медицинские салфетки, содержащие дезоксирибонуклеазу и липосомы для наружного применения

Формула изобретения

1. Медицинские салфетки из влагоустойчивой бумаги и нетканого материала «Спанбонд», содержащие в качестве активного ингредиента 0,2-0,4 мас.% дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы), 2,0-4,0 мас.% липосомы и фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.

2. Медицинские салфетки по п.1, дополнительно содержащие один или более чем один противовоспалительный ингредиент.

3. Медицинские салфетки по пп.1 и 2, содержащие дополнительно РНК-азу, в качестве противовоспалительного ингредиента хлоргексидина биглюконат и бензидамина гидрохлорид, в качестве носителя воду деминерализованную, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

РНК-аза	0,2-0,4
ДНК-аза	0,2-0,4
липосомы	2-4
хлоргексидина биглюконат	0,05-0,2
бензидамина гидрохлорид	0,5-5,0
вода деминерализованная	90,00-97,05,
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к изделиям медицинского назначения для местного применения, содержащим фермент дезоксирибонуклеазу (ДНК-азу) и липосомы, которые могут быть использованы в медицине для профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК-содержащими вирусами, такими как герпес, опоясывающий лишай, папиллома человека, аденовирусы и другие.

Известны медицинские салфетки «Антисепт» ТУ 9393-001-49921556-2002 (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия) из влагоустойчивой бумаги и нетканого материала «Спанбонд» с хлоргексидином биглюконатом для обработки кожи и мелких травм кожи.

Из патента RU 0000043766 U1, Генкин Д.Д., Еуц В.В., 10.02.2005 (формула, описание), известно косметическое изделие, в частности салфетки, выполненное из материала, содержащего порошок фермента ДНК-азы, при этом частицы порошка фермента ДНК-азы заключены в липосомы. Изделие дополнительно содержит антиоксидант.

Известна фармацевтическая субстанция - Дезоксирибонуклеаза порошок (ООО «Самсон Мед», Россия) для парентерального применения, используемая для лечения и профилактики герпеса.

Известна фармацевтическая субстанция - Рибонуклеаза аморфная порошок (ООО «Самсон Мед», Россия) для парентерального применения, используемая для лечения и профилактики клещевого энцефалита.

Известны фармацевтические средства для местного применения, используемые для профилактики герпеса, содержащие противовирусные компоненты, не являющиеся ферментами, например экстракты лекарственных растений, экстракт копеечника альпийского (Алпизарин, ВИЛАР, Россия), ациклические нуклеозиды, ацикловир (Зовиракс, Глаксо, Великобритания).

Известны косметические средства для местного применения, используемые для профилактики герпеса, содержащие противовирусные компоненты, не являющиеся ферментами, например экстракты лекарственных растений и германийорганические соединения (Помада профилактическая противогерпетическая "Антигерпес" (Р16 9158915854 71.100.70) 292472. ТУ 9124-001-00358210-96), глицирризиновая кислота - мазь «Герпинат» бан. 20 мл; № 77.01.12.915.П.02970.02.00 от НИИ атеросклероза РАЕН (Россия), ИНАТ-ФАРМА (Россия) (http://www.biomedservice.ru/publish/pub16.htm).

Известна косметическая ферментсодержащая композиция, где фермент выбран из группы протеиназ, включающей в себя трипсин, химотрипсин, бромелаин, папаин и фицин, а также из лизоцима, эластазы, -липазы и -амилазы, которая применяется для лечения акне, ухода за кожей и очистки кожи (DE 4305460). Описанная композиция не содержит ферментов нуклеаз, обладающих прямой противовирусной активностью, и, следовательно, не может быть использована для профилактики вирусных инфекций.

Медицинские салфетки, содержащие фермент - ДНК-азу и липосомы, для местного применения при профилактике вирусных инфекций не описаны.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить медицинские салфетки для местного применения, содержащие фермент ДНК-азу, хлоргексидин и липосомы, которые могут быть использованы для профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК-содержащими вирусами, такими как герпес, опоясывающий лишай, папиллома человека, аденовирусы и другие.

Согласно настоящему изобретению предложены медицинские салфетки из влагоустойчивой бумаги и нетканого материала «Спанбонд», содержащие в качестве активного ингредиента 0,2-0,4 мас.% дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы), 2,0-4,0 мас.% липосомы и фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.

В качестве предпочтительного воплощения заявленного изобретения предложены медицинские салфетки, указанные выше, дополнительно содержащие один или более чем один противовоспалительный ингредиент.

