способ вакцинации птицы против гриппа

Формула изобретения

Способ вакцинации птиц против гриппа, включающий применение инактивированной вакцины в сочетании с иммуномодулятором, отличающийся тем, что в качестве иммуномодулятора используют мирамистин, причем вводят его интраназально по 0,2-0,3 мл в каждую носовую полость птицы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу вакцинации птиц, и может быть использовано при иммунизации инактивированной вакциной против гриппа.

Высокопатогенный грипп птиц - чрезвычайно контагиозная, вирусная болезнь домашних и диких птиц различных видов, склонная к панзоотическому течению, наносящая большой экономический ущерб птицеводству и представляющая реальную угрозу здоровью человечества.

Для специфической профилактики гриппа птиц, вызываемого подтипом H5N1, выпускается инактивированная эмульгированная вакцина, изготавливаемая ФГУП «Покровским заводом биопрепаратов». Иммунизации подвергают клинически здоровую птицу независимо от возраста, объем прививной дозы 0,5 см³. Через 28 дней при наличии напряженного иммунитета менее чем у 80% птицы проводят ревакцинацию (наставление по применению вакцины против гриппа птиц от 03 марта 2006 г. Регистрационный номер ПВР-1-3,5/01517).

Зачастую групповой иммунитет после применения этой вакцины составляет менее 80%, что требует повторного проведения иммунизации (Мезенцев С.В. Грипп птиц: эпизоотология и безопасность продукции / Мезенцев С.В. // Ветеринарный консультант. - 2006. - № 20. С.6-7).

Недостатком применения инактивированных вакцин является выработка у птицы низких показателей гуморального и клеточного иммунного ответа, обусловленного слабой стимуляцией механизмов защитных факторов, что требует дополнительного применения иммуномодуляторов - стимуляторов иммуногенеза.

Известен способ вакцинации птицы против гриппа, включающий подкожное введение вакцины с одновременной пероральной дачей иммуномодулятора в виде фоспренила в дозе 0,05 мл/кг (Повышение эффективности специфической профилактики против гриппа птиц / О.Н.Виткова и др. // Ветеринария. - 2007. - 10. - С.14-16).

Известный способ перорального введения иммуномодулятора малоэффективен, так как не учитывает возможности аэрогенного пути заражения при данной инфекционной болезни птиц, что требует дополнительной стимуляции механизмов местной защиты дыхательного тракта. К тому же известный иммуномодулятор не влияет на бактерии и вирусы, находящиеся на слизистой оболочке дыхательных путей, которые под влиянием «вакцинального стресса» могут спровоцировать респираторную реакцию и тем самым снизить эффективность иммунизации.

Задача изобретения - усилить общий иммунный ответ на введение инактивированных вакцин, активизировать механизмы гуморальной и клеточной защиты, тем самым повысить эффективность вакцинации птицы.

Технический результат - повышение иммуногенной активности инактивированной вакцины против гриппа птиц с одновременной стимуляцией механизмов местной защиты и санацией слизистых оболочек верхних дыхательных путей птиц.

Технический результат достигается тем, что в способе вакцинации птицы против гриппа, включающем применение инактивированной вакцины против гриппа в сочетании с иммуномодулятором, в качестве последнего, используют мирамистин, причем вводят его интраназально по 0,2-0,3 мл в каждую носовую полость птицы.

Сущность изобретения заключается в том, что при использовании инактивированной вакцины применяется мирамистин, относящийся к группе поверхностно-активных веществ (ПАВ).

Мирамистин обладает иммунадъювантным действием, в основе которого лежит повышение проницаемости цитоплазматических мембран лимфоидных клеток и усиление их метаболизма, а также интенсификация функциональной активности макрофагов, в результате чего последние более активно осуществляют фагоцитоз и презентацию антигена иммунокомпетентным клеткам (Мирамистин. Регистр лекарственных средств России / «Энциклопедия лекарств». - М.: «РЛС-2000». - 1999. - С.656).

