энантиомерно чистые производные флавона для лечения пролиферативных нарушений и способы их получения

Формула изобретения

1. Энантиомерно чистое соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль,



где R₁ представляет собой фенил, который замещен 2 различными заместителями выбранными из: галогена, фторметила, дифторметила и трифторметила, при условии, что если один из заместителей на фенильной группе представляет собой галоген, другой заместитель не является галогеном;

R₂ и R₃ каждый независимо выбран из: гидроксила и OR₈; где R₈ представляет собой замещенный или незамещенный C₁-С₁₀-алкил, С₁-С₄ -алканоил, замещенный или незамещенный ароил;

R₄ представляет собой С₁-С₄-алкиленгидроксил; и

R₉ представляет собой водород или С ₁-С₄-алкил.

2. Энантиомерно чистое соединение формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранные из

(+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметилфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметилфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметилфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

3. Энантиомерно чистое растворенное соединение, представленное формулой (VIIIA)



где R₁ представляет собой фенил, замещенный двумя разными заместителями, выбранными из галогена, фторметила, дифторметила и трифторметила, при условии, что если один из заместителей на фенильной группе представляет собой галоген, другой заместитель не является галогеном;

R₂ и R₃ каждый независимо выбран из гидроксила и OR₈, где R₈ представляет собой замещенный или незамещенный C₁-С₁₀-алкил, C₁-C₄ -алканоил, замещенный или незамещенный ароил;

R₄ представляет собой СН₂ОС(O)СН₃; и

R₉ представляет собой водород или С₁-С ₄-алкил.

4. Энантиомерно чистое растворенное соединение, представленное формулой (IXA)



где R₁ представляет собой фенил, замещенный двумя разными заместителями, выбранными из галогена, фторметила, дифторметила и трифторметила, при условии, что если один из заместителей на фенильной группе представляет собой галоген, другой заместитель не является галогеном;

R₂ и R₃ каждый независимо выбран из гидроксила и OR₈, где R₈ представляет собой замещенный или незамещенный C₁-С₁₀-алкил, C₁-C₄ -алканоил, замещенный или незамещенный ароил;

R₄ представляет собой СН₂ОС(O)СН₃; и

R₉ представляет собой водород или С₁-С ₄-алкил.

5. Энантиомерно чистое растворенное соединение, представленное формулой (ХА)



где R₁ представляет собой фенил, замещенный двумя разными заместителями, выбранными из галогена, фторметила, дифторметила и трифторметила, при условии, что если один из заместителей на фенильной группе представляет собой галоген, другой заместитель не является галогеном;

R₂ и R₃ каждый независимо выбран из гидроксила и OR₈, R ₈ представляет собой замещенный или незамещенный C ₁-С₁₀-алкил, С₁-С₄-алканоил, замещенный или незамещенный ароил;

R₄ представляет собой СН₂ОН; и

R₉ представляет собой водород или С₁-С₄-алкил.

6. Способ получения энантиомерно чистого соединения формулы (VIA)



включающий этап, на котором проводят реакцию рацемата соединения формулы (VIA) с (-)-дибензоил виннокаменной кислотой ((-)-DBTA) в качестве хирального добавочного вещества в метаноле в качестве растворителя для получения смеси диастереомерных солей (+)- и (-)-транс энантиомеров соединения формулы (VIA), отделяя соответствующие диастереомерные соли и обрабатывая диастереомерную соль (-)-транс энантиомера основанием.

7. Способ получения энантиомерно чистого (+)-транс энантиомера соединения формулы (I) по п.1 или п.2, включающий этапы, на которых

(а) обрабатывают энантиомерно чистый растворенный (-)-транс энантиомер соединения, представленный формулой (VIA)



где R₂, R₃ R₄ и R₉ таковы, как в п.4, уксусным ангидридом в присутствии катализатора кислоты Льюиса выбранного из диэтилового эфирата трехфтористого бора, хлорида цинка, хлорида алюминия и хлорида титана, для получения растворенного ацетилированного соединения формулы (VIIA)



где R₂, R₃ и R₉ таковы, как определено, и R₄ представляет собой CH ₂OC(O)СН₃;

(b) проводят реакцию растворенного ацетилированного соединения формулы (VIIA) этапа (а) с кислотой формулы R₁COOH, или хлорангидридом кислоты формулы R₁COCl,

или ангидридом кислоты формулы (R ₁CO)₂O, или сложным эфиром формулы R₁ COOCH₃, где R₁ определено выше, в присутствии основания и растворителя для получения соединения формулы (VIIIA)



где R₁, R₂, R₃ и R₉ таковы, как определено выше, и R₄ представляет собой CH₂OC(O)СН₃;

(с) обрабатывают растворенное соединение формулы (VIIIA) основанием, выбранным из гексаметилдисилазида лития, гексаметилдисилазида натрия, гексаметилдисилазида калия, гидрида натрия и гидрида калия, для получения соответствующего растворенного соединения -дикетона формулы (IXA)



где R₁, R₂, R₃ и R₉ таковы, как определено выше, и R₄ представляет собой CH₂OC(O)СН₃;

(d) обрабатывают соединение -дикетона формулы (IXA) кислотой для получения соответствующего растворенного циклированного соединения формулы (ХА)



где R₁, R₂, R₃ и R₉ таковы, как определено выше, R₄ представляет собой СН₂ОН;

(е) обрабатывают растворенное соединение формулы (ХА) деалкилирующим агентом, выбранным из пиридин гидрохлорида, трибромида бора, эфирата трехфтористого бора и трихлорида алюминия для действия деалкилирования при температуре в диапазоне от 120-180°С для получения энантиомерно чистого (+)-транс энантиомера соединения формулы (I).

8. Фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая терапевтически эффективное количество энантиомерно чистого соединения формулы (I) по п.1 или 2, или его фармакологически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель и, необязательно, добавку.

9. Применение энантиомерно чистого соединения формулы (I) по п.1 или 2, или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения рака у млекопитающего.

Описание изобретения к патенту

Область изобретения

Данное изобретение относится к энантиомерно чистому (+)-транс-энантиомеру пирролидинов, замещенными флавонами, представленного формулой (I), его энантиомерно чистым интермедиатам, способам их соответствующего получения, их применению как активных ингредиентов в фармацевтических препаратах, в частности для лечения пролиферативных нарушений, например рака, и фармацевтическим композициям, включающих их.

Предпосылки изобретения

Регуляторы клеточного цикла приобрели широко распространенное значение в пролиферативных заболеваниях. Циклин-зависимые киназы (CDK) являются семейством ферментов, которые становятся активированными в специфических фазах клеточного цикла.

Большое разнообразие заболеваний характеризируется неконтролируемой клеточной пролиферацией, которая следует из некоторых повреждений в регуляторных путях в клеточном цикле [например, сверхэкспрессия циклинов или делеции генов, кодирующих CKI (CDK ингибирующие белки)]. Сверхэкспессия циклинаD1 приводит к дерегулированию активности киназы CDK4-D1 и, таким образом, способствует неконтролируемой клеточной пролиферации. Со знанием роли CDK в регулировании клеточного цикла и раскрытием, что приблизительно 90% всех неоплазий связаны с гиперактивацией CDK, приводящей к инактивации пути Rb (ретинобластома), CDK являются выгодными мишенями для развития противоопухолевых лекарственных средств.

Выступающая роль комплексов CDK/циклин-киназа, в частности комплексов CDK4/циклин D1 киназа, в индуцировании клеточной пролиферации и их дерегулирования в опухолях, делает их идеальными мишенями для развития высоко-специфических антипролиферативных агентов.

Флавопиридол и его аналоги хорошо известны как эффективные ингибиторы CDK и предоставляют возможный подход к антипролиферативной терапии.

Опубликованная заявка заявителя на патент США, находящаяся на стадии рассмотрения, № 2004/0106581 описывает новые соединения, применяемые в ингибировании CDK и имеющие хорошую селективность и цитотоксичность по сравнению с различными пролиферативными клеточными линиями. Данная заявка на патент включена в данное описание со ссылкой во всей ее полноте. Новые соединения, которые раскрыты в вышеупомянутой заявке на патент, имеют два хиральных центра и, следовательно, могут существовать как четыре энантиомера, например, (+)-транс, (-)-транс, (+)-цис и (-)-цис.

В технике хорошо известно, что энантиомеры данного химического соединения, несмотря на деление идентичных химических композиций, могут иметь различные действия, когда помещены в биологические системы. Часто случается, что один энантиомер обеспечивает благоприятные эффекты, тогда как другой энантиомер может быть вредным или инертным. Таким образом, преимущества, которые связаны с введением рацемический смеси, могут сохраняться, применяя один энантиомер соединения без связанных вредных побочных эффектов.

В частности, при изучениях выяснили, что ингибиторная активность CDK и антипролиферативная активность обусловлены (+)-транс-энантиомером пирролидинов, замещенных флавонами, представленного формулой (I), а не (-)-транс-энантиомером.

Будет желательным для (+)-транс-энантиомера пирролидинов, замещенных флавонами, соединений формулы (I), быть доступным в форме, в основном, свободной своего (-)-транс-энантиомера для обеспечения безопасного и эффективного способа лечения заболеваний и нарушений, опосредованных ингибированием циклин-зависимых киназ (CDK) и также лечения заболеваний, связанных с чрезмерной пролиферацией клетки, например раком.

В виду данных обнаружений, данные изобретатели разработали новый способ получения энантиомерно чистого (+)-транс-энантиомера пирролидинов, замещенных флавонами, представленного формулой (I).

Краткое описание изобретения

Данное изобретение относится к энантиомерно чистому (+)-транс-энантиомеру пирролидинов, замещенных флавонами, представленного следующей формулой (I) (далее рассматриваются как соединение формулы (I)) и метаболит, пролекарство, фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его полиморф:

,

где определения R¹, R² , R³, R⁴ и R⁹ даны далее в подробном описании.

Данное изобретение также относится к способу получения энантиомерно чистого соединения формулы (I), или метаболиту, пролекарства, фармацевтически приемлемой соли или его фармацевтически приемлемому сольвату. Способом получают (+)-транс-энантиомер с высокой химической и энантиомерной чистотой и с высоким выходом.

Данное изобретение также относится к интермедиатам, применяемым в способе получения энантиомерно чистого соединения формулы (I).

Данное изобретение дополнительно относится к способу повторного растворения соединения формулы (VIA) и его производных, данное соединение является ключевыми интермедиатами для получения энантиомерно чистого соединения формулы (I).

Данное изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции для лечения заболевания или нарушения у млекопитающего, опосредованного ингибированием CDK, включающей терапевтически эффективное количество энантиомерно чистого соединения формулы (I) или соль, сольват или его пролекарство как активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель.

Данное изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции для лечения заболевания или нарушения у млекопитающего, связанного с чрезмерной пролиферацией клетки, включающей терапевтически эффективное количество энантиомерно чистого соединения формулы (I) или соли, сольвата или его пролекарства как активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.

Данное изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания или нарушения, опосредованного ингибированием CDK у млекопитающего при необходимости, включающему введение указанному млекопитающему эффективного количества энантиомерно чистого (+)-транс-энантиомера соединения формулы (I) или метаболита, пролекарства, фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или его полиморфа.

Данное изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания или нарушения у млекопитающего, связанного с чрезмерной пролиферацией клетки, включающему введение терапевтически эффективного количества энантиомерно чистого соединения формулы (I) или соли, сольвата или его пролекарства как активного ингредиента и фармацевтически приемлемого носителя.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фигура 1: Хиральной ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) (Колонка Chiralcel OD-H (250×4,6 мм)) получили (-)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол как описано в примере 5.

Фигура 2: Хиральной ВЭЖХ (Колонка Chiralcel OD-H (250×4,6 мм)) получили (-)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол как описано в примере 98 (способ известного уровня техники).

Фигура 3: Хиральной ВЭЖХ (Колонка Chiralcel OD-H (250×4,6 мм)) получили (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид как описано в примере 10.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединения формулы (I) по данному изобретению применяются в ингибировании CDK, в частности комплексов CDK4/циклинD1 и находят применение в антипролиферативных терапиях для заболеваний, отличающихся избыточным клеточным ростом, например рака, сердечно-сосудистых отклонений, воспаления и артрита, нефрологических нарушений, паразитологии, псориаза, болезни Альцгеймера, иммунологических нарушений, включающих нежелательную пролиферацию лейкоцитов, рестеноз и другие пролиферативные нарушения гладкой мышцы, вирусные инфекции и грибковые инфекции.

Данное изобретение особенно направлено на энантиомерно чистое соединение формулы (I) и на метаболит, пролекарство, фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или его полиморф. Как упоминалось выше, соединения, что раскрыты в опубликованной заявке заявителя на патент США, находящейся на стадии рассмотрения, № 2004/0106581, имеют два хиральных центра и, следовательно, могут существовать как четыре энантиомера, а именно (+)-транс, (-)-транс, (+)-цис и (-)-цис. Более в частности, данное изобретение относится к энантиомерно чистому (+)-транс-энантиомеру пирролидинов, замещенных флавонами, представленного формулой (I).

Эффективность рацемического соединения, раскрытого в опубликованной заявке на патент США № 2004/0106581 и его отдельные энантиомеры, были подробно изучены данными изобретателями. Наблюдалось, что только (+)-транс энантиомер является активным. Данное изобретение представляет положение энантиомерно чистого (+)-транс энантиомера, представленного формулой (I), возможным, даким образом давая возможность снижения необходимой дозы лекарственного средства и его побочных эффектов.

Описанное ниже является определениями различных выражений, применяемых для описания соединений данного изобретения. Эти определения относятся к выражениям, поскольку они применяются по всему описанию (если они не ограничены в других отношениях в значениях) либо отдельно, либо как часть большей группы. Они не должны интерпретироваться в буквальном смысле. Они являются не основными определениями и являются релевантными только для данной заявки.

Выражения "флавон" или "хромон" или их аналоги означают соединения, которые можно представить следующей основной структурой:

Как применяют в данном описании, выражение "алкил" относится к радикалу насыщенных алифатических групп, включая алкильные группы с прямой цепью и алкильные группы с разветвленной цепью. Более того, если не оговорено иное, выражение "алкил" включает незамещенные алкильные группы, а также алкильные группы, которые замещены одним или более различными заместителями.

Примерами алкильных остатков, содержащих от 1 до 20 атомов углерода, являются: метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил, тетрадецил, гексадецил, октадецил и эйкозил, n-изомеры всех этих остатков, изопропил, изобутил, 1-метилбутил, изопентил, неопентил, 2,2-диметилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, изогексил, 2,3,4-триметилгексил, изодецил, сек-бутил или терт-бутил.

Выражения "алкокси", как применяют в данном описании, относится к алкильной группе, как определено выше, имеющей кислородный радикал, присоединенный к ней. Репрезентативные алкоксильные группы включают метокси, этокси, пропокси, t-бутокси и подобное.

Выражения "алкенил" относится к ненасыщенным аналогам алифатических групп по длине и возможному замещению алкилов, описанных выше, но которые содержат, по меньшей мере, одну двойную, например, 1, 2 или 3 двойные связи, при условии, что двойные связи не расположены в пределах циклической алкильной группы таким способом, что приводит к ароматической системе. Примеры алкенильных групп включают винил, 1-пропенил, 2-пропенил, 2-бутенил, 2-метил-1-пропенил или 3-метил-2-бутенил.

Более того, если не указано иное, выражения "алкенил" включают незамещенные и замещенные алкенильные группы.

Выражение "арила", как применяют в данном описании, относится к моноциклическим или полициклическим углеводородным группам, имеющим до 14 кольцевых атомов углерода, в которых находится, по меньшей мере, одно карбоциклическое кольцо, которое имеет сопряженную пи-электронную систему. Примерами остатков (С ₆-С₁₄)-арила являются фенил, нафтил, бифенил, флуоренил или антраценил. Примерами остатков (С₆-С ₁₀)-арила являются фенил или нафтил. Если не оговорено иное, и независимо от любых специфических заместителей, связанных с арильными группами, которые указаны в определении соединений формулы (I), остатки арила, например фенил, нафтил или флуоренил, могут, главным образом, быть незамещенными или замещенными одним или более, например 1, 2, 3, 4 или 5, идентичными или различными заместителями. Если не оговорено иное, заместителями, которые могут находиться в замещенных арильных группах, являются: галоген, алкил, алкенил, алкинил, фторметил, дифторметил, трифторметил, гидроксил, арилокси, амино, циано, нитро, тиол, имин, амид или карбонил (например, карбоксил, формиат, карбамид, сложный эфир, кетон или альдегид), сульфгидрил, силиловый эфир, тиокарбонил (например, тиосложный эфир, тиоацетат или тиоформиат), сульфонил, сложный эфир аминокислоты или гетероцикл, который является насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим. Арильные остатки могут быть связаны в необходимом положении, и в замещенных арильных остатках заместитешь могут быть размещены в необходимом положении.

Выражение "гетероцикл" относится к насыщенному, частично ненасыщенному или ароматическому кольцу, содержащему пять или шесть атомов кольца, из которых 1, 2 или 3 являются идентичными или различными гетероатомами, выбранными из: азота, кислорода и серы, и где гетероцикл является замещенным или незамещенным 1, 2, или 3 идентичными или различными заместителями, выбранными из: галогена, нитро, циано, SR⁷, С₁-С ₄-алкила, фторметила, дифторметила, трифторметила, С ₁-С₄-алкокси, гидроксила, карбокси, C₁ -C₄-алкоксикарбонила, С₁-С₄-алкиленгидроксила, CONH₂, CONR₅R₆, SO₂ NR₅R₆, циклоалкила, NR₅R ₆.

