производные 2-фенокси и 2-фенилсульфонамида с ссr3 антагонистической активностью для лечения астмы и других воспалительных или иммунологических заболеваний

Формула изобретения

1. Производное бензолсульфонамида, имеющее формулу (I), его таутомерные или стереоизомерные формы или его физиологически приемлемые соли:



где Х представляет О или S;

R¹ представляет водород или галоген;

R² представляет водород или галоген;

R³ представляет, нитро или циано;

R⁴ представляет

,

где R⁷¹ представляет водород;

R⁷² представляет водород; и

Z¹ представляет -[CH₂]_р-, где р равно целому числу 2.

2. Производное бензолсульфонамида формулы (I), его таутомерные или стереоизомерные формы или его физиологически приемлемые соли по п.1, где R⁴ представляет:



где R⁷² представляет водород.

3. Производное бензолсульфонамида по п.1, имеющее формулу (I-b), его таутомерные или стереоизомерные формы или его физиологически приемлемые соли:



где R¹ представляет фтор, хлор, бром или йод;

R² представляет фтор, хлор, бром или йод;

R³ представляет циано;

R ⁴ представляет



где R⁷¹ представляет водород;

R⁷² представляет водород;

Z¹ представляет -[CH₂]_р-, где р равно целому числу 2.

4. Производное бензолсульфонамида по п.3, его таутомерные или стереоизомерные формы или его физиологически приемлемые соли,

где R¹ представляет фтор, хлор или бром;

R² представляет фтор, хлор или бром;

R ³ представляет циано;

R⁴ представляет



где R⁷² представляет водород.

5. Производное бензолсульфонамида, его таутомерные или стереоизомерные формы или его физиологически приемлемые соли по любому из пп.1-4, где указанное производное бензолсульфонамида выбирают из группы, включающей:

(R)-N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамид;

(S)-N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамид;

N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-2-(3,5-дихлорфенилсульфанил)-5-нитробензолсульфонамид.

6. Лекарственное средство, проявляющее антагонистическую активность по отношению к CCR3, содержащее производное бензолсульфонамида формулы (I), его таутомерные или стереоизомерные формы, или его физиологически приемлемую соль по п.1 в качестве активного ингредиента.

7. Лекарственное средство по п.6, также содержащее один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

8. Применение производного бензолсульфонамида, его таутомерией или стереоизомерной формы, или его физиологически приемлемой соли по пп.1-5 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики расстройств или заболеваний, связанных с активностью CCR3.

9. Применением по п.8, где указанное расстройство или заболевание выбирают из группы, включающей астму, ринит, аллергические заболевания и аутоиммунные патологии.

10. Применение по п.8, где указанное расстройство или заболевание выбирают из группы, включающей ВИЧ, легочную гранулему и болезнь Альцгеймера.

11. Применение по п.8, где указанное производное бензолсульфонамида, его таутомерную или стереоизомерную форму, или его физиологически приемлемую соль смешивают с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

12. Лекарственное средство по п.7, где эксципиент представляет собой инертное вещество, такое, как носитель, разбавитель, вкусовой агент, подсластитель, лубрикат, солюбилизатор, суспендирующий агент, связующий агент, дезинтегрирующий агент для таблеток и инкапсулирующий материал.

13. Применение по п.11, где эксципиент представляет собой инертное вещество, такое как носитель, разбавитель, вкусовой агент, подсластитель, лубрикат, солюбилизатор, суспендирующий агент, связующий агент, дезинтегрирующий агент для таблеток и инкапсулирующий материал.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Данное изобретение относится к производному бензолсульфонамида, которое пригодно в качестве активного ингредиента фармацевтических препаратов. Производные бензолсульфонамида данного изобретения обладают антагонистической активностью по отношению к CCR3 (рецептору хемокина 3 СС типа) и могут быть использованы для профилактики и лечения заболеваний, связанных с активностью CCR3, в частности для лечения астмы, атопического дерматита, аллергического ринита и других воспалительных/иммунологических заболеваний.

Предшествующий уровень техники

Хемокины представляют собой хемотактические цитокины, основной функцией которых является миграция клеток воспаления, которые экспрессируют релевантные рецепторы хемокина на своей поверхности, к местам воспаления, и активация клеток воспаления. Существует два класса хемокинов, С-Х-С (.альфа.) и С-С (i), в зависимости от того, разделены ли первые два цистеина одной аминокислотой (С-Х-С) или являются соседними (С-С).

Эотаксин, один из С-С семейства хемокинов, является 8,4 кДа (74 аминокислоты) полипептидом и связывается только с рецептором CCR3 с высокой аффинностью. In vitro и in vivo эотаксин вызывает хемотаксис клеток воспаления, экспрессирующих CCR3 [Elsner J., Hochstetter R., Kimming D. and Kapp A.: Human eotaxin represents a potent activator of the respiratory burst of human eosinophils. Eur. J. Immunol., 26: 1919-1925, 1996].

Рецептор хемокина CCR3 представляет собой сопряженный с G белком седьмой трансмембранный домен-рецептор (GPCR), который связывается с известными лигандами, в дополнение к эотаксину, включающему эотаксин-2 (CCL24), RANTES (CCL5), MCP-3 (CCL7) и MCP-4 (CCL13). CCR3 экспрессируется в клетках воспаления, релевантных к патологии хронической астмы. Такие клетки воспаления включают эозинофилы [Sabroe I., Conroy D.M., Gerard N.P., Li Y., Collins P.D., Post T.W., Jose P.J., Williams T.J., Gerard C.J., Ponath P.D. J. Immunol. 161 : 6139-6147, 1998], базофилы [Uguccioni M., Mackay C.R., Ochensberger B., Loetscher P., Rhis S., LaRosa G.J., Rao P., Ponath P.D., Baggiolini M., Dahinden C.A. J. Clin. Invest. 100: 1137-1143, 1997], клетки Th2 [Sallusto F., Mackay C.R., Lanzavecchia A. Science. 277: 2005-2007, 1997], альвеолярные макрофаги [Park I.W., Koziel H., Hatch W., Li X., Du B., Groopman J.E. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 20: 864-71, 1999] и мастоциты [Oliviera S.H. and Lukacs N.W. Inflamm. res. 50: 168-174, 2001]. Также было описано, что BEAS-2B, линия клеток эпителия, стимулированная TNF- и IFN- , экспрессирует CCR3 [Stellato C., Brummet M.E., Plitt J.R., Shahabuddin S., Baroody F.M., Liu M., Ponath P.D. and Beck L.A. J. Immunol., 166: 1457-1461, 2001].

На животных моделях мыши c выбитым эотаксином показали пониженную эозинофилию после проверки иммунности к антигену [Rothenberg M.E., MacLean J.A., Pearlman E., Luster A.D. and Leder P. J. Exp. Med., 185: 785-790, 1997]. У мышей с дважды выбитым IL5/эотаксином не наблюдали эозинофилии или AHR в ответ на антигенную стимуляцию [Foster P.S., Mould A.W., Yang M., Mackenzie J., Mattes J., Hogan S.P., Mahalingam S., Mckenzie A.N.J., Rothenberg M.E., Young I.G., Mattahaei K.I. and Webb D.C. Immunol. Rev., 179 : 173-181, 2001]. Клинически, экспрессия мРНК и белка эотоксина и CCR3 наблюдается в тканях легких при атопической астме, и она связана с AHR, пониженным FEV₁ и эозинофилией легких [Ying S., Robin D.S., Meng Q., Rottman J., Kennedy R., Ringler D.J., Mackay C.R., Daugherty B.L., Springer M.S., Durham S.R., Williams TJ. and Kay A.B.: Enhanced expression of eotaxin and CCR3 mRNA and protein in atopic asthma. Association with airway hyperresponsiveness and predominant colocalization of eotaxin mRNA to bronchial epithelial and endothelial cells. Eur. J. Immunol., 27, 3507-3516, 1997; Lamkhioued Renzi P.M., AbiYounes S., GarciaZepada E.A., Allakhverdi Z., Ghaffar O., Rothenberg M.D., Luster A.D. and Hamid Q.: Increased expressions of eotaxin in bronchoalveolar lavage and airways of asthmatics contributes to the chemotaxis of eosinophils to the site of inflammation. J. Immunol., 159: 4593-4601, 1997; Jahnz-Royk K., Plusa T. and Mierzejewska J.: Eotaxin in serum of patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease: relationship with eosinophil cationic protein and lung function. Mediators of Inflammation, 9: 175-179, 2000]. Кроме того, при аллергических ринитах, экспрессирующие CCR3 Th2 лимфоциты солокализуются с эозинофилами в носовых полипах в непосредственной близости к экспрессирующим эотаксин клеткам [Gerber B.O., Zanni M.P., Uguccioni M., Loetscher M., Mackay C.R., Pichler W.J., Yawalkar N., Baggiolini M. and Moser В.: Functional expression of the eotaxin receptor CCR3 in Т lymphocytes co-localizing with eosinophils. CURRENT BIOLOGY 7: 836-843, 1997]. Более того, вирусные инфекции (RSV, вирус гриппа), которые, как известно, являются факторами риска при астме, дают повышенную экспрессию эотаксина в тканях легких, которая коррелирует с эозинофилией тканей [Matsukura S., Kokubo F., Kubo H., Tomita Т., Tokunaga H., Kadokura M., Yamamoto Т., Kuroiwa Y., Ohno Т., Suzaki H. and Adachi M.: Expression of RANTES by normal airway epithelial cells after influenza virus A infection. Am. J. Respir. Cell and Mol. Biol., 18: 255-264, 1998; Saito Т., Deskin R.W., Casola A., Haeberle H., Olszewska В., Ernest P.B., Alam R., Ogra P.L. and Garofalo R.: Selective regulation of chemokine production in human epithelial cells. J. Infec. Dis., 175: 497-504, 1997]. Таким образом, связывание CCR3 и родственных хемокинов, включая эотаксин, считается важным медиатором при воспалительных и иммунорегуляторных заболеваниях и расстройствах, включая астму, риниты и аллергические заболевания, а также аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит, болезнь Грейва и атеросклероз. Также считается, что связывания CCR3 и родственного хемокина является важным фактором при вирусных инфекциях, включая ВИЧ [(Marone G, de Paulis A, Florio G, Petraroli A, Rossi F, Triggiani M.: Int Arch Allergy Immunl 2001 Jun; 125(2)/89-95), (Li Y et al.,: Blood 2001 Lun 1; 97(11):3484-90) и (Marone G, Florio G, Pertaroli A, Triggiani M, de Paulis A: Trends Immunol 2001 May; 22(5):229-32)], гранулему легких (Ruth JH, Luakcs NW, Warmington KS, Polak TJ, Burdick M, Kunkel SL, Strieter RM, Chensue SW: J Immunol 1998 Oct 15; 161 (8):4276-82) и болезнь Альцгеймера (Xia MQ, Qin SX, Wu LJ, Mackay CR, and Hyman BT: Am J Pathol 1998 Jul; 153 (1):31-37).

Поэтому CCR3 является важной мишенью, и антагонизм к CCR3 вероятно является эффективным при лечении таких воспалительных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний.

В заявках WO 2000/76514 и WO 2000/76513 описаны циклопентильные модуляторы рецепторов хемокина, включая активность CCR3, представленные общей формулой:

где

X , x, y, R¹ , R² , R³ , R⁴ , R⁵ , R⁶ , R⁷ и R⁸ , такие как определено в указанных заявках.

В других заявках также описаны модуляторы CCR3. Однако ни в одной из представленных ссылок и других ссылках не описаны простые производные бензолсульфонамида, обладающие антагонистической активностью в отношении к CCR3.

Желательна дальнейшая разработка соединений, обладающих эффективной антагонистической активностью в отношении к CCR3, которые могут применяться для профилактики и лечения заболеваний, связанных с активностью CCR3.

