фармацевтические композиции, содержащие циклоспорин

Формула изобретения

1. Жидкая фармацевтическая композиция, содержащая:

терапевтически эффективную дозу циклоспорина;

водный жидкий носитель;

первое вещество, способствующее растворимости, выбранное из группы фосфолипидов, и

второе вещество, способствующее растворимости, выбранное из группы неионных поверхностно-активных веществ, причем

фосфолипид представляет собой смесь природных фосфолипидов и содержит циклоспорин в липосомно солюбилизированной форме.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что циклоспорин представляет собой циклоспорин А.

3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что содержание циклоспорина А составляет от примерно 0,2 до примерно 20 мг/мл.

4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что содержание циклоспорина А составляет от примерно 0,5 до примерно 10 мг/мл и, предпочтительно от примерно 1 до примерно 5 мг/мл.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что фосфолипид представляет собой лецитин, содержащй ненасыщенные жирные кислоты, например Lipoid S 100, Phospholipon G 90, 100 или аналогичным лецитином.

6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержание фосфолипида составляет от примерно 0,2 до примерно 15 вес.%, предпочтительно от примерно 1 до примерно 8 вес.%.

7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержание неионного поверхностно-активного вещества составляет от примерно 0,01 до примерно 5 вес.%, предпочтительно от 0,1 до 2 вес.%.

8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что неионное поверхностно-активное вещество выбрано из группы полисорбатов и, предпочтительно, является полисорбатом 80.

9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что весовое отношение фосфолипида к полисорбату находится между 15:1 и 9:1, предпочтительно между примерно 14:1 и примерно 12:1, например оно составляет примерно 13:1.

10. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что весовое отношение между фосфолипидом и неионным поверхностно-активным веществом, с одной стороны, и циклоспорином, с другой стороны, находится между 5:1 и 20:1, предпочтительно между 8:1 и 12:1 и, более предпочтительно составляет примерно 9:1.

11. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что весовое отношение между лецитином, неионным поверхностно-активным веществом и циклоспорином находится между примерно 15:1:1,5 и 5:0,3:0,5 и, предпочтительно составляет примерно 9:0,7:1.

12. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит липосомы со средним диаметром, равным максимально примерно 100 нм, и/или с индексом полидисперсности, равным максимально примерно 0,5.

13. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит, по меньшей мере, еще один активный агент.

14. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит один или более фармацевтических адъювантов, выбранных из стабилизатора, буферного агента, солей, веществ, регулирующих тоничность, антиоксидантов, ароматизаторов, агентов, улучшающих вкус, или подсластителей.

15. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она является стерильной и практически не содержит твердых частиц с диаметром более 3 мкм и, предпочтительно, не содержит твердых частиц активного агента, имеющих диаметр более 500 нм.

16. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она практически не содержит органических растворителей.

17. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она имеет величину динамической вязкости, равную, примерно, от 1 до, примерно, 3 мПа·с.

18. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она имеет осмоляльность, равную от, примерно, 150 до, примерно, 800 мосмол/л, предпочтительно от 250 до 600 мосмол/л.

19. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она имеет величину рН менее, примерно, 8,5, предпочтительно равную от, примерно, 2,5 до, примерно, 7,5.

20. Композиция по п.19, отличающаяся тем, что в нее введен буфер, являющийся фосфатным буфером с величиной рН в пределах от 6,7 до 7,5.

21. Способ получения композиции по любому из пп.1-20, включающий смешивание ингредиентов композиции и гомогенизацию под высоким давлением.

22. Применение композиции по любому из пп.1-20 для приготовления лекарственного средства для орального, назального, офтальмологического, легочного, парентерального, топического введения или для введения через слизистую оболочку.

23. Применение по п.22, отличающееся тем, что легочное или назальное введение осуществляют после превращения композиции в аэрозоль.

24. Применение по п.23, отличающееся тем, что композиция предназначена для ингаляции при помощи компрессорного струйного, ультразвукового или электронного небулайзера с колебательной мембраной.

25. Применение по п.22, отличающееся тем, что топическое нанесение осуществляют путем распыления композиции на кожу при помощи спрея.

26. Применение по п.22, отличающееся тем, что назальное, офтальмологическое введение или введение через слизистую осуществляют путем нанесения, закапывания или распыления композиции.

27. Применение композиции по любому из пп.1-20 для приготовления лекарственного средства для профилактики и лечения аутоиммунных заболеваний, кожных болезней, заболеваний органов чувств (глаз, носа, уха), недомогания и легочных болезней, в частности астмы, резистентной астмы, хронического обструктивного бронхита, паренхимной, фиброзной и интерстициальной легочной болезни или воспалений, рака легких и, предпочтительно, для профилактики и лечения острых и хронических реакций отторжения пересаженных органов после трансплантации легких, стволовых клеток, костного мозга сердца и других органов и заболеваний, развивающихся при этом, таких как облитерирующий бронхиолит.

28. Применение композиции по любому из пп.1-20 для приготовления лекарственного средства для профилактики и лечения кожных болезней, в особенности псориаза, нейродерматита, экземы или реакций отторжения после пересадки кожи.

29. Применение по пп.22, 27 или 28, отличающееся тем, что лекарственное средство применяют без премедикации.

30. Применение по п.29, отличающееся тем, что введение лекарственного средства осуществляют без премедикации местным анестетиком.

31. Применение по п.30, отличающееся тем, что местный анестетик представляет собой лидокаин.

32. Применение по п.29, отличающееся тем, что введение лекарственного средства осуществляют без премедикации бронхорасширяющим средством.

33. Применение по п.32, отличающееся тем, что бронхорасширяющим средством является сальбутамол.

34. Применение композиции по любому из пп.1-20 для повышения эффективности других лекарственных средств, при котором может быть достигнут аддитивный или синергический эффект.

35. Применение по п.28, отличающееся тем, что композиция является ингибитором выкачивающего насоса для повышения эффективности цитостатиков и других лекарственных веществ для лечения заболеваний легких, кожи и органов чувств.

36. Применение по п.22, отличающееся тем, что композицию вводят как часть комбинационной терапии с по меньшей мере одним или другим лекарственным веществом, при этом это другое лекарственное вещество предпочтительно представляет собой активный агент из группы иммуномодуляторов, интерферонов, стероидных и нестероидных противовоспалительных агентов, гепариноидов, бета-агонистов, антихолинергетиков, ингибиторов эндотелина и фосфодиэстеразы, антибиотиков, антимикотиков, противовирусных веществ и цитостатиков.

37. Контейнер, содержащий композицию по любому из пп.1-20, при этом контейнер выполнен преимущественно из пластика, имеет объем, равный 0,2-5 мл, и содержит удаляемый закрывающий элемент.

38. Контейнер по п.37, отличающийся тем, что после удаления закрывающего элемента контейнер может быть присоединен к элементу небулайзера для ввода жидкости, облегая его и герметизируя.

39. Контейнер по п.37, отличающийся тем, что он снабжен, по меньшей мере, одной насечкой для идентификации продукта, указания кода серии, срока годности и/или маркировки объема или дозировки.

40. Контейнер по п.37, отличающийся тем, что он представляет собой контейнер для многократного приема, выполненный из стекла или пластика, и композиция, содержащаяся в нем, предназначена для топического или системного применения.

41. Способ заполнения контейнера композицией по любому из пп.1-20, включающий заполнение в асептических условиях.

42. Способ получения аэрозоля путем распыления фармацевтической композиции по любому из пп.1-20 при помощи небулайзера.

43. Способ по п.42, отличающийся тем, что распыление 4 мг циклоспорина с получением капель размером менее 5 мкм проводят в течение менее 10 мин.

44. Способ по п.42, отличающийся тем, что скорость, с которой циклоспорин вдыхается из ротового отверстия, составляет 0,2-4 мг/мин и, более предпочтительно 0,5-1,5 мг/мин.

45. Способ по п.42, отличающийся тем, что количество капель размером менее 5 мкм находится в диапазоне между 50 и 98% и, более предпочтительно между 60 и 90%, а стандартное отклонение распределения капель по размерам составляет менее 2,2 и, предпочтительно менее 1,8.

46. Способ по п.42, отличающийся тем, что количество капель размером менее 3,5 мкм находится в диапазоне между 40 и 95% и, более предпочтительно между 50 и 85%.

47. Способ по п.42, отличающийся тем, что осаждение в легких составляет, по меньшей мере, 30% и отношение осаждения в центре легких к осаждению на периферии легких составляет от 30:70 до 70:30.

48. Способ по п.42, отличающийся тем, что доза, вдыхаемая из ротового отверстия, составляет более 40% от дозы активного агента, помещенного в небулайзер.

49. Способ по п.42, отличающийся тем, что остаток активного агента в небулайзере составляет менее 20% и, более предпочтительно менее 10%.

50. Способ по п.42, отличающийся тем, что время распыления составляет менее 15 мин и, более предпочтительно менее 10 мин.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к жидким фармацевтическим препаратам, которые содержат в качестве активного агента циклоспорин, а также вещества с похожими физическими, химическими и терапевтическими свойствами, и которые пригодны для орального, парентерального, назального, глазного, топического применения, введения через слизистую оболочку и, в особенности, введения в легкие. Другие аспекты изобретения относятся к контейнерам для упаковки и введения препаратов и их концентратов. Кроме того, данное изобретение относится к фармацевтическому применению препаратов и их применению для лечения конкретных заболеваний.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Циклоспорин представляет собой циклический олигопептид с иммунодепрессивной и кальциневриновой ингибирующей активностью. Он характеризуется селективным и обратимым механизмом иммунодепрессивности. Он селективно блокирует активацию Т-лимфоцитов за счет продуцирования некоторых цитокинов, которые принимают участие в регуляции этих Т-клеток. В частности, это включает ингибирование синтеза интерлейкина 2, что, в то же самое время, подавляет пролиферацию цитотоксических Т-лимфоцитов, которые являются ответственными, например, за отторжение инородных тканей. Циклоспорин действует внутриклеточно при связывании с так называемыми циклофилинами или иммунофилинами, которые относятся к семейству белков, которые связывают циклоспорин с высокой степенью сродства. Затем комплекс циклоспорина и циклофилина блокирует серин - треонин - фосфатазу - кальциневрин. Его активное состояние, в свою очередь, регулирует активацию факторов транскрипции, таких как NF-каппа В или NFATp/c, которые играют решающую роль в активации различных генов цитокинов, включая интерлейкин-2. Это приводит к угнетению иммунокомпетентных лимфоцитов во время фазы GO или фазы G1 клеточного цикла, так как эти белки являются существенными для деления клеток, например, интерлейкин-2 не может больше образовываться. Клетки Т- хелперы, которые повышают активность цитотоксических Т-клеток, являющихся ответственными за отторжение, являются предпочтительным местом для атаки циклоспорина.

