислотности составляет не более 90°Т.
В таблице 2 представлены данные культивирования штамма В. bifidum OV-19 в течение 96 часов на обезжиренном молоке и бифидум-среде.
Таблица 2. | ||||
Показатели культивирования штамма В. bifidum OV-19 в течение 96 часов | ||||
Время выращивания после посева, (ч) | Выращивание на молоке | Выращивание на БС среде | ||
0T | КОЕ/мл | 0T | КОЕ/мл | |
0 | 18 | 5,0×106 | 34 | 2,1×10 6 |
24 | 85 | 2,0×108 | 168 | 5,0×10 9 |
36 | 90 | 2,0×108 | 178 | 4,6×10 9 |
48 | 90 | 2,1×108 | 188 | 4,9×10 9 |
72 | 96 | 1,8×108 | 195 | 4,8×10 9 |
96 | 1,8×10 8 | 201 | 4,8×109 |
Данные, представленные в таблице 2, демонстрируют, что при длительном культивировании штамма В. bifidum OV-19 при нарастании содержания органических кислот в культуральной жидкости и обезжиренном молоке не происходит снижения содержания жизнеспособных клеток бифидобактерии, что говорит о высокой устойчивости штамма B bifidum OV-19 к кислой среде.
Таким образом, из приведенных данных видно, что штамм В. bifidum OV-19 отличается высокой технологичностью, при культивировании на производственных средах накапливает биомассу бифидобактерии и органические кислоты в короткие сроки и с высокими показателями. Устойчив к кислой среде. Сквашивает молоко, что делает возможным изготовление на его основе ферментированных кисломолочных продуктов с ценными лечебно-профилактическими и органолептическими свойствами.
Антагонистическая активность штамма В. bifidum OV-19 изучалась методом отсроченного антагонизма с тест-культурами условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (таблица 3).
Таблица 3. | ||
Антагонистическая активность штамма В. bifidum OV-19 | ||
№ | Штамм тестируемого микроорганизма | Зона задержки роста в присутствии штамма В. bifidum OV-19, мм |
1 | Staphylococcus aureus АТСС 653 8-Р | 15±4 |
2 | Shigella flexneri 337 | 19±3 |
3 | Shigella sonnei 177 | 18±5 |
4 | Proteus vulgaris 1274 | 18±3 |
5 | Escherichia coli 157 | 12±3 |
Результаты, представленные в таблице 3, показали, что при нанесении тест-культур на суточную культуру штамма В. bifidum OV-19 на агаризованной среде (метод перпендикулярных штрихов), их рост подавляется. Размер зон задержки роста свидетельствует о том, что штамм В. bifidum OV-19 проявляет высокие антагонистические свойства в отношении тестируемых культур.
Чувствительность к антибиотикам штамма В. bifidum OV-19 изучалась на модели 32 антимикробных препаратов, применяемых в медицинской практике. Изучение проводили дискодиффузионным методом в интерпретации, разработанной в лаборатории биологии бифидобактерии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского с учетом рекомендаций МУК 4.2.1890-04 [7]. Полученные данные представлены в таблице 4.
Таблица 4 | ||||||
Антибиотикочувствительность штамма В. bifidum OV-19 | ||||||
№ | Наименование антибиотика | Интерпретация зон, мм | Содержание активного вещества в диске, мкг | Диаметр зоны ингибирования роста, мм | ||
Устойчив | Промежуточно устойчив | Чувствителен | ||||
1 | Бензилпенициллин | 19 | 20-27 | 28 | 10 | 30±2 |
2 | Оксациллин | 10 | 11-13 | 14 | 10 | 15±0 |
3 | Ампициллин | 10 | 11-14 | 16 | 10 | 25±2 |
4 | Карбенициллин | 14 | 15-18 | 19 | 25 | 40±0 |
5 | Азлоциллин | 13 | 14-16 | 16 | 75 | 28±2 |
6 | Цефалотин | 14 | 15-18 | 19 | 30 | 36±2 |
7 | Цефалексин | 14 | 15-18 | 19 | 30 | 35±0 |
8 | Цефазолин | 14 | 15-18 | 19 | 30 | 25±2 |
9 | Цефтазидим | 14 | 15-17 | 18 | 30 | 25±2 |
10 | Цефотаксим | 14 | 15-20 | 21 | 30 | 35±2 |
11 | Имипенем | 13 | 14-15 | 16 | 10 | 35±0 |
12 | Стрептомицин | 16 | 17-19 | 20 | 30 | 15±0 |
13 | Неомицин | 12 | 13-16 | 17 | 30 | 10±0 |
14 | Канамицин | 14 | 15-18 | 19 | 30 | 0±0 |
15 | Гентамицин | 12 | 13-14 | 15 | 10 | 8±0 |
16 | Амикацин | 14 | 15-16 | 17 | 30 | 0±0 |
17 | Тетрациклин | 16 | 17-21 | 22 | 30 | 28±0 |
18 | Доксициклин | 15 | 16-19 | 20 | 10 | 35±0 |
19 | Эритромицин | 17 | 18-21 | 22 | 15 | 30±0 |
20 | Азитромицин | 13 | 14-17 | 18 | 15 | 25±0 |
21 | Кларитромицин | 13 | 14-17 | 18 | 15 | 35±0 |
22 | Рокситромицин | 13 | 15-18 | 19 | 30 | 35±0 |
23 | Линкомицин | 19 | 20-23 | 24 | 15 | 35±0 |
24 | Клиндамицин | 14 | 15-20 | 21 | 2 | 35±2 |
25 | Ванкомицин | 14 | 15-16 | 17 | 30 | 25±2 |
26 | Хлорамфеникол (левомицитин) | 15 | 16-18 | 19 | 30 | 35±2 |
