кислые и буферные композиции для ухода за кожей, содержащие никотинамид и абсорбирующий агент

Формула изобретения

1. Кислая и буферная композиция для ухода за кожей, содержащая:

a) от 0,1 до 4% от массы композиции никотинамида; и

b) от 5 до 20% от массы композиции абсорбирующего агента, выбранного из группы, состоящей из крахмала, талька, каолина, стеарата алюминия, карбоната магния, диоксида титана, диоксида титана или оксида цинка, обработанного метиконом, диметиконом, циклопентасилоксаном, стеариновой или миристиновой кислотой, или их смесью,

c) буферные агенты, выбранные из группы, состоящей из цитратов, фосфатов или их смеси.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция содержит от 5 до 15% от массы композиции упомянутого абсорбирующего агента.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что абсорбирующим агентом является диоксид титана.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция содержит от 0,3 до 2,5% от массы композиции никотинамида.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция имеет значение рН в диапазоне от 4 до 7.

6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция также содержит физиологические кожные липиды, другие витамины, противозудный агент и/или увлажняющие агенты.

7. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что в качестве других витаминов она содержит декспантенол и витамин Е.

8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция является эмульсией типа «масло в воде».

9. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция свободна от консерванта и этанола.

10. Композиция по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что для достижения рН 8 более чем 3 мл водного раствора 0,1М аммиака необходимо для титрования 50 мл раствора, полученного разведением 10 г композиции в 100 мл воды.

11. Композиция по любому из пп.1-9 для использования в качестве лекарственного средства для лечения и/или предотвращения пеленочного дерматита.

12. Применение композиции по любому из пп.1-10 в качестве антиуреазного агента.

13. Применение композиции по любому из пп.1-10 для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения пеленочного дерматита.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к композициям для ухода за кожей, содержащим никотинамид и абсорбирующее вещество. Изобретение также относится к лекарственным средствам, содержащим упомянутые композиции, успешно используемым для лечения и/или предотвращения от слабого до среднего раздражения кожи.

Несколько младенцев избавлялись от одного или нескольких эпизодов пеленочного дерматита, который в его более общей форме представляет собой раздражающий контактный дерматит. Кожа под пеленкой у младенцев часто подвергается действию тепла, влажной среды, и, как известно, повышенная гидратация кожи приводит к увеличению трения и царапания, повышению проницаемости и повышению количества микробов.

Предполагается, что аммиак принимает участие в образовании пеленочного дерматита. Совсем недавно было обнаружено, что аммиак может играть непрямую роль, включая взаимодействие между мочой и фекалиями. Прямое воздействие на кожу можно отнести на счет фекальных ферментов, особенно протеаз и липаз, которые становятся более активными и, таким образом, более повреждающими при увеличении рН. Увеличение рН является результатом выделения аммиака из мочевины мочи под действием фекальной уреазы. Моча и фекалии обычно присутствуют в подгузнике в одно и то же время, и воздействие на кожу этих материалов в течение нескольких часов не является необычным, особенно в ночном подгузнике, обеспечивая подходящие условия и достаточное время для такого взаимодействия и приводя к заметному повреждению кожи. Таким образом, полагают, что липазы и протеазы являются кожными раздражителями, которые могут быть вовлечены в вызывание пеленочного дерматита (Etiologic factors inndiaper dermatitis: the role of urine, Ronald W. Berg et al., Pediatric Dermatology, Vol.3 No 2. 102-106).

Кроме ее потенциальной возможности делать фекалии раздражителем, моча также содержит компоненты, которые непосредственно раздражают кожу, особенно после длительного воздействия.

В течение многих лет проводились исследования по поиску причин и лекарственных средств для слабых кожных высыпаний у людей. Такие высыпания обычно вызываются аллергией, воздействиями на кожу в периоды холодной погоды, или воздействием горячих влажных условий, таких как мытье посуды или подобное, или воздействием раздражающих материалов в актуальных продуктах или ингредиентах (например, ретиноиды, гидроксикислоты, кетокислоты). Такие высыпания также могут быть вызваны повышенной сухостью кожи без адекватного увлажнения кожи.

Поскольку причины могут быть различными, обычно симптомы включают слабое раздражение кожи, кожные высыпания, порезы и трещины, сопровождаемые чувством жжения, острой боли, раздражения и дискомфорта. На протяжении ряда лет были предприняты многочисленные попытки разработки местного действия кремов, мазей и фармацевтических препаратов для ослабления и успокоения боли и/или зуда, обычно ассоциированных с такими кожными раздражениями.