Краткое описание изобретения

В результате обширных исследований химической модификации производных бензолсульфонамида авторы данного изобретения обнаружили, что соединения, имеющие структуру, представленную в данном изобретении, обладают неожиданно превосходной антагонистической активностью в отношении к CCR3. Данное изобретение основано на этом открытии.

Таким образом, в изобретении представлены производные бензолсульфонамида, имеющие формулу (I), их таутомерные и стереоизомерные формы и их соли.

где

Х представляет О или S;

R¹ представляет водород, галоген, гидрокси, нитро, циано, С_1-6алкоксикарбонил, амино, С_1-6алкиламино, ди(С_1-6алкил)амино, С _1-6алканоил, фенил, С_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, или С_1-6 алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами;

R² представляет водород, галоген, гидрокси, нитро, циано, С_1-6алкоксикарбонил, аминоС_1-6 алкиламино, ди(С_1-6алкил)амино, С_1-6алканоил, фенил, С_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, или С_1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами;

R³ представляет водород, галоген, гидрокси, нитро, циано, амино, карбокси, тетразолил, С_1-6алкокси, С _1-6алкоксикарбонил, С_1-6алканоил, С_1-6 алканоиламино, С_1-6алкил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами или гидрокси;

R⁴ представляет

или

где

R⁴⁰ представляет С_1-6алкил, замещенный пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами, 7-оксабицикло[4.1.0]гепт-3-илом, необязательно имеющим 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей амино, (С_1-6алкил)амино и ди(С_1-6 алкил)амино, или 5-8-членным насыщенным гетероциклическим кольцом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбранных из группы, включающей N и О, и необязательно имеющим от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей гидрокси, амино, оксо и С_1-6 алкил;

R⁴¹ представляет водород, С _1-6алкил, необязательно замещенный амино, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6алкил)амино или 2,5-диоксопирролидин-1-илом, или С_5-8циклоалкил, необязательно замещенный гидрокси,

или

R⁴⁰ и R⁴¹ вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно прерываемое О;

R⁴² представляет С_1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси, или С_5-8циклоалкил, замещенный, по крайней мере, одним гидрокси и, далее, необязательно 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, амино, оксо и С_1-6алкил,

или

R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно прерываемое NH или О, где указанное 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо замещено одной или двумя оксогруппами,

при условии, что когда R⁴¹ является водородом, С_1-6алкилом, необязательно замещенным амино, С_1-6алкиламино или ди(С_1-6алкил)амино, R⁴² является гидроксизамещенным С_1-6алкиленом или карбоксизамещенным С_1-6алкиленом;

R⁴³ представляет водород, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

R⁴⁴ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N образуют 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, R ⁴⁴ является гидроксизамещенным С_1-6алкилом или карбоксизамещенным С_1-6алкилом;

R ⁴⁵, R⁴⁷, R⁴⁹ и R⁵⁰ независимо представляют водород или С_1-6алкил;

R⁴⁶ и R⁴⁸ независимо представляют С _1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

n равно целому числу от 1 до 3;

m равно целому числу от 0 до 3;

R⁵¹ представляет водород, С_1-6алкил или 3-8-членное насыщенное кольцо, необязательно прерываемое NH или О;

R⁵² представляет водород, С_1-6алкоксикарбонил или С _1-6алкил, замещенный карбокси, амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_1-6алкилсульфонил)амино, N-(С_1-6алканоил)амино, С_1-6алкоксикарбонилом, тетразолилом, триазолилом, индолинилом, изоиндолинилом, индолилом, изоиндолилом, пирролидинилом, необязательно замещенным одной или двумя оксогруппами, или пиперидинилом, необязательно замещенным одной или двумя оксогруппами,

при условии, что когда R⁵¹ и R⁵² одновременно являются водородом, R³ является тетразолилом или С_1-6алканоилом, или когда R⁵¹ является водородом или С_1-6 алкилом, R⁵² отличен от водорода;

R ⁶¹ и R⁶² независимо представляют водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси, фенилом или одним, двумя или тремя галогенами;

R⁷¹ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный амино, гидрокси, карбокси, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R⁷² представляет водород, карбокси, С_1-6алканоил, амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С _1-6алкил)аминокарбонил, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси или одним, двумя или тремя галогенами, С_1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

Z¹ представляет -[CH ₂]_p-, где р равно целому числу 1 или 2;

R⁸¹ представляет водород, С_1-6алкоксикарбонил или С_1-6алкил, замещенный пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R⁸² представляет водород, гидрокси, карбокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси, амино или карбокси,

R⁸³ представляет водород, гидрокси, карбокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси, амино или карбокси,

при условии, что когда R⁸¹ является водородом, R⁸² или R ⁸³ отличны от водорода;

Z² представляет -[CH₂]_q-, где q равно целому числу от 0 до 3;

R⁹¹ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный фенилом;

R¹¹¹ представляет водород, карбокси, С_1-6 алкоксикарбонил, С_1-6алканоил, N-(С_1-6алкил)аминокарбонил, С_1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, одним, двумя или тремя галогенами, амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С _1-6алкилсульфонил)амино, N-(С_1-6алканоил)амино, С_1-6алкоксикарбонилом, тетразолилом, триазолилом, индолинилом, изоиндолинилом, индолилом, изоиндолилом, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

кольцо А представляет собой 3-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N^A является единственным гетероатомом;

кольцо В представляет собой 3-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N ^В является единственным гетероатомом;

кольцо С и кольцо D вместе образуют 7-15-членное диазабициклическое кольцо; и

кольцо Е представляет собой 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N ^Е является единственным гетероатомом.

В данном изобретении также предоставлен способ лечения или профилактики связанных с CCR3 расстройств или заболеваний у человека или животного, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества производного бензолсульфонамида формулы (I), его таутомерной или стереоизомерной формы или его физиологически приемлемой соли.

Также в данном изобретении предоставлено применение производного бензолсульфонамида формулы (I), его таутомерной или стереоизомерной формы или его физиологически приемлемой соли при получении лекарственных средств для лечения или профилактики связанных с CCR3 расстройств или заболеваний.

Соединения данного изобретения неожиданно показывают превосходную антагонистическую активность в отношении CCR3. Поэтому они подходят для получения лекарственных средств или лечебных композиций, которые могут применяться для лечения связанных с CCR3 заболеваний. Более конкретно, так как соединения данного изобретения являются антагонистами CCR3, они пригодны для лечения и профилактики следующих заболеваний: астмы, ринита и аллергических заболеваний, и аутоиммунных патологий, таких как ревматоидный артрит, болезнь Грейва и атеросклероз. Поэтому CCR3 является важной мишенью, и антагонизм в отношении CCR3 может быть эффективным при лечении и профилактике таких воспалительных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний.

Соединения данного изобретения также полезны для лечения и профилактики таких заболеваний, как вирусные инфекции, включая ВИЧ, легочную гранулему и болезнь Альцгеймера, так как данные заболевания также связаны с CCR3.

В другом варианте соединениями формулы (I) являются такими, где

R⁴ представляет

где

R⁴⁰ представляет С_1-6алкил, имеющий заместитель, выбранный из группы, включающей 2-оксопирролидин-1-ил, 2,5-диоксопирролидин-1-ил, 2-оксопиперидин-1-ил, 2-оксопиперидин-3-ил, 4-оксопиперидин-1-ил, 2-оксопиперидин-6-ил, 2,5-диоксопиперидин-1-ил, 2,6-диоксопиперидин-1-ил и 2,6-диоксопиперидин-3-ил, пиперидин-1-ил, -2-ил, -3-ил или -4-ил (где указанный пиперидин необязательно замещен одной или двумя оксогруппами), гексагидроазепин-1-ил, -2-ил, -3-ил или -4-ил (где указанный гексагидроазепин необязательно замещен одной или двумя оксогруппами) и 7-оксабицикло[4.1.0]гепт-3-ил, необязательно замещенный амино;

R⁴¹ представляет водород, циклопентил или С_1-6алкил, необязательно замещенный амино, С_1-6алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино или 2,5-диоксопирролидин-1-илом;

R ⁴² представляет С_1-4алкилен, замещенный карбокси, или циклогексил, замещенный одной или двумя гидрокси,

или

R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо,

при условии, что когда R⁴¹ является водородом, С_1-6алкилом, необязательно замещенным амино, С_1-6алкиламино или ди(С_1-6алкил)амино, R⁴² является гидроксизамещенным С_1-6алкиленом или карбоксизамещенным С_1-6алкиленом;

R⁴³ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси;

R⁴⁴ представляет С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N образуют 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, R⁴⁴ является гидроксизамещенным С_1-6алкилом или карбоксизамещенным С_1-6алкилом;

R⁴⁵, R ⁴⁷, R⁴⁹ и R⁵⁰ независимо представляют водород, метил или этил;

R⁴⁶ и R ⁴⁸ независимо представляют С_1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

R⁵¹ представляет водород, циклопентил, этил или метил;

R⁵² представляет метоксикарбонил или С_1-6 алкил, замещенный карбокси, амино, метоксикарбонилом, метансульфониламино,

ацетамидо, индолилом, тетразолилом, 1,2,3-триазолилом,

1,2,4-триазолилом, 1,2,5-триазолилом, 1,3,4-триазолилом,

пирролидин-1-илом, 2-оксопирролидин-1-илом,

2,5-диоксопирролидин-1-илом, 2-оксопиперидин-1-илом,

2-оксопиперидин-3-илом, 4-оксопиперидин-1-илом,

2-оксопиперидин-6-илом, 2,5-диоксопиперидин-1-илом,

2,6-диоксопиперидин-1-илом или 2,6-диоксопиперидин-3-илом;

R⁶¹ и R⁶² независимо представляют бензил или фенетил;

R⁷² представляет водород, карбокси, С_1-6алканоил, амино, (С_1-6 алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_1-6 алкил)аминокарбонил, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси или одним, двумя или тремя галогенами, С _1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R⁸¹ представляет водород, метоксикарбонил или С_1-6алкил, замещенный 2-оксопирролидин-1-илом, 2,5-диоксопирролидин-1-илом, 2-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-3-илом, 4-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-6-илом, 2,5-диоксопиперидин-1-илом, 2,6-диоксопиперидин-1-илом или 2,6-диоксопиперидин-3-илом;

R⁸² представляет водород, гидрокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси,

R ⁸³ представляет водород, гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁸² или R⁸³ одновременно являются водородом, R⁸¹ отличен от водорода, или когда R⁸¹ и R⁸³ одновременно являются водородом, R⁸² отличен от водорода;

R⁹¹ представляет бензил или фенетил.