Выражение "гетероатом", как применяют в данном описании, означает атом любого элемента, за исключением углерода или водорода. Предпочтительными гетероатомами являются азот, кислород, сера и фосфор.

Галогеном является фтор, хлор, бром или йод, предпочтительно, фтор, хлор или бром.

Будет понятно, что "замещение" или "замещенные" включает неявное условие, что такое замещение является в соответствии с допущенной валентностью замещенного атома и заместителя, а также представляет устойчивое соединение, которое быстро не подвергается трансформации, например, перегруппировкой, циклизацией, отщеплением, и т.д.

Должно быть отмечено, что любой гетероатом с ненасыщенной валентностью, полагается, имеет атом водорода для насыщения валентности.

Выражение "рацемический" или "рацемат", и другие подобные выражения относятся к, главным образом, эквимолярным пропорциям (+)-энантиомера и (-)-энантиомера соединения в композиции.

Выражение "энантиомерно чистое" относится к соединению или соединениям, которое или которые находятся в энантиомерном избытке, более чем 95%. Предпочтительно, энантиомерный избыток больше чем 97%. Более предпочтительно, энантиомерный избыток больше чем 99%.

Выражение "энантиомерный избыток" относится к разнице между количеством одного энантиомера и количеством другого энантиомера, которые присутствуют в смеси продукта. Таким образом, например, энантиомерный избыток 96% относится к смеси продукта, имеющей 98% одного энантиомера и 2% другого энантиомера.

Выражение "в основном свободный" означает, что количество (+)-транс энантиомера преобладает в композиции по сравнению с (-)-транс-энантиомером соединения формулы (I). Более специфично, это означает, что количество (+)-транс-энантиомера по сравнению с (-)-транс-энантиомером по весу, по меньшей мере, приблизительно 95%, более предпочтительно, больше чем 97%.

Как применяют в данном описании, выражение "пролекарства" относится к формам соединения, которые трансформируются in vivo к исходному соединению по данному изобретению, например, гидролизом в крови. Таким образом, пролекарствами являются соединения, несущие группы, которые удаляются биотрансформацией перед иллюстрированием из фармакологического действия. Такие группы включают части, которые быстро расщепляются in vivo из соединения, несущего их, это соединение после расщепления остается или становится фармакологически активным. Такие метаболически расщепляющиеся группы формируют класс, хорошо известный врачу-специалисту в технике.

Выражение "фармацевтически приемлемая соль(и)", как применяют в данном описании, если не указано другое, включает соли основных или кислотных групп соединения по изобретению, эти группы способны к формированию солей. В случае, когда соединения по формуле (I) содержат одну или более кислотных или основных групп, изобретение также включает их соответствующие фармацевтически или токсикологически приемлемые соли. Соединения формулы (I), которые содержат одну или более основных групп, т.е. группы, которые могут присоединять протон, и могут применяться по данному изобретению в форме своих дополнительных солей с нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. Примеры пригодных неорганических кислот включают: борную кислоту, перхлорную кислоту, хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, сульфаминовую кислоту, фосфорную кислоту, азотную кислоту и другие неорганические кислоты, известные специалисту данной области. Примеры пригодных органических кислот включают: уксусную кислоту, пропионовую кислоту, янтарную кислоту, гликолевую кислоту, глюконовую кислоту, стеариновую кислоту, молочную кислоту, яблочную кислоту, виннокаменную кислоту, лимонную кислоту, аскорбиновую кислоту, памовую кислоту, малеиновую кислоту, гидроксималеиновую кислоту, фенилуксусную кислоту, глутаминовую кислоту, бензойную кислоту, салициловую кислоту, сульфаниловую кислоту, 2-ацетоксибензойную кислоту, фумаровую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, метансульфоновую кислоту, этандисульфоновую кислоту, щавелевую кислоту, изэтионовую кислоту, кетоглутаровую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, глицерофосфорную кислоту и другие органические кислоты, известные специалисту данной области. Соединения формулы (I), которые содержат кислотные группы, можно применять по данному изобретению, например, как соли щелочных металлов, типа соли лития (Li), натрия (Na) и калия (K). Фрмацевтически приемлемые соли данного изобретения можно синтезировать из испытанного соединения, которое содержит основную или кислотную часть, обычными химическими способами. Как правило, соли получают контактированием свободного основания или кислоты с стехиометрическими количествами или с избытком необходимой солеобразующей неорганической или органической кислотой или основанием в пригодном растворителе или диспергаторе, или анионным обменом, или катионным обменом с другими солями. Пригодными растворителями являются, например, этилацетат, эфир, спирты, ацетон, THF (тетрагидрофуран), диоксан или смеси этих растворителей.

Данное изобретение более того включает все сольваты соединений формулы (I), например гидраты или аддукты со спиртами, а также производные и пролекарства соединений формулы (I), которые содержат физиологически приемлемые и расщепляемые группы, например сложные эфиры и амиды.

Различные полиморфы соединений формулы (I), формирующие часть изобретения, можно получить кристаллизацией соединений формулы (I) при различных условиях. Например, применяют различные, обычно применяемые растворители или их смеси для кристаллизации; кристаллизация при различных температурах; различные виды охлаждения, находящиеся в диапазоне от очень быстрого до очень медленного охлаждения на протяжении кристаллизации. Полиморфы можно также получить нагреванием или расплавлением соединения, за чем следует постепенное или быстрое охлаждение. Присутствие полиморфов можно определить ИК-спектроскопией, ЯМР спектроскопией твердого тела, дифференциальной сканирующей калориметрией, дифракцией рентгеновских лучей на порошке или другими подобными методиками.

Где стереохимия изображена в структурах, она представлена относительно, а не в абсолютной конфигурации.

Данное изобретение относится к энантиомерно чистому соединению формулы (I), к метаболиту, пролекарству, фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его полиморфу.

,

где

R₁ представляет собой фенил, который замещен или незамещен 1, 2, или 3 идентичными или различными заместителями, выбранными из: галогена, нитро, циано, С₁-С₄-алкила, фторметила, дифторметила, трифторметила, С₁-С₄-алкокси, гидроксила, карбокси, С₁-С₄-алкоксикарбонила, С ₁-С₄-алкиленгидроксила, CONH₂, CONR ₅R₆, SO₂NR₅R₆ , циклоалкила, NR₅R₆, SR₇; или представляет собой гетероцикл, который является насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим кольцом, содержащим пять или шесть атомов кольца, из которых 1, 2 или 3 являются идентичными или различными гетероатомами, выбранными из: азота, кислорода и серы, и где гетероцикл является замещенным или незамещенным 1, 2 или 3 идентичными или различными заместителями, выбранными из: галогена, нитро, циано, С₁-С₄-алкила, фторметила, дифторметила, трифторметила, С₁-С₄-алкокси, гидроксила, карбокси, С₁-С₄-алкоксикарбонила, С₁-С₄-алкиленгидроксила, CONH₂ , CONR₅R₆, SO₂NR₅ R₆, циклоалкила, NR₅R₆ и SR ₇;

где R₅ и R₆ каждый независимо выбран из: водорода, С₁-С₄-алкила, С₁-С₄-алкоксикарбонила, С₁-С ₄-алкилакарбонила, арила; или R₅ и R₆ вместе с атомом азота, с которым они связаны, могут образовать пяти или шестичленное кольцо, которое может необязательно содержать дополнительный гетероатом; и

R₇ может быть выбран из водорода, С₁-С₄-алкила, арила, SR₁₀, где R₁₀ может быть выбран из С₁-С₄-алкила или арила;

R₂ и R₃ каждый независимо выбран из: галогена, гидроксила и OR₈; где R₈ представляет собой замещенный или незамещенный С₁-С₁₀-алкил, С₁-С₄-алканоил, замещенный или незамещенный ароил;

R₄ представляет собой С ₁-С₄.алкиленгидроксил; и

R ₉ представляет собой водород или С₁-С₄ -алкил.

В альтернативных предпочтительных вариантах осуществления энантиомерно чистых соединений формулы (I), группы R₁-R₃ и R₉, независимо друг от друга, имеют предпочтительные значения, которые даны ниже:

R¹ представляет собой фенил, который замещен или незамещен 1, 2 или 3 идентичными или различными заместителями, выбранными из: галогена, нитро, циано; С₁-С₄ -алкила, фторметила, дифторметила, трифторметила, С₁ -С₄-алкокси, гидроксила, карбокси, С₁-С ₄-алкоксикарбонила, С₁-С₄-алкиленгидроксила, CONH₂, CONR₅R₆, SO₂ NR₅R₆, циклоалкила, NR₅R ₆ и SR₇;

R₂ и R ₃ представляют собой OR₈, где R₈ как определено и такой же или отличный от R₂ и R ₃;

R⁹ представляет собой С ₁-С₄-алкил;

или метаболит, пролекарство, фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или полиморф предпочтительных вариантов осуществления.

По данному изобретению, самое предпочтительное энантиомерно чистое соединение формулы (I), или соль, или его пролекарство, выбрано из:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1 -метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфоната;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфоната;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она цитрата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она тартрата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она малеата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она ацетата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она сульфата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она нитрата;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпиррлидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметилафенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметилафенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметилафенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконата;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она глюконата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-она;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-она глюконата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она цитрата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она тартрата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глутамата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она малеата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она нитрата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она ацетата;

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконата;

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил метил сложного эфира;

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил метил сложный эфир гидрохлорида;

(+)-транс-Уксусной кислоты 8-(2-ацетоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира;

(+)-транс-Бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлор фенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира;

(+)-транс-Бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлор фенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложный эфир гидрохлорида;

(+)-транс-Октановой кислоты 2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(1-метил-2-октаноилоксиметилпирролидин-3-ил)-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира;

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-7-метокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира; и

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-7-(2-метокси этоксиметокси)-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира.

По другому варианту осуществления данного изобретения, обеспечили способ получения энантиомерно чистого соединения формулы (I). Один подход, известный в технике, обеспечивает один энантиомер разделением рацемической смеси соединения в конце ряда реакций. Данный подход предназначен для разделения энантиомеров на несколько этапов раньше в ряду и, таким образом, для обеспечения эффективного способа. Данный изобретатель установил рацемическое соединение, представленное формулой (VIA) как идеальное для разделения.

,

где R₂, R₃, R ₄ и R₉ таковы, как определено, или его фармацевтически приемлемая соль.

Способ повторного растворения данного изобретения включает реакцию рацемического соединения, представленного формулой ((±)-VIA) с хиральным добавочным веществом в присутствии простого растворителя для получения соответствующей смеси диастереомерных солей (+)- и (-)-энантиомеров соединения формулы (VIA), разделяя соответствующие диастереомерные соли и обрабатывая диастереомерную соль (-)-энантиомера основанием для получения свободного основания необходимого (-)-энантиомера соединения, представленного следующей формулой.

В способе повторного растворения по данному изобретению, хиральное добавочное вещество выбрано из: (-)-дибензоил виннокаменной кислоты ((-)-DBTA), (+)-дибутил виннокаменной кислоты, (-)-дибутил виннокаменной кислоты, (+)-кетопиновой кислоты, (-)-кетопиновой кислоты, (+)-камфор-10-сульфоновой кислоты, (-)-камфор-10-сульфоновой кислоты, (+)камфорной кислоты и (-)-камфорной кислоты. Самым предпочтительным хиральным добавочным веществом является (-)-дибензоил виннокаменной кислоты ((-)-DBTA).

Простой растворитель, применяемый на этапе повторного растворения, может быть выбран из: метанола, изопропанола, диизопропилового эфира, этилацетата и хлороформа. Самым предпочтительным растворителем является метанол.

Основание может быть выбрано из: бикарбоната натрия, карбоната натрия и карбоната калия. Самым предпочтительным основанием является карбонат натрия.

Более в частности, обеспечили способ повторного растворения рацемического соединения формулы (VIA), где R₂ и R₃ являются метокси, R₉ представляет собой метил и R₄ представляет собой гидроксиметил, соединение химически известно как (±)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]метанол (определенное тут как соединение А).

Способ повторного растворения соединения А описан в опубликованной заявке заявителя на патент США, находящейся на стадии рассмотрения, № 2004/010658. Данный способ включает множество этапов кристаллизации и перекристаллизации. Растворенное соединение (-)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол (определенное тут как соединение В) получили с выходом 22-30% и сообщенным оптическим вращением -17,7° (с=1,1, метанол).

В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения, способ, включающий повторное растворение интермедиата соединения формулы (VIA), особенно соединения А, включает реакцию соединения А с (-)-DBTA ((-)-дибензоил виннокаменной кислотой) как хиральный вспомогательный метанол для получения кристаллизированных солей дибензоилтартрата (+)- и (-)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанола. Предпочтительную соль (-)-дибензоилтартрата соединения В затем преобразовали в его свободное основание обработкой диастереомерной соли карбонатом натрия.

Энантиомерную чистоту соединения В, полученного способом по данному изобретению, оценивали и сравнивали с той, что получена при применении способа повторного растворения, сообщенного в вышеупомянутой опубликованной заявке на патент США № 2004/0106581, применяя хиральную ВЭЖХ. Доказали, что соединение В, полученное по способу данного изобретения, является одним изомером с 100% э.и. (энантиомерный избыток), тогда как соединение В получили с 88,3% э.и., когда получали способом, раскрытым в заявке на патент США № 2004/0106581.

Таким образом, не только простые энантиомеры, полученные способом по данному изобретению, имеют большую энантиомерную чистоту по сравнению с простыми энантиомерами, полученными известными способами, но и способ по данному изобретению является более простым и более экономичным, чем известные способы, поскольку он включает один этап реакции для получения диастереомерной соли, а именно соль дибензоилтартрата. Данный способ включает однократную кристаллизацию. Применение хирального добавочного вещества (-)-DBTA имеет дополнительное преимущество в том, что оно сравнительно дешевле, чем (+)-DBTA, которые применяют в способе, изложенном в опубликованной заявке на патент США № 2004/0106581, таким образом снижая общую стоимость производства.

Рацемическое соединение формулы (VIA), ключевые интермедиаты в получении соединения формулы (I), можно получить как изложено в следующей схеме 1.

Этапы получения в соответствии к соединению формулы (V), начиная от соединения формулы (II), описаны в US-A-4900727, что включено в данное описание ссылкой. В преобразовании соединения формулы (V) к формуле (VIA) в вышеуказанной схеме, функция гидроксила на кольцо пиперидина может быть преобразована на уходящую группу, такую как тозил, мезил, трифлат или галид, обработкой соответствующим реагентом, таким как р-толуолсульфонилхлорид, метансульфонилхлорид, трифторметансульфоновый ангидрид или пентахлорид фосфора в присутствии нуклеофилов кислорода, таких как триэтиламин, пиридин, карбонат калия или карбонат натрия, с последующим сужением кольца в присутствии нуклеофилов кислорода, таких как ацетат натрия или ацетат калия в спиртовом растворителе, таком как изопропанол, этанол или пропанол. Сужение кольца, включенное в данный этап, может выполняться перед образованием флавона, как изображено на вышеупомянутой схеме, или может быть завершено после формирования флавона с необходимыми заместителями.

Одним вариантом осуществления данного изобретение является энантиомерно чистый (-)-транс энантиомер соединения формулы (VIA), как определено выше, где энантиомерная чистота как определена.

Другим вариантом осуществления данного изобретения является применение энантиомерно чистого (-)-транс энантиомера интермедиата соединения формулы (VIA) как определено, для получения энантиомерно чистого соединения формулы (1) как определено. Применяя интермедиат, имеющий высокую энантиомерную чистоту, в качестве исходного соединения в способе, получающийся (+)-транс энантиомер пирролидинов, замещенных флавоном, представленный формулой (1), полученный способом, имеет соответственно высокую энантиомерную чистоту.

Согласно с предпочтительным вариантом осуществления данного изобретения, обеспечили способ получения энантиомерно чистого (+)-транс энантиомера соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, из растворенного энантиомерно чистого (-)-транс энантиомера интермедиата соединения формулы (VIA), способ включает этапы, на которых:

(а) обрабатывают растворенный энантиомерно чистый (-)-транс энантиомер интермедиата соединения формулы (VIA),

,

где R₂, R₃, R ₄ и R₉ таковы, как определено, уксусным ангидридом в присутствии катализатора кислоты Льюиса для получения растворенного ацетилированного соединения формулы (VIIA),

,

где R₂, R₃ и R ₉ таковы, как определено, и R₄ представляет собой СН₂ОС(O)СН₃;

(b) проводят реакцию растворенного ацетилированного соединения формулы (VIIA) с кислотой формулы R₄COOH или хлорангидридом кислоты формулы R₁COCl или ангидридом кислоты формулы (R₁CO)₂O или сложным эфиром формулы R ₁COOCH₃, где R₁ определено выше, в присутствии основания и растворителя для получения растворенного соединения формулы (VIIIA);

,

где R₁, R₂, R ₃ и R₉ таковы, как определено выше, и R ₄ представляет собой СН₂ОС(O)СН₃;

(с) обрабатывают растворенное соединение формулы (VIIIA) основанием в пригодном растворителе для получения соответствующего растворенного соединения -дикетона формулы (IXA);

,

где R₁, R₂, R ₃ и R₉ таковы, как определено выше, и R ₄ представляет собой СН₂ОС(O)СН₃;

(d) обрабатывают растворенное соединение -дикетона формулы (IXA) кислотой, такой как хлористо-водородная кислота, для получения соответствующего циклированного соединения формулы (ХА),

,

где R₁, R₂, R ₃ и R₉ таковы, как определено выше, R₄ представляет собой СН₂ОН;

(е) подвергают соединение формулы (ХА) деалкилированию нагреванием его с деалкилирующим агентом при температуре в диапазоне от 120-180°С для получения (+)-транс энантиомера соединения формулы (I) (где R₂ и R₃ представляют гидрокси) и, необязательно, преобразовывают испытанное соединение в его фармацевтически приемлемую соль.