Патентная заявка WO 99/47141 описывает композиции, предназначенные для лечения слабых раздражений кожи, содержащие безопасное и эффективное количество природных или синтетических соединений витамина В3 в качестве вещества, снимающего раздражение. Композиции содержат в качестве существенных компонентов компонент витамин В3 и дерматологически приемлемый носитель. Композиции могут содержать необязательные компоненты, но раскрытые композиции не содержат абсорбирующий агент. Композиции имеют рН от около 4 до около 7.

Патентная заявка WO 99/63982 описывает способ лечения пеленочного дерматита у человека, который включает стадии:

(А) предоставления терапевтической композиции, заживляющей раны пеленочного дерматита, содержащей:

(а) терапевтически эффективное количество ингибитора моно-аденозин дифосфат-рибозил трансферазы для ингибирования аденозин дифосфат-рибозилирования васкулярного эндотелиального фактора роста;

(b) буферный агент для поддержания рН дерматита в диапазоне от около 5 до около 8; и

(c) противовоспалительный агент; и

(В) взаимодействие композиции, заживляющей раны пеленочного дерматита, с пеленочным дерматитом у человека.

Несмотря на такие открытия в области ухода за кожей, остается потребность в дополнительных композициях, обеспечивающих улучшенное симптоматическое облегчение слабых раздражений кожи.

Регулярное использование кислого препарата, содержащего никотинамид в качестве ингибитора уреазы, могло бы предотвратить повышение значения рН и защитить кожу, поддерживая ее физиологическое значение рН около 5,5.

Таким образом, объектом настоящего изобретения является представление кислых и буферных местных кожных препаратов для облегчения симптомов слабой кожной сыпи, покраснения, зуда, сухости, высыпаний и трещин у млекопитающих, особенно у человека.

Изобретение относится к кислым и буферным композициям, содержащим:

a) от 0,1% до 4% от массы композиции никотинамида;

b) от 5% до 20% от массы композиции абсорбирующего агента, выбранного из группы, состоящей из диоксида титана, диоксида титана, обработанного силиконовым производным или жирными кислотами, оксида цинка, обработанного силиконовым производным или жирными кислотами, и их смесей.

Используемый здесь термин «кислая композиция» означает, что упомянутая композиция имеет значение рН ниже 7.

Определено, что буферная композиция обеспечивает способность противостоять повышению рН, индуцированную добавлением щелочного агента. Композиция может приобрести буферные свойства путем добавления буферных агентов, которые включают в себя, но не ограничиваются цитратами (динатрий цитрат/тринатрий цитрат) или фосфатами (дигидрофосфат калия и гидрофосфат динатрия). Предпочтение отдается буферным композициям, содержащим динатрий цитрат, тринатрий цитрат, дигидрофосфат калия, гидрофосфат динатрия или их смеси.

Буферная емкость может быть измерена с помощью объема щелочного раствора, добавленного для достижения фиксированного рН.

По изобретению композиция предпочтительно имеет значение рН в области от 4 до 7, более предпочтительно - от 4,4 до 6,0, и даже еще более предпочтительно от 5,0 до 6,0.

Никотинамид представляет собой соединение витамина В₃, имеющее следующую формулу:

Здесь также применимы соли соединения витамин В₃. Неограниченные примеры используемых здесь солей соединения витамин В₃ включают органические или неорганические соли, такие как неорганические соли с анионными неорганическими частицами (например, хлориды, бромиды, иодиды, карбонаты), и органические соли карбоновых кислот (включая соли моно-, ди- и три-C₁-C₁₈ карбоновых кислот, например ацетаты, салицилаты, гликоляты, лактаты, малеаты, цитраты). Эти и другие соли никотинамида могут быть легко получены специалистом в данной области техники.

Используемые здесь абсорбирующие агенты представляют собой тонко измельченные материалы, включаемые в высокой концентрации в полутвердые препараты (пасты), придавая препаратам абсорбционные свойства. В литературе описано несколько методов количественного определения их абсорбционных свойств путем измерения количества воды, абсорбированной либо после инкубации, либо через водопроницаемую пленку (Juch; Rufi; Surber; in Dermatology 1994; 189: 373-377 and Rae in Brit. J. Dermat. 1947; 59, 338-39). По изобретению абсорбирующие агенты включают оксид цинка, диоксид титана, крахмал, тальк, каолин, стеарат алюминия, карбонат магния или их смесь, которые являются наиболее широко используемыми абсорбирующими агентами, но не ограничиваются ими. Предпочтение отдается композиции, содержащей тальк, диоксид титана, диоксид титана, обработанный силиконовым производным или жирными кислотами, оксид цинка, обработанный силиконовым производным или жирными кислотами, или их смесь.