Другие предпочтительные соединения формулы (I) представлены формулой (I-b)

где

R¹ представляет фтор, хлор, бром, йод или нитро;

R² представляет фтор, хлор, бром, йод или нитро;

R³ представляет ацетил, циано или тетразолил;

R⁴ представляет

или

где

R⁴⁰ представляет С_1-6алкил, замещенный пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами, 7-оксабицикло[4.1.0]гепт-3-илом, необязательно имеющим 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей амино, (С_1-6алкил)амино и ди(С_1-6 алкил)амино, или 5-8-членным насыщенным гетероциклическим кольцом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбранных из группы, включающей N и О, и необязательно имеющим от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей гидрокси, амино, оксо и С_1-6 алкил;

R⁴¹ представляет водород, С _1-6алкил, необязательно замещенный амино, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6алкил)амино или 2,5-диоксопирролидин-1-илом, или С_5-8циклоалкил, необязательно замещенны1 гидрокси,

или

R⁴⁰ и R⁴¹ вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно прерываемое О;

R⁴² представляет С_1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси, или С_5-8циклоалкил, замещенный, по крайней мере, одним гидрокси и, далее, необязательно 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, амино, оксо и С_1-6алкил,

или

R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно прерываемое NH или О, где указанное 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо замещено одной или двумя оксогруппами,

при условии, что когда R⁴¹ является водородом, С_1-6алкилом, необязательно замещенным амино, С_1-6алкиламино или

ди(С _1-6алкил)амино, R⁴² является гидроксизамещенным С_1-6алкиленом или карбоксизамещенным С_1-6 алкиленом;

R⁴³ представляет водород, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

R⁴⁴ представляет водород или С_1-6 алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N образуют 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, замещенное одной или двумя оксогруппами, R⁴⁴ является гидроксизамещенным С_1-6алкилом или карбоксизамещенным С_1-6алкилом;

R⁴⁵, R ⁴⁷, R⁴⁹ и R⁵⁰ независимо представляют водород или С_1-6алкил;

R⁴⁶ и R⁴⁸ независимо представляют С_1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

n равно целому числу от 1 до 3;

m равно целому числу от 0 до 3;

R⁵¹ представляет водород, С_1-6алкил или 3-8-членное насыщенное кольцо, необязательно прерываемое NH или О;

R⁵² представляет водород, С_1-6алкоксикарбонил или С _1-6алкил, замещенный амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_{1_6}алкилсульфонил)амино, N-(С_1-6алканоил)амино, С_{1_6}алкоксикарбонилом, тетразолилом, триазолилом, индолинилом, изоиндолинилом, индолилом, изоиндолилом, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанный пирролидинил и пиперидинил, необязательно замещены одной или двумя оксогруппами,

при условии, что когда R ⁵¹ и R⁵² одновременно являются водородом, R ³ является тетразолилом или С_1-6алканоилом, или когда R⁵¹ является водородом или С_1-6 алкилом, R⁵² отличен от водорода;

R⁶¹ и R⁶² независимо представляют водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси, фенилом или одним, двумя или тремя галогенами;

R⁷¹ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный амино, гидрокси, карбокси, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R ⁷² представляет водород, карбокси, С_1-6алканоил, амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_1-6алкил)аминокарбонил, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси или одним, двумя или тремя галогенами, С_1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

Z¹ представляет -[CH₂]_p-, где р равно целому числу 1 или 2;

R⁸¹ представляет водород, С _1-6алкоксикарбонил или С_1-6алкил, необязательно замещенный пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R⁸² представляет водород, гидрокси, карбокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси, амино или карбокси,

R⁸³ представляет водород, гидрокси, карбокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси, амино или карбокси,

при условии, что когда R⁸¹ является водородом, R⁸² или R⁸³ отличны от водорода;

Z² представляет -[CH₂]_q-, где q равно целому числу от 0 до 3;

R⁹¹ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный фенилом;

R¹¹¹ представляет водород, карбокси, С_1-6алкоксикарбонил, С_1-6 алканоил, N-(С_1-6алкил)аминокарбонил, С_1-6 алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, одним, двумя или тремя галогенами, амино, (С_1-6алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_1-6алкилсульфонил)амино, N-(С_1-6алканоил)амино, С_1-6алкоксикарбонилом, тетразолилом, триазолилом, индолинилом, изоиндолинилом, индолилом, изоиндолилом, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

кольцо А представляет собой 3-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N ^A является единственным гетероатомом;

кольцо В представляет собой 3-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N^В является единственным гетероатомом;

кольцо С и кольцо D вместе образуют 7-15-членное диазабициклическое кольцо; и

кольцо Е представляет собой 5-8-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, в котором атом азота N^Е является единственным гетероатомом.

Другие предпочтительные соединения формулы (I-b) включают соединения, в которых:

R¹ представляет фтор, хлор или бром;

R² представляет фтор, хлор или бром;

R³ представляет циано;

R⁴ представляет

где

R⁴⁰ представляет С_1-6алкил, имеющий заместитель, выбранный из группы, включающей 2-оксопирролидин-1-ил, 2,5-диоксопирролидин-1-ил, 2-оксопиперидин-1-ил, 2-оксопиперидин-3-ил, 4-оксопиперидин-1-ил, 2-оксопиперидин-6-ил, 2,5-диоксопиперидин-1-ил, 2,6-диоксопиперидин-1-ил, 2,6-диоксопиперидин-3-ил, пиперидин-1-ил, -2-ил, -3-ил или -4-ил (где указанный пиперидин необязательно замещен одной или двумя оксогруппами), гексагидроазепин-1-ил, -2-ил, -3-ил или -4-ил (где указанный гексагидроазепин необязательно замещен одной или двумя оксогруппами) и 7-оксабицикло[4.1.0]гепт-3-ил, необязательно замещенный амино;

R⁴¹ представляет водород, циклопентил или С_1-6алкил, необязательно замещенный амино, С_1-6алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино или 2,5-диоксопирролидин-1-илом;

R⁴² представляет С_1-4алкилен, замещенный карбокси, или циклогексил, замещенным одной или двумя гидрокси,

или

R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N могут образовывать 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо,

R⁴³ представляет водород или С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси;

R⁴⁴ представляет С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁴¹ и R⁴² вместе с соседним атомом N образуют 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, R⁴⁴ является гидроксизамещенным С_1-6 алкилом или карбоксизамещенным С_1-6алкилом;

R⁴⁵, R⁴⁷, R⁴⁹ и R⁵⁰ независимо представляют водород, метил или этил;

R⁴⁶ и R⁴⁸ независимо представляют С _1-6алкилен, необязательно замещенный гидрокси или карбокси;

R⁵¹ представляет водород, циклопентил, этил или метил;

R⁵² представляет метоксикарбонил или С_1-6алкил, замещенный карбокси, амино, метоксикарбонилом, метансульфониламино, ацетамидо, индолилом, тетразолилом, 1,2,3-триазолилом, 1,2,4-триазолилом, 1,2,5-триазолилом, 1,3,4-триазолилом, пирролидин-1-илом, 2-оксопирролидин-1-илом, 2,5-диоксопирролидин-1-илом, 2-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-3-илом, 4-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-6-илом, 2,5-диоксопиперидин-1-илом, 2,6-диоксопиперидин-1-илом или 2,6-диоксопиперидин-3-илом;

R⁶¹ и R⁶² независимо представляют бензил или фенетил;

R⁷² представляет водород, карбокси, С_1-6алканоил, амино, (С_1-6 алкил)амино, ди(С_1-6алкил)амино, N-(С_1-6 алкил)аминокарбонил, С_1-6алкил, необязательно замещенный гидрокси, карбокси или одним, двумя или тремя галогенами, С _1-6алкокси, необязательно замещенный одним, двумя или тремя галогенами, пирролидинилом или пиперидинилом, где указанные пирролидинил и пиперидинил необязательно замещены одной или двумя оксогруппами;

R⁸¹ представляет водород, метоксикарбонил или С_1-6алкил, замещенный 2-оксопирролидин-1-илом, 2,5-диоксопирролидин-1-илом, 2-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-3-илом, 4-оксопиперидин-1-илом, 2-оксопиперидин-6-илом, 2,5-диоксопиперидин-1-илом, 2,6-диоксопиперидин-1-илом или 2,6-диоксопиперидин-3-илом;

R⁸² представляет водород, гидрокси или С_1-6алкил, замещенный гидрокси,

R ⁸³ представляет водород, гидрокси или карбокси,

при условии, что когда R⁸² или R⁸³ одновременно являются водородом, R⁸¹ отличен от водорода, или когда R⁸¹ и R⁸³ одновременно являются водородом, R⁸² отличен от водорода;

R⁹¹ представляет бензил или фенетил.

Предпочтительными соединениями данного изобретения являются следующие:

3-(1-бензилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-5-сульфонил)-4-(3,5-дихлорфенокси)бензонитрил;

N-{4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперазин-2-илметил}метансульфонамид;

N-{4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперазин-2-илметил}ацетамид;

N-{1-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперазин-2-илметил}метансульфонамид;

N-{1-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперазин-2-илметил}ацетамид;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(3R)-(2-гидроксиэтиламино)пирролидин-1-сульфонил]бензонитрил;

дигидрохлорид 3-(2-аминометилпиперазин-1-сульфонил)-4-(3,5-дихлорфенокси)бензонитрила;

метиловый эфир 1-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]-[1,4]диазепан-2-карбоновой кислоты;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(2S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил;

N-{1-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]-[1,4]диазепан-2-илметил}метансульфонамид;

1-[4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(пиперазин-1-сульфонил)фенил]этанон;

(R)-N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамид;

(S)-N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамид;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{4-[(2S)-(1-гидрокси-1-метилэтил)пирролидин-1-ил]пиперидин-1-сульфонил}бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(3-тетразол-2-илметилпиперазин-1-сульфонил)бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(3-[1,2,4]триазол-2-илметилпиперазин-1-сульфонил)бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(2-[1,2,4]триазол-1-илметилпиперазин-1-сульфонил)бензонитрил;

5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)-N-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)этил]бензолсульфонамид;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[3-(2,5-диоксопирролидин-1-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[3-(2,5-диоксопирролидин-1-илметил)-4-пирролидин-1-илпиперидин-1-сульфонил]бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{4-[(2S)-гидроксиметилпирролидин-1-ил]пиперидин-1-сульфонил}бензонитрил;

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{(2S)-[(2S)-гидроксиметилпирролидин-1-ил]пиперидин-1-сульфонил}бензонитрил и

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(пиперидин-4-сульфонил)бензонитрил,

и их таутомерные и стереоизомерные формы и их физиологически приемлемые соли.

Алкил сам по себе и «алк», и «алкил» в алкилене, алкениле, алкиниле, алкокси, алканоиле, алкиламино, алкиламинокарбониле, алкиламиносульфониле, алкилсульфониламино, алкоксикарбониле, алкоксикарбониламино и алканоиламино представляет собой линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий обычно 1-6, предпочтительно, 1-4, и особенно предпочтительно, 1-3 атомов углерода, где иллюстративные и предпочтительные примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил.

Алкокси иллюстративно и предпочтительно является метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, трет-бутокси, н-пентокси и н-гексокси.

Алкиламино иллюстративно и предпочтительно является алкиламинорадикалом, имеющим один или два (независимо выбранных) алкильных заместителя, иллюстративно и предпочтительно включающим метиламино, этиламино, н-пропиламино, изопропиламино, трет-бутиламино, н-пентиламино, н-гексиламино, N,N-диметиламино, N,N-диэтиламино, N-этил-N-метиламино, N-метил-N-н-пропиламино, N-изопропил-N-н-пропиламино, N-трет-бутил-N-метиламино, N-этил-N-н-пентиламино и N-н-гексил-N-метиламино.

Циклоалкил сам по себе и в циклоалкиламино, и в циклоалкилкарбониле является циклоалкильной группой, содержащей обычно 3-8, предпочтительно 5-7 атомов углерода, иллюстративно и предпочтительно включающей циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Гетероциклил сам по себе и в гетероциклах является моно- или полициклическим, предпочтительно, моно- или бициклическим, неароматическим гетероциклическим радикалом, имеющим обычно 4-10, предпочтительно, 5-8 атомов в кольце, и вплоть до 3, предпочтительно, вплоть до 2 гетероатомов и/или гетерогрупп, выбранных из группы, включающей N, O, S, SO и SO₂. Гетероциклильные радикалы могут быть насыщенными или частично ненасыщенными. Предпочтение отдается 5-8-членным моноциклическим насыщенным гетероциклильным радикалам, имеющим вплоть до двух гетероатомов, выбранных из группы, включающей O, N и S.

Воплощение данного изобретения

Соединение формулы (I) данного изобретения может быть получено, но не ограничено этим, сочетанием различных известных способов. В некоторых вариантах, один или более заместителей, таких как аминогруппа, карбоксильная группа и гидроксильная группа соединений, используемых в качестве исходных или промежуточных соединений, соответствующим образом защищают защитной группой, известной специалистам в данной области техники. Примеры защитных групп описаны в Protective Groups in Organic Synthesis (3^rd Edition) by Green and Wuts.

