биологически активный продукт пантового оленеводства

Формула изобретения

Биологически активный продукт пантового оленеводства для бальнеологии, включающий измельченный фибрин крови пантовых оленей, отличающийся тем, что он включает фибрин в нативной форме и дополнительно содержит «Цитросепт грейпфрутовый» и глицерин при следующем соотношении в граммах на 100,0 г фибрина:

Цитросепт грейпфрутовый	0,4-1,0
Глицерин	20,0-25,0

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской промышленности при получении биологически активного продукта пантового оленеводства из фибрина крови пантовых оленей, в частности к бальнеологии.

Известен биологически активный продукт: пантогематоген (см. Егерь В.В., Деев Н.Г. Пантовое оленеводство. - М.: Колос, 1994. - С.52-53), при изготовлении которого используется дефибринированная кровь марала или пятнистого оленя; психостимулирующее средство «Пантогематоген» (см. патент РФ № 2008008, МПК А61К 35/14), при производстве которого также используется дефибринированная кровь. Фибрин, при любом производстве лекарственных средств с использованием дефибринированной крови, является отходом производства и утилизируется, при этом теряется свыше 24% общего белка крови.

Известен способ получения фибрина из сгустков крови путем помещения сгустков крови в мешок, состоящий из мелкой сетки с размером ячеек 0,1×0,1 мм, для продавливания его через сетку. Оставшуюся на сетке массу промывают 20-25 литрами воды в течение 1-2 мин, полученные нити фибрина сушат (см. авторское свидетельство № 1573571, А61К 35/14). Однако использование данного метода получения и переработки фибрина характеризуется низким содержанием минеральных веществ, отсутствием клеток крови в конечном продукте вследствие интенсивного его промывания. При этом полученный порошок для наружного использования необходимо растворять некоторое время при определенных температурах.

Известен способ получения биологически активного продукта пантового оленеводства из фибрина, включающий измельчение сырья, экстрагирование водным раствором подкисленного этилового спирта при температуре 20-25°С с последующем вымораживанием экстракта при температуре -15-18°С в течение 5 суток и фильтрацией конечного продукта. При этом процесс экстракции проводят 70%-ным раствором этилового спирта при соотношении раствор спирта:сырье 10:1 в течение 5-6 суток и ежедневном подогреве экстракта до 50°С в течение 3-6 часов (положительное решение о выдаче патента от 26.11.2008 г., по заявке на изобретение РФ № 2008106549 от 19.02.2008 г. - прототип).

Однако применение данного лекарственного средства, содержащего этиловый спирт, сужает область применения препарата, в частности, в связи с индивидуальной непереносимостью части взрослых пациентов спиртсодержащих препаратов, а также при лечении детей и лечении болезней, где спиртсодержащие формы противопоказаны, например при наружном применении в виде компрессов, аппликаций, обертывании, ванн, а использование нативной формы фибрина ограничено малым сроком ее хранения.

Необходима разработка биологически активного продукта из фибрина крови пантовых оленей без использования этилового спирта, позволяющего расширить область применения препарата, в частности, при его использовании в виде компрессов, аппликаций, обертывании, ванн, при 1-1,5-годичном сроке хранения фибрина в нативной форме.

Указанный технический результат достигается тем, что в биологически активном продукте пантового оленеводства, включающем измельченный фибрин крови пантовых оленей, фибрин используют в нативной форме с целевыми добавками: г/100 г фибрина

«Цитросепт грейпфрутовый» - 0,4-1,0

Глицерин - 20,0-25,0

Сущность способа заключается в следующем. Несмотря на то что использование фибрина в нативной форме (без воздействия агрессивной среды (спирт) и технологических приемов (экстракция, вымораживание)) естественным образом повышает качество лечебного воздействия, однако срок хранения фибрина в нативной форме составляет не более 25-30 суток при температуре +2-4°С, а порошкообразную форму фибрина, как показали исследования (сушка фибрина при +45+50°С в вакууме), при использовании в оздоровительных ваннах или для влажного укутывания, необходимо предварительно растворять в воде в течение 25-30 минут при температуре +35+37°С, при температуре ниже или выше этого диапазона растворение крови снижается, т.е. усложняется процесс подготовки, а следовательно, снижаются качественные показатели лечения. Экстракты из фибрина по своим качественным показателям, естественно, ниже нативной его формы.

