новые производные тиофена

Формула изобретения

1. Соединение, выбранное из группы, включающей тиофены формулы (I)



где R¹ означает метил, трифторметил или этил;

R² означает водород;

R ³ означает водород или С₁-С₄алкил;

R⁴ означает водород или С₁-С₄ алкил;

R⁵ означает водород;

R ⁶ означает водород;

n равно 0;

m равно 0 или 1; и

если m равно 1, то n также равно 1;

и соли, а также комплексы таких соединений с растворителем.

2. Соединение по п.1, где R¹ означает этил, или соль такого соединения.

3. Соединение по п.1, где R ¹ означает метил, или соль такого соединения.

4. Соединение по п.1, где R¹ означает трифторметил, или соль такого соединения.

5. Соединение по любому из пп.1-4, где R³ и R⁴ означают С₁-С ₄алкил, или соль такого соединения.

6. Соединение по п.5, где R³ и R⁴ означают метил, или соль такого соединения.

7. Соединение по п.5, где R ³ и R⁴ означают этил, или соль такого соединения.

8. Соединение по п.5, где R³ означает метил, в R⁴ означает этил, или соль такого соединения.

9. Соединение по любому из пп.1-4, 6, 7 и 8, где n равно 0, a m равно 1, или соль такого соединения.

10. Соединение по любому из пп.1-4, 6, 7 и 8, где n равно 1, а m равно 1, или соль такого соединения.

11. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей 3-{4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо[с]тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2,6-диметилфенил}пропионовую кислоту, 3-{4-(3-(5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо[с]тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2-этил-6-метилфенил} пропионовую кислоту, 3-{2-этил-6-метил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо[с]тиофен-1-ил)пропил)фенил} пропионовую кислоту, и 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо[с]тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-6-метилфенил} пропионовую кислоту, или соли этих соединений.

12. Соединение по п.1, которое представляет собой 3-{2,6-диметил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо [с]тиофен-1-ил)пропил)фенил} пропионовую кислоту, или соль этого соединения.

13. Фармацевтическая композиция, предназначенная для профилактики или лечения заболеваний или нарушений, ассоциированных с активированной иммунной системой, включающая соединение по любому из пп.1-12 или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.

14. Соединение по любому из пп.1-4, 6-8, 11 и 12 или его фармацевтически приемлемая соль, или фармацевтическая композиция по п.13, для применения в качестве лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболеваний или нарушений, ассоциированных с активированной иммунной системой.

15. Применение соединения по любому из пп.1-12 или его фармацевтически приемлемой соли, для получения фармацевтической композиции, предназначенной для профилактики или лечения заболеваний или нарушений, ассоциированных с активированной иммунной системой.

16. Применение по п.15 для профилактики или лечения заболеваний или нарушений, выбранных из группы, включающей отторжение трансплантированных органов, таких как почки, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа, роговица и кожа; заболевания трансплантат-против-хозяина вследствие трансплантации стволовых клеток; аутоиммунные синдромы, включающие ревматоиднй артрит, рассеяный склероз, воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тиреоидит, такой как тиреоидит Хашимото, увео-ретинит; атопические заболевания, такие как риниты, конъюнктивиты, дерматиты; астму; диабет типа I; послеоперационные аутоиммунные заболевания, включающие ревматическую лихорадку и постинфекционный гломерулонефрит; солидные новообразования и опухолевые метастазы.

17. Соединение, выбранное из группы, включающей тиофены формулы (II)



где R¹, R², R³ , R⁴, R⁵, R⁶, n и m имеют значения, указанные в п.1 для формулы (I), и

R⁷ означает водород, метил, этил или трет-бутил;

и соли, а также комплексы таких соединений с растворителем.

18. Соединение, выбранное из группы, включающей тиофены формулы (III)



где R¹, R², R³ и R⁴ имеют значения, указанные в п.1 для формулы (I), и

R⁷ означает водород, метил, этил или трет-бутил;

и соли, а также комплексы таких соединений с растворителем.

Описание изобретения к патенту

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к агонистам рецептора S1P1/EDG1 формулы (I) и к их применению в качестве активных ингредиентов при получении фармацевтических композиций. Объектами изобретения являются также способы получения соединений, фармацевтических композиций, содержащих соединение формулы (I), и к их применению в качестве средств, улучшающих сосудистую функцию, и в качестве иммуномодулирующих агентов, отдельно или в комбинации с другими активными соединениями или способами лечения. Другим объектом изобретения являются новые соединения формулы (II) и (III), которые являются промежуточными соединениями для получения соединений формулы (I).

Предпосылки создания изобретения

Иммунная система человека предназначена для защиты человека от инородных микроорганизмов и веществ, которые являются причиной инфекции и заболевания. Специфичность иммунного ответа, направленного на инородное вещество или микроорганизм, а не на организм хозяина, обеспечивается сложными регуляторными механизмами. В некоторых случаях указанные контрольные механизмы становятся разрегулированными, и развивается ответная аутоиммунная реакция. Результатом неконтролируемой ответной воспалительной реакции является тяжелое повреждение органа, клеток, ткани или сустава. В процессе лечения обычно происходит подавление всей иммунной системы и существенно снижается способность организма реагировать на инфекцию. Типичные лекарственные средства указанного класса включают азатиоприн, хлорамбуцил, циклофосфамид, циклоспорин и метотрексат. Кортикостероиды, которые подавляют воспалительную реакцию и иммунный ответ, при продолжительном лечении могут оказывать побочные действия. Нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID) могут снижать боль и воспаление, однако они оказывают сильные побочные действия. Другие способы лечения включают агенты, которые активируют или блокируют сигнальный путь цитокинов.

Пероральные активные соединения, обладающие иммуномодулирующими свойствами, не подавляющие ответные иммунные реакции и не обладающие побочными действиями, позволят существенно улучшить курсы лечения разрегулированного воспалительного заболевания.

При пересадке органов необходимо подавлять ответную иммунную реакцию организма, чтобы предотвратить отторжение органа. У реципиентов органа-трансплантата может наблюдаться определенная реакция отторжения даже в том случае, если им вводят иммунодепрессанты. Наиболее часто отторжение происходит в течение первых нескольких недель после пересадки, но реакции отторжения могут также наблюдаться в течение месяцев или даже лет после пересадки. Для обеспечения максимальной защиты против отторжения при сведении к минимуму побочного действия обычно используются комбинации трех или четырех лекарственных средств. Стандартные лекарственные средства, которые используются в настоящее время для предотвращения отторжения пересаженных органов, оказывают воздействие на отдельные внутриклеточные пути активации лейкоцитов типа Т или типа В. Примерами таких лекарственных средств являются циклоспорин, даклизумаб, базиликсимаб, эверолимус или FK506, которые снижают высвобождение цитокина или подавляют передачу сигнала, азатиоприн или лефлуномид, которые ингибируют синтез нуклеотидов, или 15-дезоксиспергуалин, ингибитор дифференциации лейкоцитов.

Лечебное действие неспецифичной иммунодепрессантной терапии связано с их общим подавлением иммунитета, которое осуществляют указанные лекарственные средства, снижая защитную иммунную реакцию системы на инфекцию или злокачественные новообразования. Кроме того, стандартные иммунодепрессантные лекарственные средства часто используются в высоких дозах и могут вызывать или ускорять повреждение органа.

Подробное описание изобретения

В настоящем изобретении предлагаются новые соединения формулы (I), которые являются агонистами сопряженного с G-белком рецептора S1P1/EDG1 и обладают сильным и продолжительным иммунодепрессантным действием, которое достигается за счет снижения числа циркулирующих и инфильтрующихся T- и B-лимфоцитов и которое не оказывает влияния на процессы созревания, памяти или роста лимфоцитов. Снижение циркуляции T-/B-лимфоцитов в результате агонистического действия на S1P1/EDG1, возможно в комбинации с наблюдаемым улучшением функционирования слоя эндотелиальных клеток, ассоциированным с активацией S1P1/EDG1, позволяет использовать такие соединения для лечения неконтролируемого воспалительного заболевания и для улучшения сосудистой функции.

Соединения по настоящему изобретению можно использовать отдельно или в комбинации со стандартными лекарственными средствами, ингибирующими активацию T-клетки, для проведения новой иммунодепрессантной терапии пациентов с пониженной предрасположенностью к инфекциям по сравнению со стандартной иммунодепрессантной терапией. Кроме того, соединения по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с пониженными дозами традиционных иммунодепрессантных средств, при оказании, с одной стороны, эффективного иммунодепрессантного действия, и, с другой стороны, при снижении повреждения рецептора, ассоциированного с высокими дозами стандартных иммунодепрессантных лекарственных средств. Наблюдаемое улучшение функционирования слоя эндотелиальных клеток, ассоциированное с активацией S1P1/EDG1, представляет собой дополнительное преимущество применения соединения для улучшения сосудистой функции.