Соединения, представленные общей формулой (I-i), (I-ii) и (I-iii), данного изобретения могут быть получены, но не ограничены этим, с применением способов [A], [B] и [C], представленных ниже, соответственно.

Способ [A]

В способе [A] соединение формулы (I-i) (X, R¹ и R² такие, как определено выше, R^3' аналогичен R³, определенному выше, или защищенному R³, и R^4' аналогичен R⁴, определенному выше, или защищенному R⁴ ) может быть получено по следующим методикам в три или четыре стадии.

На стадии А-1 соединение формулы (2) (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) может быть получено взаимодействием соединения формулы (1) (где L является уходящей группой, например, галогеном (фтором, хлором, бромом или йодом), сульфонатами (например, мезилатом, тозилатом или трифлатом); и подобными) с соединением формулы (4) (где Х, R¹ и R² такие, как определено выше), в растворителе.

Примеры растворителя включают, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид, и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 10°С до 80°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

Реакцию преимущественно проводят в присутствии основания. Примеры основания включают гидрид щелочного металла, такой как гидрид натрия или гидрид калия; алкоксид щелочного металла, такой как метоксид натрия, этоксид натрия и трет-бутоксид калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид натрия или гидроксид калия; карбонаты, такие как карбонат натрия и карбонат калия; гидрокарбонаты щелочного металла, такие как гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; органические амины, такие как пиридин, триэтиламин и N,N-диизопропилэтиламин, и другие.

На стадии А-2 соединение формулы (3) (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) может быть получено восстановлением соединения формулы (2) (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) с хлоридом олова или железным порошком в присутствии кислоты (например, хлористоводородной кислоты) в растворителе, таком как этилацетат, вода и другие.

Соединение формулы (3) (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) может быть также получено гидролизом соединения формулы (2) (где Х, R¹ , R² и R^3' такие, как определено выше).

На стадии А-3 соединение формулы (6) (где Х, R ¹, R² и R^3' такие, как определено выше, и L' является уходящей группой, например, галогеном (хлором, фтором, бромом или йодом); и подобными) может быть получено из соединения формулы (3) (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) в две стадии.

Сначала соединение формулы (3) (где Х, R¹ , R² и R^3' такие, как определено выше) обрабатывают кислотой (например, хлористоводородной кислотой) и нитритом натрия в растворителе (например, воде, уксусной кислоте) при температуре от около -20°С до 0°С.

Затем реакционную смесь добавляют к раствору диоксида серы в кислоте, такой как уксусная кислота и подобные.

Примеры растворителей включают, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; вода и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 0°С до 30°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

Реакцию можно проводить в присутствии катализатора, включая, например, соли меди, такие как хлорид меди и другие.

На стадии А-4 соединение формулы (I-i) (где X, R¹, R², R^3' и R^4' такие, как определено выше) может быть получено взаимодействием соединения формулы (6) (где X, L', R¹, R²и R ^3' такие, как определено выше) с соединением формулы (5) (где R^4' такой, как определено выше) по методике, описанной для стадии А-1 способа [A] для получения соединения (2).

Соединение (I-i) может быть далее обработано для удаления защитной группы R^3' или R^4' .

Соединение формулы (6) также может быть получено по методике стадий А-1' и А-3', используя исходное соединение (1') (где L и R^3' такие, как определено выше).

На стадии А-1' соединение формулы (2') (где Х, R¹, R² и R^3' такие, как определено выше) может быть получено из соединения формулы (1') (где L и R^3' такие, как определено выше) вместо соединения формулы (1) по методике, описанной для стадии А-1 для получения соединения формулы (2) с использованием соединения формулы (4) (где Х, R¹ и R² такие, как определено выше).

На стадии А-3' соединение формулы (6) (где X, L', R¹, R²и R ^3' такие, как определено выше) может быть получено с использованием соединения формулы (2') (где Х, R¹ , R² и R^3' такие, как определено выше) и галогенида сульфоновой кислоты (например, хлорсульфоновой кислоты). Реакцию можно проводить без растворителя или в растворителе, включающем, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид, и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 0°С до 170°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

Соединения формулы (1), (1'), (4) и (5) являются коммерчески доступными или могут быть получены обычными методами.

Способ [B]

Соединение формулы (I-ii) (R¹ и R² такие, как определено выше, R^3' аналогичен R³, определенному выше, или защищенному R³, и R^4' аналогичен R⁴, определенному выше, или защищенному R⁴) может быть получено по следующей методике в три стадии.

На стадии В-1 соединение формулы (8) (где L и R^3' такие, как определено выше, и Y является С_1-6алкилом) может быть получено взаимодействием соединения формулы (7) (где Y и R^3' такие, как определено выше, и W является водородом, амино и подобными) по методике, описанной для стадии А-3 или А-3' способа [A] для получения соединения формулы (6).

На стадии В-2 соединение формулы (9) (где R^3' и R^4' такие, как определено выше) может быть получено из соединения формулы (8) в две стадии; (стадия В-2-а) взаимодействием с Н-R^4' и (стадия В-2-b) снятие защиты с алкоксигруппы.

На стадии В-2-а взаимодействие соединения формулы (8) (где Y, L и R ^3' такие, как определено выше) с соединением формулы (5) (где R^4' такой, как определено выше) может быть проведено по методике, описанной для стадии А-4 способа А для получения соединения формулы (I-i).

На стадии B-2-b последующее снятие защиты с алкоксигруппы с получением соединения формулы (9) (где R^3' и R^4' такие, как определено выше) может быть осуществлено реакцией с кислотой Льюиса, такой как, например, BBr₃, в растворителе, включая, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -30°С до 200°С, предпочтительно от около -10°С до 80°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

На стадии В-3 соединение формулы (I-ii) (где R ¹, R², R^3' и R^4' такие, как определено выше) может быть получено взаимодействием соединения формулы (9) (где R^3' и R^4' такие, как определено выше) с соединением формулы (10) (где R¹ и R² такие, как определено выше, и L является уходящей группой, такой как бороновая кислота, атом галогена, например, фтор, хлор, бром или йод).

Реакцию можно проводить в растворителе, включающем, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол и ксилол; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид, и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 10°С до 100°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

Реакцию можно проводить в присутствии катализатора, включая, например, соли меди, такие как ацетат меди(II), соли палладия, такие как ацетат палладия(II) и другие. Реакцию преимущественно может быть проведена в присутствии основания. Примеры основания включают алкоксид щелочного металла, такой как метоксид натрия, этоксид натрия и трет-бутоксид калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид натрия или гидроксид калия; карбонаты, такие как карбонат цезия, карбонат натрия и карбонат калия; гидрокарбонаты щелочного металла, такие как гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; органические амины, такие как пиридин, триэтиламин и N,N-диизопропилэтиламин, и другие.

Соединение (I-ii) может быть подвергнуто дальнейшей обработке для модификации R^3' и R ^4', например снятию защиты.

Соединения формул (7) и (10) являются коммерчески доступными или могут быть получены обычными методами.

Способ [C]

Способ [C] особенно предпочтителен, когда R⁴ формулы (I) является кольцом Е, таким как определено выше, в данном случае R⁴ формулы (I-iii) является кольцом Е с заместителем R¹¹¹ таким, как определено для R⁴, или его защищенным вариантом.

Соединение формулы (I-iii) (где X, R¹, R², R^3' и R⁴ такие, как определено выше) может быть получено по следующей методике в две стадии.

На стадии С-1 соединение формулы (12) (где X, R¹, R² , R^3' и R⁴ такие, как определено выше) может быть получено взаимодействием соединения формулы (11) (где X, R¹ , R² и R^3' такие, как определено выше) с соединением формулы (13) (R⁴ такой, как определено выше, и L является уходящей группой такой, как определено выше) с использованием основания, такого как карбонаты щелочного металла (например, карбонат натрия, карбонат калия и подобные), триэтиламин, гидроксид калия и другие.

Реакцию можно проводить в растворителе, включающем, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол и ксилол; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид, и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 10°С до 100°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 24 часов.

На стадии С-2 соединение формулы (I-iii) (где X, R¹, R², R^3' и R⁴ такие, как определено выше) может быть получено обработкой соединения формулы (12) (где X, R¹, R ², R^3' и R⁴ такие, как определено выше) в подходящих условиях окисления, таких как перекись водорода, периодат натрия, м-хлорпербензойная кислота (m-CPBA), перманганат калия и другие, в присутствии или в отсутствие катализатора, такого как каталитический трихлорид рутения, в растворителе, включая, например, воду, галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, четыреххлористый углерод, хлорбензол, дихлорметан, хлороформ и 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, изопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ) и 1,2-диметоксиэтан; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол и ксилол; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон; и другие. Необязательно, могут быть использованы два или более смешанных растворителей из перечисленных выше.

Температура реакции обычно составляет, но не ограничена этим, от около -10°С до 200°С, предпочтительно от около 10°С до 50°С. Реакцию обычно проводят в течение от 30 минут до 48 часов, предпочтительно от 1 часа до 20 часов.

Соединение (I-iii) может быть подвергнуто дальнейшей обработке для снятия защиты с R^3' или R^4' .

Соединения формул (11) и (13) являются коммерчески доступными или могут быть получены обычными методами.

Если соединения формулы (I) или их соли имеют таутомерные изомеры и/или стереоизомеры (например, геометрические изомеры и конформационные изомеры), каждый отделенный изомер и смеси также включены в объем данного изобретения.

Если соединения формулы (I) или их соли имеют асимметричный атом углерода в структуре, их оптически активные соединения и рацемические смеси также включены в объем данного изобретения.

Типичные соли соединений формулы (I) включают соли, полученные взаимодействием соединений данного изобретения с минеральными или органическими кислотами или органическими или неорганическими основаниями. Такие соли известны как кислотно-аддитивные и основно-аддитивные соответственно.

Кислоты, образующие кислотно-аддитивные соли, включают неорганические кислоты, такие как, но не ограничиваясь ими, серная кислота, фосфорная кислота, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота и подобные, и органические кислоты, такие как, но не ограничиваясь ими, п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, п-бромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, уксусная кислота и подобные.

Основно-аддитивные соли включают соли, полученные с неорганическими основаниями, такими как, но не ограничиваясь ими, гидроксид аммония, гидроксид щелочного металла, гидроксиды щелочноземельного металла, карбонаты, бикарбонаты и подобные, и органические основания, такие как, но не ограничиваясь ими, этаноламин, триэтиламин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные. Примеры неорганических оснований включают гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидроксид кальция, карбонат кальция и подобные.

Соединение данного изобретения или его соли, в зависимости от заместителей, может быть модифицировано с получением сложных низших алкиловых эфиров или других известных эфиров; и/или гидратов или других сольватов. Такие сложные эфиры, гидраты и сольваты включены в объем данного изобретения.

Соединение данного изобретения может быть введено в виде пероральных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, обычные таблетки и таблетки с энтеросолюбильной оболочкой, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, эликсиры, тинктуры, растворы, суспензии, сиропы, твердые и жидкие аэрозоли и эмульсии. Они также могут быть введены в виде парентеральных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, внутривенные, внутрибрюшинные, подкожные, внутримышечные и другие подобные формы, хорошо известные специалисту в области фармацевтики. Соединения данного изобретения могут быть введены в виде интраназальных форм путем местного применения подходящих интраназальных носителей или чрескожным путем, с применением систем доставки через кожу, хорошо известных специалисту в данной области.

Режим дозирования соединений данного изобретения выбирает специалист в данной области с учетом различных факторов, таких как, но не ограничиваясь ими, возраст, масса, пол и состояние здоровья пациента, тяжесть лечимого состояния, способ введения, уровни метаболических и экскреторных функций пациента, применяемой дозированной формы, определенного применяемого соединения или соли.

