способ диагностики токсического гепатита в эксперименте

Формула изобретения

Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте, отличающийся тем, что проводят динамическую биоимпедансометрию ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт, сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтох, и если Zинт меньше, чем Zтох, то говорят о возникновении токсического гепатита.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в эксперименте и клинической медицине для диагностики токсического гепатита.

Известен способ определения диагностики токсического гепатита в эксперименте, при котором животное забивают, а для выявления токсического гепатита проводят гистологическое исследование печени. Материал фиксируют 10% раствором нейтрального формалина, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивают ультраструктуру паренхимы печени, и если в морфологической картине ткани выявляют выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, то говорят о токсическом ее поражении (Фаращук Н.Ф. Мексидол и гепатит: результаты в эксперименте и перспективы в клинике // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006, приложение 1).

Метод является трудоемким, предполагает забой лабораторных животных. Кроме того, используя вышеописанную методику, не возможно динамическое наблюдение за процессом развития токсического гепатита у одного и того же животного.

Задачей изобретения является разработка прижизненного малоинвазивного способа диагностики токсического гепатита в эксперименте.

Сущность предложенного способа состоит в том, что проводят динамическую биоимпедансометрию (БИМ) ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт, сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтox, и если Zинт меньше, чем Zтox, то говорят о возникновении токсического гепатита.

Различные патологические процессы приводят к изменению размеров, формы и взаимного расположения клеток в биологической ткани. Соответственно, изменяется микроархитектоника биологической ткани, интенсивность кровоснабжения и метаболизма клеток. При этом меняются электрофизические свойства биообъектов, в частности импеданс. Что легло в основу данного изобретения.

Пример. Крысе весом 180 г под эфирным рауш-наркозом производили верхнесрединную лапаротомию длиной 1 см, вывихивали хвостатую долю печени в рану, осуществляли биоимпедансометрию интактной печени (частота тока 2 кГц, напряжение IV) при помощи игольчатых электродов, которые вводили в ткань печени на глубину 2 мм. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z₁ , Z₂, Z₃) на площади 10 мм². Затем вычисляли среднее значение (Zинт).

На 4 сутки после операции внутрибрюшинно вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода (ЧХУ) в дозе 0,25 мл на 100 г веса. На 3 сутки после введения ЧХУ была проведена повторная лапаротомия с последующей биоимпедансометрией хвостатой доли печени. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z₁ Z₂, Z₃) на площади 10 мм. Затем вычисляли среднее значение (Zтox).

При измерении импеданса интактной печени получили: Z₁=2069 Ом, Z₂=2177 Ом, Z₃=2237 Ом, тогда Zинт=2161 Ом.

При измерении импеданса печени после введения ЧХУ получили: Z₁=2337 Ом, Z ₂=2791 Ом, Z₃=2187 Ом, тогда Zтox=2438 Ом.

Таким образом, Zинт меньше, чем Zтox, следовательно, у данного животного диагностируется токсическое поражение печени.

Далее крысу забили, на гистологическое исследование взяли фрагмент хвостатой доли печени. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин, приготавливали гистологические срезы и окрашивали их гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивали ультраструктуру паренхимы печени.

При гистологическом исследовании выявили выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, что является признаком токсического поражения печени.

Провели эксперимент на 15 крысах-самцах весом от 145 до 185 г. Были сформированы 2 группы: опытная группа животных в количестве 10 шт. и контрольная 5 шт.

В опытной группе животных моделировали токсический гепатит и измеряли импеданс ткани печени по описанной выше методике. В результате у всех животных Zинт был меньше, чем Zтox, что говорит о развитии токсического гепатита (табл.1, 2). Диагноз подтверждался гистологическим исследованием ткани печени.

Таблица 1 Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте
№ крысы	Zинт, Ом	Zтox, Ом	Сравнение
1	2178	2300	Zинт < Zтох
2	2265	2665	Zинт < Zтох
3	2161	2438	Zинт < Zтox
4	2053	2624	Zинт < Zтox
5	2388	2602	Zинт < Zтох
6	1816	2923	Zинт < Zтох
7	2981	3313	Zинт < Zтох
8	2172	2225	Zинт < Zтox
9	2480	2822	Zинт < Zтох
10	2216	2448	Zинт < Zтox

Таблица 2
№ крысы	Zинт, Ом	Zтox, Ом	Сравнение
1	3173	1793	Zинт > Zтox
2	2806	1828	Zинт > Zтox
3	3146	2355	Zинт > Zтox
4	2889	1769	Zинт > Zтox
5	2637	1728	Zинт > Zтox

В контрольной группе крыс проводили измерение импеданса ткани печени в те же сроки, что и у опытной группы животных, но ЧХУ не вводили. В результате у всех контрольных животных Zинт был больше, чем Zтox, что подтверждает отсутствие токсического поражения печени. Результаты биоимпедансометрии были подтверждены гистологическим исследованием.

Таким образом, предложенный способ диагностики токсического гепатита является объективным и надежным, может быть широко использован в экспериментальной медицине для исследования влияния различных токсических агентов на ткань печени и оценки эффективности лекарственных препаратов при токсическом поражении печени.