агонисты рецептора меланокортина

Формула изобретения

1. Пептид формулы I



где XI представляет собой Nle или Х-Nle, где Х представляет собой

Ala-Lys-Tyr-Ser- (SEQ ID NO: 1),

Ala-Lys-Ala-,

Asn-Arg-Gly-,

Asn-Arg-Hyp-,

Asn-Asn-Pro-,

Asn-Asn-Thr-,

Asn-His-Gly-,

Asn-His-Pro-,

Asn-homoArg-Hyp-,

Asn-homoArg-Thr-,

Asn-Tyr-Ser-,

Dab-,

D-Ser-Arg-Pro-,

D-Ser-Arg-Thr-,

D-Ser-Asn-Hyp-,

D-Ser-Asn-Ser-,

D-Ser-His-Ser-,

D-Ser-His-Thr-,

D-Ser-homoArg-Gly-,

D-Ser-homoArg-Pro-,

D-Ser-Tyr-Gly-,

D-Ser-Tyr-Hyp-,

Gln-Arg-Hyp-,

Gln-Arg-Ser-,

Gln-Asn-Pro-,

Gln-Asn-Thr-,

Gln-His-Hyp-,

Gln-His-Thr-,

Gln-homoArg-Gly-,

Gln-homoArg-Ser-,

Gln-Tyr-Gly-,

Gln-Tyr-Pro-,

Gly-Ser-Gln-His-Ser- (SEQ ID NO: 2),

Gly-Ser-Gln-homoArg-Ser- (SEQ ID NO: 3),

Ser-Arg-Gly-,

Ser-Arg-Pro-,

Ser-Arg-Ser-,

Ser-Arg-Thr-,

Ser-Asn-Gly-,

Ser-Asn-Ser-,

Ser-Gln-His-Ser- (SEQ ID NO: 4),

Ser-Gln-Ser-,

Ser-His-Gly-,

Ser-His-Hyp-,

Ser-His-Pro-,

Ser-His-Ser-,

Ser-homoArg-Pro-,

Ser-homoArg-Ser-,

Ser-homoArg-Thr-,

Ser-,

Ser-Tyr-Hyp-,

Ser-Tyr-Ser- или

Ser-Tyr-Thr-,

и где N-концевая аминогруппа X1 может быть ацилирована ацильной группой, R-C(O)-, где R представляет собой алкил или алкенил, содержащий до 6 атомов углерода, причем указанный алкил может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино;

Х2 представляет собой Glu, Asp;

Х3 представляет собой Cit, Dab, Dap, циклогексилглицин, циклогексилаланин, Val, Ile, трет-бутилглицин, Leu, Tyr, Glu, Ala, Nle, Met, Met(O), Met(O₂), Gln, Gln(алкил), Gln(арил), Asn, Asn(алкил), Asn(арил), Ser, Thr, Cys, Pro, Hyp, Tic, 2-PyAla, 3-PyAla, 4-PyAla, (2-тиенил)аланин, 3-(тиенил)аланин, (4-тиазолил)Ala, (2-фурил)аланин, (3-фурил)аланин, Phe, где фенильная группа указанного Phe возможно замещена галогеном или амино;

Х4 представляет собой D-Phe, где фенильная группа в D-Phe может быть замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогена, метила, трифторметила или циано;

Х5 представляет собой Arg;

Х6 представляет собой Trp;

Х7 представляет собой Lys;

где между Х2 и Х7 имеется связь с образованием циклического пептида формулы I, за счет амидной связи, образованной из карбоксильной группы в боковой цепи Х2 и аминогруппы в боковой цепи Х7;

R1 представляет собой -N(R")₂ или -OR", где каждый R" независимо представляет собой водород или C _1-6алкил, который может быть замещен одной или более чем одной амино- или гидроксильной группой;

при условии, что, если Х3 представляет собой Hyp, Ala, Pro, Glu, Lys или Gin и X1 представляет собой Ас-Nle, тогда Х2 не является Asp;

и его фармацевтически приемлемая соль.

2. Пептид по п.1, где R¹ представляет собой -N(R")₂ , где каждый R" представляет собой водород, либо где один R" представляет собой C_1-3алкил, возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино.

3. Пептид по п.1, где X1 представляет собой Nle или R-C(O)-Nle.

4. Пептид по п.1, где R представляет собой алкил, содержащий до 6 атомов углерода, возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино.

5. Пептид по п.4, где R представляет собой метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино.

6. Пептид по п.4, где R представляет собой 2-гидрокси-3-метилбутаноил или 2,4-диаминобутаноил.

7. Пептид по п.1, где X1 представляет собой Ac-Nle.

8. Пептид по п.1, где X1 представляет собой Ас-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle (SEQ ID NO: 5) или Ac-Ser-His-Ser-Nle (SEQ ID NO: 6).

9. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Met(O₂), Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дихлор), Phe(3,4-дифтор), Dab, Cgl, Val, Cha, Phe, Dap, Ile, Thr, tBuGly, (4-тиазолил)Ala, Hyp, Ans или Gin.

10. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Met(O₂), Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дифтор), Dab, Phe, Dap, Thr, (4-тиазолил)Ala или Hyp.

11. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Tic, Met(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla.

12. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Met(O₂), Hyp или 3-PyAla.

13. Пептид по п.1, где Х4 представляет собой D-Phe, D-Phe(4-хлор), D-Phe(4-йод), D-Phe(3-трифторметил), D-Phe(2-метил) или D-Phe(2-хлор).

14. Пептид по п.1, где Х4 представляет собой D-Phe или D-Phe(4-хлор).

15. Пептид по п.1, где Х4 представляет собой D-Phe.

16. Пептид по п.1, где Х2 представляет собой Glu и Х7 представляет собой Lys.

17. Пептид по п.1, где Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Lys.

18. Пептид по п.1, где Х2-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7 представляет собой с[Х2-Х3-D-Phe-Arg-Trp-Lys], где Х2 представляет собой Glu или Asp;

Х3 представляет собой Met(O₂), Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дихлор), Phe(3,4-дифтор), Dab, Cgl, Val, Cha, Phe, Dap, Ile, Thr, tBuGly, (4-тиазолил)Ala или Hyp.

19. Пептид по п.18, где Х2 представляет собой Glu и Х3 представляет собой Tic, Met(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla.

20. Пептид по п.19, где Х3 представляет собой Hyp.

21. Пептид по п.18, где Х2-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7 представляет собой c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys].

22. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Tic, Met(O) ₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla, a X1 представляет собой Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-(SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle.

23. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Tic, Меt(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla;

X1 представляет собой Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle- (SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle;

Х4 представляет собой D-Phe;

и Х2 представляет собой Asp.

24. Пептид по п.1, где Х3 представляет собой Tic, Met(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla;

X1 представляет собой Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle- (SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle;

Х4 представляет собой D-Phe;

и Х2 представляет собой Glu.

25. Пептид по п.1, выбранный из

Ac-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 6)

Ac-Nle-c[Glu-Leu-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 7)

Ac-Nle-c[Glu-Phe(3,4-5хлор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 8)

Ac-Nle-c[Glu-Met(O₂ )-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 9)

Ac-Nle-c[Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 10)

Ac-Nle-c[Glu-Cgl-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 11)

Ac-Nle-c[Glu-Val-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 12)

Ac-Nle-c[Glu-Tic-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 13)

Ac-Nle-c[Glu-Cha-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 14)

Ac-Nle-c[Glu-Ile-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 15)

Ac-Nle-c[Glu-tBuGly-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 16)

Ас-Nle-c[Glu-Phe(3,4-дифтор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 17)

Ac-Nle-c[Glu-Phe-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 18)

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 19)

H-Ala-Lys-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 20)

2-Гидрокси-3-метилбутаноил-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 21)

H-Dab-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 22)

H-Ala-Lys-Ala-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 23)

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(4-йод)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 24)

Гекс-5-еноил-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 25)

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 26)

Ac-Gly-Ser-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 27)

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Met(O ₂)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 28)

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 29)

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-аминоэтил)амид (SEQ ID NO: 30)

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-амино)-D-Phe(4-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 31)

Ac-Asn-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 32)

Ac-D-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 33)

Ac-Gln-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 34)

Ac-Ser-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 35)

Ac-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 36)

Ac-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 37)

Ac-D-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 38)

Ac-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 39)

Ac-D-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 40)

Ac-Ser-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂(SEQ ID NO: 41)

Ac-Gln-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 42)

Ac-Gln-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 43)

Ac-Asn-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 44)

Ac-Asn-гомоArg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 45)

Ac-D-Ser-Asn-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 46)

Ac-Gln-Tyr-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 47)

Ac-Ser-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 48)

Ac-Asn-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 49)

Ac-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 50)

Ac-D-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 51)

Ac-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 52)

Ac-D-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 53)

Ac-Gln-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 54)

Ac-Asn-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 55)

Ac-Ser-Tyr-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 56)

Ac-D-Ser-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 57)

Ac-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 58)

Ac-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 59)

Ac-D-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 60)

Ac-Ser-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 61)

Ac-Asn-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 62)

Ac-Gln-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 63)

Ac-Asn-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 64)

Ac-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 65)

Ac-Gln-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 66)

Ac-Ser-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 67)

Ac-Asn-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 68)

Ac-Ser-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 69)

Ac-Asn-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 70)

Ac-D-Ser-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 71)

Ac-Gln-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 72)

Ac-Ser-Asn-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 73)

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 74)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 75)

Ac-Ser-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 76)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 77)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Ser-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 78)

Ас-Ser-His-Ser-Nle-с[Glu-Нур-D-Phe(3-трифторметил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ NO: 79)

Ac-Ser-His-Ser-Nl-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-метил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 80)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 81)

Ac-Nle-c[Asp-Thr-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 82)

Ac-Nle-c[Asp-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 83)

Ac-Nle-c[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 84)

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-aминo)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 85)

Ac-Nle-c[Asp-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 86)

и Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 87).

26. Соединение по п.1, обладающее модулирующей активностью в отношении меланокортиновых рецепторов.

27. Способ лечения заболевания или состояния, где лечение выбрано из группы, включающей лечение ожирения или предупреждение избыточной массы тела, регуляцию аппетита, индукцию насыщения, предупреждение набора массы тела после успешной потери массы тела, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по любому из пп.1-26.

28. Фармацевтическая композиция, обладающая модулирующей активностью в отношении меланокортиновых рецепторов, содержащая соединение по любому из пп.1-26 в количестве 0,1-2000 мг и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

29. Композиция по п.28, содержащая соединение по любому из пп.1-26 в количестве 0,1-2000 мг и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель в единичной лекарственной форме.

30. Применение соединения по любому из пп.1-26 для изготовления лекарственного средства для лечения ожирения или предупреждения избыточной массы тела, регуляции аппетита, индукции насыщения, предупреждения повторного набора массы тела после успешной потери массы тела.

31. Применение по п.30, где указанное лекарственное средство предназначено для пациентов с ожирением.

Описание изобретения к патенту

Область изобретения

Изобретение относится к новым пептидам для применения в терапии, в частности для лечения ожирения и родственных заболеваний.

Предшествующий уровень техники

Ожирение является хорошо известным фактором риска для развития многих весьма распространенных заболеваний, таких как атеросклероз, гипертензия, диабет типа 2 (инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНЗСД)), дислипидемия, коронарная болезнь сердца, а также остеоартрит и различные злокачественные опухоли. Оно также вызывает значительные проблемы, связанные с ограниченной подвижностью и сниженным качеством жизни. Распространенность ожирения, а следовательно, также этих заболеваний растет во всем индустриальном мире. К настоящему времени доступно только несколько фармакотерапий, а именно сибутрамин (действующий посредством серотонинергических и норадреналиновых механизмов, Abbott) и орлистат (уменьшающий всасывание жира из кишечника, Roche Pharm). Однако в связи со значительным влиянием ожирения как фактора риска при серьезных и даже смертельных и распространенных заболеваниях все еще существует необходимость в фармацевтических соединениях, полезных при лечении ожирения.

