полиморфы с-met/hgfr ингибитора

Формула изобретения

1. Свободное основание (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина в виде кристаллической формы, имеющей картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1.

2. Свободное основание по п.1, где кристаллическая форма представляет собой полиморфную форму 1 свободного основания.

3. Свободное основание по п.1 или 2, где кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1, 19,7±0,1 и 26,8±0,1.

4. Свободное основание по п.1 или 2, где кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 12.8±0,1, 15,7±0,1, 17,3±0,1, 19,7±0,1, 21,0±0,1, 21,7±0,1 и 26,8±0,1.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибитора c-Met/HGFR, содержащая свободное основание по любому из пп.1-4.

6. Фармацевтическая композиция в виде капсулы, содержащей фармацевтическую композицию по п.5.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, содержащая от 0,1 до 200 мг полиморфной формы 1 (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина.

8. Фармацевтическая композиция по п.6, содержащая от 25 до 150 мг полиморфной формы 1 (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина.

9. Фармацевтическая композиция по п.6, содержащая от 50 до 100 мг полиморфной формы 1 (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина.

10. Способ лечения рака у млекопитающего, включая человека, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.5.

11. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции по любому из пп.6-9.

12. Способ лечения аномального клеточного роста у нуждающегося в таком лечении млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества свободного основания полиморфной формы 1 (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина.

Описание изобретения к патенту

Настоящая заявка основана на предварительной заявке США № 60/742676, поданной 5 декабря 2005, содержание которой включено здесь путем ссылки полностью.

Область изобретение

Настоящее изобретение относится к полиморфам (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина, которые полезны в лечении аномального клеточного роста, такого как рак, у млекопитающих. Данное изобретение также относится к композициям, включающим такие соли и полиморфы, и к способам использования таких композиций в лечении аномального клеточного роста у млекопитающих, особенно людей.

Предпосылки изобретения

Соединение (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламин (на которое здесь ссылаются как на «соединение 1»), представленное формулой 1

является сильнодействующим низкомолекулярным ингибитором с-Met/HGFR (рецептор фактора роста гепатоцитов) киназы и ALK (киназа анапластической лимфомы) активности. Соединение 1 обладает противоопухолевыми свойствами, которые фармакологически опосредованы через ингибирование c-Met/HGFR, который вовлечен в регуляцию роста и метастатического развития широкого разнообразия типов опухолей, и ALK, которая вовлечена в патогенез ALCL (анапластическая крупноклеточная лимфома). Соединение 1 описано в международной патентной заявке № PCT/IB2005/002837 и заявке на патент США № 11/212331, которые включены здесь путем ссылки полностью. Дополнительно, рацемат соединения 1 описан в международной патентной заявке № PCT/IB05/002695 и заявке на патент США № 11/213039, которые включены здесь путем ссылки полностью.

Злокачественные новообразования человека включают в себя широкий список заболеваний, которые в целом представляют собой одну из лидирующих причин смерти в развитых странах мира (American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005. Atlanta: American Cancer Society; 2005). Прогрессирование злокачественных новообразований вызвано комплексной серией множественных генетических и молекулярных событий, включая генные мутации, хромосомные транслокации и кариотипические аномалии (Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell 2000; 100: 57-70). Несмотря на то что лежащие в основе генетические причины рака как разнообразны, так и сложны, каждый тип рака, как замечено, проявляет общие черты и приобретенные возможности, которые облегчают его развитие. Эти приобретенные возможности включают в себя нерегулируемый клеточный рост, устойчивую способность вовлекать кровеносные сосуды (то есть ангиогенез) и способность опухолевых клеток распространяться локально, а также метастазировать во вторичные органы-мишени (Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell 2000; 100: 57-70). Следовательно, способность идентифицировать новые терапевтические агенты, которые 1) ингибируют молекулярные мишени, которые изменены во время развития рака, или 2) направлены на множественные процессы, которые являются общими для развития рака в разнообразии опухолей, представляет собой значительную неудовлетворенную потребность.

В примере 19 заявки на патент США № 11/212331 описано получение соединения 1, которое, как было обнаружено, является аморфным. Является преимущественным иметь полиморфные формы, имеющие улучшенные свойства, такие как улучшенная кристалличность, свойства растворения и/или уменьшенная гигроскопичность, в то же время с сохранением свойств химической и энантиомерной стабильности.

