синергическая композиция для кормления сельскохозяйственных животных, корм, содержащий композицию, применение композиции

Формула изобретения

1. Синергическая композиция с биологически доступным метионином, предназначенная для кормления сельскохозяйственных животных, включающая: а) 2-гидрокси-1-метилтиобутановую кислоту в количестве от 5 до 95 мас.% и б) по меньшей мере, одно эфирное масло, выбранное из следующей группы: линалилацетат, тминный спирт, коричный альдегид, борнеол, кадинен, камфен, камфара, карвакрол, карвон, цинеол, цитраль, цитронеллаль, цитронеллол, цимол, дипентен, эстргол, эвгенол, гераниол, лимонен (D или L), линалол (D или L), ментол, метилхавикол, парацимол, фелландрен, пинен (альфа или бета), метилсалицилат, терпинен (альфа и бета), терпинеол (альфа и бета), туйон, тимол, борнилацетат, геранилацетат, эвгенилацетат, тминный альдегид, аллицин, анетол, периллальдегид и сабинен в количестве от 5 до 95 мас.%.

2. Композиция по п.1, включающая:

а) от 5 до 95 мас.% 2-гидрокси-1-метилтиобутановой кислоты,

б) от 5 до 95 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла, указанного в п.1, и

в) возможно, по меньшей мере, одно другое соединение.

3. Корм, содержащий композицию по любому из пп.1 и 2.

4. Применение композиции по любому из пп.1 и 2 для получения кормовой добавки.

5. Применение по п.4 для снижения активности эндогенной флоры сельскохозяйственных животных.

6. Применение по п.4 для противодействия неблагоприятным эффектам патогенных микроорганизмов кишечной флоры сельскохозяйственных животных.

7. Применение по п.4 для улучшения показателей сельскохозяйственных животных, таких как рост, выживаемость, однородность, эффективность производства.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к кормовой композиции, предназначенной для обогащения рациона сельскохозяйственных животных метионином.

Кишечная микрофлора животных состоит из различных сложных сообществ, объединяющих бактерии, дрожжи и грибы. Такая микрофлора оказывает значительное влияние на здоровье животных и эффективность их питания.

В большинстве случаев встречаются два типа бактерий: во-первых, патогенные бактерии (например, Salmonella, Campylobacter jejuni или Clostridium perfringens), и во-вторых, бактерии, не считающиеся патогенными (например, Lactobacillus или Propionibacterium). Общий баланс эффектов этих бактерий на жизнедеятельность сельскохозяйственных животных является отрицательным.

В течение многих лет компании, занятые в животноводстве, ищут возможность переориентировать кишечную бактериальную флору на улучшение жизнедеятельности животных.

Следует отметить, что в настоящее время принято обогащать корма для животных антибиотиками-факторами роста, что позволяет снизить общую бактериальную нагрузку пищеварительного тракта и улучшить показатели роста или производства. Однако использование антибиотиков в качестве факторов роста запрещено в Европе с 1 января 2006 г.

Таким образом, имеется назревшая необходимость замены антибиотиков другими веществами.

Одной из задач настоящего изобретения является создание композиции, предназначенной для питания сельскохозяйственных животных, имеющей бактерицидный эффект в отношении кишечной флоры сельскохозяйственных животных.

Другой задачей настоящего изобретения является создание композиции, предназначенной для питания сельскохозяйственных животных, оказывающей благотворный эффект на жизнедеятельность животных.

Еще одной задачей настоящего изобретения является создание кормовой композиции, не содержащий антибиотиков, с сохранением благоприятного эффекта на рост животных, оказываемого обычно антибиотиками.

Еще одной задачей настоящего изобретения является создание кормовой композиции, воздействующей на кишечную флору сельскохозяйственных животных.

Таким образом, настоящее изобретение относится к синергической кормовой композиции, содержащей биологически доступный метионин, предназначенной для питания сельскохозяйственных животных, включающей:

а) биологически доступное соединение метионина и

б) по меньшей мере, одно эфирное масло.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиция, соответствующая настоящему изобретению, которая содержит эти два соединения, проявляет синергический бактерицидный эффект в отношении активности кишечной флоры. В самом деле, биологически доступное соединение метионина и эфирное масло или смесь эфирных масел взаимно усиливают эффект друг друга.

Ни один из документов, отражающих уровень техники, не описывает синергический бактерицидный эффект комбинации биологически доступного метионина и по меньшей мере одного эфирного масла.

Под "биологически доступным метионином" понимается любое соединение, способное восполнить повседневную потребность сельскохозяйственных животных в метионине. Фактически метионин могут давать сельскохозяйственным животным в различных формах.

В соответствии с настоящим изобретением биологически доступное соединение метионина находится в очищенном состоянии.

Прежде всего это может быть метионин как таковой, в частности L-метионин или DL-метионин.

Это также может быть производное метионина. Под "производными метионина" понимаются, например, соли, алкиловые сложные эфиры и сложные эфиры спиртов, производные кетонов и гидрокси-аналоги метионина, а также их производные.

Также это может быть 2-гидрокси-1-метилтиобутановая кислота (называемая далее ГМТБК, или гидрокси-аналог метионина), известный аналог метионина в питании сельскохозяйственных животных. Она имеет то преимущество, что представлена в жидком виде, что, в свою очередь, облегчает ее использование компаниями, производящими корма для животных.

Это также может быть изопропиловый эфир гидрокси-аналога метионина или трет-бутиловый эфир метионина.

Кормовая композиция согласно настоящему изобретению может содержать также несколько источников биологически доступного метионина, например, смесь метионина и его гидрокси-аналога.

Биологическая доступность источника метионина определяется как содержание активного соединения в крови по отношению к количеству активного соединения, вносимого в пищевой рацион животного. При определении биологической доступности учитывается степень абсорбции в кишечнике в ходе пищеварения, прохождение пищевого комка в различных отделах желудка у животных с многокамерным желудком и степень трансформации активного соединения организмом (это, в частности, относится к гидрокси-аналогу метионина).

