способ коррекции эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином при l-name индуцированном дефиците оксида азота
Классы МПК: | G09B23/28 в медицине A61K38/18 стимуляторы роста; регуляторы роста A61P9/14 вазопротекторы; антигеморройные средства; средства для лечения варикозного расширения вен; капиллярные стабилизаторы |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Колесник Инга Михайловна (RU), Корокина Лилия Викторовна (RU), Даниленко Людмила Михайловна (RU), Корокин Михаил Викторович (RU), Орлова Анжелика Юрьевна (RU), Артюшкова Елена Борисовна (RU), Рагулина Вера Алексеевна (RU), Артюшкова Екатерина Владимировна (RU), Белоус Александр Сергеевич (RU), Гудырев Олег Сергеевич (RU), Цепелев Василий Юрьевич (RU), Стабровская Надежда Владимировна (RU) |
Патентообладатель(и): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Колесник Инга Михайловна (RU), Корокина Лилия Викторовна (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2009-10-29 публикация патента:
20.01.2011 |
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого лабораторным животным моделируют эндотелиальную дисфункцию, внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение семи суток. При этом степень развития дисфункции оценивают по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию эндотелиальной дисфункции проводят подкожным введением рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первый, третий и пятый дни эксперимента в утренние часы. Способ обеспечивает коррекцию эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота. 2 табл.
Формула изобретения
Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, моделируемой внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, подкожно вводят рекомбинантный эритропоэтин в дозе 50 МЕ/кг на первый, третий и пятый дни эксперимента в утренние часы.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ лечения ишемии центральной нервной системы, включающий введение терапевтически эффективной дозы рекомбинантного эритропоэтина, описанный Голд Майкл, Рензи Майкл и др. патент на изобретение RU 2341284 С2. Изобретение позволяет стимулировать функциональное восстановление центральной нервной системы, ингибировать апоптоз и воспаление в центральной нервной системе при отсроченном начале лечения.
Однако данный способ не охватывает оценку функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма и влияние малых доз рекомбинантного эритропоэтина на эндотелиальную дисфункцию при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.
Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, включающий использование рекомбинантного эритропоэтина.
Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно проводится ее коррекция путем подкожного введения рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 180-200 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно ежедневно в дозе 25 мг/кг/сут. Рекомбнантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медикобиологического агентства г. Санкт-Петербург, РОССИЯ) вводили подкожно в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента в утренние часы. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и рекомбинантного эритропоэтина привело к оптимальному снижению показателей исходных значений АД, так как исходные цифры АД были ниже: САД - 132,3±6,4, ДАД - 103,0±6,6 мм рт.ст. Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ (таблица 1).
Таблица 1. | ||||
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином. | ||||
Группы животных | Функциональные пробы | САД, мм рт.ст. | ДАД, мм рт.ст. | ЧСС, уд. в мин |
Интактные | Исходные | 137,7±3,7 | 101,9±4,3 | 420,0±9,0 |
ЭЗВ с АХ | 84,3±4,5 | 38,7±2,8 | 416,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 83,0±3,7 | 42,1±4,4 | 415,0±10,0 | |
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) | Исходные | 190,3±6,7* | 145,0±3,9* | 428,0±11 |
ЭЗВ с АХ | 110,6±5,2* | 82,8±6,6* | 426,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 88,7±4,7 | 50,8±4,2 | 426,0±13,0 | |
L-NAME (25 мг/кг) + эритропоэтин (50 МЕ/кг) | Исходные | 132,3±6,4** | 103,0±6,6** | 350,0±16,2 |
ЭЗВ с АХ | 84,3±3,7** | 48,6±1,3** | 322,0±12,8 | |
ЭНЗВ с НП | 94,3±7,1 | 53,6±2,7 | 355,9±14,9 | |
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных | ||||
** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME |
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился рекомбинантный эритропоэтин, это отношение соответствовало значению - 1,8±0,2 (таблица 2).
Таблица 2. | |||||
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME рекомбинантным эритропоэтином. | |||||
Группы животных | Функцио-нальные пробы | Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) | Время сосудистой реакции (с) | Площадь сосудистой реакции (усл. ед.) | Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП |
Интактные | АХ | 59,9±2,9 | 42,2±0,8 | 1268,0±74,8 | 1,1±0,1 |
НП | 61,0±3,0 | 45,1±1,0 | 1375,3±93,7 | ||
L-NAME | АХ | 68,0±4,1 | 20,0±1,4 | 695,3±87,6* | 5,4±0,6* |
НП | 98,0±2,0 | 67,4±1,4 | 3322,7±116,7* | ||
L-NAME + эритропоэтин 50 МЕ/кг | АХ | 60,5±1,8 | 42,6±3,6** | 1141±168,2** | 1,8±0,2** |
НП | 67,1±3,6 | 72,7±4** | 1934,9±259,3** | ||
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных | |||||
** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME |
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции рекомбинантным эритропоэтином на фоне введения L-NAME.
Класс A61K38/18 стимуляторы роста; регуляторы роста
Класс A61P9/14 вазопротекторы; антигеморройные средства; средства для лечения варикозного расширения вен; капиллярные стабилизаторы