Термин «ожирение» означает избыток жировой ткани. В данном контексте ожирение лучше всего рассматривать как любую степень избыточной тучности, которая создает риск для здоровья. Различие между нормальными индивидуумами и индивидуумами с ожирением может быть только приблизительным, но риск для здоровья, создаваемый ожирением, вероятно, непрерывно возрастает с увеличением тучности. Однако в контексте настоящего изобретения индивидуумов с индексом массы тела (ИМТ = масса тела в килограммах, разделенная на квадрат роста в метрах) выше 25 рассматривают как страдающих ожирением.

Даже слабая степень ожирения повышает риск преждевременной смерти, диабета, гипертензии, атеросклероза, заболевания желчного пузыря и некоторых типов рака. В западном индустриальном мире распространенность ожирения значительно повысилась в течение последних нескольких десятилетий. В связи с высокой распространенностью ожирения и его последствий для здоровья, его лечение должно представлять приоритетную задачу здравоохранения.

Когда поглощение энергии превышает расход энергии, избыточные калории запасаются в жировой ткани, и, если чистый положительный баланс является длительным, результатом является ожирение, то есть в балансе массы тела существует две составляющие, и аномалия с любой стороны (поглощения или расхода) может привести к ожирению.

Проопиомеланокортин (ПОМК) является предшественником пептидов -эндорфина и меланокортина, включая гормон, стимулирующий меланоциты ( -МСГ) и адренокортикотропин (АКТГ). ПОМК экспрессируется в нескольких периферических и центральных тканях, включая меланоциты, надпочечники и нейроны гипоталамуса. Процессинг предшественника ПОМК происходит по-разному в различных тканях, что приводит в результате к экспрессии различных меланокортиновых пептидов в зависимости от сайта экспрессии. В передней доле надпочечника продуцируется главным образом АКТГ, тогда как в средней доле и в нейронах гипоталамуса основными пептидами являются -МСГ, -МСГ, дезацетил- -МСГ и -эндорфин. Продемонстрировано, что некоторые из меланокортиновых пептидов, включая АКТГ и -МСГ, обладают активностью подавления аппетита при интрацеребровентрикулярной (icv) инъекции крысам (Vergoni et al., European Journal of Pharmacology 179. 347-355 (1990)). Эффект подавления аппетита также получен с искусственным циклическим аналогом -МСГ, MT-II, раскрытым в патенте США 5731408.

Идентифицировано семейство из пяти подтипов меланокортиновых рецепторов (рецепторы меланокортина 1-5, также называемые МС1, МС2, МС3, МС4 и МС5). МС1, МС2 и МС5 главным образом экспрессируются в периферических тканях, тогда как МС3 и МС4 главным образом экспрессируются в центральных тканях, однако, МС3 также экспрессируется в некоторых периферических тканях. Рецепторы МС3, которые, кроме того, вовлечены в энергетический гомеостаз, также предположительно вовлечены в некоторые воспалительные заболевания. Агонист МС3 может обладать позитивным воздействием на эти заболевания, например, на подагрический артрит.Рецепторы МС5 главным образом экспрессируются в периферических тканях и предположительно вовлечены в экзокринную секрецию и в воспаление. Показано, что рецептор МС4 вовлечен в регуляцию массы тела и пищевое поведение, поскольку у нокаут-мышей по МС4 развивается ожирение (Huzar et al., Cell 88, 131-141 (1997)). В дальнейших исследованиях либо центральной эктопической экспрессии агути (антагониста МС1, МС3 и МС4), либо сверхэкспрессии эндогенно образующегося антагониста МС3 и МС4 (пептид, соответствующий гену агути, AGRP) в головном мозге продемонстрировано, что сверхэкспрессия этих двух антагонистов приводит к развитию ожирения (Kleibig et al., PNAS 92, 4728-4732 (1995)). Кроме того, icv инъекция С-концевого фрагмента AGRP увеличивает питание и антагонизирует ингибиторный эффект -МСГ в отношении поглощения пищи.

У людей описано несколько семейных случаев ожирения преимущественно вследствие мутаций сдвига рамки считывания в рецепторе МС4 (например, Yeo et al., Nature Genetics 20, 111-112 (1998), Vaisse et al., Nature Genetics 20, 113-114).

Можно сделать вывод, что агонист МС4 может служить в качестве аноректического лекарства и быть полезным при лечении ожирения или заболеваний, связанных с ожирением, а также при лечении других заболеваний, расстройств или состояний, которые улучшаются в результате активации рецептора МС4.

Антагонисты МС4 могут быть полезны для лечения кахексии, анорексии и для лечения истощения ослабленных пожилых пациентов. Кроме того, антагонисты МС4 могут применяться для лечения хронической боли, невропатии и неврогенного воспаления.

В широком ряде патентных заявок, примерами которых являются WO 03/009850, WO 03/007949 и WO 02/081443, раскрыты малые молекулы в качестве модуляторов меланокортиновых рецепторов.

Применение пептидов в качестве модуляторов меланокортиновых рецепторов также раскрыто в ряде патентов. В ЕР 292291 раскрыт ряд производных из 7 аминокислот -МСГ с охарактеризованной повышенной эффективностью, например, за счет D-Phe в положении 7 в последовательности -МСГ и за счет присутствия дисульфидного мостика.

В US 5731408 раскрыты циклические пептиды длиной семь аминокислот, имеющие D-2-Nal в положении 4, которые являются антагонистами МС4.

В US 4457864 раскрыты тридека-пептидные аналоги -МСГ, которые проявляют повышенную эффективность и пролонгированное действие. Предпочтительные соединения имеют Nle и D-Phe в положении 4 и 7 соответственно.

В WO 98/27113 раскрыты пептиды со специфичной аффинностью связывания с рецепторами меланокортина, содержащие структуру X-Y-His-B-Arg-Z, где Х и Y представляют собой аминокислотные остатки, Z представляет собой ароматический аминокислотный остаток и В представляет собой D-(2-тиенил)аланин или D-(3-пиридил)аланин.

Аналог МТ-II со структурой Ac-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ раскрыт в Proc. 2^nd Inter, and 17^th American Peptide Symp., June 9-14, 2001, San Diego, 992, 893; аналог MT-II со структурой Ac-Nle-c[Asp-Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ раскрыт в Peptides, 20 (3), 1999, 401-409; и аналог MT-II со структурой Ac-Nle-c[Asp-Gln-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ раскрыт в Bioorg. Med. Chem. Lett, 13 (7), 2003, 1307-1311; два аналога MT-II Ac-Nle-c[Asp-Glu-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ и Ac-Nle-c[Asp-Lys-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ раскрыты в Biochem. Res. Commun., 272 (1), 2000, 23-28; и аналог MT-II Ac-Nle-c[Asp-Pro-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ упомянут в J. Peptide Res., 62, 2003, 199-206.

Остается потребность в разработке модификаторов рецепторов меланокортина, которые являются высокоэффективными и которые обладают пригодной растворимостью и, следовательно, биодоступностью в сочетании с соответствующей селективностью.

Сущность изобретения

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что специфичные аналоги MT-II обладают высоким модулирующим эффектом в отношении одного или более чем одного рецептора меланокортина, например, в отношении рецепторов МС1, МС2, МС3, МС4 и/или МС5. Соответственно, изобретение относится к пептидам формулы I

где Х1 представляет собой Nle или X-Nle, где Х представляет собой аминокислоту или ди-, три-, тетра- или пентапептид, состоящий из полярных или гидрофильных аминокислотных остатков, выбранных из D и L форм Asp, Glu, His, Arg, гомоArg, Tyr, Asn, Ser, Thr, Lys, Orn, Dap, Dab и Gln, и где Х может, кроме того, содержать один или два аминокислотных остатка, выбранных из Gly, -Ala, либо D и L форм Pro, Hyp и Ala;

и где N-концевая аминогруппа Х1 может быть ацилирована ацильной группой, R-C(O)-, где R представляет собой алкил или алкенил, содержащий до 6 атомов углерода, причем указанный алкил может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино;

Х2 представляет собой Glu, Asp, Cys, гомоCys, Lys, Orn, Dab, Dap;

X3 представляет собой Cit, Dab, Dap, циклогексилглицин, циклогексилаланин, Val, Ile, трет-бутилглицин, Leu, Tyr, Glu, Ala, Nle, Met, Met(O), Met(O₂), Gln, Gln(алкил), Gln(арил), Asn, Asn(алкил), Asn(арил), Ser, Thr, Cys, Pro, Hyp, Tic, 2-PyAla, 3-PyAla, 4-PyAla, (2-тиенил)аланин, 3-(тиенил)аланин, (4-тиазолил)Ala, (2-фурил)аланин, (3-фурил)аланин, Phe, где фенильная группа указанного Phe возможно замещена галогеном, гидроксилом, алкокси, нитро, бензоилом, метилом, трифторметилом, амино или циано;

Х4 представляет собой D-Phe, где фенильная группа в D-Phe может быть замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогена, гидрокси, алкокси, нитро, метила, трифторметила или циано;

Х5 представляет собой Arg;

Х6 представляет собой Trp, 2-Nal, (3-бензо[b]тиенил)аланин или (S)-2,3,4,9-тетрагидро-1Н- -карболин-3-карбоновую кислоту;

Х7 представляет собой Glu, Asp, Cys, гомоCys, Lys, Orn, Dab, Dap;

где между Х2 и Х7 имеется связь с образованием циклического пептида формулы I, либо за счет дисульфидного мостика (Х2 и Х7 оба независимо представляют собой Cys или гомоCys), либо за счет амидной связи, образованной из карбоксильной группы в боковой цепи Х2 или Х7 и аминогруппы в боковой цепи Х2 или Х7;

R ¹ представляет собой -N(R'')2 или -OR'', где каждый R'' независимо представляет собой водород или С_1-6алкил, который может быть замещен одним или более чем одной амино- или гидроксильной группой;

при условии, что, если X3 представляет собой Hyp, Ala, Pro, Glu, Lys или Gln и Х1 представляет собой Ac-Nle, тогда Х2 не является Asp;

а также к любой их фармацевтически приемлемой соли, сольвату или пролекарству.

В другом воплощении изобретение относится к применению указанного пептида в терапии.

В другом воплощении изобретение относится к терапевтическим способам, при которых вводят указанные пептиды субъектам, нуждающимся в этом.

Еще в одном воплощении изобретение относится к применению указанных пептидов для изготовления лекарств.

Определения

Термин «алкил», как его используют здесь без префиксов, относится к прямоцепочечному или разветвленному насыщенному одновалентному углеводородному радикалу, имеющему, например, от одного до десяти атомов углерода, например, C_1-8-алкил. Типичные C_1-8-алкильные группы включают, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 4-метилпентил, неопентил, н-пентил, н-гексил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил и тому подобное. Термин «C_1-8-алкил», как его используют здесь, также включает вторичный С_3-8-алкил и третичный С _4-8-алкил. В более общем смысле термин «алкил» предназначен для обозначения как первичного, так и вторичного и третичного алкила.