Соединения данного изобретения предпочтительно перед введением смешивают с одним или более фармацевтически приемлемым эксципиентом. Эксципиенты представляют собой инертные вещества, такие как, но не ограничиваясь ими, носители, разбавители, вкусовые агенты, подсластители, лубриканты, солюбилизаторы, суспендирующие агенты, связующие агенты, дезинтегрирующие агенты для таблеток и инкапсулирующий материал.

Еще одним вариантом данного изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединение данного изобретения и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, которые совместимы с другими ингредиентами композиции и не оказывают отрицательного действия на пациента. Фармацевтические композиции данного изобретения получают объединением терапевтически эффективного количества соединения данного изобретения с одним или более фармацевтически приемлемым эксципиентом. При получении композиций данного изобретения активный ингредиент может быть смешан с разбавителем или заключен в носитель, который может быть в форме капсулы, саше, бумаги или другого контейнера. Наполнитель может служить в качестве разбавителя, который может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который действует как носитель, или может быть в виде таблеток, пилюль, порошков, пастилок, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей, мазей, содержащих, например, вплоть до 10% мас. активного соединения, твердых и мягких желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и порошков в стерильной упаковке.

Для перорального введения активный ингредиент может быть объединен с пероральным, нетоксичным, фармацевтически приемлемым носителем, таким как, но не ограничиваясь ими, лактоза, крахмал, сахароза, глюкоза, карбонат натрия, маннит, сорбит, карбонат кальция, фосфат кальция, сульфат кальция, метилцеллюлоза и подобные; также необязательно может быть объединен с дезинтегрирующими агентами, такими как, но не ограничиваясь ими, кукурузный крахмал, крахмал, метилцеллюлоза, агар, бентонит, ксантановая смола, альгиновая кислота и подобные; и, необязательно, со связующими агентами, такими как, но не ограничиваясь ими, желатин, гуммиарабик, натуральные сахара, бета-лактоза, зерновые подсластители, природные и синтетическим смолы, гуммиарабик, трагакант, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и подобные; и, необязательно, с лубрикантами, такими как, но не ограничиваясь ими, стеарат магния, стеарат натрия, стеариновая кислота, олеат натрия, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия, тальк и подобные.

Носители для порошков могут представлять собой тонкоизмельченные твердые вещества в смеси с тонкоизмельченным активным ингредиентом. Активный ингредиент может быть смешан с носителем, имеющим связующие свойства, в подходящих пропорциях и спрессован в форме и размере, желаемом для получения таблеток. Порошки и таблетки предпочтительно содержат от около 1 до около 99% мас. активного ингредиента, что составляет новую композицию данного изобретения. Подходящие твердые носители включают карбоксиметилцеллюлозу магния, воски с низкой температурой плавления и кокосовое масло.

Стерильные жидкие композиции включают суспензии, эмульсии, сиропы и эликсиры. Активный ингредиент может быть растворен или суспендирован в фармацевтически приемлемом носителе, таком как стерильная вода, стерильный органический растворитель или смесь стерильной воды и стерильного органического растворителя.

Активный ингредиент также может быть растворен в подходящем органическом растворителе, например, водном пропиленгликоле. Другие композиции могут быть получены диспергированием тонкоизмельченного активного ингредиента в водном крахмале, или карбоксиметилцеллюлозе натрия, или в подходящем масле.

Композиции могут быть в виде единичной дозированной форме, которая является физически дискретной единицей, содержащей одну дозу, подходящую для введения человеку или другому млекопитающему. Единичной дозированной формой могут быть капсулы или таблетки, или ряд капсул или таблеток. «Единичная доза» представляет собой предопределенное количество активного соединения данного изобретения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с одним или более эксципиентами. Количество активного ингредиента в единичной дозе может варьироваться от около 0,1 до около 1000 миллиграммов или более, в зависимости от конкретного лечения.

Типичные пероральные дозы данного изобретения, применяемые для получения указанного действия, составляют от около 0,01 мг/кг/день до около 100 мг/кг/день, предпочтительно от 0,1 мг/кг/день до 30 мг/кг/день, более предпочтительно от около 0,5 мг/кг/день до около 10 мг/кг/день. При парентеральном введении, предпочтительные проверенные дозы для введения составляют от около 0,001 до 100 мг/кг/день, предпочтительно от 0,01 мг/кг/день до 1 мг/кг/день. Соединения данного изобретения могут быть введены однократной суточной дозой, или общая суточная доза может быть введена разделенными дозами два, три или более раз в день. Если введение происходит с применением чрескожных форм, оно, конечно, является непрерывным.

ПРИМЕРЫ

Ниже представлено подробное описание данного изобретения с помощью примеров, которые не должны истолковываться как ограничивающие объем данного изобретения.

В представленных ниже примерах все количественные данные, если не указано иначе, относятся к массовым процентам.

¹Н ЯМР спектр записывают с помощью любого спектрометра Bruker DRX-300 (300 МГц для ¹Н) в CDCl₃. Химические сдвиги представлены в миллионных долях (м.д.) с тетраметилсиланом (ТМС) в качестве внутреннего стандарта при нулевом значении м.д. Константы взаимодействия (J) даны в герцах, и аббревиатуры с, д, т, кв., м и ушир. означают синглет, дублет, триплет, квартет, мультиплет и широкий соответственно. Данные масс спектроскопии записаны на FINNIGAN MAT 95. ТСХ проводят на предварительно покрытой силикагелем пластине (Merck силикагель 60 F-245). Силикагель (WAKO-gel C-2000 (75-150 мкм)) используют для всех разделений колоночной хроматографией. Z в таблице означает разложение.

Все химикаты имеют реактивную степень чистоты и приобретены у Sigma-Aldrich, Wako pure chemical industries, Ltd., Tokyo kasei kogyo Co., Ltd., Nacalai tesque, Inc., Watanabe Chemical Ind. Ltd., Maybridge plc, Lancaster Synthesis Ltd., Merck KgaA, Kanto Chemical Co., Ltd.

Действие соединений данного изобретения проверяли с помощью представленных ниже анализов и фармакологических тестов.

[Определение значений IC50 для соединений в анализе на рецепторное связывание]

(1) Клетки

Используют человеческие CCR3-трансформированные клетки К562. Клонированную CCR3 сДНК конструируют с рсДНК3 вектором и трансфицируют в линию клеток К562. Человеческие ССК3-трансформированные клетки К562 выдерживают в RPMI-1640 (кат. № 22400-089, Life Technologies) с добавлением 10% FSC (кат. № А-1115-L, Hyclone), 55 мкМ 2-меркаптоэтанола (кат. № 21985-023, Life Technologies), 1 мМ пирувата натрия (кат. № 11360-070, Life Technologies), 100 единиц/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина (кат. № 15140-122, Life Technologies) и 0,4 мг/мл Geneticin (кат. № 10131-035, Life Technologies) (далее обозначено как «культуральная среда»). Перед началом исследования на рецепторное связывание клетки предварительно обрабатывают 5 мМ бутират натрийсодержащей культуральной средой (кат. № 193-01522, Wako) (2×10⁵ клеток/мл) в течение 20-24 часов для увеличения экспрессии CCR3.

(2) Анализ рецепторного связывания

Предварительно обработанные бутиратом клетки, суспендированные в связывающем буфере (25 мМ HEPES рН 7,6, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ MgCl ₂, 0,5% БСА, 0,1% NaN₃) при плотности клеток 2×10⁶ клеток/мл, добавляют в количестве 60 мкл/лунка в 96-луночный круглодонный полипропиленовый планшет (кат. № 3365, Costar). Соединения, разведенные связывающим буфером (концентрация в 4 раза выше чем конечная концентрация), добавляют в количестве 30 мкл/лунка в полипропиленовый планшет. [¹²⁵ I]-меченный человеческий эотаксин (кат. № IM290, Amersham Pharmacia Biotech), разведенный связывающим буфером в концентрации 0,2 нМ (конечная концентрация, 0,1 нМ), добавляют в количестве 30 мкл/лунка в полипропиленовый планшет. Смесь для реакции связывания в общем количестве 120 мкл/лунка (60 мкл/лунка суспензии клеток, 30 мкл/лунка раствора соединения и 30 мкл/лунка [¹²⁵I]-меченного эотаксина) инкубируют в полипропиленовом планшете в течение 1 часа при комнатной температуре, после инкубирования 100 мкл/лунка реакционной смеси переносят в фильтровальный планшет (кат. № MAFB-N0B, Millipore) и промывают промывочным буфером (25 мМ HEPES рН 7,6, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ MgCl₂ , 0,5% БСА, 0,1% NaN₃, 0,5М NaCl) дважды. 96-луночный фильтровальный планшет предварительно обрабатывают 100 мкл/лунка 0,5% полиэтиленимином (кат. № Р-3143, Sigma) в течение 2-4 часов при комнатной температуре и дважды промывают промывочным буфером перед использованием. Неспецифическое связывание определяют параллельным инкубированием в присутствии 500 нМ не меченного эотаксина (кат. № 23209, Genzyme Techne). Радиоактивность, оставшуюся на фильтре, измеряют на жидкостном сцинтилляционном счетчике (TopCount , Packard) после добавления 45 мкл/лунка сцинтиллянта (Microscint20, кат. № 6013621, Packard). Процент ингибирования для каждой концентрации соединения рассчитывают и значения IC50 определяют, исходя из кривой ингибирования.

[Определение значений IC50 соединений в анализе мобилизации кальция]

(1) Клетки

Используют человеческие CCR3-трансформированные клетки К562. Человеческие ССR3-трансформированные клетки К562 выдерживают в RPMI-1640 с добавлением 10% FSC, 55 мкМ 2-меркаптоэтанола (кат. № 21985-023, Life Technologies), 1 мМ пирувата натрия, 100 единиц/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина, и 0,4 мг/мл Geneticin. Перед началом анализа мобилизации кальция, клетки предварительно обрабатывают 5 мМ бутират натрийсодержащей культуральной средой (2×10⁵ клеток/мл) в течение 20-24 часов для увеличения экспрессии CCR3.

(2) Анализ мобилизации кальция

Предварительно обработанные бутиратом клетки нагружают Fluo-3AM (кат. № F-1242, Molecular Probes) в нагрузочном буфере (раствор Хэнка, кат. № 05906 Nissui, 20 мМ HEPES рН 7,6, 0,12% БСА, 1 мМ пробенецида, кат. № Р-8761, Sigma, 1 мМ Fluo-3AM, 0,01% плуроник F-127, кат. № Р-6866, Molecular Probes) при плотности клеток 1×10 ⁷ клеток/мл. Затем клетки промывают буфером для анализа кальция (раствор Хэнка, кат. № 05906 Nissui, 20 мМ HEPES рН 7,6, 0,1% БСА, 1 мМ пробенецида, кат. № Р-8761, Sigma). Суспензию клеток (3,3×10⁶ клеток/мл) добавляют в количестве 60 мкл/лунка в 96-луночный черный планшет с прозрачным дном (кат. № 3904, Costar). Соединения, разведенные (концентрация в 5 раз больше конечной концентрации) буфером для анализа кальция, добавляют в количестве 20 мкл/лунка в планшет за 10 минут до начала анализа. Человеческий рекомбинантный эотаксин, разведенный буфером для анализа кальция в концентрации 50 нМ (конечная концентрация; 10 нМ), добавляют в полипропиленовый планшет (кат. № 3365, Costar). Мобилизацию кальция цитоплазмы измеряют с помощью FDSS-6000 или SS-3000 (Hamamatsu Photonics) в течение 60 секунд после стимулирования 10 нМ эотаксина. Рассчитывают процент ингибирования для каждой концентрации соединения и значения IC50 определяют, исходя из кривой ингибирования.