В основе антибактериального действия мирамистина лежит гидрофобное взаимодействие препарата с липидными мембранами микроорганизмов, приводящее к их фрагментации и разрушению. Мирамистин не воздействует на оболочки клеток человека и животных, поскольку они, в отличие от оболочки бактериальной клетки, имеют значительно большую длину липидных радикалов, и гидрофобных взаимодействий с молекулами мирамистина не происходит.

Кроме того, препарат относится к малотоксичным веществам (4 класс), не кумулируется в организме и не обладает эмбриотоксическим эффектом.

Такой уникальный спектр свойств мирамистина с ассоциированной антибактериальной и иммуномодулирующей активностью отвечает требованиям, предъявляемым к препаратам, используемым для стимуляции иммунного ответа у животных.

Для изучения взаимодействия вакцины с мирамистином были проведены бактериологические и иммунологические исследования защитных факторов организма. В качестве препарата сравнения использовали фоспренил, который модулирует естественную резистентность и иммунитет, повышает устойчивость организма птиц к заболеваниям (регистрационный номер препарата ПВР-2-1.9/00010).

Санирующее действие мирамистина на верхний отдел дыхательных путей исследовали на курах яичного направления породы «Хайсекс белый» в возрасте 60 дней. Сформировали 2 группы по 5 голов в каждой. Первой группе интраназально вводили раствор мирамистина в объеме 0,2-0,3 мл. Вторая группа служила контролем и получала физиологический раствор в том же объеме.

Ингибирующее действие мирамистина определяли по изменению общего количества микрофлоры в пробах из гортани и трахеи. Бактериологические исследования проводили по общепринятым методикам.

Видовой состав контаминирующей микрофлоры при фоновом исследовании был представлен в основном стафилококками, стрептококками и бактериями группы кишечной палочки. При этом из числа исследованных проб кокки были обнаружены в 75%, а другая микрофлора в 25% (пастереллы, бактерии группы кишечной палочки и др.).

Через сутки однократное интраназальное введение мирамистина снижало количество кокковой микрофлоры на 94%, а в отношении других микроорганизмов на 87%. Микробная колонизация дыхательного тракта птицы во второй группе осталась на прежнем уровне.

Таким образом, использование мирамистина позволяет эффективно санировать верхние дыхательные пути птицы в отношении контаминирующей микрофлоры.

Повышение местной резистентности верхнего отдела респираторного тракта исследовали на курах яичного направления породы «Хайсекс белый» в возрасте 60 дней. Сформировали 2 группы птиц по 5 голов в каждой. Опытной группе интраназально вводили по 2-3 капли раствора мирамистина в каждую носовую полость. Другая группа птиц служила контролем и интраназально получала физиологический раствор в том же объеме. Состояние резистентности дыхательных путей оценивали через 7 дней с помощью мазков-отпечатков со слизистой оболочки носоглотки и смывов трахеального секрета.

В таблице 1 приведены данные по влиянию мирамистина на местную резистентность верхнего отдела респираторного тракта у кур.

Таблица 1
№ группы	Лейкоциты фагоцитирующие, %	Лейкоциты не фагоцитирующие, %	Фагоцитарное число, ед.	Секреторный лизоцим, мкг/мл
фон	1,5±0,35	20,4±0,22	1,4±0,2	6,1±0,4
1.Опытная	5,9±0,48***	17,4±0,55 **	2,4±0,2 **	14,2±0,2 ***
2.Контроль	1,5±0,37	19,3±0,58	1,4±0,3	5,8±0,6
Примечание: достоверность различий *, ** , *** - к фону; , , - к контрольной группе - Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.

Из таблицы 1 следует, что показатели контрольной группы существенно не отличаются от фона.