Катализатор кислоты Льюиса, применяемый на этапе (а) выше, может быть выбран из: BF₃. Et₂ O, хлорида цинка, хлорида алюминия и хлорида титана.

Основание, применяемое на этапе способа (b), может быть выбрано из триэтиламина, пиридина и комбинации DCC-DMAP (дициклогексилкарбодиимид-диметиламинопиридин).

Специалистам данной области будет очевидно, что перегруппировка соединения формулы (VIIIA) в соответствующее соединение -дикетона формулы (IXA) известна как перегруппировка Бейкера-Венкатарамана (J.Chem. Soc., 1381 (1933) and Curr. Sci., 4,214 (1933)).

Основание, применяемое на этапе способа (с), может быть выбрано из: гексаметилдисиазиды лития, гексаметилдисиазиды натрия, гексаметилдисиазиды калия, гидрида натрия и гидрида калия. Самым предпочтительным основанием является гексаметилдисиазида лития.

Далкилирующий агент, применяемый на этапе способа (е) для деалкилирования соединения формулы (IXA), может быть выбран из: пиридин гидрохлорида, трибромида бора, эфирата трехфтористого бора и трихлорида алюминия. Самым предпочтительным деалкилирующим агентом является пиридин гидрохлорид.

Альтернативный способ получения соединения формулы (I) включает этапы, на которых:

(i) гидролизируют растворенное ацетилированное соединение формулы (VIIA) (полученное на этапе (а) способа, описанного выше) основанием в присутствии растворителя для получения соответствующего растворенного спирта формулы (XIA);

,

где R₂, R₃ и R ₉ таковы, как определено выше;

(ii) обрабатывают растворенное соединение формулы XIA кислотой формулы R₁ COOH, или хлорангидридом кислоты формулы R₁COCl, или ангидридом кислоты формулы (R₁CO)₂O, или сложным эфиром формулы R₁COOCH₃, где R ₁ определено выше, в присутствии основания и пригодного растворителя в атмосфере азота, с последующей циклизацией, катализированной кислотой для получения соединения формулы (ХА);

i) подвергают растворенное соединение формулы (ХА) деалкилированию его нагреванием с деалкилирующим агентом при температуре в диапазоне от 120-180°С для получения растворенного (+)-энантиомера соединения формулы (I) (где R₂ и R₃ представляют гидроксильную группу) и, необязательно, преобразовывают получающееся в результате соединение в его фармацевтически приемлемую соль.

На этапе (i) альтернативного способа, основание может быть выбрано из гидроксида натрия и гидроксида калия и растворитель может быть выбран из: метанола и этанола.

На этапе (ii) альтернативного способа, основание может быть выбрано из гидрида натрия и гидрида калия и растворитель может быть выбран из: диметилформамида, тетрагидрофурана и 1,4-диоксана.

Данное изобретение также относится ко всем растворенным интермедиатам, которые крайне необходимы для синтеза энантиомерно чистого (+)-транс-энантиомера соединения общей формулы (I).

Более в частности, энантиомерно чистыми интермедиатами, которые включены в объем данного изобретения, являются соединения формулы (VIA), (VIIA), (VIIIA), (IXA), (XA) и (XIA):

В соединениях формулы (VIA), (VIIA), (VIIIA), (IXA), (ХА) и (XIA) заместители R₁, R₂, R₃, R₄ и R₉ таковы, как определено выше.

В специфическом варианте осуществления данного изобретения, селективное деметилирование соединения формулы (ХА) [где R₁ представляет собой фенил, замещенный R₁₀ и R₁₁, где R₁₀ и R₁₁ независимо представлены группой, выбранной из: галогена, нитро, циано, C₁-C₄-алкила, фторметила, дифторметила, трифторметила, C₁-C₄-алкокси, гидроксила, карбокси, С₁-С₄-алкоксикарбонила, C ₁-C₄-алкиленгидроксила, CONH₂, CONR ₅R₆, SO₂NR₅R₆ , циклоалкила, NR₅R₆, SR₇; и R₄ представляет собой СН₂ОН] проводят, как изображено на следующей схеме 2.

Как иллюстрируется на схеме 2 выше, гидроксигруппа в соединении формулы (ХА) защищена пригодной защитной группой, такой как ацетильная группа, обработкой указанного соединения формулы (ХА) соответствующим реагентом, таким как ацетилхлорид или уксусный ангидрид, в присутствии основания, выбранного из: гидрида натрия, гидрида калия, пиридин, триэтиламин и диметиламинопиридина (DMAP) для получения ацетилированного соединения формулы XIIA. Соединение формулы XIIA затем обработали деметилирующим агентом, таким как эфират трехфтористого бора для получения соединения формулы XIIIA.

Данное изобретение охватывает пролекарства энантиомерно чистых соединений формулы (I) и фармацевтических композиций, содержащих их и способ лечения путем введения таких пролекарств.

Другой аспект данного изобретения обеспечивает способ получения пролекарства растворенного соединения формулы (I), причем способ включает этапы, на которых обрабатывают растворенное соединение формулы (I), где R₂ и R ₃ являются гидроксилом, кислотой или хлорангидридом в присутствии основания для получения пролекарства растворенного соединения формулы (1), где R₂ представляет собой гидрокси, R ₃ представляет собой гидрокси, OCOR или OR, и R₄ представляет собой алкиленОН или алкилен ОС(O)R; где R представляет собой алкил или арил. Одним таким пролекарством является соединение формулы (XIVA).

Пример получения пролекарства энантиомерно чистого соединения формулы (I) is изображен на следующей схеме 3

Способ, включающий реакцию энантиомерно чистого соединения формулы (I), где R₂ и R₃ представляют собой гидроксигруппы, с кислотой или хлорангидридом кислоты в присутствии основания, выбранного из: гидрида натрия, гидрида калия, пиридин, триметиламин и DMAP для получения энантиомерно чистого (+)-транс-энантиомера пролекарства формулы (XIVA), где R₂ представляет собой гидрокси,

R ₃ представляет собой OC(O)R, R₄ представляет собой алкиленОС(О) R; где R представляет собой алкил или арил. В соединениях формулы XIVA и I, R₁₀ и R₁₁ таковы, как определено выше.

По данному изобретению, соединения общей формулы (I) являются ингибиторами CDK, в частности комплексов CDK/циклин и находят применение в антипролиферативных терапиях для заболеваний, которые характеризуются избыточным клеточным ростом, например раком, сердечно-сосудистыми отклонениями, нефрологическими нарушениями, псориазом, паразитологией, болезнью Альцгеймера, воспалением и артритом, иммунологическими нарушениями, включающими нежелательную пролиферацию лейкоцитов, рестеноз и другие пролиферативные нарушения гладкой мышцы, вирусные инфекции и грибковые инфекции.

Данное изобретение, таким образом, относится к энантиомерно чистым соединениям формулы (I), и/или их фармацевтически приемлемым солям, и/или их пролекарствам для применения как лекарственных препаратов (или медикаментов), для применения энантиомерно чистых соединений формулы (I), и/или их фармакологически приемлемых солей, и/или их пролекарств для получения лекарственных препаратов для ингибирования клеточной пролиферации или для терапии и профилактики заболеваний, упомянутых выше, например, для получения лекарственных препаратов для терапии и профилактики рака, воспаления и артрита, псориаза, заболеваний кости, микозных или вирусных инфекций, сердечно-сосудистых заболеваний, болезни Альцгеймера и т.д., и к способам лечения, направленных на такие цели, включая способы для указанных терапий и профилактик. Данное изобретение, более того, относится к фармацевтическим композициям, которые содержат эффективное количество, по меньшей мере, одного энантиомерно чистого соединения формулы (I) и/или его физиологически приемлемых солей и/или его пролекарств вдобавок к обычному фармацевтически приемлемому носителю, необязательно, с другими активными антипролиферативными агентами, и к способу получения лекарственного препарата, который включает внесение, по меньшей мере, одного энантиомерно чистого соединения формулы (I) в пригодной форме введения, применяя фармацевтически пригодный и физиологически подходящий носитель и, если подходит, дополнительно пригодные активные соединения и/или добавки. Эти композиции можно получить применением известных методик в технике, таких, что изложены в "Remington's Pharmaceutical Sciences", опубликованной Mack Publishing Co. или "Pharmaceutical Dosage Form and Drug Delivery Systems" (шестое издание), опубликованной Williams & Wilkins, (1995), каждая включена ссiлкой в данное описание.

Данное изобретение также относится к способу получения медикамента для лечения или предупреждения заболеваний, связанных с чрезмерной пролиферацией клетки, который отличается тем, что, по меньшей мере, одно энантиомерно чистое соединение общей формулы (I) применяют как фармацевтически активное вещество.

Фармацевтические композиции обычно содержат приблизительно от 1 до 99%, предпочтительно приблизительно от 5 до 70%, наиболее предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 30% по весу энантиомерно чистых соединений формулы (I) и/или из физиологически подходящих солей и/или их пролекарств. Количество активного ингредиента энантиомерно чистого соединения формулы (I) и/или его физиологически подходящих солей и/или его пролекарств в фармацевтических композициях обычно приблизительно от 5 до 500 мг. Дозировка энантиомерно чистых соединений по данному изобретению, которое вводят, может охватывать широкий диапазон. Доза, которая будет вводиться ежедневно, выбрана для удовлетворения необходимого эффекта. Приблизительно от 20 до 1000 мг предпочтительно вводят ежедневно пациенту. При необходимости, также можно вводить более высокую или низкую дозу. Фактические уровни дозы активных ингредиентов в фармацевтических композициях по данному изобретению могут варьировать с тем, чтобы получить количество активного инредиента, который эффективный для достижения необходимого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и вида введения без отравления пациента.

Выбранный уровень дозы будет зависеть от различных факторов, включая активность используемого конкретного соединения по данному изобретению или сложного эфира, соли или его амида, пути введения, времени введения, скорости экскреции конкретного соединения, которое использовали, продолжительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в комбинации с отдельными используемыми соединениями, возраста, пола, веса, состояния, общего состояния здоровья и предварительной истории болезни пациента, которого лечат, и подобных факторов, хорошо известных в медицине.

Лекарственные препараты можно вводить перорально, включая сублингвально, например в форме пилюль, таблеток, покрытых таблеток, капсул, гранул, порошков, сиропов или эликсиров. Введение, тем не менее, можно также проводить: ректально или вагинально, например в форме суппозиториев; парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно, включая применение методик вливания в форме инъекционных стерильных растворов или суспензий; местно, например, в форме кремов, мазей, лосьонов, пен, гелей, эмульсий, растворов, настоек, болтушек или трансдермальных пластырей; или другими путями, например офтальмически, оптически, назально или в других формах, например аэрозоли, ингаляторы или назальные спреи.

Фармацевтические композиции по данному изобретению получены способом, известным по существу и известным специалисту данной области. Фармацевтически приемлемые инертные неорганические и/или органические носители и/или добавки можно применять в дополнение к соединению (ям) формулы (I), и/или его (их) физиологически подходящим солям, и/или его (их) пролекарствам. Для получения пилюль, таблеток, покрытых таблеток и твердых желатиновых капсул возможно применять, например, лактозу, кукурузный крохмал или его производные, аравийскую камедь, магнезию или глюкозу, и т.д. Носителями для мягких желатиновых капсул и суппозиториев являются, например, жиры, воск, природные или гидрогенизированные масла, и т.д. Пригодными носителями для изготовления растворов являются, например, инъекционные растворы, или эмульсии, или сиропы, например вода, физиологический раствор хлорида натрия, или спирты, например этанол, пропанол или глицерол, сахарные растворы, такие как растворы глюкозы или растворы маннитола, или смеси различных растворителей, которые упоминались. Добавками, которые могут применяться, являются, например, наполнители, антиоксиданты, дисперсанты, эмульгаторы, противопенные агенты, модификаторы аромата, консерванты, солюбилизаторы или красители.

Обычно применяемые фармацевтически приемлемые носители и добавки, которые можно применять как предназначенные для формулирования композиции для ее предназначенного пути введения, хорошо известны в технике и включают те носители и добавки, описанные в опубликованной заявке заявителя на патент США № 2004/0106581.

Фармацевтические композиции также могут содержать два или более энантиомерно чистых соединений формулы (I), и/или их физиологически подходящие соли, и/или их пролекарства. Более того, вдобавок к, по меньшей мере, одному энантиомерно чистому соединению формулы (I), и/или его физиологически подходящим солям, и/или его пролекарствам, фармацевтические композиции могут также содержать один или более других терапевтически или профилактически активных ингредиентов. Таким образом, соединения по данному изобретению могут применяться как лекарственные средства при лечении пролиферативных нарушений либо поодиночке, либо как часть комбинированных терапий. Например, энантиомерно чистые соединения данного изобретения могут применяться в комбинации с известными противораковыми, цитостатическими и цитотоксическими агентами. Если сформулировано как установленная доза, такие продукты комбинации применяют соединения по данному изобретению в пределах диапазона дозировки, описанного выше, и другой фармацевтически активный агент в пределах своего разрешенного диапазона дозировки. Например, было обнаружено, что ингибитор CDK оломуцин действует синергично с известными цитотоксическими агентами в индуцировании апоптоза (J.Cell Sci., 1995, 108, 2897). Энантиомерно чистые соединения общей формулы (I) можно применять последовательно с известными лекарственными средствами, такими как противораковые или цитотоксичные агенты, когда состав комбинации неподходящий.

Необязательные антипролиферативные агенты, которые можно добавить в композицию, включают, но не ограничиваются, соединения, которые изложены в раковой химиотерапии схем лекарственного лечения в 13-м издании Merck Index, (1996) (NB год или издание требует коррекции), которые в данное описание включены ссылкой, такие как аспарагиназу, блеомицин, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, коласпазу, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, этопозид, фторурацил, гексаметилмеламин, гидроксимочевину, ифосфамид, лейковорин, ломустин, мехлорэтамин, 6-меркаптопурин, месну, метотрексат, митомицин С, митоксантрон, преднизолон, преднизон, прокарбазин, стрептозоцин, тамоксифен, тиогуанин, винбластин, винкристин, виндезин.

Другие антипролиферативные агенты, пригодные для применения с композицией по изобретению, включают, но не ограничиваются, те соединения, что признаны для применения при лечении новообразований в Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (девятое издание), редактор Molinoff et al., опубл. McGraw-Hill, стр.1225-1287, (1996), которые включены в данное описание ссылкой, такие как аминоглютетимид, L-аспарагиназу, азатиоприн, 5-азацитидин, кладрибин, бисульфан, диэтилстилбестрол, 2',2'-дифтордезоксицитидин, доцетаксел, эритрогидроксинониладенин, этинилэстрадиол, 5-фтордезоксиуридин, 5-фтордезоксиуридин монофосфат, флударабинфосфат, флуоксиместрон, флутамид, гидроксипрогестеронкапроат, идарубицин, интерферон, медроксипогестеронацетат, мегестролацетат, мелфалан, митотан, паклитаксел, пентостатин, N-фосфоноацетил-L-аспартат (PALA), пликамицин, семустин, тенипозид, тестостеронпропионат, тиотепу, триметилмеламин, уридин, винорелбин.

Необязательные ингибирующие агенты циклин-зависимой киназы (CDK), которые можно добавить к композиции, включают, но не ограничиваются, алстерпауллон, бутиролактон I, ингибитор CDK2, CDK2/циклин ингибирующий пептид I, CDK2/циклин ингибирующий пептид II, 2-(2-гидроксиэтиламино)-6-(3-хлоранилин)-9-изопропилпурин, индирубин-3'-моноксим, кенпауллон, оломуцин, изооломуцин, N⁹-изопропил-оломуцин, пурваланол А, росковитин, (S)-изомер росковитина и WHI-P180 [4-(3'-гидроксифенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] (от Calbiochem Signal Transduction Catalog & Technical Resource 2001).

Понятно, что модификации, которые не воздействуют значительно на активность различных вариантов осуществления данного изобретения, включены в пределы раскрытого изобретения. Соответственно, следующие примеры иллюстрируют, но не ограничивают данное изобретение.

Примеры

В данном описании применяются следующие аббревиатуры:

BF₃: Диэтиловый эфират трехфтористого бора

Конц.: Концентрированный

THF: Тетрагидрофуран

EtOAc: Этилацетата

МеОН: Метанол

IPA: Изопропанол

DBTA: Дибензоил виннокаменной кислоты

DMF: N,N-диметилформамид

DCC: N,N-дициклогексилкарбодиимид

DMAP: (N,N-диметиламино)пиридин

HCl: Хлористо-водородная кислота

NaBH₄ : Боргидрид натрия

NaOH: Гидроксид натрия

Na₂CO₃: Карбонат натрия

Пример 1:

1-Метил-4-(2,4,6-триметоксифенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин

1-метил-4-пиперидон (340 г, 3,0 моль) медленно добавили к раствору 1,3,5-триметоксибензола (500 г, 2.97 моль) в ледяной уксусной кислоте (600 мл), поддерживая температуру реакционной смеси ниже 40°С. Конц. HCl (450 мл) добавили через 20 минут. Температуру повысили до 85-90°С и реакционную смесь перемешивали в течение 3,5 часов. Охладили до 40°С, вылили на дробленный лед (4 кг) и перемешивали в течение 20 минут. Осадок непрореагированного 1,3,5-триметоксибензола отфильтровали. Фильтрат подщелочили ниже 10°С до pH 11-12, применяя 50% водный раствор NaOH. Полученное беловатое твердое вещество отфильтровали, промыли водой и высушили для получения соединения 1-метил-4-(2,4,6-триметоксифенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридина.

