применение анилинопиримидинов для защиты древесины

Формула изобретения

1. Способ защиты древесины или изделий из древесины от грибков, вызывающих разрушение или обесцвечивание древесины, включающий обработку указанной древесины или изделия из древесины фунгицидной композицией, содержащей в качестве единственного фунгицидного активного ингредиента эффективное количество анилинопиримидина формулы (I), или его аддитивная соль неорганической кислоты



в которой R представляет собой метил, циклопропил или пропин-1, или один или несколько носителей.

2. Способ по п.1, в котором анилинопиримидином формулы (I) является ципродинил.

3. Способ по п.1, в котором анилинопиримидином формулы (I) является пириметанил.

4. Способ по п.1, в котором анилинопиримидином формулы (I) является мепанипирим.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к применению анилинопиримидинов - пириметанила, ципродинила и мепанипирима - для защиты древесины и древесных материалов от грибков, вызывающих разрушение и обесцвечивание древесины.

Анилинопиримидины имеют следующую общую формулу (I):

в которой R представляет собой метил, циклопропил или пропин-1-ил.

Первый анилинопиримидин формулы (I) является соединением формулы (I), в которой R является метильной группой. Такое соединение представляет собой 4,6-диметил-N-фенил-2-пиримидинамин, который известен также как «пириметанил». Пириметанил был первоначально описан в заявке на патент ГДР DD-151404 в качестве соединения (1), обладающего фунгицидной активностью по отношению к фитопатогенным грибкам. Он обладает защитной и излечивающей фунгицидной активностью и используется для противодействия серой гнили вин, фруктов, овощей и декоративных растений.

Второй анилинопиримидин формулы (I) является соединением формулы (I), в которой R является циклопропильной группой. Такое соединение представляет собой 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-2-пиримидинамин, который известен также как «ципродинил». Ципродинил первоначально описан в патенте EP-0310550 в качестве соединения (1.1), обладающего активностью по отношению к фитопатогенным грибкам.

Третий анилинопиримидин формулы (I) является соединением формулы (I), в которой R является пропин-1-ильной группой. Такое соединение представляет собой 4-метил-6-(проп-1-инил)-N-фенил-2-пиримидинамин, который известен также как «мепанипирим». Формы солей мепанипирима были первоначально раскрыты в патенте EP-0224339 в качестве соединений (41), (42) и (43), обладающих фунгицидной активностью по отношению к фитопатогенным грибкам.

В патенте US-5508283 раскрываются смеси, содержашие анилинопиримидины формулы (I) и производных эфира -(метоксиимино)бензолуксусной кислоты в количествах, обеспечивающих синергическое действие. Эти синергические смеси применимы для противодействия фитопатогенным грибкам. Кроме того, упоминается их использование для защиты материалов (например, для защиты древесины), однако данные о таком их использовании представлены не были. Активные ингредиенты, а именно производные эфира -(метоксиимино)бензолуксусной кислоты и анилинопиримидины формулы (I), тем не менее, должны быть использованы в комбинации одних с другими: совместно, или по отдельности, или последовательно, при этом очередность - в случае раздельного использования - не влияет на конечный результат (см. колонку 4, строчки 14-17 патента US-5508283). Следовательно, фунгицидное действие смесей согласно патенту US-5508283 всегда связано с комбинированным использованием указанных активных ингредиентов.

В патенте US-6156760 раскрыты фунгицидные смеси, содержащие три активных ингредиента, являющихся оксимом, карбаматом и анилинопиримидином формулы (I) в синергических количествах. Эти синергические смеси применимы для противодействия фитопатогенным грибкам. Кроме того, упоминается их использование для защиты материалов (например, для защиты древесины), однако данные о таком их использовании представлены не были. Активные ингредиенты, а именно оксим, карбамат и анилинопиримидин формулы (I), тем не менее, должны быть использованы в комбинации одних с другими: совместно, или по отдельности, или последовательно, при этом очередность - в случае раздельного использования - не влияет на конечный результат (см. колонку 5, строчки 31-34 патента US-6156760). Следовательно, фунгицидное действие смесей согласно патенту US-6156760 всегда связано с комбинированным использованием указанных активных ингредиентов.