Краткое изложение сущности изобретения

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена кристаллическая форма свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина. В конкретном воплощении кристаллическая форма свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина является безводной. В другом воплощении кристаллическая форма свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина представляет собой гидрат.

В дополнительном аспекте кристаллическая форма представляет собой полиморфную форму 1 свободного основания. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пик при угле дифракции (2 ) 19,7±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 17,3±0,1 и 19,7±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1 и 26,8±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1, 21,0±0,1 и 26,8±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1, 21,0±0,1, 21,7±0,1 и 26,8±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ) 12,8±0,1, 15,7±0,1, 17,3±0,1 и 19,7±0,1, 21,0±0,1, 21,7±0,1 и 26,8±0,1. В дополнительном аспекте кристаллическая форма имеет картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, содержащую пики при углах дифракции (2 ), по существу, таких, как показано на фиг.1.

В настоящем изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция, содержащая полиморфную форму 1 свободного основания соединения 1. В настоящем изобретении дополнительно предложена капсула, содержащая указанную фармацевтическую композицию. В конкретных аспектах этого воплощения капсула содержит от 0,1 до 200 мг полиморфной формы 1 свободного основания соединения 1. В дополнительном аспекте капсула содержит от 25 до 150 мг полиморфной формы 1 свободного основания соединения 1. В дополнительном аспекте капсула содержит от 50 до 100 мг полиморфной формы 1 свободного основания соединения 1 .

В еще одном воплощении в изобретении предложен способ лечения рака у млекопитающего, включая человека, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

В еще одном воплощении в изобретении предложен способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему, включая человека, капсулы по настоящему изобретению.

В еще одном воплощении в изобретении предложен способ лечения аномального клеточного роста у нуждающегося в таком лечении млекопитающего, включая человека, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества полиморфной формы 1 свободного основания соединения 1.

В еще одном воплощении аномальный клеточный рост опосредован по меньшей мере одной генетически измененной тирозинкиназой. В еще одном воплощении аномальный клеточный рост опосредован киназой рецептора фактора роста гепатоцитов (c-Met/HGFR) или киназой анапластической лимфомы (ALK). В еще одном воплощении аномальный клеточный рост опосредован киназой рецептора фактора роста гепатоцитов (c-Met/HGFR). В еще одном воплощении аномальный клеточный рост опосредован киназой анапластической лимфомы (ALK).

В еще одном воплощении аномальный клеточный рост представляет собой рак. В еще одном воплощении рак выбран из рака легких, рака костей, рака поджелудочной железы, рака кожи, рака головы или шеи, кожной или внутриглазной меланомы, рака матки, рака яичников, рака прямой кишки, рака анальной области, рака желудка, рака ободочной кишки, рака молочной железы, карциномы фаллопиевых труб, карциномы эндометрия, карциномы шейки матки, карциномы влагалища, карциномы наружных женских половых органов, болезни Ходжкина (лимфогранулематоза), рака пищевода, рака тонкого кишечника, рака эндокринной системы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака надпочечника, саркомы мягких тканей, рака уретры, рака пениса, рака простаты, хронической или острой лейкемии, лимфоцитической лимфомы, рака мочевого пузыря, рака почки или мочеточника, почечно-клеточного рака, карциномы почечной лоханки, неоплазм центральной нервной системы (ЦНС), первичной лимфомы ЦНС, опухолей спинного мозга, глиомы ствола головного мозга, аденомы гипофиза и их комбинаций.

В еще одном воплощении рак выбран из группы, состоящей из не-мелкоклеточного рака легкого (NSCLC), плоскоклеточного рака, гормонорезистентного рака простаты, папиллярной почечно-клеточной карциномы, колоректальной аденокарциномы, нейробластом, анапластической крупноклеточной лимфомы (ALCL) и рака желудка.

Определения

Как используется здесь, если не указано иначе, термин «аномальный клеточный рост» относится к клеточному росту, который является независимым от нормальных регуляторных механизмов (например, отсутствие контактного ингибирования).

Как используется здесь, если не указано иначе, термин «терапия» означает обращение, облегчение, подавление развития или предупреждение расстройства или состояния, к которому такому термин применим, или одного или более чем одного симптома такого расстройства или состояния. Термин «лечение», как используется здесь, если не указано иначе, относится к акту терапии, как она определена непосредственно выше.