Выход: 580 г (74%);

mp (точка плавления): 112-114°С;

IR (инфракрасное излучение) (KBr): 3045, 2900, 2837, 1600, 1585 см^-1;

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,15 (s, 2Н), 5,55 (s, 1H), 3,85 (s, 3Н), 3,75 (s, 6H), 3,10 (d, 2H), 2,55 (t, 2H), 2,40 (s, 3Н), 2,35 (m, 2H);

MS (EI): m/z 263 (M+).

Пример 2:

(±)-транс-1-Метил-4-(2,4,6-триметоксифенил)-пиперидин-3-ол

Диэтиловый эфират трехфтористого бора (300 мл, 2,36 моль) медленно добавили с перемешиванием в атмосфере азота при 0°С к раствору соединения формулы (1) (300 г, 1,14 моль) и NaBH₄ (75 г, 1,97 моль) в сухом THF (2,25 л). Температуру реакционной смеси медленно повысили до 55°С и перемешивали в течение 1,5 часа. Ее охладили до 30°С. Ледяную воду (100 мл) медленно добавили с последующим подкислением конц. HCl (375 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 50-55°С. Ее охладили до 30°С и подщелочили, применяя 50% водный раствор NaOH до pH 11-12. Пероксид водорода (30%, 225 мл) добавили через 0,5 часа. Реакционную смесь перемешивали при 55-60°С на протяжении 1,5 часа. Ее охладили до 30°С и добавили достаточное количество воды для растворения осевших солей. Органический слой отделили и водную часть экстрагировали с этилацетатом (2×1 л). Органические экстракты высушили (безводный Na₂ SO₄) и концентрировали. Полученное неочищенное вязкое коричневое масло обработали 4N HCl (1,2 л) и экстрагировали с этилацетатом (2×500 мл). Водную часть охладили, подщелочили 50% водным раствором гидроксида натрия и экстрагировали, применяя этилацетат (2×1 л). Органический экстракт высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения соединения (±)-транс-1-метил-4-(2,4,6-триметоксифенил)-пиперидин-3-ола.

Выход: 210 г (65,6%);

mp: 96-97°С;

IR (KBr): 3582, 3374, 3017 см^-1;

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,15 (s, 2Н), 4,40 (m, 1H), 3,79 (s, 3Н), 3,74 (s, 6H), 3,20 (dd, 1H), 3,00 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,90 (t, 1H), 1,52 (m, 1H);

MS (CI): m/z 282 (M+1).

Пример 3:

(±)-транс-Уксусной кислоты-1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил метил сложный эфир

Метансульфонил хлорид (30,27 мл, 44,8 г, 0,4 моль) добавили по каплям к охлажденному и перемешанному раствору соединения формулы (2) (100 г, 0,35 моль) и триэтиламина (71,88 г, 0,7 моль) в сухом THF (1,0 л). Реакционную смесь дополнительно перемешивали на протяжении 45 минут при 0°С. Осадок триэтиламин HCl отфильтровали и промыли сухим THF (2×100 мл). Фильтрат добавили по каплям к суспензии ацетата натрия, кипящей с обратным холодильником (115 г, 1,40 моль) в 2-пропаноле (1,0 л). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником на протяжении дополнительных 15 минут, разбавили EtOAc (1.0 L) и соли отфильтровали. Смесь солей промыли EtOAc (2×100 мл). Комбинированный фильтрат концентрировали для получения камеди. Воду (50 мл) добавили к камеди с перемешиванием для получения твердого вещества, которое отфильтровали и высушили для получения соединения, (±)-транс-уксусной кислоты 1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил метил сложного эфира.

Выход: 90 г (81%);

mp: 74-77°С;

¹Н NMR (CDCl ₃, 300 MHz): 6,13 (s, 2Н), 4,00 (m, 2Н), 3,81 (m, 1Н), 3,79 (s, 3Н), 3,76 (s, 6Н), 3,20 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,69 (m, 1Н), 2,47 (s, 3Н), 2,00 (m, 2Н), 1,99 (s, 3Н).

Пример 4:

(±)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол

10% водный раствор NaOH (596 мл) добавили к раствору соединения примера (3) (241 г, 0,75 моль) в метаноле (596 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°С на протяжении 45 минут. Ее концентрировали до камеди и затем вылили в ледяную воду (2 л). Полученное твердое вещество отфильтровали для получения соединения (±)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанола.

Выход: 198 г (94%);

mp: 82-85°С;

IR (KBr): 3421, 3009, 1607 см^-1;

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,15 (s, 2Н), 3,92 (m, 1Н), 3,80 (s, 9Н), 3,60 (dd, 1Н), 3,45 (d, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,42 (s, 3Н), 2,00 (m, 1H), 1,92 (m, 1H);

MS(ES+): m/z 282 (M+1).

Пример 5:

(-)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол

(-)-DBTA (321,7 г, 897,7 ммоль) добавили к соединению формулы (4) (250 г, 889,6 ммоль) с последующим добавлением метанола (1715 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником на протяжении 10 минут, медленно перемешивали при комнатной температуре на протяжении 3 часов, кристаллизированную соль отфильтровали и высушили.

Выход: 185 г (30%);

mp: 102-105°С;

[ ]_D ²⁵=-82,66° (с=07, метанол).

Соль перемешивали с 10% водным раствором Na₂CO ₃ (765 мл) и EtOAc (200×3 мл) для получения свободного основания в слое EtOAc. Слой EtOAc концентрировали для получения соединения (-)-транс-[1-метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанола.

Выход: 80 г (98,3%);

[ ]_D ²⁵=-20,0° (с=0,7, метанол);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,13 (s, 2Н), 3,90 (m, 1H), 3,79 (s, 9Н), 3,57 (dd, 1H), 3,38 (d, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,93 (m, 1H).

Данное соединение подвергли хиральной ВЭЖХ. Хиральную ВЭЖХ провели, применяя колонку Chiralcel OD-H (250×4,6 мм), и систему растворителей гексан:этанол (92:08) с TFA (0.4%). Результаты записали при 264 нм со скоростью потока растворителя 1 мл/мин. Как изображено на фигуре 1, хиральная ВЭЖХ показывает 100% э.и. соединения, (-)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанола.

Пример 6:

(-)-транс-Уксусной кислоты-3-(3-ацетил-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил)-1-метилпирролидин-2-ил метил сложный эфир

BF₃-эфират (25,2 г, 178 ммоль) добавили по каплям с перемешиванием при 0°С, в N₂ атмосфере к раствору соединения примера (5) (10 г, 35,58 ммоль) в уксусном ангидриде (19,48 мл, 176 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Ее вылили на дробленный лед (1 кг), подщелочили, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃ и экстрагировали, применяя EtOAc (3×200 мл). Органический экстракт промыли рассолом, высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения соединения (-)-транс-Уксусной кислоты 3-(3-ацетил-2-гидрокси-4,6-диметокси-фенил)-1-метилпирролидин-2-ил метил сложного эфира.

Выход: 10 г (83%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 14,20 (s, 1H), 5,96 (s, 1H), 4,10 (d, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,66 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 2,21 (m, 2H), 2,10 (s, 3H).

Пример 7:

(-)-транс-1-[2-Гидрокси-3-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-4,6-диметоксифенил)-этанон

К раствору соединения примера (6) (10 г, 28,4 ммоль) в метаноле (25 мл) добавили с перемешиванием при комнатной температуре 10% водный раствор NaOH (25 мл). Температуру реакционной смеси повысили до 50°С за 45 минут. Ее охладили до комнатной температуре, подкислили, применяя конц. HCl, и концентрировали для удаления метанола. Ее подщелочили, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃. Соединение (-)-транс-1-[2-гидрокси-3-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-4,6-диметоксифенил)-этанона отфильтровали, промыли водой и высушили.

Выход: 7,14 г (82%);

IR (KBr): 3400, 3121, 3001, 1629, 1590 см^-1;

¹Н NMR (CDCl ₃, 300 MHz): 5,96 (s, 1H), 3,93 (m, 1Н), 3,90 (s 3Н), 3,88 (s, 3Н), 3,59 (dd, 1Н), 3,37 (d, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,59 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,00 (m, 2H);

MS(ES+): m/z 310 (M+1).

Пример 8:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Гидрида натрия (50%, 0,54 г, 11,25 ммоль) добавили по частям к раствору соединения примера (7) (0,7 г, 2,2 ммоль) в сухом DMF (15 мл) при 0°С в атмосфере азота и с перемешиванием. Через 10 минут добавили метил 2-хлорбензоат (1,15 г, 6,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 часов. Осторожно добавили метанол при ниже 20°С. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г), подкислили 1:1 HCl (pH 2) и экстрагировали, применяя EtOAc (2×100 мл). Водный слой подщелочили, применяя насыщенный Na₂CO₃ (pH 10), и экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический слой высушили (безводный Na₂SO ₄) и концентрировали. К остатку добавили конц. HCl (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г) и сделали основной, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO ₃. Смесь экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический экстракт промыли водой, высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она.

Выход: 0,67 г (64%);

mp: 91-93°С;

[ ]_D ²⁵=+5,8° (с=0,7, метанол);

IR (KBr): 3431, 1648, 1598, 1571 см^-1;

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,70 (dd, 1Н), 7,52 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 6,50 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,64 (dd, 1H), 3,40 (d, 1H), 3,15 (m, 1H), 2,74 (d, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,00 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 430 (M+1).

Пример 9:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Расплавленный пиридин гидрохлорид (4,1 г, 35,6 ммоль) добавили к соединению формулы (8) (0,4 г, 0,9 ммоль) и нагревали при 180°С на протяжении 1,5 часа. Реакционную смесь охладили до 25°С, разбавили МеОН (10 мл) и подщелочили, применяя Na₂CO₃, до pH 10. Смесь отфильтровали и органический слой концентрировали. Остаток суспендировали в воде (5 мл), перемешивали на протяжении 30 мин, отфильтровали и высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она.

Выход: 0,25 г (70%);

IR(KBr): 3422, 3135, 1664, 1623, 1559 см^-1;

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,56 (d, 1H), 7,36 (m, 3H), 6,36 (s, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 2,88 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,35 (m, 1H), 1,88 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 402 (M+1);

Исследование: C₂₁H ₂₀ClNO₅ C, 62,24 (62,71); H, 5,07 (4,97); N, 3,60 (3,48); Cl, 9,01 (8,83).

Пример 10:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (9) (0,2 г, 0,48 ммоль) суспендировали в IPA (изопропиловый спирт) (5 мл) и добавили 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения соединения (+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,21 г (97%);

mp: 188-192°С;

[ ]_D ²⁵=+21,3° (с=0,2, метанол);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,80 (d, 1Н), 7,60 (m, 3Н), 6,53 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,89 (m, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,59 (dd, 1H), 3,38 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,45 (m, 1H), 2,35 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 402 (M+1) (свободное основание).

Данное соединение подвергли хиральной ВЭЖХ. Хиральную ВЭЖХ провели, применяя колонку Chiralcel OD-H (250×4,6 мм), и систему растворителей гексан: этанол (92:08) с TFA (0,4%). Результаты записали при 264 нм со скоростью потока растворителя 1 мл/мин. Как изображено на фигуре 3, хиральная ВЭЖХ показывает 100% э.и. соединения, (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Пример 11:

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Гидрида натрия (50%, 0,776 г, 16 ммоль) добавили по частям к раствору соединения формулы (7) (1,0 г, 3,2 ммоль) в сухом DMF (25 мл) при 0°С, в атмосфере азота и с перемешиванием. Через 10 минут добавили метил 2-хлор-5-фторбензоат (1,22 г, 6,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 часов. Осторожно добавили метанол при ниже 20°С. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г), подкислили 1:1 HCl (pH 2) и экстрагировали, применяя EtOAc (2×100 мл). Водный слой подщелочили, применяя насыщенный Na₂CO₃ (pH 10), и экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический слой высушили (безводный Na₂SO ₄) и концентрировали. К остатку добавили конц. HCl (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г) и сделали основной, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO ₃. Смесь экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический экстракт промыли водой, высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она.

Выход: 0,9 г (63%);

¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,57 (m, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,45 (s 1H), 4,15 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,63 (dd, 1H), 3,32 (d, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,00 (m, 2H); MS (CI):

m/z 448 (M+1).

Пример 12:

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Расплавленный пиридин гидрохлорид (8,0 г, 69,5 ммоль) добавили к соединению формулы (11) (0,8 г, 1,78 ммоль) и нагревали при 180°С на протяжении 1,5 часа. Реакционную смесь охладили до 25°С, разбавили МеОН (10 мл) и подщелочили, применяя Na₂CO₃, до pH 10. Смесь отфильтровали и органический слой концентрировали. Остаток суспендировали в воде (10 мл), перемешивали на протяжении 30 минут, отфильтровали и высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она.

Выход: 0,45 г (60%);

mp: 253-254°С;

IR (KBr): 3450, 1665 см^-1;

¹Н NMR (DMSO d₆, 300 MHz): 12,70 (s, 1H), 7,75 (m, 2Н), 7,54 (m, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,14 (s, 1Н), 3,80 (m, 1Н), 3,51 (m, 3Н), 2,94 (m, 2Н), 2,46 (s, 3Н), 2,15 (m, 1Н), 1,86 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 420 (M+1);

Исследование: C₂₁H ₁₉ClFNO₅C, 60,2 (60,08); Н, 4,53 (4,56); N, 3,86 (3,34); Cl, 8,17 (8.44).

Пример 13:

(+)-транс-2-(2-Хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3 -ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (12) (0,1 г, 0,244 ммоль) суспендировали в IPA (5 мл) и добавили 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,108 г (100%);

[ ]_D ²⁵=+18,05° (с=0,7, метанол);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,67 (m, 2Н), 7,37 (m, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,69 (m, 1H), 3,60 (dd, 1H), 3,45 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,52 (m, 1H), 2,29 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 420 (M-36,5).

Пример 14:

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Соединение формулы (7) (6 г, 19,42 ммоль) в сухом DMF (60 мл) реагировало с метил 2-бром-5-фторбензоатом (6,7 г, 28,75 ммоль) в присутствии NaH (50%, 3,88 г, 80,8 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 часов. Осторожно добавили метанол при ниже 20°С.

Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г), подкислили 1:1 HCl (pH 2) и экстрагировали, применяя EtOAc (2×100 мл). Водный слой подщелочили, применяя насыщенный Na₂CO₃ (pH 10), и экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический слой высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали. К остатку добавили конц. HCl (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г) и сделали основной, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃. Смесь экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический экстракт промыли водой, высушили (безводный Na₂SO₄ ) и концентрировали для получения соединения (+)-транс-2-(2-бром-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она.

Выход: 3,94 г (41,2%);

¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7.65 (m, 1H), 7.45 (m, 1H), 7.10 (m, 1Н), 6.47 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.15 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.64 (dd, 1H), 3.35 (d, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.45 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.00 (m, 2H); MS (ES+): m/z 493 (M+1).

Пример 15:

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Расплавленный пиридин гидрохлорид (39 г, 339 ммоль) добавили к соединению формулы (14) (3,9 г, 7,92 ммоль) и нагревали при 180°С на протяжении 1,5 часа. Реакционную смесь охладили до 25°С, разбавили МеОН (10 мл) и подщелочили, применяя Na₂CO₃, до pH 10. Смесь отфильтровали и органический слой концентрировали. Остаток суспендировали в воде (40 мл), перемешивали на протяжении 30 минут, отфильтровали и высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2-бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она.

Выход: 1,4 г (38,14%);

mp: 145-147°С;

IR (KBr): 3650, 1640 см^-1;

¹Н NMR (CDCl₃+TFA, 300 MHz): 12,40 (s, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,15 (m, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,30 (m, 1H), 2,08 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 465 (M+1).

Пример 16:

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (15) (1,0 г) превратили в его гидрохлоридную соль суспендированием в IPA (5 мл) и 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения соединения (+)-транс-2-(2-бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 1,0 г (93%); MS (ES+): m/z 465 (М+1) (свободное основание).

Пример 17:

(+)-транс-2-(2-Бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфонат

Соединение формулы (15) (1,97 г, 4,25 ммоль) в метаноле (5 мл) обработали раствором метансульфоновой кислоты в метаноле (0,408 г, 4,25 ммоль). Полученный прозрачный раствор концентрировали для получения названного соединения (+)-транс-2-(2-бром-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфоната.

Выход: 2,3 г (96,63%);

¹Н NMR (D₂O, 300 MHz): 7,58 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 6,30 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 2,83 (s, 3H), 2,70 (s, 3H), 2,20 (m, 2H);

Исследование: C₂₂H₂₃BrNFO₈S·H ₂O, C, 46,08 (45,68); H, 4,61 (4,35); N, 2,63 (2,42), Br, 14,73 (13,81); S, 4,99 (5,54);

MS (ES+): m/z 465 (M+1), свободное основание.

