способ получения лака карминовой кислоты

Формула изобретения

1. Способ получения алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты, включающий стадии

(i) обработки водного раствора,

включающего

(a) от 0,5 до 15% (г/л) карминовой кислоты и

(b) от 0,75 до 15% (г/л) белков не из насекомых Dactylopius coccus costa, где по существу все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон,

где водный раствор, по существу, свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой (ММ) выше 6000 дальтон; солями алюминия и кальция,

(ii) регулирование условий с получением условий, подходящих для получения алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты, который содержит

(a) от 40 до 80% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и

(b) от 10 до 30% белков не из насекомых Dactylopius coccus costa (по массе сухих веществ), где по существу все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон и где лак, по существу, свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой (ММ) выше 6000 дальтон, причем в водном растворе стадии (i) соотношение карминовая кислота/белки не из насекомых Dactylopius coccus costa (г/л) составляет менее 1.

2. Способ по п.1, где водный раствор получают смешиванием подходящей белковой композиции с подходящей композицией чистой карминовой кислоты.

3. Способ по п.2, где белковая композиция является гидролизатом на основе молока, в частности, гидролизатом сыворотки.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где по существу все белки имеют молекулярную массу (ММ) ниже 6000 дальтон, более предпочтительно ниже 4000 дальтон и наиболее предпочтительно ниже 3000 дальтон.

5. Способ п.1, где водный раствор включает от 2 до 7% карминовой кислоты и от 3 до 8% белков, более предпочтительно водный раствор включает от 3 до 5% карминовой кислоты и от 4 до 6% белков; и где полученный на стадии (ii) лак карминовой кислоты содержит от 55 до 75% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и от 15 до 25% белков (по массе сухих веществ), более предпочтительно, лак содержит от 62 до 72% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и от 18 до 22% белков (по массе сухих веществ).

6. Способ п.1, где в водном растворе стадии (i) по п.1 соотношение карминовая кислота/ белки не из насекомых Dactylopius coccus costa (г/л) составляет от 0,5 до 0,8.

7. Способ по п.1, где в водном растворе стадии (i) сначала добавляют соль алюминия и затем после подходящего периода времени к водному раствору добавляют соль кальция; причем подходящий период времени составляет от 2 мин до 3 дней.

8. Способ п.1, где при обработке водного раствора карминовая кислота/ белок солями алюминия и кальция уровень рН доводят до значения от 2 до 8 для получения лака карминовой кислоты, предпочтительно уровень рН доводят до значения от 3 до 7 и более предпочтительно уровень рН доводят до значения от 4 до 6.

9. Лак карминовой кислоты, полученный способом по любому из пп.1-8, где лак содержит от 40 до 80% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и от 10 до 30% белков (по массе сухих веществ), где лак по существу свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa и по существу все белки в лаке имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон.

10. Применение лака карминовой кислоты по п.9 для получения окрашивающей композиции для добавления в пищевые продукты, сладости, кондитерские изделия, напитки, лекарственные средства или косметические средства.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способу получения лаков карминовой кислоты, новым композициям лака карминовой кислоты и их применению в пищевых продуктах, таких как йогурт, фруктовые добавки, напитки, другие разнородные пищевые продукты, которым необходим стабильный красный цвет, и в косметике.

Уровень техники

Карминовая кислота является красителем, который может быть экстрагирован из тел самок насекомых Dactylopius coccus costa (другое название Coccus cacti L.). Эти насекомые живут на Nopalea Coccinel-lifera, Opuntia fidus indica и других растениях семейства Cactaceae, произрастающих, например, в пустынных областях Мексики и Центральной и Южной Америки. В зависимости от уровня рН, краситель может иметь спектр цвета от оранжевого до ярко красного и, как правило, известен, как кошениль или кошенилевый краситель. Карминовый краситель широко используется в пищевых продуктах и напитках.