Как используется здесь, термин «по существу такой же» в отношении положений пиков дифракции рентгеновских лучей означает, что рассматривается типичное положение пика и изменчивость интенсивности. Например, специалисту в данной области должно быть понятно, что положения пиков (2 ) будут демонстрировать некоторую вариабельность между приборами, обычно такую, как 0,1°. Более того, специалисту в данной области должно быть понятно, что относительные интенсивности пиков показывают вариабельность между приборами, а также вариабельность вследствие степени кристалличности, предпочтительной ориентации, поверхности подготовленного образца и других факторов, известных специалисту в данной области, и должны приниматься только в качестве качественных измерений.

Краткое описание графических материалов

На фиг.1 показана картина дифракции рентгеновских лучей на порошке кристаллической формы свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина, полиморфной формы 1.

На фиг.2 показана термограмма дифференциальной сканирующей калорометрии (DSC) кристаллической формы свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина, полиморфной формы 1.

Детальное описание изобретения

Была приготовлена однозначно определяемая физическая форма свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина. Картина дифракции рентгеновских лучей на порошке (PXRD) полиморфной формы 1 свободного основания показана на фиг.1, при этом соответствующие табличные данные показаны в таблице 1.

Таблица 1
PXRD данные для формы 1 свободного основания (R)-3-[1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина
2 (°)	Величина D	Интенсивность пика (импульсы)	Интенсивность пика (%)
12,8	6,916	6,69	30,9
15,7	5,658	12,6	58,1
17,3	5,129	15,9	73,3
19,7	4,511	21,6	100
21,0	4,235	8,00	37,0
21,7	4,102	7,03	32,5
26,8	3,326	7,92	36,6

DSC термограмма для кристаллической формы свободного основания 1 показана на фиг.2.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим полиморфную форму 1 свободного основания соединения 1, описанного здесь. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут, например, находиться в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетка, капсула, пилюля, порошок, препараты замедленного высвобождения, раствор, суспензия для парентеральной инъекции, такой как стерильный раствор, суспензия или эмульсия для местного введения в виде мази или крема, или для ректального введения в виде суппозитория. Фармацевтическая композиция может находиться в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных дозировок. Фармацевтическая композиция должна включать общепринятый фармацевтический носитель или эксципиент и соединение по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента. В дополнение, она может включать в себя другие медицинские или фармацевтические агенты, носители, адъюванты и тому подобное.

Примерные формы парентерального введения включают в себя растворы или суспензии активных соединений в стерильных водных растворах, например водных растворах пропиленгликоля или декстрозы. Такие лекарственные формы могут быть подходящим образом забуферены, при желании.

Подходящие фармацевтические носители включают в себя инертные разбавители или наполнители, воду и различные органические растворители. Фармацевтические композиции могут, при желании, содержать дополнительные ингредиенты, такие как корригенты, связующие вещества, эксципиенты и тому подобное. Таким образом, в таблетках для перорального введения, содержащих различные эксципиенты, эксципиенты, такие как лимонная кислота, могут быть использованы вместе с различными разрыхлителями, такими как крахмал, альгиновая кислота и некоторые сложные силикаты, и со связующими агентами, такими как сахароза, желатин и аравийская камедь. Дополнительно, смазывающие агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк, часто полезны для целей таблетирования. Твердые композиции подобного типа могут также быть использованы в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах. Предпочтительные материалы включают в себя лактозу или молочный сахар и полиэтиленгликоли высокой молекулярной массы. Когда для перорального введения желательны водные суспензии или эликсиры, активное соединение в них может быть объединено с различными подсластителями или корригентами, красящими веществами или красками и, при желании, эмульгирующими агентами или суспендирующими агентами, вместе с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин или их комбинации.

Способы получения различных фармацевтических композиций с конкретным количеством активного соединения известны или будут очевидны специалисту в данной области, например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15^th Edition (1975).

Примеры

Примеры и вспомогательные примеры, предложенные ниже, дополнительно иллюстрируют и служат примером конкретных аспектов воплощений настоящего изобретения. Следует понимать, что объем настоящего изобретения ни в коем случае не ограничен объемом следующих примеров.