Наиболее предпочтительной является косметическая композиция, содержащая ДНК-азу в качестве активного ингредиента, РНК-азу, хлоргексидина биглюконат и бензидамина гидрохлорид в качестве противовоспалительных ингредиентов и фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

РНК-аза	0,2-0,4
ДНК-аза	0,2-0,4
липосомы	2-4
хлоргексидина биглюконат	0,05-0,2
бензидамина гидрохлорид	0,5-5,0
вода деминерализованная	90,00-97,05
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Активным ингредиентом заявленных медицинских салфеток являются липосомы, ферменты: РНК-аза или ДНК-аза либо их смесь. РНК-аза обладает специфической способностью деполимеризовать РНК вирусы до кислоторастворимых моно- и олигонуклеотидов, задерживая размножение некоторых РНК-содержащих вирусов. ДНК-аза обладает способностью задерживать развитие вирусов герпеса, аденовирусов и других ДНК-содержащих вирусов, не повреждая при этом ДНК клеток макроорганизма (Машковский М.Д. Лекарственные средства, Том 2, Москва, Новая Волна, 2000, стр.111-112).

Для приготовления композиции используют лекарственные ферментные препараты «Рибонуклеаза» (аморфная) и «Дезоксирибонуклеаза». Оба препарата получены из поджелудочной железы крупного рогатого скота путем экстракции из измельченного сырья с последующей очисткой и лиофильной сушкой. Лиофильно высушенный порошок «Рибонуклеаза аморфная» используется в виде инъекционных препаратов в медицине для лечения клещевого энцефалита, в виде аэрозоля и ингаляций при воспалительных заболеваниях дыхательных путей, в виде присыпок и примочек в стоматологии при гингивите и пародонтозе. Лиофильно высушенный порошок «Дезоксирибонуклеаза» используется при герпетических кератитах и кератоувеитах, остром катаральном воспалении верхних дыхательных путей аденовирусной природы и пневмонии.

РНК-азу и ДНК-азу в форме указанных препаратов не применяют для профилактики вирусных инфекций вследствие их затрудненного всасывания через неповрежденную кожу и низкого уровня потребительских свойств, а также отсутствия стабильности при содержании влаги свыше 10% и в растворе с потерей активности ферментов в течение суток.

Неожиданно обнаружено, что РНК-аза и/или ДНК-аза и липосомы могут быть включены в состав медицинских салфеток для местного применения с сохранением активности указанных ферментов в течение длительного времени, несмотря на то, что такая композиция содержит значительное количество воды (до 90%).

Медицинские салфетки по настоящему изобретению обычно изготавливают общепринятыми способами, используя твердые или жидкие фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты, выбранные из консервантов, полимерных носителей и других эксципиентов, которые целесообразны для приготовления композиций для местного применения.

Дополнительными преимуществами указанных медицинских салфеток является способность не только обеспечивать гигиенический уход, но и оказывать лечебно-профилактическое действие в отношении герпетических высыпаний, а также быстро проникать через кожу и, соответственно, быстрая всасываемость, удобство применения.

Быстрое проникновение через кожу обусловлено связыванием ферментов с липосомами, представляющими собой полимерную матрицу на основе высокоактивных гидрированных лецитинов в комбинации с холестерином, которые используют в косметологии в составе препаратов против старения кожи, для ухода за кожей, препаратов до и после загара и препаратов для ампульной косметики.

Кроме того, активные ингредиенты могут применяться в комбинации с одним или более чем одним противовоспалительным ингредиентом, таким как хлоргексидина биглюконат, бензидамина гидрохлорид, РНК-аза, обеспечивая дополнительное преимущество заявленной композиции.

Эффективность заявленных медицинских салфеток обусловлена активностью входящих в ее состав ферментов. Обнаружено, что медицинские салфетки для местного применения, содержащие РНК-азу 0,2-0,4 мас.% и/или ДНК-азу 0,2-0,4 мас.%, обладают стабильностью в отношении активности ферментов при ее длительном хранении, в то время как активность этих ферментов, приготовленных в виде раствора, быстро падает. Следовательно, заявленная композиция может быть использована для эффективной профилактики РНК- и ДНК-содержащих вирусов, таких как вирус клещевого энцефалита, вирус герпеса, опоясывающего лишая, папилломы человека, аденовирусов и других.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1

Медицинские салфетки, содержащие ДНК-азу, имеют следующий состав:

ДНК-аза	0,2
липосомы	2
хлоргексидина биглюконат	0,05
бензидамина гидрохлорид	0,5
вода деминерализованная	97,25
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют хлоргексидина биглюконат и бензидамина гидрохлорид, добавляют липосомы, ДНК-азу, полученный раствор перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют. Полученным раствором пропитывают влагоустойчивую бумагу с импрегнированным нетканым материалом «Спанбонд» и упаковывают.

ПРИМЕР 2

Медицинские салфетки, содержащие смесь РНК-азы, и ДНК-азы имеют следующий состав:

РНК-аза	0,4
ДНК-аза	0,4
липосомы	4
хлоргексидина биглюконат	0,2
бензидамина гидрохлорид	5,0
вода деминерализованная	90,00
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличается тем, что из ферментов дополнительно используют рибонуклеазу.