Нуклеотидная последовательность и аминокислотная последовательность рецептора S1P1/EDG1 человека известна в данной области техники и опубликована в литературе, см., например, Hla T. и Maciag Т., J. Biol. Chem., 265, 9308-9313 (1990), WO 91/15583 (опубликовано 17 октября 1991 г.), WO 99/4627 (опубликовано 16 сентября 1999 г.). Активность и эффективность соединений формулы (I) оценивают с использованием анализа ГТФ S для определения значений EC₅₀ и числа циркулирующих лимфоцитов у крыс после перорального введения соответственно (см. раздел Примеры).

1) Изобретение относится к новым тиофенам формулы (I)

где R¹ означает метил, трифторметил или этил,

R² означает водород, C ₁-С₄алкил, метокси или галоген,

R³ означает водород, C₁-С₄алкил, C₁-С₄алкокси или галоген,

R⁴ означает водород, C₁-С₄алкил или галоген,

R⁵ означает водород,

R⁶ означает водород или гидрокси,

если R⁶ означает гидрокси, R⁵ может также означать гидрокси,

n равно 0,

m равно 0 или 1, и

если m равно 1, то n также равно 1,

и к солям, а также к комплексам с растворителем указанных соединений.

Если не указано иное, общие термины, используемые в описании заявки, имеют следующие значения.

Подразумевается, что форма множественного числа, используемая в отношении соединений, солей, фармацевтических композиций, заболеваний и т.п., означает также форму единственного числа соединения, соли и т.п.

Подразумевается, что любая ссылка в описании заявки на соединение формулы (I), (II) или (III) относится также к энантиомерам, смесям энантиомеров, таким как рацематы, диастереомерам, смесям диастереомеров и к смесям энантиомеров и диастереомеров, таким как диастереомерные рацематы, а также к солям (прежде всего фармацевтически приемлемым солям) и комплексам с растворителем (включая гидраты) и к морфологическим формам таких соединений.

Термин C₁-С ₄алкил, используемый отдельно или в комбинации с другими группами, означает насыщенные группы с прямой и разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4, предпочтительно от 1 до 3 атомов углерода. Примерами групп C₁-С₄алкил являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.

Термин C₁-С₄ алкокси означает группу R-О, где R означает C₁-С ₄алкил. Предпочтительными примерами группы C₁ -С₄алкокси являются метокси, этокси, пропокси и изопропокси.

Термин галоген означает фтор, хлор, бром или иод, предпочтительно фтор или хлор.

Соли предпочтительно означают фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I).

Солеобразующими группами являются группы или радикалы, обладающие основными или кислотными свойствами. Соединения, содержащие по меньшей мере одну основную группу или по меньшей мере один основный радикал, например аминогруппу, вторичную аминогруппу, не образующую пептидной связи, или пиридильный радикал, образуют кислотно-аддитивные соли, например соли неорганических кислот. Если в соединениях присутствуют несколько основных групп, то такие соединения образуют моно- или поликислотно-аддитивные соли.

Соединения, содержащие кислотные группы, такие как карбоксигруппа или фенольная гидроксигруппа, образуют соли с металлами или соли аммония, такие как соли щелочного металла или щелочно-земельного металла, например соли натрия, калия, магния или кальция, или соли аммония, например соли аммиака или пригодных органических аминов, таких как третичные моноамины, например триэтиламин или три(2-гидроксиэтил)амин, или гетероциклических оснований, например N-этилпиперидина или N,N'-диметилпиперазина. Возможно также образование смешанных солей.

Соединения, содержащие кислотные и основные группы, образуют внутренние соли.

Для выделения или очистки соединений, а также, если соединения используются в качестве промежуточных продуктов, можно также использовать фармацевтически неприемлемые соли, например пикраты. Однако для терапевтических целей используются только фармацевтически приемлемые нетоксичные соли, которые, следовательно, являются предпочтительными.

Термин фармацевтически приемлемые соли включает соли неорганических кислот или органических кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, фосфорная кислота, азотная кислота, фосфористая кислота, азотистая кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, фумаровая кислота, бензойная кислота, миндальная кислота, коричная кислота, пальмитиновая кислота, стеариновая кислота, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, этандисульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, янтарная кислота, трифторуксусная кислота и т.п., которые являются нетоксичными, или, если соединение формулы (I) содержит кислотную группу, соли оснований, например, щелочного или щелочно-земельного металла, такого как натрий, калий, кальций и т.п. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в литературе, см., например, "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm., 33, 201-217 (1986).

Соединения формулы (I), (II) или (III) могут содержать один или более асимметрических атомов углерода и могут присутствовать в форме чистых изомеров (предпочтительно) или смесей изомеров, таких как смеси энантиомеров, таких как рацематы, смеси диастереомеров или смеси энанатиомеров и диастереомеров, таких как диастереомерные рацематы. Настоящее изобретение включает все такие формы. Смеси разделяют известными способами, например хроматографией на колонке, тонкослойной хроматографией (ТСХ), жидкостной хроматографией высокого разрешения (ЖХВР) или кристаллизацией.

2) Конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 1), где R¹ означает этил.

3) Конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 1), где R¹ означает метил.

4) Конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 1), где R¹ означает трифторметил.

5) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-4), где R² означает метокси, a R³ и R⁴ означают водород.

6) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-4), где R ² означает водород, a R³ и R⁴ означают C₁-С₄алкил.

7) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 6), где R³ и R⁴ означают метил.

8) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 6), где R³ и R⁴ означают этил.

9) Более предпочтительный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 6), где R³ означает метил, а R⁴ означает этил.

10) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-4), где R² означает водород, R³ означает метокси, a R⁴ означает хлор.

11) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-4), где R² означает водород, R³ означает метил, a R⁴ означает хлор.

12) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-11), где R⁵ и R⁶ означает водород.

13) Другой более предпочтительный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 12), где n равно 0, a m равно 1.

14) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 12), где n равно 1, a m равно 1.

15) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-11), где m равно 1, a R⁵ и R⁶ означают гидрокси.

16) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 15), где n равно 0.

17) Другой конкретный вариант изобретения относится к производным тиофена по любому из вариантов 1)-11), где R⁵ означает водород, a R⁶ означает гидрокси.

18) Другой специальный вариант изобретения относится к производным тиофена по варианту 1), где R¹ означает трифторметил, метил или этил, R², R ⁵ и R⁶ означают водород, R³ и R ⁴ означают C₁-С₄алкил, n равно 0, a m равно 1.

19) Конкретными соединениями тиофена формулы (I) являются:

3-{4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2,6-диметилфенил}пропионовая кислота,

3-{4-(3-(5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2-этил-6-метилфенил}пропионовая кислота,

3-{2-этил-6-метил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропил)фенил}пропионовая кислота и

3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-6-метилфенил}пропионовая кислота.

20) Еще одним конкретным соединением тиофена формулы (I) является 3-{2,6-диметил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропил)фенил}пропионовая кислота.

21) Еще одним объектом изобретения являются новые тиофены формулы (II)

где R¹, R², R ³, R⁴, R⁵, R⁶, n и m имеют значения, указанные выше для формулы (I), a R⁷ означает водород, метил, этил или трет-бутил, и соли, а также комплексы с растворителями таких соединений.

22) Еще одним объектом изобретения являются новые тиофены формулы

где R¹, R², R ³ и R⁴ имеют значения, указанные выше для формулы (I), a R⁷ означает водород, метил, этил или трет-бутил, и соли, а также комплексы с растворителями таких соединений.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно использовать в качестве лекарственных средств, например, при получении фармацевтических композиций для энтерального, парентерального или местного введения. Композиции можно вводить, например, перорально, например, в форме таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий, ректально, например, в форме суппозиториев, парентерально, например, в форме растворов для инъекции или растворов для вливания или местно, например, в форме мазей, кремов или масел.

Фармацевтические композиции получают известными для специалиста способами (см., например, Mark Gibson, ред., Pharmaceutical Preformulation and Formulation, IHS Health Group, Englewood, CO, USA, (2001), Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20 изд., Philadelphia College of Pharmacy and Science), например переработкой описанных соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, необязательно в комбинации с другими терапевтически ценными соединениями, в галеновую лекарственную форму в смеси с пригодными нетоксичными, инертными, фармацевтически приемлемыми твердыми или жидкими материалами-носителями и, при необходимости, с обычными фармацевтическими адъювантами.

Фармацевтические композиции, включающие соединение формулы (I), можно использовать для профилактики и/или лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с активированной иммунной системой.