Методы и материалы

Порошковая дифракция рентгеновских лучей (PXRD): данные PXRD, показанные на фиг.1, получали в соответствии со следующим протоколом. Образец (2 мг) помещали на предметное стекло микроскопа с нулевым фоном. Образец затем помещали в Discover D8 (Bruker AXS Instruments), снабженный GADDS детектором. В системе использован медный источник рентгеновских лучей, поддерживаемый при 40 кВт и 40 мА, для обеспечения эмиссии CU 1 при 1,5406 Ангстрем. Данные собирали от 4 до 40° 2 , используя шаговое сканирование 0,02°, с шагом времени 60,1 секунд. Пики дифракции обычно измеряли с ошибкой ±0,1 градус (2 ).

Дифференциальная сканирующая калорометрия (DSC): DSC измерения, показанные на фиг.2, осуществляли с использованием Q1000, Thermal Analysis Instruments. Образец массой 1,6 мг помещали в герметично запаянный алюминиевый резервуар с маленьким отверстием. Образец уравновешивали до 25°С и затем прогоняли до 250°С при скорости сканирования 10°С/мин. Сухой азот использовали в качестве продувочного газа.

Синтез соединения 1

PLE представляет собой фермент, производимый Roche и продаваемый Biocatalytics Inc. в виде неочищенного препарата эстеразы из печени свиньи, традиционно известный как PLE-AS (закупаемый у Biocatalytics как ICR-123, продаваемый в качестве суспензии сульфата аммония). Этот фермент классифицируется в CAS ((Chemical Abstracts Service) Реферативная служба по химии) реестре как «гидролаза эфиров карбоновых кислот», № CAS 9016-18-6". Соответствующий классификационный номер фермента ЕС 3.1.1.1. Известно, что этот фермент обладает широкой субстратной специфичностью в отношении гидролиза широкого ряда сложных эфиров. Липазную активность определяли, используя способ, основанный на гидролизе этил бутирата в pH-титраторе. 1 LU (липазная единица) представляет собой количество фермента, которое высвобождает 1 мкмоль титруемой масляной кислоты в минуту при 22°С, pH 8,2. Препарат, о котором сообщается здесь (PLE-AS, в виде суспензии), обычно транспортируют в виде непрозрачной коричнево-зеленой жидкости с заявленной активностью свыше 45 LU/мг (содержание белка около 40 мг/мл).

(1S)-1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этанол

(1S)-1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этанол, показанный как соединение (S-1) в схеме ниже, получали путем комбинации ферментативного гидролиза рацемического 1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этилацетата, этерификации и химического гидролиза с инверсией согласно Схеме Б. Рацемический 1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этилацетат (соединение А2) получали в соответствии со Схемой А.

Схема А

1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этанол (А1): боргидрид натрия (90 мг, 2,4 ммоль) добавляли к раствору 2',6'-дихлор-3'-фтор-ацетофенона (Aldrich, каталожный № 52294-5) (207 мг, 1 ммоль) в 2 мл безводного СН₃ ОН. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем упаривали с получением бесцветного маслянистого остатка. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (элюируя 0 10% EtOAc в гексанах), с получением соединения А1 в виде бесцветного масла (180 мг; 0,88 ммоль; 86,5% выход); МС (APCI (масс-спектрометрия с химической ионизацией при атмосферном давлении)) (М-Н)^- 208; ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-D) млн^-1 1.64 (d, J=6,82 Гц, 3Н), 3.02 (d, J=9,85 Гц, 1Н), 6.97-7.07 (m, 1Н), 7.19-7.33 (m, 1Н).

1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)этилацетат (А2): уксусный ангидрид (1,42 мл, 15 ммоль) и пиридин (1,7 мл, 21 ммоль) последовательно добавляли к раствору соединения А1 (2,2 г, 10,5 ммоль) в 20 мл CH₂Cl₂. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов, а затем упаривали с получением желтоватого маслянистого остатка. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (элюируя 7 9% EtOAc в гексанах), с получением соединения А2 в виде бесцветного масла (2,26 г; 9,0 ммоль; 85,6% выход); ¹ Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-D) млн^-1 1.88 (d, J=6,82 Гц, 3Н), 2.31 (s, 3Н), 6.62 (q, J=6,82 Гц, 1Н), 7.25 (t, J=8,46 Гц, 1Н), 7.49 (dd, J=8,84; 5,05 Гц, 1Н).