Термин «алкенил», как его используют здесь без префиксов, относится к прямоцепочечному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу, содержащему по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод и имеющему, например, от двух до десяти атомов углерода, например С_2-8 -алкенил. Типичные С_2-8-алкенильные группы включают, например, винил, аллил, 1-пропенил, 1,3-бутадиен-1-ил и гекс-5-енил.

Термин «галоген» предназначен для обозначения фтора, хлора, брома и йода.

Термин «алкокси» предназначен для обозначения радикала формулы -O-R', где R' представляет собой алкил, как указано выше.

В контексте настоящего изобретения термин «арил» предназначен для обозначения карбоциклического ароматического кольцевого радикала или радикала, представляющего собой конденсированную ароматическую кольцевую систему, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим. Типичные арильные группы включают фенил, дифенилил, нафтил и тому подобное.

Сокращения аминокислот, используемые в контексте настоящего изобретения, имеют приведенные ниже значения

Ас	Н3С-С(О)-
Ala	Аланин
Asn	Аспарагин
Asn(алкил)	R'=алкил
Asn(арил)	R'=арил
Asp	Аспарагиновая кислота
Arg	Аргинин
-Ala
Cha	Циклогексилаланин
Cgl	Циклогексилглицин
Cit	Цитруллин
Cys	Цистеин
Dab	(S)-2,4-диаминомасляная кислота
Dap	(S)-2,3-диаминопропионовая кислота
D-Phe
Gln	Глутамин
Gln(алкил)	R'=алкил
Gln(арил)	R'=арил
Glu	Глутаминовая кислота
His	Гистидин
гомоArg	Гомо-аргинин
гомоCys	Гомо-цистеин
Hyp	4-гидроксипролин
Ile	Изолейцин
Leu	Лейцин
Lys	Лизин
Met	Метионин
Met(O)
Met(O2)
1-Nal
2-Nal
Nle	Норлейцин
Orn	Орнитин
Phe	Фенилаланин
Pro	Пролин
2-PyAla
3-PyAla
4-PyAla
Ser	Серин
tBuGly	Трет-бутилглицин
Thr	Треонин
(4-тиазолил)Ala
Tic
Tyr	Тирозин
Trp	Триптофан
Val	Валин

В контексте настоящего изобретения термин «агонист» предназначен для обозначения вещества, которое активирует рецепторы.

В контексте настоящего изобретения термин «антагонист» предназначен для обозначения вещества, которое нейтрализует эффект агониста или противодействует эффекту агониста посредством связывания с соответствующим рецептором.

В контексте настоящего изобретения термин «фармацевтически приемлемая соль» предназначен для обозначения солей, которые не являются вредными для пациента. Такие соли включают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, фармацевтически приемлемые соли металлов, соли аммония и алкилированного аммония. Соли присоединения кислоты включают соли как неорганических кислот, так и органических кислот. Репрезентативные примеры подходящих неорганических кислот включают соляную, бромистоводородную, йодисто-водородную, фосфорную, серную, азотную кислоты и тому подобное. Репрезентативные примеры подходящих органических кислот включают муравьиную, уксусную, трихлоруксусную, трифторуксусную, пропионовую, бензойную, циннамовую, лимонную, фумаровую, гликолевую, молочную, малеиновую, яблочную, малоновую, миндальную, щавелевую, пикриновую, пировиноградную, салициловую, янтарную, метансульфоновую, этансульфоновую, винную, аскорбиновую, памовую, бисметиленсалициловую, этандисульфоновую, глюконовую, цитраконовую, аспарагиновую, стеариновую, пальмитиновую, ЭДТА, гликолевую, пара-аминобензойную, глутаминовую, бензолсульфоновую, пара-толуолсульфоновую кислоты и тому подобное. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения неорганической или органической кислоты включают фармацевтически приемлемые соли, перечисленные в J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, которая включена в данное описание посредством ссылки.

Примеры солей металлов включают соли лития, натрия, калия, магния и тому подобное.

Примеры солей аммония и алкилированного аммония включают соли аммония, метиламмония, диметиламмония, триметиламмония, этиламмония, гидроксиэтиламмония, диэтиламмония, бутиламмония, тетраметиламмония и тому подобное.

«Терапевтически эффективное количество» соединения, как его используют здесь, означает количество, достаточное для лечения, облегчения или частичной остановки клинических проявлений данного заболевания и его осложнений. Количество, достаточное для осуществления этого, определяют как «терапевтически эффективное количество». Эффективные количества для каждой цели будут зависеть как от тяжести заболевания или повреждения, так и от массы и общего состояния субъекта. Должно быть понятно, что определение подходящей дозировки может быть достигнуто с использованием рутинного экспериментирования путем конструирования матрицы значений и тестирования различных точек в этой матрице, что находится в пределах компетенции обычного практикующего врача или ветеринара.

Термин «терапия» и «лечение», как их используют здесь, означают оказание помощи пациенту и уход за ним в целях борьбы с состоянием, таким как заболевание или расстройство. В этот термин следует включать полный спектр терапий для данного состояния, которым страдает пациент, таких как введение активного соединения для облегчения симптомов или осложнений, для замедления прогрессирования заболевания, расстройства или состояния, для облегчения или ослабления симптомов и осложнений и/или для лечения или элиминации заболевания, расстройства или состояния, а также для предупреждения состояния, где предупреждение следует понимать как оказание помощи пациенту и уход за ним в целях борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством и включает введение активных соединений для предупреждения появления симптомов или осложнений. Пациент, подлежащий лечению, предпочтительно представляет собой млекопитающее, в частности, человека, но может также включать животных, таких как собаки, кошки, коровы, овцы и свиньи.

Термин «сольват», как его используют здесь, означает комплекс определенной стехиометрии, образованный растворенным веществом (в данном случае соединением согласно настоящему изобретению) и растворителем. Растворителями могут быть, например, вода, этанол или уксусная кислота.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

В одном воплощении Х1 представляет собой Nle или R-C(O)-Nle, где R представляет собой алкил или алкенил, содержащий до 6 атомов углерода.

В одном воплощении R представляет собой алкил, содержащий до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил. Особо следует упомянуть метил. Указанный алкил может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино.

В одном воплощении R¹ представляет собой -N(R'') ₂, где каждый R'' представляет собой водород, или где один R'' представляет собой C_1-3алкил, такой как метил, этил или пропил, который может быть замещен амино, такой как 2-амино-этил.

В одном воплощении Х представляет собой Z1-Z2-Z3-Z4-Z5, Z2-Z3-Z4-Z5, Z3-Z4-Z5, Z4-Z5 или Z5, где

Z1 представляет собой аминокислоту и, в частности, Gly;

Z2 представляет собой аминокислоту и, в частности, Ser или Ala;

Z3 представляет собой Ser, Ala, Lys, Gln, Asn или D-Ser;

Z4 представляет собой Tyr, Lys, His, Arg, гомоArg, Gln или Asn; и

Z5 представляет собой Ser, Dab, Ala, Hyp, Gly, Pro или Thr;

и где N-конец X ацилирован группой R-C(O)-, где R представляет собой алкил, содержащий до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, и, в частности, метил. Указанный алкил может быть также замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино. Особо следует упомянуть 2-гидрокси-3-метилбутаноил и 2,4-диаминобутаноил.

В одном воплощении Х представляет собой

Ala-Lys-Tyr-Ser- (SEQ ID NO: 1),

Ala-Lys-Ala-,

Asn-Arg-Gly-,

Asn-Arg-Hyp-,

Asn-Asn-Pro-,

Asn-Asn-Thr-,

Asn-His-Gly-,

Asn-His-Pro-,

Asn-гомоArg-Hyp-,

Asn-гомоArg-Thr-,

Asn-Tyr-Ser-,

Dab-,

D-Ser-Arg-Pro-,

D-Ser-Arg-Thr-,

D-Ser-Asn-Hyp-,

D-Ser-Asn-Ser-,

D-Ser-His-Ser-,

D-Ser-His-Thr-,

D-Ser-гомоArg-Gly-,

D-Ser-гомоArg-Pro-,

D-Ser-Tyr-Gly-,

D-Ser-Tyr-Hyp-,

Gln-Arg-Hyp-,

Gln-Arg-Ser-,

Gln-Asn-Pro-,

Gln-Asn-Thr-,

Gln-His-Hyp-,

Gln-His-Thr-,

Gln-гомоArg-Gly-,

Gln-гомоArg-Ser-,

Gln-Tyr-Gly-,

Gln-Tyr-Pro-,

Gly-Ser-Gln-His-Ser- (SEQ ID NO: 2),

Gly-Ser-Gln-гомоArg-Ser- (SEQ ID NO: 3),

Ser-Arg-Gly-,

Ser-Arg-Pro-,

Ser-Arg-Ser-,

Ser-Arg-Thr-,

Ser-Asn-Gly-,

Ser-Asn-Ser-

Ser-Gln-His-Ser- (SEQ ID NO: 4),

Ser-Gln-Ser-,

Ser-His-Gly-,

Ser-His-Hyp-,

Ser-His-Pro-,

Ser-His-Ser-,

Ser-гомоArg-Pro-,

Ser-гомоArg-Ser-,

Ser-гомоArg-Thr-,

Ser-,

Ser-Tyr-Hyp-,

Ser-Tyr-Ser- или

Ser-Tyr-Thr-, каждый из которых ацилирован на N-конце группой R-C(O)-, где R представляет собой алкил, содержащий до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, и, в частности метил. Указанный алкил может быть также замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из гидроксила и амино. Особо следует упомянуть 2-гидрокси-3-метилбутаноил и 2,4-диаминобутаноил.

В одном воплощении Х1 представляет собой Ac-Nle.

В одном воплощении Х1 представляет собой Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle (SEQ ID NO: 5).

В одном воплощении Х1 представляет собой Ac-Ser-His-Ser-Nle (SEQ ID NO: 88).

В одном воплощении X3 представляет собой Met(O₂), Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дихлор), Phe(3,4-дифтор), Dab, Cgl, Val, Cha, Phe, Dap, Ile, Thr, tBuGly, (4-тиазолил)Ala или Hyp.

В одном воплощении X3 представляет собой Меt(O)₂, Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дифтор), Dab, Phe, Dap, Thr, (4-тиазолил)Ala, Hyp, Ans или Gln.

В одном воплощении X3 представляет собой Tic, Met(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla.

В одном воплощении X3 представляет собой Met(O)₂.

В одном воплощении X3 представляет собой Hyp или 3-PyAla.

В одном воплощении Х4 представляет собой D-Phe, D-Phe(4-хлор), D-Phe(4-йод), D-Phe(3-трифторметил), D-Phe(2-метил) или D-Phe(2-хлор).

В одном воплощении Х4 представляет собой D-Phe или D-Phe(4-хлор), и, в частности D-Phe.

В одном воплощении Х6 представляет собой Trp.

В одном воплощении Х2 представляет собой Glu и Х7 представляет собой Lys, а в другом воплощении Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Lys.

В одном воплощении Х2-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7 представляет собой c[X2-X3-D-Phe-Arg-Trp-Lys], где Х2 представляет собой Glu или Asp и X3 представляет собой Met(O₂), Tic, 3-PyAla, Ser, Cit, Leu, Phe(4-амино), Phe(3,4-дихлор), Phe(3,4-дифтор), Dab, Cgl, Val, Cha, Phe, Dap, Ile, Thr, tBuGly, (4-тиазолил)Ala или Hyp.В частности, Х2 может представлять собой Glu. В частности, X3 может представлять собой Tic, Met(O)₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla, и конкретно следует упомянуть Hyp.

В одном воплощении Х2-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7 представляет собой c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys].