Кроме того, циклоспорин ингибирует синтез и высвобождение других лимфокинов, которые ответственны за пролиферацию зрелых цитотоксических Т-лимфоцитов и за другие функции лимфоцитов. Способность циклоспорина блокировать интерлейкин-2 является критической для его клинической эффективности: реципиенты трансплантатов, которые толерантны по отношению к их трансплантатам, характеризуются низким продуцированием интерлейкина-2. Пациенты с проявляющими реакциями отторжения, напротив, не характеризуются ингибированием образования интерлейкина-2.

Первым и до сих пор единственным циклоспорином, появившимся на рынке (в 1980-е годы) был циклоспорин-А. Циклоспорин-А с химической точки зрения представляет собой цикло- [[(Е)-(2S, 3R, 4R)-3-гидрокси-4-метил-2-(метиламино)-6-октеноил]-L-2-аминобутирил-N-метилглицидил-N-метил-L-лейцил-L-валил-N-метил-L-лейцил-L-аланил-D-аланил-N-метил-L-лейцил-N-метил-L-лейцил-N-метил-L-валил]. Его доступность открыла новую эру в трансплантологии, так как с его помощью количество трансплантированных органов, которые остаются действующими в течение продолжительного времени, может быть значительно увеличено.

Первое лекарственное вещество на основе циклоспорина (Sandimmun фирмы Sandoz) уже смогло повысить успешные результаты при трансплантации почек примерно в 2 раза. Новый пероральный препарат циклоспорина (Neoral фирмы Sandoz, позже Novartis) с более высокой и более надежной биодоступностью позволил достигнуть лучшей дозировки и еще более увеличить успешные результаты, начиная с 1990-х годов. Несмотря на некоторые новые достижения в создании активных агентов, циклоспорин все еще остается часто применяемым в трансплантологии агентом.

В настоящее время трансплантация легких в принципе может протекать успешно, если пациенты подвергаются лечению циклоспорином-А. Со времени введения этого активного агента в клиническую терапию количество трансплантаций легких по всему миру резко возросло. Это справедливо как для трансплантации одного легкого, так и для трансплантации обоих легких. Трансплантацию легких обычно назначают пациентам с терминальной стадией легочной болезни, когда медицинская терапия потерпела поражение и возможность выживаемости мала из-за болезни. Например, трансплантация одного легкого показана в случае некоторых форм эмфиземы и фиброза, такого как идиопатический фиброз легких.

Трансплантацию обоих легких осуществляют в случае муковисцидоза, первичной гипертензии легких, эмфиземы с общей легочной недостаточностью, частых тяжелых инфекций, а также идиопатического фиброза легких с осложнениями в виде повторяющихся инфекционных заболеваний.

В случае успешной трансплантации легких качество жизни пациентов может быть снова повышено до почти нормального уровня. Однако в отличие от трансплантации сердца, почек и печени время дожития после трансплантации легких все еще остается довольно коротким и в среднем составляет только 5 лет. Среди прочих факторов это может быть обусловлено тем фактом, что активный агент циклоспорин нельзя эффективно дозировать всем пациентам из-за системных побочных эффектов, таких как нарушение функции почек, повышенное содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови, поражение почек со структурными изменениями, например интерстициальный фиброз, повышенные уровни билирубина и печеночных ферментов в сыворотке, гипертрихоз, тремор, утомляемость, головная боль, гипертрофический гингивит, заболевания желудочно-кишечного тракта, например анорексия, боль в животе, тошнота, рвота, диарея, гастрит, гастероэнтерит, парестезия, чувство жжения на руках и ногах, артериальная гипертензия, повышенный уровень жиров в крови, акне, сыпь, аллергические реакции на коже, гипергликемия, анемия, гиперурикемия, подагра, возрастающий вес тела, эдемы, язва желудка, судороги, менструальные расстройства, гиперкалиемия, гипермагниемия, приливы, эритема, зуд, спазмы в мышцах, мышечная боль, миопатия и т.д.

Следовательно, желательно, если, например, в случае трансплантации легких или в случае некоторых других показаний, циклоспорин-А можно было вводить целенаправленно и специфически по отношению к тканям и так, чтобы проявлялась только небольшая системная биодоступность активного агента для сведения к минимуму воздействия активного агента на здоровую ткань.

Подходящая лекарственная форма может быть также применена для лечения и профилактики болезней, таких как астма, идиопатический фиброз легких, саркоидоз, альвеолит и паренхимные заболевания легких (см. Drugs for the treatment of respiratory diseases, edited by Domenico Spina, Clive p.Page et. al., Cambridge University Press, 2003, ISBN 0521773210). Новые терапевтические аспекты также предусматривают топическое лечение возможных аутоиммунных болезней, таких как нейродерматит, псориаз, неспецифические экземы, пролиферация или мутация клеток кожи и лечение после трансплантации кожи. Интересной областью применения является офтальмология, например лечение после трансплантации роговицы, лечение кератоконъюнктивита или других инфекционных глазных болезней, которые недостаточно отвечают на противовоспалительную терапию, например, при помощи стероидов. Эта форма пригодна также для лечения кератидов у животных, например у собак.

В действительности были сделаны попытки применять циклоспорин локально, например, в виде масляных глазных капель с концентрацией, равной 1% и 2% (состав согласно Немецкому кодексу лекарств (German codex of medicines) с применением в качестве стабилизатора очищенного арахисового масла) или в виде аэрозоля. Однако этот подход обычно приводит к поражению, в основном из-за очень низкой растворимости активного агента в воде, что очень затрудняет эффективное введение лекарства. Таким образом, в случае легочного применения некоторые добавки для солюбилизации, которые можно применять в случае перорального введения, нельзя использовать из-за отсутствия переносимости. Например, капсулы Sandimmun Optoral (Novartis), которые включают циклоспорин-А, содержат концентрат микроэмульсии с этанолом, пропиленгликолем и значительными количествами поверхностно-активных веществ и поэтому являются составом, который в случае ингаляции вызывает серьезные токсические эффекты.

Кроме того, концентрат раствора для инфузии Sandimmun® (Novartis), который доступен для инфузии, нельзя вводить путем ингаляции. Единственные адъюванты, содержащиеся в нем, представляют собой этанол и полиоксиэтилен-40 касторовое масло. Его можно применять для инфузии только потому, что он предварительно разбавляется 0,9%-ным раствором хлорида натрия или 5%-ным раствором глюкозы в отношении от 1:20 до 1:100.

В заявке WO 00/45834 предложена ингаляция аэрозоля на основе циклоспорина для профилактики или лечения реакций отторжения после трансплантации легких. Рекомендуется вводить в легкие дозу циклоспорина, равную 15-30 мг. Носитель, который должен применяться для активного агента, представляет собой пропиленгликоль, который в такой высокой концентрации вызывает значительное раздражение, что вызывает необходимость ингаляции раствора лидокаина пациентам для местной анестезии перед введением препарата на основе циклоспорина. Недавнее исследование (Akkar et al., Poster presentation at NACF, 2005) показывает, что в зависимости от концентрации пропиленгликоль приводит к гибели клеток Calu-3, что представляют признанную модель для клеток эпителия легких (Steimer et al. Jour. Aerosol. Med. 18 (2), pp.137-182, 2005). Следовательно, по физиологическим причинам было бы желательно иметь преимущественно водный препарат.

В заявке ЕР 0294239 A1 описан водный препарат циклоспорина для легочного применения. Для увеличения растворимости препарат содержит -циклодекстрин. Однако эффект солюбилизации является слишком слабым для эффективной ингаляции: достигаемые концентрации циклоспорина составляют только от 0,1 до 2,0 мг/мл, в частности от 0,2 до 1,5 мг/мл. Это означает, что введение единичной дозы, равной 20 мг в легкие, занимает несколько часов при применении обычного небулайзера.

В заявке ЕР 0504760 А1 описана особая орторомбическая кристаллическая форма циклоспорина-А, которая, как говорится, особенно пригодна для ингаляции. Однако это относится только к ингаляции порошковой формы или к препаратам, содержащим дисперсию активного агента, но не к водным растворам для небулайзеров.

Порошковые ингаляторы, однако, требуют сравнительно большого объема вдыхания и плохо подходят для эффективного лечения пациентов с заболеваниями легких. Более того, известно, что количества порошка более 20 мг часто вызывают кашель и что вдыхаемая фракция большинства порошковых смесей снижается с увеличением концентрации носителя, такого как лактоза или трегалоза. Кроме того, ввиду наличия всех известных in vitro данных кажется сомнительным, что очень плохо растворимый активный агент, будучи введен в легкие в виде суспендированных частиц, будет растворяться в том количестве слизи, которое имеется в легких, в значительной степени, что является условием для терапевтической эффективности. То же самое верно, в принципе, и для заявки WO 99/42124, в которой описан аморфный жидкий кристаллический циклоспорин.

В заявке WO 95/24892 описан препарат циклоспорина с газообразным пропеллентом, который нужно вводить в виде дозируемого аэрозоля. Однако дозируемые аэрозоли в течение многих лет критиковали за то, что они вносят вклад в глобальное потепление и поэтому неизвестно, будут ли признаны на рынке аэрозоли, содержащие газообразные пропелленты. То же относится и к заявке WO 98/01147. Известно также, что вдыхаемая фракция уменьшается, если активные агенты применяются в концентрациях более 1 мг/вдох, и, кроме того, точность дозирования in vivo сильно меняется. При осаждении в легких только 10% в случае дозируемых аэрозолей можно сделать вывод, что потребуется более 50 вдохов, чтобы произошло осаждение терапевтически релевантных концентраций циклоспорина в периферических областях легких.

В заявке WO 98/00111 предложена липосомная дисперсия циклоспорина-А для ингаляции, которая содержит очень высокую концентрацию фосфолипида - до 225 мг/мл. Однако она имеет такую высокую динамическую вязкость, что нельзя эффективно применять небулайзер.

Липосомный препарат циклоспорина-А известен также из заявки US 2003/ 0215494; изобретение, описанное в этой заявке, основывается на том факте, что такой препарат нужно применять для ингибирования метастазов в легких. Эта заявка не вносит вклад в решение технической проблемы создания препарата активного агента, который более пригоден для ингаляции.

