антигипоксическое средство для лечения отдаленных последствий отравлений метгемоглобинообразователями

Формула изобретения

Применение настойки семян лимонника в качестве средства для лечения отдаленных последствий отравлений метгемоглобинообразователями.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к новым антигипоксическим средствам, предназначенным для лечения отравлений метгемоглобинобразователями (МГО).

Известно, что средства для коррекции гипоксии достаточно широко применяются для профилактики и лечения интоксикаций различного генеза [1, 4]. Однако отсутствуют данные о возможности применения антигипоксантов в условиях интоксикации МГО, в первую очередь, для профилактики и лечения формирующихся отдаленных последствий (синдромокомплексов) в условиях субхронического отравления. Известно, что МГО вызывают разнообразное количество патологических синдромов. Ведущим является образование метгемоглобина (MetHb), которое происходит как при остром токсическом воздействии, так и при хронической экспозиции вследствие контакта с образующими его веществами. Основной путь образования MetHb - окисление Fe⁺⁺ гемоглобина крови в Fe⁺⁺⁺, вследствие чего гемоглобин становится неспособным выполнять транспортную функцию переноса кислорода тканями [5, 6]. Это приводит к развитию гипоксии тканей, выраженность и глубина которой зависит от времени экспозиции МГО, и, как следствие, «оксидативному» стрессу, характеризующемуся активацией свободнорадикального окисления и снижением активности антиоксидантной системы клетки [7]. Таким образом, центральным звеном, формирующим последствия острых и хронических интоксикаций МГО, является гипоксия тканей и образование активных форм кислорода.

Целью настоящего изобретения является применение лимонника семян настойки в качестве антигипоксического средства, что позволяет использовать его в комплексной терапии интоксикации МГО и расширяет ассортимент лекарственных средств указанных назначений.

Заявляемый препарат выпускается в промышленных масштабах и широко используется в качестве общетонизирующего средства растительного происхождения, оказывающего стимулирующее действие на ЦНС, сердечно-сосудистую и дыхательную системы, умственную и физическую работоспособность [8].

Непременным условием для реализации лечебных свойств препаратов, предназначенных для купирования синдромокомплекса, развивающегося вследствие отравлений МГО, в первую очередь, является наличие у них собственно антигипоксических свойств. Для скрининга антигипоксического действия были выбраны модели, воспроизводящие патологические процессы при основных типах гипоксии [2, 3]: острой гипоксической гипоксии, острой тканевой гипоксии (нитропруссид натрия), острой гемической гипоксии (нитрит натрия) [2, 3].

Оценку влияния препарата на формирование отдаленных последствий (синдромокомплексов) проводили в условиях субхронической интоксикации МГО.

Применение лимонника семян настойки в качестве антигипоксического средства для лечения отдаленных последствий отравлений МГО предложено впервые. Заявляемое решение широко применимо, так как лимонника семян настойка выпускается в промышленных масштабах.

Примеры, подтверждающие антигипоксическое действие лимонника семян настойки при основных типах гипоксии, приведены ниже (примеры 1-3).

Пример 1. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой гипоксической гипоксии

Для исключения неблагоприятного действия спирта (растворитель, содержащийся в настойке) ее деалкоголизировали путем продувания сухого воздуха до удаления запаха спирта. Сухой масляный остаток растворяли в воде очищенной и получали настой, доведенный водой очищенной до первоначального объема.

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Изучаемый препарат вводили ежедневно в течение 14 дней атравматичным зондом внутрижелудочно в эффективной дозе 0.10 мл/кг. Контрольным животным вводили воду. На 14-й день опыта через 60 мин после последнего введения осуществляли «подъем» животных в барокамере на предельную «высоту» 11000 м над уровнем моря. Регистрировали продолжительность жизни и выживаемость животных. При профилактическом введении лимонника семян настоя наблюдалось как достоверное увеличение выживаемости животных, так и увеличение продолжительности жизни (таблица 1).

Пример 2. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой тканевой гипоксии

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Условия введения препарата соответствовали описанным в примере 1. На 14-й день опыта через 30 мин после последнего введения препарата животным внутрибрюшинно вводили раствор нитропруссида натрия в дозе 20 мг/кг. Фиксировали продолжительность жизни животных. Лимонника семян настой статистически достоверно повышал продолжительность жизни животных на 95% (таблица 2).

Пример 3. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой гемической гипоксии

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Условия введения препарата соответствовали описанным в примере 1. На 14-й день опыта через 30 мин после последнего введения изучаемого препарата животным внутрибрюшинно вводили раствор нитрита натрия в дозе 300 мг/кг. Фиксировали продолжительность жизни животных. Лимонника семян настой статистически достоверно повышал продолжительность жизни животных на 84% (таблица 3).

Таким образом, лимонника семян настой оказал антигипоксическое действие на всех типовых моделях гипоксии.

Примеры, подтверждающие позитивное влияние лимонника семян настойки на специфические симптомы отравления и показатели, характеризующие функциональное состояние печени, почек и окислительно-восстановительные процессы при субхроническом отравлении анилином, нитритом натрия и нитроглицерином у мышей самцов и субхроническом отравлении анилином у крыс самцов, приведены ниже (примеры 4-5).