Схема Б

В колбу с рубашкой на 50 мл, снабженную pH электродом, верхней мешалкой и линией подачи основания (1М NaOH), добавляли 1,2 мл 100 мМ фосфатно-калиевого буфера pH 7,0 и 0,13 мл суспензии PLE AS. Затем добавляли по каплям соединение А2 (0,13 г, 0,5 ммоль, 1,00 экв.) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов, поддерживая pH реакции постоянной при 7,0, используя 1 М NaOH. Как за превращением, так и за энантиомерным избытком реакции наблюдали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой и останавливали после того, как 50% исходного материала израсходовалось (приблизительно 17 часов в этих условиях). Данную смесь затем экстрагировали трижды 10 мл этилацетата для выделения сложного эфира и спирта в виде смеси R-1 и S-2.

Метансульфонилхлорид (0,06 мл, 0,6 ммоль) добавляли к раствору смеси R-1 и S-2 (0,48 ммоль) в 4 мл пиридина в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем выпаривали с получением масла. К смеси добавляли воду (20 мл) и затем EtOAc (20 мл×2) для экстракции водного раствора. Органические слои объединяли, сушили, фильтровали и упаривали с получением смеси R-3 и S-2. Эту смесь использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-D) млн^-1 1.66 (d, J=7,1 Гц, 3Н), 1.84 (d, J=7,1 Гц, 3Н), 2.09 (s, 3Н), 2,92 (s, 3Н), 6.39 (q, J=7,0 Гц, 1Н), 6.46 (q, J=6,8 Гц, 1Н), 6.98-7.07 (m, 1Н), 7.07-7.17 (m, 1Н), 7.23-7.30 (М, 1Н), 7.34 (dd, J=8,8; 4,80 Гц, 1Н).

Ацетат калия (0,027 г, 0,26 ммоль) добавляли к смеси R-3 и S-2 (0,48 ммоль) в 4 мл ДМФ в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 12 часов. К реакционной смеси добавляли воду (20 мл) и для экстракции водного раствора добавляли EtOAc (20 мл×2). Объединенный органический слой сушили, фильтровали и выпаривали с получением масла S-2 (72 мг, 61% выход в две стадии). Хиральность: энантиомерный избыток 97,6%. ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-D) млн^-1 1.66 (d, J=7,1 Гц, 3Н), 2.09 (s, 3Н), 6.39 (q, J=6,8 Гц, 1Н), 7.02 (t, J=8,5 Гц, 1Н), 7.22-7.30 (m, 1Н).

Метоксид натрия (19 ммоль; 0,5 М в метаноле) медленно добавляли к соединению S-2 (4,64 г, 18,8 ммоль) в атмосфере азота при 0°С. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель выпаривали и добавляли H₂O (100 мл). Охлажденную реакционную смесь нейтрализовали буферным раствором ацетат натрия - уксусная кислота до pH 7. Этилацетат (100 мл×2) добавляли для экстракции водного раствора. Объединенные органические слои сушили над Na₂SO ₄, фильтровали и выпаривали с получением масла S-1 в виде белого твердого вещества (4,36 г, 94,9% выход); SFC-MS (масс-спектрометрия-сверхкритическая флюидная хроматография): энантиомерный избыток 97%. 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-D) млн^-1 1.65 (d, J=6,8 Гц, 3Н), 5.58 (q, J=6,9 Гц, 1Н), 6.96-7.10 (m, 1Н), 7.22-7.36 (m, 1Н).

5-бром-3-[1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)-этокси1-пиридин-2-иламин (рацемат)

1. 2,6-Дихлор-3-фторацетофенон (15 г, 0,072 моль) перемешивали в ТГФ (150 мл, 0,5 М) при 0°С, используя ледяную баню, в течение 10 минут. Алюмогидрид лития (2,75 г, 0,072 моль) медленно добавляли. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане, по каплям добавляли воду (3 мл) с последующим медленным добавлением 15% NaOH (3 мл). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 минут. Добавляли 15% NaOH (9 мл), MgSO₄ и смесь фильтровали для удаления твердых веществ. Твердые вещества промывали ТГФ (50 мл) и фильтрат концентрировали с получением 1-(2,6-дихлор-3-фторфенил)-этанола (14,8 мг, 95% выход) в виде желтого масла. ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) 1.45 (d, 3Н), 5.42 (m, 2Н), 7.32 (m, 1Н), 7.42 (m, 1Н).