Под "эфирным маслом" понимается жидкость, получаемая из растений (цветов, почек, зерен, листьев, побегов, трав, коры, древесины, плодов и корней). Эфирное масло может, в частности, быть получено посредством отжима, ферментации, анфлеража и экстракции. Эфирные масла иногда называют также летучими маслами, благодаря присутствию терпенов (неароматических углеводородов) и кислородсодержащих соединений (спиртов, альдегидов, кетонов), которые являются ароматическими. Эфирное масло может быть сырым, депентенизированным, ректифицированным либо составным.

В соответствии с настоящим изобретением эфирное масло может представлять собой смесь эфирных масел.

В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения эфирные масла более чем на 5% состоят, по меньшей мере, из одного соединения, выбираемого из следующей группы: линалилацетат, тминный спирт, коричный альдегид, борнеол, кадинен, камфен, камфара, карвакрол, карвон, цинеол, цитраль, цитронеллаль, цитронеллол, цимол, дипентен, эстргол, эвгенол, гераниол, лимонен (D или L), линалол (D или L), ментол, метилхавикол, парацимол, фелландрен, пинен (альфа или бета), метилсалицилат, терпинен (альфа и бета), терпинеол (альфа и бета), туйон, тимол, борнилацетат, геранилацетат, эвгенилацетат, тминный альдегид, аллицин, анетол, периллальдегид и сабинен. Предпочтительно эфирные масла более чем на 10% состоят из одного из указанных соединений.

Используемые масла предпочтительно получают путем холодного отжима цедр или путем отгонки различных частей следующих растений: чеснок, вакциниум, алоэ, укроп, зелень аниса, чайное дерево, базилик, бергамот, розовое дерево, береза, красный можжевельник, морковь, куркума, каяпутовое дерево, камфара, корица, тмин, сельдерей, дуб, лимон, мелисса, кориандр, эстрагон, эвкалипт шаровидный, фенхель, можжевельник, герань, имбирь, женьшень, гвоздика, иссоп, лавр благородный, лаванда настоящая, лаванда широколистная, сорго лимонное, сладкий лимон, мандарин, майоран, мята перечная, мускатный орех, мирра, мирт, лук, ладан, апельсин, душица, пальмароза, грейпфрут, папайя, красный перец, пачули, петрушка, жгучий красный перец, сосна приморская, сосна обыкновенная, яблоко, хрен, розмарин, сандал, чабер, сассафрас, шалфей, чабрец, хвойная смола, красный тимьян, вербена, бородач, кананги.

Под "животными" более конкретно понимаются сельскохозяйственные животные и, в частности, выпасные животные (как то: крупный рогатый скот на мясо, молоко, сыр и кожу; овцы на мясо, шерсть и сыр; козы), свиньи, кролики, домашняя птица (цыплята, куры, индейки, утки, гуси и др.), водные животные (рыба, креветки, устрицы и мидии), другие домашние животные (в частности, лошади, собаки, кошки). Крупный рогатый скот представляет собой подсемейство семейства полорогих - жвачных животных с многокамерным желудком, - которое включает множество важных видов сельскохозяйственных животных (молочные породы, мясные породы, смешанные породы).

Композиция согласно настоящему изобретению представлена в виде порошка или в жидком виде. В свою очередь, биологически доступный метионин представлен в виде порошка или гранул. Это дополнительно требует растворения такого порошка в эфирном масле с целью получения композиции согласно настоящему изобретению. Как указано выше, метионин может быть представлен и в виде гидрокси-аналога, то есть в жидком виде. В этом случае обе жидкости перемешивают до однородного состояния перед введением животным или добавлением в корм.

Соединение а) предпочтительно выбирают из следующей группы: непосредственно метионин (L-метионин или D,L-метионин) либо одно из его производных типа солей, амидов, алкиловых сложных эфиров и сложных эфиров спиртов, кетопроизводных, гидрокси-аналогов или производных этих продуктов.

В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения соединение а) описывается следующей формулой (I):

, в которой

R представляет собой Н или изопропиловую группу,

а R' представляет собой -ОН или -NH2.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения кормовая добавка согласно настоящему изобретению, которая оказывает синергический бактерицидный эффект на кишечную флору животных, содержит:

а) от 5 до 95 мас.% биологически доступного соединения метионина,

б) от 5 до 95 мас.% одного, по меньшей мере, эфирного масла и

в) при необходимости, по меньшей мере, одно иное вещество.

Согласно этому варианту осуществления кормовая композиция может содержать по меньшей мере одно дополнительное вещество, например, эмульгатор или желатин. В этом варианте речь идет об открытой композиции.

Предпочтительно указанная композиция содержит от 10 до 90 мас.% биологически доступного соединения метионина, от 10 до 90 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла и, при необходимости, по меньшей мере, одно иное соединение.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция содержит от 15 до 85 мас.% биологически доступного соединения метионина, от 15 до 85 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла и, возможно, по меньшей мере, одно иное соединение.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция содержит от 20 до 80 мас.% биологически доступного соединения метионина, от 20 до 80 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла и, возможно, по меньшей мере, одно иное соединение.

В соответствии с еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения кормовая композиция согласно настоящему изобретению, которая проявляет синергический бактерицидный эффект в отношении кишечной флоры животных, состоит из:

а) от 5 до 95 мас.% биологически доступного соединения метионина,

б) от 5 до 95 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла.

В этом варианте осуществления кормовая композиция содержит только эти два соединения и не содержит ни одного другого соединения. В этом варианте речь идет о закрытой композиции.