По изобретению в случае, когда абсорбирующим агентом является диоксид титана, обработанный силиконовым производным, или оксид цинка, обработанный силиконовым производным, силиконовое производное предпочтительно выбирают из группы, состоящей из метикона, диметикона и циклопентасилоксана. В случае, когда абсорбирующим агентом является диоксид титана, обработанный жирными кислотами, или оксид цинка, обработанный жирными кислотами, жирные кислоты преимущественно выбирают из группы, состоящей из стеариновой кислоты, мистириновой кислоты и их смеси. В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения абсорбирующим агентом является диоксид титана. Диоксид титана преимущественно используется в анатазной кристаллической форме со средним размером первичного кристалла в области от 0,2 до 0,4 мкм.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения композиция содержит от 5% до 20% от массы композиции одного из упомянутых абсорбирующих агентов, преимущественно от 5% до 15% от массы композиции одного из упомянутых адсорбирующих агентов. Если используется смесь абсорбирующих агентов, то общее количество абсорбирующих агентов в композиции составляет от 5% до 40%, предпочтительно от 10% до 30%, более предпочтительно от 15% до 25% массы композиции.

Композиция преимущественно содержит от 0,1% до 4%, предпочтительно от 0,3% до 2,5% от массы композиции никотинамида.

Композиция может также содержать физиологические кожные липиды, которые включают церамид, холестерин, пальмитиновую кислоту и линолевую кислоту, но не ограничиваются ими; другие витамины, в частности специфические витамины, способствующие процессу заживления, которые включают декспантенол и витамин Е, но не ограничиваются ими; противозудные агенты, которые включают глицин, но не ограничиваются им; увлажняющие агенты, которые включают глицерин, сорбит и ксилит, но не ограничиваются ими. В соответствии с одним преимущественным вариантом осуществления изобретения композиция содержит декспантенол и витамин Е.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения композиция содержит декспантенол в количестве от 3% до 10%, преимущественно от 4% до 8% от массы композиции.

Композиция может также содержать соединение витамин С в комбинации с никотинамидом или вместо него.

В соответствии с одним преимущественным вариантом осуществления изобретения композиция не содержит этанол или консерванты; композиция свободна от консервантов и этанола. Композиция может содержать синтетический или природный эмульгатор, который включает, но не ограничивается, цетеарилглюкозид, кокоилглюкозид, бис-ПЭГ/ППГ-16/16 ПЭГ/ППГ-16/16 диметикон, трибехенин ПЭГ-20 эфиры, глицерил стеарат, ПЭГ-75 стеарат, цетет-20, цетеарет-12, цетеарет-20, стеарет-20, полиглицерил-3-диизостеарат, полиглицерил-2-дигидроксистеарат, ПЭГ-30 диполигидроксистеарат, цетил ПЭГ/ППГ-10/1 диметикон, бис ПЭГ/ППГ-14/14 диметикон.

В композицию настоящего изобретения могут также быть включены другие традиционные добавки продуктов ухода за кожей, которые включают, но не ограничиваются ими, агенты, придающие вязкость, и стабилизаторы эмульсии, такие как ксантановая камедь, цетиариловый спирт, PVP, ПЭГ-75, натрий альгинат, карбомер, гуаровая камедь, смягчающие вещества, такие как триглицериды каприловой/каприновой кислоты, сквалан, диметикон, водоустойчивые и образующие пленку агенты, такие как ПВП эйкозен сополимер, С20-22 алкил фосфат/С20-22 спирты, красители, такие как оксиды железа.

Композиция соответствует ЕР стандартам эффективности антимикробного сохранения, что означает, что после внесения от 10⁵ до 10⁶ микроорганизмов log уменьшение должно быть следующим:

	2 дня	7 дней	14 дней	28 дней
Бактерия критерия А	2	3	-	Не увеличивается (НУ)
Бактерия критерия В	-	-	3	(НУ)
Грибы критерия А	-	-	2	(НУ)
Грибы критерия В	-	-	1	(НУ)
Таблица 1

Композиция настоящего изобретения также содержит дерматологически приемлемый носитель. Выражение «дерматологически приемлемый носитель», используемый здесь, означает, что носитель является приемлемым для локального применения на коже, имеет хорошие эстетические свойства, является совместимым с активными компонентами настоящего изобретения или любыми другими компонентами и не будет вызывать каких-либо неблагоприятных опасений в отношении безопасности или токсичности. Безопасное и эффективное количество носителя составляет от около 40% до около 90%, предпочтительно от около 45% до около 85%, более предпочтительно от около 50% до около 80% массы композиции.