В патенте США № 5958378 описаны липосомные препараты на основе циклоспорина для небулизации; однако их вязкость так высока, что они не могут быть распылены при помощи электронного небулайзера с колебательной мембраной. Более того, в препарате использован органический растворитель бутанол, но, несмотря на последующий процесс лиофилизации, он не может быть полностью удален и обеспечивает получение липосом с размером >1 мкм, которые не могут быть стерилизованы путем фильтрации и которые имеют только небольшую способность проникать через мембраны эпителиальных клеток.

Обычные нелипосомные топические препараты, например кремы, мази или лосьоны, не обладают достаточной топической эффективностью при лечении кожных заболеваний, таких как нейродерматит или псориаз, так как эффект проникновения является недостаточным из-за образования отложений на эпидермисе и его ороговения. Известно также, что в некоторых случаях этих заболеваний даже липосомные препараты не всегда обеспечивают эффективное проникновение через кожу и в зависимости от конкретного состава и размера и природы липосом приводят только к незначительным улучшениям.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью данного изобретения является получение композиции, содержащей циклоспорин, которая устраняет недостатки составов, известных из уровня техники.

Эта цель достигается путем создания композиции по п.1 формулы изобретения. Другие растворы и варианты указаны в других пунктах формулы изобретения.

Согласно данному изобретению композиция представляет собой жидкий водный препарат, который содержит терапевтически эффективную дозу циклоспорина, первое способствующее растворению вещество, выбранное из группы фосфолипидов, и второе способствующее растворению вещество, выбранное из группы неионных поверхностно-активных веществ. Особенно предпочтительным циклоспорином является циклоспорин А.

Композиция предпочтительно содержит активный агент циклоспорин в липосомально солюбилизированной форме. Липосомы, которые в основном образуются фосфолипидом, содержащимся в композиции, предпочтительно представляют собой униламеллярные липосомы. Эти липосомы преимущественно имеют средний диаметр, равный максимум примерно 100 нм, измеренный как средний Z - диаметр при помощи Malvern ZetaSizer, и индекс полидисперсности, равный максимум примерно 0,5, предпочтительно равный максимум примерно 0,4.

Липосомы предпочтительно получают с водой в качестве жидкого носителя и без органических растворителей. Процесс получения, по существу, предпочтительно является изотоническим и не оказывает отрицательного влияния на трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER) в модели легочных эпителиальных клеток Calu-3, что является мерой переносимости активного агента и состава по отношению к действию на жизнеспособность клеток, и в легочных клетках человека композиция не приводит к значительному увеличению количества интерлейкина-8, биомаркера воспаления.

В контексте данного изобретения фармацевтическая композиция представляет собой препарат на основе по меньшей мере одного активного агента и по меньшей мере одного адъюванта, которым в простейшем случае может быть, например, носитель, такой как вода. Активный агент является веществом или смесью веществ, которое/которые пригодно (пригодны) для непосредственной или косвенной активации или поддержания здоровья или благосостояния животного или человека. Активный агент может выполнять диагностическую, терапевтическую или профилактическую функцию, обычно в организме животного или человека или на поверхности тела животного или человека, иногда, например, in vitro, например, в контакте с выделенными частями организма, такими как клетки или жидкости из организма.

В данном случае препарат представляет собой предпочтительно коллоидный водный раствор без органического растворителя, состоящий из униламеллярных липосом, имеющих диаметр, равный максимум 100 нм, в котором активный агент, по меньшей мере преимущественно, находится в растворенном состоянии. Предпочтительно, чтобы вода была единственным жидким растворителем, содержащимся в препарате. Кроме того, предпочтительно, чтобы препарат являлся водным раствором или водным коллоидным раствором, то есть однофазной жидкой системой. Такая система, по существу, не содержит диспергированных частиц, размер которых больше, чем у коллоидных частиц. Для удобства частицы с размером менее примерно 1 мкм рассматриваются как коллоидные частицы, которые не образуют отдельную фазу и не приводят к образованию границы между физическими фазами. Иногда частицы размером немного более 1 мкм также рассматриваются как коллоидные. Однако предпочтительно, когда композиция по изобретению, по существу, не содержит частиц, которые не относятся четко к ряду коллоидных частиц, а именно частиц, которые, например, имеют диаметр, равный 1 мкм или более.

Композиция содержит терапевтически эффективную дозу циклоспорина, который предпочтительно представляет собой циклоспорин-А. Циклоспорин-А с химической точки зрения представляет собой цикло-[[(Е)-(2S, 3R, 4R)-3-гидрокси-4-метил-2-(метиламино)-6-октеноил]-L-2-аминобутирил-N-метилглицидил-N-метил-L-лейцил-L-валил-N-метил-L-лейцил-L-аланил-D-аланил-N-метил-L-лейцил-N-метил-L-лейцил-N-метил-L-валил] и является циклическим пептидом с иммуносупрессорной активностью. В этом контексте термин "терапевтически эффективный" включает также профилактическую активность. Терапевтическую дозу следует определять в зависимости от индивидуального случая применения. В зависимости от природы и тяжести заболевания, метода введения, а также роста и состояния пациента терапевтическую дозу определяют методом, известным среднему специалисту в данной области. Некоторые общие советы по выбору дозы содержатся, например, в обзоре свойств продуктов, продаваемых под торговым названием Sandimmun® фирмы Novartis Pharma AG, которые также являются препаратами, содержащими циклоспорин-А. Однако данное изобретение также применяется для введения циклоспорина такими путями, которые не использовались до сих пор, в частности путем ингаляции после распыления препарата при помощи подходящего небулайзера, при этом необходимо адаптировать дозу активного агента к такому применению обычными методами. Кроме того, препарат по изобретению может в той же или более низкой концентрации применяться топически или распыляться на поверхность кожи, или же его можно закапывать в глаз или в ухо.

Неожиданно было установлено, что в виде водного жидкого препарата циклоспорин может быть эффективно солюбилизирован, его вкус может быть при этом замаскирован фосфолипидом и неионным поверхностно-активным веществом, а в некоторых случаях его стабильность может быть повышена.

Таким образом, согласно изобретению препарат содержит, помимо циклоспорина и воды, фосфолипид или смесь фосфолипидов, такую как например, Lipoid S 100 или Phospholipon G90, и неионное поверхностно-активное вещество, которым предпочтительно является полисорбат, особенно полисорбат 80.

Это второе поверхностно-активное вещество действует синергически с фосфолипидом и тоже повышает настоящую или коллоидную водную стабильность циклоспорина, содержащегося в препарате в статистически значимой степени. Поверхностно-активное вещество является амфифильным или поверхностно-активным веществом или смесью веществ с поверхностно-активными свойствами.

Поверхностно-активные вещества содержат, по меньшей мере один, скорее гидрофильный и, по меньшей мере один, скорее липофильный, участки молекулы. Существуют мономерные, низкомолекулярные поверхностно-активные вещества и поверхностно-активные вещества, имеющие олигомерную или полимерную структуру. Кроме того, имеется различие между ионной и неионной природой поверхностно-активных веществ. Примерами подходящих поверхностно-активных веществ в смысле данного изобретения являются алкиловые эфиры полиоксиэтилена, эфиры жирных кислот и полиоксиэтиленсорбитана, такие как, например, полиоксиэтилен сорбитанолеат, эфиры жирных кислот и сорбитана, полоксамеры, витамин Е-TPGS (D- -токоферил полиэтиленгликоля 1000 сукцинат) и тилоксапол (tyloxapol).

В настоящее время предпочтительные фосфолипиды представляют собой, в частности, смеси природных или обогащенных фосфолипидов, например лецитины, такие как коммерчески доступный Phospholipon G90, 100 или Lipoid 90, S 100. К неионным поверхностно-активным веществам относятся полисорбаты и витамин-TPGS, они являются предпочтительными, особенно полисорбат 80.

Фосфолипиды являются амфифильными липидами, которые содержат фосфор. Известные также как фосфатиды, они играют важную роль в природе, особенно как компоненты, образующие двойные слои в биологических мембранах, и часто применялись для фармацевтических целей такие фосфолипиды, которые получены на основе фосфатидовой кислоты. Последняя представляет собой (обычно двойной) ацилированный глицерол-3-фосфат, в котором остатки жирной кислоты могут быть разной длины. Производными фосфатидовой кислоты являются, например, фосфохолины или фосфатидилхолины, в которых фосфатная группа дополнительно этерифицирована холином, а также фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитолы и т.д. Лецитины представляют собой природные смеси различных фосфолипидов, которые обычно содержат большое количество фосфатидилхолинов. Предпочтительными фосфолипидами по изобретению являются лецитины, а также чистые или обогащенные фосфатидилхолины, такие как димиристоилфосфатидилхолин, дипальмитоил фосфатидилхолин и дистеароилфосфатидилхолин.

Согласно другому предпочтительному варианту данного изобретения могут быть добавлены приемлемые с токсикологической точки зрения стабилизаторы и антиоксиданты, например натровая соль этилендиаминотетрауксусной кислоты (Na-EDTA, токоферолы), изотонирующие добавки, такие как хлорид натрия, маннит, трегалоза или буферные соли (цитрат, карбонат, фосфат, борат и т.д.), агенты, корректирующие вкус, например сахарин или мятное масло.

Количественный состав обычно зависит от медицинского назначения. В общем, выбранное содержание циклоспорина колеблется в пределах между 0,2 и 20 мг/мл, предпочтительно между 0,5 и 10 мг/мл, более предпочтительно между примерно 1 и 5 мг/мл, наиболее предпочтительно между 1 и 4,5 мг/мл. Для лечения астмы предлагаются более низкие дозы, которые могут быть в пределах от 0,25 до 5 мг/мл. Для того чтобы поддерживать время распыления в компрессорном, струйном или электронном небулайзере, таком как, например, Аеr X, AeroNeb Go, Omron U22 или EFlow, как можно более коротким, предпочтительно применять небольшие объемы растворов (<2 мл) с более высокими концентрациями. При особенно предпочтительном применении препарата, а именно в виде раствора для ингаляции, для профилактики и лечения в случае отторжения трансплантата легких, желательно и, в интересах достаточной переносимости пациентами, необходимо, чтобы содержание циклоспорина было как можно больше, а время ингаляции, таким образом, как можно меньше. Предпочтительно, чтобы содержание циклоспорина, особенно в случае циклоспорина А, составляло, по меньшей мере, примерно 0,5 мг/мл, например от 0,5 до 10 мг/мл. Содержание, равное 1-5 мг/мл, даже лучше и может быть достигнуто при использовании данного изобретения. Согласно еще одному предпочтительному варианту композиция в случае топического нанесения на кожу или при закапывании в глаз или в ухо содержит циклоспорин А в количестве 0,1-2%, а для профилактики и лечения респираторных заболеваний - в количестве 1,5-5 мг/мл или более, например в количестве примерно 5-10 мг/мл.