27 | Рифампицин | 12 | 13-15 | 16 | 5 | 35±0 |
28 | Полимиксин | 11 | 12-14 | 15 | 300ЕД | 0±0 |
29 | Налидиксовая кислота | 12 | 13-17 | 18 | 30 | 8±0 |
30 | Ципрофлоксацин | 15 | 16-20 | 21 | 5 | 15±3 |
31 | Пефлоксацин | 14 | 15-21 | 22 | 10 | 8±0 |
32 | Ломефлоксацин | 18 | 19-21 | 22 | 10 | 20±2 |
Как видно из таблицы 4, штамм устойчив к полимиксину, амикацину, канамицину, неомицину, стрептомицину, гентамицину, ципрофлоксацину, пефлоксацину, налидиксовой кислоте, промежуточно устойчив к оксациллину, ломефлоксацину. К остальным антибиотикам, используемым в исследовании, штамм чувствителен.
Безвредность
В опыте изучения острой токсичности штамма В. bifidum OV-19 показана его полная безвредность: при введении белым мышам per os микробной взвеси бифидобактерии в количестве 5×107 КОЕ на животное, гибели мышей не отмечено.
Таким образом, из приведенных данных видно, что новый штамм В. bifidum OV-19 отличается высокой технологичностью, активно наращивает биомассу бифидобактерии на производственных средах с содержанием бифидобактерии не ниже 109 КОЕ/мл, образует в процессе культивирования органические кислоты, обладает высокой антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам, устойчивостью к широкому спектру антибиотиков, устойчив к повышенной кислотности. Сквашивает молоко с образованием сгустка. Безвреден при введении лабораторным животным.
Представленные данные изучения штамма В. bifidum OV-19 позволяют сделать заключение об его перспективности при использовании как основы для бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, а также средств гигиенического и косметического назначения.
Пример 1. Использование штамма В. bifidum OV-19 для получения биологически активной добавки к пище в жидкой форме.
1-й пассаж: лиофилизированную стартерную культуру штамма В. bifidum OV-19 регидратируют средой для культивирования либо физиологическим раствором в 1 мл, и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 107-8 раз. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 48 часов.
2-й пассаж: выросшую культуру из разведения в 106-8 раз в объеме 5% вводят в среду накопления (1 л) и культивируют 16-24 часа при 37-38°С (лабораторная закваска).
3-й пассаж: лабораторную закваску вносят в среду накопления (20 литров) в объеме 5% и инкубируют при 37-38°С (производственная закваска).
4-й пассаж: производственную закваску вносят в объеме 3-5% в аппарат для культивирования со стерильной гидролизатно-молочной средой следующего состава (в расчете на 1 литр среды): гидролизат молока - 0,5 л, пептон - 2 г, лактоза - 10 г, хлористый натрий - 5 г, цистеин - 0,2 г, агар-агар - 1 г, дистиллированная вода - 0,5 литра; pH среды - 7,0-7,2. Проводят культивирование в течение 16-24 часа при температуре 37-38°С. Выросшая биомасса представляет собой жидкий концентрат бифидобактерии с содержанием бифидобактерии не менее 109 КОЕ/мл, который можно непосредственно использовать в качестве биологически активной добавки лечебно-профилактического назначения. Готовый продукт разливают по 100 мл во флаконы и герметично укупоривают.
Пример 2. Использование штамма В. bifidum OV-19 в качестве ингредиента неферментированного пищевого продукта.
1-й пассаж: лиофилизированную стартерную культуру штамма В. bifidum OV-19 регидратируют средой для культивирования либо физиологическим раствором в 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 10 7-8 раз. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 48 часов.
2-й пассаж: выросшую культуру из разведения в 106-8 раз в объеме 5% вводят в среду накопления (0,2 л) и культивируют 16-24 часа при 37-38°С (лабораторная закваска).
3-й пассаж: лабораторную закваску вносят в среду накопления (4 л) в объеме 5% и инкубируют при 37-38°С (производственная закваска).
4-й пассаж: производственную закваску вносят в гидролизатно-молочную среду в количестве 5% к объему среды и культивируют при 37-38°С в течение 24 часов. Готовая биомасса содержит не менее 109 КОЕ/мл бифидобактерии.
Готовая биомасса служит для обогащения пищевых продуктов. Ее вносят в молоко, соки, детское питание, мороженое и другие продукты, перемешивают и разливают или фасуют в емкости, получая продукт с концентрацией бифидобактерии 106-7 КОЕ/мл или КОЕ/г.