Такие заболевания или нарушения выбирают из группы, включающей отторжение трансплантированных органов, ткани или клеток, заболевания трансплантат-против-хозяина, развивающиеся при пересадке органов или тканей, аутоиммунные синдромы, включающие ревматоидный артрит, системную красную волчанку, антифосфолипидный синдром, тиреоидит Хашимото, лимфоцитарный тироидит, рассеянный склероз, тяжелая миастения, диабет типа I, увеит, эписклерит, склерит, болезнь Кавасаки, увеоретинит, задний (поясничный) увеит, увеит, ассоциированный с болезнью Бехчета, увеоменингиальный синдром, аллергический энцефаломиелит, хроническая васкулопатия аллотрансплантата, постинфекционные аутоиммунные заболевания, включающие ревматическую атаку и постинфекционный гломерулонефрит, воспаление и гиперпролиферативные кожные заболевания, псориаз, псориатический артрит, атопический дерматит, миопатию, миозит, остеомиелит, контактный дерматит, экзематозный дерматит, себорейный дерматит, красный плоский лишай, пузырчатка, буллезный пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, уртикария, гигантская крапивница (отек Квинке), васкулит, эритема, кожная эозинофилия, воспаление сальной железы (угри), склеродермия, гнездная алопеция, кератоконъюнктивит, весенний конъюнктивит, кератит, герпетический кератит, эпителиальная дистрофия роговицы, лейкома роговицы, глазная пузырчатка, язва Морена, язвенный кератит, склерит, офтальмопатия Грейвса, синдром Фогта-Коянаги-Харады, саркоидоз, сенная лихорадка, обратимое обструктивное заболевание дыхательных путей, бронхиальная астма, аллергическая астма, наследственная бронхиальная астма, приобретенная бронхиальная астма, астма, вызванная пылью, хроническая или запущенная астма, поздняя астма и гиперчувствительность дыхательных путей, бронхиолит, бронхит, эндометриоз, орхит, язвы желудка, ишемические заболевания кишечника, воспалительные заболевания кишечника, некротизирующий энтероколит, патологические изменения кишечника, ассоциированные с термическими ожогами, целиакия, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, болезнь Крона, язвенный колит, повреждение сосудов, вызванное ишемическими заболеваниями и тромбозом, атеросклероз, ожирение сердца, миокардит, инфаркт миокарда, аортит, кахексия вследствие вирусного заболевания, тромбоз сосудов, мигрень, ринит, экзема, интерстициальный нефрит, IgA-индуцированная нефропатия, синдром Гудпасчера, гемолитический-уремический синдром, диабетическая нефропатия, гломерулосклероз, гломерулонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит, интерстициальный цистит, дерматомиозит, синдром Гийена-Барре, болезнь Меньера, полиневрит, множественный полиневрит, миелит, мононеврит, радикулопатия, гипертиреоидизм, базедова болезнь, тиреотоксикоз, истинная эритроцитарная аплазия, апластическая анемия, гипопластическая анемия, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунная тромбоцитопения, агранулоцитоз, пернициозная анемия, мегалобластная анемия, анэритроплазия, остеопороз, фиброма легких, идиопатическая интерстициальная пневмония, дерматомиозит, обыкновенная лейкодерма, обыкновенный ихтиоз, фотосенсибилизация, кожная T-клеточная лимфома, нодозный полиартериит, хорея Гентингтона, хорея Сиденгама, миокардоз, миокардит, склеродермия, гранулема Вегенера, синдром Шегрена, адипоз, эозинофильный фасцит, повреждения десен, периодонта, альвеолярной кости, ткани зуба, алопеция (мужского типа) или старческая, мышечная дистрофия, пиодермия, синдром Сезари, гипофизит, хроническая надпочечниковая недостаточность, болезнь Аддисона, повреждение органов при ишемии/вторичной перфузии после сохранения, эндотоксиновый шок, псевдомембранозный колит, колит, вызванный лекарственным средством или облучением, ишемическая острая почечная недостаточность, хроническая почечная недостаточность, рак легких, злокачественное новообразование лимфоидного происхождения, острый или хронический лимфоцитарный лейкоз, лимфома, легочная эмфизема, катаракта, сидероз, пигментный ретинит, старческая дегенерация желтого пятна, рубцевание стекловидного тела, щелочной ожог роговицы, дерматитная эритема, пузырчатый дерматит, цементный дерматит, гингивит, периодонтит, сепсис, панкреатит, заболевание периферической артерии, карциногенез, солидные опухоли, метастазы карциномы, гипобаропатия, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз, склерозирующий холангит, частичная резекция печени, острый некроз печени, цирроз, алкогольный цирроз, печеночная недостаточность, внезапно и быстро разивающаяся печеночная недостаточность, вторичная печеночная недостаточность и острая на фоне хронической печеночная недостаточность.

Предпочтительные заболевания или нарушения, подлежащие лечению и/или профилактике соединениями формулы (I), выбирают из группы, включающей отторжение трансплантированных органов, таких как почки, печень, сердце, легкие, поджелудочная железа, роговица и кожа, заболевания трансплантат-против-хозяина после трансплантации стволовых клеток, аутоиммунные синдромы, включающие ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тиреоидит, такой как тиреоидит Хашимото, увеоретинит, атопические заболевания, такие как ринит, конъюнктивит, дерматит, астма, диабет типа I, послеоперационные аутоиммунные заболевания, включающие ревматическую лихорадку и постинфекционный гломерулонефрит, солидные раки и опухолевые метастазы.

Более предпочтительные заболевания или нарушения, подлежащие лечению и/или профилактике соединениями формулы (I), выбирают из группы, включающей отторжение трансплантированных органов, выбранных из группы, включающей почки, печень, сердце и легкие, заболевания трансплантат-против-хозяина после трансплантации стволовых клеток, аутоиммунные синдромы, выбранные из группы, включающей ревматоиднй артрит, рассеяный склероз, псориаз, псориатический артрит, болезнь Крона и тиреоидит Хашимото и атопический дерматит.

Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения заболевания или нарушения, указанного в описании заявки, включающему введение субъекту фармацевтически активного количества соединения формулы (I).

Кроме того, соединения формулы (I) можно также использовать в комбинации с одним или более иммуномодулирующими агентами для профилактики и/или лечения заболеваний и нарушений, указанных выше. Согласно предпочтительному варианту изобретения указанные агенты выбирают из группы, включающей иммунодепрессанты, кортикостероиды, нестероидные противовоспалительные агенты, цитотоксические лекарственные средства, ингибиторы молекул адгезии, цитокины, ингибиторы цитокинов, антагонисты рецепторов цитокинов и рецепторов рекомбинантного цитокина.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) для получения фармацевтической композиции, необязательно для применения в комбинации с одним или более иммуномодулирующими агентами для профилактики и/или лечения заболеваний и нарушений, указанных выше.

Настоящее изобретение относится также к пролекарствам соединения формулы (I), которые превращаются in vivo в соединение формулы (I). Следовательно, подразумевается, что любая ссылка на соединение формулы (I) относится также к соответствующим пролекарствам соединения формулы (I).

Соединения формулы (I) можно получать способами, указанными ниже, способами, описанными в разделе Примеры, или аналогичными способами. Оптимальные условия проведения реакций могут изменяться в зависимости от конкретных используемых реагентов или растворителей, однако такие условия определяются специалистом стандартными методами.

Соединения формулы (I) по настоящему изобретению получают по общей последовательности реакций, указанной ниже. Далее в описании приводятся только некоторые схемы синтеза соединений формулы (I).

Соединения формулы (I) можно получить по реакции соединения 1 с основанием, таким как раствор LiOH, раствор NaOH, раствор KOH и т.п., или с кислотой, такой как HCl, ТФУ и т.п., в присутствии или в отсутствие дополнительных растворителей, таких как ТГФ, диоксан, ДМФА, ДМСО, ДХМ и т.п. Соединения 1 можно получить гидрированием соединения формулы (II) или, если n равно 0, m равно 1, a R⁵ и R⁶ означают водород, гидрированием соединения формулы (III) в присутствии катализатора, такого как Pd/C, Pt/C и т.п., в растворителе, таком как метанол, этанол, ТГФ и т.п., или их смеси.

Соединения формулы (II) можно получить конденсацией соединения 2 с соединением 3 в присутствии HCl в растворителе, таком как этанол, изопропанол и т.п., или их смеси, или в присутствии NaOH, LiOH или KOH, в растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол, или их смеси, при температуре предпочтительно от 0°C до 70°C. Аналогичным образом соединение формулы (III) можно получить конденсацией соединения 2 с соединением 4.

R означает,

H,

Соединение 2 можно получить по реакции соединения 5, где R означает метил, этил или трифторметил, с MeLi в растворителе, таком как диэтиловый эфир или ТГФ или их смеси, при температуре от -20°C до 35°C. В другом варианте соединение 2 можно получить по реакции соединения 6, где R означает метил, этил или трифторметил, с метилмагнийбромидом, метилмагнийхлоридом или метилмагнийиодидом. Амид Вайнреба 6 можно получить по реакции кислоты 5 с гидрохлоридом N,O-диметилгидроксиламина в присутствии конденсирующего реагента, такого как EDC, DCC и т.п. (см., например, M.Mentzel, H.M.R.Hoffmann, Journal fuer Praktische Chemie/Chemiker-Zeitung, 339, 517-524 (1997), J. Singh, N.Satyamurthi, I.S.Aidhen, Journal fuer Praktische Chemie (Weinheim, Germany), 342, 340-347 (2000), V.K.Khlestkin, D.G.Mazhukin, Current Organic Chemistry, 7, 967-993 (2003)).