Требуемое содержание поверхностно-активных добавок зависит от содержания циклоспорина А. Если солюбилизируется циклоспорин А в более низких концентрациях порядка 0,5-1% активного агента, содержание лецитина/поверхностно-активного вещества должно быть пропорционально снижено. В общем содержание фосфолипида в композиции должно лежать в пределах между примерно 0,2 и примерно 15 вес.% и, предпочтительно, в пределах от примерно 1 до примерно 8 вес.%.

Неионное поверхностно-активное вещество должно содержаться в концентрации, равной от примерно 0,01 до примерно 5 вес.%, и, предпочтительно, в пределах от 0,1 до 2 вес.%, особенно в случае, когда выбран полисорбат, например полисорбат 80.

Весовое отношение фосфолипида или фосфолипидного компонента к неионному поверхностно-активному веществу является особенно важным при определении количества циклоспорина, которое может быть солюбилизировано на единицу объема. Предпочтительным является отношение между примерно 15:1 и 9:1, особенно между примерно 14:1 и 12:1, то есть, например, примерно 13:1. Это предпочтительное отношение применяется также, в частности, в случае, когда в качестве неионного поверхностно-активного вещества выбран полисорбат, такой как, например, полисорбат 80.

Выбранное весовое отношение между двумя солюбилизирующими компонентами добавки, а именно фосфолипидом и неионным поверхностно-активным веществом, с одной стороны, и циклоспорином, с другой стороны, обычно составляет от примерно 5:1 до примерно 20:1. Согласно предпочтительным вариантам отношение составляет примерно от 8:1 до примерно 12:1, например, оно равно примерно 10:1.

В особенно предпочтительной композиции отношение циклоспорина А к смеси Lipoid S 100/поверхностно-активное вещество составляет 1:9, а содержание солюбилизированного циклоспорина А составляет до 0,5 вес.%, что обеспечивает следующее отношение смесь: циклоспорин:Lipoid S 100:полисорбат 80, равное 1:9:0,69, при этом получаются униламеллярные липосомы с содержанием циклоспорина, в общем, равным примерно 4-6 вес.%, например примерно 5 вес.%.

В следующей таблице приведены некоторые примеры количеств компонентов, при которых циклоспорин А может быть оптимально солюбилизирован в липосомной форме.

Циклоспорин А	Lipoid S 100	Polysorbate 80	Очищенная вода	NaCl
0.1%	0.9%	0.07%	98.77%	8%
1%	9.0%	0.7%	87.7%	8%
5%	45%	3.5%	38.5%	8.0%

Композиция по изобретению имеет то преимущество, что она может содержать довольно большое количество плохо растворимого циклоспорина в солюбилизированной форме. В то же самое время, вкус циклоспорина замаскирован, что имеет особое преимущество во всех оральных, назальных и легочных формах и при введении через слизистую оболочку рта, а также в случае особенно предпочтительного применения препарата для получения медикамента для топической терапии кожи, для введения в глаз, нос и ухо и особенно для профилактики или лечения отторжения трансплантатов легких путем ингаляции.

Композиция может содержать дополнительные фармацевтические адъюванты, которые являются полезными и общеупотребительными для намеченного применения. Подходящие адъюванты известны специалистам в данной области. Например, композиция может содержать агенты, корректирующие величину рН, для регулирования рН, такие как физиологически приемлемые основания, кислоты или соли, возможно, в виде буферных смесей. В этом контексте термин "физиологически приемлемые" не означает, что один из адъювантов должен быть сам по себе переносимым и в неразбавленной форме, что не имеет место, например, для раствора гидроокиси натрия, но означает, что он должен переноситься пациентом в той концентрации, в которой он содержится в препарате.

Подходящие для регулировки рН агенты, корректирующие рН, могут быть выбраны, наряду с прочим, с учетом намеченного пути введения. Примеры потенциально пригодных адъювантов этой группы включают раствор гидроокиси натрия, основные натриевые, кальциевые или магниевые соли, такие как, например, цитраты, фосфаты, ацетаты, тартраты, лактаты и т.д., аминокислоты, кислые соли, такие как кислые фосфаты или дигидрофосфаты, особенно такие соли натрия, кроме того, органические и неорганические кислоты, такие как, например, соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, кромоглициновая кислота, уксусная кислота, молочная кислота, винная кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, лизин, метионин, кислые гидрофосфаты натрия или калия и т.д.

Согласно одному из предпочтительных вариантов данного изобретения препарат имеет - с агентом, корректирующим рН, или без него - нейтральный или кислый рН. Предпочтительно, чтобы величина рН была равна максимум 8,5 или находилась в пределах от примерно 2,5 до примерно 7,5. В случае введения в легкие или парентерального введения величина рН, равная примерно от 4 до 7,5, является предпочтительной при условии, что она совместима с другими требованиями к составу, например, в отношении стабильности. Особенно предпочтительна композиция, в которой содержится фосфатный буфер с величиной рН в пределах от 6,7 до 7,5 и особенно в пределах от 6,7 до 7,3, при этом стабильность липосомного состава может быть значительно повышена и образование нежелательного лизолецитина во время хранения значительно уменьшено (см. Пример 4).

Кроме того, препарат может содержать осмотически активные добавки, чтобы регулировать осмоляльность до желаемой величины, что важно для некоторых областей применения, таких как парентеральная инъекция или ингаляция, или другие локальные применения для того, чтобы достичь хорошей переносимости. Такие адъюванты часто называются изотоническими агентами, даже если их добавление не обязательно приводит к получению изотонической композиции, а обеспечивает состояние, близкое к изотоническому и к физиологической осмоляльности для достижения наиболее возможно лучшей физиологической переносимости.

Особенно часто применяемым придающим изотоничность агентом является хлорид натрия, но он не пригоден для любого случая. Согласно преимущественному варианту изобретения препарат не содержит хлорида натрия, за исключением, конечно, количеств повсеместного хлорида натрия, который может также находиться в воде фармацевтического качества. Согласно другому варианту препарат содержит практически нейтральную соль в качестве изотонического агента, которая не является хлоридом натрия, но, например, представляет собой сульфат натрия или фосфат натрия. Однако в этом случае даже более предпочтительными являются соли, отличающиеся от солей натрия. Так, известно, что некоторые соли кальция и магния оказывают положительное или поддерживающее действие при ингаляции растворов активного агента, возможно потому, что они сами по себе противодействуют местным раздражениям, вызываемым введением активного агента, и потому, что они расширяют бронхи, что указывается в клинической литературе (например, Hughes et al., lancet, 2003; 361 (9375): 2114-7), и/или потому, что они ингибируют адгезию возбудителей инфекции к протеогликанам слизистой оболочки респираторного тракта, при этом косвенно поддерживается клиренс реснитчатого эпителия как природной защиты организма от патогенов (K.W.Tsang et al., Eur. Resp. 2003, 21, 932-938). Предпочтительными являются, например, сульфат магния, который обладает превосходной легочной переносимостью и может использоваться спокойно для ингаляции, а также хлорид кальция (1-10 ммоль).

В качестве альтернативы нейтральным минеральным солям, как изотонические агенты могут применяться физиологически приемлемые органические адъюванты. Особенно пригодными являются водорастворимые вещества со сравнительно низкими молекулярными весами, например с молекулярной массой менее 300 или, более предпочтительно, менее 200 и имеющие, соответственно, высокую осмотическую активность. Примеры таких адъювантов представляют сахара и сахарные спирты, в частности маннит и сорбит, ксилит, трегалоза.

Количества изотонизирующего агента должно регулироваться таким образом, чтобы с учетом других компонентов, содержащихся в композиции, осмоляльность составляла, по меньшей мере 150 мосмол/л. Согласно другим вариантам предпочтительна осмоляльность в пределах от примерно 150 до 800 мосмол/л. По еще другому варианту препарат имеет осмоляльность от около 250 до около 600 мосмол/л или от около 250 до 400 мосмол/л.

Если содержание циклоспорина является таким высоким, как только возможно и если, соответственно, должно быть применено довольно большое количество адъювантов, повышающих растворимость, можно предположить, что даже без добавления отдельного агента, регулирующего изотоничность, осмоляльность композиции уже будет находиться в желаемых пределах или выше этих пределов и применение изотонического агента не будет необходимым.

Так как композиция в качестве агентов, улучшающих растворимость, содержит поверхностно-активные вещества, это, несомненно, будет влиять на поверхностное натяжение препарата. Это может быть особенно релевантным в случае введения в легкие. Согласно предпочтительному варианту препарат в стандартных условиях, т.е. при комнатной температуре и нормальном давлении, имеет поверхностное натяжение от примерно 25 до 75 мН/м, что обеспечивает эффективное распыление с высокой долей вдыхаемых капель, имеющих диаметр, равный максимум 5 мкм, при применении обычных небулайзеров.

Однако, если препарат должен быть адаптирован для применения в небулайзерах специального типа, поверхностное натяжение можно регулировать до специальных величин, например до величин от примерно 30 до примерно 65 мН/м. Более предпочтительной является величина поверхностного натяжения от примерно 30 до примерно 45 мН/м, хотя это не всегда может быть достигнуто, если другие параметры состава являются более первостепенными. С другой стороны, величина поверхностного натяжения не должна быть меньше примерно 25 мН/м.

Поверхностное натяжение, величина которого снижена путем введения поверхностно-активных веществ, может способствовать распределению аэрозоля в легких, что, в свою очередь, оказывает положительное влияние на эффективность введения.

В случае введения путем ингаляции вязкость композиции также может иметь значение. Согласно варианту, который является предпочтительным для распыления, композиция по изобретению имеет динамическую вязкость, в стандартных условиях равную примерно от 1,0 до 3,0 мПа·с. Согласно другому варианту величина вязкости находится в пределах между 1,2 и 2,0 мПа·с.

Кроме того, препарат может содержать другие обычные адъюванты, такие как стабилизаторы, антиоксиданты, агенты, улучшающие вкус, ароматизаторы, подсластители, красители и т.д., которые доступны специалистам в данной области при получении препаратов, в зависимости от предполагаемого применения.

Липосомный препарат по изобретению может быть получен путем гомогенизации при высоком давлении. Например, водорастворимые компоненты можно применять в виде водного раствора, в котором диспергирован циклоспорин, и липосомы затем образуются в процессе гомогенизации при высоком давлении, при этом размер и индекс полидисперсности липосом можно регулировать, меняя величину давления и количество циклов.