В статье Tjamos et al. в Journal of Phytopathology (2004), 152(4), 250-255, описан эффект использования фунгицидов - карбендазима, Chorus® и Switch® для борьбы химическим способом с заражением виноградников Aspergillus niger и A. carbonarius. Было продемонстрировано, что препарат Switch® (комбинация фунгицидов флудиоксонила и ципродинила) был в состоянии противодействовать Aspergillus spp. в противоположность карбендазиму и Chorus® (ципродинил в качестве единственного фунгицидного ингредиента), которые были неэффективными. Авторами статьи (Tjamos et al.) сделан вывод, что эффективность Switch® обусловлена флудиоксонилом.

В настоящее время установлено, что анилинопиримидины формулы (I) обладают фунгицидной активностью по отношению к грибкам, вызывающим обесцвечивание древесины и разрушение древесины, при использовании в качестве единственного ингредиента, активного в фингицидном отношении.

Анилинопиримидины формулы (I) могут присутствовать в их свободной основной форме или в форме соли неорганической кислоты, которая может быть получена реакционным взаимодействием свободной основной формы с соответствующей неорганической кислотой. Подходящие неорганические кислоты включают в себя, например, галогеноводородные кислоты, т.е. фтористоводородную, хлористоводородную, бромистоводородную и иодистоводородную кислоты; серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п.

Термин «соль неорганической кислоты», использованный здесь выше, также включает в себя сольваты, которые в состоянии образовывать анилинопиримидины формулы (I). Примерами таких сольватов являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п.

Анилинопиримидины формулы (I) и их соли неорганической кислоты применимы для предотвращения, контроля или устранения роста грибков на предметах, изготовленных из древесины. Термин «защита», использованный в данном описании, означает выполнение указанных действий, таких как предотвращение, контроль или устранение роста грибков. Термины «древесина», «древесный материал» и «изделия из древесины», как они использованы здесь, означают все формы древесины, например цельную древесину (такую как брус или пиломатериалы в виде бревен, балок, теса, досок или панелей), древесные композиционные материалы (такие как древесно-волокнистые плиты и древесно-стружечные плиты) и все изделия, изготовленные из древесины или древесных композиционных материалов (такие как материалы для каркасов, настилов, обшивки, наружной облицовки, кровельные материалы, столбы и железнодорожные шпалы).

Защита или предохранение древесины и древесных материалов от окрашивания, обесцвечивания и разрушения грибками, вызывающими обесцвечивание древесины или ее разрушение, означает, что они должны быть защищены, например, от плесневения, гниения, потери ими полезных механических свойств, таких как прочность на разрыв, устойчивость к ударам или прочность на сдвиг, или ухудшения их оптических или других полезных свойств вследствие возникновения запаха, окрашивания и образования пятен. Эти явления обусловлены рядом грибков, вызывающих обесцвечивание древесины или ее разрушение, типичными примерами которых являются следующие:

Грибки, обесцвечивающие древесину:

1: Аскомицеты (Ascomycetes): Ceratocystis, например Ceratocystis minor;

Aureobasidium, например Aureobasidium pullulans;

Sclerophoma, например Sclerophoma pithyophila;

Cladosporium, например Cladosporium herbarum;

2: Грибы несовершенные (Deuteromycetes): Fungi imperfecti;

Aspergillus, например Aspergillus niger;

Dactylium, например Dactylium fusarioides;

Penicillium, например P. brevicaule, P. variabile, P. funiculosum или P. glaucum;

Scopularia, например Scopularia phycomyces; и

Trichoderma, например Trichoderma viride или Trichoderma lignorum.

3: Зигомицеты (Zygomycetes): Mucor, например Mucor spinorus.