Предпочтительно кормовая композиция согласно настоящему изобретению содержит от 10 до 90 мас.% биологически доступного соединения метионина и от 10 до 90 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция содержит от 15 до 85 мас.% биологически доступного соединения метионина и от 15 до 85 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция содержит от 20 до 80 мас.% биологически доступного соединения метионина, от 20 до 80 мас.% по меньшей мере одного эфирного масла и, возможно, по меньшей мере одно иное соединение.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения доля биологически доступного метионина (т.е. соединение а)) в композиции составляет более 60 мас.%, предпочтительно более 80 мас.%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения доля эфирного масла (т.е. соединения б)) в композиции составляет менее 40 мас.%, предпочтительно менее 20 мас.%, более предпочтительно менее 10 мас.%. Кроме того, еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение б) присутствует в композиции в количестве более 5 мас.%, предпочтительно не менее 8 мас.%.

Настоящее изобретение также относится к кормовой добавке, содержащей композицию согласно настоящему изобретению.

Под "кормовой добавкой" понимаются активное соединение или смесь активных соединений, входящие в состав корма в доле, обыкновенно не превышающей 2%, например, менее 1% по отношению к общей массе корма.

Настоящее изобретение относится также к корму для животных, в частности, типа кормового рациона, включающему кормовую композицию, описанную выше, либо включающему указанную кормовую добавку.

Наконец, настоящее изобретение касается применения описанной выше композиции для получения кормовой добавки.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения такое применение может, помимо прочего, привести к снижению активности эндогенной флоры у сельскохозяйственных животных, обеспечить противодействие неблагоприятным эффектам патогенных микроорганизмов кишечной флоры сельскохозяйственных животных.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения такое применение может, помимо прочего, привести к улучшению показателей сельскохозяйственных животных, таких как рост, выживаемость, однородность, эффективность производства.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция улучшает показатели за счет снижения активности кишечной флоры сельскохозяйственных животных.

Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением композицию согласно настоящему изобретению применяют для изготовления кормовой добавки для сельскохозяйственных животных для улучшения показателей за счет подавления активности кишечной флоры указанных животных.

Нижеприведенные примеры и графические материалы позволят продемонстрировать некоторые преимущества и характеристики настоящего изобретения.

Целью нижеприведенных исследований является сравнение газообразования флорой содержимого подвздошной кишки мясных цыплят в различных экспериментальных условиях. Газообразование является косвенным показателем бактериальной активности флоры подвздошной кишки цыпленка.

Пример 1

Животные и отбор проб

50 мясных цыплят выращивали на рационе на основе пшеницы. Все цыплята выращивались при одном и том же режиме питания. Цыплят забивали на 35-й день, затем отбирали содержимое их подвздошной кишки в анаэробных условиях. Содержимое помещали в сосуды, которые хранили при -18°С.

Испытания in vitro

Руководствуясь экспериментальной схемой, описанной ниже в Таблице I, измеряли зависимость газообразования от времени.

В 48 сосудов последовательно помещали:

- действующее вещество (т.е. ничего в случае отрицательного контроля, ГМТБК, эфирное масло (ЭМ) либо испытуемый образец),

- 90 мл буферного раствора, содержащего пшеничный крахмал (питательная среда для бактерий); этот буферный раствор служил для поддержания рН на постоянном уровне и подавления О ₂,

- 10 мл посевного материала, состоящего на 1/4 из содержимого подвздошной кишки и на 3/4 из стерильного физиологического раствора, который перед заливкой отфильтровывали и гомогенизовали.

Тестовые дозы рассчитывали таким образом, чтобы они отражали концентрации, ожидаемые в содержимом желудочно-кишечного тракта животных.

Таблица I
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1	ЭМ2	Тест. Обр. 2	ЭМ3	Тест. Обр. 3	ЭМ4	Тест. Обр. 4	ЭМ5	Тест. Обр. 5
Образец	0	ГМТБК	ЭМ1	ГМТБК + ЭМ1	ЭМ2	ГМТБК + НЕ 2	ЭМ3	ГМТБК + ЭМ3	ЭМ4	ГМТБК + ЭМ4	ЭМ5	ГМТБК + ЭМ5
Повторность	4	4	4	4	4	4	4	4	4	4	4	4
Внесенная доза ГМТБК	мг	0	83	0	83	0	83	0	83	0	83	0	83
	мас.%	0	100	0	75	0	62,5	0	71,4	0	73	0	62,5
Внесенная доза ЭМ	мг	0	0	28	28	50	50	34	34	31	31	50	50
	мас.%	0	0	100	25	100	37,5	100	28,6	100	27	100	37,5
Посевной материал (мл)	10	10	10	10	10	10	10	10	10	10	10	10
Буферный раствор (мл)	90	90	90	90	90	90	90	90	90	90	90	90
ЭМ: эфирное масло или смесь эфирных масел
ГМТБК: биологически доступный метионин в виде 2-гидрокси-4-метилтиобутановой кислоты

Руководствуясь экспериментальной схемой, изложенной выше в Таблице I, получали кривые зависимости газообразования от времени, которые в большинстве случаев имели сигмообразную форму.

Эти кривые рассчитывали по следующей математической модели:

Y=A/(1+(C/t)^В)

где Y - объем выделившегося газа

t - время

А, В и С - параметры модели

На основе этих уравнений выводили расчетное значение конечного объема Vf (Vf=A), а также значение времени, при котором газообразование максимально, обозначаемое Trm (это значение времени использовали для косвенной оценки латентного периода, который недоступен в этой модели). Для оценки эффекта тестового образца осуществляли дисперсионный анализ (ANOVA) на основании полученных данных. Если вероятность эффекта оказывалась значимой, т.е. при р<0.05, значения средних сравнивали по критерию Фишера с защищенным минимальным значимым различием (PLSD - protected least significant difference), что позволяло установить различия средних для различных воздействий.

Результаты

Результаты приведены ниже в Таблице II.

Значения параметров в Таблице II имеют значимые различия с порогом вероятности 5%, если воздействия не имеют совпадающих буквенных обозначений.