Пример 18:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Соединение формулы (7) (0,8 г, 2,58 ммоль) в сухом DMF (10 мл) реагировало с 2,4-дихлор-5-фтор-бензоилхлоридом (0,887 г, 3,9 ммоль) в присутствии NaH (50%, 0,62 г, 12,9 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 часов. Осторожно добавили метанол при ниже 20°С. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (100 г), подкислили 1:1 HCl (pH 2) и экстрагировали, применяя EtOAc (2×50 мл). Водный слой подщелочили, применяя насыщенный Na₂CO₃ (pH 10) и экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×100 мл). Органический слой высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали. К остатку добавили конц. HCl (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (100 г) и сделали основной, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃. Смесь экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×100 мл). Органический экстракт промыли водой, высушили (безводный Na₂SO₄ ) и концентрировали для получения названного соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она.

Выход: 0,54 г (43,4%);

¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,75 (d, 1H), 7,57 (d, 1Н), 6,60 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,65 (dd, 1H), 3,36 (d, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,10 (m, 2H);

MS (ES+):m/z 482 (M+1).

Пример 19:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Расплавленный пиридин гидрохлорид (5,5 г, 47.6 ммоль) добавили к соединению формулы (18) (0,53 г, 1,1 ммоль) и нагревали при 180°С на протяжении 1,5 часа. Реакционную смесь охладили до 25°С, разбавили МеОН (10 мл) и подщелочили, применяя Na₂CO₃, до pH 10. Смесь отфильтровали и органический слой концентрировали. Остаток суспендировали в воде (5 мл), перемешивали на протяжении 30 минут, отфильтровали и высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она.

Выход: 0,29 г (58%);

IR (KBr): 3422, 1664, 1618, 1401 см^-1;

¹ Н NMR (CDCl₃+DMSO d₆, 300 MHz): 7,50 (m, 2H), 6,42 (s, 1H), 6,19 (s, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,71 (m, 2H), 3,16 (m, 2H), 2,88 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,36 (m, 1H), 1,92 (m, 1H);

MS(ES+): m/z 454 (M+1).

Пример 20:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (19) (0,89 г, 1,96 ммоль) превратили в его гидрохлоридную соль суспендированием в IPA (5 мл) и 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,91 г (92%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,86 (m, 2Н), 6,65 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 4,26 (q, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 3,60 (dd, 1H), 3,56 (q, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,28 (m, 1H); IR (KBr): 3386, 1657 см ^-1.

MS (ES+): m/z 454 (M-36,5);

Исследование: C₂₁H₁₉Cl₃FNO ₅, C, 51,08 (51,35); H, 4,26 (3,87); N, 3,13 (2,85), Cl, 21,99 (21,70).

Пример 21:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфонат

Метансульфоновую кислоту (0,012 г, 0,125 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,05 г, 0,11 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 5 минут при 25°С до получения прозрачного раствора. Растворитель удалили под сниженным давлением для получения остатка. Остаток промыли дважды сухим эфиром (2×5 мл) и высушили под высоким вакуумом (0,1 мм) для получения соединения(+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она метансульфоната.

Выход: 0,054 г (90%);

Исследование: C₂₂H₂₂Cl₂FNO ₈S·2,5 H₂O С, 44,26 (44,34); Н, 4,42 (4,53); N, 2,58 (2,35); Cl, 12,11 (11,92).

Пример 22:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она цитрат

Моногидрат лимонной кислоты (0,023 г, 0,11 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,05 г, 0,11 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 10 минут при 50-55°С. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она цитрата.

Выход: 0,065 г (91,5%);

Исследование: C₂₇H₂₆Cl₂FNO ₁₂ С, 49,75 (50,17); Н, 4,25 (4,05); N, 2,60 (2,17); Cl, 10,69 (10,97).

Пример 23:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она тартрат

Виннокаменную кислоту (0,016 г, 0,11 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,05 г, 0,11 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 10 минут при 50-55°С. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она тартрата.

Выход: 0,06 г (90,19%);

Исследование: C₂₅H₂₄Cl₂FNO ₁₁·2,0 H₂O С, 47,43 (46,84); Н, 4,13 (4,37); N, 2,40 (2,18); Cl, 10,77 (11,08).

Пример 24:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она малеат

Малеиновую кислоту (0,0127 г, 0,11 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,05 г, 0,11 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 5 минут при 50°С до получения чистого раствора. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она малеата.

Выход: 0,059 г (90,19%);

Исследование: C₂₅H₂₂Cl₂FNO ₉·1,5 H₂O С, 50,54 (50,23); Н, 4,08 (4,18); N, 2,31 (2,34); Cl, 11,83 (11,88).

Пример 25:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она ацетат

Уксусную кислоту (0,0065 мл, 0,0068 г, 0,11 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,05 г, 0,11 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 5 минут при 50-55°С до получения чистого раствора. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения названного соединения.

Выход: 0,05 г (88,33%);

Исследование: C₂₃H₂₂Cl ₂FNO₉ С, 53,67 (53,71); Н, 4,63 (4,31); N, 3,08 (2,72); Cl, 13,93 (13,79).

Пример 26:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она сульфат

Раствор H₂SO₄ (5% метаноловый раствор, 60 мкл, 0,055 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,025 г, 0,055 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 5 минут при 50-55°С. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фтор фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она сульфата.

Выход: 0,025 г (82,24%);

MS (ES-):m/z 550 (M-1).

Пример 27:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она нитрат

Раствор HNO₃ (5% метаноловый раствор, 70 мкл, 0,055 ммоль) добавили к суспензии соединения формулы (19) (0,025 г, 0,055 ммоль) в метаноле (2 мл). Ее перемешивали в течение 5 минут при 50-55°С до получения чистого раствора. Реакционную смесь концентрировали и твердое вещество высушили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлор-5-фторфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она нитрата.

Выход: 0,025 г (87,81%);

MS(ES-): m/z 515 (M-1).

Пример 28:

(+)-транс-2,4-Дихлорбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения формулы (6) (3 г, 8,9 ммоль), 2,4-дихлорбензойной кислоты (1,79 г, 9,3 ммоль), DCC (3,87 г, 18,7 ммоль) и DMAP (1,148 г, 9,3 ммоль) растворили в дихлорметане (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С. Осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали, органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолов в хлороформе и 0,01% аммиаке как элюент для получения соединения (+)-транс-2,4-дихлорбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира, который применяли в дальнейшей реакции без характеристики.

Выход: 4,48 г (100%)

Пример 29:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (1,6 М в гексане, 10,67 мл, 17 ммоль) в THF (25 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (3,56 мл, 17 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (28) (4,48 г, 8,5 ммоль) в THF (25 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl, и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2,4-дихлорфенил)-3-охопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (4,6 г), данный сложный эфир растворили в конц. HCl (50 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов, реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (50×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводной Na₂SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения, (+)-транс-2-(2,4-дихлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 3,2 г (81%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,74 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,42 (dd, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,68 (dd, 1H), 3,39 (dd, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,07 (m, 2H); MS (ES+): m/z 464 (M+1).

Пример 30:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (29) (3,2 г, 7,35 ммоль), пиридин гидрохлорида (3,2 г, 6,91 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,01% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,98 г (30%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,5 (s, 1H), 7,54 (m, 2Н), 7,40 (m, 1H), 6,40 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,89 (m, 2H), 3,28 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,45 (m, 1H), 1,95 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 436 (M+1).

Пример 31:

(+)-транс-2-(2,4-Дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (30) (0,4 г, 0,9 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дихлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,4 г (92%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,80 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,54 (dd, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,41 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,52 (m, 1H), 2,29 (m, 1H);

MS (ES-): m/z 470 (M-1).

Пример 32:

(+)-тракс-4-Бром-2-хлорбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения примера (6) (1,95 г, 5,5 ммоль), 4-бром-2-хлорбензойной кислоты (1,44 г, 6,1 ммоль), DCC (2,29 г, 11 ммоль) и DMAP (0,68 г, 5,5 ммоль) растворили в дихлорметане (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С, осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали, органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-4-бром-2-хлорбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира.

Выход: 2,8 г (88,7%);

MS (ES+): m/z 569 (M+1).

Пример 33:

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (15% раствор в гексане, 4,23 мл, 10 ммоль) в THF (25 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (2,1 мл, 10 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут К этому добавили по каплям раствор соединения примера (32) (2,8 г, 5 ммоль) в THF (25 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуре и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(4-бром-2-хлорфенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (2,65 г). Данный сложный эфир растворили в конц. HCl (20 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (50×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения, (+)-транс-2-(4-бром-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 1,4 г (59%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,69 (d, 1Н), 7,66 (d, 1H), 7,55 (dd, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,66 (dd, 1H), 3,38 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,10 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 509 (M+1).

Пример 34:

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (33) (1,4 г, 2,75 ммоль), пиридин гидрохлорида (1,4 г, 12 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,01% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(4-бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,88 г (60,6%);

¹Н NMR (CDCl₃; 300 MHz): 7,91 (m, 1H), 7,87 (m, 1Н), 7,69 (m, 1H), 6,41 (s, 1H), 6,15 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,77 (dd, 1H), 3,66 (dd, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 2,76 (s, 3H), 2,24 (m, 2H);

MS(ES+): m/z 481 (M+1).

Пример 35:

(+)-транс-2-(4-Бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (34) (0,48 г, 1,0 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(4-бром-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,4 г (93%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,87 (m, 1H), 7,71 (m, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,73 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,28 (m, 1H);

MS(ES-): m/z 515 (M-1).

Пример 36:

(+)-транс-2-Хлор-4-цианобензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения примера (6) (3,84 г, 10 ммоль), 2-хлор-4-цианобензойной кислоты (2,48 г, 13 ммоль), DCC (4,51 г, 21 ммоль) и DMAP (1,34 г, 10 ммоль) растворили в дихлорметане (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С, осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали, органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-хлор-4-цианобензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира.

Выход: 3,5 г (62%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,19 (d, 1H), 7,79 (s, 1Н), 7,69 (d, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,93 (s, 6H), 3,48 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,10 (m, 1H), 1,92 (m, 2H), 1,74 (s, 3H);

MS (ES+): m/z 515 (M+1).

Пример 37:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (1,6 М раствор в гексане, 17 мл, 27 ммоль) в THF (50 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (5,7 мл, 27 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (36) (5,6 г, 10 ммоль) в THF (50 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×75 мл). Органический слой промыли водой (50 мл), рассолом (50 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-цианофенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как масла (6,1 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (60 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (50×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,75 г (15%);

IR (KBr): 3431, 2233, 1648, 1599 см ^-1;

¹H NMR (CDCl₃ , 300 MHz): 8,20 (d, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,10 (m, 2H);

MS (ES+):m/z 455 (M+1).

Пример 38:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (37) (20 мг, 0,046 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-цианофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 20 мг (98%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,08 (m, 1H), 7,97 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 3,84 (m, 2H), 3,75 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,43 (m, 1H), 2,31 (m, 1H); MS (ES-): m/z 489 (M-1)

Пример 39:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (37) (0,25 г, 0,55 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,25 г, 2,2 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,01% аммиак и 4,5% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,11 г (49,5%);

IR (KBr): 3396, 2234, 1656, 1615 см ^-1;

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,05 (s, 1H), 7,90 (m, 2Н), 6,45 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,75 (dd, 2H), 3,49 (m, 2H), 3,21 (m, 1H), 2,76 (s, 3H), 2,23 (m, 2H);

MS(ES+): m/z 427 (M+1)

Пример 40:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (39) (0,1 г, 0,23 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-цианофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,1 г (92,6%);

MS(ES-): m/z 461 (М-1).

Пример 41:

(+)-транс-2-Хлор-4-трифторметилабензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения примера (6) (1,16 г, 3,2 ммоль), 2-хлор-4-трифторметилабензойной кислоты (0,88 г, 4 ммоль), DCC (1,35 г, 6,5 ммоль) и DMAP (0,4 г, 3,27 ммоль) растворили в дихлорметане (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С, осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали, органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолом в хлороформе и 0,01% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-хлор-4-трифторметилабензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира.

Выход: 1,44 г (78,8%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,19 (d, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,69 (d, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,14 (m, 1H), 3,93 (s, 6H), 3,52 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,15 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,62 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 558 (M+1)

Пример 42:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметилафенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (15% раствор в гексане, 2,2 мл, 5 ммоль) в THF (10 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (1,08 мл, 5,1 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут К этому добавили по каплям раствор соединения примера (41) (1,44 г, 2,5 ммоль) в THF (10 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуре и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×25 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-трифторметилфенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир как масла (1,3 г, 90,2%). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (10 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (25×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметилафенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,56 г (48,2%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,95 (d, 1Н), 7,78 (s, 1H), 7,69 (d, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,71 (dd, 1H), 3,41 (d, 1H), 3,26 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,10 (m, 2H); MS (ES+): m/z 497 (M+1)

Пример 43:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметила-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (42) (0,25 г, 0,5 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,25 г, 2,16 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (25 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 4,5% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметилафенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,15 г (63,7%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,99 (m, 2Н), 7,83 (d, 1Н), 6,65 (s, 1H), 6,41 (s, 1H), 4,24 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,54 (m, 1H), 2,28 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 470 (M+1)

Пример 44:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-трифторметилафенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (43) (0,1 г, 0,2 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-трифторметила-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид.

Выход: 0,1 г (92,8%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,02 (d, 2Н), 7,83 (d, 1H), 6,64 (s, 1Н), 6,41 (s, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,73 (m, 2H), 3,68 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,39 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,54 (m, 1H), 2,31 (m, 1H).

Пример 45:

(+)-транс-2-Хлор-4-нитробензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

2-Хлор-4-нитробензойную кислоту (13 г, 64 ммоль) и тионилхлорид (40 мл) нагревали вместе при 85°С на протяжении 3 часов. Избыток тионилхлорида выпарили под сниженным давлением и остаток высушили в вакууме и растворили в THF (100 мл). Это добавили по каплям к раствору соединения примера (6) (15 г, 42 ммоль) и триэтиламина (29,5 мл, 213 ммоль) в THF (100 мл), который поддерживали при 15-20°С. Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 часов. В конце 12 часов реакционную смесь концентрировали для удаления THF, подкислили разбавленной HCl, подщелочили 10% раствором NaHCO₃ до pH 10, экстрагировали с EtOAc (3×100 мл), промыли водой (50 мл), рассолом (50 мл) и органический слой высушили над безводным Na₂SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением для получения соединения (+)-транс-2-хлор-4-нитробензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира, как масла, которое применяли само по себе в следующей реакции без очистки.

Выход: 24,8 г (71,7%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,35 (s, 1H), 8,25 (m, 2H), 6,47 (s, 1H), 4,17 (m, 1H), 3,94 (s, 6H), 3,59 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,49 (s, 6H), 2,46 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,83 (s, 3H);

MS (ES+): m/z 535 (M+1).

Пример 46:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Раствор соединения примера (45)(20 г, 37,5 ммоль) в диоксане (150 мл) добавили по каплям к суспензии гидрида натрия (60% дисперсии, 5,68 г, 142 ммоль) в диоксане (50 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь подавили при помощи добавления по каплям метанола и растворители выпарили под сниженным давлением. Остаток подкислили разбавленной HCl, подщелочили 10% раствором NaHCO ₃ до pH 8-9 и экстрагировали с EtOAc (3×250 мл). Органический слой промыли водой (50 мл), рассолом (50 мл), высушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под сниженным давлением для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-нитрофенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как масла (18,2 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 3 часов. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×250 мл) и промыли водой (50 мл) и рассолом (50 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂ SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1%) аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как бледно-желтого твердого вещества.

Выход: 9,5 г (53,5%);

IR (KBr): 3447, 1648, 1600, 1570 см^-1;

¹Н NMR (CDCl ₃, 300 MHz): 8,37 (d, 1Н), 8,26 (dd, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 2,62 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,04 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 475 (M+1)

Пример 47:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (46) (0,05 г, 0,105 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,05 г (53,7%); ¹ H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,50 (d, 1Н), 8,27 (dd, 1Н), 8,09 (d, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,11 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 3,88 (m, 2H), 3,72 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 2,99 (s, 3H), 2,49 (m, 1H), 2,26 (m, 1H); MS (ES+): m/z 511 (M+1).

Пример 48:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконат

Соединение формулы (46) (6,4 г, 13.4 ммоль) суспендировали в метанола (300 мл) и обработали глюконовой кислотой (2,63 г, 13,4 ммоль) и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-нитро фенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконата.

Выход: 8,5 г (93,9%);

m.р.: 137-140°С;

IR (KBr): 3404, 1648, 1601, 1524 см^-1;

¹H NMR (CD ₃OD, 300 MHz): 8,50 (d, 1H), 8,33 (dd, 1Н), 8,09 (d, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 3,72 (m, 11H), 2,95 (s, 3H), 2,4 (m, 1H), 2,30 (m, 1H); [ ]_D ²⁵:+11,76° (c=0,76, MeOH);

MS (ES+): m/z 475 (M+1), свободное основание.

Пример 49:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (46) (4,2 г, 8,8 ммоль), пиридин гидрохлорида (4,2 г, 36 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2 часов. Реакционную смесь охладили и разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 2,8 г (70,88%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,48 (d, 1H), 8,34 (dd, 1H), 8,02 (d, 1H), 6,48 (s, 1Н), 6,12 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,64 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,77 (s, 3H), 2,22 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 447 (M+1)

Пример 50:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (49) (2,8 г, 6.2 ммоль) суспендировали в метаноле (10 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 2,7 г (92,5%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,51 (d, 1H), 8,36 (dd, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,41 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,91 (m, 2H), 3,73 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,32 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 483 (M+1);

[ ]_D ²⁵: +13,0° (c=0,2, метанола.