[Определение значений IC50 соединений в анализе хемотаксиса]

(1) Клетки

Используют человеческие CCR3-трансформированные клетки L1.2. Человеческий CCR3-экспрессирующий L1.2 стабильный трансформант устанавливают электропорацией согласно методам, описанным в J. Exp. Med. 183:2437-2448, 1996. Человеческие ССК3-трансформированные клетки L1.2 выдерживают в RPMI-1640 с добавлением 10% FSC, 100 единиц/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина, и 0,4 мг/мл Geneticin. За один день перед началом анализа хемотаксиса клетки предварительно обрабатывают 5 мМ бутират натрийсодержащей культуральной средой (5×10⁵ клеток/мл) в течение 20-24 часов для увеличения экспрессии CCR3.

(2) Анализ хемотаксиса

Предварительно обработанные бутиратом клетки суспендируют в буфере для хемотаксиса (раствор Хэнка, кат. № 05906 Nissui, 20 мМ HEPES рН 7,6, 0,1% альбумина человеческой сыворотки, кат № А-1887, Sigma) при плотности клеток 1,1×10⁷ клеток/мл. Смесь из 90 мкл суспензии клеток и 10 мкл раствора соединения, разведенного буфером для хемотаксиса (концентрация в 10 раз больше конечной), предварительно инкубируют в течение 10 минут при температуре 37°С. Смесь клеток и соединений добавляют в верхнюю камеру 24-ячеечной камеры для хемотаксиса (Transwell , кат. № 3421, Costar, размер пор 5 мкм). 0,5 мл 10 нМ раствора человеческого рекомбинантного эотаксина (кат. № 23209, Ganzyme Techne), разведенного буфером для хемотаксиса, добавляют в нижнюю камеру планшета для хемотаксиса. Затем проводят хемотаксис в CO₂ инкубаторе при температуре 37°С в течение 4 часов. После инкубирования в течение 4 часов мигрировавшие клетки подсчитывают с использованием FACScan (Becton Dickinson). Рассчитывают процент ингибирования для каждой концентрации соединения и значения IC50 определяют, исходя из кривой ингибирования.

[Тест на селективность]

Тест на селективность проводят в рамках анализа мобилизации кальция и анализа рецепторного связывания с применением CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR7, CCR8, CXCR1 и PAR-1 (рецептор активации пептидазы) стабильных трансформантов. Методы тестирования являются такими же, как и для CCR3. Единственным отличием является использование различных стабильных трансформантов в этих тестах на селективность.

[Определение значений IC50 соединений в анализе хемотаксиса с использованием человеческих эозинофилов]

Человеческие эозинофилы очищают от периферийной крови. Двадцать пять мл гепаринизированной крови осторожно расслаивают в 15 мл Mono-Poly Resolving Medium ( № 16-980-49DN, ICN Biomedicals Co. Ltd, Japan) в 50 мл пробирке ( № 2335-050, Iwaki, Japan) и затем центрифугируют при 400g в течение 20 мин при комнатной температуре. После центрифугирования красные клетки крови удаляют гипотоническим лизисом. Осадок полиморфоядерных лейкоцитов инкубируют с античеловеческими CD16 Microbeads ( № 130-045-701, Milteynyi Biotec GmbH, Germany) в течение 30 мин при температуре 4°С. После промывания клеток, магнитно-меченые нейтрофилы уменьшают путем обработки суспензии клеток на BS колонках ( № 130-041-304, Milteynyi Biotec GmbH, Germany), присоединенных к VarioMACS ( № 130-090-282, Milteynyi Biotec GmbH, Germany).

Анализ хемотаксиса с использованием полученных эозинофилов проводят по тому же протоколу, который применяют для CCR3 стабильных трансформантов, L1.2 клеток.

[Модель хронической астмы у приматов: протокол]

Материалы и методы: Животные, используемые в исследовании, представляют собой диких взрослых самцов обезьян циномолгус (Macaca fascicularis), массой от 4,0 до 9,0 кг (Charles River BRF, Inc.). Все исследуемые животные имеют природную респираторную чувствительность к вдыхаемому экстракту Ascaris suum. Животных содержат отдельно в комнатах с контролем окружающей среды в клетках с открытыми решетками и дают два раза в день пищу и воду ad libitum . Каждое животное голодало приблизительно в течение 12 часов перед днем начала исследования. Для каждого исследования животных анестезируют гидрохлоридом кетамина (7 мг/кг, в.м. Ketaset, Fort Dodge, IA;) и ксилазином (1,2 мг/кг, в.м., Bayer Corp., Elkart, IN), инкубируют эндотрахеальной трубкой с манжеткой (5,0 мм внутренний диаметр, Mallinckrodt Critical Care, Glen Falls, NY) и усаживают в специально разработанное поддерживающее кресло. Для поддержания анестезии, при необходимости, применяют кетамин (5 мг/кг, в.м.).

Протокол исследования: Реакцию дыхательных путей (AR) на вдыхаемый метахролин с последующим бронхоальвеолярным лаважем (BAL) для оценки клеточной композиции дыхательных путей (ACC) определяют за 3 дня до (день 0) и через 3 дня после (день 10) трех чередующихся ингаляций (дни 3, 5, 7) экстракта Ascaris suum. Животным позволяют отдыхать в течение от 6 до 8 недель между исследованиями для того, чтобы реакция дыхательных путей и воспаление вернулись к исходным (до-антигенным) уровням. Исследования с применением лекарства объединяют с исследованиями с применением контрольного вещества для того, чтобы удостовериться, что никаких изменений в чувствительности к антигену не возникает в течение времени.

Тестируемые соединения, растворенные в смеси этанол:ПЭГ400:вода (10:50:40 об./об.), вводят под легкой анестезией.

Система доставки аэрозоля и ингаляции типа антигенного стимула: Аэрозольную ингаляцию типа антигенного стимула вводят с помощью периодического вдыхания при положительном давлении с использованием респиратора Bird Mark 7A и микрораспылителя (модель 8158). Каждая ингаляция состоит из 30 вдохов (максимальное инспираторное давление=20 см Н ₂О). Экстракт Ascaris suum (Greeg Laboratories, Lenoir, NC) разводят PBS до конечной пороговой концентрации, предварительно определенной для каждого животного, и вводят в виде аэрозоля (размер частиц <2 мкм). Метахолин (Sigma Chemical Co, St. Louis, Missouri) растворяют в PBS с концентрацией 100 мг/мл, и последовательные разведения 30, 10, 3, 1, 0,3 и 0,1 мг/мл последовательно готовят для распыления.

Измерение резистентности дыхательной системы (Rrs) : Животных подключают к Harvard Ventilator (Harvard Apparatus, S. Natick, MA) через эндотрахеальную трубку и вентилируют со скоростью от 30 до 35 вдохов в минуту. Поток воздуха измеряют с помощью Fleish (Hans Rudolph) пневмотахографа, и грудное давление измеряют с помощью трансдуктора давления валидина (в качестве различия между давлением в периферическом конце эндотрахеальной трубки и комнатным давлением). Пневмотахограф и валидин подключают к пре-усилителю и затем к MI² анализатору дыхания (Malvern, PA). Используя первичные сигналы потока и давления, анализатор рассчитывает резистентность дыхательных путей и коэффициент податливости (а также множество других параметров дыхания).

Определение реакции на дозу метахолина : Для оценки реакции дыхательных путей на вдыхаемый метахолин строят кривые зависимости от кумулятивной дозы путем введения повышенных концентраций метахолина до тех пор, пока Rrs не станет от 100 до 200%. Перед введением первой дозы метахолина вводят дозу носителя в качестве контроля. Изменения Rrs измеряют непрерывно в течение 10 минут после ввода аэрозоля. Ввод аэрозоля разделяют 5-10 минутными перерывами или до тех пор, пока Rrs не вернется к исходным уровням.

Определение значений PC₁₀₀: Резистентность, полученную для PBS, принимают за ноль. Процент повышения резистентности выше ноля для каждой дозы метахолина вводят в компьютер, и программа использует алгоритм для определения точной концентрации метахолина, которая вызывает повышение резистентности на 100% по сравнению с исходным уровнем (РС₁₀₀). Различия (день 10-день 0) в значениях РС₁₀₀ рассчитывают как логарифмы (база 10) для нормализации данных и расчетов для больших вариаций в абсолютных значениях для РС₁₀₀ для различных животных.

Бронхоальвеолярный лаваж: После определения реакции на дозу метахолина каждую обезьяну помещают в положение на спине, и волоконно-оптический бронхоскоп (Olympus Optical, модель 3С-10, Lake Success, NY) проводят под килем и вклинивают в пятую-седьмую генерацию бронхов. Всего 15 мл физиологического раствора с бикарбонатным буфером (рН 7,4) вливают и осторожно отсасывают через канал в бронхоскопе. Собранные образцы немедленно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 минут при температуре 4°С. Полученный осадок после центрифугирования повторно суспендируют в не содержащем Ca++ и Mg++ сбалансированном солевом растворе Хэнка. Во избежание возможного воздействия процедуры BAL на клеточный состав легких, BAL проводят попеременно на правом и левом легком. Общее количество белых клеток на миллилитр жидкости BAL определяют с помощью счетчика Coulter (Coulter Corp., Miami, FL). Состав клеток BAL определяют с помощью подсчета минимум 200 клеток из меченого препарата цитоспина Райта.

Образцы крови: Образцы крови собирают до и через 30 минут, 1 час и 2 часа после введения первой дозы тестируемых соединений (утро 2-го дня) непосредственно перед введением каждой последующей дозы и через 30 минут, 1 час и 2 часа после конечной дозы (вечер 9-го дня). Кровь берут из бедренной вены в EDTA, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 минут при температуре 4°С и плазму хранят при температуре -70°С до исследования тестируемых соединений.

Статистический анализ: Все данные оценивают статистически с применением проверки по критерию Стьюдента, где р значение <0,05 считается статистически значимым.

Результаты анализа рецепторного связывания (RBA), анализа мобилизации Ca²⁺ (Ca ²⁺) показаны в примерах и таблицах примеров, представленных ниже. Данные соответствуют соединениям, полученным твердофазным синтезом, и, таким образом, уровни чистоты составляют от 40 до 90%. По практическим соображениям соединения сгруппированы в три класса активности следующим образом:

IC ⁵⁰=А 100нМ<В 500 нМ<С

Соединения данного изобретения также показывают более чем 100-кратную селективность в отношении к CCR1, CCR5, CCR7, CCR8 и CXCR1 в анализах рецепторного связывания.

Соединения данного изобретения показывают зависимое от дозы ингибирующее действие на вызванный эотаксином хемотаксис человеческих эозинофилов и сильную активность в анализах in vivo.

Методики получения исходных соединений

[Исходное соединение А]

5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфонилхлорид

(1) К смеси 4-хлор-3-нитробензонитрила (24,0 г, 131 ммоль) и 3,5-дихлорфенола (32,0 г, 197 ммоль) в сухом ТГФ (150 мл) порциями добавляют NaH (6,84 г, 171 ммоль) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривают и 100 мл ледяной воды, и 20 мл 4 н. водн. NaOH добавляют к остатку. Осадок собирают фильтрованием, промывают 0,5 н. водн. NaOH и водой, сушат в вакууме с получением 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)нитробензола (40,0 г, 98,4%) в виде слегка желтого твердого вещества.

(2) Смесь 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)нитробензола (4,08 г, 13,20 ммоль) и дигидрата хлорида олова(II) (17,87 г, 79,20 ммоль) в EtOAc (200 мл) нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливают в насыщенный водный NaHCO₃ . Смесь экстрагируют EtOAc. Экстракт промывают насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают в вакууме с получением 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)анилина (3,53 г, 95,8%).