Грибки, разрушающие древесину:

1: Грибки, вызывающие мягкую гниль: Chaetomium, например Ch. globosum или Ch. alba-arenulum;

Humicola, например Humicola grisea;

Petriella, например Petriella setifera; и

Trichurus, например Trichurus spiralis.

2: Грибки, вызывающие белую и бурую гниль:

Coniophora, например Coniophora puteana;

Coriolus, например Coriolus versicolor;

Donkioporia, например Donkioporia expansa;

Glenospora, например Glenospora graphii;

Gloeophyllum, например Gl. abietinum, Gl. adoratum, Gl. protactum, Gl. sepiarium или Gl. trabeum;

Lentinus, например L. cyathiformes, L. edodes, L. lepideus, L. grinus или L. squarrolosus;

Paxillus, например Paxillus panuoides;

Pleurotus, например Pleurotis ostreatus;

Poria, например P. monticola, P. placenta, P. vaillantii или P. vaporaria;

Serpula (Merulius), например Serpula himantoides или Serpula lacrymans;

Stereum, например Stereum hirsutum;

Trychophyton, например Trychophyton mentagrophytes; и

Tyromyces, например Tyromyces palustris.

Данное изобретение также предоставляет использование фунгицидных композиций, содержащих анилинопиримидин формулы (I) или его соль неорганической кислоты и один или несколько подходящих носителей, для защиты древесины и древесных материалов от грибков, вызывающих разрушение и обесцвечивание древесины.

Количество анилинопиримидина формулы (I) в фунгицидных композициях должно быть таким, чтобы обеспечить эффективное фунгицидное действие против грибков, вызывающих разрушение или обесцвечивание древесины. В частности, предполагается, что готовые к использованию фунгицидные композиции по данному изобретению содержат анилинопиримидин формулы (I) в интервале от 50 до 5000 млн^-1 (по массе на объем), в частности от 100 до 3000 млн^-1 (по массе на объем). Во многих случаях такие фунгицидные композиции, подлежащие использованию непосредственным образом, которые также известны как готовые к использованию композиции, могут быть получены из концентратов, таких как, например, эмульгируемые концентраты, суспензионные концентраты или растворимые концентраты, разбавлением их водными или органическими средами; предполагается, что такие концентраты относятся к композициям в том смысле, как этот термин использован в определениях данного изобретения. Такие концентраты могут быть разбавлены для получения смеси, готовой к использованию, в резервуаре незадолго до использования.

Упоминаемый выше эмульгируемый концентрат представляет собой жидкую гомогенную композицию, содержащую анилинопиримидин формулы (I), подлежащую нанесению в виде эмульсии после разбавления водой. Суспензионный концентрат представляет собой стабильную суспензию, содержащую анилинопиримидин формулы (I), в жидкости, подлежащей разбавлению водой перед использованием. Растворимый концентрат представляет собой жидкую гомогенную композицию, подлежащую применению в виде истинного раствора активных ингредиентов после разбавления водой.

Подходящими носителями для использования в фунгицидных композициях, содержащих анилинопиримидин формулы (I), являются любые материалы или вещества, с которыми образуют смесь указанные анилинопиримидины формулы (I) для облегчения их нанесения на древесину или древесный материал, подлежащий обработке и/или для облегчения хранения и транспортировки фунгицидных композиций или обращения с ними без снижения их противогрибковой эффективности. Такие подходящие носители могут быть любой жидкостью или твердым материалом и соответствуют пригодным для этого веществам, известным в области изготовления составов.

Растворителями, пригодными для использования в качестве носителей, являются ароматические углеводороды, предпочтительно их фракции с 8-12 атомами углерода, например диметилбензоловые смеси или замещенные нафталины, фталаты, такие как дибутилфталат или диоктилфталат, алифатические или алициклические углеводороды, такие как циклогексан или парафины, спирты и гликоли и их простые и сложные эфиры, такие как этанол, этиленгликоль, монометиловый или моноэтиловый эфиры этиленгликоля, кетоны, такие как циклогексанон, сильнополярные растворители, такие как N-метил-2-пирролидон, диметилсульфоксид или диметилформамид, а также растительные масла или эпоксидированные растительные масла, такие как эпоксидированное кокосовое масло или соевое масло; или вода.

