бромид 1-( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием

Формула изобретения

Бромид 1-( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="/images/patents/58/2404013/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия формулы

-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="/images/patents/58/2404974/2404974-2.gif" BORDER="0" TI="CF" HE="29" WI="61">

обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и фармации, в частности, к созданию нового биологически активного соединения, являющегося активной основой для создания лекарственных препаратов с широким спектром фармакологического действия.

Одной из актуальных задач медицины и фармации является разработка средств профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. Ишемическая болезнь сердца, и особенно инфаркт миокарда, являются ведущей причиной смертности населения в Украине и странах Европейского Союза, Северной Америки [Коваленко В.Н., 2004].

Интенсивная терапия в острейшем и остром периоде инфаркта миокарда представляется наиболее сложной и важной проблемой кардиологии. Острейший период инфаркта миокарда, который продолжается 2-3 часа, является самым тяжелым и кратковременным; второй - острый период - длится от 2 до 14 дней. Поэтому чем быстрее и эффективнее будет проявляться фармакологическое действие лекарственных препаратов, используемых в первом и втором периодах инфаркта, тем эффективнее окажется его лечение.

В остром периоде инфаркта миокарда применяют -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -адреноблокаторы, одним из которых является «гибридный» - ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> + -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ) адреноблокатор последнего поколения - карведилол [Машковский М.Д. Лекарственные средства.- М.: Новая волна, 2008.- С.275]. Карведилол оказывает благоприятное действие на внутрисердечную и региональную гемодииамику, нормализует кислородный режим миокарда в условиях ишемии, обладает антиоксидантным эффектом. Карведилол принимается нами за аналог по фармакологическому действию.

Недостатком карведилола является отсутствие или незначительный кардиопротективный эффект в острейшем и остром периодах инфаркта миокарда, а также слабовыраженный энерготропный эффект [Рылова А.К., Розанов А.В. Терапия в-блокаторами в специальных группах пациентов (обзор результатов анализа в подгруппах исследований CIBIS 11, COMET, COPER-NICUS.MERIT HF)// Сердце. - 2003. - № 4. - С.190-196]. Существенным недостатком карведилола, ограничивающим его применение, является возникновение целого ряда побочных реакций со стороны разных органов и систем. Нервная система: возможны потеря сознания, депрессия, нарушение сна, парестезии. Сердечно-сосудистая система: брадикардия, ортостатическая гипотензия, атриовентрикулярная блокада II-III ст., редко - нарушение периферического кровообращения, прогрессирование сердечной недостаточности (при увеличении доз), отеки нижних конечностей, стенокардия, выраженное снижение АД, обострение синдрома "перемежающейся" хромоты и синдром Рейно. Пищеварительный тракт: сухость во рту, тошнота, диарея или запор, рвота, боль в животе, потеря аппетита, повышение активности «печеночных» трансаминаз. Обмен веществ: увеличение массы тела и гиперхолестеринемия; у больных с уже имеющимся сахарным диабетом - гипергликемия или гипогликемия, декомпенсация углеводного обмена. Аллергические реакции: кожные аллергические реакции, обострение псориаза. Со стороны дыхательной системы: одышка и бронхоспазм (у предрасположенных больных). Прочие: нарушение зрения, уменьшение слезоотделения, гриппоподобный синдром, чихание, миалгия, артралгия, боли в конечностях, «перемежающаяся» хромота, редко - нарушение мочеиспускания, нарушение функции почек [Инструкция по применению карведилола]. [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна, 2008. - С.275].

Известно биологически активное соединение «Бромид 1-( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-(п-диметиламинобензилиденамино)-1,2,4-триазолия, обладающий антиоксидантным, противоишемическим, -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -адреноблокирующим, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действием» (рабочее название «Трианол») [Патент Украины № 28494, МПК7 C07D 249/08, А61К 31/41. 12.05.97/15.01.2002//Промислова власнiсть. - 2001. - № 1. С.3.43]. Доклинические исследования показали, что трианол, вводимый в дозах 1-5 мг/кг животным с экспериментальным инфарктом миокарда, уменьшает зону некроза миокарда, улучшает показатели ЭКГ, нормализует энергетический обмен, активирует антиоксидантную систему кардиомиоцитов на 3 сутки эксперимента. При введении трианола в дозе 10-30 мг/кг животным со спонтанной гипертензией снижается артериальное давление.