Прежде всего, можно видеть, что все испытанные соединения дают результаты, достоверно отличные от контроля по обоим критериям, т.е. Vf и Trm. Таким образом, все эти композиции проявляют подавляющий эффект в отношении активности флоры подвздошной кишки.

Цель состояла в максимизации Trm. Все тестовые образцы, таким образом, оказались эффективны.

Показано наличие синергического эффекта биологически доступного соединения метионина в форме ГМТБК и эфирного масла на активность бактерий.

Таким образом, Trm в случае отрицательного контроля составляет 10,8 час. При воздействии ГМТБК Trm остается неизменным; это позволяет считать, что ГМТБК сама по себе не действует или слабо действует на активность бактерий.

При воздействии ЭМ1 достигается Trm, составляющее 13,5 час. Таким образом, ЭМ1 действует на бактериальную активность.

Смесь 1 дает Trm, составляющее 19,3 час. Следовательно, смесь 1 проявляет эффект в отношении активности бактерий, который превосходит суммарный эффект ЭМ1 и ГМТБК, взятых в отдельности.

Смесь 1, а также смеси 2-5, дающие тот же результат, проявляют, таким образом, синергический эффект в отношении активности бактерий, измеряемый с помощью Trm.

Измерение величины Vf является показателем длительности эффекта воздействия. Цель состоит в минимизации Vf.

Как наиболее эффективные рассматриваются те образцы, которые минимизируют конечный объем и в то же время максимизируют Trm.

Это смеси 3 и 5.

Таблица II
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1	ЭМ2	Тест. Обр. 2	ЭМ3	Тест. Обр. 3	ЭМ4	Тест. Обр. 4	ЭМ5	Тест Обр. 5
Vf (мл)	Среднее	586	565	496	469	238	184	460	237	302	252	308	193
Ст.откл.	17	21	41	18	34	17	9	48	113	18	55	8
Различие	а	а	b	bс	ef	f	с	ef	d	de	d	f
Tmn (час)	Среднее	10,8	10,8	13,5	19,3	28,6	46,3	21,5	39,1	28,9	35,8	30,8	37,2
Ст.откл.	0,2	0,2	0,1	1,8	1,2	3,1	4,6	3,4	0,4	1,3	1,9	3,1
Различие	а	а	b	с	d	f	с	е	d	е	d	е
Vf: конечный объем выделенного газа (мл)
Trm: значение времени, при котором газообразование максимально (час)
Состав n=ЭМn + ГМТБК

Пример 2

Условия и параметры эксперимента из Примера 1 воспроизвели в Примере 2 (см. нижеследующую Таблицу III).

Таблица III
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1	ЭМ2	Тест. Обр. 2
Образец	0	ГМТБК	ЭМ1	ГМТБК + ЭМ1	ЭМ2	ГМТБК + ЭМ2
Повторность	4	4	4	4	4	4
Внесенная	мг	0	83	0	83	0	83
доза ГМТБК	мас.%	0	100	0	84,7	0	84,7
Внесенная	мг	0	0	15	15	15	15
доза ЭМ	мас.%	0	0	100	15,3	100	15,3
Посевн. материал (мл)	10	10	10	10	10	10
Буферн. раствор (мл)	90	90	90	90	90	90
ЭМ1: красный тимьян
ЭМ2: чайное дерево
ГМТБК: биологически доступный метионин в виде 2-гидрокси-4-метилтиобутановой кислоты

Результаты

Результаты приведены в нижеследующей Таблице IV.

Таблица IV
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1	ЭМ2	Тест. Обр. 2
Vf (мл)	Среднее	542,0	296,2	226,7	203,1	319,6	361,1
	Станд. откл.	43,9	28,6	15,5	15,6	10,8	41,3
	Различие	а	b	b	b	b	e
Trm (час)	Среднее	15,3	20,3	27,7	33,1	20,2	24,8
	Станд. откл.	1,0	0,7	1,1	0,8	0,8	0,8
	Различие	а	b	с	d	b	e
Vf: конечный объем выделенного газа (мл)
Trm: значение времени, при котором газообразование максимально (час)
Тестовый образец n = ЭМn + ГМТБК

Что касается максимизации Trm, все тестовые воздействия (ГМТБК, ЭМ и их смеси) оказались эффективны.

Вновь продемонстрировано, что эффект биологически доступного соединения метионина, в данном случае ГМТБК, и эфирного масла в отношении активности бактерий оказывается синергическим.

Фактически Trm в отрицательном контроле составляет 15,3 час.

При воздействии ГМТБК достигается Trm, составляющее 20,3 час. Следовательно, ГМТБК проявляет эффект в отношении активности бактерий, когда ее добавляют отдельно.

При воздействии ЭМ1 достигается Trm, составляющее 27,7 час. Таким образом, и ЭМ1 проявляет эффект в отношении активности бактерий.

В свою очередь, при воздействии смеси 1 (или тестового образца 1) Trm составляет 33,1 час. Таким образом, смесь 1 проявляет в отношении активности бактерий эффект, превосходящий суммарный эффект ЭМ1 и ГМТБК, взятых в отдельности.

Следовательно, смесь 1, а также смесь 2, дающая сходные результаты, проявляют синергический эффект.

Величина Vf является показателем долгосрочного эффекта воздействия. Цель состоит в том, чтобы свести к минимуму Vf.

Как наиболее эффективные рассматриваются те образцы, которые минимизируют конечный объем и в то же время максимизируют Trm.

Это смесь 1.

NB: Различия в значениях Vf и Trm от примера к примеру настоящей заявки могут объясняться использованием различного содержимого кишечника, происходящего из разных групп животных. Несмотря на то что выращивание, кормление и условия отбора проб были одни и те же, тем не менее, популяции бактерий, заселяющих кишечник, никогда не бывают одинаковы. Различия между выявленными значениями в различных примерах имеют место по причине различий в микрофлоре от пробы к пробе.