Композиция или концентрат согласно изобретению подаются в контейнеры с одной дозой или множеством доз, предпочтительно в асептических условиях. Подходящими контейнерами являются, например, флаконы из полипропилена или полиэтилена (РР-РЕ-флаконы) и блистеры из сополимеров циклоолефинов (СОС-блистеры) или блистеры из полиэтилентерефталата (РЕЕТ-блистеры). Или же можно применять контейнеры, изготовленные из других полимеров или сополимеров, которые пригодны для переработки по технологии упаковка/розлив (выдув-наполнение- запаивание) или методом переработки термопластов. Запаянные контейнеры из пластика, такие как флаконы из РР или РЕ, могут быть изготовлены, наполнены и запаяны, например, при осуществлении интегрированного процесса, включающего выдув - наполнение - запаивание. Полученные таким образом контейнеры особенно пригодны для жидких продуктов, имеющих объем, равный примерно 0,2 мл или более, и маленькие объемы хорошо подходят для закапывания в глаз или в ухо. Для применения в небулайзере или для локального нанесения на кожу, где требуются изменяющиеся количества активных агентов, для идеального заполнения контейнера годятся объемы от 0,2 до 5 мл, предпочтительно от 0,5 до 5 мл. Для оптимального удобства для пациентов они могут быть снабжены крышкой, которая может быть удалена откручиванием или путем отгибки кромок и которая изготовлена так, чтобы не иметь острых краев и позволить осуществить капельное, хорошо дозируемое высвобождение жидкости.

Или же отверстие, через которое может выходить жидкость, может быть изготовлено таким образом, чтобы оно подходило для соединения типа Люэр (Luer) или для соединения при помощи насадки Люэра. Так, отверстие может быть круглым и иметь диаметр, который практически соответствует внешнему диаметру соединения Люэра с наружной резьбой. Таким образом, обычный шприц с соединением Люэра может быть плотно соединен с контейнером, например, для того, чтобы отобрать содержимое контейнера и перенести его в небулайзер или для того, чтобы перемешать содержимое контейнера с содержимым шприца и затем переместить смесь в небулайзер. Как еще одна альтернатива, контейнер из пластика может иметь такую конфигурацию, которая после удаления крышки позволяет плотно присоединить его к элементам для ввода жидкости соответствующим образом адаптированного небулайзера, чтобы осуществить непосредственную передачу препарата в резервуар ингалятора.

Пластиковые контейнеры этого типа также имеют преимущество, состоящее в том, что они могут быть легко снабжены рельефной насечкой, которая позволяет слепым людям идентифицировать продукт. Это дает возможность избежать применения бумажных этикеток, что желательно для предотвращения миграции компонентов клея, бумаги или печатной краски через стенку контейнера в препарат. Кроме того, при наличии такой насечки может быть сделана доступной информация для пациентов с ослабленным зрением. Насечка может содержать различную информацию, например, о серии, сроке годности препарата, идентификации продукта, инструкцию о применении или маркировку о наличии одной или многих доз и объемах. Особенно в случае педиатрических пациентов, когда желательна гибкая схема приема согласно возрасту и росту, указание объемов может служить для облегчения высвобождения желательной дозы, что уменьшает риск ошибок при дозировании.

Согласно еще одному варианту изобретения изготавливаются контейнеры с множеством доз, которые содержат препарат, описанный выше, и имеют такую конфигурацию, что они позволяют осуществить асептическое высвобождение одной дозы. Так, контейнер, содержащий множество доз, может быть стеклянным или пластиковым, например флаконом или сосудом для инфузии, имеющими крышку, изготовленную из эластомера, которую можно проткнуть канюлей, или может быть сложный контейнер, включающий дозирующее устройство типа, используемого для назальных спреев без консервантов, при этом препарат по изобретению не должен содержать консервант и его можно распылять в нос или в другие полости тела или на поверхность кожи, как известно при лечении ног спортсменов. Спрей без консерванта имеет большие преимущества, особенно при лечении псориаза или нейродерматита, так как липосомы могут быть при этом нанесены на поврежденную или воспаленную кожу однородно и с соблюдением гигиены.

Одним из преимуществ контейнеров с множеством доз в случае препаратов для ингаляции является гибкость, которая дает возможность регулировать дозировку без проблем и без необходимости расхода значительных количеств препарата, что имеет место в случае контейнеров с единичной дозой после их открытия. В больницах и организациях здравоохранения при этом можно одновременно осуществлять лечение пациентов особенно эффективно и, возможно, при снижении расходов при индивидуальном дозировании. Особые требования при лечении индивидуальных пациентов могут, таким образом, быть легко приняты во внимание.

Если композиция не может быть стерилизована в последнем контейнере, ее предпочтительно вводить в контейнер в асептических условиях.

Для применения аэрозолей препарата в принципе можно применять любой небулайзер, используемый в терапии. Хорошо разработанные струйные небулайзеры в принципе возможны, как и более современные ультразвуковые или пьезоэлектрические небулайзеры. Преимущество струйных небулайзеров заключается в том, что они являются общеупотребительными и являются довольно дешевыми. Многие пациенты уже знакомы с применением обычных струйных небулайзеров. Некоторые струйные небулайзеры нового поколения (например, PARI LC PLUS^® и PARI LC SPRINT^®) используют механизмы, при которых распыление приспособлено к ритму дыхания пациента, с тем чтобы для ингаляции была доступна как можно большая часть полученного аэрозоля.

Однако особенно предпочтительным является получение аэрозоля препарата при помощи современного пьезоэлектрического или электронного небулайзера с колебательной мембраной, в частности небулайзера eFlow типа PARI. Особое преимущество для пациента, применяющего этот прибор (или похожий прибор), состоит в заметном уменьшении времени ингаляции по сравнению с другими методами. Этот прибор не только позволяет получить аэрозоль из большего количества жидкости в единицу времени, но также обеспечивает получение аэрозоля особо высокого качества, содержащего большую часть маленьких вдыхаемых капель с узким спектром размеров капель, обычно с геометрическим стандартным отклонением менее 1,6. Другие возможные небулайзеры с колебательной мембраной представляют собой, например AeroNeb Pro или -Go, ProDose или I-Neb.

Успех лечения очень зависит от надежной и адекватной доступности активного агента для легких. Для удобства пациентов этого следует достигать в приемлемый промежуток времени. Пациенты обычно предпочитают небольшие промежутки времени для ингаляции, и время ингаляции более примерно 10 мин может оказать отрицательное влияние на самочувствие пациентов. Полезно также проводить ингаляцию или непрерывно, или путем запуска дыхательного цикла или применения выбранного характера дыхания, что возможно, например, при применении небулайзера типа eFlow в соединении с ингаляционным устройством Akita (hiaMed). Особенно предпочтительным является способ дыхания, включающий медленный глубокий вдох в течение 4-10 с, задержку дыхания до 10 с с последующим быстрым выдохом.

Как можно видеть из Примера 4 и Фиг.1, активный агент очень равномерно распределяется в легких с осаждением в центре и на периферии, при этом каждое составляет примерно 50%, что полезно с терапевтической точки зрения. Избыточное осаждение на периферических участках приводит к повышенной системной абсорбции, которая, как известно, в случае высоких концентраций, приводит к повреждению почек. В идеальном случае отношение количества осажденного в центре агента к количеству, осажденному на периферии, в зависимости от природы заболевания, например, для предотвращения закупорки бронхов, должно составлять 30:70, или 50:50, или 70:30.

Однако в отдельных случаях может быть предпочтительным назальное, оральное, офтальмологическое, парентеральное или топическое введение композиции или введение через слизистую оболочку. Введение можно осуществить путем нанесения, закапывания, распыления на поверхность тела или в полости тела, что при проведении первоначальных опытов на людях оказалось особенно хорошо переносимым.

Благодаря своей иммуносупрессорной активности циклоспорин может быть применен для различных медицинских показаний, например, для профилактики и лечения отторжения трансплантатов после различных пересадок органов (почки, печени, сердца, сердца и легких, поджелудочной железы, костного мозга и т.д.), профилактики и терапии реакции "трансплантат против хозяина", терапии эндогенного увеита, проявления неинфекционного увеита или заднего увеита Бехчета, тяжелого или резистентного псориаза, особенно с появлением бляшек, нефритного синдрома вследствие гломерулярных заболеваний, таких как минимальное гломерулярное изменение, фокально-сегментарный гломерулосклероз или мембранный гломерулонефрит, тяжелый ревматоидный артрит, резистентные формы длительного атопического дерматита, а также для лечения других болезней, которые требуют локальной или системной иммунной супрессии, например для лечения астмы или глазных болезней. Согласно новым данным циклоспорин также действует как ингибитор выкачивающих насосов и тем самым предотвращает раковые клетки от "выбрасывания" цитостатически активных медикаментов.

Дальнейшее применение композиции по изобретению относится к профилактике или лечению болезней кожи, особенно псориаза, нейродерматита, экземы или реакций отторжения после пересадки кожи. Лечение можно проводить, например, с применением спрея, который распыляется на пораженные участки кожи.

Как описано выше, особенно предпочтительное применение композиции по изобретению относится к профилактике и лечению отторжения трансплантатов легких, а также предотвращению или замедлению облитерирующего бронхиолита. Эта болезнь возникает во многих случаях также после пересадки костного мозга или пересадки стволовых клеток, вот почему ингаляция считается особенно подходящей для профилактики или лечения болезней, таких как, например, облитерирующий бронхиолит. В случае такого применения композиция вводится путем ингаляции аэрозоля. По сравнению с системной терапией (например, при пероральном введении) локальная терапия имеет то преимущество, что активный агент вводится непосредственно в область действия, что, с одной стороны, может повысить терапевтическую эффективность и, с другой стороны, уменьшает системный стресс организма и улучшает переносимость терапии. Благодаря липосомному инкапсулированию активного агента и размеру липосом, равному в среднем максимум 100 нм, активный агент может проникать особенно эффективно из дыхательных путей через слой клеток легочного эпителия в ткань легких и проявлять там свое действие. По другому варианту предпочтительными являются липосомы со средним диаметром, равным от 30 до 80 нм.