Трианол принимаем за ближайший структурный аналог заявляемому биологически активному веществу.

Однако трианол не оказывает быстрого и выраженного кардиопротективного действия в острейший и острый периоды инфаркта миокарда, что значительно затрудняет его применение в интенсивной терапии сердечно-сосудистых заболеваний.

В основу изобретения поставлена задача создания эффективного биологически активного вещества, превосходящего по спектру и степени активности известные аналоги и обеспечивающего производство фармакологически активных препаратов для лечения инфаркта миокарда в начальные - острейший и острый - периоды его развития.

Решение поставленной задачи обеспечивает биологически активное вещество - бромид 1 - ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия формулы

-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" TI="CF" HE="29" WI="61">

обладающее кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием.

Рабочее название препарата - МТ.

Заявляемое биологически активное вещество отличается от ближайшего структурного аналога тем, что заявляемое вещество представляет собой по химическому строению бромид 1 - ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолий, а ближайший структурный аналог отличается тем, что у него аминогруппа в положении 4 блокирована остатком п-диметиламинобензальдегида.

Фармакологический эффект от использования изобретения.

Введение препарата МТ в дозах 1-5 мг/кг, и особенно в оптимально эффективной дозе 2 мг/кг, что составляет 1/86 от ЛД₅₀, в острый период инфаркта миокарда приводит к снижению степени повреждения кардиомиоцитов, начиная с 15 минуты развития экспериментальной патологии, а также к уменьшению гибели кардиомиоцитов, торможению свободнорадикальных процессов, активации адаптивного протеинсинтеза, снижению артериального давления, улучшению энергообмена миокарда, улучшению показателей электрокардиографии. Применение препарата МТ в острый период инфаркта миокарда по силе терапевтического эффекта превосходит эффективность средства базовой терапии - аналога по фармакологическому действию карведилола и структурного аналога трианола. Введение препарата МТ в дозах 10-50 мг/кг, и особенно в оптимально эффективной дозе 30 мг/кг, что составляет 1/6 от ЛД₅₀, животным со спонтанной гипертензией приводит к снижению артериального давления через 30 мин после инъекции препарата. По силе антигипертензивного действия препарат МТ превосходит эффективность средства базовой терапии - аналога по фармакологическому действию карведилола и структурного аналога трианола.

Сущность изобретения и его преимущества перед известными аналогами поясняются следующими примерами доклиничсских исследований на животных и результатами этих исследований, представленными в таблицах.

Для иллюстрации реализации данного изобретения приводим примеры получения заявляемого вещества и его фармакологическую активность.

Пример 1. Синтез бромида 1 - ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия

Синтез проводят в четырехгорлой колбе вместимостью 0,5 л, снабженной мешалкой, термометром, обратным холодильником и делительной воронкой вместимостью 0,25 л.

В колбу загружают 42,04 г (0,5 моля) 4-амино-1,2,4-триазола и 120 мл изопропанола и нагревают до 70°С до полного растворения 4-амино-1,2,4-триазола. К полученному раствору прибавляют по каплям раствор, состоящий из 93,45 г (0,505 моль) -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -бромэтилбензола в 100 мл изопропанола. Затем реакционную массу нагревают до кипения (83-85°С) и кипятят в течение 8 часов. После чего реакционную массу охлаждают при периодическом перемешивании сначала на воздухе до комнатной температуры, а затем на ледяной бане до 5-6°С. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывают, тщательно отжимают и промывают на фильтре два раза по 10 мл охлажденного изопропанола или ацетона.

Выход целевого продукта 123,8 г (98% от теории).

Белый со слегка желтоватым или зеленоватым оттенком кристаллический порошок растворим в воде, растворим в метаноле, 95% этаноле, ДМФА, нерастворим в эфире, ацетоне. Температура плавления 102-107°С (плавится в пределах 2°С).