Пример 3

Условия и параметры эксперимента из Примера 1 воспроизвели в Примере 3 (см. нижеследующую Таблицу V):

Таблица V
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1
Образец	0	ГМТБК	ЭМ1	ГМТБК + ЭМ1
Повторность	4	4	4	4
Внесенная	мг	0	83	0	83
доза ГМТБК	мас.%	0	100	0	84,7
Внесенная	мг	0	0	15	15
доза ЭМ	мас.%	0	0	100	15,3
Посевной материал (мл)	10	10	10	10
Буферный раствор (мл)	90	90	90	90
ЭМ1: корица
ГМТБК: биологически доступный метионин в форме 2-гидрокси-4-метилтиобутановой кислоты

Результаты

Результаты приведены в нижеследующей Таблице VI.

Таблица VI
Препарат	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ1	Тест. Обр. 1
Vf (мл)	Среднее	632,7	334,3	218,3	20,0
Станд. откл.	23	86	82	10
Различие	а	b	с	е
Trm (час)	Среднее	14,1	28,1	53,5	>72
Станд. откл.	0,1	2,2	10,9	н/о
Различие	а	b	с	d
Vf: конечный объем выделенного газа (мл)
Trm: значение времени, при котором газообразование максимально (час)
Состав n = ЭМn + ГМТБК
н/о - не определялось

Все испытанные композиции дают результаты, достоверно отличные от контроля по обоим критериям, а именно Vf и Trm. Эти композиции, таким образом, проявляют подавляющий эффект в отношении активности флоры подвздошной кишки.

Что касается величины Trm, которая должна быть как можно выше, то все испытанные воздействия (ГМТБК, ЭМ и тестовый образец) оказываются, таким образом, эффективными.

Было снова продемонстрировано наличие синергического эффекта биологически доступного соединения метионина, в данном случае в виде ГМТБК и эфирного масла, в данном случае в виде эфирного масла корицы, на активность бактерий.

Фактически при отрицательном контроле Trm составляет 14,1 час.

При воздействии ГМТБК достигается Trm, составляющее 28,1 час. Следовательно, ГМТБК проявляет эффект в отношении активности бактерий, когда ее добавляют отдельно.

При воздействии ЭМ1 Trm составляет 53,5 час. Таким образом, ЭМ1 проявляет эффект в отношении активности бактерий.

Смесь 1 (или тестовый образец 1) дает значение Trm "более 72 час" Таким образом, смесь 1 оказывает почти полное бактерицидное действие, которое препятствует образованию газа бактериями, происходящими из кишечного содержимого. Комбинация ГМТБК с эфирным маслом корицы, таким образом, обладает весьма сильным эффектом в отношении активности бактерий, который превосходит суммарный эффект эфирного масла корицы и ГМТБК, взятых в отдельности.

Следовательно, смесь 1 проявляет сильный синергический эффект (см. Фиг.6).

Величина Vf является показателем долгосрочного эффекта воздействия. Цель состоит в том, чтобы свести к минимуму эту величину.

Как наиболее эффективные рассматриваются те образцы, которые минимизируют конечный объем и в то же время максимизируют Trm.

Смесь 1 соответствует этим требованиям и может рассматриваться как особенно эффективная.

Пример 4

Условия и параметры эксперимента из Примера 1 воспроизвели в Примере 4 (см. нижеследующую Таблицу VII):

Таблица VII
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	СЭМ	Тест. Обр.
Образец	0	ГМТБК	СЭМ2	ГМТБК + СЭМ2
Повторность	4	4	4	4
Внесенная доза ГМТБК	мг	0	83	0	83
	вес.%	0	100	0	84,7
Внесенная доза ЭМ	мг	0	0	15	15
	вес.%	0	0	100	15,3
Посевной материал (мл)	10	10	10	10
Буферный раствор (мл)	90	90	90	90
СЭМ: 3/4 чайное дерево и 1/4 эфирное масло корицы
ГМТБК: биологически доступный метионин в виде 2-гидрокси-4-метилтиобутановой кислоты

Результаты

Результаты приведены в нижеследующей Таблице VIII.

Таблица VIII
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	СЭМ	Тестовый образец
Vf (мл)	Среднее	518	421	377	253
	Станд. откл.	35	37	21	2
	Различие	а	b	b	d
Trm (час)	Среднее	11,1	15,4	19,0	25,3
	Станд. откл.	1,4	1,7	2,7	2,6
	Различие	а	b	d	е
Vf: конечный объем выделенного газа (мл)
Trm: значение времени, при котором газообразование максимально (час)

Снова продемонстрировано наличие синергического эффекта биологически доступного соединения метионина и смесей эфирных масел в отношении активности бактерий.

Trm в отрицательном контроле составляет 11,1 час.

Что же касается тестового образца, состоящего из 84,7% ГМТБК и 15,3% смеси из 3/4 эфирного масла чайного дерева и 1/4 эфирного масла корицы:

- при воздействии ГМТБК достигается Trm, составляющее 15,4 час. Следовательно, ГМТБК проявляет эффект в отношении активности бактерий, если его добавляют отдельно (разница с отрицательным контролем), значение различия: 4,3 час.

- при воздействии СЭМ достигается Trm, составляющее 19,0 час. Следовательно, ЭМ1 проявляет эффект в отношении активности бактерий (разница с отрицательным контролем), величина различия: 7,9 час.

- в свою очередь, смесь (или тестовый образец) дает Trm 25,3 час. Таким образом, смесь 1 проявляет эффект в отношении активности бактерий, превосходящий суммарный эффект СЭМ2 и ГМТБК, взятых в отдельности. А именно (25,3-11,1) больше, чем (4,3+7,9).

Следовательно, указанная смесь проявляет синергический эффект в отношении активности бактерий.

Величина Vf является показателем долгосрочного действия эффекта воздействия.