Карминовую кислоту получают экстракцией водой или спиртом из указанных сушеных насекомых. Во время экстракции водным растворителем карминовой кислоты из насекомого выделяется также белок насекомых и остается в экстракте пигмента. Количество белка насекомых составляет, как правило, менее 0,5%. Водный экстракт кошенили содержит, главным образом, карминовую кислоту плюс некоторое количество белка кошенили и в незначительном количестве другие экстрагируемые из насекомого вещества. Здесь и далее этот экстракт будет именоваться раствором экстракта кошенили.

Сообщалось, что кошенилевые белки насекомых могут вызывать некоторые аллергические проблемы. Для решения этих проблем в US 2002/0058016, EP 1318178 (SAN-EI Gen (Japan)) описан способ, где раствор экстракта кошенили подвергают ферментному протеолизу и затем удаляют белки насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой более 6000.

В предшествующем уровне техники описаны другие многочисленные не протеолитические стандартные способы получения чистой карминовой кислоты, по существу, свободной от белка насекомых Dactylopius coccus costa. В таких способах, как правило, используется подходящая адсорбционная обработка, ионообменная обработка, кислотная обработка и/или мембранная обработка. Коммерчески доступная карминовая кислота, по существу, свободная от белка насекомых Dactylopius coccus costa, включает водорастворимый порошок кошенили от Chr. Hansen, A/S (Denmark) или подобные коммерчески доступные продукты от компаний Pronex (Peru) или Sensient.

Указанный здесь лак карминовой кислоты представляет собой вид окрашивающей композиции, содержащей, по существу, карминовую кислоту, объединенную в той или иной степени с алюминием и кальцием. Для этого используют термин алюминиево-кальциевый лак карминовой кислоты. Лак получают взаимодействием карминовой кислоты с алюминием и/или кальцием в водной среде. Условия регулируют таким образом, чтобы благоприятствовать осаждению комплексной композиции лака алюминий/кальций - карминовая кислота. Эта комплексная композиция носит название кармин.

Экспериментальный пример 2 США 2002/0058016 (SAN-EI Gen (Japan)) описывает получение алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты на основе раствора чистой карминовой кислоты, полученной в примере 1. Пример 2 абзац (0085) объясняет, что «когда алюминиевый лак карминовой кислоты или кальциевый лак (кармин) преобразуется в полимер, прослеживается такая тенденция, при которой присутствие низкомолекулярного белка позволяет получить более чистый лак с повышенной интенсивностью красного цвета. Таким образом, кошенилевый краситель (кармин) с более высокой интенсивностью красного цвета и высокой рыночной стоимостью может быть получен введением белка со сравнительно низкой молекулярной массой, который не является аллергеном, в раствор, свободный от вышеупомянутых аллергенов». За исключением этого спорного утверждения не описаны никакие существенные детали в отношении возможности добавления белка с низкой молекулярной массой в лак карминовой кислоты.

Сущность изобретения

Целью настоящего изобретения является получение улучшенного лака карминовой кислоты, свободного от потенциально аллергенных белков кошенилевых насекомых.

Решение основано на некоторых существенных признаках, важных для получения оптимального состава лака, который получен авторами настоящего изобретения, исходя из чистой карминовой кислоты, по существу свободной от белка насекомых Dactylopius coccus costa. Эти признаки описаны ниже более подробно и включают детали, касающиеся процентного соотношения введенного белка не из кошенилевых насекомых и карминовой кислоты.

Согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к способу получения лака карминовой кислоты, включающему следующие стадии:

(i) обработка водного раствора,

включающего

(a) от 0,5 до 15% (г/л) карминовой кислоты и

(b) от 0,75 до 15% (г/л) белка не из насекомых Dactylopius coccus costa, где, по существу, все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон,

где водный раствор, по существу, свободен от белка насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой (ММ) выше 6000 дальтон;

соединением алюминия и кальция,

(ii) регулирование условий с получением условий, подходящих для получения алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты, где лак содержит

(a) от 40 до 80% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и

(b) от 10 до 30% белка не насекомых Dactylopius coccus costa (по массе сухих веществ), где, по существу, все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон и

где лак, по существу, свободен от белка насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой (ММ) выше 6000 дальтон.