Пример 4. Эффективность применения лимонника семян настойки при субхронической интоксикации анилином, нитритом натрия и нитроглицерином в дозах, равных 1/10 ЛД₅₀

Каждая экспериментальная группа содержала по 12 мышей-самцов. Анилин сульфат вводили в дозе 100 мг/кг, нитрит натрия - 15 мг/кг и нитроглицерин - 6 мг/кг (дозы, не вызывающие летальных эффектов при остром введении) внутрижелудочно ежедневно в течение 10 дней. Изучаемый препарат вводили внутрижелудочно ежедневно в течение 7 дней после последнего введения МГО. Группа № 1- интактные животные; № 2 - животные, получавшие анилин без лечения, № 3 - животные, получавшие анилин и настой семян лимонника в дозе 0,10 мл/кг, № 4 - животные, получавшие нитрит натрия без лечения, № 5 - животные, получавшие нитрит натрия и настой семян лимонника, № 6 - животные, получавшие нитроглицерин без лечения, № 7 - животные, получавшие нитроглицерин и настой семян лимонника. Полученные данные представлены в таблице 4. Данные приведены только в отношении показателей, измененных вследствие действия токсикантов.

Из представленных в таблице 4 данных следует, что субхроническое введение различных МГО привело к развитию у животных отчетливых признаков патологии со стороны системы крови, основного обмена и окислительно-восстановительных процессов: увеличивалось содержание метгемоглобина крови, наблюдалась лейкопения, снижение количества лимфоцитов и повышение содержания сегментоядерных нейтрофилов; отмечалась гипогликемия, увеличение активности печеночных трансаминаз, в особенности аланинаминотрансаминазы, и содержания сульфгидрильных групп, МДА и гидроперекисей липидов, наряду с падением активности каталазы.

В картине крови наблюдалась выраженная полихромазия, патологические включения в эритроцитах (тельца Гейнца), анизоцитоз (2+; 50%). Данные изменения свидетельствуют о развитии гематотоксических реакций в виде метгемоглобинемии, нарушении углеводного обмена, развитии поражения печени с выходом в кровь трансаминаз, компенсаторном увеличении сульфгидрильной антиоксидантной защиты организма наряду со снижением активности каталазы и усилением процессов ПОЛ.

Введение изучаемого препарата положительно и достоверно влияло на показатели, характеризующие развитие патологических процессов при воздействии различными МГО.

Пример, подтверждающий позитивное влияние лимонника семян настоя на течение субхронической интоксикации анилином, как модельным МГО, у крыс самцов, приведен ниже (пример 5).

Пример 5. Эффективность применяемого препарата оценивали по его влиянию на систему крови, функциональное состояние печени и почек, показатели, характеризующие состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Исходя из полученных в предварительном остром эксперименте данных анилин сульфат вводили в дозе 150 мг/кг (доза, не вызывающая летальных эффектов при остром введении и равная 1/10 ЛД₅₀) внутрижелудочно ежедневно в течение 10 дней. Изучаемый препарат вводили внутрижелудочно ежедневно в течение 7 дней после последнего введения анилина. Каждая экспериментальная группа содержала по 10 крыс-самцов. Группа № 1 - интактные животные; № 2 - животные, получавшие анилин без лечения, № 3 - животные, получавшие анилин и настой семян лимонника в дозе 0,10 мл/кг.

Полученные данные представлены в таблице 5. Данные приведены только в отношении показателей, измененных вследствие действия токсикантов. Введение анилина сульфата привело к развитию у животных отчетливых признаков патологии, аналогичных таковым у мышей (пример 4).

Введение семян лимонника настойки положительно и достоверно влияло на изученные показатели и способствовало снижению патобиохимических процессов, лежащих в основе развития отдаленных последствий при субхронической интоксикации анилином, оказывая антиоксидантное, антигипоксическое, гепатопротективное и нефропротективное действие.

Таблица 1
Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой гипобарической гипоксии мышами-самцами
Экспериментальная группа	Доза, мл/кг	Время жизни на предельной высоте (М±m, мин)	Прирост времени жизни по отношению к контролю, %	Выживаемость, %
Контроль		3.4±0.7		0
Лимонник семена, настой	0.10 мл/кг	16.9±1.2*	+397*	80*
* Р 0.05 по отношению к контролю

Таблица 2
Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой тканевой гипоксии мышами-самцами
Препарат	Доза, мл/кг	Длительность жизни, мин (М±m)	Прирост времени жизни по отношению к контролю, %
Контроль		6.3±0.3
Лимонник семена, настой	0.10 мл/кг	12.3±0.6*	+95
* Р 0.05 по отношению к контролю

Таблица 3
Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой гемической гипоксии мышами-самцами
Препарат	Доза, мл/кг	Длительность жизни, мин (М±m)	Прирост времени жизни по отношению к контролю, %
Контроль		10.1±0.3
Лимонник семена, настой	0.10 мл/кг	18.6±0.8*	+84
* Р 0.05 по отношению к контролю