Подходящими твердотельными носителями, используемыми, например, для дустов и диспергируемых порошков, являются обычно натуральные минеральные наполнители, такие как кальцит, тальк, каолин, монтмориллонит или аттапульгит. Для улучшения физических свойств также возможно добавление высокодисперсной кремниевой кислоты или высокодисперсных полимерных абсорбентов. Подходящими гранулированными носителями-абсорбентами являются пористые носители, например пемза, кирпичная крошка, сепиолит или бентонит; а подходящими несорбирующими носителями являются такие материалы, как кальцит или песок. Кроме того, может быть использовано большое число предварительно гранулированных неорганических или органических материалов, главным образом, например, доломит или порошкообразные растительные остатки.

Фунгицидные композиции, содержащие анилинопиримидин формулы (I) или его соль неорганической кислоты и один или несколько подходящих носителей, для применения при защите древесины и древесных материалов от грибков, вызывающих разрушение и обесцвечивание древесины, могут опционально содержать одно или несколько вспомогательных средств, таких как диспергаторы, поверхностно-активные вещества, увлажняющие добавки, адгезивы, загустители, связующие, удобрения, противоморозные добавки, репелленты, окрашивающие добавки, ингибиторы коррозии, гидрофобные добавки, сиккативы или УФ-стабилизаторы.

Поверхностно-активными соединениями, подходящими для использования в фунгицидных композициях, содержащих анилинопиримидин формулы (I), являются неионогенные, катионогенные и/или анионогенные поверхностно-активные вещества с хорошими эмульгирующими, диспергирующими и увлажняющими свойствами. Термин «поверхностно-активные вещества» здесь также включает в себя смеси поверхностно-активных веществ.

Подходящими анионогенными поверхностно-активными веществами могут являться как водорастворимые мыла, так и водорастворимые синтетические поверхностно-активные соединения.

Подходящими мылами являются соли щелочных металлов, соли щелочноземельных металлов или соли незамещенного или замещенного аммония и высших жирных кислот (C₁₀-C₂₂), например натриевые или калиевые соли олеиновой или стеариновой кислоты или смесей натуральных жирных кислот, которые могут быть получены, например, из кокосового масла или таллового масла. Кроме того, здесь могут быть также упомянуты соли метилтаурина и жирных кислот.

Более часто, однако, используют так называемые синтетические поверхностно-активные вещества, главным образом сульфонаты жирных кислот, сульфаты жирных кислот, сульфонированные производные бензимидазола или алкиларилсульфонаты. Сульфонаты или сульфаты жирных кислот обычно находятся в виде солей щелочного металла, солей щелочноземельного металла или солей незамещенного или замещенного аммония и содержат алкильный радикал с 8-22 атомами углерода; указанный алкил также содержит радикалы, являющиеся производными ацильных радикалов; например, это натриевая или кальциевая соль лигносульфоновой кислоты, додецилсульфат или смесь сульфатов жирных спиртов, полученная из натуральных жирных кислот. Эти соединения также включают в себя соли эфиров серной кислоты и сульфоновые кислоты продуктов присоединения жирных спиртов/этиленоксида. Сульфонированные производные бензимидазола предпочтительно содержат 2 группы сульфоновой кислоты и один радикал жирной кислоты, содержащий 8-22 атомов углерода. Примерами алкиларилсульфонатов являются соли натрия, калия или триэтаноламина и додецилбензолсульфоновой кислоты, дибутилнафталинсульфоновой кислоты или продукта реакции конденсации нафталинсульфоновой кислоты/формальдегида. Также подходят соответствующие фосфаты, например соли эфира фосфорной кислоты и продукта присоединения п-нонилфенола и 4-14 молей этиленоксида, или фосфолипиды.