Полученный промышленным способом раствор экстракта кошенили обычно содержит около 0,6% карминовой кислоты и относительно небольшие количества белка насекомых Dactylopius coccus costa, как правило, около от 0,1 до 0,25% белка. В уровне техники это рассматривалось, как достаточное количество белка для получения лака. В противоположность уровню техники авторы настоящего изобретения определили, что улучшенные лаки могут быть получены включением более высокого количества белка, как описано здесь. Преимуществом использования значительно более высокого количества белка, как описано выше, на стадии (i), является улучшение выхода карминовой кислоты. Выход относится к количеству карминовой кислоты в лаке на стадии (ii) по сравнению с исходным количеством в водном растворе на стадии (i). Смотрите более подробные рабочие примеры, описанные ниже, где выход достигает вплоть до 98,2%.

На дату подачи настоящей заявки авторами настоящего изобретения не было обнаружено в уровне техники (например, для промышленных лаков) источников, в которых описывается лак карминовой кислоты с таким количеством карминовой кислоты и белка не из насекомых, как описано здесь.

Согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к алюминиево-кальциевому лаку карминовой кислоты, полученному способом по первому аспекту изобретения, и варианты его воплощения, как описано здесь, где лак включает:

(a) от 40 до 80% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и

(b) от 10 до 30% белков не из насекомых Dactylopius coccus costa (по массе сухих веществ), где, по существу, все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имеют молекулярную массу (ММ) ниже 10000 дальтон и

где лак, по существу, свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa с молекулярной массой (ММ) выше 6000 дальтон.

Термин «полученный» следует понимать в общепринятом значении английского слова, т.е. как лак, который может быть получен упомянутым способом, но теоретически может быть получен и другим способом. Предпочтительно лак согласно второму аспекту изобретения получают способом согласно первому аспекту изобретения, и вариантам его воплощения, описанным здесь.

Согласно третьему аспекту настоящее изобретение относится к применению алюминиевого лака карминовой кислоты, кальциевого лака карминовой кислоты или алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты по второму аспекту изобретения, и вариантам воплощения изобретения, описанным здесь для получения окрашивающей композиции для добавления в пищевые продукты, сладости, кондитерские изделия, напитки, лекарственные средства или косметические средства.

В качестве альтернативы третий аспект может быть описан как способ окрашивания пищевых продуктов, сладостей, кондитерских изделий, напитков, лекарственных средств или косметических средств, включающий применение окрашивающей композиции, полученной из алюминиевого лака карминовой кислоты, кальциевого лака карминовой кислоты или алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты по второму аспекту изобретения и вариантам его воплощения, описанным здесь.

Подробное описание изобретения

Способ получения лака карминовой кислоты

Для получения водного раствора стадии (i) предпочтительно используют карминовую кислоту из композиции чистой карминовой кислоты. Термин «композиция чистой карминовой кислоты» здесь означает раствор экстракта кошенили с высокой степенью очистки. Предпочтительно он включает от 90 до 99% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и предпочтительно, по существу, свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa.

Термин «по существу, свободен от белков насекомых Dactylopius coccus costa» означает, что эти белки не определяются электрофорезом с додецилсульфата натрия в полиакриламидном геле (SDS-PAGE). Подходящий SDS-PAGE анализ приведен в примере 1.

Композиция чистой карминовой кислоты может быть получена любым стандартным способом, например, на основе способов, в которых, как правило, используется подходящая адсорбционная обработка, ионообменная обработка, кислотная обработка и/или мембранная обработка. Коммерчески доступные композиции чистой карминовой кислоты включают водорастворимый порошок кошенили от Chr. Hansen, A/S (Denmark) или подобные коммерчески доступные продукты от компаний Pronex (Peru) или Sensient. Композиция чистой карминовой кислоты может быть получена способом на основе протеолиза, как описано в US 2002/0058016.

В качестве белков не из насекомых Dactylopius coccus costa для получения водного раствора стадии (i) предпочтительно использовать белковую композицию, полученную из источника, который является приемлемым для пищевой промышленности и/или приемлем при производстве лекарственных средств. Например, предпочтительны белки не на основе композиций белков, полученных, например, из змей, известных своей токсичностью для человека. Кроме того, следует использовать источник, который не относится к источникам, вызывающим аллергию, или приемлем в отношении аллергических проблем.