Соединения 5 можно получить по реакции соединения 7 с раствором основания, такого как раствор NaOH, раствор LiOH, раствор KOH и т.п., или кислоты, такой как HCl, ТФУ и т.п., в растворителе, таком как вода, этанол, метанол, ТГФ и т.п., или их смеси.

Соединения 7 получают при обработке соединения 8 неводным основанием, таким как NaOMe, NaOEt, трет-BuOK, DBU и т.п., в растворителе, таком как метанол, этанол, ТГФ, ДМФА и т.п., или их смеси, предпочтительно при повышенной температуре.

Соединения 8 получают при взаимодействии соединения 9 с эфиром меркаптоуксусной кислоты в присутствии основания, такого как NaH, NaOEt, NaOMe, трет-бутоксид калия и т.п., в ТГФ, диоксане, ДМФА, этаноле, метаноле и т.п., или их смеси. Кроме того, соединения 5 можно также получать по трехстадийной методике в одном реакторе из соединения 9, например, по следующей последовательности реакций I:

Соединения 9 получают по реакции соединения 10 с хлорирующим агентом, таким как оксалилхлорид, в растворителе, таком как ДХМ, CHCl₃, ТГФ и т.п. (см., например, R.E.Mewshaw, Richard Е., Tetrahedron Lett., 30, 3753-3756 (1989), Ф.А.Лахвич, Т.С.Хлебникова, А.А.Ахрем, Журнал органической химии, 25, 2541-2549 (1989)).

Соединения 10, где R означает водород, метил или этил, можно получить ацилированием соединения 11 соответствующим ацилирующим агентом, таким как этил- или метилформиат, метил- или этилацетат, метил- или этилпропионат, хлорформиат, ацетилхлорид и т.п., в присутствии основания, такого как трет-бутилат калия, NaOMe, NaH, LDA и т.п., в растворителе, таком как ТГФ, толуол, EtOH и т.п., при температуре от 0 до 60°C (см., например, Ch.Kashima, S.Shibata, H.Yokoyama, Т.Nishio, Journal of Heterocyclic Chemistry, 40, 773-782 (2003), I.Yavari, Issa, M.Bayat, Tetrahedron, 59, 2001-2005 (2003), J.P.Konopelski, J.Lin, P.J.Wenzel, H.Deng, G.I.Elliott, B.S.Gerstenberger, Organic Letters 4, 4121-4124 (2002), C.Wiles, P.Watts, S.J.Haswell, E.Pombo-Villar, Tetrahedron Letters, 43, 2945-2948 (2002), R.Faure, A.Frideling, J.-P.Galy, I. Alkorta, J.Elguero, Heterocycles, 57, 307-316 (2002), через имин: M.Hammadi, D.Villemin, Synthetic Communications, 26, 2901-2904 (1996)).

Соединение 11 получают по известным для специалиста методикам (см., например, М.Е.Flaugh, Т.А.Crowell, D.S.Farlow, Journal of Organic Chemistry, 45, 5399-5400 (1980), A.M.Badger, M.J.Dimartino, C.K.Mirabelli, E.N.Cheeseman, J.W.Dorman, D.H.Picker, D.A. Schwartz, EP 310321 A2 (1989), N.R.Natale, R.O.Hutchins, Organic Preparations and Procedures International, 9, 103-108 (1977), L.M.Rice, B.S.Sheth, J.W.Wheeler, Journal of Heterocyclic Chemistry, 10, 731-735 (1973)).

Кроме того, соединения 5, где R означает метил или этил, предпочтительно получают из соединения 5, где R означает водород (структура 12), по реакции соединения 5 с избытком сильного основания, такого как h-BuLi, трет-BuLi, LDA и т.п., в растворителе, таком как ТГФ, диэтиловый эфир и т.п., а затем с соответствующим алкилирующим агентом (например, метилиодидом, этилиодидом, см., например, W.-D.Liu, С.-С.Chi, I.-F.Pai, А.-Т.Wu, W.-S.Chung, Journal of Organic Chemistry, 67, 9267-9275 (2002), D.W.Knight, A.P.Nott, Tetrahedron Letters, 21, 5051-5054 (1980), R. Raap, Canadian Journal of Chemistry, 49,2155-2157 (1971)).

Соединения 2, где R ¹ означает трифторметил, предпочтительно получают по следующей последовательности реакций. Например, из соединения 12 получают амид Вайнреба 13, который иодируют при добавлении сильного основания, такого как LDA, а затем иода, в растворителе, таком как ТГФ, при низкой температуре (например, при -78°C). Иодированное соединение 14 вводят в реакцию с метилхлордифторацетатом по описанной методике (см., например, D.E.Nichols, S.Frescas, D.Marona-Lewicka, X.Huang, B.L.Roth, G.A.Gudelksy, J.F.Nash, J. Med. Chem., 37, 4346-4351 (1994)). Полученное трифторметил-производное 15 вводят в реакцию с метил-реактивом Гриньяра или метиллитием, при этом получают соединение 2, где R¹ означает трифторметил.

Следующие схемы иллюстрируют способы получения соединений 3 и 4.

(см., например, F.Orsini, F.Pelizzoni, Synthetic Comm., 17, 1389-1402 (1987))

(см., например, H.Kotsuki, P.K.Datta, H.Suenaga, Synthesis, 470-472 (1996), синтез бромида или иодида вместо трифлата: см., например, V.P.Baillargeon, J.K.Stille, J. Am. Chem. Soc, 108, 452-461 (1986), M.J.Gomez-Escalonilla, F.Langa, J.-M.Rueff, L.Oswald, J.F.Nierengarten, Tetrahedron Lett., 43, 7507-7511 (2002), H.Aust, D. Ickenroth, H.Meier, J.Prakt. Chem., 341, 523-528 (1999), Y.Li, B.He, B.Qin, X.Feng, G.Zhang, J.Org. Chem., 69, 7910-7913 (2004)).

(см., например, G.Battistuzzi, S.Cacchi, G.Fabrizi, Org. Lett., 5, 777-780 (2003), N.J.Lawrence, S.Brown, Tetrahedron, 58, 613-619 (2002), D.J.Wardrop, M.S.Burge, Chem. Comm., 1230-1231 (2004))

(см., например, Y.Li, B.He, B.Qin, X.Feng, G.Zhang, J.Org. Chem., 69, 7910-7913 (2004), T.Azemi, M.Kitamura, K.Narasaka, Tetrahedron, 60, 1339-1344 (2004), A.Krasovskiy, P.Knochel, Angew. Chem. Int. Ed., 43, 3333-3336 (2004), T.P.Zabawa, D.Kasi, S.R.Chemler, J. Am. Chem. Soc., 127, 11250-11251 (2005)).

(см., например, W.P.Gallagher, R.E.Maleczka, J. Org. Chem., 68, 6775-6779 (2003), A.-Y.Peng, Y.-X.Ding, J. Am. Chem. Soc, 125, 15006-15007 (2003)).

(см., например, R.A.Fernandes, M.S.Bodas, P.Kumar, Tetrahedron, 58, 1223-1227 (2002), V.P.Baillargeon, J.K.Stille, J. Am. Chem. Soc, 108, 452-461 (1986)).

Другой путь получения соединений 1 показан на схеме ниже. Соединения 17 получают конденсацией соединения 2 с соединением 16 в основной или кислотной среде, указанной выше. Соединения 16 являются коммерческими препаратами или их получают по следующим стандартным методикам, известным специалисту в данной области. При взаимодействии соединения 17, например, с трифторметансульфоновым ангидридом в присутствии основания, такого как триэтиламин или пиридин, получают соединения 18. Затем соединение 18 конденсируют с соединением 19 по реакции типа конденсации Хека в присутствии палладия в качестве катализатора, при этом получают соответствующее соединение 20 (см., например, G.Battistuzzi, S.Cacchi, G.Fabrizi, Org. Lett., 5, 777-780 (2003)). Если R⁶ означает гидроксигруппу, то в зависимости от условия проведения реакции OH-группу временно блокируют защитной группой. Затем проводят соответствующую модификацию соединения 20 по двойной связи с целью получения требуемого соединения 1. Указанные стадии аналогичны стадиям, указанным выше при получении соединений 3 и 4, и, следовательно, такой синтез может включать обычное гидрирование с целью получения насыщенного производного или дигидроксилирование с использованием, например, KMnO ₄ или каталитического количества OSO₄ в присутствии N-метилморфолин-N-оксида (NMO), с последующим восстановительным деблокированием бензильной гидроксигруппы (см., например, N.J.Lawrence, S.Brown, Tetrahedron, 58, 613-619 (2002), D.J.Wardrop, M.S.Burge, Chem. Comm., 1230-1231 (2004)). Межмолекулярную конденсацию можно также проводить в присутствии алкина, а не алкена (конденсация Соногашира, см., например, W.P.Gallagher, R.E.Maleczka, J. Org. Chem., 68, 6775-6779 (2003), A.-Y.Peng, Y.-X.Ding, J. Am. Chem. Soc, 125, 15006-15007 (2003)). Затем полученное производное фенилацетилена можно гидрировать последовательно или в одну стадию с образованием соответствующего насыщенного соединения.