Таблица 4
Влияние лимонника семян настоя на некоторые гематологические показатели и показатели основного обмена у мышей в условиях субхронической интоксикации метгемоглобинобразователями
Изучаемые показатели (М±m)	Экспериментальные группы
№ 1	№ 2	№ 3	№ 4	№ 5	№ 6	№ 7
Hb, г/л	144±3	116±4*	135±5	112±6*	130±6	108±10*	122±14
MetHb, %	0.20±0.05	5.30±0.90*	0.50±0.11	8.54±1.25*	0.82±0.16	7.49±1.13*	0.76±0.12
Лейкоциты, 109/л	8.5±0.1	3.1±0.3*	5.0±0.1*	4.2±0.3*	5.5±0.3*	3.9±0.5*	6.0±0.8*
Сегментоядерные нейтрофилы, %	35.0±1.7	50.0±2.6*	39.0±2.2	54.0±3.2*	36.8±2.6	47.0±2.9*	41.2±3.4
Лимфоциты, %	63.0±1.7	32.3±3.4*	52.0±8.6	37.8±2.4*	56.0±5.8	35.3±9.1*	59.5±7.2
Глюкоза, мМ/л	9.25±0.53	6.51±1.10*	8.75±0.90	5.94±1.32*	8.90±1.04	5.76±0.84*	9.05±0.62
Холестерин, мМ/л	3.27±0.12	6.60±0.20*	3.62±0.18	4.89±0.31*	3.98±0.24	4.15±0.17*	3.66±0.14
Мочевина, мМ/л	4.5±0.2	7.8±0.6*	4.8±0.4	5.6±0.3*	5.0±0.2	6.0±0.5*	4.9±0.5
ЩФ, нМ/с·л	390±37	952±64*	359±62	673±37*	435±28	518±28*	420±16
АсАТ,нМ/с·л	538±34	914±85*	670±56	696±24*	550±25	723±38*	594±43
АлАТ, нМ/с·л	755±48	1554±101*	872±89	1233±77*	936±65	1018±53*	850±58
Примечание: * - Р 0.05 по отношению к группе интактных животных, - Р 0.05 по отношению к группе животных, не получавших лечения

Таблица 5
Влияние лимонника семян настоя на некоторые гематологические и биохимические показатели крови крыс в условиях субхронической интоксикации анилином
Изучаемые показатели (М±m)	Экспериментальные группы
№ 1	№ 2	№ 3
Hb, г/л	162±4	115±4*	146±3*
MetHb, % от Hb	1.16±0.33	4.11±0.42*	2.87±0.37*
Лейкоциты, 109/л	8.1±0.3	3.5±0.1*	8.2±0.2
Сегментоядерные нейтрофилы, %	15±2	39±5*	12±3
Лимфоциты, %	82±4	65±3*	79±3
Глюкоза, мМ/л	5.25±0.53	2.51±1.10*	4.14±1.21
Холестерин, мМ/л	0.86±0.12	1.69±0.23*	1.23±0.26
АсАТ, нМ/с·л	256±51	426±38*	336±34
АлAT, нМ/с·л	376±44	785±52*	255±51*
Мочевина, мМ/л	4.5±0.2	7.8±0.6*	4.8±0.4
ЩФ, нМ/с·л	390±37	952±64*	359±62
МДА, мкМ/л	2.45±0.13	15.90±0.77*	3.90±0.34*
Гидроперекиси липидов, ед. опт. плотности при 480 нм	0.11±0.02	0.38±0.02*	0.23±0.04*
Каталаза, мкМ Н2О2/мг·мин	9.38±0.58	3.34±0.50*	7.98±0.42*
SH-группы, мкМ/л	190±69	344±50*	208±36
Примечание: * - Р 0.05 по отношению к группе интактных животных, - Р 0.05 по отношению к группе животных, не получавших лечение

Список использованных источников

1. Копцов С.В., Вахрушев А.Е., Павлов Ю.В. Современные аспекты применения антигипоксантов в медицине критических состояний // Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости. - 2002. - № 2. - С.54-56.

2. Лукьянова Л.Д., Гацура В.В., Пастушенков Л.В. и др. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических веществ. - М.: МЗ СССР, Одобрены Фармакологическим комитетом 11.04.1990 (протокол № 7).

3. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Основные методы оценки протекторного действия антигипоксантов в эксперименте // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. - М. - 1989. - С.98-109.

4. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Растения-антигипоксанты (фитотерапия). - СПб. - 1991. - С.96.

5. Hall А.Н., Kulig K.W., Rumack В.Н. Drug- and chemical-induced methaemoglobinaemia: clinical features and management. - Med. Toxicol. - 1986. - № 1. - pp.253-260.

6. Harris J.C., Rumack B.H., Peterson R.G. Methaemoglobinaemia resulting from absorption of nitrates. - JAMA. - 1979. - pp.242-2869.

7. Harvey J.W., Keitt A.S. Studies of the efficacy and potential hazards of methylene blue therapy in aniline-induced methemoglobinemia. - Br. J. Haematology. - 1983. - № 54. - pp.29-41.

8. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 14-е. - М.: Новая волна. - 2000. - т.1. - стр.134.