Термин «белки не из насекомых Dactylopius coccus costa» использован для того, чтобы максимально широко определить пептиды, аминокислоты, белки или смеси из них для получения водного раствора на стадии (i).

Примерами подходящих белковых композиций являются композиции на основе растительных белков, таких как соевые и картофельные белки.

Предпочтительно белки являются молочными белками, такими как белки коровьего молока. Предпочтительно молочные белки получают из гидролизата на основе молока, такого как гидролизат сыворотки. Подходящий коммерчески доступный гидролизат сыворотки может быть получен от коммерческих молочных компаний. Это особенно полезно в том случае, когда краситель карминовой кислоты используют в пищевых продуктах на основе молока.

Предпочтительно, чтобы, по существу, все белки не из насекомых Dactylopius coccus costa имели молекулярную массу (ММ) ниже 6000 дальтон, более предпочтительно ниже 4000 дальтон и наиболее предпочтительно ниже 3000 дальтон.

Особенность способа, описанного здесь, состоит в том, что, когда белки стадии (i) имеют определенную молекулярную массу, лак, полученный на стадии (ii), также будет содержать композицию белков с соответствующей молекулярной массой. Например, если, по существу, все белки на стадии (i) имеют молекулярную массу (ММ) ниже 6000 дальтон, тогда, по существу, все белки лака на стадии (ii) будут иметь молекулярную массу (ММ) ниже 6000 дальтон.

Термин «по существу, все белки имеют молекулярную массу (ММ) ниже (количественное значение) дальтон» означает, что белки с большей молекулярной массой, чем указанная, не определяются SDS-PAGE анализом. Подходящий SDS-PAGE анализ приведен в примере 1.

Водный раствор предпочтительно может быть получен простым добавлением подходящей белковой композиции (например, в порошкообразной форме) к раствору чистой карминовой кислоты или простым добавлением, например, чистой карминовой кислоты (например, в порошкообразной форме) к раствору, включающему подходящую белковую композицию. Другими словами, простым смешиванием подходящей белковой композиции с подходящей композицией чистой карминовой кислоты.

В водном растворе стадии (i) по первому аспекту изобретения предпочтительно, чтобы соотношение карминовая кислота/ белки не из насекомых Dactylopius coccus costa (г/л) составляло менее 1. Авторы настоящего изобретения определили, что если соотношение составляет более 1, то раствор имеет тенденцию к гелеобразованию. См. таблицу рабочего примера, приведенного здесь ниже.

Предпочтительно соотношение карминовая кислота/ белки не из насекомых Dactylopius coccus costa (г/л) составляет от 0,4 до 0,9; более предпочтительно от 0,5 до 0,8 и наиболее предпочтительно от 0,5 до 0,7.

Перед добавлением белков к водному раствору рН раствора устанавливают предпочтительно от 5 до 7, более предпочтительно около 6.

Предпочтительно водной средой является вода, предпочтительно дистиллированная вода.

Предпочтительно водный раствор является, по существу, свободным от белков насекомых Dactylopius coccus costa.

Предпочтительно водный раствор включает от 1 до 10% карминовой кислоты и от 1,5 до 10% белков не из насекомых Dactylopius coccus costa. Более предпочтительно водный раствор включает от 2 до 7% карминовой кислоты и от 3 до 8% белков не из насекомых Dactylopius coccus costa и наиболее предпочтительно водный раствор включает от 3 до 5% карминовой кислоты и от 4 до 6% белков не насекомых Dactylopius coccus costa.

Водный раствор карминовая кислота/белок обрабатывают соединением алюминия и кальция в подходящих условиях с получением лака карминовой кислоты. Специалисту в данной области, как правило, известны подходящие условия для получения лака. Однако авторы настоящего изобретения проанализировали это в деталях и ниже приводят предпочтительные условия.

Обработка водного раствора соединением алюминия и кальция может быть проведена различными способами, например, она может быть проведена добавлением алюминия и кальция к раствору, включающему только белки с последующим добавлением к раствору карминовой кислоты.