Найдено, %: С 44,48; Н 4,90; Br 29,65; N 20,81.

Брутто формула: C₁₂H₁₃BrN₄.

Вычислено, %: С 44,63; Н 4,87; Br 29,69; N 20,81.

ИК-спектр: 3389; 3280 см^-1 (симметричные и ассиметричные валентные колебания NH₂ 3025 см^-1 ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> CH ароматического ядра); 1631 см^-1 ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> C=H связи гетероциклического ядра).

Пример 2. Кардиопротективная и противоишемическая активность препарата МТ

Кардиопротективную и противоишемическую активность МТ изучали на модели последовательной окклюзии левой нисходящей и левой огибающей коронарной артерии у крыс линии Вистар массой 220-240 г, полученных из питомника Института фармакологии и токсикологии АМН Украины. Окклюзию коронарных артерий проводили под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг) путем наложения шелковой лигатуры [2,8]. МТ, трианол вводили в дозе 2 мг/кг внутрибрюшинно за 15 мин до наложения лигатуры. У экспериментальных животных забиралась венозная кровь через 15 мин, 60 мин и 120 мин. В сыворотке крови определялась активность кардиоспецифического изоэнзима МВ-КФК (определяли по оптическому тесту Варбурга после хроматографического разделения) [7, 8].

При коронароокклюзии происходит возникновение острой ишемии, гибель кардиомиоцитов и выход в сыворотку крови кардиоспецифического изоэнзима креатинфосфокиназы МВ-КФК, о чем свидетельствует повышение его активности на 17%, 52%, 75%, 102% соответственно на 15, 30, 60, 120 мин после наложения лигатуры.

Таблица 1
Влияние МТ и препаратов сравнения на активность маркерного фермента МВ-КФК (мМоль/л/ч) в острейший период ишемии миокарда, вызванной окклюзией коронарной артерии у крыс
Группы наблюдения и количество животных	Время окклюзии
15 мин	30 мин	60 мин	120 мин
Интактная n=5	0,04±0,001	0,04±0,002	0,04±0,001	0,04±0,002
Окклюзия (контроль) n=5	0,047±0,001 (+17%)	0,061±0,003 (+52%)	0,070±0,002 (+75%)	0,081±0,002 (+102%)
MT n=5	0,04±0,001 *# (-15%)	0,042±0,002*# (-32%)	0,052±0,002* (-26%)	0,058±0,002* (-28%)
Трианол n=5	0,046±0,001 (-2%)	0,051±0,002* (-17%)	0,058±0,003* (-18%)	0,064±0,002* (-20%)
Примечание: * - достоверность отличия (p<0,05) по отношению к контрольной группе, # - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе трианола

Как видно из данных, представленных в таблице 1, заявляемый препарат МТ проявляет выраженное кардиопротективное действие при окклюзии нисходящей коронарной артерии. Так, на 15, 30, 60 и 120 мин после коронарооклюзии препарат МТ снижал гиперферментемию МВ-КФК на 15%, 32%, 26% и 28%, а трианол - на 2%, 17%, 18% и 20% соответственно.

Преимуществом применения препарата МТ явилось то, что у него появление достоверного кардиопротективного действия наблюдалось уже с 15 мин после окклюзии, с максимально выраженным эффектом на 30 мин окклюзии.

Достоверный же кардиопротективный эффект трианол проявлял с 30 мин после окклюзии, который на 15% был менее эффективным, чем подобный эффект от применения препарата МТ в этот период времени. Кардиопротективное действие трианола по силе уступало действию препарата МТ на 60 и 120 мин наблюдения на 8%.

Таким образом, препарат МТ оказывает достоверное кардиопротективное действие в условиях острейшего периода ишемии миокарда, достоверно превосходящее действие трианола не только по силе основного эффекта, но и по времени его проявления, что является явным преимуществом заявляемого препарата.

Пример 3.