В одном воплощении X3 представляет собой Tic, Met(O) ₂, Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla, и Х1 представляет собой Ас-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle- (SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle.

В одном воплощении X3 представляет собой Tic, Met(O₂), Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla, Х1 представляет собой Ас-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle- (SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle, и Х4 представляет собой D-Phe и Х6 представляет собой Trp, и Х2 представляет собой Asp.

В одном воплощении X3 представляет собой Tic, Met(O)₂ , Ser, Hyp, Cit, Dap, (4-тиазолил)Ala или 3-PyAla, Х1 представляет собой Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle- (SEQ ID NO: 5) или Ac-Nle, и Х4 представляет собой D-Phe, и Х6 представляет собой Trp, и Х2 представляет собой Glu.

В одном воплощении пептиды по настоящему изобретению выбраны из

Ac-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 6)

Ac-Nle-c[Glu-Leu-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 7)

Ac-Nle-c[Glu-Phe(3,4-дихлор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 8)

Ac-Nle-c[Glu-MetO ₂-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 9)

Ac-Nle-c[Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 10)

Ac-Nle-c[Glu-Cgl-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 11)

Ac-Nle-c[Glu-Val-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 12)

Ac-Nle-c[Glu-Tic-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 13)

Ac-Nle-c[Glu-Cha-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 14)

Ac-Nle-c[Glu-lle-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 15)

Ac-Nle-c[Glu-tBuGly-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 16)

Ac-Nle-c[Glu-Phe(3,4-дифтор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 17)

Ac-Nle-c[Glu-Phe-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 18)

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 19)

H-Ala-Lys-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 20)

2-Гидрокси-3-метилбутаноил-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 21)

H-Dab-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 22)

H-Ala-Lys-Ala-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 23)

Ас-Nle-с[Glu-Hyp-Phe(4-йод)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 24)

Гекс-5-еноил-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 25)

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 26)

Ac-Gly-Ser-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 27)

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Met(O) ₂-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO:28)

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂ (SEQ ID NO: 29)

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-аминоэтил)амид (SEQ ID NO: 30)

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-амино)-D-Phe(4-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 31)

Ac-Asn-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 32)

Ac-D-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 33)

Ac-Gln-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 34)

Ac-Ser-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 35)

Ac-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 36)

Ac-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 37)

Ac-D-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 38)

Ac-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 39)

Ac-D-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 40)

Ac-Ser-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂(SEQ ID NO: 41)

Ac-Gln-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 42)

Ac-Gln-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 43)

Ac-Asn-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 44)

Ac-Asn-гомоArg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 45)

Ac-D-Ser-Asn-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 46)

Ac-Gln-Tyr-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 47)

Ac-Ser-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 48)

Ac-Asn-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 49)

Ac-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 50)

Ac-D-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 51)

Ac-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 52)

Ac-D-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 53)

Ac-Gln-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 54)

Ac-Asn-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 55)

Ac-Ser-Tyr-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 56)

Ac-D-Ser-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 57)

Ac-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 58)

Ac-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 59)

Ac-D-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 60)

Ac-Ser-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 61)

Ac-Asn-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 62)

Ac-Gln-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 63)

Ac-Asn-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 64)

Ac-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 65)

Ac-Gln-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 66)

Ac-Ser-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 67)

Ac-Asn-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 68)

Ac-Ser-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 69)

Ac-Asn-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 70)

Ac-D-Ser-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 71)

Ac-Gln-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 72)

Ac-Ser-Asn-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 73)

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 74)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 75)

Ac-Ser-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 76)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 77)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Ser-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 78)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(3-трифторметил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 79)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-метил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 80)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 81)

Ac-Nle-c[Asp-Thr-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 82)

Ac-Nle-c[Asp-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 83)

Ac-Nle-c[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 84)

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-амино)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 85)

Ac-Nle-c[Asp-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 86)

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂ (SEQ ID NO: 87).

Другие воплощения изобретения понятны из приведенной ниже формулы изобретения.

В одном воплощении настоящего изобретения соединение является агонистом рецептора меланокортина.

В одном воплощении настоящего изобретения соединение является агонистом МС4.

В одном воплощении настоящего изобретения соединение является селективным агонистом МС4. В данном контексте селективность следует понимать в связи с активностью соединения по отношению к МС1, МС3 и/или МС5. Если соединение является значительно более эффективным агонистом МС4, чем оно является эффективным агонистом МС1, МС3 и/или МС5, его считают селективным агонистом МС4. Эффективности соединения по отношению к МС1 и МС4 определяют в анализах связывания рецептора, как описано в анализе IV (МС1) и анализе V (МС4). Если соединение является более чем в 10 раз, как например более чем в 50 раз, как например более чем в 100 раз более эффективным по отношению к МС4, чем по отношению к МС1, его считают селективным агонистом МС4 по отношению к МС1. Эффективности соединения по отношению к МС3, МС4 и МС5 определяют в функциональных анализах, как описано в анализе II (МС3 и МС5) и анализе III (МС4). Если соединение является более чем в 10 раз, как например более чем в 50 раз, как например более чем в 100 раз более эффективным по отношению к МС4, чем по отношению к МС3, его считают селективным агонистом МС4 по отношению к МС3. Если соединение является более чем в 10 раз, как например более чем в 50 раз, как например более чем в 100 раз более эффективным по отношению к МС4, чем по отношению к МС5, его считают селективным агонистом МС4 по отношению к МС5. В конкретном воплощении соединение по настоящему изобретению является селективным агонистом МС4 по отношению к МС1, по отношению к МС3, по отношению к МС5, по отношению к МС1 и МС3, по отношению к МС1 и МС5, по отношению к МС3 и МС5 или по отношению к МС1, МС3 и МС5.

В одном воплощении соединение по настоящему изобретению является селективным агонистом МС4 и антагонистом МС3. В данном контексте соединение считают селективным агонистом МС4 и антагонистом МС3, если оно является селективным агонистом МС4 по отношению к МС1 и МС5, как обсуждалось выше, и антагонизирует МС3 на основании измерений, описанных в анализе II. Соединение со значением IC₅₀ менее чем 100 нМ, как например менее чем 10 нМ, как например менее чем 5 нМ, как например менее чем 1 нМ, считают антагонистом МС3.

В одном воплощении соединение по настоящему изобретению является и селективным агонистом МС3, и селективным агонистом МС4. В данном контексте соединение считают селективным агонистом МС3 и МС4, если оно является значительно более эффективным агонистом МС3 и МС4, чем оно является эффективным агонистом МС1 и МС5. Селективность соединения по отношению к МС1 и МС3 определяют путем сравнения эффективности, определенной для МС1, как описано в анализе IV, с эффективностью для МС3, определенной, как описано в анализе II. Если соединение является более чем в 10 раз, как например более чем в 50 раз, как например более чем в 100 раз более эффективным по отношению к МС3, чем по отношению к МС1, его считают селективным агонистом МС3 по отношению к МС1. Селективность соединения по отношению к МС3 и МС5 определяют путем сравнения эффективности, определенной, как описано в анализе II. Если соединение является более чем в 10 раз, как например более чем в 50 раз, как например более чем в 100 раз более эффективным по отношению к МС3, чем по отношению к МС5, его считают селективным агонистом МС3 по отношению к МС5. Селективность МС4 соединения по отношению к МС3 и МС5 определяют, как обсуждалось выше.

Соединения по настоящему изобретению модулируют рецепторы меланокортина, и, следовательно, считаются особенно пригодными для лечения заболеваний или состояний, которые можно лечить посредством модулирования активности рецептора меланокортина. В частности, соединения по настоящему изобретению считаются особенно пригодными для лечения заболеваний или состояний посредством активации рецептора МС4.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ замедления прогрессирования от нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ) до диабета типа 2, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ замедления прогрессирования от диабета типа 2 до инсулинозависимого диабета, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении изобретение относится к способу лечения ожирения или предупреждения избыточной массы тела, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ регуляции аппетита, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении настоящее изобретение относится к способу индукции насыщения, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении изобретение относится к способу предупреждения повторного набора массы тела после успешной потери массы тела.

В одном воплощении изобретение относится к способу предупреждения набора массы тела, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении изобретение относится к способу увеличения расхода энергии.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ лечения заболевания или состояния, связанного с избыточной массой тела или ожирением, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении изобретение относится к способу лечения булимии, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В одном воплощении изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, выбранного из атеросклероза, гипертензии, диабета, диабета типа 2, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), дислипидемии, коронарной болезни сердца, болезни желчного пузыря, камней желчного пузыря, остеоартрита, рака, половой дисфункции и риска преждевременной смерти, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

В частности, соединения по настоящему изобретению могут быть пригодны для лечения этих заболеваний у пациентов с ожирением или избыточной массой тела. Соответственно, в настоящем изобретении также предложен способ лечения у пациентов с ожирением заболеваний или состояний, выбранных из диабета типа 2, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), дислипидемии, коронарной болезни сердца, болезни желчного пузыря, камней желчного пузыря, остеоартрита, рака, половой дисфункции и риска преждевременной смерти у пациентов с ожирением, при котором пациенту, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество соединения по настоящему изобретению.

Кроме того, агонисты рецептора МС4 могут обладать положительным эффектом в отношении чувствительности к инсулину, лекарственной зависимости посредством модулирования системы обратной связи, геморрагического шока. Кроме того, агонист МС3 и МС4 обладает жаропонижающими эффектами, и они оба предположительно вовлечены в регенерацию периферических нервов, а также известно, что рецептор МС4 уменьшает стрессовую реакцию.

При всех терапевтических способах, раскрытых здесь, соединение по настоящему изобретению можно вводить одно. Однако его можно также вводить в комбинации с одним или более чем одним дополнительным терапевтически активным соединением, либо последовательно, либо одновременно.

В одном аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, возможно в комбинации с одним или более чем одним дополнительным терапевтически активным соединением, вместе с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом в единичной лекарственной форме, содержащей от примерно 0,05 мг до примерно 1000 мг, как, например, от примерно 0,1 мг до примерно 500 мг, как, например, от примерно 0,5 мг до примерно 200 мг соединения по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения заболеваний или состояний, выбранных из избыточной массы тела или ожирения, булимии, атеросклероза, гипертензии, диабета типа 2, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), дислипидемии, коронарной болезни сердца, болезни желчного пузыря, камней желчного пузыря, остеоартрита, рака, половой дисфункции и риска преждевременной смерти.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению, одного или в комбинации с дополнительным терапевтически активным соединением, для изготовления лекарственного средства, эффективного при замедлении прогрессирования от НТГ до диабета типа 2, замедлении прогрессирования от диабета типа 2 до инсулинозависимого диабета, регуляции аппетита, индукции насыщения, предупреждения набора массы тела после успешной потери массы тела или при повышении расхода энергии.

Как описано выше, соединения по настоящему изобретению можно вводить или применять в комбинации с одним или более чем одним дополнительным терапевтически активным соединением. Пригодные дополнительные соединения могут быть выбраны из противодиабетических агентов, гиполипидемических агентов, агентов против ожирения, гипотензивных агентов и агентов для лечения осложнений в результате диабета или связанных с диабетом.

Пригодные противодиабетические агенты включают инсулин, производные глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), такие как раскрыты в WO 98/08871 (Novo Nordisk A/S), которая включена в данное описание посредством ссылки, а также перорально активные гипогликемические агенты.