2. К перемешанному раствору трифенилфосфина (8,2 г, 0,03 моль) и DEAD (диэтилазадикарбоксилат, 13,65 мл 40% раствора в толуоле) в ТГФ (тетрагидрофуран, 200 мл) при 0°С добавляли к раствору 1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этанола (4,55 г, 0,021 моль) и 3-гидрокси-нитропиридина (3,35 г, 0,023 моль) в ТГФ (200 мл). Полученный ярко-оранжевый раствор перемешивали в атмосфере азота при температуре окружающей среды в течение 4 часов, момент, к которому все исходные материалы были израсходованы. Растворитель удаляли и неочищенный материал загружали сухим на силикагель и элюировали смесью этилацетата и гексанов в соотношении 20:80 с получением 3-(2,6-дихлор-3-фтор-бензилокси)-2-нитро-пиридин (6,21 г, 0,021 моль, 98%) в виде розового твердого вещества. ¹Н ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 1.8-1.85 (d, 3Н), 6.0-6.15 (q, 1Н), 7.0-7.1 (t, 1Н), 7.2-7.21 (d, 1Н), 7.25-7.5 (m, 2Н), 8.0-8.05 (d, 1Н).

3. В перемешанной смеси АсОН (650 мл) и EtOH (500 мл) суспендировали 3-(2,6-дихлор-3-фтор-бензилокси)-2-нитро-пиридин (9,43 г, 0,028 моль) и железные опилки (15,7 г, 0,28 моль). Реакционную смесь нагревали медленно до температуры флегмы и оставляли перемешиваться в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем добавляли диэтиловый эфир (500 мл) и воду (500 мл). Раствор осторожно нейтрализовали путем добавления карбоната натрия. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным NaHCO₃ (2×100 мл), H₂O (2×100 мл) и солевым раствором (1×100 мл), затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали до сухости под вакуумом с получением 3-(2,6-дихлор-3-фтор-бензилокси)-пиридин-2-иламина (9,04 г, 0,027 моль, 99%) в виде светло-розового твердого вещества. ¹ Н ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 1.8-1.85 (d, 3Н), 4.9-5.2 (brs, 2Н), 6.7-6.84 (q, 1Н), 7.0-7.1 (m, 1Н), 7.2-7.3 (m, 1Н), 7.6-7.7 (m, 1Н).

4. Перемешанный раствор 3-(2,6-дихлор-3-фтор-бензилокси)-пиридин-2-иламина (9,07 г, 0,03 моль) в ацетонитриле охлаждали до 0°С, используя ледяную баню. К этому раствору порциями добавляли N-бромсукцинимид (NBS) (5,33 г, 0,03 моль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 минут. Реакционную смесь концентрировали до сухости под вакуумом. Полученное темное масло растворяли в EtOAc (500 мл) и очищали посредством хроматографии на силикагеле. Растворители затем удаляли в вакууме с получением 5-бром-3-(2,6-дихлор-3-фтор-бензилокси)-пиридин-2-иламина (5,8 г, 0,015 моль, 51%) в виде белого кристаллического твердого вещества. 1Н ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 1.85-1.95 (d, 3Н), 4.7-5.0 (brs, 2Н), 5.9-6.01 (q, 1Н), 6.8-6.95 (d, 1Н), 7.01-7.2 (t, 1Н), 7.4-7.45 (m, 1Н), 7.8-7.85 (d, 1Н).

5-бром-3-[1(R)-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси1-пиридин-2-иламин

Энантиомерно чистый R изомер получали, как описано выше, для рацемата, но используя энантиомерно чистые исходные материалы, описанные выше. ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 1.74 (d, 3Н), 6.40 (m, 1Н), 6.52 (br s, 2Н), 7.30 (m, 1Н), 7.48 (m, 1Н), 7.56 (s, 1Н); МС m/z 382 М+1).

4-метансульфонилокси-пиперидин-1-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир (2)

К перемешанному раствору трут-бутилового эфира 4-гидрокси-пиперидин-1-карбоновой кислоты (7,94 г, 39,45 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл), охлажденному до 0°С, медленно добавляли NEt₃ (5,54 мл, 39,45 ммоль), а затем метансульфонилхлорид (3,06 мл, 39,45 ммоль) и DMAP (4-диметиламинопиридин, 48 мг, 0,39 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К смеси добавляли воду (30 мл). Экстракция CH₂Cl₂ (3×30 мл), за которой следовало высушивание (Na₂SO₄ ) и удаление растворителя в вакууме, давали 4-метансульфонилокси-пиперидин-1-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир в виде белого твердого вещества (11,00 г, выход более 99%). ¹Н ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) 4.89 (m, 1Н), 3.69 (m, 2Н), 3.31 (m, 2Н), 3.04 (s, 3Н), 1.95 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).