Цель состоит в том, чтобы свести к минимуму эту величину.

Как наиболее эффективные рассматриваются те образцы, которые минимизируют конечный объем и в то же время максимизируют Trm.

Смесь из данного теста соответствует этим требованиям и, следовательно, может рассматриваться как особенно эффективная.

Пример 5

В примере 1 была продемонстрирована эффективность 5-ти смесей эфирных масел в отношении подавления активности флоры подвздошной кишки животных, получающих кормовой рацион на основе пшеницы.

Цель настоящего теста состоит в том, чтобы доказать, что три из этих смесей обладают подавляющим эффектом в отношении флоры подвздошной кишки цыплят, получающих кормовой рацион на основе кукурузы.

Животные и отбор проб

Условия идентичны приведенным в Примере 1.

Испытания in vitro

Экспериментальная схема для смесей 2, 3, 4 и 5 представлена в Таблице 1.

Результаты

Результаты приведены ниже в Таблице IX.

Таблица IX
Воздействие	Отрицат. контроль	ЭМ2 + ГМТБК	ЭМ3 + ГМТБК	ЭМ4 + ГМТБК	ЭМ5 + ГМТБК
Vf (мл)	Среднее	455	203	201	228	206
Станд. откл.	11,8	8,4	1,5	14,4	13,9
Различие	а	b	b	b	b
Trm (час)	Среднее	17,1	30,1	22,1	28,0	30,3
Станд. откл.	0,68	1,86	1,18	0,63	2,20
Различие	а	d	b	с	d
ЭМ: Эфирное масло или смесь эфирных масел

Приведенные в таблице значения параметров значимо различны с порогом вероятности 5%, если воздействия не имеют совпадающих буквенных обозначений.

Все четыре тестируемых смеси достоверно снижают Vf и достоверно повышают Trm по сравнению с контролем.

Следовательно, эти продукты эффективны в отношении подавления активности флоры подвздошной кишки цыплят, получающих кормовой рацион на основе кукурузы, причем эффект является как краткосрочным, так и долгосрочным, как в случае флоры цыплят, получавших кормовой рацион на основе пшеницы (пример 1). Таким образом, эти смеси эффективны при обоих режимах кормления.

Пример 6

В примерах 1 и 5 была продемонстрирована эффективность пяти смесей эфирных масел в отношении подавления активности флоры, происходящей из подвздошной кишки мясных цыплят. Цель настоящего теста состоит в том, чтобы определить эффективность таких смесей в отношении флоры слепой кишки свиней.

Животные

Свиней выращивали до сотого дня, затем в анаэробных условиях отбирали содержимое их слепой кишки.

Испытания in vitro

Экспериментальная схема для смесей 2, 3 и 4 представлена в Таблице 1.

Результаты

Результаты приведены в Таблице X.

Приведенные в таблице значения параметров значимо различны с порогом вероятности 5%, если воздействия не имеют совпадающих буквенных обозначений.

Таблица X
Воздействие	Отрицат. контроль	ЭМ2 + ГМТБК	ЭМ3 + ГМТБК	ЭМ4 + ГМТБК
Vf (мл)	Среднее	430	265	344	412
	Станд. откл.	48,0	2,5	27,4	17,4
	Различие	ab	d	с	b
Trm (час)	Среднее	21,1	23,9	25,8	25,2
	Станд. откл.	0,36	1,25	2,04	1,30
	Различие	а	bс	с	с
ЭМ: Эфирное масло или смесь эфирных масел

Все тестируемые смеси снижают Vf, достоверно в случаях 2 и 3, со средним значением в случае 4, и значительно повышают Trm по сравнению с контролем. Таким образом, эти смеси эффективны в отношении подавления активности флоры слепой кишки свиней, причем эффект является как краткосрочным, так и долгосрочным.

Следовательно, все три смеси действуют одновременно на флору и цыпленка и свиньи.

Пример 7

Целью настоящего исследования было сравнение эффективности по меньшей мере одного эфирного масла и ГМТБК, когда эти соединения добавляют по отдельности из двух разных сосудов (каждое из соединений представлено в небольшом количестве в 100 мл раствора; таким образом, прямой контакт между молекулами ограничен), либо же если их перемешивают перед добавлением в раствор.

Животные

В настоящем тесте использовали флору подвздошной кишки 35-дневного цыпленка, получавшего кормовой рацион на основе пшеницы.

Испытания in vitro

В этом тесте тестировали смеси, протестированные в примере 1. Экспериментальная схема представлена в Таблице 1 для смеси 2.

Результаты

Результаты приведены в Таблице XI.

Приведенные в таблице значения параметров значимо различны с порогом вероятности 5%, если воздействия не имеют совпадающих буквенных обозначений.

Таблица XI
Воздействие	Отрицат. контроль	ЭМ2 + ГМТБК после перемеш.	ЭМ2+ГМТБК раздельное добавление
Vf (мл)	Среднее	532	184	407
	Станд. откл.	20,4	23,3	24,4
	Различие	а	с	b
Trm (час)	Среднее	14,8	31,3	19,4
	Станд. откл.	0,45	3,31	0,66
	Различие	а	с	а
ЭМ: Эфирное масло или смесь эфирных масел

Эффект ЭМ2 + ГМТБК оказывается значительно сильнее, если оба вещества были перемешаны перед помещением в емкость: предварительный контакт особенно усиливает действие этих соединений на флору. Таким образом, можно полагать, что между этими веществами происходят физико-химические взаимодействия, влияющие на их эффективность. Это подтверждает синергический эффект смеси биологического соединения доступного метионина по меньшей мере с одним эфирным маслом.

Пример 8

Животные

В данном тесте использовали флору подвздошной кишки 35-дневного цыпленка, получавшего кормовой рацион на основе пшеницы.

Тесты in vitro

Экспериментальная схема приведена в Таблице XII ниже.