Пригодные перорально активные гипогликемические агенты предпочтительно включают имидазолины, сульфонилмочевины, бигуаниды, меглитиниды, оксадиазолидиндионы, тиазолидиндионы, сенсибилизаторы к инсулину, ингибиторы -глюкозидазы, агенты, действующие на АТФ-зависимые калиевые каналы -клеток поджелудочной железы, например, открыватели (активаторы) калиевых каналов, такие как раскрыты в WO 97/26265, WO 99/03861 и WO 00/37474 (Novo Nordisk A/S), которые включены в данное описание посредством ссылки, открыватели калиевых каналов, такие как ормитиглинид, блокаторы калиевых каналов, такие как натеглинид или BTS-67582, антагонисты глюкагона, такие как раскрыты в WO 99/01423 и WO 00/39088 (Novo Nordisk A/S и Agouron Pharmaceuticals, Inc.), все из которых включены в данное описание посредством ссылки, агонисты GLP-1, такие как раскрыты в WO 00/42026 (Novo Nordisk A/S и Agouron Pharmaceuticals, Inc.), которые включены в данное описание посредством ссылки, ингибиторы дипептидилпептидазы-IV (DPP-IV), ингибиторы протеинтирозинфосфатазы (ПТФазы), активаторы глюкокиназы, такие как описаны в WO 02/08209 (Hoffmann La Roche), ингибиторы ферментов печени, вовлеченных в стимуляцию глюконеогенеза и/или гликогенолиза, модуляторы захвата глюкозы, ингибиторы гликогенсинтазокиназы-3 (GSK-3), соединения, модифицирующие метаболизм липидов, такие как гиполипидемические агенты и антилипидемические агенты, соединения, уменьшающие поглощение пищи, и агонисты рецептора, активируемого пролифератором пероксисом (агонисты PPAR) и агонисты рецептора ретиноида Х (агонисты RXR), такие как ALRT-268, LG-1268 или LG-1069.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают инсулин или аналоги инсулина, сульфонилмочевину, например толбутамид, хлорпропамид, толазамид, глибенкламид, глипизид, глимепирид, гликазид, глибурид, бигуанид, например, метформин, меглитинид, например, репаглинид или сенаглинид/натеглинид.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают тиазолидиндионовые сенсибилизаторы к инсулину, например троглитазон, циглитазон, пиоглитазон, розиглитазон, изаглитазон, дарглитазон, энглитазон, CS-011/CI-1037 или Т174, либо соединения, раскрытые в WO 97/41097 (DRF-2344), WO 97/41119, WO 97/41120, WO 00/41121 и WO 98/45292 (Dr. Reddy's Research Foundation), которые включены в данное описание посредством ссылки.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают сенсибилизаторы к инсулину, например, такие как GI 262570, YM-440, MCC-555, JTT-501, AR-H039242, KRP-297, GW-409544, CRE-16336, AR-Н049020, LY510929. МВХ-102, CLX-0940, GW-501516 или соединения, раскрытые в WO 99/19313 (NN622/DRF-2725), WO 00/50414, WO 00/63191, WO 00/63192, WO 00/63193 (Dr. Reddy's Research Foundation) и WO 00/23425, WO 00/23415, WO 00/23451, WO 00/23445, WO 00/23417, WO 00/23416, WO 00/63153, WO 00/63196, WO 00/63209, WO 00/63190 и WO 00/63189 (Novo Nordisk A/S), которые включены в данное описание посредством ссылки.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают ингибитор -глюкозидазы, например воглибозу, эмиглитат, миглитол или акарбозу.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают ингибитор гликогенфосфорилазы, например соединения, описанные в WO 97/09040 (Novo Nordisk A/S).

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают активатор глюкокиназы.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают агент, действующий на АТФ-зависимый калиевый канал -клеток поджелудочной железы, например, толбутамид, глибенкламид, глипизид, гликазид, BTS-67582 или репаглинид.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают натеглинид.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают гиполипидемический агент или антилипидемический агент, например колестирамин, колестипол, клофибрат, гемфиброзил, ловастатин, правастатин, симвастатин, пробукол или декстротироксин.

Другие примеры указанных дополнительных терапевтически активных соединений включают соединения против ожирения или агенты, регулирующие аппетит. Такие соединения могут быть выбраны из группы, состоящей из агонистов CART (транскрипта, регулируемого кокаином и амфетамином), антагонистов NPY (нейропептида Y), агонистов МС3 (меланокортина 3), агонистов МС4 (меланокортина 4), антагонистов орексина, агонистов TNF (фактора некроза опухоли), агонистов CRF (фактора, высвобождающего кортикотропин), антагонистов CRF ВР (белка, связывающего фактор, высвобождающий кортикотропин), агонистов урокортина, 3-адренергических агонистов, таких как CL-316243, AJ-9677, GW-0604, LY362884, LY377267 или AZ-40140, агонистов MSH (меланоцитостимулирующего гормона), антагонистов МСН (меланоцитоконцентрирующего гормона), агонистов ССК (холецистокинина), ингибиторов обратного захвата серотонина (флуоксетина, сероксата или циталопрама), ингибиторов обратного захвата серотонина и норэпинефрина, агонистов 5НТ (серотонина), агонистов бомбезина, антагонистов галанина, гормона роста, факторов роста, таких как пролактин или плацентарный лактоген, соединений, высвобождающих гормон роста, агонистов TRH (гормона, высвобождающего тиреотропин), модуляторов UCP 2 или 3 (несвязывающий белок 2 или 3), химических несвязывающих агентов, агонистов лептина, агонистов DA (дофамина) (бромокриптина, допрексина), ингибиторов липазы/амилазы, модуляторов PPAR, модуляторов RXR, агонистов TR , адренергических ЦНС-стимулирующих агентов, ингибиторов AGRP (белка, соответствующего гену агути), антагонистов H3 гистамина, таких как раскрыты в WO 00/42023, WO 00/63208 и WO 00/64884, которые включены в данное описание посредством ссылки, exendin-4, агонистов GLP-1 и цилиарного нейротрофического фактора. Дополнительными агентами против ожирения являются бупропион (антидепрессант), топирамат (противосудорожный агент), экопипам (антагонист дофамина D1/D5), налтрексон (антагонист опиоидов) и пептид YY_3-36 (Batterham et al., Nature 418, 650-654 (2002)).

В одном воплощении агент против ожирения представляет собой лептин.

В одном воплощении агент против ожирения представляет собой пептид YY_3-36.

В одном воплощении агент против ожирения представляет собой ингибитор обратного захвата серотонина и норэпинефрина, например сибутрамин.

В одном воплощении агент против ожирения представляет собой ингибитор липазы, например орлистат.

В одном воплощении агент против ожирения представляет собой адренергический ЦНС-стимулирующий агент, например дексамфетамин, амфетамин, фентермин, мазиндол фендиметразин, диэтилпропион, фенфлурамин или дексфенфлурамин.

Другие примеры пригодных дополнительных терапевтически активных соединений включают гипотензивные агенты.

Примерами гипотензивных агентов являются -блокаторы, такие как апренолол, атенолол, тимолол, пиндолол, пропранолол и метопролол, ингибиторы АПФ (ангиотензинпревращающего фермента), такие как беназеприл, каптоприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, хинаприл и рамиприл, блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин, фелодипин, никардипин, израдипин, нимодипин, дилтиазем и верапамил, и -блокаторы, такие как доксазозин, урапидил, празозин и теразозин.

В одном воплощении применений и способов по настоящему изобретению соединение по настоящему изобретению можно вводить или применять в комбинации более чем с одним из вышеупомянутых соединений, например, в комбинации с метформином и сульфонилмочевиной, такой как глибурид; сульфонилмочевиной и акарбозой; натеглинидом и метформином; акарбозой и метформином; сульфонилмочевиной, метформином и троглитазоном; инсулином и сульфонилмочевиной; инсулином и метформином; инсулином, метформином и сульфонилмочевиной; инсулином и троглитазоном; инсулином и ловастатином и т.д.

Фармацевтические композиции

Соединения согласно настоящему изобретению можно вводить одни или в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами, либо в однократной, либо в многократных дозах. Препараты фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению можно готовить с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями, а также с любым из известных адъювантов и эксципиентов в соответствии с общепринятыми методиками, такими как описаны в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 2000.

Препараты фармацевтических композиций можно специально готовить для введения любым подходящим путем, таким как пероральный, ректальный, назальный, легочный, местный (включая трансбуккальный и сублингвальный), чрескожный, интрацистернальный, внутрибрюшинный, вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, подоболочечный, внутривенный и внутрикожный) путь, причем предпочтителен пероральный путь. Должно быть понятно, что предпочтительный путь будет зависеть от общего состояния и возраста субъекта, подлежащего лечению, от природы состояния, подлежащего лечению, и от выбранного активного ингредиента.

Установлено, что многие аналоги МТ-11 проявляют короткий период полураспада, и что эффект соединений, таким образом, исчезает достаточно быстро после введения. Эта проблема может быть преодолена путем использования режимов дозировки с более короткими интервалами между дозировками или даже режимов дозировки без интервалов, то есть непрерывной дозировки, либо режимов дозировки, характеризующихся периодами непрерывной дозировки, прерываемыми периодами без дозировки.

В данной области техники известны различные помпы и устройства, которые полезны для введения лекарственного средства по непрерывной схеме или по прерывисто-непрерывной схеме. В его простейшей форме резервуар, содержащий лекарство, представленное в применимой форме, располагают таким образом, что сила тяжести, возможно посредством клапана, который регулирует ток, дает возможность лекарству проникать через наружный слой кожи субъекта через иглу или подобное устройство, что дает возможность подкожного, внутрикожного или внутривенного введения. Также предпочтительно использовать помпы для введения лекарства, а не силу тяжести. Помпы могут представлять собой наружные помпы, либо они могут быть вместе с резервуаром имплантированы субъекту. Помпы, описанные здесь, может носить субъект, и ток из помпы можно регулировать индивидуально для оптимизации эффекта, принимая во внимание имеющееся лекарство и субъекта, подлежащего лечению.

Композиции согласно настоящему изобретению особенно полезны при включении в системы доставки лекарства с регулируемым, замедленным, пролонгированным, отсроченным и медленным высвобождением. В частности, эти композиции полезны при включении в системы парентерального регулируемого высвобождения и замедленного высвобождения (где обе системы приводят к многократному уменьшению числа введений), хорошо известные специалистам в данной области техники. Даже более предпочтительным является подкожное введение систем регулируемого высвобождения и замедленного высвобождения. Без ограничения объема изобретения примерами полезных систем и композиций регулируемого высвобождения являются гидрогели, маслянистые гели, жидкие кристаллы, полимерные мицеллы, микросферы и наночастицы.

Фармацевтические композиции для перорального введения включают твердые лекарственные формы, такие как твердые или мягкие капсулы, таблетки, пастилки, драже, пилюли, лепешки, порошки и гранулы. Где это пригодно, их можно готовить с покрытиями, такими как энтеросолюбильные покрытия, либо можно готовить такие их препараты, чтобы обеспечить регулируемое высвобождение активного ингредиента, такое как ограниченное или пролонгированное высвобождение, согласно способам, хорошо известным в данной области техники.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают растворы, эмульсии, водные или масляные суспензии, сиропы и эликсиры.

Фармацевтические композиции для парентерального введения включают стерильные водные и неводные инъекционные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии, а также стерильные порошки, из которых готовят стерильные инъекционные растворы или дисперсии перед применением. Инъекционные препараты в виде депо также рассматривают как входящие в объем настоящего изобретения.

Другие пригодные формы введения включают суппозитории, спреи, мази, кремы, гели, ингаляторы, кожные пластыри, имплантаты и т.д.