Однако предпочтительно сначала получить водный раствор, включающий оба компонента, и карминовую кислоту и белки, а затем добавлять в этот раствор соединение алюминия и кальция. Не ограничиваясь этой теорией, авторы изобретения полагают, что для получения оптимального состава лака важно, чтобы алюминий и кальций добавляли к раствору, уже содержащему оба компонента, и карминовую кислоту и белки.

Действительно, это является отличием от предположения, указанного в рабочем примере 2 US 2002/0058016, где сначала получают раствор карминовой кислоты с алюминием и затем предлагается добавлять белки с низкой ММ к этому раствору.

Во-первых, предпочтительно сначала добавить алюминий и затем через подходящее время добавить в водный раствор кальций. Подходящее время составляет от около 30 секунд до 1 часа, предпочтительно от 1 минуты до 15 минут.

Неожиданно авторы настоящего изобретения установили, что если кальций добавляют первым к раствору карминовая кислота/белки, то в конечном лаке появляется риск нежелательного развития «черных пятен». Считается, что черные пятна представляют собой карминат кальция. «Черные пятна» появляются в меньшей степени при введении первым алюминия в водный раствор карминовая кислота/белки. Смотрите рабочий пример 2, описанный здесь ниже более подробно.

Предпочтительно водный раствор обрабатывают от 1 г алюминия/л раствора до 20 г алюминия /л раствора и от 1 г кальция /л раствора до 20 г кальция /л раствора. Специалисту в данной области техники известно, как оптимизировать это соотношение для получения требуемого цвета.

Подходящим соединением алюминия является сульфат алюминия. Предпочтительно соединением алюминия является AlK(SO₄)₂×12H₂O. Подходящим соединением кальция является карбонат кальция или хлорид кальция. Предпочтительным соединением кальция является (CH₃ COO)₂Ca×H₂O.

При обработке водного раствора карминовая кислота/белки соединением алюминия и/или кальция для получения лака карминовой кислоты предпочтительным является регулирование уровня рН в пределах от 3 от 7. Предпочтительно уровень рН устанавливают в пределах от 4 до 6 и более предпочтительно в пределах от 4,5 до 5,5.

Регулирование уровня рН может быть проведено после смешивания раствора карминовая кислота/белки с солями. Однако предпочтительно регулирование проводят до добавления солей.

Предпочтительно водный раствор карминовая кислота/белки обрабатывают соединением алюминия и кальция при следующих подходящих условиях для получения лака карминовой кислоты:

Период времени: от 15 минут до 2 часов, более предпочтительно от 30 минут до 60 минут.

Температура: от 80°С до 99°С, более предпочтительно от 92°С до 97°С.

Конечная композиция полученного на стадии (ii) лака карминовой кислоты связана с начальной композицией водного раствора стадии (i). Предпочтительный состав водного раствора карминовая кислота/белки приведен выше. Соответствующие предпочтительные композиции полученного на стадии (ii) лака карминовой кислоты те, в которых лак содержит от 55 до 75% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и от 15 до 25% белков (по массе сухих веществ), более предпочтительно, где лак содержит от 62 до 72% карминовой кислоты (по массе сухих веществ) и от 18 до 22% белков (по массе сухих веществ).

Безусловно, количество карминовой кислоты и белков в лаке не может быть более чем 100%. Фактически, на самом деле, сумма будет, как правило, составлять около 90%, поскольку лак включает другие вещества, такие как соли, использованные для получения лака. Соответственно, если лак включает 75% карминовой кислоты (по массе сухих веществ), тогда будет обычным присутствие 15% белков (по массе сухих веществ).

Предпочтительным способом определения количеств карминовой кислоты является известный стандартный способ, описанный ФАО/ВОЗ: документ 44 сессии Объединенного Комитета экспертов международной сельскохозяйственной организации (JECFA) 1995 года и Кодекс о пищевых химических продуктах, 2-е издание (FCCII). В Директиве Комиссии ЕС 94/45 от июля 1995 года, официальный журнал ЕС № L226, стр.9, описано, что цвет, свойственный разведенному окрашивающему продукту Е-120, имеет максимум при 494 нм.