Примеры

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, не ораничивающими его объем.

Соединения характеризовали данными ¹H-ЯМР (300 МГц) или ¹³C-ЯМР (75 МГц) (Varian Oxford, химические сдвиги приводятся в част./млн относительно сигналов растворителя, мультиплеты: s означает синглет, d = дублет, t = триплет, p = квинтет, hex = гексет, hept = гептет, m = мультиплет, константы взаимодействия приводятся в Гц), данными ЖХ/МС (Finnigan Navigator, снабженным бинартным насосом HP 1100 и DAD, колонка: 4,6×50 мм, Zorbax SB-AQ, 5 мкм, 120 Å, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,04% ТФУ), от 5% до 95%, 1 мин, скорость элюирования: 4,5 мл/мин), данными ТСХ (силикагель 60 F₂₅₄, фирма Merck): t_R в мин, и температурами плавления. Соединения очищали препаративной ЖХВР (если не указано иное, в следующих условиях: колонка: X-terra RP18, 50×19 мм, 5 мкм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% муравьиная кислота), от 10% до 95%) или методом ЖХСД (насос Labomatic MD-80-100, линейный детектор UVIS-201r, колонка: 350x18 мм, Labogel-RP-18-5s-100, элюент: градиент метанол/вода, от 10% до 100%).

В описании изобретения используются следующие сокращения:

БСА	бычий сывороточный альбумин
Bu	бутил
DBU	1,8-диазабицикло(5.4.0)ундец-7-ен
DCC	дициклогексилкарбодиимид
ДХМ	дихлорметан
DIBAL	диизобутилалюминийгидрид
DIPEA	диизопропилэтиламин, основание Хюнига, этилдиизопропиламин
ДМФА	диметилформамид
ДМСО	диметилсульфоксид
ЕА	этилацетат
EDC	N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид
Et	этил
ЖХВР	жидкостная хроматография высокого разрешения
i-Prop	изопропил
ЖХ/МС	жидкостная хроматография/масс-спектроскопия
LDA	диизопропиламид лития
Me	метил
ЖХСД	жидкостная хроматография среднего давления
NMO	N-оксид N-метилморфолина
NMP	1-метил-2-пирролидон
OAc	ацетат
OTMS	триметилсилилокси
Ph	фенил
п-TSOH	пара-толуолсульфоновая кислота
KT	комнатная температура
S1P	1-фосфат сфингозина
TBTU	тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,2,3,3-тетраметилурония
Tf	трифторметансульфонил
ТФУ	трифторуксусная кислота
ТГФ	тетрагидрофуран
ТСХ	тонкослойная хроматография
TMSCN	триметилсилилцианид
tR	время удерживания

Структурный фрагмент А

a) В раствор 4,4-диметилциклогекс-2-енона (50 г, 403 ммоля) в ЕА (230 мл) добавляли суспензию Pd/C (2,5 г, 10% Pd) в ЕА и смесь перемешивали при КТ в атмосфере H ₂ (1 бар) в течение 2 ч. Катализатор отделяли фильтрованием и растворитель осторожно упаривали, при этом получали 4,4-диметилциклогексанон (50 г) в виде бесцветного масла, которое медленно кристаллизовалось.

¹H ЯМР (CDCl₃): 2,34 (t, J 6,4 Гц, 4Н), 1,66 (t, J 6,4 Гц, 4Н), 1,09 (s, 6Н).

b) В охлажденный на ледяной бане раствор трет-бутилата K (24,5 г, 109 ммолей, 50% раствор в трет-бутаноле) в ТГФ (700 мл) медленно добавляли этилформиат (120 мл, 123 ммоля). Смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Затем в течение 20 мин добавляли раствор 4,4-диметилциклогексанона (50 г, 396 ммолей) в этилформиате (50 мл) и ТГФ (70 мл) и смесь перемешивали при 15-20°C в течение 30 мин. Суспензию оранжевого цвета выливали в 10% раствор лимонной кислоты (200 мл) и солевой раствор (200 мл), а затем экстрагировали ЕА (2×200 мл). Органические экстракты промывали 0,2 н. раствором NaOH, солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и упаривали досуха, при этом получали 5,5-диметил-2-оксоциклогексанкарбальдегид (52 г) в виде масла желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 0,89 мин, 196,15 (M+1+CH3CN) ⁺.

c) В раствор 5,5-диметил-2-оксоциклогексанкарбальдегида (51 г, 331 ммоль) в хлороформе (250 мл) быстро добавляли оксалилхлорид (40 мл, 465 ммолей). Смесь перемешивали в течение 3-4 мин, добавляли лед и 2 н. раствор NaOH (100 мл). Органическую фазу отделяли и водную фазу однократно экстрагировали хлороформом. Объединенную органическую фазу промывали водой, сушили над Na₂SO ₄ и растворитель удаляли в вакууме, при этом получали 2-хлорметилен-4,4-диметилциклогексанон (50 г) в виде масла коричневого цвета. ЖХ/МС: t_R 0,96 мин.

d) В первую порцию (300 мл) свежеприготовленного раствора натрия (21 г, 875 ммолей в 500 мл этанола) добавляли этиловый эфир меркаптоуксусной кислоты (50 мл). Полученный раствор в течение 10 мин добавляли в раствор 2-хлорметилен-4,4-диметилциклогексанона (50 г, 290 ммолей) в ТГФ (170 мл), при этом смесь нагревалась (50°C). В реакционную смесь добавляли вторую порцию свежеприготовленного раствора натрия в этаноле (200 мл) и смесь перемешивали при КТ в течение 15 мин. Затем в смесь добавляли 1 н. раствор LiOH (300 мл), раствор кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, а затем перемешивали при КТ в течение 16 ч. ТГФ и этанол удаляли при пониженном давлении и полученный раствор темного цвета экстрагировали гептаном/ЕА (3:1, 2×200 мл). Водную фазу подкисляли при добавлении лимонной кислоты (30 г) и 2 н. HCl (200 мл) и трижды экстрагировали ЕА. Объединенные органические экстракты трижды промывали насыщенным раствором NaHCO₃, сушили над Na₂SO₄ и упаривали. Полученное масло темно-коричневого цвета растворяли в ацетонитриле при 60°C и кристаллизовали при 5°C. Кристаллы отделяли, промывали ацетонитрилом и высушивали, при этом получали 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновую кислоту (31 г) в виде порошка сероватого цвета. ЖХ/МС: t _R 0,95 мин, 252,18 (M+1+CH₃CN)⁺.

¹H ЯМР (CDCl₃): 7,15 (s, 1Н), 3,05 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 2,47 (s, 2Н), 1,58 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 0,97 (s, 6H).

Структурный фрагмент B

1) Синтез с использованием структурного фрагмента A

В раствор 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-карбоновой кислоты (5 г, 23,8 ммоля) в ТГФ при -78°C добавляли трет-бутиллитий (41 мл, 1,5 M раствор в пентане) и смесь перемешивали при -78°С в течение 15 мин. Затем в смесь добавляли по каплям йодистый метил (17,1 г, 120 ммолей), перемешивали при -78°C в течение 30 мин, нагревали до KT, разбавляли водой (400 мл), подкисляли при добавлении 10% раствора лимонной кислоты и трижды экстрагировали ЕА. Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄ и упаривали. Полученное твердое вещество суспендировали в гептане/диэтиловом эфире, суспензию фильтровали и твердое вещество высушивали в высоком вакууме, при этом получали 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновую кислоту (4,01 г) в виде порошка бежевого цвета. ЖХ/МС: t _R 0,97 мин, 225,13 (M+1).

¹H ЯМР (D₆-DMCO): 12,49 (ушир.s, 1H), 2,87 (t, J 6,7 Гц, 2Н), 2,26 (s, 5Н), 1,45 (t, J 6,7 Гц, 2Н), 0,91 (s, 6Н).

2) Прямой синтез из 4,4-диметилциклогексанона

a) В суспензию NaH (2,88 г, 60% дисперсия в минеральном масле, 60 ммолей) в толуоле (25 мл) добавляли ЕА (6,5 мл, 66 ммолей) и смесь перемешивали при КТ в течение 5 мин. Затем в смесь добавляли раствор 4,4-диметилциклогексанона (2,52 г, 20 ммолей) в ЕА (6 мл) и нагревали до 55°C, при этом наблюдалась бурная реакция, суспензия грязно-белого цвета окрашивалась в оранжевый цвет, а затем образовался прозрачный раствор. Прозрачный раствор выливали в лед/воду и экстрагировали ЕА. Водную фазу подкисляли до pH 4-5 и экстрагировали ЕА. Объединенные органические экстракты сушили над Na₂SO₄ и растворитель удаляли в вакууме, при этом получали 2-ацетил-4,4-диметилциклогексанон (2,00 г) в виде масла желтого цвета.