Пример 51:

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Соединение формулы (46) (1,0 г, 2,1 ммоль), хлорид олова (1,9 г, 8,4 ммоль) и EtOAc (5 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре на протяжении 12 часов. В конце 12 часов реакционную смесь подщелочили 10% раствором NaOH до pH 10 и экстрагировали с EtOAc (3×10 мл). Органические слои скомбинировали, промыли водой (10 мл), рассолом (10 мл), высушили над безводным Na ₂SO₄ и концентрировали под сниженным давлением для получения соединения (+)-транс-2-(4-амино-2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как твердого вещества.

Выход: 0,74 г (79%);

MS (ES+): 445 (М+1).

Пример 52:

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он (соединение-1)

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он (соединение-2)

Смесь соединения примера (51) (0,7 г, 1,57 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,7 г, 6 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь охладили и разбавили метанолом (25 мл) и подщелочили твердым Na₂ CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединений (+)-транс-2-(4-амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она (соединение-1) и (+)-транс-2-(2-хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она (соединение-2) как желтых твердых веществ.

Соединение-1: Выход: 0,25 г (38%); MS (ES+): 417 (М+1).

Соединение-2: Выход: 0,13 г (19%); MS (ES+): 431 (М+1).

Пример 53:

(+)-транс-2-(4-Амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение (+)-транс-2-(4-амино-2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она (0,25 г, 0,6 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соединения (+)-транс-2-(4-амино-2-хлор фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,26 г (96%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,78 (d, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,13 (dd, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 4,30 (m, 1H), 3,91 (m, 2H), 3,80 (m, 1H), 3,60 (dd, 1H), 3,46 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,52 (m, 1H), 2,29 (m, 1H);

MS (ES+): 417 (M+1), свободное основание; MS (ES-): 451 (M-1)

Пример 54:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение (+)-транс-2-(2-Хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он (0,13 г, 0,3 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлор-4-метиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 0,13 г (96%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,67 (d, 1H), 6,86 (d, 1H), 6,80 (dd, 1H), 6,54 (s, 1Н), 6,34 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,64 (m, 1H), 3,58 (dd, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 2,53 (m, 1H), 2,33 (m, 1H);

MS (ES+): 431 (M+1), свободное основание; MS(ES-): 465 (M-1).

Пример 55:

(+)-транс-2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-бензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-бензойную кислоту (1,0 г, 4,4 ммоль), тионилхлорид (0,35 мл, 4,8 ммоль), N-метилпирролидин-2-он (0,1 мл) и дихлорметан (20 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре на протяжении 12 часов. К этому раствору добавили соединение формулы (6) (0,86 г, 2,4 ммоль) и смесь охладили до 0-5°С. После охлаждения добавили триэтиламин (1,7 мл, 12,7 ммоль) и реакционную смесь нагрели до комнатной температуре и перемешивали в течение 4 часов. Смесь разбавили хлороформом (25 мл), промыли 10% NaHCO₃ (10 мл), водой (10 мл), рассолом (10 мл) и органический слой высушили над безводным Na₂SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением для получения соединения (+)-транс-2-хлор-4-пирролидин-1-илбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира как твердого вещества, который применяли как таковой в следующей реакции без очистки.

Выход: 1,37 г (100%);

MS(ES+): 559 (М+1).

Пример 56:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (1,6 М в гексане, 3 мл, 4,8 ммоль) в THF (10 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (1 мл, 4,75 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (55) (1,37 г, 2,45 ммоль) в THF (5 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (0,97 г, 70,8%). Этот сложный эфир растворили в 5 мл конц. HCl и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×25 мл) и промыли водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как коричневого твердого вещества.

Выход: 0,4 г (46,5%);

¹Н NMR (CDCl₃ , 300 MHz): 7,62 (d, 1Н), 6,58 (m, 2H), 6,50 (m, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,24 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,32 (m, 5H), 2.88 (m, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,05 (m, 6H);

MS (ES+): 499 (M+1).

Пример 57:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидрокси метил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (56)(0,4 г, 0,8 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,4 г, 3,46 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂ CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 23 мг (6,6%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,82 (s, 1H), 7,47 (d, 1H), 6,62 (d, 1H), 6,52 (dd, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 4,2 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,34 (m, 5H), 2,96 (m, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,40 (m, 1H), 2,09 (m, 6H);

MS (ES+): 471 (M+1).

Пример 58:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидрокси метил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (57) (23 мг, 0,049 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлор-4-пирролидин-1-ил-фенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 23 мг (92,8%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,66 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 6,62 (dd, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,37 (m, 4H), 3,06 (s, 3H), 2,54 (m, 1H), 2,29 (m, 1H)), 2,06 (m, 4H); MS (ES-): 505 (M-1).

Пример 59:

(+)-транс-2-Хлор-4-изопропиламинобензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

2-Хлор-4-изопропиламинобензойную кислоту (1,0 г, 4,6 ммоль), тионилхлорид (0,38 мл, 5,1 ммоль), N-метилпирролидин-2-он (0,1 мл) и дихлорметан (20 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре на протяжении 12 часов. К этому раствору добавили соединение формулы (6) (0,91 г, 2,5 ммоль) и смесь охладили до 0-5°С. После охлаждения добавили триэтиламин (1,7 мл, 12 ммоль), реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 часов. Реакционную смесь отфильтровали для удаления осажденного триэтиламин гидрохлорида и органический слой концентрировали под сниженным давлением для получения названного соединения как твердого вещества, которое применяли как таковое в следующей реакции без очистки.

Выход: 0,95 г (67%); MS (ES+): 547 (М+1)

Пример 60:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (1,6 М в гексане, 2,22 мл, 3,56 ммоль) в THF (10 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (0,74 мл, 3,56 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (59) (0,95 г, 1,78 ммоль) в THF (5 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-изопропиламинофенил)-3-оксо-пропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (0,95 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (5 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×25 мл) и промыли водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-изопропиламинофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она, как коричневого твердого вещества, которое взяли далее без дополнительной очистки.

Выход: 0,7 г (92,5%)

Пример 61:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (60) (0,7 г, 1,4 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,7 г, 6 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (25 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 20 мг (3%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,38 (d, 1H), 6,63 (d, 1H), 6,51 (dd, 1H), 6,39 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,67 (m, 1H), 3,27 (m, 1H), 2,9 (m, 2H), 2,65 (s, 3H), 2,43 (m, 2H), 1,25 (d, 6H);

MS (ES+): 459 (M+1).

Пример 62:

(+)-транс-2-(2-Хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (61) (20 мг, 0,043 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлор-4-изопропиламинофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 20 мг (95%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,72 (d, 1H), 7,04 (d, 1H), 6,92 (dd, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,65 (dd, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,0 (s, 3H), 2,53 (m, 1H), 2,32 (m, 1H), 1,29 (d, 6H);

MS (ES-): 493 (M-1).

Пример 63:

(+)-транс-2,4-Дибромбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения примера (6) (0,84 г, 2,3 ммоль), 2,4-дибромбензойную кислоту (0,8 г, 2,8 ммоль), DCC (0,98 г, 4,7 ммоль) и DMAP (0,3 г, 2,3 ммоль) растворили в дихлорметане (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С, осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали и органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2,4-дибром бензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира.

Выход: 1,14 г (78%);

¹Н NMR (CDCl₃; 300 MHz): 8,19 (s, 1H), 7,55 (m, 2Н), 6,44 (s, 1Н), 4,2 (m, 2H), 3,91 (s, 6H), 3,60 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,13 (m, 1H), 1,94 (m, 2H), 1,80 (s, 3H);

MS (ES+): 614 (M+1).

Пример 64:

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (15%) в гексане, 2,38 мл, 5,6 ммоль) в THF (10 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (1,67 мл, 8 ммоль) - добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (63) (1,14 г, 1,8 ммоль) в THF (10 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×25 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2,4-дибромфенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (1,2 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (10 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 10. Водный слой экстрагировали с хлороформом (25×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄) концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2,4-дибромфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,6 г (58%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,81 (s, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,51 (dd, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,21 (m, 1Н), 4,03 (s, 3Н), 4,01 (s, 3Н), 3,73 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,50 (s, 3Н), 2,15 (m, 2H); MS (ES+): 554 (M+1).

Пример 65:

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (64) (0,6 г, 1.08 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,6 г, 5,19 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и % метанол в хлороформе как элюент для получения названного соединения как желтого твердого вещества.

Выход: 0,2 г (22%); MS(ES+): 526 (М+1).

Пример 66:

(+)-транс-2-(2,4-Дибромфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (65) (25 мг, 0,047 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2,4-дибромфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 25 мг (93,5%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,95 (m, 1H), 7,73 (m, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,4 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,53 (m, 1H), 2,28 (m, 1H);

MS (ES-): 560 (M-1)⁺

Пример 67:

(+)-транс-2-Бром-4-хлорбензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

Смесь соединения примера (6) (1,12 г, 3,2 ммоль), 2-бром-4-хлорбензойной кислоты (0,9 г, 3,8 ммоль), DCC (1,32 г, 6,4 ммоль) и DMAP (0,4 г, 3,2 ммоль) растворили в дихлорметане (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 12 часов. Реакционную смесь охладили до 0°С, осажденную дициклогексилмочевину отфильтровали и органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией с 1% метанолом в хлороформе и 0,1%) аммиаком как элюент для получения названного соединения (+)-транс-2-бром-4-хлор-бензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира.

Выход: 0,6 г (33%); MS(ES+): 569 (M+1).

Пример 68:

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (15% в гексане, 0.9 мл, 2 ммоль) в THF (10 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, гексаметилдисилазан (0.44 мл, 2 ммоль) добавили по каплям и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор соединения примера (67) (0,6 г, 1 ммоль) в THF (10 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×25 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл) и высушили над безводным Na₂ SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-бром-4-хлорфенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как коричневого твердого вещества (1,2 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (10 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов, реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (25×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-бром-4-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,3 г (53,6%);

MS (ES+): 509 (M+1).

Пример 69:

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь соединения примера (68) (0,3 г, 0,59 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,3 г, 2,6 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (25 мл) и подщелочили твердым Na₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она как желтого твердого вещества.

Выход: 0,04 г (14%);

MS(ES+): 481 (М+1).

Пример 70:

(+)-транс-2-(2-Бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (69) (34 мг, 0,07 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-бром-4-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 34 мг (93%);

¹HNMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,98 (m, 1H), 7,8 (m, 2H), 6,5 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,17 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,43 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,49 (m, 1H), 2,28 (m, 1H);

MS (ES-): 515 (M-1).

Пример 71:

(±)-транс-8-(2-Гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметокси-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-он

К суспензии 50% гидрида натрия в минеральном масле (1,39 г, 29,1 ммоль) в N,N-диметилформамиде (60 мл), поддерживаемом в атмосфере азота и охлажденном до 0°С, (±)-транс-1-[2-гидрокси-3-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-4,6-диметоксифенил]-этанон (3 г, 9,7 ммоль) добавили порциями и перемешивали в течение 15 минут. В конце 15 минут 2-метокси метилбензоат (4,8 г, 29 ммоль) добавили по каплям и реакцию перемешивали при 0°С на протяжении 1 часа. Избыток гидрида натрия разрушили осторожным добавленим метанола. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl и подщелочили 10% бикарбонатом натрия до pH 9. Реакционную смесь концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом для получения 1-[2-гидрокси-3-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-4,6-диметоксифенил]-3-(2-метоксифенил)-пропан-1,3-диона как масла (1,4 г). Этот ( -дикетон растворили в конц. HCl (50 мл) и перемешивали в течение 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO₃ до pH 10. Водный слой экстрагировали с хлороформом (50×3 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения соединения (±)-транс-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметокси-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-она.

Выход: 1,4 г (34%);

¹ Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,97 (d, 1Н), 7,44 (t, 1H), 7,09 (t, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,70 (dd, 1H), 3,42 (d, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,08 (m, 2H);

MS (ES+): 426 (M+1).

Пример 72:

(±)-транс-5,7-Дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-гидроксифенил)-хромен-4-он (соединение-1);

(±)-транс-5,7-Дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-он (соединение-2);

(±)-транс-5-Гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метокси-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-он (соединение-3);

Смесь соединения примера (71) (70 мг, 0,165 ммоль), пиридин гидрохлорида (700 мг, 6,09 ммоль) нагревали при 180°С на протяжении периода 2,5 часов. Реакционную смесь разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na ₂CO₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения соединений (±)-транс-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-гидроксифенил)-хромен-4-она (соединение-1), (±)-транс-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-она (соединение-2) и (±)-транс-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метокси-2-(2-метоксифенил)-хромен-4-она (соединение-3).

(Соединение-1):Выход: 17 мг (27%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,90 (dd, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,96 (m, 2H), 6,18 (s, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,79 (dd, 1H), 3,65 (dd, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 2,34 (m, 2H);

MS (ES+): 384 (M+1).

(Соединение-2): Выход: 20 мг (30%);

¹H NMR (CDCl₃ , 300 MHz): 12,77 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 6,88 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,30 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 2,67 (s, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,12 (m, 1H); MS (ES+): 398 (M+1).

(Соединение-3): Выход: 12 мг (18%);

¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 13,12 (s, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,58 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,05 (m, 2H); MS(ES+): 412 (M+1).

Пример 73:

(±)-транс-5,7-Дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-гидроксифенил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение-1 примера 72 (15 мг, 0,039 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (±)-транс-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-2-(2-гидроксифенил)-хромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 14 мг (85%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,97 (dd, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,00 (m, 2H), 6,34 (s, 1H), 4,42 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,79 (m, 1H), 3,63 (dd, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,01 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,36 (m, 1H);

MS(ES+): 420 (M+1)⁺

Пример 74:

(+) Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир

Соединение формулы (9) (2 г, 5 ммоль) перемешивали в сухом дихлорметане (40 мл) с уксусным ангидридом (2,50 мл, 26,4 ммоль) и каталитическим количеством диметиламинопиридина при 25°С. Через 1 час насыщенный раствор карбоната натрия (30 мл) добавили в реакционную смесь и перемешивали в течение 15 минут Органический слой отделили и водный слой экстрагировали с CHCl₃ (3×50 мл). Комбинированный органический слой концентрировали и полученный продукт очистили, применяя колонку с силикагелем и 3% метанол в CHCl₃ + 1% щелок NH₃ как элюент для получения соединения (+) уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира.

Выход: 1,3 г (60%);

IR (KBr): 3421, 3069, 2953, 1742, 1659 см^-1;

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,60 (s, 1H), 7,54 (m, 2Н), 7,45 (m, 2Н), 6,44 (s, 1Н), 6,31 (s, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,42 (t, 1H), 3,32 (t, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,43 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,90 (s, 3H).

Пример 75:

(+) Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир гидрохлорид

Соединение формулы (74) (0,2 г, 0,38 ммоль) суспендировали в IPA (5 мл) и добавили 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения названного соединения (+) уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир гидрохлорида.

Выход: 1,00 г (93%); MS (ES+): m/z 444 (М+1), свободное основание.

Пример 76:

(+)-транс-Уксусной кислоты 8-(2-ацетоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложный эфир

Раствор соединения примера (10) (10 г, 22 ммоль) в пиридине (100 мл) охладили до 0°С. Ацетил хлорид (5,7 мл, 80 ммоль) добавили по каплям и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры с последующим нагреванием с обратным холодильником на протяжении 12 часов. Смесь концентрировали под сниженным давлением и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 5% метанол в хлороформе как элюент для получения названного соединения (+)-транс-уксусной кислоты 8-(2-ацетоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира.

Выход: 5 г (45%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,54 (d, 1H), 7,44 (m, 3Н), 6,53 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,17 (m, 2H), 3,48 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,44 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 1,92 (m, 1H), 2,0 (s, 3H);

MS (ES+): m/z 486 (M+1).

Пример 77:

(+)-транс-Бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлор фенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложный эфир

Раствор соединения примера (10) (0,5 г, 1,1 ммоль) в пиридине (3 мл) охладили до 0°С. Бензоилхлорид (1 мл, 8,62 ммоль) добавили по каплям и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры с последующим нагреванием с обратным холодильником на протяжении 12 часов. Смесь концентрировали под сниженным давлением и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 5% метанол в хлороформе как элюент для получения соединения (+)-транс-бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира.

Выход: 0,2 г (28%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,25 (m, 1H), 8,09 (m, 1H), 7,91 (m, 1H), 7,50 (m, 11 H), 6,68 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,32 (dd, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,72 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,12 (m, 1H);

MS (ES+): m/z 610 (M+1).

Пример 78:

(+)-транс-Бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлор фенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира гидрохлорид

Соединение формулы (77) (0,2 г, 0,328 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-бензойной кислоты 8-(2-бензоилоксиметилпирролидин-3-ил)-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложного эфира гидрохлорида.

Выход: 0,2 г (94,5%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,2 (m, 1H), 8,02 (m, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,49 (m, 11H), 6,85 (s, 1H), 6,29 (s, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,5 (m, 3H), 3,89 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 3,12 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 2,48 (m, 1H);

MS (ES+):m/z 610 (M+1), свободное основание.