Неионогенные поверхностно-активные вещества являются предпочтительно производными полигликолевого эфира алифатических или циклоалифатических спиртов или насыщенных или ненасыщенных жирных кислот и алкилфенолов; указанные производные содержат 3-10 групп гликолевого эфира и 8-20 атомов углерода в составляющей (алифатического) углеводорода и 6-18 атомов углерода в алкильной составляющей алкилфенолов.

Другими подходящими неионогенными поверхностно-активными веществами являются водорастворимые продукты присоединения полиэтиленоксида и полипропиленгликоля, этилендиаминополипропиленгликоля, содержащие 1-10 атомов углерода в алкильной молекулярной цепочке; такие продукты присоединения содержат 20-250 групп этиленгликольэфира и 10-100 групп пропиленгликольэфира. Эти соединения обычно содержат 1-5 звеньев этиленгликоля на звено пропиленгликоля.

Типичными примерами неионогенных поверхностно-активных веществ являются нонилфенолполиэтоксиэтанолы, полигликолевые эфиры касторового масла, продукты присоединения полипропилена/полиэтиленоксида, трибутилфеноксиполиэтоксиэтанол, полиэтиленгликоль и октилфеноксиполиэтоксиэтанол. Эфиры жирных кислот и полиэтиленсорбита, такие как полиоксиэтиленсорбиттриолеат, также являются пригодными неионогенными поверхностно-активными веществами.

Фунгицидные композиции, содержащие анилинопиримидин формулы (I) или его соль неорганической кислоты и один или несколько подходящих носителей, для использования при защите древесины и древесных материалов от грибков, вызывающих разрушение и обесцвечивание древесины, могут содержать анилинопиримидины формулы (I) в качестве единственного фунгицидного активного ингредиента. Однако эти фунгицидные композиции могут опционально содержать один или несколько дополнительных активных ингредиентов, таких как фунгициды, бактерициды, акарициды, нематоциды или инсектициды, в особенности фунгициды или инсектициды, например, для расширения спектра действия или для предотвращения увеличения противодействия.

В качестве других активных ингредиентов, которые могут быть использованы в комбинации с анилинопиримидинами по данному изобретению, могут рассматриваться продукты, относящиеся к следующим классам.

Фунгициды:

2-амнобутан, 2,6-дихлор-N-(4-трифторметилбензол)бензамид, 8-гидроксихинолин сульфат, 2-фенил-фенол (OPP), алдиморф, ампропилфос, анилазин, беналаксил, беноданил, беномил, бинапакрил, бифенил, битертанол, бластицидин-S, бупиримат, бутиобат, полисульфид кальция, каптафол, каптан, карбендазим, карбоксин, хинометионат, хлоронеб, хлорпикрин, хлорталонил, хлозолинат, куфранеб, цимоксанил, ципрофурам, дихлорофен, диклобутразол, диклофлуанид, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, диметиримол, диметоморф, динокап, дифениламин, дипиритион, диталимфос, дитианон, додин, дразоксолон, эдифенфос, этиримол, фенаримол, фенфурам, фенитропан, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропидиморф, фентин ацетат, фентин гидроксид, фербам, феримзонфлуазинам, флудиоксонил, фторомид, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фозетил-аммоний, фталид, фуралаксил, фурмециклокс, гуазатин, гексахлорбензол, химексазол, имазалил, иминоктадин, ипробенфос (IBP), ипродион, изопротиолан, касугамицин, препараты меди, такие как гидроксид меди, нафтенат меди, хлороксид меди, сульфат меди, оксид меди, оксин-медь и бордосская жидкость, этиленбисдитиокарбамат меди-марганца (mancopper), манкоцеб, манеб, мефеноксам, мепронил, металаксил, метасульфокарб, метфуроксам, метирам, метсульфовакс, миклобутанил, диметилдитиокарбамат никеля, нитротализопропил, нуаримол, офурас, оксадиксил, оксамокарб, оксикарбоксин, пефуразоат, пенсукурон, фосдифен, пимарицин, пипералин, полиоксин, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропинеб, пиразофос, пирифенокс, пироквилон, пентахлорнитробензол (PCNB), сера и серные препараты, теклофталам, текназин, тиабендазол, тициофен, тиофанатметил, тирам, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триазоксид, трихламид, тридеморф, трифлумизол, трифорин, валидамицин A, винклозолин, цинеб, цирам; производные изотиа- и бензизотиазолона, такие как, например, 1,2-бензизотиазолон (BIT); оксатиазины, такие как бетоксазин (т.е. 3-(бензо[b]тиен-2-ил)-5,6-дигидро-1,4,2-оксатиазин, 4-оксид); стробилурины, такие как азоксистробин, димоксистробин, флуоксастробин, метоминостробин, пираклостробин, крезоксим-метил, трифлоксистробин и пикоксистробин; триазолы, такие как азаконазол, бромуконазол, ципроконазол, дифеноконазол, диниколазол, эпоксиконазол, фенбуконазол, флуквинконазол, флусилазол, гексаконазол, кетоконазол, метконазол, пенконазол, пропиконазол, протиоконазол, симеконазол, тебуконазол, тетраконазол и тритиконазол.