ПРИМЕР 3

Медицинские салфетки, содержащие ДНК-азу, имеют следующий состав:

ДНК-аза	0,2
липосомы	2
хлоргексидина биглюконат	0,05
вода деминерализованная	97,75
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличается тем, что из состава исключен бензидамина гидрохлорид.

ПРИМЕР 4

Медицинские салфетки, содержащие ДНК-азу, имеют следующий состав:

ДНК-аза	0,3
липосомы	3,0
хлоргексидина биглюконат	0,1
вода деминерализованная	96,60
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличается тем, что из состава исключен бензидамина гидрохлорид.

ПРИМЕР 5

Медицинские салфетки, содержащие ДНК-азу, имеют следующий состав:

ДНК-аза	0,25
липосомы	3,0
хлоргексидина биглюконат	0,1
вода деминерализованная	96,65
Влагоустойчивая бумага
Нетканый материал «Спанбонд»

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличается тем, что из состава исключен бензидамина гидрохлорид.

ПРИМЕР 6

Оценка стабильности ферментов в медицинских салфетках для местного применения

Поскольку главным недостатком ферментов является их нестабильность при длительном хранении готовых лекарственных форм на их основе в течение срока годности, была проведена сравнительная оценка сохранения активности ферментов при хранении в виде раствора и в виде композиции для местного применения (на примере геля).

Активности РНК-азы и ДНК-азы определяли по следующим методикам.

1. Определение активности ДНК-азы проводили по методу Кунитца. За единицу активности ДНК-азы принимают наименьшее количество фермента, которое при воздействии его на субстрат в условиях опыта освобождает такое количество кислото-растворимых продуктов, которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 260 нм на одну единицу. В контрольную и две опытные пробирки вносят по 0,5 мл субстрата (ДНК) и по 0,3 мл 0,2 М трис-буфера (рН=7). В опытные предварительно прогретые пробирки вносят 0,2 мл раствора фермента. Пробы термостатируют в течение 30 минут при температуре 37,5°С. Затем к пробам прибавляют 1 мл охлажденного в ледяной бане 1н раствора хлорной кислоты (HClO₄), в контрольную - 0,2 мл раствора фермента. Пробирки встряхивают и выдерживают в ледяной бане 16-25 минут. Образовавшиеся осадки отделяют центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. Из надосадочного слоя отбирают 0,5 мл раствора, добавляют 2,5 мл воды и измеряют оптическую плотность при =260 нм.

2. Определение активности РНК-азы проводили по методу Анфинсена. Метод основан на определении кислоторастворимых веществ, освобождаемых РНК-азой в результате гидролиза РНК в определенных условиях. За единицу активности РНК-азы принимают наименьшее количество фермента, вызывающее при воздействии его на субстрат (РНК) в течении 30 минут при 37°С освобождение такого количества кислоторастворимых веществ (олигонуклеотидов), которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 260 нм на одну единицу. В контрольную и две опытные пробирки вносят по 2,5 мл раствора хлорно-кислого бария и помещают их в сосуд со льдом. В чистые пробирки заливают по 0,25 мл субстрата (РНК) и прогревают в течение 5 минут на водяной бане при 37±0,5°С. В опытные вносят 0,25 мл раствора фермента. Пробы термостатируют при 37±0,5°С в течение 30 минут. Затем к пробам прибавляют 2,5 мл охлажденного хлористого бария, а в контрольную пробирку еще 0,25 мл раствора фермента. Пробирки встряхивают и выдерживают на льду 30 минут. Образовавшиеся осадки отделяют центрифугированием при 6000 оборотах в минуту в течение 10 минут. Из надосадочного слоя отбирают 0,5 мл раствора, разводят 2,5 мл водой и измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре при =260 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения - контрольная проба.

Результаты приведены в следующей таблице.

Таблица
Исследуемые образцы	Основные ингредиенты	Стабильность при хранении
1	2	3
Медицинские салфетки № 1	Согласно Примеру 1	Активность 95% для РНК-азы и 80% для ДНК-азы в течение 1 года наблюдения
Медицинские салфетки № 2	Согласно Примеру 2	Активность 82% для ДНК-азы в течение 2 лет наблюдения
Медицинские салфетки № 3	Согласно Примеру 3	Активность 96% для ДНК-азы в течение 2 лет наблюдения
Раствор нативного фермента		Активность 40% для РНК-азы в течение 1 суток

Как видно из представленной таблицы, введение ферментов в композиции для местного применения позволяет получить стабильные при хранении медицинские салфетки для местного применения, используемые для гигиенического ухода и при профилактике вирусных инфекций. Несмотря на то, что при введении ферментов в состав таких салфеток происходит незначительная потеря ферментативной активности, при дальнейшем хранении в течение 2 лет ферменты не изменяют своей активности благодаря фиксации лабильной структуры фермента липосомами.

Содержание хлоргексидина биглюконата, бензидамина гидрохлорида определяют суммарно по потере в массе при высушивании с выдерживанием в сушильном шкафу при температуре 100-105°С до постоянного веса.