Пример 79:

(+)-траис-Октановой кислоты 2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(1-метил-2-октаноилоксиметилпирролидин-3-ил)-4-оксо-4Н-хромен-7-ил сложный эфир

Раствор соединения (10) (0,5 г, 1,2 ммоль) в пиридине (3 мл) охладили до 0°С. Октаноилхлорид, полученный при нагревании октановой кислоты с обратным холодильником (0,41 мл, 3,12 ммоль) в тионилхлориде (1 мл) на протяжении 30 минут с последующим выпариванием насухо, добавили по каплям и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры с последующим нагреванием с обратным холодильником на протяжении 12 часов. Смесь концентрировали под сниженным давлением и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 5% метанола в хлороформе как элюент для получения названного соединения.

Выход: 0,2 г (30,5%); ¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,60 (s, 1H), 7,55 (m, 4Н), 6,44 (s, 1H), 6,31 (s, 1Н), 4,31 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 2,76 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,45 (m, 1H), 2,34 (t, 2H), 2,17 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 1,48 (m, 2H), 1,27 (m, 16H), 0,86 (m, 6H).

Пример 80:

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-7-метокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир

К раствору соединения формулы (8) (2,0 г, 4,65 ммоль) и диметиламинопиридина (10 мг) в дихлорметане (20 мл), уксусный ангидрид (0.48 мл, 5.07 ммоль) добавили по каплям и реакционную смесь перемешивали на протяжении 15 минут. В конце 15 минут, реакционную смесь разбавили хлороформом (20 мл), органический слой промыли 10% NaHCO₃, водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под сниженным давлением. Остаток растворили в дихлорметане (20 мл) с последующим добавлением диэтилового эфирата трифторида бора (1,72 мл, 13,9 ммоль) и диметилсульфида (1,1 мл, 14 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 1 часа. Реакционную смесь вылили в лед, подщелочили 10% Na₂CO₃ и экстрагировали с хлороформом (2×50 мл). Органические слои скомбинировали, промыли водой (10 мл), рассолом (10 мл), высушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под сниженным давлением. Остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 20% петролейный эфир в хлороформе и 0,1% аммиак как элюент для получения соединения (+)-транс-уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-7-метокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира.

Выход: 1,22 г (58%);

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,88 (s, 1H), 7,50 (m, 4Н), 6,47 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,04 (m, 2H), 3,95 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,13 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,13 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,72 (s, 3H);

MS(ES+): m/z 458 (M+1).

Пример 81:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-он

Способ А

Соединение формулы (80) (1,4 г, 3,0 ммоль) растворили в метаноле (6 мл), к которому добавили 2% водный раствор NaOH (6 мл), и смесь нагревали с перемешиванием при 50-60°С на протяжении 1 часа. В конце этого периода, смесь подкислили разбавленной HCl с последующим подщелачиванием 10% раствором Na₂CO₃ до pH 9. Смесь экстрагировали с EtOAc (3×25 мл) и органические слои промыли водой (10 мл), рассолом (10 мл), высушили над безводным Na₂SO ₄, концентрировали под сниженным давлением и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 1% изопропанол в хлороформе и 0,1% аммиак как элюент для получения соединения (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она. Выход: 1,2 г (97%);

IR (KBr): 3446, 1656, 1608 см^-1;

¹Н NMR (CDCl ₃, 300 MHz): 12,90 (s, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,48 (m, ЗН), 6,57 (s, 1H), 6,44 (s, 1Н), 4,11 (m, 1H), 3,91 (s, 3Н), 3,63 (dd, 1H), 3,36 (d, 1H), 3,14 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,33 (s, 3Н), 2,01 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 416 (M+1)⁺ .

Способ В

Соединение формулы (8) (0,1 г, 0,23 ммоль) обработали HBr (5 мл, 47%) при 100°С на протяжении 3,5 часа. Реакционную смесь вылили на лед, подщелочили раствором Na₂CO₃ (10%, 40 мл), экстрагировали с этилацетатом и концентрировали. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией и 5% метанолом+1% раствором NH ₃ в CHCl₃ как элюент для получения названного соединения.

Выход: 0,085 г (84%); ¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,90 (s, 1Н), 7,74 (m, 1H), 7,48 (m, 3H), 6,57 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,63 (dd, 1H), 3,36 (d, 1H), 3,14 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,01 (m, 2H); MS (ES+): m/z 416 (M+1).

Пример 82:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (81) (50 мг, 0,11 моль) суспендировали в метаноле (2 мл), обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 53 мг (100%);

IR (KBr): 3297, 1663, 1608, 1581 см^-1;

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,12 (d, 1H), 7,91 (m, 3Н), 6,96 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,34 (s, 3Н), 4,17 (m, 2Н), 4,03 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,71 (m, 1Н), 3,31 (s, 3Н), 2,75 (m, 1H), 2,62 (m, 1H); MS (ES+): m/z 416 (M-36,5);

[ ]_D ²⁵: +15,32° (c=0,27, метанол).

Пример 83:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она глюконат

Соединение формулы (81) (50 мг, 0,12 ммоль) суспендировали в метаноле (1 мл) и воде (1 мл) и перемешивали. К этому добавили глюконовую кислоту (24 мг, 0,12 ммоль), перемешивали и раствор выпарили насухо для получения соли (+)-тракс-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-7-метоксихромен-4-она глюконата.

Выход: 74 мг (100%); IR (KBr): 3445, 1654, 1609 см^-1; ¹Н NMR (CD₃ OD, 300 MHz): 7,80 (d, 1H), 7,59 (m, 3Н), 6,64 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,07 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,76 (m, 7H), 2,92 (s, 3H), 2,33 (m, 2H); [ ]_D ²⁵: +18,17° (c=0,73, метанол)

Пример 84:

(+)-транс-Уксусной кислоты-3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир

К раствору соединения примера (10) (1 г, 2,28 ммоль) и триэтиламина (1,6 мл, 11,4 ммоль) в метиленхлориде (10 мл) добавили уксусный ангидрид (0,7 мл, 7,4 ммоль) и перемешивали в течение 30 минут при окружающей температуре. Реакционную смесь подавили при помощи насыщенного раствора карбоната натрия (10 мл) и перемешивали в течение 30 минут Органический слой отделили, промыли водным карбонатом натрия (10 мл), водой (10 мл), высушили над безводным сульфатом натрия и выпарили под сниженным давлением для получения соединения (+)-транс-уксусной кислоты-3-[2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира, который применяли, как таковой, без дополнительной очистки.

Выход: 1,1 г (99%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz) 12,59 (s, 1Н), 7,45 (m, 4H), 6,44 (s, 1H), 6,31 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,42 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 1,92 (s, 3H);

MS (ES+): 444 (M+1).

Пример 85:

(+)-транс-Уксусной кислоты 3-[2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-7-(2-метоксиэтокси метокси)-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложный эфир

Соединение формулы (84) ((1,11 г, 2,50 ммоль) растворили в сухом DMF (15 мл) в атмосфере азота и охладили до 0°С. Гидрида натрия (50%, 0,14 г, 2,9 ммоль) добавили и смесь перемешивали на протяжении 30 минут. Раствор 2-метоксиэтоксиметил хлорида (0,33 мл, 2,9 ммоль) в сухом DMF добавили по каплям и реакцию поддерживали при 10°С на протяжении ночи. Реакцию вылили в ледяную воду (10 мл), подкислили уксусной кислотой до pH 5, подщелочили водным Na₂CO₃ (pH 9) и экстрагировали с этилацетатом (2×25 мл). Органический слой отделили, промыли водой (15 мл), рассолом (15 мл), высушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под сниженным давлением насухо для получения соединения (+)-транс-уксусной кислоты-3-[2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-4-оксо-4Н-хромен-8-ил]-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира.

Выход: 1,1 г (92%);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,78 (s, 1Н), 7,56 (m, 4H), 6,68 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,20 (m, 2H), 4,05 (m, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,56 (m, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,81 (s, 3H), 1,62 (m, 2H);

MS (ES+): 532 (M+1).

Пример 86:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-он

Соединение формулы (85) (1,1 г, 2,07 ммоль) растворили в 15 мл 1% растворе гидроксида натрия в смеси 1:1 метанол-вода и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 1 часа. В конце 1 часа, реакционную смесь разбавили ледяной водой, подкислили уксусной кислотой (pH 5), подщелочили водным Na₂CO ₃ (pH 9) и экстрагировали с этилацетатом (2×25 мл). Органический слой отделили, промыли водой (15 мл), рассолом (15 мл), высушили над безводный сульфатом натрия и концентрировали под сниженным давлением. Остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 1% изопропанол в хлороформе и 0,1% аммиак как элюент для получения названного соединения (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-она.

Выход: 0,43 г (38,7%);

¹ H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 12,84 (s, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,50 (m, 3Н), 6,62 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,30 (q, 1H), 3,85 (m, 3H), 3,59 (m, 4H), 3,37 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,96 (m, 1H), 2,72 (s, 3H), 2,39 (m, 1H), 2,24 (m, 1H); MS (ES+): 490 (M+1).

Пример 87:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-она глюконат

К раствору соединения примера (86) (0,55 г, 1,12 ммоль) в метаноле (5 мл) добавили (+)-глюконовую кислоту (0,22 г, 1,12 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 30 минут. Растворитель удалили под сниженным давлением для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-5-гидрокси-8-(2-гидроксиметил)-1-метилпирролидин-3-ил)-7-(2-метоксиэтоксиметокси)-хромен-4-она глюконата.

Выход: 0,77 г (100%);

IR (KBr): 3385, 1656, 1606 см^-1;

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,62 (d, 1H), 7,54 (m, 3Н), 6,74 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,49 (s, 2Н), 4,29 (m, 1H), 4,07 (s, 2Н), 3,76 (m, 13 Н), 3,34 (s, 3Н), 2,90 (s, 3Н), 2,38 (m, 2Н);

MS (ES+): 490 (M+1)⁺, свободное основание;

[ ]_D ²⁵: +15,33° (с=0,6, метанол).

Пример 88:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метанола (2 мл) и перемешивали. К этому добавили эфирную HCl, раствор перемешивали и выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она гидрохлорида.

Выход: 50 мг (93%);

IR (KBr): 3421, 1647, 1599, 1471 см^-1;

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,95 (d, 1H), 7,56 (m, 3Н), 6,76 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 4,36 (m, 1Н), 3,95 (s, 3Н), 3,85 (s, 3Н), 3,82 (m, 2Н), 3,68 (m, 2Н), 3,35 (m, 1Н), 2,99 (s, 3Н), 2,36 (m, 2Н);

MS (ES+): m/z 430 (М+1), свободное основание;

[ ]_D ²⁵: +3,76° (с=0,28, метанол)

Пример 89:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она цитрат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили лимонную кислоту (23 мг, 0,12 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения названной соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она цитрата.

Выход: 73 мг (100%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,79 (d, 1H), 7,57 (m, 3Н), 6,77 (s, 1Н), 6,48 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,10 (s, 3Н), 4,02 (s, 3Н), 3,98 (m, 2H), 3,69 (m, 2H), 3,31 (m, 1H), 3,01 (s, 3H), 2,76 (m, 4H), 2,29 (m, 2H).

Пример 90:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она тартрат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили виннокаменную кислоту (17 мг, 0,113 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она тартрата.

Выход: 7 мг (100%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,76 (d, 1Н), 7,57 (m, 3Н), 6,75 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,49 (m, 3H), 3,31 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,26 (m, 2H);

MS (ES+): m/z 430 (M), свободное основание;

[ ]_D ²⁵: +5,35° (с=0,21, метанол)

Пример 91:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глутамат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили глутаминовую кислоту (17 мг, 0,115 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глутамата.

Выход: 67 мг (100%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,79 (d, 1H), 7,57 (m, 3Н), 6,77 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,41 (m, 4H), 4,10 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,69 (m, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,38 (m, 2H).

Пример 92:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она малеат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили малеиновую кислоту (14 мг, 0,116 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она малеата.

Выход: 5 мг (78%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,78 (d, 1H), 7,62 (d, 1Н), 7,56 (t, 1H), 7,49 (t, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,25 (s, 2H), 4,35 (m, 1H), 4,09 (s, 3Н), 4,01 (s, 3Н), 3,83 (m, 2H), 3,69 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 2,95 (s, 3Н), 2,41 (m, 1H), 2,28 (m, 1H).

Пример 93:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она нитрат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили азотную кислоту (7,1 мг, 0,113 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения названной соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она нитрата.

Выход: 57 мг (99%);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,79 (d, 1H), 7,53 (m, 3Н), 6,77 (s, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 3,86 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,39 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,43 (m, 1H), 2,32 (m, 1H).

Пример 94:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она ацетат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0.116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили уксусную кислоту (7 мг, 0,11 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения названной соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она ацетата.

Выход: 56 мг (100%);

¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,79 (d, 1H), 7,57 (m, 3Н), 6,77 (s, 1H), 6,48 (s, 1Н), 4,35 (m, 1H), 4,17 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 3,86 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,31 (s, 3H), 2,95 (s, 3H), 2,43 (m, 1H), 2,30 (m, 1H); [ ]_D ²⁵: +2,85° (c=0,14, метанол).

Пример 95:

(+)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконат

Соединение формулы (8) (50 мг, 0,116 ммоль) суспендировали в метаноле (2 мл) и перемешивали. К этому добавили глюконовую кислоту (21 мг, 0,11 ммоль), раствор перемешивали и выпарили для получения соли (+)-транс-2-(2-хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она глюконата.

Выход: 71 мг (100%); IR (KBr): 3445,1648, 1560 см^-1;

¹Н NMR (CD ₃OD, 300 MHz): 7,61 (d, 1H), 7,59 (m, 3Н), 6,76 (s, 1H), 6,73 (s, 1Н), 4,75 (m, 2H), 4,09 (s, 3Н), 3,82 (s, 3Н), 3,70 (m, 9H), 3,30 (m, 1H), 2,89 (s, 3Н), 2,34 (m, 2H);

MS(ES+): m/z 430 (M+1), свободное основание;

[ ]_D ²⁵: +2,85° (с=0,14, метанол);

Исследование: (C₂₉H₃₆ClN₁₂O·H ₂O) С 54,31 (54,08), H 5,90 (5,94), N 2,49 (2,17), Cl 5,62 (5,34), вода 3,30 (2,79).

Пример 96:

(-)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

(Данное соединение представляет собой (-)-транс энантиомер соединения, иллюстрированного в примере 10. (-)-транс Энантиомер получили для сравнения его активности с его соответствующим (+)-транс энантиомером.).

(А) (+)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол

(+)-DBTA (112,7 г, 314,0 ммоль) добавили к соединению формулы (4) (88,5 г, 314 ммоль) с последующим добавлением метанола (600 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником на протяжении 10 минут, медленно перемешивали при комнатной температуре на протяжении 3 часов, кристаллизированную соль отфильтровали и высушили.

Выход: 80,5 г (40%);

[ ]_D ²⁵=+82,11° (с=0,7, метанол).

Соль перемешивали с 10% водным раствором Na₂CO ₃ (255 мл) и EtOAc (200х3 мл) для получения свободного основания в слое EtOAc. Слой EtOAc концентрировали для получения названного соединения.

Выход: 30 г (98,5%); [ ]_D ²⁵=+20,2° (с=0,7, метанол); ¹ Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,13 (s, 2Н), 3,90 (m, 1H), 3,79 (s, 9H), 3,57 (dd, 1H), 3,38 (d, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,93 (m, 1H).

(В) (+)-транс-Уксусной кислоты 3-(3-ацетил-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил)-1-метилпирролидин-2-ил метил сложный эфир

BF₃-эфират (36,8 г, 259 ммоль) добавили по каплям с перемешиванием при 0°С, в атмосфере N₂ к раствору соединения формулы ((96-(А))(14,6 г, 51,9 ммоль) в уксусном ангидриде (24,26 мл, 26,2 г, 256 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Ее вылили на дробленый лед (1 кг), подщелочили применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃ и экстрагировали, применяя EtOAc (3×200 мл). Органический экстракт промыли рассолом, высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения названного соединения.

Выход: 17,8 г (98%); ¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 6,1 (s, 1H), 4,22 (m, 2Н), 4,15 (m, 1H), 3,94 (s, 3Н), 3,92 (s, 3Н), 3,82 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,23 (m, 1Н), 2,85 (s, 3Н), 2,64 (s, 3Н), 2,28 (m, 2H), 2,01 (s, 3H).

(C) (+)-транс-1-[2-Гидрокси-3-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-4,6-диметоксифенил)этанон

К раствору соединения формулы (96-(В)) (17,8 г, 50,7 ммоль) в метаноле (40 мл) добавили с перемешиванием, при комнатной температуре 10% водный раствор NaOH (40 мл). Температуру реакционной смеси повысили до 50°С на протяжении 45 минут. Ее охладили до комнатной температуры, подкислили, применяя конц. HCl, и концентрировали для удаления метанола. Ее подщелочили, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃ . Осажденное названное соединение отфильтровали, промыли водой и высушили.

Выход: 10,2 г (65%); mp: 173-174°С; [ ]_D ²⁵=+4,12° (с=0,7, метанол);

¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 5,96 (s, 1H), 3,93 (m, 1Н), 3,91 (s 3Н), 3,90 (s, 3Н), 3,58 (dd, 1H), 3,42 (d, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,62 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,00 (m, 2H); MS (ES+): m/z 310 (M+1).