Кардиопротективная, антиоксидантная и протеинсинтетичесая активность препарата МТ

Кардиопротективную, антиоксидантную и протеинсинтетичеекую активность препарата МТ изучали на модели острого инфаркта миокарда у крыс липни Вистар массой 200-230 г, который вызывали введением изадрина и питуитрина. Мелкоочаговый инфаркт миокарда моделировался введением питуитрина (1Ед/кг) подкожно, а затем изадрина (200 мг/кг) внутримышечно в течение 3 суток [2, 3, 8]. Заявляемый препарат МТ, трианол и карведилол вводили в дозе 2 мг/кг внутрибрюшинно в течение 3 суток, параллельно формированию инфаркта миокарда. Об указанных видах активности судили по снижению продукта окислительной модификации белка (ОМБ) - карбоксифенилгидразида (КФГ) (определяли спектрофотометрически по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином) [10]; содержанию РНК в цитоплазме кардиомиоцитов и плотности ядер кардиомиоцитов на единице площади (после окраски срезов миокарда галоцианин-хромовыми квасцами по Эйнарсону) [9] и проведения морфометрического анализа на микроскопе Axioskop. Моделирование инфаркта миокарда приводило к накоплению в тканях сердца маркерного продукта окислительной модификации белка - КФГ на 213%, отображающего активацию свободнорадикальных процессов; снижению плотности ядер кардиомиоцитов на 4%, что свидетельствует о гибели клеток и уменьшении содержания в них РНК на 23%, свидетельствующее о нарушении процессов протеинового синтеза.

Таблица 2
Влияние МТ на показатели гибели кардиомиоцитов, активность процессов протеинсинтеза и интенсивность свободно-радикальных процессов при остром инфаркте миокарда
Группы наблюдения и количество	Показатели
КФГ, у.е./г белка	РНК, Е on	Плотность ядер на 1 мм2 площади миокарда
Интактная (n=5)	12,33±1,78	0,098±0,001	8116±221
Инфаркт (контроль)(n=5)	38,6±2,22 (+213%)	0,076±0,001 (-23%)	7832±285 (-4%)
МТ (n=5)	17,2±1,00*+ # (-55,4%)	0,117±0,001*+# (+54%)	9511±166*+# (+21,5%)
Трианол (n=5)	21,4±1,11*+ (-45.4%)	0,115±0,001* +(+51%)	9326±296*+ +(+19%)
Карведилол (n=5)	27,3±1,33* (-29,0%)	0,098±0,001* (+28%)	8706±151* (+11%)
Примечание:* - достоверность отличия (<0,05) по отношению к контрольной группе, # - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе трианола, + - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе карведилола

Как видно из данных, представленных в таблице 2, введение препарата МТ оказывало выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствовало статистически достоверное снижение накопления КФГ в миокарде на 55,4% после моделирования инфаркта, по сравнению с группами сравнения. Введение трианола оказывало менее выраженное действие (снижение КФГ на 45,4%), а введение карведилола снижало этот показатель на 29,0%. Препарат МТ оказывал протеинсинтетическое действие, о чем свидетельствовало повышение РНК в цитоплазме кардиомиоцитов на 54%, введение препаратов сравнения - трианола и карведилола - оказывало достоверно худший эффект (повышение РНК на 51% и 28% соответственно). Введение препарата МТ приводило к уменьшению гибели кардиомиоцитов, о чем свидетельствовало повышение плотности ядер кардиомиоцитов на 21,5%. Препараты сравнения трианол и карведилол оказывали менее выраженный эффект (повышение искомого показателя наблюдалось на 19% и 11% соответственно).

Таким образом, препарат МТ оказывает более выраженное, чем у трианола и карведилола, антиоксидантное, кардиопротективное и протеинсинтетическое действие в условиях острого периода инфаркта миокарда, что является явным преимуществом применения заявляемого препарата.