¹ H ЯМР (CDCl₃): 2,35 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 2,12 (s, 2Н), 2,10 (s, 1Н), 1,48 (t, J 7,0 Гц, 2H), 0,98 (s, 6H).

b) В раствор 2-ацетил-4,4-диметилциклогексанона (5,00 г, 29,7 ммоля) в хлороформе (15 мл) при 0°C добавляли оксалилхлорид (7,54 г, 59,4 ммоля), смесь нагревали при 60°C и перемешивали в течение 15 мин. Затем смесь выливали в воду, органическую фазу отделяли, промывали насыщенным раствором NaHCO₃ и солевым раствором, сушили над MgSO₄ и упаривали досуха, при этом получали неочищенный 2-(1-хлорэтилиден)-4,4-диметилциклогексанон (3,2 г, содержащий региоизомер) в виде масла коричневого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,00 мин.

c) В смесь NaOEt (10 мл, 2,5 M раствор в этаноле, 25 ммолей) в ТГФ (10 мл) добавляли этиловый эфир меркаптоуксусной кислоты (3,09 г, 25,7 ммоля), а затем добавляли раствор полученного на предыдущей стадии 2-(1-хлорэтилиден)-4,4-диметилциклогексанона (3,2 г, 17,14 ммоля). Полученный раствор перемешивали при 60°C в течение 45 мин. Смесь разбавляли водой и экстрагировали ЕА. Органический экстракт сушили над Na₂SO₄ , упаривали и очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/толуол, затем гептан/ЕА), при этом получали этиловый эфир 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновой кислоты (3,1 г) в виде масла коричневого цвета, содержащий региоизомер этилового эфира 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновой кислоты. Аналитическое количество очищали препаративной ЖХВР, при этом получали очищенный этиловый эфир 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновой кислоты в виде бесцветного масла. ЖХ/МС: t_R 1,13 мин. 252,99 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl₃ ): 4,29 (q, J 7,0 Гц, 2Н), 3,00 (t, J 6,4 Гц, 2Н), 2,30 (s, 3Н), 2,26 (s, 2Н), 1,52 (t, J 6,4 Гц, 2Н), 1,34 (t, J 7,0 Гц, 3H), 0,96 (s, 6Н).

d) В раствор этилового эфира 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновой кислоты (3,0 г, 11,9 ммоля) в этаноле (100 мл) добавляли 2 н. раствор LiOH (50 мл) и реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 2 ч. Этанол удаляли на роторном испарителе, водный раствор однократно экстрагировали гептаном, добавляли лимонную кислоту до pH 2 и трижды экстрагировали ЕА. Экстракты ЕА объединяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали, упаривали и высушивали, при этом получали 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновую кислоту (1,6 г) в виде твердого вещества бежевого цвета, содержащего региоизомер 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(b)тиофен-2-карбоновой кислоты. ЖХ/МС: t_R 0,98 мин, 225,14 (M+1).

Структурный фрагмент C

В охлажденный раствор (-78°C) 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-карбоновой кислоты (960 мг, 4,57 ммоля) в ТГФ (19 мл) добавляли трет-бутиллитий (8 мл, 1,5 М раствор в пентане) и смесь перемешивали при -78°C в течение 10 мин. Затем добавляли йодистый этил (3,80 г, 24,37 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 3 ч. В смесь добавляли воду/метанол (1:1,8 мл), 10% раствор лимонной кислоты и экстрагировали ЕА. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO ₄ и упаривали. Полученное твердое вещество суспендировали в ацетонитриле (6 мл), нагревали до 60°C, охлаждали до КТ, фильтровали и высушивали, при этом получали 3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-карбоновую кислоту (640 мг) в виде твердого вещества бежевого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,01 мин, 280,10 (M+1+CH₃CN).

Структурный фрагмент D

В суспензию 3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (4,10 г, 18,28 ммоля) в диэтиловом эфире (300 мл) при КТ медленно добавляли метиллитий (23 мл, 1,6 М раствор в диэтиловом эфире), при этом образовался прозрачный раствор, который приобретал желтый цвет и слегка нагревался (26°C). Смесь перемешивали в течение 15 мин, после чего реакцию останавливали при добавлении воды. Органический слой отделяли, однократно промывали водой, сушили над MgSO₄ и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/ЕА, 4:1), при этом получали 1-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)этанон (2,80 г) в виде кристаллического твердого вещества светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,06 мин, 223,17 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl₃): 3,00 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 2,43 (s, 3Н), 2,31 (s, 3Н), 2,26 (s, 2Н), 1,51 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 0,95 (s, 6Н).

Структурный фрагмент E

В раствор 3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (2,10 г, 8,81 ммоля) в диэтиловом эфире (100 мл) при КТ добавляли раствор метиллития (11 мл, 1,6 М раствор в диэтиловом эфире). Раствор светло-желтого цвета перемешивали при КТ в течение 15 мин, добавляли еще одну порцию метиллития (2 мл), перемешивали в течение 15 мин, добавляли еще одну порцию метиллития (1 мл) и смесь перемешивали при КТ в течение еще 15 мин. Реакцию останавливали при добавлении воды, органический слой отделяли, однократно промывали водой, сушили над MgSO₄ и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/ЕА, 7:3), при этом получали 1-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)этанон (1,65 г) в виде твердого вещества светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,00 мин, (M+1) 237,15.

¹ H ЯМР (CDCl₃): 3,03 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 2,73 (q, J 7,6 Гц, 2Н), 2,47 (s, 3Н), 2,31 (s, 2Н), 1,55 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 1,28 (t, J 7,6 Гц, 3Н), 0,97 (s, 6Н).

Структурный фрагмент F

a) В раствор 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-карбоновой кислоты (20 г, 95 ммолей) в ДМСО (150 мл) добавляли гидрохлорид N,O-диметилгидроксиламина (12,06 г, 124 ммоля) и DIPEA (65 мл, 380 ммолей) и раствор TBTU (33,59 г, 105 ммолей) в ДМФА (70 мл)). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч, затем выливали в воду/лед и дважды экстрагировали диэтиловым эфиром (2×100 мл). Органические экстракты промывали насыщенным раствором NaHCO ₃, 10% раствором лимонной кислоты и солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали, упаривали и остаток высушивали, при этом получали метоксиметиламид 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (23 г) в виде масла коричневого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,01 мин, (М+1) 254,14.

b) В раствор диизопропиламина (11,02 г, 109 ммолей) в ТГФ (400 мл) при 0-5°C добавляли н-бутиллитий (72,7 мл, 109 ммолей, 1,5 M раствор в пентане). Раствор охлаждали до -78°C и добавляли раствор метоксиметиламида 5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (23 г, 91 ммоль) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивали при -78°C в течение 20 мин, добавляли раствор иода (30 г, 119 ммолей) в ТГФ (100 мл) и смесь перемешивали при -78°C в течение 30 мин. Реакцию останавливали при медленном добавлении воды/метанола (1:1, 20 мл). Раствор разбавляли водой (400 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (3×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали 10% раствором лимонной кислоты и солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ), при этом получали метоксиметиламид 3-иод-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (18 г) в виде масла коричневатого цвета. ЖХ/МС: t _R 1,09 мин, 380,21 (М+1).

c) Метоксиметиламид 3-иод-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (18 г, 47 ммолей), CuI (14,5 г, 76 ммолей) и KF (4,4 г, 76 ммолей) растворяли в ДМФА (80 мл). Раствор нагревали до 134°C и в течение 4 ч с использованием поршневого насоса добавляли метиловый эфир хлордифторуксусной кислоты (16,26 г, 113 ммолей), при этом наблюдалось выделение газа. После добавления реагента смесь охлаждали и выливали в воду/лед. Полученный осадок отделяли, суспендировали в ДХМ (600 мл) и суспензию фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 0,5 н. HCl (250 мл) и насыщенным раствором NaHCO₃, сушили над Na₂SO ₄, фильтровали и упаривали, при этом получали метоксиметиламид 5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислоты (14 г) в виде масла коричневого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,10 мин, 322,20 (М+1).

d) В раствор метоксиметиламида 5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-карбоновой кислот (14 г, 44 ммоля) в диэтиловом эфире (400 мл) при КТ добавляли метиллитий (80 мл, 1,6 M раствор в диэтиловом эфире). Смесь перемешивали при КТ в течение 15 мин, затем выливали в воду/лед и нейтрализовали при добавлении соляной кислоты. Эфирную фазу отделяли и водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (2×100 мл). Органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над MgSO₄ , фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/20-30% ДХМ), при этом получали 1-(5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-ил)этанон (9,1 г) в виде масла желтого цвета.

ЖХ/МС: t _R 1,11 мин, 318,34 (M+1+CH₃CN).

¹H ЯМР (CDCl₃): 3,04 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 2,57 (d, J 1,2 Гц, 2Н), 2,53 (s, 3H), 1,58 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 0,99 (s, 6Н).