(D) (-)-транс-2-(2-Хлорфенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

Гидрид натрия (50%, 0,54 г, 11,25 ммоль) добавили по частям к раствору соединения формулы (96-(С)) (0,7 г, 2,2 ммоль) в сухом DMF (15 мл) при 0°С, в атмосфере азота и с перемешиванием. Через 10 минут добавили метил 2-хлорбензоат (1,15 г, 6,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 часов. Осторожно добавили метанол при ниже 20°С. Реакционную смесь вылили на дробленный лед (300 г), подкислили 1:1 HCl (pH 2) и экстрагировали, применяя EtOAc (2×100 мл). Водный слой подщелочили, применяя насыщенный Na₂CO ₃ (pH 10), и экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический слой высушили (безводный Na ₂SO₄) и концентрировали. К остатку добавили конц. HCl (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 часов. Реакционную смесь вылили на дробленый лед (300 г) и сделали основной, применяя насыщенный водный раствор Na₂CO₃. Смесь экстрагировали, применяя CHCl₃ (3×200 мл). Органический экстракт промыли водой, высушили (безводный Na₂SO₄) и концентрировали для получения названного соединения.

Выход: 0,625 г (65%); mp: 95-97°С; IR (KBr): 3431, 1648, 1598, 1571 см ^-1; [ ]_D ²⁵=-4,95° (с=0,7, метанол); ¹ Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,70 (dd, 1H), 7,68 (m, 3Н), 6,50 (s, 1Н), 6,44 (s, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,66 (dd, 1H), 3,37 (d, 1H), 3,15 (m, 1H), 2,77 (d, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,05 (m, 2H); MS (ES+): m/z 430 (M+1).

(E) (-)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Расплавленный пиридин гидрохлорид (2 г, 17,3 ммоль) добавили к соединению формулы (96-(D)) (0,2 г, 0,46 ммоль) и нагревали при 180°С на протяжении 1,5 часа. Реакционную смесь охладили до 25°С, разбавили МеОН (10 мл) и подщелочили, применяя Na₂CO₃ до pH 10. Смесь отфильтровали и органический слой концентрировали. Остаток суспендировали в воде (5 мл), перемешивали на протяжении 30 минут, отфильтровали и высушили для получения названного соединения.

Выход: 0,125 г (67,6%); mp: 228-230°С; IR (KBr): 3422, 3135, 1664, 1623, 1559 см^-1; MS (ES+): m/z 402 (М+1); Исследование: C₂₁H₂₀ClNO₅·0,5 H₂ O С, 61,81 (61,33); Н, 4,62 (5,00); N, 3,75 (3,33); С1, 8,47 (8,45).

(F) (-)-транс-2-(2-Хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

Соединение формулы (96-(Е)) (4,09 г, 10,18 ммоль) суспендировали в IPA (5 мл) и добавили 3,5% HCl (25 мл). Суспензию нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор охладили и твердое вещество отфильтровали для получения названного соединения.

Выход: 4,47 г (99%); mp: 180-184°С; [ ]_D ²⁵=-20,2° (с=0,4, метанол);

¹Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 7,80 (d, 1H), 7,60 (m, 3Н), 6,54 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,89 (m, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,59 (dd, 1H), 3,38 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,51 (m, 1H), 2,30 (m, 1H); MS (ES+): m/z 402 (M-36.5); Исследование: C₂₁H₂₁Cl ₂NO₅ C, 57,2 (57,55); H, 4,92 (4,83); N, 2,98 (3.20); Cl, 15,74 (16,18).

Пример 97:

(-)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

(Данное соединение представляет собой (-)-транс энантиомер соединения, иллюстрированного в примере 50. (-)-транс Энантиомер получили для сравнения его активности с его соответствующим (+)-транс энантиомером.).

(А). (-)-транс-2-Хлор-4-нитробензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложный эфир

2-Хлор-4-нитробензойную кислоту (3,55 г, 17 ммоль) и тионилхлорид (2 мл) нагревали вместе при 85°С на протяжении 3 часов. Избыток тионилхлорида выпарили под сниженным давлением и остаток высушили в вакууме и растворили в THF (50 мл). Его добавили по каплям к раствору соединения примера (96-(В))(4 г, 11 ммоль) и триэтиламина (15 мл, 108 ммоль) в THF (100 мл), который поддерживали при 15-20°С. Реакционную смесь нагрели до комнатной температуре и перемешивали в течение 12 часов. В конце 12 часов реакционную смесь концентрировали для удаления THF, подкислили разбавленной HCl, подщелочили 10% раствором NaHCO₃ до pH 10, экстрагировали с EtOAc (3×100 мл), промыли водой (50 мл), рассолом (50 мл) и органический слой высушили над безводным Na₂SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением для получения названного соединения как масла, которое применяли, так таковое, в следующей реакции без очистки.

Выход: 1,62 г (25%); ¹Н NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,35 (d, 1H), 8,25 (m, 2Н), 6,45 (s, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,94 (s, 6Н), 3,59 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,17 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,83 (s, 3H); MS (ES+): m/z 535 (M+1).

(В). (-)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-он

К раствору n-BuLi (15% в гексане, 2.54 мл, 5,8 ммоль) в THF (25 мл), который поддерживали при 0°С в атмосфере азота, добавили по каплям гексаметилдисилазан (1,25 мл, 5,8 ммоль) и перемешивали в течение 15 минут. К этому добавили по каплям раствор (-)-транс-2-хлор-4-нитробензойной кислоты 2-(2-ацетоксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-6-ацетил-3,5-диметоксифенил сложного эфира (1,6 г, 3 ммоль) в THF (25 мл), поддерживая температуру при 0°С. После добавления, реакцию нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. Реакционную смесь подкислили разбавленной HCl, подщелочили 10% раствором NaHCO ₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл). Органический слой промыли водой (25 мл), рассолом (25 мл), высушили над безводным Na₂SO₄. Органический слой концентрировали под сниженным давлением и под вакуумом для получения уксусной кислоты 3-{3-[3-(2-хлор-4-нитрофенил)-3-оксопропионил]-2-гидрокси-4,6-диметоксифенил}-1-метилпирролидин-2-ил-метил сложного эфира как желтого твердого вещества (1,6 г). Этот сложный эфир растворили в конц. HCl (16 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении 3 часов для выполнения циклизации. В конце 3 часов реакционную смесь подщелочили твердым NaHCO ₃ до pH 8-9. Водный слой экстрагировали с хлороформом (3×50 мл) и промыли водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄; концентрировали под сниженным давлением и высушили под вакуумом. Остаток очистили колоночной хроматографией с 3% метанолом в хлороформе и 0,1% аммиаком как элюент для получения названного соединения как желтого твердого вещества.

Выход: 0,71 г (50%); IR (KBr): 3447, 1648, 1600, 1570 см^-1; ¹H NMR (CDCl ₃): 8,37 (d, 1H), 8,26 (dd, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 2,62 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,04 (m, 2H); MS (ES+): m/z 475 (M+1).

(C) (-)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он

Смесь (-)-транс-2-(2-хлор-4-нитрофенил)-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-5,7-диметоксихромен-4-она (0,4 г, 0,8 ммоль), пиридин гидрохлорида (0,48 г, 4,1 ммоль) и каталитического количества хинолина нагревали при 180°С на протяжении периода 2 часов. Реакционную смесь охладили и разбавили метанолом (50 мл) и подщелочили твердым Na₂CO ₃ до pH 10. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Органический слой концентрировали и остаток очистили колоночной хроматографией, применяя 0,1% аммиак и 3% метанол в хлороформе как элюент для получения названного соединения как желтого твердого вещества.

Выход: 0,24 г (65%); MS (ES+): m/z 447 (M+1)

(D) (-)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-она гидрохлорид

(-)-транс-2-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5,7-дигидрокси-8-(2-гидроксиметил-1-метилпирролидин-3-ил)-хромен-4-он (0,2 г, 0,4 ммоль) суспендировали в метаноле (10 мл), обработали эфиральной HCl и органический растворитель выпарили для получения названной соли.

Выход: 0,18 г (85%); ¹ Н NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8,51 (d, 1H), 8, (dd, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,69 (s, 1Н), 6,41 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,91 (m, 2H), 3,73 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,32 (m, 1H); MS (ES+): m/z 483 (M+1).

Пример 98: (Сравнительный пример: получили способом, описанным в опубликованной заявке на патент США № 2004/0106581)

(-)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)-пирролидин-2-ил]-метанол

Соединение формулы 4 (27,3 г, 97,1 ммоль), растворили в метаноле (100 мл) и нагревали до 70°С. К этому добавили горячий раствор (+) DBTA (36,51 г, 101,9 ммоль) и нагревание продолжали на протяжении 10 минут. Ее концентрировали для получения твердого вещества (63,81 г), которое кристаллизировали, применяя метанол (45 мл) и изопропанол (319 мл). Фильтрацией и промываним изопропанолом с последующей сушкой обеспечили кристаллическую соль тартрата (13,14 г), [ ]_D ²⁵=+55,34°(с=1,14, метанол). Этот продукт перекристаллизовали, применяя метанол (10 мл) и изопропанол (40 мл). Его выделили, как описано выше, выход: 9,04 г, [ ]_D ²⁵=+49,67° (с=1,248, метанол). Свободное основание получили из данного продукта следующим образом.

Соль (9 г) суспендировали в этилацетате (100 мл). К этой суспензии добавили 5% водный раствор NaHCO₃ (100 мл) и смесь перемешивали в течение 30 минут. Органическую часть отделили и водную часть дополнительно экстрагировали, применяя этилацетат (2×50 мл). Органические части скомбинировали и концентрировали для получения соединения (-)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)пирролидин-2-ил]метанола.

Выход: 3,6 г (26,3%).

[ ]_D ²⁵=-17,6° (с=1,1, метанол).

¹H NMR (CDCl₃): 6,13 (s, 2Н), 3,90 (m, 1Н), 3,79 (s, 9H), 3,51 (dd, 1H), 3,38 (d, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,93 (m, 1H).

MS (ES+): m/z 282 (M+1).

Данное соединение подвергли хиральной ВЭЖХ. Хиральную ВЭЖХ провели, применяя колонку Chiralcel OD-H (250×4,6 мм) и систему растворителей гексан: этанол (92:08) с TFA (0,4%). Результаты записали при 264 нм со скоростью потока растворителя 1 мл/мин. Как изображено на фигуре 2, хиральная ВЭЖХ показывает 88,3% э.и. соединения (-)-транс-[1-Метил-3-(2,4,6-триметоксифенил)пирролидин-2-ил]-метанола.

Биологическое исследование:

Эффективность (+)-транс энантиомеров соединений формулы I в ингибировании активности циклин-зависимых киназ можно изучать множеством фармакологических исследований, хорошо известными в этой области, такими, как описаны ниже или, например, в Losiewics, М.D., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, 201, 589. Киназы, циклины и субстраты, применяемые в исследовании киназы in vitro, могут быть белками, выделенными из клеток млекопитающих, или альтернативно, они могут быть белками, выработанными рекомбинантно. Иллюстрированные фармакологические исследования, как описано ниже в данном описании, проводили с соединениями данного изобретения и их солями.

Исследование CDK4/циклин D1 киназы и исследование CDK2/циклин Е киназы

При исследовании измеряют фосфорилирование белка ретинобластомы (Rb) CDK4 или CDK2 при активации циклином D1 или циклином Е, соответственно, путем переноса ( ³²Р) - фосфата из ³²Р-АТФ в исследовании в 96-луночном фильтровальном планшете.

Материалы:

CDK4 или CDK2 совместно экспрессировали с циклином D1 или циклином Е, соответственно, системой экспрессии бакуловируса в клетках насекомых. Для этого 1×10⁷ Sf9 клетки совместно заразили бакуловирусами, содержащими CDK-4 человека или 2 и циклин D1 или Е гены, и через 72 часа клетки лизировали в 500 мкл лизирующего буфера (50 мМ HEPES (N-2-гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновая кислота) (pH 7,5), 10 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT (дитиотреитол), 5 мкг/мл апротинина, 5 мкг/мл леупептина, 0,1 мМ NaF, 0,2 мМ фенилметилсульфонилфторида (PMSF) и ортованадате натрия. Центрифугированный лизат очистили на GST (глутаминциклотрансфераза)-колонке сефарозы. Чистоту белков применяли при помощи SDS-PAGE с последующим Вестерн-блотами, применяя специфические антитела (Santacruz Biotec, USA) для CDK4 или CDK2.

Гибридный белок GST-ретинобластомы (Rb) (аа 776-928) экспрессировали в бактерии E.coli и очистили аффинной хроматографией на GSH-сефарозе. GST-Rb связанный с этими гранулами служил как субстрат в исследовании.

Считывание:

Количественный анализ проводился сцинтиляционным определением (³²P)-GST-Rb в 96-луночных фильтровальных планшетах, применяя сцинтиляционный 96-луночный счетчик Top Count (Packard, USA).

Методика:

Исследование фермента CDK4 или CDK2 проводили в 96-луночной форме, применяя многоситовые фильтровальные планшеты с ультратонким фильтром. Все этапы исследования проходили в планшете с одним фильтром (планшеты Unifilter, Packard, USA). Фильтровальные лунки предварительно увлажнили буфером киназы (100 л/лунка) и раствор затем удалили при помощи вакуума, с фильтровальным планшетом на вакуумном коллекторе и вакуум включили. 50 мкл GST-Rb связанного с гранулами GSH-сефарозы в буфере киназы (0,5 г GST-Rb/50 мкл) добавили в каждую лунку и применили вакуум для удаления буфера. Дополнительно 25 мкл реакционной смеси, содержащей АТФ (холодный + горячий) и ингибиторы фосфатазы, разбавленные в буфере киназы, добавили в каждую лунку с последующим добавлением исследуемого соединения (4 × заключительной концентрации в буфере киназы) или буфера киназы (контроль) в дополнительный 25 мкл объем. Заключительные 50 мкл (100 нг) CDK-4/D1 человека или CDK-2/E фермента в буфере киназы добавили в каждую лунку для начала реакции. Реакцию инкубировали на протяжении 30 минут при 30°С. После окончания реакции, применяли вакуум и планшет промыли промывным буфером (буфер TNEN) три раза. Фильтровальный планшет высушили на воздухе и поместили в многоситовой соединительный планшет. В каждую лунку добавили 30 мкл Packard Microscint - О cocktail и планшет покрыли пленкой Top-Seal А. Планшет считывали в сцинтиляционном счетчике Packard Top Count Scintillation на протяжении 10 минут. Флавопиридол применяли как стандартный ингибитор во всех экспериментах.

Концентрацию соединения, при которой 50% активности фосфокиназы CDK4-циклина D1 и CDK2-циклина Е ингибировалось, (IC₅₀), рассчитывали для репрезентативных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, описанных в примерах. Результаты показаны в таблице 1.

Таблица 1:
Соединение(я)	IC50 (µM)
CDK4-ЦИКЛИН D1	CDK2-ЦИКЛИН Е
Соединение формулы 10	0,065	2,8
Соединение формулы 96-(F)	NA	21
Соединение формулы 50	0,045	1,7
Соединение формулы 97-(D)	1	>10
Флавопиридол	60	360

Клеточная пролиферация in vitro и исследование цитотоксичности:

Применяли экспоненциально растущие культуры десяти линий раковых клеток человека (Calu1 легкого, А-549 легкого, НТ-29 толстой кишки, HL-60 промиелоцитарного лейкоза, РС-3 простаты, Н-460 легкого, MDA-MB-231 грудной железы, MCF-7 грудной железы, HeLa шейки матки, Colo-205 толстой кишки, Н9 лимфомы (Т Клетки), U-937 гистиоцитарной лимфомы (моноциты) и СаСО-2 Colon), полученные от NCCS, Pune, India. Клеточную пролиферацию in vitro (NCI, USA protocol) и исследование цитотоксичности проводили, применяя стандартные методики, а именно поглощение ³Н-тимидина и исследование цитотоксичности при помощи МТТ (тетразолия (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид), соответственно (Для поглощения ³Н-тимидина: Cell Biology, A Laboratory Handbook, 1998, Vol 1 Ed Julio E. Celis, и для исследования МТТ: Promega Protocol, USA, 2000). В исследовании поглощения ³Н-тимидина, клетки собрали через 72 часа на планшетах GF/B unifilter (Packard, USA), применяя коллектор клеток Packard Filtermate Universal и планшеты считывали на 96-луночном жидкостном сцинтилляционном счетчике Packard TopCount. Концентрацию соединения, при которой 50% пролиферативной активности ингибировалось, (IC₅₀), и степень токсичности соединения рассчитывали для репрезентативных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, описанных в примерах. Результаты показаны в таблице 2 ниже.

Таблица 2:
Соединение(я)	Исследование тимидина (IC50 мкМ)	МТТ цитотоксичности (IC50 мкМ)
Calu1 (Легкое)	А-549 (Легкое)	НТ-29 (Толстая кишка)	Calu1 (Легкое)	А-549 (Легкое)	НТ-29 (Толстая кишка)
Соединение формулы 10	<0,3	0,18	0,68	0,88	0,7	0,58
Соединение формулы 96-(F)	*NA	10	25 М	16,3	16	17,9
Соединение формулы 50	<0,3	1,2	1,5	1,4	1,2	1,1
Соединение формулы 97-(D)	ND	*NA	10	ND	*NA	*NA
* не наблюдалось никакого статически значимого ингибирования
NA - Не активное
ND - Не закончено

Результаты показывают, что (+)-транс-энантиомер соединений формулы (I) является более сильным ингибитором, чем его (-)-транс-энантиомер. Таким образом, введение (+)-транс-энантиомера соединений формулы (I), в основном свободного (-)-транс-энантиомера, обеспечивает снижение необходимой дозы лекарственного средства.