Бактерициды:

бронопол, дихлорофен, нитрапирин, диметилдитиокарбамат никеля, касугамицин, октилинон, фуранкарбновая кислота, окситетрациклин, стрептомицин, теклофталам, сульфат меди и другие препараты меди.

Инсектициды/Акарициды/Нематициды:

абамектин, ацефат, ацетамиприд, акринатрин, аланикарб, алдикарб, альфаметрин, амитраз, AZ 60541, азадирахтин, азинфос A, азинфос M, азоциклотин, Bacillus thuringiensis, бендиокарб, бенфуракарб, бенсультап, бета-цифлутрин, бифентрин, BPMC, брофенпрокс, бромофос A, буфенкарб, бупрофезин, бутокарбоксин, бутилпирадабен, кадузафос, карбарил, карбофуран, карбофенотион, карбосульфан, картап, CGA 157 419, хлоэтокарб, хлорэтоксифос, хлорфенвинфос, хлорфлуазурон, хлормефос, хлофенапир, хлорпирифос, хлорпирифос M, цис-ресметрин, клоцитрин, клофентезин, цианофос, циклопротрин, цифлутрин, цигалотрин, цигексатин, циперметрин, циромазин, дельтаметрин, деметон-M, деметон-S, деметон-S-метил, диафентиурон, диазинон, дихлофентион, дихлорвос, диклифос, дикротофос, диэтион, дифлубензурон, диметоат, диметилвинфос, диоксатион, дисульфотон, эдифенфос, эмамектин опционально в виде бензоата, эсфенвалерат, этиофенкарб, этион, этипрол, этофенпрокс, этопрофос, этримфос, фенамифос, феназаквин, фенбутадин оксид, фенитротион, фенобукарб, фенотиокарб, феноксикарб, фенпропатрин, фенпирад, фенпироксимат, фентион, фенвалерат, фипронил, флуазинам, флуциклоксурон, флуцитринат, флуфеноксурон, флуфенпрокс, флувалинат, фонофос, формотион, фостиазат, фубфенпрокс, фуратиокарб, гамма-цигалотрин, HCH, гептенофос, гексафлумурон, гекситиазокс, имидаклоприд, ипробенфос, изазофос, изофенфос, изопрокарб, изоксатион, ивемектин, лямбда-цигалотрин, линдан, луфенурон, малатион, мекарбам, мервинфос, месульфенфос, метальдегид, метакрифос, метамидофос, метидатион, метиокарб, метомил, метолкарб, милбемектин, монокротофос, моксидектин, налед, NC 184, нитенпирам, ометоат, оксамил, оксидеметон M, оксидепрофос, паратион A, паратион M, перметрин, фентоат, форат, фозалон, фосмет, фосфамдон, фоксим, пиримикарб, пиримифос M, пиримифос A, профенофос, промекарб, пропафос, пропоксур, протиофос, протоат, пиметрозин, пирахлофос, пиридафентион, пиресметрин, пиретрум, пиридабен, пиримидифен, пирипроксифен, квиналфос, салитион, себуфос, силафлуофен, сульфотеп, сульпрофос, тебуфенозид, тебуфенпирад, тебупиримифос, тефлубензурон, тефлутрин, темефос, тербам, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиафенокс, тиаметоксам, тиодикарб, тиофанокс, тиометон, тионазин, турингиензин, тралометрин, триаратен, триазофос, триазурон, трихлорфон, трифлумурон, триметакарб, вамидотион, XMC, ксилилкарб, зетаметрин.