Структурный блок A

a) В раствор 4-гидрокси-3,5-диметилбензальдегида (5,0 г, 33,3 ммоля) в ДХМ (50 мл) и пиридине (8 мл) при 0°C медленно добавляли ангидрид трифторметансульфоновой кислоты (6 мл, 36,6 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕА и трижды промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/ЕА, 4:1), при этом получали 4-формил-2,6-диметилфениловый эфир трифторметансульфоновой кислоты (5,3 г) в виде твердого вещества светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,04 мин.

¹H ЯМР (CDCl₃): 9,97 (s, 1Н), 7,66 (s, 2Н), 2,48 (s, 6Н).

b) В раствор 4-формил-2,6-диметилфенилового эфира трифторметансульфоновой кислоты (4,7 г, 16,7 ммоля) в сухом ДМФА (75 мл) при КТ при перемешивании в атмосфере азота последовательно добавляли триэтиламин (3,4 г, 33,3 ммоля), метилакрилат (14,3 г, 167 ммолей), 1,3-бис-(дифенилфосфино)пропан (378 мг, 0,92 ммоля) и Pd(OAc)₂ (187 мг, 0,83 ммоля) и смесь перемешивали при 115°C в течение 5 ч. Затем смесь разбавляли диэтиловым эфиром (350 мл), дважды промывали 1 н. HCl и однократно насыщенным раствором NaHCO₃. Органический экстракт сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: гептан/ЕА, 5:1), при этом получали метиловый эфир 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)акриловой кислоты (2,9 г) в виде твердого вещества светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 0,96 мин.

c) В раствор метилового эфира 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)акриловой кислоты (2,9 г, 13,3 ммоля) в метаноле (70 мл) добавляли 2 н. раствор NaOH (35 мл) и суспензию перемешивали при КТ в течение 30 мин. Метанол упаривали, водный раствор дважды экстрагировали ДХМ, подкисляли 2 н. HCl и дважды экстрагировали ЕА. Объединенные экстракты ЕА сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт перекристаллизовывали из ЕА, при этом получали 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)акриловую кислоту (2,2 г) в виде кристаллов светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 0,83 мин.

¹H ЯМР (D ₆-ДМСО): 12,65 (ушир.s, 1H), 9,92 (s, 1Н), 7,66 (d, J 16,4 Гц, 1H), 7,61 (s, 2Н), 6,12 (d, J 16,4 Гц, 1Н), 2,35 (s, 6Н).

Структурный блок В

a) В раствор 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)акриловой кислоты (2,2 г, 10,8 ммоля) и DIPEA (2,0 мл, 11,9 ммоля) в этаноле (80 мл) добавляли Pd/C (200 мг, 10% Pd, содержащий 50% воды). Суспензию интенсивно перемешивали в атмосфере H₂ (1 бар) в течение 1 ч. Смесь фильтровали через целит и фильтрат упаривали. Остаток выливали в 1 н. HCl/лед и экстрагировали ЕА. Органический экстракт однократно промывали 1 н. HCl и однократно солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали, при этом получали 3-(4-гидроксиметил-2,6-диметилфенил)пропионовую кислоту (2,2 г) в виде смолы светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t _R 0,71 мин.

b) В раствор 3-(4-гидроксиметил-2,6-диметилфенил)пропионовой кислоты (960 мг, 4,6 ммоля) в уксусной кислоте (20 мл) добавляли MnO₂ (1440 мг, 16,6 ммоля) и смесь перемешивали при 80°C в течение 4,5 ч. Затем смесь фильтровали, фильтрат упаривали и неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/8% МеОН), при этом получали 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)пропионовую кислоту (800 мг) в виде твердого вещества бежевого цвета. ЖХ/МС: t_R 0,81 мин.

¹H ЯМР (D ₆-ДМСО): 12,2 (ушир.s, 1Н), 9,86 (s, 1Н), 7,52 (s, 2Н), 2,93-2,85 (m, 2Н), 2,38-2,30 (m, 8Н).

Структурный блок С

3-(2-Этил-4-формил-6-метилфенил)акриловую кислоту получали аналогично тому, как описано для структурного блока A. ЖХ/МС: t_R 0,87 мин.

¹H ЯМР (CDCl₃): 9,98 (s, 1Н), 7,96 (d, J 16,4 Гц, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,13 (d, J 16,4 Гц, 1H), 2,75 (q, J 7,6 Гц, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,25 (t, J 7,6 Гц, 3H).

Структурный блок D

3-(2-Этил-4-формил-6-метилфенил)пропионовую кислоту получали из структурного блока С аналогично тому, как описано для структурного блока B. ЖХ/МС: t_R 0,86 мин.

¹H ЯМР (CDCl₃): 9,93 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 3,11-3,04 (m, 2H), 2,75 (q, J 7,6 Гц, 2H), 2,56-2,50 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,28 (t, J 7,6 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 1

Раствор 1-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)этанона (400 мг, 1,69 ммоля), 3-(4-формил-2,6-диметилфенил)пропионовой кислоты (419 мг, 2,03 ммоля) и NaOH (1,7 г, 42,5 ммоля) в метаноле (17 мл) перемешивали при 75°C в течение 75 мин. Затем смесь разбавляли 1 н. HCl и дважды экстрагировали ЕА. Органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/6% МеОН), при этом получали 3-{4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-2,6-диметилфенил}пропионовую кислоту (620 мг) в виде твердого вещества светло-желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,17 мин, 425,34 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl₃): 7,68 (d, J 15,8 Гц, 1Н), 7,28 (s, 2Н), 7,27 (d, J 15,8 Гц, 1Н), 3,18 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 3,06-2,98 (m, 2Н), 2,78 (q, J 7,6 Гц, 2Н), 2,54-2,48 (т, 2Н), 2,39 (s, 6Н), 2,34 (s, 2Н), 1,58 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 1,32 (t, J 7,6 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 2A

В раствор 1-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-ил)этанона (143 мг, 0,606 ммоля) и 3-(2-этил-4-формил-6-метилфенил)пропионовой кислоты (200 мг, 0,908 ммоля) в этаноле (15 мл) добавляли 5 н. раствор HCl в изопропаноле (3 мл) и реакционную смесь темно-коричневого цвета перемешивали при КТ в течение 3 ч, при 50°C в течение 48 ч, а затем добавляли DIPEA (4 мл). Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали препаративной ЖХВР (колонка Grom-Sil 120, ODS-4-HE, 30×75 мм, 10 мкм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% НСООН), от 10% до 95%), при этом получали этиловый эфир 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-6-метилфенил}пропионовой кислоты (157 мг) в виде масла желтого цвета. ЖХ/МС: t_R 1,27 мин, 467,43 (М+1).

Промежуточное соединение 2B

Раствор 1-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-ил)этанона (200 мг, 0,846 ммоля) и 3-(2-этил-4-формил-6-метилфенил)акриловой кислоты (203 мг, 0,931 ммоля) в растворе NaOH в метаноле (8 мл, 10 г NaOH в 100 мл метанола) перемешивали при КТ в течение 3 ч. Затем в смесь осторожно добавляли 2 н. HCl до pH 1 и дважды экстрагировали ДХМ. Органические экстракты промывали водой и солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт кристаллизовали из ацетонитрила (40 мл), при этом получали 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-6-метилфенил}акриловую кислоту (222 мг) в виде кристаллов желтого цвета. Остаток, содержащийся в маточном растворе, фракционировали препаративной ЖХВР (колонка Grom-Sil 120, ODS-4-HE, 30×75 мм, 10 мкм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% НСООН),от 20% до 95%), при этом получали дополнительное количество (29 мг) продукта. ЖХ/МС: t_R 1,20 мин, 437,31 (М+1).

Промежуточное соединение 3

3-{2-Этил-6-метил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропенил)фенил}акриловую кислоту получали из 1-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)этанона и 3-(2-этил-4-формил-6-метилфенил)акриловой кислоты аналогично тому, как описано для промежуточного соединения 2B. ЖХ/МС: t _R 1,17 мин, 423,34 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl₃): 7,97 (d, J 16,4 Гц, 1Н), 7,68 (d, J 15,2 Гц, 1H), 7,33 (s, 2H), 7,28 (d, J 15,8 Гц, 1H), 6,13 (d, J 15,8 Гц, 1H), 3,16 (t, J 7,0 Гц, 2H), 2,77 (q, J 7,6 Гц, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,32 (s, 2H), 1,57 (t, J 6,4 Гц, 2H), 1,24 (t, J 7,6 Гц, 3H), 1,00 (s, 6H).

Промежуточное соединение 4

Этиловый эфир 3-{4-(3-(5,5-диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-2-этил-6-метилфенил}пропионовой кислоты получали из структурного фрагмента F и структурного фрагмента D аналогично тому, как описано для промежуточного соединения 2А. ЖХ/МС: t_R 1,29 мин, 506,68 (М+1).

Промежуточное соединение 5

3-{2,6-Диметил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропенил)фенил}акриловую кислоту (570 мг) получали при конденсации структурного фрагмента D (415 мг, 1,87 ммоля) и структурного фрагмента B (381 мг, 1,87 ммоля) аналогично тому, как описано для промежуточного соединения 2B. ЖХ/МС: t_R 1,17 мин, 409,21 (М+1).