Типичная пероральная доза находится в интервале от примерно 0,001 до примерно 100 мг/кг массы тела в сутки, предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 50 мг/кг массы тела в сутки и более предпочтительно от примерно 0,05 до примерно 10 мг/кг массы тела в сутки при введении в одной или более чем одной дозе, например, от 1 до 3 доз. Как указано выше, непрерывная схема введения или прерывисто-непрерывная схема введения может быть предпочтительной. Точная доза будет зависеть от частоты и режима введения, пола, возраста, массы и общего состояния субъекта, подлежащего лечению, от природы и тяжести состояния, подлежащего лечению, и любых сопутствующих заболеваний, подлежащих лечению, а также от других факторов, очевидных специалистам в данной области техники.

Препараты могут быть для удобства представлены в единичной лекарственной форме способами, известными специалистам в данной области техники. Типичная единичная лекарственная форма для перорального введения один или более чем один раз в сутки, например, от 1 до 3 раз в сутки, может содержать от 0,05 до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 500 мг, и более предпочтительно от примерно 0,5 мг до примерно 200 мг.

Для парентеральных путей, таких как внутривенный, подоболочечный, внутримышечный, и для подобного введения типичные дозировки составляют порядка примерно половины дозы, применяемой для перорального введения.

Соединения согласно настоящему изобретению, как правило, используют в виде свободного вещества или в виде его фармацевтически приемлемой соли.

Примерами являются соль присоединения кислоты соединения, имеющего функцию свободного основания, и соль присоединения основания соединения, имеющего функцию свободной кислоты. Термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к нетоксичным солям соединений согласно настоящему изобретению, которые обычно получают путем взаимодействия свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой или путем взаимодействия кислоты с подходящим органическим или неорганическим основанием. Когда соединение согласно настоящему изобретению, такое как соединение формулы (I), содержит функциональную группу свободного основания, такие соли получают общепринятым способом путем обработки раствора или суспензии этого соединения химическим эквивалентом фармацевтически приемлемой кислоты. Когда соединение согласно настоящему изобретению, такое как соединение формулы (I), содержит функциональную группу свободной кислоты, такие соли получают общепринятым способом путем обработки раствора или суспензии этого соединения химическим эквивалентом фармацевтически приемлемого основания. Физиологически приемлемые соли соединения с гидроксигруппой включают анион указанного соединения в сочетании с подходящим катионом, таким как катион натрия или аммония. Другие соли, которые не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть полезны для получения соединений согласно настоящему изобретению, и они образуют дополнительный аспект настоящего изобретения.

Для парентерального введения могут применяться растворы соединений согласно настоящему изобретению в стерильном водном растворе, водном пропиленгликоле, либо в кунжутном или арахисовом масле. Если необходимо такие водные растворы должны содержать буферный агент, а жидкий разбавитель сначала делают изотоническим полем добавления достаточного количества физиологического раствора или глюкозы. Эти водные растворы особенно пригодны для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. Используемые стерильные водные среды могут быть легко получены способами, известными специалистам в данной области техники.

Пригодные фармацевтические носители включают инертные твердые разбавители или наполнители, стерильные водные растворы и различные органические растворители.

Примерами твердых носителей являются лактоза, terra alba (белая глина), сахароза, циклодекстрин, тальк, желатин, агар, пектин, аравийская камедь, стеарат магния, стеариновая кислота и низшие алкиловые эфиры целлюлозы.

Примерами жидких носителей являются сироп, арахисовое масло, оливковое масло, фосфолипиды, жирные кислоты, амины жирных кислот, полиоксиэтилен и вода. Носитель или разбавитель может включать любое вещество ограниченного высвобождения, известное в данной области техники, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, один или смешанный с воском. Фармацевтические композиции, образованные путем объединения соединений для применения по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемых носителей, затем легко вводят в ряде лекарственных форм, пригодных для описанных путей введения. Препараты могут быть для удобства представлены в единичной лекарственной форме способами, известными в области фармацевтики.

Препараты по настоящему изобретению, пригодные для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы или таблетки, каждая из которых содержит определенное количество активного ингредиента, и которая может включать подходящий эксципиент. Кроме того, перорально применимые препараты могут находиться в форме порошка или гранул, раствора или суспензии в водной или неводной жидкости или жидкой эмульсии масло в воде или вода в масле.

Композиции, предназначенные для перорального применения, можно готовить любым известным способом, и такие композиции могут содержать один или более чем один агент, выбранный из группы, состоящей из подсластителей, вкусо-ароматических агентов, красителей и консервантов с целью обеспечения фармацевтически изящных и приемлемых на вкус препаратов. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, которые пригодны для изготовления таблеток. Эти эксципиенты могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия;

гранулирующие и разрыхляющие агенты, например кукурузный крахмал или альгиновую кислоту; связующие агенты, например крахмал, желатин или аравийскую камедь; и смазывающие агенты, например стеарат магния, стеариновую кислоту или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми, либо они могут быть покрыты оболочкой с помощью известных методик для замедления разрыхления и всасывания в желудочно-кишечном тракте и, следовательно, могут обеспечивать замедленное действие в течение длительного периода. Например, можно использовать вещество, обеспечивающее замедленное действие, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Таблетки можно также покрывать с помощью методик, описанных в патентах США № № 4356108, 4166452 и 4,265,874, включенных в данное описание посредством ссылки, с получением осмотических терапевтических таблеток для регулируемого высвобождения.

Препараты для перорального применения могут быть также представлены в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например с карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, например с арахисовым маслом, жидким вазелином или оливковым маслом.

Водные суспензии могут содержать активные соединения в смеси с эксципиентами, пригодными для изготовления водных суспензий. Такие эксципиенты представляют собой суспендирующие агенты, например натрийкарбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинилпирролидон, смолу трагакант и аравийскую камедь; диспергирующие и увлажняющие агенты могут представлять собой природный фосфатид, такой как лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации алкиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации алкиленоксида с частичными эфирами, образованными из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат, или продукты конденсации алкиленоксида с частичными эфирами, образованными из жирных кислот и ангидридов гексита, например полиэтиленсорбитанмоноолеат. Водные суспензии могут также содержать один или более чем один краситель, один или более чем один вкусо-ароматический агент и один или более чем один подсластитель, такой как сахароза или сахарин.

Препараты в виде масляных суспензий можно готовить путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий вазелин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например пчелиный воск, твердый вазелин или цетиловый спирт. Подсластители, такие как перечисленные выше, и вкусо-ароматические агенты можно добавлять для получения приемлемого на вкус перорального препарата. Эти композиции можно консервировать путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, пригодные для изготовления водной суспензии путем добавления воды, содержат активное соединение в смеси с диспергирующим или увлажняющим агентом, суспендирующим агентом и одним или более чем одним консервантом.

Примеры пригодных диспергирующих или увлажняющих агентов и суспендирующих агентов уже упомянуты выше. Дополнительные эксципиенты, например подсластители, вкусо-ароматические агенты и красители, также могут присутствовать.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно настоящему изобретению, могут также находиться в форме эмульсий масло в воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, например оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, например, жидкий вазелин, либо их смесь. Пригодные эмульгирующие агенты могут представлять собой природные смолы, например аравийскую камедь или смолу трагакант, природные фосфатиды, например соевый лецитин, и эфиры или частичные эфиры, образованные из жирных кислот и ангидридов гексита, например сорбитанмоноолеат, и продукты конденсации указанных частичных эфиров с этиленоксидом, например полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсии могут также содержать подсластители и вкусо-ароматические агенты.

Препараты в виде сиропов и эликсиров можно готовить с подсластителями, например глицерином, пропиленгликолем, сорбитом или сахарозой. Такие препараты могут также содержать смягчающее средство, консервант, а также вкусо-ароматические агенты и красители. Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильной инъекционной водной или маслянистой суспензии. Препарат в виде этой суспензии можно готовить известными способами, используя подходящие диспергирующие или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты, описанные выше. Этот стерильный инъекционный препарат может также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, находятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные фиксированные масла удобно использовать в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно применять любое мягкое фиксированное масло, используя синтетические моно- и диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, находят применение в изготовлении инъекционных растворов.

Композиции могут также находиться в форме суппозиториев для ректального введения соединений согласно настоящему изобретению. Эти композиции можно готовить путем смешивания лекарства с подходящим не раздражающим эксципиентом, который является твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре, и который будет, следовательно, плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарства. Такие вещества включают, например, масло какао и полиэтиленгликоли.

Для местного применения рассматривают кремы, мази, желе, растворы или суспензии и т.д., содержащие соединения по настоящему изобретению. В этих целях препараты для местного применения будут включать полоскания для рта и горла.

Соединения согласно настоящему изобретению можно также вводить в форме липосомных систем доставки, таких как малые однослойные везикулы, большие однослойные везикулы и многослойные везикулы. Липосомы могут быть образованы из ряда фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Кроме того, некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут образовать сольваты с водой или общепринятыми органическими растворителями. Такие сольваты также включены в объем настоящего изобретения.

Таким образом, в следующем воплощении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или пролекарство и один или более чем один фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.

Если твердый носитель используют для перорального введения, препарат может быть таблетирован, помещен в твердую желатиновую капсулу в форме порошка или гранул, либо он может находиться в форме пастилки или лепешки. Количество твердого носителя будет широко варьировать, но обычно будет составлять от примерно 25 мг до примерно 1 г. Если используют жидкий носитель, препарат может находиться в форме сиропа, эмульсии, мягкой желатиновой капсулы или стерильной инъекционной жидкости, такой как жидкая водная или неводная суспензия или раствор.

Примеры

Все соединения согласно настоящему изобретению могут быть синтезированы специалистами в данной области техники с использованием стандартных стадий синтеза и удаления защиты. Описание необходимого оборудования и способов синтеза можно найти в "The Fine Art Of Solid Phase Synthesis", 2002/3 Catalog, Novabiochem.

Типичные примеры, которые включают стадию циклизации, приведены ниже:

Ac-Nle-c[Glu-Met(O₂ )-D-Phe-Arq-Trp-Lys]-NH₂

1а. Смолу с защищенным пептидилом H-Nle-Glu(OPip)-Met(O₂)-D-Phe-Arg(Pmc)-Trp(Boc)-Lys(Mtt)-(Rink смола) синтезировали в соответствии со стратегией Fmoc на синтезаторе пептидов Applied Biosystems 431 А в масштабе 0,25 ммоль, используя протоколы фирмы-производителя "FastMoc UV, в которых используют опосредованные HBTU (2-(1Н-бензотриазол-1-ил-)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфатом) сочетания в NMP (N-метилпирролидоне) и УФ-мониторинг удаления защитной группы Fmoc. Исходная смола, используемая для синтеза, представляла собой 0,50 г (4-((2',4'-диметоксифенил)-(Fmoc-амино)метил)-феноксиполистироловой смолы (смола Rink) (Novabiochem) с загрузкой 0,51 ммоль/г. Используемые защищенные производные аминокислот представляли собой Fmoc-Nle-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Mtt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OPip)-OH, Fmoc-Met(O₂)-OH.

1б. Затем смолу с пептидом, полученную в результате стадии (1а), ацилировали предварительно активированным раствором уксусной кислоты (1,0 ммоль), HODhbt (3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазина) (1,0 ммоль), DIC (диизопропилкарбодиимида) (1,0 ммоль) и DIEA (N,N-диизопропилэтиламина) (0,25 ммоль) в NMP (5 мл). Через 2 часа при комнатной температуре смолу фильтровали и промывали NMP и ДХМ (дихлорметаном).