(3) 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)анилин (3,53 г, 12,65 ммоль) растворяют в смеси конц. водн. HCl (6,33 мл) и HOAc (2,53 мл). Раствор охлаждают до температуры 0°С и по каплям добавляют нитрит натрия (0,96 г, 13,9 ммоль) в воде (1,27 мл) при перемешивании. Через 30 минут реакционную смесь по каплям добавляют в суспендированную смесь CuCl (0,63 г, 6,32 ммоль) в насыщенном растворе SO₂ в HOAc (25,3 мл) при температуре 5°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при температуре 10°С и выливают в воду. Полученную смесь экстрагируют EtOAc. Экстракт промывают насыщенным водным NaHCO₃, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO ₄. Растворитель выпаривают в вакууме с получением 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфонилхлорида в виде коричневого порошка (4,45 г, 97%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₃Н₆Cl₃NO₃S [M+H]⁺ 362, найдено: 362.

Пример 1-1

N-(R)-(+)-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамид

К суспензии (R)-(+)-3-аминохинуклидина 2HCl (2,87 г, 14,4 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (25 мл) добавляют Et₃N (5,88 мл, 42,0 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим добавлением по каплям раствора 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфонилхлорида (90%, 4,83 г, 12 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (10 мл). После перемешивания в течение 5 часов при комнатной температуре добавляют CH₂Cl₂ (160 мл), смесь промывают водой, насыщенным водным Na₂CO ₃, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄ . Растворитель выпаривают и продукт перекристаллизовывают из смеси EtOAc и гексана с получением N-(R)-(+)-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонамида (4,30 г, 79,2%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 1,46-1,59 (2H, м), 1,68-1,72 (1H, м), 1,86-1,88 (2H, м), 2,69-2,99(6H, м), 3,20-3,28 (1H, м), 3,46-3,51 (1H, м), 7,00 (1H, д, J=8,67 Гц), 7,04 (2H, с), 7,32 (1H, т, J=1,7 Гц), 7,79 (1H, дд, J=8,64, 2,07 Гц), 8,31 (1H, д, J=2,07 Гц); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C₂₀ H₁₉С₁₂N₃O₃S [M+H] ⁺ 452, найдено: 452.

Молекулярная масса: 452,36

Температура плавления: 215-220°С (разложение)

Уровень активности CCR3: А

Уровень активности IC₅₀: А

Пример 1-2

5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)-N-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)этил]бензолсульфонамид

(1) 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)бензолсульфонамид

К раствору N¹,N¹ -диметилэтан-1, 2-диамина (74,0 мг, 0,84 ммоль) и Et₃ N в сухом CH₂Cl₂ (3 мл) по каплям добавляют раствор 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфонилхлорида (90%, 282 мг, 0,7 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (6 мл). Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют CH₂Cl₂ (60 мл), смесь промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO ₄. Растворитель выпаривают и остаток очищают колоночной хроматографией (CH₂Cl₂/CH₃OH=10:1) с получением 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)бензолсульфонамида (220 мг, 75,9%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₉ Н₂₁Cl₂N₃O₄S [M+H] ⁺ 414, найдено: 414.

(2) 1-(2-бромэтил)пирролидин-2,5-дион

К смеси дигидрофуран-2,5-диона (396 мг, 4,00 ммоль) и 1,2-дибромэтана (1,50 г, 8,00 ммоль) в CH ₃CN (20 мл) добавляют K₂CO₃ (829 мг, 6,00 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи и растворитель выпаривают. Смесь разбавляют EtOAc (150 мл), промывают водой, насыщенным водным Na₂CO₃, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают с получением 1-(2-бромэтил)пирролидин-2,5-диона, который используют на следующей стадии без дальнейшей очистки (580 мг, 70,4%).

(3) 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)-N-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)этил]бензолсульфонамид

К раствору 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)бензолсульфонамида (41,4 мг, 0,1 ммоль) в сухом ДМФА (2 мл) добавляют 1-(2-бромэтил)пирролидин-2,5-дион (30,9 мг, 0,15 ммоль) и NaH (60%, 6,00 мг, 0,15 ммоль). Смесь перемешивают в течение 8 часов при температуре 90°С. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривают. Смесь разбавляют EtOAc (60 мл), промывают насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают, остаток очищают препаративной ТСХ (CH₂Cl₂/CH ₃OH=20/1) с получением 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)-N-(2-диметиламиноэтил)-N-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)этил]бензолсульфонамида (44 мг, 81,6%), и свободное основание превращают в соль HCl с использованием 4 н. HCl в диоксане.

¹ H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 2,76 (4H,с), 2,85 (6H, с), 3,56 (4H, ушир.с), 3,74-3,80 (2H, м), 3,94 (2H, ушир.с), 7,01 (1H, д, J=8,64 Гц), 7,09 (2H, с), 7,33 (1H, с), 7,81 (1H, д, J=8,64 Гц), 8,21 (1H, с); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C₂₃H₂₄Cl₂ N₄O₅S^.HCl [M+H]⁺ 539, найдено: 539.

Молекулярная масса: 575,90

Температура плавления:

Уровень активности CCR3: А

Уровень активности IC₅₀: А

Пример 1-3

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил

(1) этиловый эфир [(2S)-бензилоксикарбониламино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты

К смеси (2S)-бензилоксикарбониламино-3-(1Н-индол-3-ил)пропионовой кислоты (4,16 г, 12,3 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (2,83 г, 14,8 ммоль), 1-гидроксибензотриазола (1,99 г, 14,8 ммоль) и Et₃N (5,14 мл, 36,9 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) порциями добавляют гидрохлорид этилового эфира аминоуксусной кислоты (1,72 г, 12,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. Органический растворитель выпаривают в вакууме и остаток разбавляют EtOAc. Органический слой промывают 0,5 н. HCl, насыщенным водным NaHCO₃, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄. Органический слой концентрируют с получением этилового эфира [(2S)-бензилоксикарбониламино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты (5,10 г, 97,9%) в виде желтого липкого масла: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₂₃Н₂₅N₃ O₅ [M+H]⁺ 424, найдено: 424.

(2) этиловый эфир [(2S)-амино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты

К суспензии 10% Pd/C (0,50 г) в сухом МеОН (70 мл) добавляют раствор этилового эфира [(2S)-бензилоксикарбониламино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты (5,10 г, 17,6 ммоль) в сухом МеОН (30 мл). Реакционную смесь перемешивают в 1 атм Н₂ в гидрогенизаторе в течение 1 дня при комнатной температуре. После удаления всех частиц через слой целлита фильтрат концентрируют в вакууме с получением этилового эфира [(2S)-амино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты (2,36 г, 91,6%) в виде масла: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₅Н₁₉N₃O₃ [M+H] ⁺ 290, найдено: 290.

(3) (3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-2,5-дион

Раствор этилового эфира [(2S)-амино-3-(1Н-индол-3-ил)пропиониламино]уксусной кислоты (3,25 г, 11,2 ммоль) и Et₃N в сухом МеОН нагревают при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Полученный белый осадок собирают и сушат с получением (3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-2,5-диона (1,80 г, 65,9%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₃ Н₁₃N₃O₂ [M+H]⁺ 244, найдено: 244.

(4) 3-(пиперазин-(2S)-илметил)-1Н-индол

К суспензии алюмогидрида лития (0,19 г, 5,08 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл) по каплям добавляют раствор (3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-2,5-диона (0,30 г, 1,23 ммоль) в ТГФ (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре 75°С в течение ночи, охлаждают до комнатной температуры, к смеси последовательно добавляют 0,19 мл воды, 0,19 мл 4 н. водного NaOH и 0,58 мл воды при температуре 0°С. Полученный белый осадок отфильтровывают через слоя целита и фильтрат концентрируют в вакууме с получением 3-(пиперазин-(2S)-илметил)-1Н-индола (0,26 г, количественный) в виде желтого масла: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₃Н₁₇N₃ [M+H]⁺ 216, найдено: 216.

(5) 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрил

К раствору 3-(пиперазин-(2S)-илметил)-1Н-индола (33,0 мг, 0.15 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,08 мл, 0,46 ммоль) в сухом ТГФ (2 мл) порциями добавляют 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонилхлорид (50,0 мг, 0,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме. Остаток очищают препаративной ТСХ (CH₂Cl ₂/МеОН=10/1) дважды с получением 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-[(3S)-(1Н-индол-3-илметил)пиперазин-1-сульфонил]бензонитрила (6,20 мг, 7,5%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 2,56-3,07 (7H, м), 3,71-3,75 (1H, д, J=10,9 Гц), 3,83-3,86 (1H, д, J=11,1 Гц), 6,98 (2H, д, J=1,7 Гц), 7,04-7,05 (1H, д, J=2,3 Гц), 7,10-7,15 (1H, т, J=7,0 Гц), 7,20-7,25 (1H, т, J=7,0 Гц), 7,28-7,29 (1Н, т, J=1,9 Гц), 7,37-7,40 (1H, д, J=7,9 Гц), 7,55-7,58 (1H, д, J=7,5 Гц), 7,75-7,78 (1H, дд, J=2,1, 8,7 Гц), 8,09 (1H, ушир.), 8,28-8,29 (1Н, д, J=2,1 Гц); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C₂₆H₂₂C₁₂N ₄О₃S [M+H]⁺ 541, найдено: 541.

Молекулярная масса: 541,46

Температура плавления: 128-129°С

Уровень активности CCR3: А

Уровень активности IC₅₀: А

Пример 1-4

Гидрохлорид 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{[2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинил]сульфонил}бензонитрила

(1) Метиловый эфир 1,4-дибензилпиперазин-2-карбоновой кислоты

К предварительно разогретому раствору (50°С) метилового эфира 2,3-дибромпропионовой кислоты в толуоле (40 мл) и Et₃N (5,80 мл, 41,6 ммоль) по каплям добавляют N,N'-дибензилэтан-1,2-диамин (4,90 мл, 20,8 ммоль). Полученную белую суспензию нагревают при кипении с обратным холодильником до получения прозрачного раствора и раствор перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь экстрагируют 2 н. HCl (около 500 мл) и экстракт нейтрализуют 4 н. NaOH. Водный слой экстрагируют EtOAc три раза. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO₄ и концентрируют с получением метилового эфира 1,4-дибензилпиперазин-2-карбоновой кислоты (5,73 г, 84,8%) в виде бесцветного масла: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₂₀Н₂₄N₂O ₂ [M+H]⁺ 325, найдено: 325.

(2) (1,4-дибензилпиперазин-2-ил)метанол

К суспензии алюмогидрида лития (1,54 г, 40,6 ммоль) порциями добавляют метиловый эфир 1,4-дибензилпиперазин-2-карбоновой кислоты (3,00 г, 9,25 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения до температуры 0°С к смеси последовательно добавляют 1,5 мл воды, 1,5 мл 4 н. водного NaOH и 4,5 мл воды. Смесь перемешивают в течение 1 часа и белый осадок отфильтровывают через слоя целита. Фильтрат концентрируют в вакууме с получением (1,4-дибензилпиперазин-2-ил)метанола (2,74 г, количественный) в виде желтого масла: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₉ Н₂₄N₂O [M+H]⁺ 297, найдено: 297.

(3) 1,4-дибензил-2-хлорметилпиперазин

К раствору тионилхлорида (1,63 мл, 22,4 ммоль) в CCl₄ (30 мл) по каплям добавляют раствор (1,4-дибензилпиперазин-2-ил)метанола (2,74 г, 9,25 ммоль) в CCl ₄ в течение 10 минут. Полученную суспензию перемешивают в течение 2 часов при температуре 77°С. После охлаждения до комнатной температуры добавляют 20 мл ледяной воды и водный слой отделяют от органического растворителя. Доводят рН водного слоя до 12 с 4 н. водного NaOH и экстрагируют CHCl₃ три раза. Объединенный органический слой сушат над MgSO ₄ и концентрируют с получением коричневатого масла, которое очищают колоночной хроматографией с силикагелем (CH₂ Cl₂/МеОН=30/1) с получением 1,4-дибензил-2-хлорметилпиперазина в неочищенном виде (3,08 г, 95%, чистота около 90% согласно анализу ВЭЖХ). Соединение используют на следующей стадии без дальнейшей очистки: ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₉Н₂₃ ClN₂ [M+H]⁺ 315, найдено: 315.