Пример 4. Кардиопротективная, противоишемическая и энерготропная активность МТ

Кардиопротективную, противоишемическую и энерготропную активности препарата МТ изучали на модели острого инфаркта миокарда у крыс линии Вистар массой 220-230 г, который вызывали введением изадрина и питуитрина. Мелкоочаговый инфаркт миокарда моделировался введением питуитрина (1 Ед/кг) подкожно, а затем изадрина (200 мг/кг) внутримышечно в течение 3 суток [2, 3, 8]. Заявляемый препарат (МТ), трианол и карведилол вводили в дозе 2 мг/кг внутрибрюшинно в течение 3 суток параллельно формированию инфаркта миокарда. О данных видах активности судили по снижению активности в сыворотке крови кардиоспецифического изоэнзима креатинфосфокиназы МВ-КФК (определяли по оптическому тесту Варбурга после хроматографического разделения [8], по снижению суммарной степени смещения сегмента ST относительно изолинии ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> _{-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle">} ST) (определяли электрокардиографически) [2, 8], а также по повышению уровня АТФ в миокарде (определяли спектрофотометрически) [4].

Таблица 3
Влияние препарата МТ и препаратов сравнения на показатели ишемии, биоэнергетику сердечной мышцы при экспериментальном инфаркте миокарда
Группы наблюдения и количество животных	Показатели
МВ-КФК, ммоль/л/ч	( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ST) (мкВ)	АТФ, мкм/г
Интактная группа n=5	0,05±0,005	0	3,38±0,253
Инфаркт (контроль) n=5	0,22±0,02 (+340%)	225±21	2,30±0,14 (-32%)
МТ n=5	0,068±0,01*+# (-70%)	23±13*+#	3,10±0,14*+# (+34,7%)
Трианол n=5	0,092±0,02* +(-58%)	34±21*+	2,98±0,14* +(+29,5%)
Карведилол n=5	0,12±0,02* (-46%)	64±21*	2,68±0,11* (+16,5%)
Примечание: * - достоверность отличия (p<0,05) по отношению к контрольной группе, # - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе трианола, + - достоверность отличий(p<0,05) по отношению к группе карведилола

Моделирование инфаркта миокарда приводило к развитию энергодефицита, о чем свидетельствовало снижение уровня АТФ в миокарде на 32%; появление ишемических изменений в тканях сердца, что выражалось в увеличении суммарной степени смещения сегмента ST относительно изолинии ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> _{-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle">} ST) на электрокардиограмме на 225±21 мкВ и нарушении целостности мембран кардиомиоцитов, о чем свидетельствовало повышение в сыворотке крови активности кардиоспецифического изоэнзима креатинфосфокиназы -МВ-КФК на 340%, по сравнению с интактной группой. Как видно из данных, представленных в таблице 3, препарат МТ обладает выраженным энерготропным действием и на фоне моделирования инфаркта повышал уровнь АТФ в миокарде на 34% (введение препаратов сравнения трианола и карведилола приводило к повышению АТФ на 29,5% и 16,5% соответственно). Введение МТ животным в острый период инфаркта миокарда оказывало статистически достоверно более выраженное кардиопротективное действие по сравнению с препаратами сравнения, о чем судили по снижению МВ-КФК на 70% (препарат сравнения трианол снижал активность МВ-КФК на 58%, а введение карведилола - на 46%). Назначение препарата МТ животным с инфарктом миокарда в остром периоде оказывало выраженное противоишемическос действие, о чем свидетельствовало снижение суммарной степени смещения сегмента ST относительно изолинии ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> _{-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle">} ST) до 23±13 мкВ (введение трианола обеспечивало снижение этого показателя ишемии миокарда до 34±21 мкВ, а введение карведилола - до 64±21 мкВ (р<0,05)).

Пример 5.

Антигипертензивная активность препарата МТ

Исследования антигипертензивного действия препарата МТ проводили на крысах линии НIСАГ со спонтанной артериальной гипертензией массой 260±5 г. Препарат МТ, трианол и карведилол вводили внутрибрюшинно в одинаковой дозе - 30 мг/кг. Артериальное давление измеряли через 30 мин, 1, 3 и 6 часов после ведения препаратов на хвостовой артерии при помощи плетизмографа.