Носитель может быть в виде широкого разнообразия форм. Например, эмульсионные носители, включая, но не ограничиваясь, эмульсии типа «масло в воде» (например, эмульгель), «вода в масле», «вода в масле в воде» и «масло в воде в силиконе», пригодны здесь. Предпочтительные косметически и/или фармацевтически приемлемые местные носители включают эмульсии типа «масло в воде».

Эти эмульсии могут быть также выпущены в форме спреев, с использованием либо емкостей с механическим насосом либо аэрозольных емкостей под давлением с использованием стандартных пропеллентов. Эти носители также могут быть выпущены в форме мусса. Другие подходящие местные носители включают безводные жидкие растворители, такие как масла и силиконы; однофазные жидкие растворители на водной основе; и загущенные версии этих безводных носителей и однофазных носителей на водной основе.

Композиции настоящего изобретения обычно получают с помощью стандартных методов, таких как методы, известные в данной области техники для получения местных композиций.

Такие методы обычно включают смешивание ингредиентов в одну или более стадий до относительно равномерного состояния с или без нагревания, охлаждения, применения вакуума и тому подобного. Неограниченными примерами формы продукта могут быть крем, паста, гель, эмульсия, лосьон, мазь, раствор, жидкость, мусс, пенка и т.д.

Композиция пригодна для лечения или предотвращения слабых кожных сыпей, покраснений, зуда, сухости, высыпаний и трещин у млекопитающих, особенно у человека.

Композиция предпочтительно применяется местно на коже.

Изобретение также относится к лекарственному средству, содержащему композицию, описанную выше.

Лекарственное средство пригодно для лечения или предотвращения раздражения кожи млекопитающих.

Лекарственное средство пригодно для лечения или предотвращения кожных сыпей, зуда, высыпаний и трещин у млекопитающих, особенно у людей. Лекарственное средство, в частности, предназначено для лечения и/или предотвращения пеленочного дерматита.

Лекарственное средство предпочтительно применяется местно на коже. Лекарственное средство может быть в форме крема, пасты, кожного лосьона, геля или подобного, предназначенного для оставления на коже. Количество применяемого лекарственного средства, частота применения и периодичность использования могут широко варьироваться в зависимости от уровня желаемого уменьшения раздражения.

Изобретение также относится к использованию вышеописанной композиции в качестве антиуреазного агента, т.е. описанная выше композиция может быть использована для ингибирования уреазной активности.

Следующие примеры далее описывают и демонстрируют варианты осуществления изобретения в объеме настоящего изобретения.

Пример 1: формулы, содержащие Никотинамид по изобретению.

Пример 2: Буферная емкость композиций по изобретению

Буферная емкость может быть количественно определена посредством объема щелочного раствора, добавленного для достижения фиксированного рН.

Протокол: Анализ проведен методом титриметрии

Развести 10 г крема до 100 мл водой

Титровать 50 мл раствора 0,1 М аммиаком до достижения рН 8

Зафиксировать объем

Результаты: результаты представлены в таблице 8

	5В	5F	5Н	4F
Глицин	2%	2%	2%	2%
Динатрий фосфат	0,5%	1,0%	0,7%	-
Калий фосфат	1,0%	1,0%	1,0%	-
Динатрий цитрат	-	-	-	1,315%
Тринатрий цитрат	-	-	-	3,14%
Липацид C8G	0,5%	1%	0.7%	1%
Липацид UG	0%	0%	0%	1%
рН (на старте)	5,3	5,1	5,3	5,3
Результаты: в мл 0,1 М аммиака для достижения рН 8	4,9	7,8	5,6	6,5
Таблица 8

Предложенные условия: более чем 3,0 мл, предпочтительно более чем 4,5 мл 0,1 М аммиака для достижения рН 8.

Эти результаты подтверждают, что композиции по изобретению могут быть названы буферными композициями.

Пример 3: Ингибирование уреазы

Целью этого примера является тестирование ингибирующего действия некоторых молекул на активность уреазы. Были определены подходящие условия (Т°, время, концентрация), при которых уреаза производит измеряемые количества аммиака. При этих же условиях добавляли увеличивающиеся концентрации никотинамида.