1в. Смолу, полученную в результате стадии (1б), обрабатывали 5·10 мл 2% ТФУ (трифторуксусной кислоты), 2% ТЭС (триэтилсилана) в ДХМ в течение 60 минут при периодическом перемешивании. Смолу промывали NMP, NMP с 5% DIEA и NMP. Пептид подвергали циклизации, используя HODhbt (1,0 ммоль), РуВОР (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат, 1 Н-бензотриазол-1-илокситрипирролидинофосфония гексафторфосфат) (1,0 ммоль) и DIEA (2,0 ммоль) в NMP (5 мл) при периодическом перемешивании в течение 4 ч. Смолу промывали NMP и ДХМ.

1 г. Пептид отщепляли от смолы, полученной на стадии (1в), путем перемешивания в течение 60 минут при комнатной температуре с 10 мл 2,5% воды и 2,5% ТЭС в ТФУ. Смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали примерно до 1 мл потоком азота. Сырой пептид осаждали из полученного масла с помощью 50 мл диэтилового эфира и промывали 3 раза 50 мл диэтилового эфира.

Сырой циклический пептид очищали препаративной ОФ-ВЭЖХ. Аналитические данные см. в примере 4 ниже.

Во всех приведенных ниже примерах значения Rt представляют собой значения времени удерживания, а значения массы представляют собой значения, определенные с помощью МС детектора, полученные путем использования одного из приведенных ниже устройств ЖХ/МС (жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии).

Система ЖХ/МС 1: Agilent 1100 Series, электроспрей; колонка: Waters XTerra® C₁₈ 5 мкм 3,0·50 мм; вода/ацетонитрил, содержащие 0,05% ТФУ; градиент: 5% 100% ацетонитрил от 0 до 6,75 мин, элюция до t=9,0 мин; поток 1,5 мл/мин.

Система ЖХ/МС 2: Sciex API-100 Quadrupole MS, электроспрей; колонка: Waters XTerra® C ₁₈ 5 мкм 3,0·50 мм; вода/ацетонитрил, содержащие 0,05% ТФУ; градиент: 5% 90% ацетонитрил от 0 до 7,5 мин, элюция до t=10,0 мин; поток 1,5 мл/мин.

Система ЖХ/МС 3: Sciex API-150 Ex Quadrupole MS, электроспрей; колонка: Waters XTerra® C₁₈ 5 мкм 3,0·50 мм; вода/ацетонитрил, содержащие 0,05% ТФУ; градиент: 5% 15% ацетонитрил от 1,0 до 2,0 мин, 15% 45% ацетонитрил от 2,0 до 28,0 мин, 45% 90% ацетонитрил от 28,0 до 30,0 мин, элюция до t=30,0 мин; поток 1,5 мл/мин.

Система ЖХ/МС 4: как описано для системы 3, но с другим градиентом: 5% 20% ацетонитрил от 1,0 до 3,0 мин, 20% 50% ацетонитрил от 3,0 до 16,0 мин, 50% 90% ацетонитрил от 16,0 до 18,0 мин, элюция до t=18,0 мин.

Пример 1

Ac-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 2): Rt=6,40 мин; (m+1)=1050

Пример 2

Ac-Nle-c[Glu-Leu-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=3,06 мин; (m+1)=1015

Пример 3

Ac-Nle-c[Glu-Phe(3,4-дихлор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=3,41 мин; (m+1)=1117

Пример 4

Ac-Nle-c[Glu-Met(O ₂)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,50 мин; (m+1)=1065

Пример 5

Ac-Nle-c[Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,13 мин; ((m+2)/2)=501

Пример 6

Ac-Nle-c[Glu-Cgl-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=3,21 мин; (m+1)=1040

Пример 7

Ac-Nle-c[Glu-Val-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,69 мин; (m+1)=1000

Пример 8

Ac-Nle-c[Glu-Tic-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,88 мин; (m+1)=1061

Пример 9

Ac-Nle-c[Glu-Cha-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=3,17 мин; (m+1)=1054

Пример 10

Ac-Nle-c[Glu-Ile-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,97 мин; (m+1)=1015

Пример 11

Ac-Nle-c[Glu-tBuGly-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,96 мин; (m+1)=1015

Пример 12

Ac-Nle-c[Glu-Phe(3,4-дифтор)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=3,08 мин; (m+1)=1084

Пример 13

Ac-Nle-c[Glu-Phe-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,97 мин; (m+1)=1050

Пример 14

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,4 мин; (m+1)=1387

Пример 15

H-Ala-Lys-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,1 мин; (m+1)=1457

Пример 16

2-Гидрокси-3-метилбутаноил-Ser-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

Первый диастереомер

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,5 мин; (m+1)=1108

Второй диастереомер

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,6 мин; (m+1)=1108

Пример 17

H-Dab-Nle-c[Glu-3-PyAla-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=1,84 мин; ((m+2)/2)=554

Пример 18

H-Ala-Lys-Ala-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=1,9 мин; (m+1)=1243

Пример 19

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(4-йод)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,73 мин; (m+1)=1140

Пример 20

Гекс-5-еноил-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,92 мин; ((m+2)/2)=534

Пример 21

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,21 мин; ((m+2)/2)=756

Пример 22

Ac-Gly-Ser-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 1): Rt=2,15 мин; ((m+2)/2)=772

Пример 23

Ac-Gly-Ser-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Met(O) ₂-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH₂

ЖХ/МС (система 2): Rt=2,54 мин; (m+1)=1561

Пример 24

Ac-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 4): Rt=5,66 мин; (m+1)=1015

Пример 25

Ас-Nle-с[Clu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-(2-аминоэтил)амид

ЖХ/МС (система 4): Rt=4,71 мин; ((m+2)/2)=530

Пример 26

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-амино)-D-Phe(4-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 4): Rt=3,3 мин; ((m+2)/2)=543

Пример 27

Ac-Asn-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,46 мин; ((m+2)/2)=690

Пример 28

Ac-D-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,60 мин; ((m+2)/2)=664

Пример 29

Ac-Gln-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,51 мин; ((m+2)/2)=694

Пример 30

Ac-Ser-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,75 мин; ((m+2)/2)=680

Пример 31

Ac-Gln-гомоArg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,62 мин; ((m+2)/2)=700

Пример 32

Ac-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,87 мин; (m+1)=651

Пример 33

Ac-D-Ser-Asn-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,88 мин; (m+1)=652

Пример 34

Ac-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,11 мин; ((m+2)/2)=690

Пример 35

Ac-D-Ser-Tyr-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,24 мин; ((m+2)/2)=690

Пример 36

Ac-Ser-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,13 мин; ((m+2)/2)=676

Пример 37

Ac-Gln-His-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,16 мин; ((m+2)/2)=697

Пример 38

Ac-Gln-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,2 мин; ((m+2)/2)=706

Пример 39

Ac-Asn-Arg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,13 мин; ((m+2)/2)=699

Пример 40

Ac-Asn-гомоArg-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,47 мин; ((m+2)/2)=707

Пример 41

Ac-D-Ser-Asn-Hyp-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,8 мин; ((m+2)/2)=665

Пример 42

Ac-Gln-Tyr-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=9,06 мин; ((m+2)/2)=702

Пример 43

Ac-Ser-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,7 мин; ((m+2)/2)=669

Пример 44

Ac-Asn-His-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,59 мин; ((m+2)/2)=682

Пример 45

Ac-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,92 мин; ((m+2)/2)=678

Пример 46

Ac-D-Ser-Arg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,93 мин; ((m+2)/2)=678

Пример 47

Ac-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,06 мин; ((m+2)/2)=685

Пример 48

Ac-D-Ser-гомоArg-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,13 мин; ((m+2)/2)=685

Пример 49

Ac-Gln-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=7,85 мин; ((m+2)/2)=677

Пример 50

Ac-Asn-Asn-Pro-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,03 мин; ((m+2)/2)=671

Пример 51

Ac-Ser-Tyr-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=9,04 мин; ((m+2)/2)=683

Пример 52

Ac-D-Ser-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,04 мин; ((m+2)/2)=671

Пример 53

Ac-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,61 мин; ((m+2)/2)=691

Пример 54

Ac-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,02 мин; ((m+2)/2)=680

Пример 55

Ac-D-Ser-Arg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,77 мин; ((m+2)/2)=680

Пример 56

Ac-Ser-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,99 мин; ((m+2)/2)=687

Пример 57

Ac-Asn-гомоArg-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,91 мин; ((m+2)/2)=701

Пример 58

Ac-Gln-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=7,11 мин; ((m+2)/2)=680

Пример 59

Ac-Asn-Asn-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,95 мин; ((m+2)/2)=672

Пример 60

Ac-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,78 мин; ((m+2)/2)=661

Пример 61

Ac-Gln-Tyr-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,48 мин; ((m+2)/2)=682

Пример 62

Ac-Ser-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,73 мин; ((m+2)/2)=648

Пример 63

Ac-Asn-His-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,56 мин; ((m+2)/2)=662

Пример 64

Ac-Ser-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,71 мин; ((m+2)/2)=658

Пример 65

Ac-Asn-Arg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,77 мин; ((m+2)/2)=672

Пример 66

Ac-D-Ser-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,93 мин; ((m+2)/2)=665

Пример 67

Ac-Gln-гомоArg-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,72 мин; ((m+2)/2)=685

Пример 68

Ac-Ser-Asn-Gly-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,84 мин; ((m+2)/2)=637

Пример 69

Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,68 мин; ((m+2)/2)=676

Пример 70

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,73 мин; ((m+2)/2)=664

Пример 71

Ac-Ser-Arg-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,94 мин; ((m+2)/2)=673

Пример 72

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,65 мин; ((m+2)/2)=656

Пример 73

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Ser-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,4 мин; ((m+2)/2)=650

Пример 74

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(3-трифторметил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=7,41 мин; ((m+2)/2)=697

Пример 75

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-метил)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=5,88 мин; ((m+2)/2)=670

Пример 76

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe(2-хлор)-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=6,22 мин; ((m+2)/2)=680

Пример 77

Ac-Nle-c[Asp-Thr-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=9,87 мин; (m+1)=989

Пример 78

Ac-Nle-c[Asp-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=9,58 мин; (m+1)=974

Пример 79

Ас-Nle-с[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=11,87 мин; ((m+2)/2)=521

Пример 80

Ac-Nle-c[Asp-Phe(4-амино)-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,98 мин; ((m+2)/2)=525

Пример 81

Ac-Nle-c[Asp-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=9,78 мин; ((m+2)/2)=523

Пример 82

Ac-Ser-His-Ser-Nle-c[Asp-(4-тиазолил)Ala-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH ₂

ЖХ/МС (система 3): Rt=8,28 мин; ((m+2)/2)=677

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Анализ (I) Экспериментальный протокол испытания на эффективность в отношении аппетита с аналогами МС4 с использованием модели свободного доступа крыс к пище

Для экспериментов используют крыс TAC:SPRD @mol или крыс Wistar из М&В Breeding and Research Centre A/S, Дания. В начале эксперимента крысы имеют массу тела 200-250 г.Крыс привозят, по меньшей мере, за 10-14 суток до начала эксперимента с массой тела 180-200 г. Каждую дозу соединения испытывают в группе из 8 крыс. В каждую серию испытания включают группу из 8 крыс, принимающих плацебо.

