способ количественного определения марганца, свинца и никеля в желчи методом атомно-абсорбционного анализа с атомизацией в пламени

Формула изобретения

Способ количественного определения марганца, свинца и никеля в желчи методом атомно-абсорбционного анализа с атомизацией в пламени, включающий отбор желчи и определение в ней количественного содержания тяжелых металлов с помощью метода атомно-абсорбционной спектрометрии, отличающийся тем, что после отбора желчи производят ее замораживание, затем размораживание, при котором одновременно, начиная с частичного мягкого размораживания, осуществляют гомогенизацию желчи посредством перемешивания, далее производят отбор гомогенизированной пробы желчи для подготовки к анализу, затем в полученную пробу вводят концентрированную азотную кислоту в объемном соотношении 1:1 соответственно, смесь выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, затем нагревают 5-10 мин при температуре 120±5°С, далее выдерживают не менее 2,5 ч при комнатной температуре, затем для получения аналита к полученной смеси добавляют концентрированную перекись водорода в объемном соотношении 1:1 к объему пробы желчи, аналит нагревают 5-10 мин при температуре 120±5°С, охлаждают до комнатной температуры и далее с помощью метода атомно-абсорбционной спектрометрии, используя градуировочный график, производят определение в аналите количественного содержания конкретного вида металла - марганца, свинца и никеля, при этом концентрированную азотную кислоту и концентрированную перекись водорода берут в объемном соотношении 1:1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицинской химии, в частности к медицинским токсикологическим исследованиям, и может быть использовано при диагностике экологически обусловленных патологий, вызванных наличием тяжелых металлов в организме человека.

Изобретение может найти применение в лабораториях биохимии, специализированных учреждениях и клинико-диагностических лабораториях медицинских центров.

В результате возрастающего антропогенного воздействия наблюдается прогрессирующее загрязнение окружающей среды геохимическими элементами, в том числе тяжелыми металлами. Накоплению различных загрязняющих веществ в атмосфере, почве и воде способствуют выбросы промышленных предприятий, бытовые и сельскохозяйственные отходы. Указанные загрязняющие вещества обладают токсическим действием на живые организмы. Так накопление тяжелых металлов (например, свинца, марганца, никеля, цинка, кадмия, кобальта, хрома и т.п.) в организме может привести к поражению центральной нервной и сердечно-сосудистой систем, способствовать возникновению хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта и т.п. По содержанию тяжелых металлов в биосредах (например, в желчи) можно выявлять симптомы различных морфофункциональных нарушений гепатобиллиарной системы и желудка человека, проживающего в условиях воздействия высокой антропогенной нагрузки.

В настоящее время известен ряд способов определения конкретных видов тяжелых металлов в биосредах методом атомно-абсорбционного анализа, а именно:

- по патенту РФ № 2342659 известен «Способ определения содержания кадмия в органах и мышечной ткани свиней», согласно которому по уровню марганца и калия в копытном роге и по соответствующим уравнениям регрессии устанавливают содержание кадмия;

- по патенту РФ № 2009484 известен «Способ определения кобальта в биологическом материале», согласно которому производят минерализацию пробы биоматериала, обработку его пикриновой кислотой, экстракцию хлороформным раствором - метилциклогексен 1,1 - дикарбоновой кислотой, обработку экстракта этиловым спиртом с последующим атомно-абсорбционным анализом;

- по патенту РФ № 1257520 известен «Способ определения тяжелых металлов в эктодермальных тканях», согласно которому пробу волос или ногтей измельчают, добавляют к ним 30%-ный раствор тетраметиламмония, нагревают, далее разбавляют бидистиллированной водой, центрифугируют, отделяют раствор 1, а нерастворившийся осадок переводят в растворимую форму азотной кислотой и пергидролем с получением раствора 2, далее в указанных растворах методом атомно-абсорбционного анализа определяют кобальт, никель, медь, марганец, цинк.

Однако все указанные известные способы являются сложными, характеризуются длительным временем определения и не позволяют использовать в качестве биоматериала желчь.

