2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-дион, обладающий противомикробной активностью

Формула изобретения

2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-дион формулы 1:



обладающий противомикробной активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области органической химии, к производным 1,4-дикетонов, а именно к неизвестному ранее новому биологически активному веществу - 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диону формулы 1:

которое может найти применение в медицине в качестве лекарственного противомикробного препарата.

Ближайшими структурными аналогами заявляемого соединения являются аминовинилдикетоны 2, которые имеют с заявляемыми соединениями 1 одинаковый аминовинилдикетоновый фрагмент [Е.И.Титова, Л.Д.Гаврилова, Р.Л.Болынедворская, Л.И.Верещагин. Журнал органической химии, 1969, том 5, вып.12, с.2113-2119].

Структурными аналогами соединений 1 так же можно считать замещенные 2-амино-4-арил-4-оксо-2-бутеновые кислоты и их эфиры 3, проявляющие противомикробную и анальгетическую активность [Е.Н.Козьминых, А.О.Беляев, В.О.Козьминых, P.P.Махмудов, Т.Ф.Одегова. Химико-фармацевтический журнал, 2002, т.36, № 11, с.28-30. Н.В.Колотова, В.О.Козьминых, Э.В.Долбилкина, Е.Н.Козьминых, В.Э.Колла, С.А.Шеленкова. Химико-фармацевтический журнал, 1998, т.32, № 9, с.32-35].

Все приведенные аналоги 2, 3 содержат общий с заявляемыми соединениями 1 аминовинилкетоновый фрагмент. Отличия состоят в том, что в качестве заместителей R и R' в заявляемых соединениях находится n-толлильный заместитель, R''=Н, в качестве R''' - 2,4-дихлораминофенильный заместитель.

В качестве эталона сравнения нами взяты противомикробные препараты - цефепим [Яковлев С.В., Рус. мед. журнал, 1998, т.6, № 22, с.1449-1457] и хлоргексидина биглюконат [Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб. терап., 2001, № 5, с.105-155], широко применяемые в лечебной практике антибиотик и дезинфектант.

Цель данного изобретения - синтез неописанного ранее 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диона, обладающего противомикробным действием.

Поставленная цель достигается получением 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диона и изучением его противомикробного действия.

Пример получения заявляемого соединения 1:

Смесь эквимолярных количеств дитолуоилацетилена и 2,4-дихлоранилина кипятили в бензоле в течение 5 мин. Растворитель упаривали. Образовавшийся осадок перекристаллизовывали из четыреххлористого углерода. Выход 75%. Т.пл. 147-148°С. ИК спектр, см^-1: 1668 (С(1)=0), 1605 (С(4)=0, С=С). Спектр ЯМР ¹Н, м.д.: 2.36 (с, 6Н, 2Ме); 6.13 (с, 1Н, СН); 6.97 (м, 7Н, Ar); 7.76 (д, 4Н, Н(2), Н(6), ³J=8.4); 12.35 (с, 1Н, NH). Найдено, %: С 66.72; Н 3.80; Cl 17.85; N 3.50. C₂₂H₁₅Cl ₂NO₂. Вычислено, %: С 66.68; Н 3.82; Cl 17.89; N 3.53.

Полученное соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в спиртах, хлороформе, толуоле, диметилсульфоксиде и диметилформамиде, нерастворимое в алканах и воде.

Заявленное соединение было исследовано на наличие у него противомикробной активности.

Определение бактериостатической активности проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ - М., 2000., с.264-273]. Для всех исследуемых соединений были определены МПК в отношении фармакопейных штаммов: S. aureus АТСС 6538-Р, E. coli АТСС 25922, С. albicans АТСС 885-653, P. aerugenosa АТСС 9027, В. cereus АТСС 8035, В. subtilis АТСС 6633, S. epidermidis АТСС 14990. Посевы производили в мясопептонный бульон, рН 7,0 с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар). Для определения противомикробной активности использовалась 18-20-часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микробов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 млн. м. т./мл. готовили рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 млн. м. т./мл. Данную взвесь микробов вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемого препарата. Таким образом, микробная нагрузка при определении ПМА составила 250000 м. т./мл. Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилсульфоксида, 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл мясопептонного бульона (1:500). Далее готовили ряд серийных разведений соединения с двукратно уменьшающей концентрацией.

Учет результатов производили через 18-20 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении данного штамма. Бактериостатический эффект исследуемых соединений сравнивали с действием цефепима [Яковлев СВ., Рус. мед. журнал, 1998, т.6, № 22, с.1449-1457], хлоргексидина биглюконата [Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб, терап., 2001, № 5, с.105-155].

Острую токсичность (ЛД ₅₀) заявленного соединения изучали на белых лабораторных мышах обоего пола массой 19-20 г. Исследуемое соединение вводили однократно в желудок в виде крахмальной слизи в объеме 1480, 2960, 4440, 5920, 7400 мг/кг, соответственно, наблюдение за животными проводили в течение 10 суток. Статистическую обработку результатов проводили по Прозоровскому В.В. сравнением средней смертельной дозы (ЛД₅₀) при Р=0,05 [Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. и токсикол., 1978, № 4, с.497-502]. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, соединение 1 по противомикробной активности сопоставимо с активностью хлоргексидина биглюконата по отношению к S.aureus и E.coli. Соединение 1 по отношению к С.albicans, спорообразующим палочкам, S.epidermidis уступает препаратам сравнения. По отношению к P.aerugenosa активностью не обладает. Соединение 1 по классификации Измерова Н.Ф. [Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении, М., Медицина, 1977, с.197] относится к классу практически нетоксичных препаратов.

Таким образом, 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-дион 1 проявляет выраженную противомикробную активность и является практически нетоксичным. Следовательно, заявляемое соединение 1 может найти применение в медицине в качестве противомикробного лекарственного средства.

Таблица 1
Противомикробная активность (мкг/мл) и острая токсичность соединения 1
Соединение	S.aureus	Е.coli	Р.aerug.	С.albic.	S.epid.	В.cereus	В.subt.	LD50, мг/кг
1	2,0-1,0	2,0-1,0	-	31-62	125	31	250	2700-3800
Цефепим	0,125-16	0,015-2,0	0,03-16	-	0,5-62	-	-	-
Хлоргексидина бигл-т	1-2	1-5	10-500	7-15	-	1-2	1-3	-

Источники информации

1. Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении, М., Медицина, 1977, с.197.

2. Козьминых Е.Н., Беляев А.О., Козьминых В.О., Махмудов P.P., Одегова Т.Ф. Химико-фармацевтический журнал, 2002, т.36, № 11, с.28-30.

3. Колотова Н.В., Козьминых В.О., Долбилкина Э.В., Козьминых Е.Н., Колла В.Э., Шеленкова С.А. Химико-фармацевтический журнал, 1998, т.32, № 9, с.32-35.

4. Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб, терап., 2001, № 5, с.105-155.

5. Прозоровский В.В., Прозоровская М. П., Демченко В.М. Фармакол. и токсикол., 1978, № 4, с.497-502.

6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ - М., 2000, с.264-273.

7. Титова Е.И., Гаврилова Л.Д., Болыдедворская Р.Л., Верещагин Л.И. Журнал органической химии, 1969, том 5, вып.12, с.2113-2119.

8. Яковлев С.В. Русский медицинский журнал - 1998. - т.6, № 22. - с.1449-1457.