Таблица 4
Влияние препарата МТ и препаратов сравнения на показатели артериального давления (АД) у спонтанно гппертензивных крыс, мм рт.ст.
Группы наблюдения и количество животных	Уровень ФД по срокам наблюдения
АД исходное	АД через 30 мин	АД через 1 ч	АД через 3 ч	АД через 6 ч
Крысы с гипертензией (контроль) n=5	163±2	167±7	165±5	166±3,1	164±2,5
Крысы с гипертензией + МТ (n=8)	159±1,4	133±2,4* #+ (-16,4%)	139±1,8* (- 12,6%)	139±1,2* (-12,6%)	156±1,4
Крысы с гипертензией + трианол (n=8)	155±2,5	142±3 (-8,4%)	140±3,8* (-9,6%)	142±1,2* (-8,4%).	156±1,4
Крысы с гипертензией + карведилол (n=8)	169±3,9	163±3,0 (-3,6%)	155±4,0* (-8,3%)	148±4,7* (-12,5%)	169±4,3
Примечание: * - достоверность отличия (p<0,05) по отношению к контрольной группе, # - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе трианола, + - достоверность отличий (p<0,05) по отношению к группе карведилола

У спонтанно гипертензивных крыс (контроль) значение АД практически не изменялось в течение всего эксперимента.

Назначение крысам со спонтанной гипертензией препарата МТ в дозе 30 мг/кг приводило к достоверному снижению АД на 16,4% уже через 30 мин после введения. Причем в этот период наблюдения препарат МТ по силе антигипертензивного действия достоверно превосходил трианол и карведилол. В течение последующих 3 часов препарат МТ обеспечивал стойкое достоверное снижение АД на 12,6%, которое по силе превосходило антигипертензивное действие трианола и карведилола. Через 6 часов после введения МТ наблюдалось снижение его антигипертензивного действия. Трианол незначительно снижал АД через 30 мин. Достоверное снижение этого параметра на 9,7% наблюдалось только через 1 час после инъекции препарата. Антигипертензивный эффект трианола сохранялся на протяжении последующих 3 часов после введения (снижение АД на 8,4%), но был значительно слабее, чем подобный эффект после применения препарата МТ. Карведилол незначительно снижал АД через 30 минут после введения. Достоверный антигипертензивный эффект регистрировали через 1 час после инъекции препарата (снижение АД на 8,3%). Максимальный антигипертензивный эффект карведилола, сопоставимый с действием препарата МТ, наблюдался через 3 часа после введения препарата (снижение АД на 12%). Через 6 часов после введения карведилола его антигипертензивный эффект исчезает.

Таким образом, заявляемый препарат МТ обладает достоверно более выраженным, чем у трианола и карведилола, антигипертензнвным действием, максимальное проявление которого наступает быстрее, чем у препаратов сравнения на 30-120 мин после введения крысам линии НIСАГ и сохраняется до 6 ч наблюдения.

Обобщая полученные результаты применения препарата МТ, аналога по фармакологическому действию - карведилола и трианола - ближайшего структурного аналога, можно сделать следующее заключение.

В условиях последовательной окклюзии левой нисходящей и левой огибающей коронарной артерии у крыс линии Вистар препарат МТ в дозе 2 мг/кг оказывает достоверное кардиопротективное действие в условиях острейшего периода ишемии миокарда, предотвращая гибель кардиомиоцитов и снижая уровень гиперферментемии МВ-КФК на 15%, 32%, 26% и 28%, с максимально выраженным эффектом на 30 мин окклюзии, достоверно превосходя действие трианола не только по силе основного эффекта, но и по времени его проявления.

В условиях моделирования питуитрин-изадриновой модели инфаркта миокарда препарат МТ в дозе 2 мг/кг достоверно уменьшал в ткани сердца уровень маркерного продукта окислительной модификации белка - КФГ, тем самым оказывая антиоксидантное действие в полтора раза выше, чем у трианола, и в два раза выше, чем карведилола; оказывал выраженное противоишемическое действие, проявляемое в снижении суммарной степени смещения сегмента ST относительно изолинии ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> _{-фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle">} ST) до 23±13 мкВ (введение трианола обеспечивало снижение этого показателя ишемии миокарда до 34±21 мкВ, а карведилола - до 64±21 мкВ); проявлял выраженное энерготропное действие, повышая уровень АТФ в миокарде на 34% (введение препаратов сравнения трианола и карведилола приводило к повышению АТФ на 29,5% и 16,5% соответственно); повышал содержание РНК в цитоплазме кардиомиоцитов на 54%, оказывая протеинсинтетическое действие, что достоверно выше, чем после применения трианола и карведилола (повышение РНК на 51% и 28% соответственно); проявлял максимальный кардиопротективиый эффект по сравнению с аналогами, предотвращая гибель кардиомиоцитов, и снижал уровень МВ-КФК на 70% (трианол снижал активность МВ-КФК на 58%, а карведилол - на 46%).