Наиболее близким к предлагаемому техническому решению по технической сущности является Способ определения содержания железа, цинка, никеля в желчи методом атомной абсорбции, приведенный в разделе 4.1 Методических указаний МУК 4.1.775-99, утвержденных 06.07.1999 г. и разработанных Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России.

Согласно указанному известному способу производят отбор проб желчи при дуоденальном зондировании в объеме 5 см³ и с помощью атомно-абсорбционного анализа посредством прямого определения производят измерение концентрации металлов, при этом результаты измерений регистрируют по показаниям прибора с цифровой индексацией откалиброванного согласно рабочим стандартным растворам определяемого металла и представляют в виде: Х _ср.±0,25·Х_сp., мкг/см³, где Х_ср. - среднее значение замеренных концентраций.

Недостатком указанного способа является нестабильность результатов анализа при исследовании проб желчи неоднородной по вязкости и составу, кроме того, не исключено влияние органической составляющей. В случаях неоднородности желчи достоверность полученных результатов исследований превышает допустимые значения нормативов оперативного контроля точности, заявленных в известной упомянутой методике.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в повышении точности количественного определения марганца, свинца и никеля в желчи за счет перевода пробы желчи в однородное гомогенное состояние, разложения органической составляющей и, тем самым, снижения ее влияния при одновременной экономии используемого биоматериала.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения марганца, свинца и никеля в желчи методом атомно-абсорбционного анализа с атомизацией в пламени, включающим отбор желчи и определение в ней количественного содержания тяжелых металлов с помощью метода атомно-абсорбционной спектрометрии, при этом после отбора желчи производят ее замораживание, затем размораживание, при котором одновременно, начиная с частичного мягкого размораживания, осуществляют гомогенизацию желчи посредством перемешивания, далее производят отбор гомогенизированной пробы желчи для подготовки к анализу, затем в полученную пробу вводят концентрированную азотную кислоту в объемном соотношении 1:1 соответственно, смесь выдерживают при комнатной температуре 15-20 минут, затем нагревают 5-10 минут при температуре 120±5°С, далее выдерживают не менее 2,5 часов при комнатной температуре, затем для получения аналита к полученной смеси добавляют концентрированную перекись водорода в объемном соотношении 1:1 к объему пробы желчи, аналит нагревают 5-10 минут при температуре 120±5°С, охлаждают до комнатной температуры и далее с помощью метода атомно-абсорбционной спектрометрии и, используя градуировочный график, производят определение в аналите количественного содержания конкретного вида металла - марганца, свинца и никеля, при этом концентрированную азотную кислоту и концентрированную перекись водорода берут в объемном соотношении 1:1.

Указанный технический результат при реализации предлагаемого способа количественного определения марганца, свинца и никеля в желчи методом атомно-абсорбционного анализа с атомизацией в пламени, достигается за счет следующего.

Необходимо пояснить, что желчь достаточно часто представляет собой неоднородную биологическую среду. Она содержит жидкую фазу, слизь, различные сгустки, включения осадка, мешающие проведению анализа. Поэтому, используя натуральную, т.е. предварительно неподготовленную, биосреду при исследованиях возникают большие колебания в определениях, часто засоряется капилляр спектрометра.

Благодаря тому, что перед исследованиями желчь замораживают, а затем размораживают, начиная ее перемешивание уже при частичном мягком размораживании (уже при наличии ледяной «каши»), происходит гомогенизация пробы, снижается ее вязкость, т.к. в ледяной «каше» измельчаются сгустки, крупные включения, слизь и смешиваются с жидкой фазой. После этого возможен отбор пробы пипеткой или дозатором для дальнейшей подготовки ее к анализу.

Для достижения однородности пробы и разрушения органической матрицы в нее последовательно добавляют концентрированную азотную кислоту и концентрированную перекись водорода, с нагревом после введения каждого указанного реагента 5-10 минут при температуре 120±5°С для растворения остаточных форм осадка.

Добавлением к желчи указанных реагентов (концентрированной азотной кислоты и концентрированной перекиси водорода) последовательно в их заявленном количественном соотношении между собой и с объемом пробы, обеспечивается химическая модификация анализируемого материала с образованием растворимых соединений и количественного перевода исследуемых металлов в раствор, перевод пробы в форму, пригодную для анализа.