Для защиты древесины или изделий из нее от грибков, вызывающих разрушение или обесцвечивание древесины, проводили обработку древесины или изделий из нее фунгицидной композицией, содержащей анилинопиримидин формулы (I). Такую обработку выполняли посредством нескольких разных методик, таких как, например, обработка древесины в закрытых системах, находящихся под повышенным давлением или при разрежении, в системах термической обработки или обработки погружением или же посредством широкого спектра методик обработки поверхности, например обрызгиванием, распылением, опылением, рассеиванием, окрашиванием, разливанием, нанесением кистью, окунанием, вымачиванием или импрегнированием древесины или изделий из древесины композицией или эмульсией, содержащей анилинопиримидин формулы (I).

Экспериментальная часть

Эксперимент 1: испытание с тест-планшетом

Активность против роста грибков определяли с помощью тест-планшета. Рассчитанное количество исходного раствора (содержащего пириметанил, ципродинил или мепанипирим в концентрации 4000 млн ^-1 в диметилсульфоксиде) отмеривали пипеткой в многолуночный планшет для того, чтобы получить конечную тестовую концентрацию в интервале от 0,6 до 20 млн^-1, и смешивали с теплой питательной средой. Этими питательными средами являлись глюкозный агар (GA) (10 г глюкозы, 1,5 г K₂HPO₄, 2 г KH₂PO₄, 1 г (NH₄)₂ SO₄, 0,5g MgSO₄ и 12,5 г агара в 1 литре деионизованной воды); желатиновый глюкозный агар (GGA) (4 г желатина, 4 г глюкозы, 1,75 г KH₂PO₄, 0,75 г MgSO ₄ и 10 г агара в 1 литре деионизованной воды); или агар Чапека-Докса (CDA) (30 г сахарозы, 3 г NaNO₃, 1 г K₂HPO₄, 0,5 г MgSO₄·7H ₂O, 0,5 г KCl, 0,01 г FeSO₄·7H₂ O и 15 г агара в 1 литре деионизованной воды). Данную среду инокулировали 2 мкл суспензии спор/мицелия. 24-луночные планшеты выдерживали в темноте при температуре 22°C и относительной влажности 75% и оценивали рост грибков через одну неделю.

В испытаниях с тест-планшетом были использованы следующие виды грибков: Aureobasidium pullulans P 268 (Ap1); Aspergillus niger CBS 554.65 (An); Chaetomium globosum CEB 1218.2 (Cg); и Humicola grisea MG 28 (Hg).

Наименьшая концентрация каждого из испытуемых соединений или смеси испытуемых соединений, достаточная для подавления видимого роста грибков, принималась в качестве минимальной ингибирующей концентрации (MIC). Для случаев, когда не наблюдалось роста грибков, в Таблице 1 использована аббревиатура «нр».