Для достижения эффективной локальной ингаляционной терапии легких предпочтительные признаки, обсуждавшиеся выше, следует выбирать с учетом небулайзера, применяемого для введения, таким образом, чтобы использовать препарат аэрозоля с возможно большей фракцией вдыхаемых капель. В частности, фракция капель с диаметром менее примерно 2-4 мкм должна быть как можно больше. Особенно предпочтительным является электронный небулайзер с колебательной мембраной, содержащий перфорированную мембрану в виде листа из нержавеющей стали, содержащего около 4000 пор определенного размера, при помощи которого может быть быстро и эффективно получен аэрозоль с определенным спектром частиц (Martin Knoch and Martin Keller: The customized electronic nebuliser: a new category of liquid aerosol drug delivery systems. Expert Opin. Drug. Deliv. (2005) 2 (2):377-390). Липосомный препарат по изобретению при этом вдыхается без разрушения липосом или непрерывно, или с запуском дыхательного цикла, или при помощи дыхательного устройства, при этом большая доля активного агента может быть осаждена целенаправленно в легких, до 98% полученных капель имеют диаметр менее 5 мкм, до 80% капель имеют средний диаметр менее 3,5 мкм, поэтому активный агент может осаждаться целенаправленно в дистальных областях легких с большей эффективностью, чем при применении компрессорных струйных небулайзеров. Дополнительный активный агент может быть выбран из, например, группы иммуномодуляторов, интерферонов, стероидных и нестероидных противовоспалительных агентов, гепариноидов, бета-агонистов, антихолинергиков, ингибиторов эндотелина и фосфодиэстеразы, антибиотиков, антимикотиков, антивирусных веществ и цитостатиков. Или же можно применять комбинационную терапию, если композиция по изобретению содержит только циклоспорин в качестве активного агента, но вводится в комбинации с другим препаратом, который содержит другой активный агент.

Введение композиции по изобретению, в особенности введение путем ингаляции, можно проводить без предварительного лечения. В частности, введение можно осуществлять без предварительного введения местных анестетиков, таких как, например, лидокаин, и/или без предварительного применения средств, расширяющих бронхи, таких как, например, сальбутамол.

Предпочтительно, чтобы композиция была стерильной, особенно если ее намереваются применять для введения в легкие, при парентеральном применении или введении в глаза. Более того, она предпочтительно практически не содержит твердых частиц размером более чем примерно 3 мкм. Предпочтительно, чтобы, например, все количество активного агента, содержащегося в композиции, находилось в липосомно солюбилизированной форме. Соответственно, твердые частицы активного агента должны практически отсутствовать, особенно твердые частицы активного агента, имеющие диаметр более чем примерно 500 нм. Предпочтительными композициями являются композиции, практически не содержащие твердых частиц, имеющих диаметр более чем 500 нм.

Как указывалось выше, композицию можно применять в качестве лекарственного средства, например, для профилактики и лечения аутоиммунных заболеваний, болезней кожи, после трансплантации или для болезней органов чувств (глаз, носа, уха), недомогания и легочных заболеваний, например астмы, хронического обструктивного бронхита, паренхимных, фиброзных и интерстициальных заболеваний легких или воспаления легких, рака легких и предпочтительно для профилактики и лечения острого или хронического отторжения трансплантатов и болезней, возникающих при этом, таких как облитерирующий бронхиолит, особенно после трансплантации легких, сердца, костного мозга или стволовых клеток, в особенности после трансплантации легких. Композиция может также быть применена для повышения эффективности других лекарств, в частности цитостатиков, когда за счет ингибирующего действия на выкачивающий насос может быть достигнут аддитивный или синергический эффект.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению обеспечивает, наряду с прочими, следующие преимущества:

- Получение липосом одностадийным способом, даже в больших количествах, до 1000 кг, может осуществляться при гомогенизации при высоком давлении и стерилизации путем последующей стерильной фильтрации через материал с диаметром пор, равным 0,22 мкм.

- Липосомы могут эффективно диффундировать из дыхательных путей в ткань легких.

- Для достижения терапевтического эффекта необходимы только 1-3, более предпочтительно 1-2 ингаляции в день.

- Композиция проявляет эффект депо в целевом органе, и в некоторых случаях ингаляцию нужно проводить только 1-4 раза в неделю и в особенно предпочтительных случаях только каждый второй день.

- Композицию можно хранить в холодильнике (4-8°С) в течение по меньшей мере 12 мес. и особенно предпочтительно до 36 мес.

- Композицию можно также применять в устройствах для дыхания или в соединении с системами для регулируемого дыхания, такими как устройство eFlow-Akita.

Важные аспекты и варианты данного изобретения далее будут проиллюстрированы следующими примерами. Другие варианты очевидны для специалиста в данной области из описания и формулы изобретения.

Пример 1. Раствор для топического лечения путем распыления на кожу

	Концентрация (вес./вес.%)	Функция
Циклоспорин А	0,50	Активный агент
Tween 80	0,35	Усилитель растворимости
Phospholipon G 90	4,50	Усилитель растворимости
NaCl	0,5	Изотонический агент
Декспантенол	5,0	Агент, защищающий кожу
Токоферола ацетат	0,05	Антиоксидант
Цитрат натрия	0,05	Буфер
Лимонная кислота	0,04	Буфер
Вода для инъекции	до 100	Растворитель

Водорастворимые адъюванты (хлорид натрия, лимонная кислота и Tween 80), перечисленные в приведенной выше таблице, помещают в колбу Эрленмейера объемом 1 л и растворяют в воде при перемешивании. Затем добавляют и диспергируют при перемешивании лецитин (Phospholipon G 90), декспантенол, токоферола ацетат и активный агент (циклоспорин А). Затем смесь гомогенизируют в течение примерно 10 мин в Ultraturax и перемещают в гомогенизатор высокого давления. При величине давления около 1500 бар смесь гомогенизируют до получения коллоидного препарата, у которого размер диаметра капель или частиц, измеренный в Malvern Zetasizer, составляет <100 нм, а индекс полидисперсности <0,4. Коллоидный препарат затем фильтруют в стерильных условиях и 20 мл препарата помещают в предварительно стерилизованные коричневые стеклянные флаконы, которые закрываются колпачками с распылительной головкой, позволяющими многократное извлечение композиции.

Пример 2. Коллоидный раствор для ингаляции

Коллоидный препарат, состоящий из компонентов, перечисленных в приведенной ниже таблице, готовят, как описано выше и после фильтрования в стерильных условиях 4 мл препарата помещают в коричневые стеклянные флаконы объемом 6 мл, которые затем закрывают. В случае необходимости содержимое флаконов перемещают в резервуар электронного небулайзера, например eFlow PARI, полученный аэрозоль можно затем применять для ингаляции для того, чтобы избежать, например, реакций отторжения после пересадки легкого или возникновения облитерирующего бронхиолита.

	Концентрация (вес./вес.%)	Функция
Циклоспорин А	0,50	Активный агент
Tween 80	0,35	Стабилизатор
Lipoid S 100	4,5	Носитель
NaCl	0,85	Изотонический агент
Эдетат натрия	0,05	Комплексообразователь
Вода для инъекции	до 100,0	Растворитель

Величина рН прозрачного, слегка опалесцентного липосомного раствора при 20°С равна 4,5, осмоляльность составляет 0,32 осмол/кг. Измеренная динамическая вязкость равна 1,35 мПа·с; поверхностное натяжение равно 36 мН/м.

Коллоидный раствор распыляли при помощи специально адаптированного небулайзера с колебательной мембраной типа eFlow PARI, аэрозоли характеризовали при помощи имитатора дыхания PARI. Этот опыт включал два разных способа ингаляции, а именно для ребенка (16 вдохов в минуту, каждый объемом 225 мл с отношением вдыхание/выдыхание, равным 40:60) и для взрослого (15 вдохов в минуту с объемом 500 мл каждый, отношение вдыхание/выдыхание 1:1). Характеристики аэрозоля приведены в следующей ниже таблице.

	Дыхательный ритм для взрослого (15 вдохов, 500 мл объем, вдыхание / выдыхание = 50:50)	Дыхательный ритм для ребенка (16 вдохов, 225 мл объем, вдыхание / выдыхание = 40:60)
	Среднее	Стандартн. отклонение	Среднее	Стандарн. отклонение
Доза аэрозоля из полости рта (мкг)	9577,1	745,1	8954,4	1085,8
Остаток в небулайзере (мкг)	1606,8	559,2	2123,9	352,8
Потери аэрозоля (мкг)	2872,5	255,9	2763,3	376,2
Время распыления (мин)	9,5	0,6	11,6	1,4
Доза аэрозоля (% заполненной дозы)	66,5	4,5	62,9	8,4
Остаток в небулайзере (% от заполненной дозы)	11,2	3,9	15,0	2,5
Потери аэрозоля (%)	20,0	2,0	19,4	2,5
Регенерация (% от заполненной дозы)	97,7	5,0	97,3	7,1

Кроме того, с применением того же раствора для ингаляции методом измерения лазерной дифракции при различных скоростях высвобождения аэрозоля (см. след. Таблицу) были определены фракции с различным размером частиц, пригодные для введения в легкие. Это показывает очень высокую эффективность высвобождения аэрозоля и имитированного осаждения, что обеспечивает небольшой промежуток времени ингаляции и независимость от метода ингаляции.

	15 л/мин	20 л/мин	28 л/мин
	Среднее	Станд. откл.	Среднее	Станд. откл.	Среднее	Станд. откл.
Массовый средний диаметр (мкм)	2,8	0,1	2,9	0,1	2,7	0,1
Геометрическое станд. отклонение	1,5	0,0	1,5	0,0	1,5	0,0
Вдыхаемая фракция (%, <3,3 мк)	63,5	1,7	61,5	4,1	66,0	3,4
Вдыхаемая фракция (%, <5 мк)	89,4	1,1	89,2	2,1	91,2	1,6
Скорость высвобождения аэрозоля (мг/мин)	289,0	10,8	258,3	4,3	282,5	28,0

Было исследовано действие раствора для ингаляции, описанного в примере 2, на клетки calu-3 (слившийся монослой). Для этой цели клетки calu-3 (НТВ - 55, АТСС, Manassas, VA, USA) культивировали в питательной среде Minimal Essential Medium (MEM) с солями Элла и L-глутамином (РАА laboratories GmbH, Pasching, Austria), 10% фетальной телячьей сыворотки, 1% раствором несущественных аминокислот и 55 мг/500 мл пирувата натрия. Образование слившихся слоев с плотными соединениями было подтверждено путем измерения транс-эпителиального электрического сопротивления (TEER) с применением подходящего вольтметра (EVOM, World Precision Instruments, Berlin, Germany) и электрода STX-2. Во время опытов с раствором циклоспорина возраст клеточного монослоя составлял около 14 дн. Вначале удаляли культуральную среду, монослой промывали и предварительно культивировали с раствором буферного раствора Рингера в течение 20-30 мин. Затем при помощи пипетки добавляли липосомный раствор.