Метод

Принцип: Ферментативную активность определяли путем инкубирования образца с уреазой и последующего определения высвобождающегося аммиака, используя индофенольную реакцию вместе с параллельной стандартизацией с аммиаком.

Метод анализа: Подходящие концентрации уреазы и аммиака определяли с помощью предварительных тестов, дающих линейный сигнал (между 0 и 1,2 O.D. (оптическая плотность) при 630 нм) после 30' колориметрической реакции.

Для получения достоверной кривой ингибирования были приготовлены серийные разведения образцов. В параллель также была получена стандартная кривая для аммиака. Каждый тест был выполнен дважды. Объем лунки составлял 100 мкл. Все растворы образцов и мочевины были доведены до рН 5,5. Мы использовали 3 контрольных значения и точку нулевого ингибирования:

- тест нулевого ингибирования: 25 мкл 4% мас./об. мочевины +50 мкл уреазы 0,4 мг/мл +25 мкл ацетатного буфера;

- контроли образцов: 25 мкл образца 25 мг/мл +25 мкл мочевины +50 мкл ацетатного буфера;

- контроль уреазы: 50 мкл уреазы 0,4 мг/мл +50 мкл ацетатного буфера;

- контроль стандарта: 25 мкл 4% мас./об. мочевины +75 мкл ацетатного буфера;

Кривые образцов включали 8 концентраций (разведение 2/5 от 25 мг/мл до 0,01 мг/мл):

- тесты образцов: 25 мкл образца (для каждой концентрации) +25 мкл 4% мас./об. мочевины +50 мкл уреазы 0,4 мг/мл

Кривые стандартов включали также 8 концентраций (двукратное разведение от 100 мг/л до 0,8 мг/мл)

- тесты стандартов: 50 мкл стандарта (для каждой концентрации) +25 мкл 4% мас./об. мочевины +25 мкл ацетатного буфера.

Микропланшет инкубировали в течение 15' при комнатной температуре после добавления уреазы (ферментативная реакция) и затем инкубировали 30' после добавления реагента А и реагента В (60 мкл и 90 мкл соответственно >> индофенольная колориметрическая реакция).

Затем определяли абсорбцию при 630 нм.

Результаты:

Каждый результат соответствует среднему из двух повторов. Для образцов контрольное значение представляет собой сумму контроля уреазы и контроля образца. Для стандартов контрольное значение означает контроль стандарта.

Лунки	ПОГЛОЩЕНИЕ (630 нм)
контроль Никотинамид	0,038
контроль уреаза	0,049
контроль Стандарт	0,061
уреаза (нулевое ингибирование)	1,3755
Таблица 9

Никотинамид

Лунки	Концентрация	Поглощение (630 нм)	Поглощение-Контроль (630 нм)
А	6,25	0,072	-0,015
В	2,5	0,0835	-0,0035
С	1	0,1065	0,0195
D	0,4	0,151	0,064
Е	0,16	0,2595	0,1725
F	0,064	0,497	0,41
G	0,0256	0,7325	0,6455
Н	0,01024	1,058	0,971
Уреаза	0	1,3755	1,2885
Таблица 10

Стандарт

Лунки	Концентрация	Поглощение (630 нм)	Поглощение-контроль (630 нм)
А*	100	NA	NA
В	50	0,9535	0,8925
С	25	0,543	0,482
D	12,5	0,309	0,248
Е	6,25	0,1865	0,1255
F	3,125	0,124	0,063
G	1,5625	0,093	0,032
Н	0,78125	0,0775	0,0165
Контроль	0	0,061	0
* 100 мг/мл не использовалась из-за значительного разброса между дублирующими значениями поглощения (1,102-1,574)
Таблица 11

В условиях теста значительное ингибирование уреазной активности наблюдается между 0,01 и 1 мг/мл; выше этой последней концентрации получено полное ингибирование уреазы.

Пример 4: Ингибирование активности уреазы канавалии мечевидной композициями согласно изобретению

Целью этого примера является сравнение ингибирования уреазной активности кремом-плацебо и кремом, содержащим 0,5%, 1%, 2% никотинамида.

Будут исследованы оптимальные условия для достижения значительного ингибирующего эффекта.

Продукт: были протестированы формулы 5В, 5С, 5Е и формула 5Е', которая является тем же самым, что и формула 5Е при условии, что она содержит 47,5% масс./масс. воды вместо 47% масс./масс. и 0% масс./масс. никотинамида вместо 0,5% масс./масс.