Трет-бутил-4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]пиперидин-1-карбоксилат

Трет-бутил-4-(4-иод-1Н-пиразол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (3)

NaH (1,2 экв., 0,68 ммоль) добавляли порциями к перемешанному раствору 4-иодопиразола (0,57 ммоль) в ДМФ (диметилформамид, 2 л) при 4°С и затем добавляли трет-бутиловый эфир 4-метансульфонилокси-пиперидин-1-карбоновой кислоты, соединение 2 (1,1 экв., 0,63 ммоль). Полученную смесь нагревали до 100°С в течение 12 часов. Реакцию гасили с помощью Н₂О и экстрагировали EtOAc несколько раз. Объединенные органические слои сушили, фильтровали и концентрировали с получением оранжевого масла. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 5% EtOAc в пентане) с получением соединения 3 в виде белого твердого вещества (140 г, 66%).

Трет-бутил-4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]пиперидин-1-карбоксилат (4)

Бис(пинаколато)дибор (1,4 экв., 134 г, 0,52 моль) и ацетат калия (4 экв., 145 г, 1,48 моль) добавляли последовательно к раствору соединения 3 (140 г, 0,37 моль) в 1,5 л ДМСО (диметилсульфоксид). Смесь продували азотом несколько раз и затем добавляли дихлорбис(трифенилфосфино)палладий (II) (0,05 экв., 12,9 г, 0,018 моль). Полученную смесь нагревали при 80°С в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через подложку из целита и промывали EtOAc. Фильтрат промывали насыщенным NaCl (500 мл×2), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 5% EtOAc в гексанах) с получением соединения 4 в виде белого твердого вещества (55 г, 40%).

3-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1Н-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламин (1)

К перемешанному раствору 3-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиридин-2-иламина (15,22 г, 35,64 ммоль) и трет-бутилового эфира 4-(4-бром-пиразол-1-ил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (14,12 г, 42,77 ммоль) в ДМЭ (1,2-диметоксиэтан, 143 мл) добавляли раствор Na₂CO₃ (11,33 г, 10692 ммоль) в воде (36 мл). Раствор дегазировали и очищали с помощью азота три раза. К данному раствору добавляли Pd(PPh ₃)₂Cl₂ (1,25 г, 1,782 ммоль). Реакционный раствор дегазировали и очищали с помощью азота снова три раза. Реакционный раствор перемешивали при 87°С масляной бане в течение примерно 16 часов (либо до тех пор, пока не будет израсходован боранпиканоловый эфир), охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли EtOAc (600 мл). Реакционную смесь фильтровали через подложку из целлита и промывали EtOAc. Раствор EtOAc промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем, элюируя с помощью системы EtOAc/гексан (Biotage 90+ Column: равновесие 600 мл 100% гексанов, сегмент 1: 2250 мл 50% EtOAc/гексаны линейный, сегмент 2: 4500 мл 75% EtOAc/гексаны линейный, сегмент 3: 4500 мл 100% EtOAc), с получением трет-бутилового эфира 4-(4-{6-амино-5-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-пиридин-3-ил}-пиразол-1-ил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (11,8 г, 60% выход, чистота приблизительно 95%) с Rf 0,15 (50% EtOAc/гексаны). МС m/е 550 (М+1)⁺.