В заявленном изобретении предложен состав ингредиентов продукта, обеспечивающий длительный срок его хранения, удобное в применении при его высоких лечебных качествах.

Исследования по выявлению наличия биологически активных веществ в составе фибрина после дефибринирования и фильтрации крови пантовых оленей показали, что химический и аминокислотный состав фибрина выше, чем в пантах (таблица 1 и 2).

Таблица 1
Физико-химические показатели фибрина и пантов
Показатели, %	Фибрин	Пант марала
Вода	15,17	15,09
Жир	11,23	1,31
Белок	73,45	42,37
Зола	4,65	41,19

Таблица 2
Аминокислотный состав фибрина и пантов
Аминокислота, %	Фибрин	Пант марала
1. Треонин	2,53	2,42
2. Триптофан	0,59	0,40
3. Серин	1,26	0,95
4. Изолейцин	1,27	2,18
5. Глицин	1,32	1,02
6. Аланин	1,69	1,22
7. Валин	1,51	1,13
8. Метионин	1,21	1,11
9. Лейцин	3,19	3,55
10. Глутамин	4,39	2,88
11. Пролин	1,90	0,44
12. Фенилаланин	1,10	0,75
13. Лизин	3,98	3,91
14. Аргинин	1,47	1,41
15. Метионин + Цистин	2,15	1,87
16. Общее количество	29,56	25,24

Как видно из таблицы 1, содержание белка и жира в фибрине в 1,7 и 8,6 раза выше, чем в пантах и, согласно таблицы 2, на 14,6% выше суммарный аминокислотный состав.

«Цитросепт грейпфрутовый» (33%-ный стандартный экстракт семян грейпфрута) - антисептик растительного происхождения. Фирма изготовитель «Чинта-мани Интернэшнл АС», Норвегия. Состав экстракта: экстракт грейпфрута 60%, глицерин пальмовый, вода. Цитросепт содержит в своем составе свыше 19% биофлавоноидов (флавоном, флавононы, флавоны), обладающих свойством воздействия на клеточные мембраны микроорганизмов (при отсутствии токсичности для живых организмов) и может использоваться в качестве растительного консерванта с полезными побочными свойствами. Цитросепт обладает широким спектром действия, воздействует на вирусы и паразиты, эффективен в различных сочетаниях, нетоксичен. Используется в медицинской практике при кандидозах и других грибковых заболеваниях кожи, ногтей. Цитросепт стимулирует естественную сопротивляемость организма, при этом биофлавоноиды, содержащиеся в цитросепте (семенах грейпфрута), растворяют отложения холестерина, укрепляют стенки капилляров и препятствуют образованию тромбов, задерживают развитие так называемых болезней цивилизации: повышенное кровяное давление, атеросклероз, инфаркт миокарда. Поэтому при использовании лечебных ванн с применением фибрина данный препарат расширяет спектр лечебного воздействия.

Глицерин, имея молекулы небольших размеров и обладая высоким сродством с молекулами воды (гидратная оболочка), способствует усвояемости лекарственного препарата при принятии ванн, то есть способствует насыщению клеток лекарственной составляющей препарата. В связи с тем, что наружное применение препарата обусловлено воздействием на поверхность кожных покровов рефлекторного (через рецепторы кожи) и гуморального (всасывание химических и биологических веществ) механизмов, вышеприведенные свойства глицерина, а также его способность образовывать поверхностно-активные вещества, накапливающиеся на поверхности двух фаз (среда, тело), способствуют повышению всасывания лекарственного препарата и его рефлекторного воздействия. Кроме этого глицерин обладает антисептическим действием, благодаря этому качеству его используют для предотвращения заражения ран в приготовленных высококонцентрированных растворах. Удерживая влагу (раствор лекарственного средства) на поверхности кожи после приема пациентом ванны, увеличивает срок лечебного воздействия лекарственной составляющей препарата. Наличие глицерина в составе лекарственного средства позволяет при необходимости проводить процесс замораживания последнего в связи с тем, что глицерин является защитным средством при замораживании живых тканей, предотвращая их разрушение. Замораживание нативного фибрина может возникнуть в связи с необходимостью более длительного хранения препарата.