Предпочтительным способом определения количества белков кислоты является известный способ Къельдаля и/или аминокислотный анализ.

После стадии (ii) получения лака карминовой кислоты обычно проводят последующие адекватные стадии. Они могут включать стадию фильтрации лака карминовой кислоты и/или стадию сушки лака карминовой кислоты с получением сухого лака карминовой кислоты. Эти стадии являются известными для специалистов в данной области техники и ссылка на руководство приведена выше.

Применение лака карминовой кислоты в различных продуктах.

Для того, чтобы использовать лак карминовой кислоты, описанный выше, следует превратить его в подходящую окрашивающую композицию. Термин «окрашивающая композиция» следует рассматривать в широком смысле. В зависимости от требований он может быть просто лаком карминовой кислоты или лаком после фильтрования и/или сушки. В качестве альтернативы лак может быть переведен в подходящий раствор кармина или водорастворимый кармин (порошкообразный).

Однако это может быть также окрашивающая композиция, в которую введены подходящий носитель или добавка, разрешенные для применения в пищевой промышленности или фармацевтически приемлемые. Специфический выбор носителя или добавки обусловлен конечным использованием, например, в пищевых продуктах или лекарственных средствах, и специалист в данной области техники с использованием рутинных методов может выбрать адекватные носители или добавки. Дополнительные детали смотрите в US 20020058016.

Как сказано выше, окрашивающая композиция может быть введена в пищевые продукты, сладости, кондитерские изделия, напитки, лекарственные средства или косметические средства.

Термин «пищевой продукт» означает здесь как пищевой продукт, так и кормовые продукты. Предпочтительно это пищевые продукты. Предпочтительные пищевые продукты включают молочные продукты, такие как йогурт, или мясо.

Дополнительным существенным признаком окрашивающей композиции является интенсивность цвета. Цвет карминовой кислоты может быть, например, красным, и окрашивающая композиция может быть получена различной интенсивности, например, красного цвета для придания адекватного цвета конечному продукту, например пищевому продукту.

Стандартной обработкой является проведение адекватных стадий для получения окрашивающей композиции с требуемой интенсивностью цвета, начиная с получения лака карминовой кислоты, описанного выше.

Окрашивающая композиция может быть заключена в капсулы с использованием традиционных технологий капсулирования, подходящих для пищевых продуктов, например, как описано в WO 97/26803 (Chr. Hansen A/S), путем заключения в капсулу из гуммиарабика.

Примеры

Материалы и аналитические методы

Чистая карминовая кислота: коммерчески доступная карминовая кислота получена из очищенного экстракта кошенили (Dactylopius coccus costa). Минимум около 90% карминовой кислоты.

Белковая композиция: коммерческий гидролизат сывороточного белка, подходящий в качестве источника белка в детских молочных смесях с пониженным содержанием аллергенов. По существу, все белки имеют молекулярную массу (ММ) ниже 6000 дальтон.

Анализ ELISA: антигенность проверяли одностадийным иммунометрическим анализом ELISA с поликлональными антителами к сывороточному белку.

Мкг белка экв./г белка максимум 85

Соль алюминия: AlK(SO₄)₂×12H₂ O

Соль кальция: (CH₃COO)₂ Ca×H₂O

Уксусная кислота: CH ₃COOH

Гидроксид натрия: NaOH в гранулах

Анализ SDS-PAGE

Трис забуференный раствор рН 8 (20 г трис/1000 мл дистиллированной воды/ уровень рН отрегулирован концентрированной HCl).

Лаки кармина были добавлены к буферному раствору таким образом, что все образцы содержали одинаковое количество карминовой кислоты/мл, соответствующее 1,5 г/л 46,56% лака карминовой кислоты.

Маркер 12 или Морской Синий был применен в качестве индикатора размера белка (ММ)

1М DL-дитиотреитол (DTT): 20 мг раствора DTT в 130 мкл MQW

объем введен в гель: 5 мкл Маркера 12, 7 мкл Морского Синего, образцы кармина 10 мкл

NuPage Novex высокопроизводительный гель, содержащий 4-12% Bis-tris был окрашен кумассией бриллиантовой голубой и/или серебряной.