К раствору трет-бутилового эфира 4-(4-{6-амино-5-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-пиридин-3-ил}-пиразол-1-ил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (11,8 г, 21,45 ммоль) в CH₂Cl₂ (59 мл, 0,2 М) добавляли смесь 4 н. HCl/диоксан (21 мл). Раствор перемешивали в течение ночи с образованием твердого вещества. Данное твердое вещество тщательно измельчали с помощью стеклянного пестика и обрабатывали ультразвуком для высвобождения исходного материала, заключенного в данном твердом веществе. Добавляли дополнительное количество смеси 4 н. HCl/диоксан (21 мл) и перемешивали еще в течение 2 часов при комнатной температуре, в котором LCMS (жидкостная хроматография-масс-спектрометрия) показала отсутствие исходного материала. Суспензию фильтровали в бюхнеровской воронке, выстеленной фильтровальной бумагой. Маточный раствор сохраняли, поскольку он содержал менее 5% продукта. Твердое вещество переносили в лабораторный стакан на 500 мл и ВЭЖХ воду добавляли до тех пор, пока твердое вещество не растворилось полностью. pH доводили до 10 с помощью добавления твердого Na₂CO₃ . Водный раствор экстрагировали CH₂Cl₂ (5×200 мл) либо до тех пор, пока LCMS не показала отсутствие продукта в водном слое. CH₂Cl₂ раствор сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Неочищенный продукт повторно растворяли в CH₂Cl₂ (10 мл) и МеОН (1 мл), очищали на силикагелевой колонке, элюируя с помощью системы CH₂Cl₂/MeOH/NEt₃ . (Biotage 40+ Column: равновесие 600 мл CH₂Cl ₂ 100%, дающая побочный продукт, сегмент 1: 1200 мл 10% MeOH/CH₂Cl₂ линейный, сегмент 2: 2400 мл 10% MeOH/CH₂Cl₂ ступенчатый, сегмент 3: 2400 мл 9% МеОН/1% NEt₃/CH₂Cl₂ ). Желаемые фракции собирали с получением 3-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламина (7,19 г, 75% объединенный выход, белое твердое вещество). МС m/е 450 (М+1)⁺. ¹Н ЯМР (ДМСО-d₆ , 400 МГц) 7.92 (s, 1Н), 7.76 (s, 1Н), 7.58 (m, 1Н), 7.53 (s, 1Н), 7.45 (m, 1Н), 6.90 (s, 1Н), 6.10 (m, 1Н), 5.55 (bs, 2Н), 4.14 (m, 1Н), 3.05 (m, 2Н), 2.58 (m, 2Н), 1.94 (m, 2Н), 1.80 (d, 3Н), 1.76 (m, 2Н).

Твердый продукт, 3-[(R)-1-(2,6-дихлор-3-фтор-фенил)-этокси]-5-(1-пиперидин-4-ил-1H-пиразол-4-ил)-пиридин-2-иламин, растворяли в дихлорметане и растворитель медленно выпаривали для получения мелкокристаллического твердого вещества. После сушки при высоком вакууме единственность кристаллической полиморфной формы 1 данного образца подтверждали с помощью точки плавления 194°С.

Для перекристаллизации твердого вещества были использованы следующие растворители: изопропанол, изобутанол, этанол, этилацетат, толуол, тетрагидрофуран и диоксан. Все семь растворителей давали ту же самую полиморфную форму 1 кристаллического твердого вещества, что и исходное кристаллическое твердое вещество из дихлорметана.

Полиморф (Соединение 1) по настоящему изобретению был протестирован на пациентах-людях с немелкоклеточным раком легкого (NSCLC).

Пример результатов исследования (22 пациентов, которые участвовали в этом исследовании, имея NSCLC и событие слияния генов EML4-ALK) приведен ниже. В отношении одного из 22 пациентов исследование прерывали по причинам, не связанным с лечением; в отношении пяти пациентов исследование прерывали в связи с прогрессированием заболевания; а в отношении шестнадцати пациентов либо со стабильным заболеванием, либо с существенными частичными реакциями на терапию соединением по настоящему изобретению исследование продолжали. Пример результатов представлен в таблице (фиг.3). Как показано ниже, опухолевые реакции всех пациентов, за исключением одного, привели к 20-70%-ному уменьшению размера опухоли.

Дополнительные данные, подтверждающие заявленное изобретение, представлены в таблице 2. Из приведенной таблицы следует, что несколько пациентов, для которых другие противораковые терапии были неудачными, имели хорошую реакцию на соединение 1, изображенное выше.

В таблицах 1 и 2, СЗ означает стабильное заболевание, ПЗ означает прогрессирование заболевания и ЧР означает частичную реакцию. Из примера результатов, представленных в таблице 2, следует, что большая часть пациентов, у которых лучшая реакция на предшествующие акты лечения другими агентами для лечения рака была СЗ или ПЗ, после обработки соединением 1 имели лучшую реакцию ЧР. Несколько других пациентов (с лучшей реакцией на предшествующие акты лечения другими агентами для лечения рака СЗ или ПЗ) после обработки соединением 1 имели лучшую реакцию СЗ. И только меньшая часть пациентов даже после обработки соединением 1 все еще имела реакцию ПЗ.

Приведенные выше данные являются клиническим доказательством того, что соединения по настоящему изобретению полезны и эффективны для лечения аномального клеточного роста у человека.