Величину TEER измеряли сразу же после применения и через 120 мин. Затем клетки снова промывали и культивировали с культуральной средой в течение 24 ч. Затем снова измеряли величину TEER. Для сравнения использовали буферный раствор Рингера (KRB), пропиленгликоль, раствор циклоспорина А в пропиленгликоле (62,5 мг/мл и водный раствор додецилсульфата натрия (SDS)). В следующей таблице приведены измеренные величины TEER в виде процентов от первоначальных величин после добавления буферного раствора Рингера (кислая углекислая соль).

TEER (% 0 ч)
Концентрация (%, вес./об.)	Время (ч)	Среднее (n=3)	SD	RSD
Положительный контроль (0,1% SDS)	Среда	100
KRB	107	2	2
0	20	1	4
1	19	1	7
2	19	5	26
24	11	1	7
	Среда	100
KRB	108	2	2
Отрицательный контроль (KRB)	0	101	6	5
1	86	2	2
2	83	0	0
24	70	3	4
Липосомы циклоспорина 5 мг/мл	Среда	100
KRB	115	1	1
0	114	5	4
1	95	4	4
2	90	1	1
24	92	2	2
Липосомы циклоспорина 1:5 разбавление в KRB	Среда	100
	KRB	102	8	8
	0	88	8	10
	1	99	11	12
	2	108	13	12
	24	89	6	7
Липосомы циклоспорина 1:10 разбавление в KRB	Среда	100
KRB	119	7	-25
0	114	7	-25
1	143	7	-25
2	155	7	-25
24	122	7	-25
Липосомы циклоспорина 1:15 разбавление в KRB	Среда	100
KRB	123	3	3
0	119	7	6
1	120	3	2
2	135	4	3
24	101	3	3
Плацебо	Среда	100
KRB	123	3	3
концентрат липосом	0	124	5	4
1	101	3	3
2	102	4	4
24	102	2	2
Плацебо концентрат липосом, разбавление 1:5	Среда	100
KRB	111	5	5
0	97	3	3
1	96	5	5
2	97	3	3
24	97	6	6
Плацебо концентрат липосом, разбавление 1:10	Среда	100
KRB	124	3	3
0	102	3	3
1	99	2	2
2	119	1	1
	24	84	5	6
Плацебо концентрат липосом, разбавление 1:15	Среда	100
KRB	132	2	1
0	115	14	12
1	110	7	6
2	121	9	7
24	80	1	1

		TEER через 2 ч	TEER через 24 ч
Испытуемые препараты	Конц. (%)	Среднее (%)	SD	Среднее (%)	SD
KRB		134	19,87	89	18,35
CSA / пропиленгликоль	11,050	9	2,46	22	4,65
Пропиленгликоль	10,000	14	2,42	43	2,71
5,000	36	8,75	75	10,36
0,500	120	12,82	83	8,77
0,100	116	3,80	83	3,90
SDS (додецилсульфат натрия)	0,100	3	1,93	2	1,25
0,010	7	0,80	2	0,37
0,001	114	20,30	107	16,29

Измеренные величины TEER показывают, что композиция по изобретению оказывает только небольшое и в основном обратимое воздействие на целостность монослоя calu-3 или не оказывает никакого воздействия. Додецилсульфат натрия (SDS, синоним: лаурилсульфат натрия), пропиленгликоль и циклоспорин А, растворенный в пропиленгликоле, напротив, наносят значительный и в основном необратимый вред монослою клеток calu-3. На основании этого можно сделать вывод, что наряду с прочими факторами пропиленгликоль, вероятно, не является подходящим носителем для циклоспорина А при ингаляции.

Пример 3. Коллоидный раствор

Способом, описанным в Примере 1, были приготовлены следующие составы А и В (см. приведенные ниже таблицы), которыми заполняли коричневые стеклянные флаконы в стерильных условиях.

Пример 3, состав А	Концентрация, вес.%
Циклоспорин А	0,50
Tween 80	0,35
Lipoid S 100	4,50
Моногидрат дигидрофосфата натрия	0,215
Додекагидрат дигидрофосфта натрия	0,34
Хлорид натрия	0,80
Динатрий эдетат	0,02
Вода для инъекции	100,0
Пример 3, состав В	Концентрация, вес.%
Циклоспорин А	0,40
Tween 80	0,28
Lipoid S 100	3,60
Моногидрат дигидрофосфата натрия	0,215
Додекагидрат дигидрофосфта натрия	0,34
Хлорид натрия	0,80
Динатрий эдетат	0,02
Вода для инъекции	100,0

Коллоидные растворы пригодны, в частности, для ингаляции. Кроме того, их можно применять для топического нанесения и в офтальмологии.

Пример 4. Коллоидный раствор

Способом, аналогичным описанному в Примере 1, был приготовлен следующий состав (см. приведенную ниже таблицу), заполнение флаконов проводили в стерильных условиях.

Пример 4, состав	Концентрация, вес.%
Циклоспорин А	0,50
Tween 80	0,35
Lipoid S 100	4,50
Витамин Е TPGS	0,35
Моногидрат дигидрофосфата натрия	0,25
Додекагидрат дигидрофосфта натрия	0,25
Хлорид натрия	0,85
Динатрий эдетат	0,02
Вода для инъекции	100,0

Затем слегка опалесцирующий раствор был охарактеризован, результаты показаны в следующей таблице.

Параметр	Величина
рН	6,51
Динамическая вязкость	1,36 мПа·с
Поверхностное натяжение	32,8 мН/м
Refractive index	1,342
Осмоляльность	372 мосмол/кг
Плотность	1,007 г/см3
Медианный диаметр липосом	35,7 нм
Индекс полидисперности	0,21

Кроме того, было измерено действительное содержание циклоспорина А, оно было равно 4,83 мг/мл. Содержание примесей составляло 0,81 мг/мл.

После хранения при 5°С в течение 3 мес. все параметры практически не изменились, включая, например, содержание CsA (4,93 мг/мл), содержание примесей, равное 0,36 мг/мл, а также медианный диаметр липосом (36,6 нм). После хранения при температуре 25°С и относительной влажности равной 60% в течение 3 мес. препарат все еще оказался очень стабильным; в частности, содержание CsA и примесей оставалось практически постоянным. Медианный диаметр липосом слегка увеличился до 44,4 нм; однако это не оказывает вредного влияния на свойства композиции.

32 мл (соответствует 15 мг CsA) коллоидного раствора применяли для получения аэрозоля при помощи специально адаптированного электронного небулайзера с колебательной мембраной типа PARI eFlow 30, имеющего смесительную камеру и клапаны для вдоха и выдоха, распределение капель по размерам полученного таким образом аэрозоля характеризовали методом лазерной дифракции, используя Malvern MasterSizer X со скоростью потока 20 л/мин. Определенный таким образом массовый средний диаметр частиц был равен 2,8 мкм при геометрическом стандартном отклонении, равном 1,5.

Фракция частиц размером <5 мкм (вдыхаемая фракция) составляла 89,4%, фракция частиц размером <3,3 мкм составляла 63,5%. Общий выход был равен 289 мг/мл.

Кроме того, определяли свойства аэрозоля в опыте по имитированию дыхания, используя имитатор дыхания PARI и типичный характер ингаляции для взрослых (см. Пример 2), а также каскадный импактор (пробоотборник частиц) следующего поколения импакторов со скоростью потока, равной 15 л/мин, температура была равна 23°С и относительная влажность составляла 50%. Определенные при этом характеристики аэрозоля приведены в следующей таблице. Время ингаляции составляло 11 мин. Определение фракций CsA проводили после определения содержания активного агента методом ЖХВР.

В следующем опыте раствор для ингаляции был радиомечен ⁹⁹mTc-DTPA, затем был проведен такой же опыт и характеристики аэрозоля был определены, исходя из радиоактивности осажденных фракций. Результаты обоих экспериментов были практически идентичными. На Фиг.3 показано распределение фракций аэрозоля на отдельных стадиях в импакторе (на основе измерения радиоактивности и ЖХВР), на оси абсцисс величины даны в мкм.

Параметр	мг	%
Первоначальное (заполненное) количество CsA	15,0	100
Доставленная доза CsA	11,4	75,9
Количество CsA, оставшееся в ингаляторе	1,3	8,5
Потеря CsA в аэрозоле	2,0	13,1

Было также проведено гамма-сцинтиграфическое исследование композиции для определения осаждения CsA in vivo в легких. Для этой цели осуществляли лечение при помощи 2 мл (примерно 10 мг CsA) раствора для ингаляции 12 пациентов с трансплантатами легких (7 с трансплантатами обоих легких [DLTx] и 5 с пересадкой одного легкого [SLTx]). Каждая доза вводимого раствора для ингаляции предварительно была радиомечена 4 MBq 88 mTc-DTPA (Pentacis, CIS-Diagnostik) и затем ею заполняли резервуар электронного небулайзера с колебательной мембраной типа PARI eFlow 30L. Пациенты получали инструкцию дышать медленно и глубоко. После опорожнения резервуара небулайзера получали изображение головы и грудной клетки пациентов при помощи гамма-камеры типа Siemens Diacam.

На Фиг.1 показано типичный снимок пациента с трансплантатом обоих легких. На Фиг.2 приведен снимок пациента с трансплантатом одного легкого. Снимки показывают наличие равномерного осаждения аэрозоля в легких. Все пациенты хорошо перенесли ингаляцию; предварительное лечение, использованное, как описано в литературе при ингаляции известных препаратов CsA с растворением активного агента в пропиленгликоле, не было необходимым.

В следующем опыте с теми же пациентами вводили дозу объемом 4 мл с той же концентрацией. Эта доза также хорошо переносилась без предварительного лечения.

Количественное определение радиоактивности показало, что средняя величина осаждения в легких составила 36% от дозы CsA, введенной в небулайзер. Относительная величина осаждения в легких была немного выше в случае более низкой дозы (2 мл), чем для дозы в 4 мл. В следующей таблице приведены полученные результаты.

Место осаждения	Среднее (все)	2 мл	4 мл	DLTx	SLTx
В легких	36,0%	39,8%	32,6%	37,0%	36,0%
На периферии легких	19,0%	20,4%	17,2%	20,0%	18,0%
Экстраторакально	15,0%	16,3%	13,6%	14,0%	15,0%
Остаток в небулайзере	18,0%	10,1%	26,4%	19,0%	18,0%
Потери аэрозоля/выдох	3,01%	33,9%	27,4%	31,0%	31,0%
Время ингаляции		9,0 мин	19,1 мин

Кроме того, проводили анализ крови для определения фармакокинетических параметров при введении 10 мг или 20 мг CsA путем ингаляции. Полученные таким образом результаты приведены в следующей таблице.