Таблица XII
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ	Тест. Обр.
Образец	0	ГМТБК	ЭМ	ГМТБК + ЭМ
Повторность	4	3	3	3
Внесенная доза ГМТБК	мг	0	113	0	113
	мас.%	0	100	0	89,7
Внесенная доза ЭМ	мг	0	0	13	13
	мас.%	0	0	100	10,3
Посевной материал (мл)	10	10	10	10
Буферный раствор (мл)	90	90	90	90
ЭМ: масло душицы

Результаты

Результаты приведены ниже в Таблице XIII. Приведенные в таблице значения параметров значимо различны с порогом вероятности 5%, если воздействия не имеют совпадающих буквенных обозначений.

Таблица XIII
Воздействие	Отрицат. контроль	ГМТБК	ЭМ	ЭМ + ГМТБК
Vf (мл)	Среднее	407	353	300	224
	Станд. откл.	45,1	17,7	127,6	1,9
	Различие	а	а	а	а
Trm (час)	Среднее	16,0	16,2	18,3	20,3
	Станд. откл.	1,67	0,71	0,99	0,67
	Различие	а	а	b	с

Когда ее используют в отдельности, ГМТБК не проявляет сколько-нибудь значительного эффекта в отношении процесса брожения, как это наблюдалось в примере 1.

Масло душицы повышает Trm в среднем на 2,3 часа по сравнению с отрицательным контролем (достоверный эффект).

Смесь масла душицы и ГМТБК повышает Trm на 4,3 часа по сравнению с отрицательным контролем. Действие этой смеси на бактериальную флору является синергическим. Масло и ГМТБК, таким образом, действуют синергично, краткосрочно подавляя активность микрофлоры.

Пример 9

Пищевые композиции, используемые в испытаниях in vivo

Таблица XIV
Состав пищевых композиций, используемых в испытаниях in vivo
Ингредиенты	Дни 0-12	Дни 12-28	Дни 28-42	Дни 42-56
Пшеница	45,47	48,49	53,34	57,02
Кукуруза	10,00	10,00	10,00	10,00
Соевая мука (48%СР)	31,19	26,43	21,23	18,24
Экструдированные соевые бобы	5,00	5,00	5,00	5,00
Пальмовое масло	1,60	3,09	3,20	2,95
Соевое масло	2,42	3,00	3,20	2,94
Карбронат кальция	0,85	0,81	0,86	0,87
Фосфат дикальция	2,17	1,88	1,87	1,68
Соль	0,30	0,30	0,30	0,30
Премикс	1,00	1,00	0,67	0,65
Общее количество	100	100	100	100
Характеристика
Белок	22,0	20,0	18,00	17,00
Неочищенный жир	6,65	8,69	9,01	8,54
Метаболическая энергия (ккал/кг)	3000	3150	3200	3200
Лизин	1,38	1,20	1,05	1,00
Метионин	0,56	0,51	0,40	0,38
Метионин + Цистеин	0,93	0,85	0,72	0,69
Кальций	1,00	0,90	0,90	0,85
Доступный фосфор	0,50	0,45	0,45	0,42
Натрий (г/кг)	1,37	1,35	1,34	1,34

Состав эфирных масел в продукте "Neman"

Используемые эфирные масла представляли собой масло гвоздики, корицы и орегано. Основные химические компоненты, отвечающие за эффект состава, таким образом, представляли собой карвакрол, коричный альдегид и эвгленол.

Пример in vivo

Задачей испытания in vivo было определение благоприятного эффекта состава "Neman" (эфирные масла в смеси с 2-гидрокси-1-метилтиобутановой кислотой - ГМТБК) в отношении показателей роста в сравнении с отрицательным контролем (только ГМТБК) и положительным контролем (ГМТБК и антибиотик - стимулятор роста, бацитрацин). Данное исследование поводили согласно полностью рандомизированному плану по следующей схеме:

3 курса введения × 10 повторений × 15 бройлеров в каждом случае.

Птиц содержали на стандартной диете на основе пшеницы-кукурузы-соевой муки в течение 56 дней согласно следующим четырем фазам (Таблица XV).

Таблица XV
Состав корма в зависимости от фазы роста
Основной состав корма	Дни 0-12	Дни 12-28	Дни 28-42	Дни 42-56
Мука	45,47	48,49	53,34	57,02
Кукуруза	10,00	10,00	10,00	10,00
Соевая мука (48)	31,19	26,43	21,23	18,24
Экструдированные соевые бобы	5,00	5,00	5,00	5,00
Пальмовое масло	1,60	3,09	3,20	2,95
Соевое масло	2,42	3,00	3,20	2,94
Карбонат кальция	0,85	0,81	0,86	0,87
Фосфат дикальция	2,17	1,88	1,87	1,68
Соль	0,30	0,30	0,30	0,30
Премикс	1,00	1,00	0,67	0,65
Содержит L-Лизин НС198	0,30	0,22	0,20	0,23
Родимет АТ88	0,27	0,24	0,13	0,12
Общее количество	100	100	100	100
Характеристики питательных веществ (%)
Неочищенный белок	22,0	20,0	18,00	17,00
Жир	6,65	8,69	9,01	8,54
Метаболическая энергия (ккал/кг)	3000	3150	3200	3200
Общее количество лизина	1,38	1,20	1,05	1,00
Общее количество метионина	0,56	0,51	0,40	0,38
Метионин + Цистеин	0,93	0,85	0,72	0,69
Общее количество кальция	1,00	0,90	0,90	0,85
Доступный фосфор	0,50	0,45	0,45	0,42
Натрий (г/кг)	1,37	1,35	1,34	1,34

Три типа диеты применяли в течение разных фаз роста, как показано в Таблице XVI. Диета 1 представляет собой контрольную диету, представленную в Таблице XV. Диета 2 представляет собой контрольную диету + антибиотик-стимулятор роста (бацитрацин) в количестве 333 ppm в течение периода 0-12 дней и 167 ppm в течение периода 13-42 дня. Антибиотик удаляли в течение конечного периода 43-56 дней, так же как это осуществляют в полевых условиях. Диета 3 представляет собой экспериментальную диету, основанную на контрольной диете в течение периода 0-28 дней, куда после 28-го дня добавляют состав Neman (контрольная диета + премикс, состоящий из ГМТБК и эфирного масла, в количестве 100 г на одну тонну корма). Использовали эфирные масла гвоздики, корицы и орегано. Таким образом, основные компоненты, отвечающие за эффект состава, представляют собой карвакрол, коричный альдегид и эвгленол.