(4) 1,4-дибензил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазин

К раствору 1,2,4-триазола (48,3 мг, 0,70 ммоль) в ДМФА (2 мл) добавляют NaH (18,3 мг, 0,76 ммоль). Через 10 минут перемешивания к смеси добавляют 1,4-дибензил-2-хлорметилпиперазин (200 мг, 0,64 ммоль) и KI (156 мг, 0,70 ммоль). Смесь перемешивают при температуре 60°С в течение ночи. Смесь разбавляют EtOAc и промывают водой и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией с NH-силикагелем (Hex/AcOEt=1/4) с получением 1,4-дибензил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазина (220,0 мг, 99,7%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₂₁ Н₂₅N₅ [M+H]⁺ 348, найдено: 348.

(5) Дигидрохлорид 2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазин

К раствору 1,4-дибензил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазина (206 мг, 0,59 ммоль) в МеОН (3,0 мл) добавляют несколько капель 4 н. HCl в 1,4-диоксане и 20% влажный Pd(OH)₂ (100 мг). Смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Н₂ из баллона. Катализатор фильтруют через слой целита и фильтрат концентрируют в вакууме с получением дигидрохлорида 2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазин (122,9 мг, 86,3 %): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₇ Н₁₃N₅ [M+H]⁺ 168, найдено: 168.

(6) трет-бутил-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилат

К суспензии дигидрохлорида 2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)пиперазин (104 мг, 0,39 ммоль) и Et₃N (157,7 мг, 1,56 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл) добавляют [{[(трет-бутоксикарбонил)окси]амино}(циано)метил]бензол (106,5 мг, 0,43 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают колоночной хроматографией с силикагелем (МеОН/CHCl ₃=1/10) с получением трет-бутил-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилата (50,9 мг, 48,9%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₁₁ Н₂₀N₆O₂ [M+H]⁺ 268, найдено: 268.

(7) трет-бутил-4-{[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенил]сульфонил}-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилат

К раствору трет-бутил-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилата (29,5 мг, 0,11 ммоль) и диизопропилэтиламина (28,5 мг, 0,22 ммоль) в ТГФ (2 мл) добавляют 5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонилхлорид (40,0 мг, 0,11 ммоль). Смесь перемешивают при температуре 50°С в течение ночи. Растворитель удаляют, остаток разбавляют CHCl ₃, промывают насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают в вакууме и полученный остаток очищают препаративной ТСХ (МеОН/CHCl₃=1/10) с получением трет-бутил-4-{[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенил]сульфонил}-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилата (42,5 мг, 64,9%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С₂₅ Н₂₆Cl₂N₆O₅S [M+H] ⁺ 593, найдено: 593.

(8) Гидрохлорид 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{[2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинил]сульфонил}бензонитрила

К раствору трет-бутил-4-{[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенил]сульфонил}-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинкарбоксилата (37 мг, 0,06 ммоль) в CН₂Cl₂ (1 мл) добавляют 4 н. HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме, остаток растирают с Et₂O и белое твердое вещество собирают фильтрованием с получением гидрохлорида 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-{[2-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-пиперазинил]сульфонил}бензонитрила (28,5 мг, 86,3%).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): 2,30-3,37 (1H, м), 3,71 (1H, т, J=12,9 Гц), 4,01 (2H, д, J=14,2 Гц), 4,56 (1H, дд, J=14,2, 5,4 Гц), 4,60-4,63 (1H, м), 4,82 (1H, дд, J=13,9, 9,5 Гц), 7,21 (1H, д, J=8,5 Гц), 7,40 (2H, д, J=1,6 Гц), 7,59 (1H, т, J=3,5, 1,6 Гц), 7,68 (1H, с), 8,05 (1H, д, J=2,2 Гц), 8,07 (1H, с), 8,59 (1H, с), 9,51 (1H, ушир.с), 9,58 (1H, ушир.с); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C ₂₅H₂₆Cl₂N₆O₅ S [M+H]⁺ 494, найдено: 494.

Молекулярная масса: 529,84

Температура плавления: 177°С (разложение)

Уровень активности CCR3: А

Уровень активности IC₅₀: А

Соединения примеров (1-5)-(1-47), показанные в таблице, получают по методике примеров (1-1)-(1-4) или соответствующими реакциями.

Пример 2-1

4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(пиперидин-4-сульфонил)бензонитрил

(1) К раствору 3-амино-4-(3,5-дихлорфенокси)бензонитрила (4,19 г, 15 ммоль) в водн. HCl (конц. HCl (10 мл)+вода (25 мл)) по каплям добавляют раствор NaNO₂ (1,14 г, 16,5 ммоль) в воде (6 мл) при перемешивании при температуре ниже 4°С. После добавления рН раствора доводят до 4 добавлением ацетата натрия. После перемешивания при температуре 0°С в течение 20 минут смесь добавляют в горячий раствор (80°С) О-этилдитиокарбоната калия (4,81 г, 30 ммоль) в воде (45 мл) при перемешивании. Смесь перемешивают при температуре 80°С в течение 0,5 часа. После охлаждения до комнатной температуры раствор экстрагируют EtOAc, сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают с получением сложного О-этилового эфира S-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенил]сложного эфира дитиокарбоновой кислоты, который используют на следующей стадии без дальнейшей очистки (5,50 г, 66,8% (чистота 70%)).

(2) Смесь сложного О-этилового эфира S-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенил]сложного эфира дитиокарбоновой кислоты (5,50 г, 66,8% (чистота 70%)), КОН (3,37 г, 60,1 ммоль) в этаноле (20 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривают. К остатку добавляют 30 мл ледяной воды. рН смеси доводят до 4 добавлением уксусной кислоты. Смесь экстрагируют EtOAc. Экстракт промывают водой, насыщенным раствором соли, сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают с получением 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-меркаптобензонитрила, который используют на следующей стадии без дальнейшей очистки (3,20 г, 75,5% (чистота 70%)).

(3) К суспензии гидробромида 4-бромпиперидина (2,94 г, 12 ммоль) в CH₂Cl₂ (30 мл) добавляют NEt₃ (3,04 г, 4,2 мл, 30 ммоль) при перемешивании. Через 10 минут добавляют би-трет-бутилдикарбонат (3,14 г, 14,4 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов и разбавляют CH₂Cl₂ (60 мл). Смесь промывают 0,2 н. водн. HCl, 5% водн. NaHCO₃, насыщенным раствором соли, сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают с получением трет-бутилового эфира 4-бромпиперидин-1-карбоновой кислоты в виде бесцветной жидкости, которую используют на следующей стадии без дальнейшей очистки (2,60 г, 69,5% (чистота 70%)).

(4) Смесь 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-меркаптобензонитрилового эфира (338 мг, 0,8 ммоль (чистота 70%)), трет-бутилового эфира 4-бромпиперидин-1-карбоновой кислоты (362 мг, 0,96 ммоль, (чистота 70%)) и K₂CO₃ (552 мг, 4 ммоль) в сухом ДМФА (8 мл) перемешивают при температуре 95°С в течение ночи. Растворитель выпаривают и остаток разбавляют EtOAc (100 мл). Смесь промывают насыщенным раствором соли и органический слой сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают с получением трет-бутилового эфира 4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфанил]пиперидин-1-карбоновой кислоты, который используют на следующей стадии без дальнейшей очистки (360 мг, 56,3%, (чистота 60%)).

(5) К раствору трет-бутилового эфира 4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)фенилсульфанил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (320 мг, 0,4 ммоль (60 чистота)) в смеси CCl₄ (6 мл) и CH₃CN (6 мл) добавляют раствор NaIO ₄ (599 мг, 2,80 ммоль) и RuCl₃ (41,5 мг, 0,2 ммоль) в воде (12 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов и растворитель выпаривают. Остаток разбавляют EtOAc (100 мл). Смесь промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат над MgSO₄. Растворитель выпаривают и неочищенный продукт очищают препаративной ТСХ (EtOAc/гексан=1:1) с получением трет-бутилового эфира 4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (50,0 мг, 24,4%): ВЭЖХ-МС (ESI): рассчитано для С ₂₃Н₂₄Cl₂N₂O₅ S [M+H]⁺ 511, найдено: 511.

(6) К раствору трет-бутилового эфира 4-[5-циано-2-(3,5-дихлорфенокси)бензолсульфонил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (30 мг, 0,06 ммоль) в CH₂Cl₂ (1 мл) добавляют 4 н. HCl (в диоксане, 0,6 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Полученный белый осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме с получением гидрохлорида 4-(3,5-дихлорфенокси)-3-(пиперидин-4-сульфонил)бензонитрила (23 мг, 87,6%).

¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 1,72-1,77 (2H, ддм, J=13,4 Гц, J=3,78 Гц), 2,03-2,09 (2H, ддм, J=13,4 Гц, J=3,78 Гц), 3,09 (2H, ушир.с), 3,18 (2H, ушир.с), 4,94 (1H, кв., J=3,78 Гц), 7,54 (1H, д, J=9,03 Гц), 7,96 (2H, с), 8,07 (1H, с), 8,76 (1H, с), 8,46 (1H, с), 8,83 (1H, ушир.с), 9,14 (1H, ушир.с); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C₁₈ H_I7Cl₃N₂O₃S [M+H] ⁺ 411, найдено: 411.

Молекулярная масса: 447,77

Температура плавления: 220-226°С (разложение)

Уровень активности CCR3: С

Уровень активности IC₅₀: С

Пример 3-1

N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-2-(3,5-дихлорфенилсульфанил)-5-нитробензолсульфонамид

(1) К суспензии дигидрохлорида 1-азабицикло[2.2.2]окт-3-иламина (44,9 мг, 0,205 ммоль) в ТГФ порциями добавляют NaH (60%, 41,0 мг, 1,03 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 минут. Затем перемешиваемую смесь по каплям добавляют к раствору 2-хлор-5-нитробензолсульфонилхлорида (52,2 мг, 0,205 ммоль) в ТГФ при температуре 0°С. Полученную смесь перемешивают при температуре 0°С в течение 2 часов.

(2) После удаления ледяной бани к смеси добавляют NaH (60%, 9,90 мг, 0,246 ммоль) с последующим добавлением 3,5-дихлорбензолтиола (44,0 мг, 0,246 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрируют в вакууме. Остаток разбавляют EtOAc и промывают водой, 1 н. NaOH и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме с получением неочищенного продукта. Затем неочищенное соединение очищают препаративной ТСХ с получением N-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил)-2-(3,5-дихлорфенилсульфанил)-5-нитробензолсульфонамида (41,3 мг, 41,3%) в виде белого порошка:

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 1,48-1,59 (1H, м), 1,61-1,73 (1H, м), 1,75-1,83 (2H, м), 2,54-2,61 (1H, м), 2,64-2,82 (2H, м), 2,85-2,90 (2H, т, J=7,5 Гц), 3,19-3,27 (1H, дд, J=9,4, 14,1 Гц), 3,42-3,46 (1H, м), 7,13-7,16 (1H, д, J=8,9 Гц), 7,39-7,40 (2H, д, J=1,9 Гц), 7,52-7,53 (1H, т, J=1,9 Гц), 8,18-8,22 (1H, дд, J=2,6, 8,9 Гц), 8,87-8,88 (1H, д, J=2,5 Гц); ВЭЖХ-МС (ESI): Рассчитано для C₁₉H ₁₉Cl₂N₃O₄S₂ [M+H]⁺ 488, найдено: 488.

Молекулярная масса: 488,41

Температура плавления: 256°С