Нагревание и выдерживание смеси пробы желчи с концентрированной азотной кислотой при комнатной температуре не менее 2,5 часов обеспечивает разложение (минерализацию) органической составляющей желчи, способствует удалению образовавшихся газов.

Пробоподготовка в предлагаемом способе проходит практически в одной пробирке, что снижает риск загрязнения пробы от посуды и возможные потери при необходимости переноса пробы.

Благодаря вышеуказанным операциям, их последовательности и заявленным режимам, обеспечивается получение раствора аналита из пробы желчи, который уже может быть использован для проведения ряда исследований, результаты которых будут гарантированно стабильными и точными, что и было доказано экспериментальным путем.

Опыты показали, что отступление в меньшую сторону от заявленных объемных соотношений пробы желчи и вводимых в нее объемов концентрированной азотной кислоты и концентрированной перекиси водорода, может привести к неполному окислению органической составляющей и завышенным результатам, видимо, на фоне матричного эффекта, а при отступлениях в большую сторону - увеличивается разбавление пробы, что может привести к выходу из диапазона чувствительности метода, кроме того, кислотность аналита не должна превышать норм, указанных в инструкции по эксплуатации спектрофотометра.

Нагревание смеси пробы желчи с концентрированной азотной кислотой, а потом с концентрированной перекисью водорода менее 5 мин при температуре 120±5°С может привести к неполной минерализации и недостаточной дегазации аналита, а при нагреве свыше 10 мин происходит слишком бурное кипение, разбрызгивание и значительное упаривание пробы, что приводит к искажению результатов.

Выдерживание смеси пробы желчи с концентрированной азотной кислотой после указанного нагрева не менее 2,5 часов при комнатной температуре обеспечивает разрушение органической матрицы. Уменьшение этого этапа пробоподготовки часто приводит к неполной минерализации, что не гарантирует количественный перевод исследуемого элемента в раствор.

Отбор пробы желчи для приготовления одной порции аналита осуществляют в объеме 1 см³, но не более 2 см³, т.к. реакция может проходить достаточно бурно и необходимо подбирать другие условия для минерализации.

При осуществлении предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:

- производят отбор желчи при дуоденальном зондировании в объеме приблизительно 5 см³ (минимальный объем 2 см³ );

- после отбора желчи производят ее замораживание, т.е. получают твердую фазу;

- затем начинают ее размораживание при комнатной температуре;

- при размораживании уже при частичном мягком размораживании одновременно осуществляют гомогенизацию желчи посредством перемешивания (перемешивание необходимо начинать уже при образовании ледяной «каши», т.е. это и характеризует частичное, мягкое размораживание, и далее перемешивать до полного размораживания);

- далее производят отбор гомогенизированной пробы желчи в чистую пробирку, предпочтительно, в объеме 1 см³ для подготовки к анализу;

- затем вводят в нее в объемном соотношении 1:1, т.е. в объеме 1 см³, концентрированную азотную кислоту с концентрацией 70%;

- смесь выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, затем нагревают 5-10 мин в пробирочном электронагревателе, например, марки HACH COD REACTOR, при температуре 120±5°С;

- и далее смесь выдерживают не менее 2,5 часов (в преимущественном варианте 2,5-3 часа) при комнатной температуре,

- затем для получения аналита к полученной смеси добавляют концентрированную перекись водорода с концентрацией 33%; в объемном соотношении 1:1 (т.е. 1 см³) к объему пробы желчи (следует указать, что для получения аналита концентрированную азотную кислоту и концентрированную перекись водорода берут в объемном соотношении 1:1, т.е. в данном примере по 1 см³);

- аналит вновь нагревают в пробирочном электронагревателе 5-10 мин при температуре 120±5°С,

- охлаждают до комнатной температуры,

- для каждой серии опытов ставят 2 холостые пробы, повторяя процедуру подготовки аналита, заменяя желчь очищенной бидистиллированной водой. Измерение холостых проб проводят вместе с реальными пробами;

- объемы полученного аналита и холостой пробы фиксируют, в случае упаривания доводят до 3 см³ (соответственно первоначальному суммарному объему пробы желчи и добавленных реактивов) очищенной бидистиллированной водой,

- и далее методом атомно-абсорбционной спектрометрии (используя, например, атомно-абсорбционный спектрофотометр марки Perkin Elmer 3110 или др.), используя градуировочный график, построенный методом абсолютной калибровки на аттестованных смесях растворов металлов, производят определение в аналите количественного содержания конкретного вида металла: свинца, марганца и никеля.