Содержание метионина в курсе диеты 3 варьировали для достижения одинакового содержания метионина во всех курсах диеты.

Таблица XVI
Курсы диеты в разные периоды времени
Период (Дни)	Диета 1 (Отрицат. контроль)	Диета 2 (Отрицат. контроль)	Диета 3 (Отрицат. контроль)
0-12	Контроль	Контроль + Бацитрацин	Контроль
13-28	Контроль	Контроль + Бацитрацин	Контроль
29-42	Контроль	Контроль + Бацитрацин	Контроль + (ГМТБК+ЭМ)
43-56	Контроль	Контроль	Контроль + (ГМТБК+ЭМ)
ЭМ: эфирные масла

Результаты

Результаты, полученные в течение 56 дней кормления животных, суммированы в Таблице XVII

Таблица XVII
Показатели роста в зависимости от типа курса диеты и периода кормления. Разные буквенные обозначения в одном ряду указывают на значимое различие (Р<0.05) между курсами диет
	Диета 1	Диета 2	Диета 3
Период 0-28 дней
Прибавка в весе (г)	Средн.	1409	1452	1449
С.О.	40,9	50,3	61,9
Прибавка в весе (г)	Средн.	2109	2105	2166
С.О.	49,8	93,7	130,0
Коэффициент превращения пищи (г/г)	Средн.	1,497	1,450	1,494
С.О.	0,0509	0,0544	0,0539
Период 0-35 дней
Прибавка в весе	Средн.	1951	1981	1987
С.О.	25,5	91,9	76,5
Потребление	Соедн.	3131	3106	3177
С.О.	68,8	118,5	113,6
Коэффициент	Средн.	1,605	1,570	1,599
С.О.	0,0366	0,0648	0,0493
Период 0-42 дней
Прибавка в весе	Средн.	2595	2642	2664
С.О.	93,0	104,8	121,5
Потребление	Средн.	4465	4437	4514
С.О.	126,4	117,5	173,8
Коэффициент	Средн.	1,721	1,681	1,695
С.О.	0,0399	0,0716	0,0448
Период 0-49 дней
Прибавка в весе	Средн.	3241b	3273ab	3361а
С.О.	77,4	132,2	173,3
Потребление	Средн.	6003	5864	6037
С.О.	198,7	314,4	209,6
Коэффициент	Средн.	1,852	1,792	1,798
С.О.	0,0443	0,0771	0,0644
Период 0-56 дней
Прибавка в весе	Средн.	3715b	3729ab	3900а
	С.О.	134,2	204,7	165,0
Потребление	Средн.	7389	7236	7463
	С.О.	207,6	370,5	271,2
Коэффициент	Средн.	1,990а	1,942ab	1,915b
	С.О.	0,0706	0,0655	0,0611

В ходе стартового периода и периода роста (0-42 дня) в курсах диеты не было отмечено значимых различий эффекта. Однако даже несмотря на то что различия не достигли уровня значимости, в случае Диеты 2 и 3 наблюдалось численное увеличение прибавки веса, соответственно 47 и 69 г по сравнению с Контрольной диетой 1.

В течение периода 0-49 дней в случае Диеты 3, включающей премикс ГМТБК + эфирное масло, наблюдалось значимое увеличение прибавки веса по сравнению с контрольной диетой (+120 г) при отсутствии значимого эффекта в отношении потребления пищи, что приводило, таким образом, к уменьшению коэффициента превращения пищи (коэффициент превращения пищи: -2,9%, не значимо). Показатели птиц, которых держали на Диете 2, оказались промежуточными в отношении набора веса и похожими на результаты, полученные в случае Диеты 3, в отношении коэффициента превращения пищи.

Было показано, что в течение всего периода 0-49 дней Диета 3, включающая премикс ГМБТК + эфирные масла, позволяет достигать значительного улучшения роста по сравнению с Диетой 1 и Диетой 2 - увеличение прибавки веса составляет соответственно 185 и 171 г. Данное улучшение роста сопровождается улучшением коэффициента превращения пищи в сравнении с Диетой 1 на 3,8%. Диета 2 (антибиотик - стимулятор роста) показала промежуточные результаты между Диетой 1 и Диетой 3 в отношении коэффициента превращения пищи.

Выводы

Премикс ГМТБК + эфирные масла, добавленный к стандартной диете, основанной на муке, кукурузе и соевых бобах, позволил достичь улучшения роста в течение периода 0-56 дней. Этот эффект наблюдается вместе с улучшением коэффициента превращения пищи, что позволяет предполагать значимый эффект состава ГМБТК + эфирные масла в отношении эффективности кормления. Антимикробный эффект данного продукта, продемонстрированный ранее in vitro, приводит к снижению конкуренции за питательные вещества между микроорганизмами и организмом-хозяином, что значительно улучшает показатели жизнедеятельности птиц. Более того, за счет антимикробного эффекта, уменьшающего бактериальную нагрузку на кишечник, состав может также снижать воспалительный статус птиц, а следовательно, улучшать показатели роста по сравнению с Диетой 1 (контроль, содержащий только ГМТБК).

С учетом данных результатов можно заключить, что премикс ГМТБК + эфирное масло при добавлении к стандартной диете улучшает параметры роста.