Пример 1: получение лака карминовой кислоты

Этот пример описывает примеры получения алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты с карминовой кислотой и гидролизатом сыворотки.

Карминовая кислота в количестве 21 г была растворена в 500 мл воды, и в этом карминовом растворе было растворено 33 г пептида. Уровень рН был доведен до 5, и температура была повышена до 85-95°С. Затем 8 г AlK(SO₄)₂×12H₂O был растворен в 50 мл воды и добавлен к раствору, и затем 8,2 г (CH₃ COO)₂Ca×H₂O был растворен в 50 мл воды и добавлен к раствору. Через 45 минут 70-98% карминовой кислоты превратилось в лак карминовой кислоты, который выпал из раствора в осадок. Лак кармина был отделен от раствора, высушен и проанализирован.

Карминовая кислота, %	белок, %	Карминовая кислота/белок	Al соль, %	Ca соль, %	выход, %	обработка
4,5	1,5	2,61	1,6	1,6	-	невозможно
4,5	2,2	1,78	1,6	1,6	-	невозможно
2,5	1,0	2,17	1,6	1,6	-	невозможно
3,25	5	0,7	1,6	1,6	98,4	легко
2	3	0,7	0,9	0,8	93,9	легко
0,75	1	0,8	0,24	0,25	85,2	легко
4	6,7	0,6	1,6	1,6	98,2	легко
4	5,7	0,7	1,6	1,6	97,7	легко
4	5,0	0,8	1,6	1,6	97,4	легко
4	4,4	0,9	1,6	1,6	95,0	возможно

Полученные в результате лаки кармина имели содержание карминовой кислоты 65-75% и содержание белка 18-22%. Ни один из белков в лаках, определяемый анализом SDS-PAGE, не имел массу более 3000 дальтон.

Полученные в результате лаки кармина имели оттенки ярко-красного цвета и были пригодны в качестве лаков кармина на основе кошенилевого белка для получения растворов кармина и водорастворимых порошков кармина.

Заключение:

Результаты, приведенные в Таблице примера 1, демонстрируют следующее:

(1) оптимальные выходы карминовой кислоты получают, когда водный раствор включает от 3% до 5% карминовой кислоты и от 4% до 7% гидролизата сывороточного белка;

(2) при повышении количества белка в приведенных выше пределах выход улучшается;

(3) соотношение карминовая кислота/добавленные белки должно быть менее 1, чтобы избежать гелеобразования, приводящего к невозможности обработки. Кроме того, предпочтительное соотношение составляет от 0,5 до 0,8 и более предпочтительно около 0,6.

Пример 2

Этот пример описывает примеры получения алюминиево-кальциевого лака карминовой кислоты с карминовой кислотой и гидролизатом сыворотки.

Карминовая кислота в количестве 21 г была растворена в 500 мл воды, и в этом карминовом растворе было растворено 33г пептида. Уровень рН был доведен до 5, и температура была повышена до 85-95°С. Затем 8 г (CH₃COO) ₂Ca×H₂O был растворен в 50 мл воды и добавлен к раствору, и затем 8,2 г AlK(SO₄)₂×12H ₂O был растворен в 50 мл воды и добавлен к раствору. Через 45 минут 70-98% карминовой кислоты перешло в лак карминовой кислоты, который был осажден из раствора. Лак кармина был отделен от раствора, высушен и проанализирован.

Были идентифицированы черные пятна. Черные пятна, весьма вероятно, были карминатом кальция, который не перешел из кармината кальция в алюминиево-кальциевый лак кармина.

Предполагается, что введение сначала раствора AlK(SO₄)₂×12H₂ O приводит к присоединению алюминия и пептида к карминовой кислоте, и это затрудняет/делает невозможным преобразование кальция в карминат кальция до образования алюминиево-кальциевого лака кармина.

Заключение:

Результат примера 2 демонстрирует, что необходимо сначала вводить алюминий, и, выждав время, затем вводить кальций, чтобы не образовывались «черные пятна».