Когда животных привозят, их помещают индивидуально с чередующимся световым режимом (свет выключают в 7:30 и включают в 19:30), что означает, что свет выключен в дневное время и включен в ночное время. Поскольку крысы в норме начинают питаться, когда свет выключен, и съедают основную часть своего суточного рациона ночью, эти условия означают, что авторы изобретения изменили время начала питания на 7:30, когда свет выключают. В течение периода привыкания 10-14 суток крысам дают свободный доступ к пище и воде. В этот период животных берут в руки, по меньшей мере, 3 раза. Эксперимент проводят в домашних клетках для крыс. Непосредственно перед введением лекарства крыс рандомизированно объединяют в различные лечебные группы (n=8) по массе тела. Вводят лекарство в соответствии с массой тела примерно в 7:00-1-3 мг/кг раствора либо интраперитонеально, либо перорально, либо подкожно. Время введения лекарства записывают для каждой группы. После введения лекарства крыс возвращают в их домашние клетки, где они теперь имеют доступ к пище и воде. Потребление пищи записывают индивидуально каждый час в течение 7 часов, а затем через 24 ч и иногда через 48 ч. В конце постановки эксперимента животных подвергают эвтаназии.

Индивидуальные данные вносят в таблицы Microsoft Excel. Выпадающие значения исключают после использования критерия статистической оценки Грабба для выпадающих значений, и результат представляют графически путем использования программы GraphPad Prism.

Анализ (II) Функциональный анализ рецепторов меланокортина 3 и 5 (МС3 и МС5) на цАМФ с использованием набора для обнаружения цАМФ AlphaScreen^TM

Анализы цАМФ для рецепторов МС3 и МС5 проводят на клетках, стабильно экспрессирующих рецепторы МС3 и МС5 соответственно. Эти рецепторы клонируют из кДНК с помощью ПЦР и встраивают в вектор экспрессии pcDNA3. Стабильные клоны отбирают, используя 1 мг/мл G418.

Клетки примерно при 80-90% конфлюентности промывают 3 раза ФСБ, отделяют от планшетов версеном и разводят в фосфатном буфере (ФСБ). Центрифугируют 2 мин при 1300 об/мин и удаляют надосадочную жидкость. Клетки дважды промывают стимулирующим буфером и ресуспендируют в стимулирующем буфере с конечной концентрацией 1 или 2·10⁶ клеток/мл. 25 мкл клеточной суспензии добавляют в микротитровальные планшеты, содержащие 25 мкл тестируемого соединения или соединения сравнения (все разведены в стимулирующем буфере). Планшеты инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре (КТ) на шейкере для планшетов при низкой скорости качания. Реакцию останавливают добавлением 25 мкл акцепторных гранул с анти-цАМФ и 2 мин позже 50 мкл донорных гранул на лунку с биотинилированным цАМФ в буфере лизиса. Затем планшеты запаивают пластиком, качают в течение 30 минут и оставляют стоять на ночь, а затем считают в считывающем устройстве для микропланшетов Alpha^TM.

Значения ЕС₅₀ вычисляют с помощью анализа нелинейной регрессии кривых доза-ответ (минимум 6 точек), используя программу Windows GraphPad Prism, GraphPad software, USA. Все результаты выражают в нМ.

Для измерения антагонистической активности в функциональном анализе МС3 на цАМФ рецепторы МС3 стимулируют 3 нМ -МСГ и ингибируют возрастающим количеством потенциального антагониста. Значение IC₅₀ антагониста определяют при концентрации, которая ингибирует стимуляцию МС3 на 50%.

Анализ (III) рецептора меланокортина 4 (МС4) на цАМФ

Клетки ВНК, экспрессирующие рецептор МС4, стимулируют потенциальными агонистами МС4 и измеряют степень стимуляции цАМФ, используя анализ на цАМФ Flash Plate® (NEN ^TM Life Science Products № по каталогу SMP004).

Экспрессирующие рецептор МС4 клетки ВНК были получены путем трансфекции кДНК, кодирующей рецептор МС4, в BHK570/KZ10-20-48, и отбора на стабильные клоны, экспрессирующие рецептор МС4. кДНК рецептора МС4 покупали в Euroscreen в дополнение к клеточной линии СНО, экспрессирующей рецептор МС4. Клетки выращивают в среде DMEM, 10% ФСТ (фетальной сыворотки теленка), 1 мг/мл G418, 250 нМ МТХ и 1% пенициллина/стрептомицина.

Клетки примерно при 80-90% конфлюентности промывают 3 раза ФСБ, отделяют от планшетов версеном и разводят в ФСБ. Центрифугируют 2 мин при 1300 об/мин и удаляют надосадочную жидкость. Клетки дважды промывают стимулирующим буфером и ресуспендируют в стимулирующем буфере до конечной концентрации 0,75·10 ⁶ клеток/мл. (Используют 7 мл/96-луночный планшет). 50 мкл клеточной суспензии добавляют в Flashplate, содержащий 50 мкл тестируемого соединения или соединения сравнения (все разведены в H₂O). Смесь встряхивают в течение 5 минут и дают стоять в течение 25 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливают 100 мкл смеси для обнаружения (Detection Mix) на лунку (Detection Mix=11 мл буфера для обнаружения +100 мкл изотопного индикатора (~2 мкКи) цАМФ [¹²⁵I]). Затем планшеты запаивают пластиком, качают в течение 30 минут и оставляют стоять на ночь (или на 2 часа) и считают в счетчике Topcounter 2 мин/лунка. В целом процедура анализа описана в протоколе к набору Flashplate (анализ цАМФ Flash Plate® (NEN^TM Life Science Products № по каталогу SMP004)). Однако стандарты цАМФ разводят в 0,1% ЧСА (человеческий сывороточный альбумин) и 0,005% твин 20, а не в стимулирующем буфере.

Значения ЕС ₅₀ вычисляют с помощью анализа нелинейной регрессии кривых доза-ответ (минимум 6 точек), используя программу Windows GraphPad Prism, GraphPad software, USA. Все результаты выражают в нМ.

Анализ (IV) Анализ связывания рецептора меланокортина 1 (МС1)

Анализ связывания рецептора МС1 проводят на мембранах клеток НЕК293, стабильно экспрессирующих рецептор МС1. Этот анализ проводят в суммарном объеме 250 мкл; 25 мкл ¹²⁵NDP- -МСГ (22 пМ в конечной концентрации), 25 мкл тестируемого соединения/контроля и 200 мкл клеточной мембраны (35 мкг/мл). Тестируемые соединения растворяют в ДМСО. Радиоактивный лиганд, мембраны и тестируемые соединения разводят в буфере: 25 мМ ГЭПЭС рН 7,4, 0,1 мМ CaCl₂, 1 мМ MgSO₄, 1 мМ ЭДТА, 0,1% ЧСА и 0,005% Твин-20. Образцы инкубируют при 30°C в течение 90 мин в микротитровальных планшетах Greiner и разделяют с использованием фильтров GF/B, которые предварительно замачивают на 60 мин в 0,5% PEI и промывают 2-3 раза NaCl (0,9%) перед разделением связанного и несвязанного радиоактивного лиганда фильтрованием. После фильтрования фильтры промывают охлажденным во льду 0,9% NaCl 10 раз. Фильтры высушивают при 50°C в течение 30 мин, запаивают, добавляют в каждую лунку 30 мкл Microscint 0 (Packard, № по каталогу 6013616) и считают планшеты в счетчике Topcounter 1 мин/лунка.

Данные анализируют с помощью нелинейного регрессионного анализа кривых связывания, используя программу Windows GraphPad Prism, GraphPad software, USA.

Анализ (V) Анализ связывания рецептора меланокортина 4 (МС4)

Связывание ¹²⁵NDP- -МСГ in vitro с рекомбинантными клетками ВНК. экспрессирующими человеческий рецептор МС4 (фильтрационный анализ).

Этот анализ проводят в 5 мл флаконах Minisorb (Sarstedt № 55.526) или в 96-луночном планшете с фильтрами Millipore MADVN 6550 и с использованием клеток ВНК, экспрессирующих человеческий рецептор МС4 (полученных от Professer Wikberg, Uppsala, Швеция). Клетки ВНК держат при -80°C до анализа, и анализы проводят непосредственно на разведении этой клеточной суспензии без дополнительной подготовки. Суспензию разводят до получения максимального специфичного связывания 10%, примерно до 50-100-кратного разведения. Анализ проводят в суммарном объеме 200 мкл; 50 мкп клеточной суспензии, 50 мкл ¹²⁵NDP- -МСГ ( 79 пМ в конечной концентрации), 50 мкл тестируемого пептида и 50 мкл связывающего буфера рН 7 смешивают и инкубируют в течение 2 ч при 25°C. Связывающий буфер: 25 мМ ГЭПЭС рН 7,0, 1 мМ CaCl₂, 1 мМ MgSO₄, 1 мМ ЭГТА, 0,02% бацитрацин и 0,2% БСА (бычий сывороточный альбумин)). Пептиды растворяют в H₂O и разводят в связывающем буфере. Радиоактивный лиганд и мембраны разводят в связывающем буфере. Инкубацию останавливают разведением 5 мл охлажденного во льду 0,9% NaCl с последующим быстрым фильтрованием через фильтры Whatman GF/C, предварительно обработанные в течение 1 часа 0,5% полиэтиленимином. Фильтры промывают 3·5 мл охлажденного во льду NaCl. Радиоактивность, удержанную на фильтрах, считают, используя автоматический гамма-счетчик Cobra II.

Данные анализируют с помощью анализа нелинейной регрессии кривых связывания, используя программу Windows GraphPad Prism, GraphPad software, USA.

Анализ (VI) Оценка расхода энергии

Используют крыс TAC:SPRD или Wistar из М&В Breeding and Research Centre A/S, Дания. По меньшей мере, после одной недели акклиматизации крыс помещают индивидуально в метаболические камеры (система Oxymax, Columbus Instruments, Columbus, Ohio; системы калибровали ежедневно). Во время измерения животные имеют свободный доступ к воде, но пищей камеры не снабжают. Световой цикл составляет 12:12, свет включают в 6.00. После того, как животные проведут в камерах примерно 2 часа (то есть, когда достигнут базовый расход энергии), вводят соединение или носитель (перорально, интраперитонеально или подкожно), и продолжают наблюдения, чтобы установить время действия соединения. Данные для каждого животного (потребление кислорода, продуцирование углекислого газа и скорость потока) собирают каждые 10-18 мин суммарно в течение 22 часов: 2 часа адаптации (базовый уровень) и 20 часов измерения. Коррекцию на изменения в содержании O₂ и CO₂ в поступающем воздухе делают во время каждого 10-18 минутного цикла.

Данные вычисляют на метаболическую массу ((кг массы тела) ⁰'⁷⁵) для потребления кислорода и продуцирования углекислого газа, и на животное для тепла. Потребление кислорода (VO₂) рассматривают как главный представляющий интерес параметр расхода энергии.

Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитируемые здесь, включены в данное описание посредством ссылки в их полном объеме и до той степени, как если бы ссылка была сделана индивидуально и конкретно указана как включенная путем ссылки и изложена здесь в полном объеме (до максимальной степени, допустимой законом).

Все заголовки и подзаголовки использованы здесь только для удобства и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом.

Использование любого и всех примеров или лексики, указывающей на примеры (например, «такой как»), приведенных здесь, предназначено исключительно для лучшего раскрытия изобретения и не накладывает ограничений на объем изобретения, если иное не заявлено. Лексику, использованную в описании, не следует рассматривать как указывающую на какой-либо не заявленный элемент как на существенный для осуществления изобретения.

Цитирование и включение патентных документов посредством ссылки сделано только для удобства и не отражает какую-либо точку зрения в отношении действительности, патентоспособности и/или практической значимости таких патентных документов.

В данное изобретение включены все модификации и эквиваленты объектов, перечисленных в прилагаемой формуле изобретения, как разрешено соответствующим законом.