Определение на атомно-абсорбционном спектрофотометре начинают с установки в прибор спектральной лампы, соответствующей определяемому металлу, и прогревают не менее 20 мин (согласно инструкции по эксплуатации). Для измерения используется поглощение с длиной волны, равной максимуму поглощения определяемого металла при прохождении через содержащий пары атомов металлов слой воздуха: марганца - 248,3 нм; свинца - 283,3 нм; никеля - 232,2 нм. Монохроматор устанавливают на нужную длину волны, выбирают ширину спектральной щели, ставят на распыление очищенную бидистиллированную воду, подбирают необходимое соотношение газов (ацетилен - воздух) для поддержания горения и поджигают пламя. Капилляр, подающий раствор в пламя, опускают в 1%-ный раствор азотной кислоты и определяют нулевую линию. Распыляют в пламя аттестованные смеси анализируемого металла для построения градуировочного графика, затем вводят пробы и регистрируют значения концентраций исследуемых проб. Точность настройки прибора проверяют введением аттестованной смеси заданной концентрации через каждые пять проб, в случае необходимости осуществляют перекалибровку. При высоком содержании определяемого металла аналит и холостые пробы разбавляют 1%-ным раствором азотной кислоты, коэффициент разбавления учитывают при расчете результата анализа. Расчет содержания (X) металлов в желчи проводят по формуле:

где С - концентрация, определяемая по градуировочному графику, построенному методом абсолютной калибровки на аттестованных смесях растворов металлов, мкг/см³;

С' - значение концентрации холостой пробы, мкг/см³ ;

V - общий объем аналита, см³;

V' - объем пробы желчи, взятой для анализа, см ³.

За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений X_max, X_min , расхождение между которыми r, не должно превышать предела повторяемости r_n:

Результат количественного анализа в документах, предусматривающих его использование, представляется в виде: ( ± ), мкг/см³, при доверительной вероятности (предельной ошибке для заданной надежности) Р=0,95, где

- средний результат анализа, мкг/см³,

;

- характеристика погрешности, мкг/см³, при Р=0,95

,

где - относительное значение характеристики погрешности, %.

Предлагаемый способ был испытан в лабораторных условиях. Для его реализации были использованы следующие реактивы и растворы:

Кислота азотная концентрированная, ГОСТ 4461-77, осч.;

Ацетилен, ГОСТ 5457-75;

Перекись водорода, ГОСТ 177-88, 33%;

Азотная кислота (HNO ₃), 1%;

Очищенная бидистиллированная вода;

Азотная кислота (HNO₃), 1%;

Перекись водорода, 6%.

Исследования желчи на предмет количественного определения в ней никеля, марганца и свинца проводили путем осуществления вышеуказанных операций и режимов.

Данные по количественному содержанию никеля в желчи, полученные в ходе реализации предлагаемого способа, приведены в таблице 1, по количественному содержанию марганца - в таблице 2, по количественному содержанию свинца - в таблице 3.

Далее путем расчетов на основании полученных указанных данных определяли показатели повторяемости, воспроизводимости, точности предлагаемого способа. Ниже приведен порядок расчетов на примере количественного содержания никеля, определенного в пробе желчи предлагаемым способом.

1. Оценка показателя повторяемости предлагаемого способа

1.1. Среднее арифметическое параллельных определений рассчитывают по формуле (данные для расчета взяты из таблицы 1):

1.2. Выборочную дисперсию результатов единичного анализа содержания никеля, полученного в условиях повторяемости (параллельные определения), рассчитывают по формуле (таблица 1):

1.3. Проверка гипотезы о равенстве генеральных дисперсий. Величину G_l (max) рассчитывают по формуле:

G₁(max)=0,120, G_табл =0,602 (при доверительной вероятности Р=0,95). Дисперсия однородна (G₁<G_табл).