Заявляемый препарат МТ в дозе 30 мг/кг обладает достоверно более выраженным, чем у трианола и карведилола, антигипертензивным действием, максимальное проявление которого наступает быстрее, чем у препаратов сравнения на 30-120 мин после введения спонтанно гипертензивным крысам линии HIСАГ.

Приведенные данные о фармакологических эффектах препарата МТ, трианола и карведилола являются доказательством явного преимущества применения заявляемого препарата.

Другим преимуществом препарата МТ является его более низкая токсичность по сравнению с трианолом. Так, ЛД₅₀ препарата МТ составляет 172 мг/кг при внутрибрюшинном введении крысам, а ЛД₅₀ трианола - 112 мг/кг.

Как видно из вышеприведенных результатов доклинических исследований эффективности заявляемого биологически активного вещества, бромид 1 - ( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-амино-1,2,4 триазолия (препарат МТ) при лечении инфаркта миокарда в острейшем и остром периодах и артериальной гипертензии по эффективности использования значительно превосходит по всем показателям эффективность использования для тех же целей известных средств и ближайшего структурного аналога.

Это определяет целесообразность патентоправовой охраны заявляемого вещества и разработку конкретных лекарственных форм на его основе для лечения инфаркта миокарда, в частности, в начальные его периоды, а также для его профилактики.

Источники информации

1. Бромид 1 -( -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -фенилэтил)-4-(п-диметиламинобензилиденамино)-1,2,4-триазолия, обладающий антиоксидантным, противоишемическим, -фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия (мт), обладающий кардиопротективным, противоишемическим, антигипертензивным, антиоксидантным, протеинсинтетическим и энерготропным действием, патент № 2404974" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -адреноблокирующим, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действием / Мазур И.А., Авраменко Н.А., Беленичев И.Ф., Волошин Н.А., Дунаев В.В., Загородних О.В., Стец В.Р., Фаворитов В.Н., Георгиевский Г.В. / Патент Украины № 28494, 12.05.97. / 15.01.2002. - № 1.

2. Воронина Т.А., Серединин С.Б. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.- МЗ РФ ЗАО ИИА Ремедиум, 2002. - 320 с.

3. Каверина Н.В., Чичканов Г.Г. Методические рекомендации по экспериментальному (фармакологическому) изучению препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве антиангинальных средств //Руководящие методические материалы по экспериментальному и иклиническому изучению новых лекарственных средств.- М., 1982. - С.61-69.

4. Коваленко В.М. Стан здоров'я народу Укрaïни у зв'язку iз хворобами системи кровообiгу та можливi шляхи його покращання. Аналiтично - статистичний посiбник для лiкарiв - кардiологiв, ревматологiв, терапевтiв загальноï практики / Пiд ред. В.М. Коваленка - Киïв. - 2004. - 124 с.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна, 2008. - 1206 с.

6. Рылова А.К., Розанов А.В. Терапия в-блокаторами в специальных группах пациентов (обзор результатов анализа в подгруппах исследований CIBIS 11, COMET, COPER-NICUS, MERIT HF)// Сердце. - 2003. - № 4. - С.190-196.

7. Прохорова М.А. Современные методы в биохимии. - Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. -368 с.

8. Стефанов А.В. Доклинические исследования лекарственных средств. - Киев: Авиценна, 2002. - 568 с.

9. Пирс Э. Гистохимия. - М., 1962. - 962 с.

10. Halliwell В., Gutteridge M.C. Free radicals in biology and medicine. - Oxfbrd: Claredon Press, 1985. - 347 p.