В опытной группе наблюдалось увеличение числа фагоцитирующих лейкоцитов до 5,9±0,48% и снижение содержания не фагоцитирующих до 17,4±0,55%, по отношению к контролю. Одновременно обнаруживается повышение фагоцитарного числа до отметки 2,4 ед. Кроме того, зарегистрировано усиление продукции секреторного лизоцима, которое составило 14,2±0,2 мкг/мл.

Таким образом, интраназальное введение мирамистина увеличивает количество лейкоцитов, фагоцитирующих микроорганизмы, а также концентрацию лизоцима в трахеальном секрете, что, в свою очередь, ведет к повышению резистентности респираторного тракта у птиц.

Исследование специфического иммунного ответа к вирусу гриппа H5N1 проводили на бройлерах в возрасте 40 дней, подобранных по принципу аналогов. Из 45 птиц были сформированы 2 опытные и 1 контрольная группы, по 15 голов в каждой. Для вакцинации использовали инактивированную эмульгированную вакцину против гриппа птиц, изготовленную ФГУП «Покровским заводом биопрепаратов», в рекомендуемой наставлением дозе 0,5 см³ внутримышечно. Первую группу иммунизировали с одновременным интраназальным введением 0,01% раствора мирамистина по 2-3 капли, что составляет около 0,2-0,3 мл на голову. Второй группе перорально, согласно наставлению, применяли 0,4% раствор фоспренила в дозе 0,05 мл/кг, одновременно с внутримышечной инъекцией вакцины. Третья группа служила контролем и вакцинировалась без использования иммуностимулятора.

Использование при вакцинации птиц разных иммуностимулирующих препаратов привело к неодинаковому росту уровня антител, о чем свидетельствуют показатели опытных групп (табл.2). На 21 сутки титр антител у группы птиц, получавших мирамистин, достоверно увеличился по отношению к контролю до 5,2±0,43 log₂ (P<0,001), тем самым достигнув уровня защиты. Титр антител у птиц, где применяли фоспренил, оказался ниже и составил 4,2±0,32 log₂ (P<0,001). На 28 день уровень антигемагглютининов во второй группе птиц был равен 5,8±0,8 log₂ (Р<0,05), а в первой - 7,8±0,67 log₂ (P<0,001), что почти в 2 раза выше минимального защитного уровня. Уровень средних геометрических титров контрольной группы на 28 день так и не смог достичь защитных и составил 3,4±0,7 log₂ .

В таблице 2 показана динамика антигемагглютининов в РТГА после вакцинации кур против гриппа.

Таблица 2
Группы	Препарат	Возраст птицы	Титр антигемагглютининов
21 день	28 день
фон		40 дней	1,2±0,32 log2
1.Опытная группа	Вакцина ГП + мирамистин интраназально	40 дней	5,2±0,43 log2 ***	7,8±0,67 log2***
2.Опытная группа	Вакцина ГП + фоспренил per os	40 дней	4,2±0,32 log2 ***	5,8±0,8 log2 ***
3.Контрольная группа	Вакцина ГП	40 дней	2,0±0,53 log 2	3,4±0,7 * log2
Примечание: достоверность различий *, ** , *** - к фону; , , - к контрольной группе - Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.

Таким образом, уровень титров антител у птиц при применении противогриппозной вакцины в сочетании с мирамистином оказался выше, чем при использовании вакцины per se на 4 log₂, а при сочетании вакцины с фоспренилом на 2 log₂.

Представленные данные убедительно свидетельствуют о высокой иммуномодулирующей активности мирамистина, обусловленной не только активизацией механизмов местной иммунной защиты, но и санацией слизистой оболочки верхних дыхательных путей от сопутствующей микрофлоры, что способствует формированию полноценного иммунного ответа у прививаемой птицы. К тому же способ не требует наличия специального оборудования для введения иммуномодулятора.

Предлагаемый нами способ вакцинации птицы против гриппа и болезни Ньюкасла успешно апробирован в ряде птицеводческих хозяйств Липецкой области.