1.4. Расчет среднего квадратического отклонения (СКО) S_r выполняют по формуле:

,

1.5. Показатель повторяемости _r предлагаемого способа в виде среднего квадратического отклонения:

Показатель повторяемости предлагаемого способа в виде предела повторяемости r_n рассчитывают по формуле:

r_n=Q(P,n)· _r, где n - число параллельных определений, предусмотренных предлагаемым способом для получения результата анализа.

Q(P,n)=2,77 при n=2, Р=0,95

r_n=2,77·1,94·10 ^-3=5,36·10^-3

1.6. Среднее значение результатов анализа, полученных в условиях воспроизводимости:

1.7. Показатель повторяемости _r S_r в относительных единицах:

Предел повторяемости предлагаемого способа r в относительных единицах:

2. Оценка показателя воспроизводимости предлагаемого способа

2.1. Рассчитывают дисперсию, характеризующую разброс средних арифметических результатов параллельных определений (Х_l) относительно общего среднего значения по формуле:

2.2. Показатель воспроизводимости предлагаемого способа в виде СКО при проведении эксперимента в одной лаборатории рассчитывают по формуле:

Показатель воспроизводимости предлагаемого способа в относительных единицах:

Показатель воспроизводимости предлагаемого способа в виде предела воспроизводимости рассчитывают по формуле:

при P=0,95

2.3. Предел воспроизводимости в относительных единицах:

3. Оценка показателя правильности методики

Получают серию L результатов определяемого металла - никеля в пробе без добавки (рабочая проба) - и пробе с добавкой (проба с добавкой определяемого металла) - (см. таблицу 4).

Величина добавки к рабочей пробе С=0,100 мкг/см³, погрешность приготовления аттестованной смеси ± _со=±0,001 мкг/см³ (1%) (для градуировочного графика готовят аттестованные смеси с заданными концентрациями никеля в 1%-ном растворе азотной кислоты).

3.1. Среднее значение результата анализа пробы без добавки (рабочей пробы):

СКО, характеризующее случайный разброс результатов анализа пробы без добавки:

3.2. Среднее значение результата анализа пробы с добавкой (см. таблицу4):

СКО, характеризующее случайный разброс результатов анализа пробы с добавкой:

,

3.3. Значение экспериментально найденной величины добавки:

3.4. Систематическая погрешность предлагаемого способа _m:

3.5. Проверяют значимость вычисленных значений _m по критерию Стьюдента (t):

Рассчитывают значение t:

где S₁ и S₂ - СКО, характеризующие случайный разброс результатов анализа пробы без добавки и пробы с добавкой;

_со - погрешность аттестованного значения добавки к пробе.

Значение t сравнивают с t_табл. При числе степеней свободы f=L-1 для доверительной вероятности Р=0,95 t_табл.=2,26.

Так как t<t _табл. (0,27<2,26), оценка систематической погрешности равна нулю, _m=0.

3.6. Показатель правильности предлагаемого способа рассчитывают по формуле:

3.7. Верхнюю ( _СВ) и нижнюю ( _СН) границы неисключенной систематической погрешности с принятой вероятностью Р=0,95 находят по формуле:

В относительных единицах:

4. Оценка показателя точности предлагаемого способа.

4.1. Среднее квадратическое отклонение ( ) погрешности результатов анализа равно:

Верхнюю и нижнюю границы ( _В, _Н), в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа находится с принятой вероятностью Р=0,95, рассчитывают по формуле:

В относительных единицах:

Расчет показателей повторяемости, воспроизводимости, точности предлагаемого способа для марганца и свинца проводится аналогичным образом.

Данные о диапазоне измерений в желчи никеля, свинца и марганца предлагаемым способом, а также о значениях показателей повторяемости, воспроизводимости и точности приведены в таблицах 5 и 6.

Известный по прототипу способ прямого определения металлов в желчи обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата до 25%, в то время как предлагаемый способ позволяет снизить погрешность при определении никеля до 5%, свинца до 10%, марганца до 14,85% (см. таблицу 5).

