способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии

Формула изобретения

1. Способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии, включающий определение агрегационной активности тромбоцитов с использованием в качестве индукторов растворов АДФ, коллагена, ристомицина и адреналина путем смешивания на предметном стекле 0,1 мл стандартизированной по количеству тромбоцитов богатой тромбоцитами плазмы и 0,1 мл одного из агрегирующих агентов, и определения времени проявления агрегатов тромбоцитов в виде беловатых крупинок, видимых невооруженным глазом, при этом при ускорении агрегации тромбоцитов свыше 7% от контроля прогнозируют развитие токсической формы диспепсии.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве контроля используют средний результат определения индуцированной агрегации тромбоцитов у десяти клинически здоровых новорожденных телят.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике болезней животных.

В настоящее время установлено, что при некоторых патологических состояниях животных наблюдаются изменения агрегационной активности тромбоцитов.

Известны различные методы определения функциональной способности тромбоцитов, основанные на оценке спонтанной или индуцированной (с применением различных агонистов) агрегации тромбоцитов (Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: «Ньюдиамед-АО», 2001. - 296 с.).

Известен метод определения агрегационной активности тромбоцитов «на стекле» (Шитикова А.С. Визуальный микрометод определения агрегационной активности тромбоцитов с различными агрегирующими агентами / А.С.Шитикова // Лабораторное дело. - 1984. - № 4. - С.215-220).

Однако все указанные методы используются только для оценки функциональной активности тромбоцитов при различной патологии, а для прогнозирования развития токсической формы диспепсии не применяются.

Цель изобретения - прогнозирование у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии развития токсической формы диспепсии.

Раннее прогнозирование развития токсической диспепсии у новорожденных телят имеет большое практическое значение, т.к. позволяет более тщательно подходить к терапии и своевременно осуществлять превентивное лечение заболевших животных, что будет способствовать снижению падежа заболевших диспепсией новорожденных телят и повышению экономической эффективности животноводства.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем. У новорожденных телят с начальными признаками диспепсии отбирают пробы крови и определяют агрегационную активность тромбоцитов с использованием в качестве индукторов растворов АДФ, коллагена, ристомицина и адреналина путем смешивания на предметном стекле 0,1 мл стандартизированной по количеству тромбоцитов богатой тромбоцитами плазмы и 0,1 мл одного из агрегирующих агентов и установления времени проявления агрегатов тромбоцитов в виде беловатых крупинок, видимых невооруженным глазом. В качестве контроля используют средний результат определения индуцированной агрегации тромбоцитов у 10 клинически здоровых новорожденных телят. При выявлении у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии ускорения агрегации тромбоцитов свыше 7% от контроля можно прогнозировать развитие токсической диспепсии.

Способ осуществляют следующим образом: у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии производят отбор проб крови с утра до кормления в пластиковую посуду. Для предотвращения спонтанной агрегации применяют стабилизацию получаемой крови 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:4. Определяют индуцированную агрегационную активность тромбоцитов с использованием в качестве индукторов растворов АДФ (разведение маточного раствора 1:10), коллагена (концентрация 20 мг/мл), ристомицина (концентрация 15 мг/мл) и адреналина (разведение маточного раствора 1:50). Для этого из стабилизированной крови получают богатую тромбоцитами плазму и бедную тромбоцитами плазму. Используемую богатую тромбоцитами плазму получают центрифугированием полученной стабилизированной крови при 1000 об/мин в течение 6 мин; а плазму, бедную тромбоцитами, - после центрифугирования оставшейся в пробирке богатой тромбоцитами плазмы при 3000 об/мин в течение 20 мин. Богатую тромбоцитами плазму стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления при необходимости аутологичным образцом бедной тромбоцитами плазмы (до 380-400000 тромбоцитов/мкл). Объемы смешиваемых богатой и бедной тромбоцитами плазм определяют по формуле (1):

где V_ppp - объем бедной тромбоцитами плазмы,

V_prp - объем богатой тромбоцитами плазмы,

N - счетная концентрация тромбоцитов в исходной богатой тромбоцитами плазме (клеток/мкл).

Далее разными пипетками на обезжиренное сухое предметное стекло наносят 0,1 мл исследуемой богатой тромбоцитами плазмы и 0,1 мл одного из агрегирующих агентов. После смешивания стеклянной палочкой капель на предметном стекле немедленно включают секундомер и устанавливают время проявления так называемого феномена снежной бури - момента, когда агрегаты тромбоцитов достигают таких размеров, что могут быть видны невооруженным глазом в виде беловатых крупинок (обязательно использование подсветки для микроскопа типа ОИ-19). Феномен снежной бури у здоровых особей наступает в одно и то же время, а при усилении агрегационной функции он проявляется раньше нормы, при ослаблении - позже. Реакции повторяют 2 раза с одним и тем же агрегирующим агентом. Результат учитывают в секундах. Результатом считают средние от двух определений значения.

В качестве контроля используют средний результат определения по вышеописанному способу индуцированной агрегации тромбоцитов у 10 клинически здоровых новорожденных телят той же возрастной группы.