добавить буфер до полного объема

Композиция: Образец с 2%, 1%, 0,5%, 0% никотинамида

- Общий Метод: Анализ ингибирования уреазы

Каждый анализ разделен на три стадии:

1) Приготовление образца

2) Детекция

3) Измерение поглощения при 630 нм

1. Приготовление образца

Образец и плацебо разводили в буфере (натрий ацетатный буфер 0,33 М рН 5,5).

2. Детекция: Анализ, уреазы

Каждая пробирка теста содержала

250 мкл мочевины 4%,

250 мкл уреазы 2,5 мг/л,

500 мкл разведенного образца или разведенного плацебо.

Каждую пробирку инкубировали 15' при комнатной температуре с уреазой.

В каждую пробирку добавляли 30 мкл HCl 30% и 400 мкл хлороформа.

Пробирки центрифугировали 15' при 10000 об/мин.

Супернатант удаляли.

100 мкл супернатанта, 60 мкл Реагента А и 90 мкл Реагента В добавляли в каждую лунку и инкубировали 1 ч при комнатной температуре.

3. Измерение поглощения при 630 нм

Поглощение измеряли при 630 нм.

Среднее значение контроля уреазы вычитали из каждого значения «пробирки активности».

Средние значения и относительное стандартное отклонение рассчитывали для каждой серии.

- Результаты и обсуждение

В этом примере тестировали ингибирующее действие серийных разведении крема (плацебо, никотинамид 0,5% и 2%) на активность уреазы. Был применен метод, описанный в примере 3. На второй стадии сравнивали ингибирующее воздействие крема-плацебо или содержащего 0,5%, 1% и 2% никотинамида.

1. Поиск разведения крема с оптимальным ингибирующим эффектом

Два главных результата разведении крема - это сниженный матриксный эффект и уменьшение концентрации никотинамида. Такое ингибирующее воздействие никотинамида было показано путем сравнения результатов, полученных для плацебо и для образца. Оптимальное разведение будет выбрано для его лучшего соотношения между ингибирующими эффектами плацебо и образца. Протестированы 200,400, 600 и 800-кратные разведения крема - никотинамид 2%. 100, 200 и 300-кратные разведения протестированы для крема - никотинамид 0,5%. Для каждого разведения были приготовлены дубликаты и протестированы в четырех экземплярах. Средние значения и относительное стандартное отклонение рассчитывали для каждой серии (8 результатов).

Результаты показаны на фиг.1 и 2. Фиг.1 описывает для крема, содержащего 2% никотинамида, значения O.D. при 630 нм после 60' соответственно для

1 - образец - разведение 800×

1' - плацебо - разведение 800×

2 - образец - разведение 600×

2' - плацебо - разведение 600×

3 - образец - разведение 400×

3' - плацебо - разведение 400×

4 - образец - разведение 200×

4' - плацебо - разведение 200×

Фиг.2 описывает для крема, содержащего 0,5% никотинамида, значения O.D. при 630 нм после 60' соответственно для

1 - образец - разведение 300×

1' - плацебо - разведение 300×

2 - образец - разведение 200×

2' - плацебо - разведение 200×

3 - образец - разведение 100×

3' - плацебо - разведение 100×

Все вместе эти результаты предполагают, что 200-кратное разведение является наиболее эффективным условием анализа.

2. Ингибирующие влияния разведенного, крема-плацебр или разведенного крема, содержащего 0,5%, 1% и 2% никотинамида

200-кратные разведения каждого из составов крема и плацебо протестированы на предмет их ингибирующего влияния на активность уреазы. Для каждого разведения были приготовлены дубликаты и протестированы в четырех экземплярах. Средние значения и относительное стандартное отклонение рассчитывали для каждой серии (8 результатов).

Результат показан на фиг.3, которая описывает значения O.D. при 630 нм после 60' соответственно для

1 - плацебо - разведение 200×

2 - крем с 0,5% никотинамида - разведение 200×

3 - крем с 1% никотинамида - разведение 200×

4 - крем с 2% никотинамида - разведение 200×

Различие O.D. между разведенным кремом-плацебо и разведенным кремом, содержащим 0,5% никотинамида, более выражено, чем O.D. различия между разведенными образцами, содержащими 0,5%-1% и 2% никотинамида. Однако, как оказалось, ингибирующий эффект последовательно увеличивается с концентрацией никотинамида.

Заключение

Все вместе эти результаты убедительно говорят о том, что крем, содержащий 0,5%, 1%, 2% никотинамида, постепенно ингибирует активность уреазы.