Для определения оптимального сочетания ингредиентов в препарате был проведен ряд опытов. В первом опыте (таблица 3) нативный фибрин был законсервирован препаратом «Цитросепт грейпфрутовый» в количестве 0,2; 0,4; 0,8; 1,0; 1,2; и 1,4 г на 100 г фибрина.

Таблица 3
Срок хранения фибрина, месяц	Динамика роста колоний при различной концентрации препарата «Цитросепта» на 100,0 г фибрина, г	Фибрин (без консерванта)
0,2	0,4	0,8	1,0	1,2	1,4
0,5	н о	н о	н о	н о	н о	н о	н о
1	н о	н о	н о	н о	н о	н о	13×105
2	н о	н о	н о	н о	н о	н о
3	н о	н о	н о	н о	н о	н о
4	9×10 5	н о	н о	н о	н о	н о
5		н о	н о	н о	н о	н о
6		н о	н о	н о	н о	н о
7		н о	н о	н о	н о	н о
8		11×10 5	н о	н о	н о	н о
9			н о	н о	н о	н о
10			н о	н о	н о	н о
11			н о	н о	н о	н о
12			н о	н о	н о	н о
13			8×10 5	н о	н о	н о
14				н о	н о	н о
15				10×10 5	н о	н о
16					н о	н о
17					9×10 5	н о
18						н о
19						н о
20						10×10 5
где н о - не обнаружено

Согласно таблице 3 видно, что в фибрин, консервированный препаратом «Цитросепт» в дозах 0,2 и 0,4 г хранившийся при температуре +2-4°С дал рост колоний на 4 и 8 месяц соответственно. При этом в течение последующего месяца у данных образцов цвет из темно-вишневого перешел в коричневый, появился гнилостный запах, плотная с хлопьями консистенция с пузырьками брожения. Фибрин, изготовленный без пастеризации также на 30-ый день проведения эксперимента, хранившийся в тех же условиях, имел коричневый цвет, появился гнилостный запах, плотная с хлопьями консистенция с пузырьками брожения. Фибрин, консервированный в дозах 0,8-1,4 г на протяжении 13-20 месяцев соответственно, имел темно-вишневый цвет, жидкую консистенцию.

Во втором опыте (таблица 4) нативный фибрин был законсервирован препаратом «Цитросепт грейпфрутовый» в дозах 0,4; 0,8; 1,0 и 1,2 г при наличии глицерина в количестве 15,0; 20,0 и 25,0 г на 100 г фибрина, хранившийся при температуре +2-4°С.

Таблица 4

Срок хранения фибрина, мес.

Динамика роста колоний при различной концентрации препарата «Цитросепта» и глицерина на 100,0 г фибрина, г

0,4

0,8

1,0

1,2

15,0

20,0

25,0

15,0

20,0

25,0

15,0

20,0

25,0

15,0

20,0

25,0

1

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

2

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

3

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

4

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

5

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

6

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

7

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

8

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

9

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

10

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

11

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

12

9×105

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

13

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

14

8×10 5

н о

8×105

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

15

10×10 5

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

16

11×10 5

н о

н о

н о

н о

н о

н о

н о

17

9×10 5

8×10 5

н о

н о

н о

н о

н о

18

н о

н о

н о

н о

н о

19

н о

н о

н о

н о

н о

20

9×10 5

н о

н о

н о

н о

21

11×10 5

н о

н о

н о

22

н о

н о

н о

23

н о

н о

н о

24

н о

н о

н о

где н о - не обнаружено

Как видно из таблицы 4, при наличии глицерина в составе продукта в количестве 15,0 г на 100,0 г фибрина, при содержании цитросепта - 0,4 г, срок годности продукта был на уровне 11 месяцев (по сравнению с предыдущим опытом, где 0,4 г цитросепта (без глицерина) обеспечивало всего лишь 7-месячный срок хранения). При 20,0 и 25,0 г глицерина на 100,0 г фибрина при той же концентрации цитросепта срок годности продукта составил 13 и 14 месяцев. Оптимальный срок годности продукта 1-1,5 года при наличии 20,0 и 25,0 г глицерина был достигнут при 0,8 г цитросепта (15-16 месяцев), при 1,0 г цитросепта 19-20 месяцев. Таким образом, оптимальным сочетанием ингредиентов смеси для достижения 1-1,5-годичного срока хранения нативной формы фибрина следует считать 0,4-1,0 г цитросепта в смеси с 20,0-25,0 г глицерина на 100,0 г фибрина. Как видно из таблицы 3, для увеличения срока хранения фибрина (без глицерина) до 13-20 месяцев требовалось 1,0-1,4 г дорогостоящего препарата. Использование глицерина в составе продукта наряду с повышением лечебных качеств продукта позволило на 42% (в среднем) сократить срок расхода цитросепта.