Благодаря указанной последовательности операций и использованию определенных режимов предлагаемый способ позволяет повысить точность определения никеля, марганца и свинца в пробе желчи.

Таблица 1
Данные по количественному содержанию никеля в пробе желчи, полученные в ходе реализации предлагаемого способа, мкг/см3
L, номер результата, l=1,L	N, число параллельных определений, n=1,N	Xn, результат параллельного определения	,среднее арифметическое параллельных определений, N=2	,значения выборочных дисперсий
1	1	0,150	0,1485	4,5·10-6
2	0,147
2	1	0,151	0,1520	2,0·10-6
2	0,153
3	1	0,149	0,1475	4,5·10-6
2	0,146
4	1	0,155	0,1540	2,0·10-6
2	0,153
5	1	0,148	0,1495	4,5·10-6
2	0,151
6	1	0,149	0,1475	4,5·10-6
2	0,146
7	1	0,153	0,1540	2,0·10-6
2	0,155
8	1	0,153	0,1545	4,5·10-6
2	0,156
9	1	0,150	0,1485	4,5·10-6
2	0,147
10	1	0,152	0,1535	4,5·10-6
2	0,155

Таблица 2
Данные по количественному содержанию марганца в пробе желчи, полученные в ходе реализации предлагаемого способа, мкг/см 3
L, номер результата, l=1,L	N, число параллельных определений, n=1,N	Хn, результат параллельного определения	,среднее арифметическое параллельных определений, N=2	,значения выборочных дисперсий
1	1	0,052	0,0525	0,50·10-6
2	0,053
2	1	0,046	0,0470	2,0·10-6
2	0,048
3	1	0,049	0,0500	2,0·10-6
2	0,051
4	1	0,047	0,0460	2,0·10-6
2	0,045
5	1	0,044	0,0455	4,5·10-6
2	0,047
6	1	0,055	0,0535	4,5·10-6
2	0,052
7	1	0,048	0,0500	8,0·10-6
2	0,052
8	1	0,051	0,0545	0,5 10-6
2	0,050
9	1	0,046	0,0440	8,0·10-6
2	0,050
10	1	0,047	0,0455	4,5·10-6
2	0,044

Таблица 3
Данные по количественному содержанию свинца в пробе желчи, полученные в ходе реализации предлагаемого способа, мкг/см3
L, номер результата, l=1,L	N, число параллельных определений, n=1,N	Xn, результат параллельного определения	,среднее арифметическое параллельных определений, N=2	,значения выборочных дисперсий
1	1	0,156	0,1525	2,45·10-5
2	0,149
2	1	0,141	0,1435	1,25·10-5
2	0,146
3	1	0,135	0,1385	2,45·10-5
2	0,142
4	1	0,137	0,1395	1,25·10-5
2	0,142
5	1	0,152	0,1490	1,8·10-5
2	0,146
6	1	0,134	0,1360	0,8·10-5
2	0,138
7	1	0,142	0,1450	1,8·10-5
2	0,148
8	1	0,154	0,1510	1,8·10-5
2	0,148
9	1	0,138	0,1410	1,8·10-5
2	0,144
10	1	0,151	0,1485	1,25·10-5
2	0,146

Таблица 5
Данные о диапазоне измерений в желчи никеля, свинца и марганца предлагаемым способом, а также о значениях показателей его повторяемости, воспроизводимости и точности
Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см 3	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) r, %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) R, %	Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р=0,95),± , %
Никель, от 0,10 до 1,00 вкл.	1,28	2,32	4,94
Свинец, от 0,10 до 1,00 вкл.	2,82	4,71	10,03
Марганец, от 0,025 до 0,250 вкл.	3,91	7,10	14,85

Таблица 6
Значения пределов повторяемости и воспроизводимости предлагаемого способа при доверительной вероятности Р=0,95
Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см 3	Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), rn, %	Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), , %
Никель, от 0,10 до 1,00 вкл.	3,55	6,42
Свинец, от 0,10 до 1,00 вкл.	7,82	13,04
Марганец, от 0,025 до 0,250 вкл.	10,83	19,68