Пример 1

В раствор 3-{4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-2,6-диметилфенил}пропионовой кислоты (610 мг, 1,44 ммоля) и DIPEA (204 мг, 1,58 ммоля) в этаноле (30 мл) добавляли Pd/C (300 мг, 10% Pd, содержащий 50% воды). Суспензию перемешивали при КТ в течение 18 ч в атмосфере H ₂ при давлении 1 атм. Смесь фильтровали и фильтрат упаривали. Неочищенный продукт очищали препаративной ЖХВР (колонка Grom-Sil 120, ODS-4-HE, 30×75 мм, 10 мкм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% HCOOH), от 20% до 95%), при этом получали 3-{4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(с)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2,6-диметилфенил}пропионовую кислоту (460 мг) в виде бесцветного лиофилизата. ЖХ/МС: t _R 1,15 мин. 427,40 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl₃): 6,91 (s, 2Н), 3,10-2,90 (m, 8Н), 2,73 (q, J 7,6 Гц, 2Н), 2,53-2,46 (m, 2Н), 2,32 (s, 6Н), 2,30 (s, 2Н), 1,54 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 1,28 (t, J 7,6 Гц, 3H), 0,97 (s, 6Н).

Пример 2

a) В раствор этилового эфира 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропенил)-6-метилфенил}пропионовой кислоты (153 мг, 0,328 ммоля) в этаноле добавляли Pd/C (80 мг, 10% Pd, содержащий 50% воды) и полученную суспензию перемешивали в атмосфере H₂ (1 бар) при КТ в течение 72 ч. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат упаривали. Неочищенный продукт очищали препаративной ЖХВР (колонка Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30×75 мм, 10 µм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% HCOOH), от 20% до 95%), при этом получали этиловый эфир 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-6-метилфенил}пропионовой кислоты (95 мг) в виде аморфного твердого вещества. ЖХ/МС: t _R 1,26 мин, 469,40 (М+1).

b) В раствор этилового эфира 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-6-метилфенил}пропионовой кислоты (92 мг, 0,196 ммоля) в этаноле (2 мл) добавляли 2 н. раствор NaOH (2 мл) и смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растворяли в 2 н. HCl и экстрагировали ЕА. Органический экстракт промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали, при этом получали 3-{2-этил-4-(3-(3-этил-5,5-диметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-6-метилфенил}пропионовую кислоту в виде аморфного твердого вещества. ЖХ/МС: t_R 1,16 мин, 441,36 (М+1).

¹H ЯМР (CDCl ₃): 6,95 (s, 1Н), 6,93 (s, 1H), 3,12-2,94 (m, 8Н), 2,74 (q, J 7,6 Гц, 2Н), 2,66 (q, J 7,6 Гц, 2Н), 2,56-2,48 (m, 2Н), 2,36 (s, 3H), 2,32 (s, 2Н), 1,56 (t, J 7,0 Гц, 2Н), 1,29 (t, J 7,6 Гц, 3H), 1,24 (t, J 7,6 Гц, 3H).

Пример 3

В раствор 3-{2-этил-6-метил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропенил)фенил}акриловой кислоты (промежуточное соединение 3, 340 мг, 0,805 ммоля) и DIPEA (182 мг, 1,41 ммоля) в этаноле добавляли Pd/C (340 мг, 10% Pd, содержащий 50% воды) и полученную суспензию перемешивали в атмосфере H₂ (10 бар) при 50°C в течение 72 ч. Затем добавляли еще одну порцию Pd/C и перемешивали в атмосфере H₂ (10 бар) при 50°C в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат упаривали. Неочищенный продукт очищали препаративной ЖХВР (колонка Grom-Sil 120, ODS-4-HE, 30×75 мм, 10 мкм, элюент: градиент ацетонитрил/вода (+0,5% HCOOH), от 20% до 95%), при этом получали 3-{2-этил-6-метил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропил)фенил}пропионовую кислоту (154 мг) в виде бесцветной пены. ЖХ/МС: t_R 1,15 мин, 427,30 (М+1).

Пример 4

3-{4-(3-(5,5-Диметил-3-трифторметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)-3-оксопропил)-2-этил-6-метилфенил}пропионовую кислоту получали из промежуточного соединения 4 аналогично тому, как описано в примере 2. ЖХ/МС: t_R 1,17 мин, 481,36 (М+1).

Пример 5

3-{2,6-Диметил-4-(3-оксо-3-(3,5,5-триметил-4,5,6,7-тетрагидробензо(c)тиофен-1-ил)пропил)фенил}пропионовую кислоту (430 мг) получали из промежуточного соединения 5 (548 мг, 1,34 ммоля) аналогично тому, как описано в примере 3. ЖХ/МС: t_R 1,13 мин. 413,34 (М+1).

¹ H ЯМР (CDCl₃): 0,97 (s, 6Н), 1,53 (t, J 6,7 Гц, 2Н), 2,28 (s, 2Н), 2,32 (s, 6Н), 2,33 (s, 3H), 2,45-2,54 (m, 2 Н), 2,89-2,99 (m, 4Н), 2,99-3,10 (m, 4Н), 6,91 (s, 2Н).

Пример 6

Анализ связывания с ГТФ S для определения значений EC₅₀

Определение связывания ГТФ S проводили в 96-луночных планшетах для микротитрования (фирма Nunc, кат. № 442587) в конечном объеме реакционной смеси 200 мкл. Для анализа использовали мембранную фракцию клеток СНО, экспрессирующих рекомбинантный рецептор S1P1 человека. Для анализа использовали буферный раствор следующего состава: 20 мМ Hepes (фирма Fluka, кат. № 54461), 100 мМ NaCl (фирма Fluka, кат. № 71378), 5 мМ MgCl₂ (фирма Fluka, кат. № 63064), 0,1% БСА (фирма Calbiochem, кат. № 126609), 1 мкМ ГДФ (фирма Sigma, кат. № G-7127), 2,5% ДМСО (фирма Fluka, кат. № 41644), 50 пМ ³⁵S-ГТФ S (фирма Amersham Biosciences, кат. № SJ1320), pH 7,4. Исследуемые соединения растворяли, разбавляли 100% ДМСО и предварительно инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин в 150 мкл указанного выше буферного раствора в отсутствие ³⁵S-ГТФ S. Затем добавляли 50 мкл ³⁵S-ГТФ S и смесь инкубировали в течение 1 ч при КТ. Смесь переносили в лунке планшета Multiscreen (фирма Millipore, MAHFC1H60) с использованием сборщика клеток фирмы Packard Biosciences. Планшеты промывали ледяным буферным раствором для промывки (10 мМ Na₂ HPO₄/NaH₂PO₄, 70%/30%), сушили, плотно закрывали дно, добавляли 25 мкл сцинтилятора MicroScint20 (фирма Packard Biosciences, кат. № 6013621) и плотно закрывали сверху. Связанный с мембранной фракцией ³⁵S-ГТФ S измеряли на счетчике TopCount (фирма Packard Biosciences).

Величина ЕС₅₀ означает концентрацию агониста, при которой наблюдается 50% специфическое связывание ³⁵ S-ГТФ S по сравнению с максимальным связыванием. Специфическое связывание рассчитывали при вычитании величины неспецифического связывания из величины максимального связывания. Максимальное связывание определяли по количеству импульсов в минуту, измеренных в лунках планшета Multiscreen в присутствии 10 мкМ S1P. Неспецифическое связывание определяли как связывание в отсутствие агониста в растворе для анализа связывания.

В таблице 1 приведено значение ЕС₅₀ для соединения по настоящему изобретению. Значение ЕС₅₀ определяли методом, описанным выше.

Таблица 1
Соединение (пример № )	ЕС50 (нМ)
4	4,0

Пример 7

Оценка эффективности in vivo

Эффективность соединений формулы (I) оценивали по количеству циркулирующих лимфоцитов после перорального введения соединения формулы (I) в количестве 3-30 мг/кг самцам крыс линии Wistar с нормальным кровяным давлением. Животных выдерживали в условиях с контролируемым климатом в световом цикле 12 ч свет/темнота и обеспечивали им свободный доступ к нормальному корму для крыс и питьевой воде. Кровь отбирали до введения лекарственного средства и через 3, 6 и 24 ч после введения. Цельную кровь анализировали (гематологические параметры) в системе Advia Hematology (фирма Bayer Diagnostics, Цюрих, Швейцария).

Все данные представлены в виде средней величины ±СО (стандартное отклонение). Статистический анализ проводили дисперсионным методом (ANOVA) с использованием программы Statistica (фирма StatSoft) и критериев Стьюдента-Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений. Нулевую гипотезу отвергали при значении p<0,05.

В качестве примера в таблице 2 приведено количество лимфоцитов через 6 ч после перорального введения 10 мг/кг соединения по настоящему изобретению самцам крыс линии Wistar с нормальным кровяным давлением по сравнению с группой животных, которым вводили только носитель.

Таблица 2
Соединение (пример № )	Количество лимфоцитов
1	-61±5%