Пример 3. Использование штамма В. bifidum OV-19 для получения бактерийного препарата.
1-й пассаж: лиофилизированную стартерную культуру штамма В. bifidum OV-19 регидратируют средой для культивирования либо физиологическим раствором в 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 107-8 раз. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 48 часов.
2-й пассаж: выросшую культуру из разведения в 106-8 раз в объеме 5% вводят в среду накопления (0,2 л) и культивируют 16-24 часа при 37-38°С (лабораторная закваска).
3-й пассаж: лабораторную закваску вносят в среду накопления (4 л) в объеме не более 5% и инкубируют при 37-38°С (производственная закваска).
4-й пассаж: производственную закваску вносят в казеиново-дрожжевую среду в количестве 5% к объему среды и культивируют при 37-38°С в течение 24 часов. Готовая биомасса содержит не менее 10 9 КОЕ/мл бифидобактерии.
К готовой биомассе добавляют сахарозожелатиновую защитную среду высушивания в объеме 10-15% и 15-20% обезжиренного молока. Полученную суспензию разливают по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при 40-45°С и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат имеет не менее 108 КОЕ/г живых клеток бифидобактерии.
Пример 4. Использование штамма В. bifidum OV-19 для получения капсулированной формы биологически активной добавки к пище.
Для капсулирования готовят смесь, в которую входят следующие ингредиенты: 1 часть сухой биомассы, содержащая не менее 109 КОЕ/г бифидобактерии, 6 частей инулина и 3 части яблочного пектина. К смеси, из расчета получившейся массы добавляют 0,5% аэросила и 1% аскорбиновой кислоты. После тщательного перемешивания проводят капсулирование в капсулы № 0 по 0,4 г. В 1 г БАД к пище содержится не менее 10 8 КОЕ жизнеспособных бифидобактерии.
Пример 5. Использование штамма В. bifidum OV-19 для получения гигиенических и косметических средств.
Сухую биомассу бифидобактерии штамма В. bifidum OV-19 с содержанием бифидобактерии не менее 109 КОЕ/г вводят в состав питательного крема из расчета 1 г на 100 г крема.
Пример 6. Использование штамма В. bifidum OV-19 для получения кисломолочного продукта.
1-й пассаж: лиофилизированную стартерную культуру штамма В. bifidum OV-19 регидратируют средой для культивирования либо физиологическим раствором в объеме 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до
107-8 раз. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 48 часов.
2-й пассаж: выросшую культуру из разведения в 106-8 раз в объеме 5% вводят в среду накопления (0,2 л) и культивируют 16-24 часа при 37-38°С (лабораторная закваска).
3-й пассаж: лабораторную закваску вносят в среду накопления (4 л) в объеме не более 5% и инкубируют при 37-38°С (производственная закваска).
4-й пассаж: производственную закваску вносят в стерильное обезжиренное молоко в количестве 5% к его объему и культивируют при 37-38°С до сквашивания (в течение 16-18 часов). Готовый продукт охлаждают и разливают по 0,2 л в пластиковые стаканчики и укупоривают крышками из металлической фольги. Продукт содержит не менее 108 КОЕ/мл бифидобактерии.
Список литературы
1. Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. / Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. М., ГЭОТАР-Медиа, 2007, с.300.
2. Воронина О.Л., Субботина М.Е., Лунин В.Г., Жиленкова О.Г., Амерханова A.M. /Дифференцирование видов бифидобактерии на основе секвенирования фрагментов генов 16S рРНК и трансальдолазы. Научно-практический журнал «Клиническое питание», 2007, № 1-2, с.31.
3. Гончарова Г.И., Вилыпанская Ф.Л., Ж. микробиол., 1968, № 7, с.55.
4. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. / Функциональное питание. М., Грант, 2002, с.295.
5. Карзанова М.Е., Воронина О.Л., Лунин В.Г., Жиленкова О.Г., Амерханова A.M. /Определение видовой принадлежности штаммов бифидобактерии на основе секвенирования фрагментов генов 16S рРНК и трансальдолазы. Научно-теоретический журнал «Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук», 2006, № 5, с.9-12.
6. Козлова Э.П., Курносова Н.А., Феклисова Л.В. / Теоретические и медико-биологические аспекты использования различных видов бифидобактерии в составе средств профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Сб. научных трудов МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, 1986, с.64-69.
7. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04, 2004.
8. Соколова К.Я., Соловьева И.В. / Дисбактериозы. Теория и практика. Н.Новгород, 1999, 198 с.
9. Шкопоров А.Н., Ефимов Б.А., Володин Н.Н., Кафарская Л.И. / Бифидобактерии: традиционный взгляд и современные генетические исследования. Журнал «Вопросы практической педиатрии», 2007, т.2, № 5, с.76-79.
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
Класс A23C9/12 сброженные молочные продукты; обработка с использованием микроорганизмов и(или) ферментов
Класс A23L1/29 изменение питательных свойств пищевых продуктов; диетические продукты
Класс A61K8/99 из микроорганизмов