При выявлении у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии ускорения агрегации тромбоцитов свыше 7% от контроля можно прогнозировать развитие токсической формы диспепсии.

Пример 1. По принципу аналогов с учетом происхождения, возраста и живой массы при рождении были сформированы 2 группы новорожденных телят. Условия содержания, кормления и ухода за животными были одинаковыми. Первая группа состояла из 22 клинически здоровых новорожденных телят. Вторая группа была составлена из 17 телят с начальными признаками диспепсии, находившихся на лечении по принятой в хозяйстве схеме (тилозин-50 0,2 мл/кг внутримышечно 1 раз в сутки до выздоровления; отвар конского щавеля на изотоническом растворе натрия хлорида внутрь утром и вечером по 0,5 л). По ходу эксперимента вторая группа была разделена на две подгруппы: больных простой (n=10) и больных токсической формой диспепсии (n=7) телят. Критерием для такого разделения стало различие в клинической картине болезни. Для телят с простой диспепсией была характерна учащенная дефекация с выделением разжиженного кала, общее состояние больных телят оставалось удовлетворительным. У телят, больных токсической формой диспепсии, при полном развитии картины болезни отмечался профузный понос, наблюдались угнетенное состояние, адинамия, исхудание, взъерошенность шерстного покрова, сухость носового зеркальца.

У больных диспепсией телят (n=17) агрегацию тромбоцитов определяли в начале болезни (при появлении первых признаков диспепсии), в разгар заболевания (на 2-3 сутки диспепсии) и в стадию выздоровления.

Результаты определения индуцированной агрегации тромбоцитов у клинически здоровых и больных диспепсией телят представлены в таблице 1. Как видно из таблицы 1, у больных диспепсией новорожденных телят в начале простой диспепсии в сопоставлении со средними данными клинически здоровых новорожденных телят происходило ускорение индуцированной агрегации на 5,51% при применении коллагена, на 6,26% при применении АДФ, на 5,95% при использовании ристомицина и на 5,80% при использовании адреналина. При токсической диспепсии в начале болезни результаты агрегации опережали средние данные здоровых новорожденных телят на 7,72% при применении коллагена, на 8,39% при применении АДФ, на 7,82% при использовании ристомицина и на 8,09% при использовании адреналина.

Таблица 1.
Индуцированная агрегация тромбоцитов (AT) клинически здоровых и больных диспепсией новорожденных телят
Индукторы	Средняя AT здоровых новорожденных телят (n=22)	Простая диспепсия (n=10)	Токсическая диспепсия
Начало болезни	Разгар болезни	Стадия выздоровления	Начало болезни (n=7)	Разгар болезни (n=7)	Стадия выздоровления(n=5)
Коллаген, с	29,92±1,16	28,27±0,31*	25,30±0,07*	29,29±0,07*	27,61±0,36*	17,59±0,12*	25,47±0,11*
АДФ, с	38,97±1,61	36,53±0,39*	32,94±0,07*	37,06±0,07*	35,70±0,40*	23,03±0,06*	34,13±0,14*
Ристомицин, с	41,02±1,61	38,58±0,37*	36,17±0,06*	39,49±0,08*	37,81±0,39*	24,11±0,10*	36,33±0,18*
Адреналин, с	97,05±4,01	91,42±1,08*	75,53±0,07*	94,07±0,06*	89,20±1,24*	57,07±0,10*	87,67±0,48*
* -p 0,05 по сравнению со средней AT здоровых новорожденных телят

Соответственно уже при проявлении первых признаков диспепсии, когда еще невозможно диагностировать форму заболевания, агрегация тромбоцитов происходит раньше более чем на 7% у тех новорожденных телят, которые в дальнейшем переболевают токсической формой диспепсии. Таким образом, определение индуцированной агрегации тромбоцитов у новорожденных телят по предлагаемой методике можно использовать как относительно простой и доступный в условиях хозяйства способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии.

Пример 2. У новорожденного теленка № 122 выявлены начальные признаки диспепсии: учащенная дефекация с выделением разжиженного кала. Для оценки риска развития токсической формы диспепсии у животного отобрана проба крови, определена агрегационная активность тромбоцитов с использованием в качестве индуктора коллагена. Данный показатель у заболевшего теленка равен 27,25 с. В качестве контроля использован средний результат определений агрегационной активности тромбоцитов у 10 клинически здоровых новорожденных телят (30,05 с). Ускорение агрегации тромбоцитов у заболевшего теленка составляет 2,80 с или 9,32%. Соответственно у данного животного можно прогнозировать развитие токсической формы диспепсии. Теленку назначена адекватная терапия: 0,1 мл 0,1%-ного раствора препарата «Биопаг-Д» на 1 кг живой массы теленка 2 раза в сутки внутрь с молозивом-молоком; 0,2 г/кг массы тела животного энтеросорбента «Полисорб-ВП» внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозива или через 2 часа после кормления; реополиглюкин с глюкозой 5 мл на 1 кг живой массы 1 раз в сутки внутривенно; 50 мл изотонического раствора натрия хлорида на голову внутривенно 1 раз в сутки. В результате животное переболело диспепсией в легкой форме.