Таблица 1 Минимальная ингибирующая концентрация в млн -1 ципродинила, пириметанила и мепанипирима для четырех грибков, вызывающих деградацию древесины в трех разных средах
Тестируемое соединение	Среда	Ap1	An	Cg	Hg
ципродинил	GA	10	<0,6	нр	10
	GGA	5	<0,6	нр	20
	CDA	5	<0,6	нр	10
пириметанил	GA	20	<0,6	нр	>20
	GGA	20	20	нр	>20
	CDA	20	<0,6	нр	>20
мепанипирим	GA	20	<0,6	нр	20
	GGA	20	<0,6	нр	20
	CDA	10	<0,6	нр	10

Эксперимент 2: испытание на плитках

Модель испытания: Испытание на плитках из древесины

Растворитель: этанол

Порода древесины: Шотландская сосна (Pinus sylvestris); 526 кг/м ³

Размеры образцов древесины: 24×12×2 мм

Обработка: 250 мкл/плитку

Сушка: выдержка в течение ночи в стерильной камере с ламинарным потоком воздуха

Стерилизация: нет

Вид грибков: Базидиомицеты (Basidiomycetes):

1. Coriolus versicolor CTB 863A

2. Coniophora puteana BAM 15

Грибки синей гнили:

3. Aureobasidium pullulans P 268

4. Cladosporium cladosporioides IHEM 3795

Плесневые грибки:

5. Aspergillus niger CBS 554.65

6. Trichoderma viride CBS 189.79

7. Trichoderma sp. изол. MB тест

Грибки, вызывающие мягкую гниль:

8. Chaetomium globosum ATCC 6205

9. Humicola grisea MG 28

Концентрации тестовых растворов: 50-100-200-400-800-1600-3200-6400 млн^-1

Инокулят: Базидиомицеты (грибки 1-2) с кусочком агара (4 мм²) из запаса активно растущей колонии. Все другие грибки - с 15 мкл суспензии спор/мицелия

Питательная среда: Картофельный агар с декстрозой (PDA): 4 г экстракта картофеля, 20 г бактодекстрозы и 15 г бактоагара в 1 литре деионизованной воды

Глюкозный агар (GA): 10 г глюкозы, 1,5 г K₂HPO₄, 2 г KH ₂PO₄, 1 г (NH₄)₂SO ₄, 0,5 г MgSO₄ и 12,5 г агара в 1 литре деионизованной воды

Условия культивирования: 22°C и 70% относительной влажности

Период выдерживания: 3 недели выдерживания

Проверка пригодности: Полное покрытие контрольных образцов всеми грибками.

Модель испытания: В каждой чашке Петри (диаметр 5 см) размещали по одному испытательному образцу на предварительно инокулированной питательной среде. Инокулят был размещен в двух местах в стороне от плитки и в одном месте с ее верхней стороны. После инкубационного периода поверхность оценивали при использовании следующей системы показателей:

0: на плитках отсутствует рост грибков

1: следы роста грибков на плитках

2: небольшой рост грибков (покрыто от 5 до 25% поверхности)

3: умеренный рост грибков (покрыто от 25 до 50%)

4: рост грибков от значительного до максимального (более 50%).

Пороговые величины в этом эксперименте определялись между концентрацией с показателем 1 и концентрацией с показателем >1.

Пороговые величины в данном эксперименте определялись как концентрация в интервале между наибольшей концентрацией с показателем >1 и наименьшей концентрацией с показателем 1. Среда GA при этом была использована как менее богатая питательными веществами альтернатива PDA с тем, чтобы предотвратить отклонение от специфического действия анилинопиримидинов, таких как ципродинил, пириметанил и мепанипирим, на испытываемые грибки.

Таблица 2 Пороговые величины в млн-1 трех анилинопиримидиновых соединений при испытании на плитках для двух разных питательных сред
Соединение	пириметанил	ципродинил	мепанипирим
Среда:	PDA	GA	PDA	GA	PDA	GA
C. versicolor	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400
C. puteana	>6400	>6400	>6400	3200-6400	>6400	>6400
A. pullulans	>6400	1600-3200	>6400	3200-6400	>6400	>6400
С. cladosporioides	>6400	1600-3200	>6400	800-1600	>6400	>6400
A. niger	>6400	>6400	>6400	>6400	1600-3200	>6400
T. viride	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400
T. sp.	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400	>6400
С. globosum	>6400	800-1600	1600-3200	100-200	>6400	200-400
H. grisea	1600-3200	800-1600	800-1600	200-400	>6400	200-400