Результаты по проверке эффективности заявленного биологически активного продукта из фибрина и экстракта по прототипу приведены в таблице 5.

Таблица 5
Наименование теста	Заявленный способ	Прототип
наружно (n=11)	per os (n=12)	наружно (n=11)	per os (n=11)
Адаптогенное действие, мин	105,2±14,2	128,2±14,2	64,6±5,2	68,3±4,8
Тонизирующее действие, мин	68,4±6,5	73,4±6,5	47,3±4,0	45,9±5,3
Вертикальная решетка	+	+	+	+
Открытое поле (после пробежки за 5 минут)	43,5±3,5	49,5±4,1	29,5±2,2	26,6±2,7
«Челночные пробежки» (число пробежек за 5 минут)	28,6±2,9	33,5±3,4	16,5±3,1	19,7±4,1
«Лестница» (количество ступеней за 5 минут)	23,4±2,6	29,3±2,9	12,5±2,3	16,8±2,7
«Горячая пластинка», с	18,5±2,6	27,5±2,8	10,3±2,1	15,3±3,2

Эксперименты были проведены на 45 мышах-самцах массой тела 19-21 г. Часть первой опытной группы заявленную биосубстанцию получала в дозе 10 мл/кг при помощи зонда в течение 20 дней, а часть мышей в течение 7 дней помещали в теплую воду (+37°С) на 10 минут с разведенным в ней препаратом, содержащем 0,5 г цитросепта и 20,0 г глицерина на 100,0 г фибрина (имитация бальнеологических процедур) из расчета 1:0,0013 (вода:биологически активный продукт). Вторая опытная группа (прототип) по аналогии получала спиртовой экстракт из фибрина.

В ходе изучения биологических свойств консервированного фибрина установлено, что заявленный образец превосходит прототип по адаптогенному и тонизирующему действию, способствует увеличению двигательной активности (в тесте «открытое поле»), болевой чувствительности (в тесте «горячие пластинки») и т.д.

Пример. Измельченные, например, на куттере свежие (собранные в день убоя маралов) сгустки крови, полученные после дефибринирования и фильтрации крови, смешиваются с цитросептом (фирма-изготовитель «Чинтамани Интернэшнл АС», Норвегия) и глицерином (ГОСТ 6824-96) в соотношении: 1,0 г цитросепта и 20,0 г глицерина на 100,0 г фибрина, фасуются в стерильные полипропиленовые или стеклянные емкости по 100,0 г и хранят при температуре окружающей среды +2-4°С.

Для проведения общих оздоровительных ванн пациент обязательно принимает гигиенический душ, затем в ванну, заполненную водой (150 л) с температурой 36-38°С, добавляют 200,0 г заявленного биологически активного продукта. Пациент сразу после душа ложится в ванну на 10-15 минут. После окончания процедуры пациент промокает тело полотенцем, укутывается простыней и отдыхает 15-20 минут. Общий курс лечения 6-12 ванн.

Для осуществления влажного укутывания всего тела или наложения аппликаций на часть тела предварительно пациент принимает гигиенический душ, затем проводит 2 захода по 5-7 минут в сауну с температурой 80-90°С. После этого пациент растирает биологически активный продукт по всему телу или на определенную часть. Обертывается пленкой, простыней и ложится на кушетку, где он лежит в течение 15-30 минут. По окончании процедуры простыню и пленку снимают, пациент принимает гигиенический душ, промокает тело полотенцем, укутывается простыней и отдыхает 15-20 минут. Общий курс лечения 6-12 процедур.

Таким образом, с увеличением сроков хранения нативной формы фибрина крови пантовых оленей, обладающей более выраженными лечебно-профилактическими свойствами по сравнению с экстрактом и порошком из фибрина, стало возможным использование нативной формы фибрина в бальнеологии и, при сочетании с адекватным лечебным действием цитросепта и глицерина в составе препарата, получить биологически активный продукт высокого качества, тем самым расширяя область применения продукта.