	10 мг	20 мг
T1/2	5,2 ч	6,1 ч	р=0,034
AUC	110 ч·нг/мл	190 ч·нг/мл	р=0,025
Сmax	20 нг/мл	31 нг/мл
MRT (среднее время пребывания)	7,8 ч	8,6 ч	но

Неожиданно было установлено, что только очень небольшая часть раствора липосомного CsA для ингаляции находится в крови, период полураспада является очень коротким - 5,2 и 6,1 ч соответственно.

Ранее опубликованные данные (Соrсоran Т.Е. et al.: Preservation of post - transplant lung function with aerosol cyclosporine. Eur. Respir. J., 23 (3), 378-83 (2004)) относились к периоду полураспада, примерно 40 ч после ингаляции раствора 300 мг CsA/ пропиленгликоль. Преимущество короткого периода полураспада состоит в возможности частого введения, например один или два раза в день. Таким путем будет возможно достичь однородных терапевтических количеств в легких и это обеспечит надежное лечение.

Кроме того, было найдено, что существует корреляция между дозами CsA, осажденными на периферии легких и фармакологическими параметрами AUC (площадь под кривой) и С_mах (максимальная концентрация) в случае терапии липосомным CsA: это делает возможным обеспечение определения активной концентрации CsA в целевом участке целевого органа, а именно на периферии легких, путем простого измерения уровней в сыворотке крови пациента. Это позволит осуществить простой мониторинг терапии.

Пример 5. Коллоидный раствор для закапывания в глаза

Готовят коллоидный раствор ингредиентов, перечисленных в приведенной ниже таблице, и после фильтрации в стерильных условиях в стерильные грушевидные флаконы из полиэтилена (РЕ) объемом 0,5 мл в атмосфере стерильного азота помещают по 0,25 мл полученного раствора, впоследствии его помещают в атмосфере азота в блистеры из алюминия. Из этих стерильных стандартных контейнеров, которые позволяют осуществить закапывание продукта, можно закапать коллоидный раствор в глаз с целью лечения, например, реакций отторжения после пересадки роговицы, и других воспалительных процессов.

	Концентрация, вес./вес.%	Функция
Циклоспорин А	0,50	Активный агент
Тобрамицин	1,0	Активный агент
Tween 80	0,35	Стабилизатор
Lipoid S 100	4,50	Носитель
NaCl	0,56	Изотонический агент
KH2PO4	0,68	Буферное вещество
Гидроокись натрия	дост. колич.	Буферное вещество
Динатрий эдетат	0,05	Комплексообразователь
Вода для инъекции	до 100,0	Растворитель

Пример 6.

По 0,2 г циклоспорина А и такролимуса диспергируют в липосомном изотоническом плацебо растворе, содержащем лецитин и полисорбат 80 в весовом отношении 10:1 в изотоническом растворе хлорида натрия при помощи Ultraturax и затем гомогенизируют при высоком давлении в микрофлюидизаторе при давлении 1500 бар, при этом получают коллоидный препарат с частицами, диаметр которых, определенный при помощи Malvern Zetasizer, составляет менее 80 нм, а индекс полидисперсности <0,35.

После фильтрации в стерильных условиях в стерильные полиэтиленовые флаконы по технологии выдувание - заполнение - запечатывание в стерильном азоте помещают по 2 мл препарата и затем герметизируют его в алюминиевых блистерах в атмосфере азота. Из этих стерильных стандартных доз, которые позволяют осуществить закапывание препарата, коллоидный раствор можно применять для введения в легкие, в нос или для топического нанесения для лечения нежелательных аутоиммунных заболеваний.

Пример 7. Липосомный раствор для ингаляции или для введения в глаз или в ухо

В изотоническом коллоидном растворе плацебо, приготовленном гомогенизацией при высоком давлении и содержащем 10% Lipoid S 100, 0,7% polisorbate 80, 0,8% хлорида натрия и 0,01% натрия-EDTA и токоферола ацетат, диспергируют 0,4% циклоспорина А и 0,04% будесонида в коллоидно-дисперсном виде и получают липосомный препарат с частицами диаметром <75 нм и индексом полидисперсности <0,3. Под трансмиссионным электронным микроскопом можно видеть сферические униламеллярные липосомные структуры размером 55-75 нм, что коррелирует с величинами 40-55 нм, определенными методом фотонной коррелирующей спектроскопии (PCS). После фильтрации в стерильных условиях во флаконы из полипропилена помещают порции по 0,25 мл для лечения глаз и ушей и порции по 2 мл для использования в небулайзерах, заполнение проводят в атмосфере азота и для сохранения стабильности при хранении их запечатывают отдельно в заполненные газообразным азотом блистеры из алюминия. После распыления при помощи электронного небулайзера eFlow осуществляют ингаляцию продукта для лечения легочных заболеваний, таких как, например, астма и COPD (хроническая обструктивная болезнь легких).

Пример 8.

В изотоническом коллоидно-дисперсном плацебо растворе, полученном гомогенизацией при высоком давлении и содержащем 40% Lipoid S 100 и по 2% полисорбата 80, а также витамина E-TPGS, 0,8% хлорида натрия и 0,02% натрия-EDTA, диспергируют 1,5% циклоспорина А и сиролимуса (рапамицина) в коллоидно-дисперсной форме, получают липосомный препарат с частицами диаметром <100 нм и индексом полидисперсности <0,3. После фильтрации в стерильных условиях в заполненные азотом ампулы из полиэтилена помещают порции раствора по 2 мл и для сохранения стабильности при хранении в отдельности запечатывают их в блистеры из алюминия, наполненные газообразным азотом. Продукт применяют для ингаляции с целью лечения интерстициальных легочных заболеваний, таких как саркоидоз и фиброз легких. Или же он может быть применен для закапывания в глаз после пересадки роговицы.

Пример 9. Коллоидный раствор для топического лечения кожи, глаз и ушей

	Концентрация, вес./вес.%	Функция
Циклоспорин А	0,50	Активный агент
Tween 80	0,35	Стабилизатор
Lipoid S 100	4,50	Усилитель растворимости
NaCl	0,5	Изотонический агент
Декспантенол	5,0	Агент для защиты кожи
Динатрий эдетат	0,05	Комплексообразователь
Вода для инъекции	до 100,0	Растворитель

Водорастворимые адъюванты, указанные в приведенной выше таблице, помещают в колбу Эрленмейера объемом 1 л и растворяют в воде при перемешивании; затем добавляют лецитин (Lipoid S 100 или Phospholipon G 90) и активный агент (циклоспорин) и диспергируют при перемешивании. Затем смесь гомогенизируют в течение 10 мин в Ultraturax и помещают в гомогенизатор высокого давления. При давлении, равном 1500 бар, эту смесь гомогенизируют до тех пор, пока не получат коллоидный препарат с частицами, диаметр которых, определенный при помощи Malvern Zetasizer, равен <100 нм, а индекс полидисперсности составляет <0,4. Коллоидный препарат затем фильтруют в стерильных условиях и помещают его в предварительно стерилизованные коричневые стеклянные флаконы объемом 5-50 мл, которые затем закрывают стерильным колпачком с дозирующей насадкой, позволяющей проводить многократное закапывание содержимого.

Пример 10.

В изотоническом коллоидно-дисперсном плацебо растворе, приготовленном методом гомогенизации при высоком давлении и содержащем 40% Phospholipon и по 2% полисорбата 80 и витамина E-TPGS, 0,8% хлорида натрия и 0,02% натрия-EDTA, диспергируют 3% декспантенола и по 1% каждого компонента из циклоспорина А, амфотерицина В, вводят в коллоидно-дисперсной форме, получая липосомный препарат с диаметром частиц <100 нм и индексом полидисперсности <0,3. После фильтрации в стерильных условиях в заполненные азотом ампулы из полиэтилена помещают порции раствора по 2 мл и для сохранения стабильности при хранении в отдельности запечатывают их в блистеры из алюминия, наполненные газообразным азотом. Продукт применяют для профилактики и лечения путем ингаляции возможных реакций отторжения после пересадки органов или частей органов, таких как легкие, нос, кожа, роговица, ухо, и болезней, возникающих при этом.

Пример 11.

В изотоническом коллоидно-дисперсном плацебо растворе, приготовленном методом гомогенизации при высоком давлении и содержащем 20% Phospholipon и по 1% каждого из полисорбата 80 и витамина E-TPGS, 0,8% хлорида натрия и 0,02% натрия-EDTA, диспергируют по 2% каждого из гиалуроновой кислоты и кромогликата натрия, а также 1% циклоспорина А, вводят в коллоидно-дисперсной форме, получая коллоидно-дисперсный препарат с частицами размером <100 нм и индексом полидисперсности <0,3. После фильтрации в стерильных условиях в заполненные азотом ампулы из полиэтилена помещают порции раствора по 2 мл и для сохранения стабильности при хранении в отдельности запечатывают их в блистеры из алюминия, наполненные газообразным азотом. Продукт применяют для профилактики и лечения путем ингаляции хронического обструктивного бронхита, паренхимной, фиброзной и интерстициальной легочных болезней или воспалений, а также для топической супрессии аутоиммунных заболеваний, а также заживления ран на коже, в носу и в ушах.

Пример 12.

Липосомный раствор для ингаляции, содержащий циклоспорин А (4,5 мг/мл), фосфолипид (Lipoid S 100, 40 мг/мл), полисорбат 80 (Tween 80, 3 мг/мл), хлорид натрия (8,5 мг/мл) и динатрий эдетат (0,5 мг/мл) получают способом, аналогичным описанному в примере 2. Гомогенизацию проводят при помощи гомогенизатора высокого давления при давлении 1500 бар, осуществляют 2 цикла. Средний размер полученных липосом (измерен как Z - средний) равен 50 нм, а индекс полидисперсности составляет примерно 0,25. После фильтрации в стерильных условиях липосомы (порции по 2 мл) помещали в специально полученные флаконы объемом 3 мл, которые можно плотно соединить с закручивающейся крышкой устройства eFlow. При закрывании устройства приема медикамента мембрана РЕ разрушается таким образом, чтобы содержимое можно было вдыхать без заполнения небулайзера вручную.

Пример 13.

Липосомный состав можно также соединить с водорастворимыми активными агентами, что можно видеть из следующего примера. Водорастворимые адъюванты помещают в сосуд объемом 200 л в соответствии с рецептурой, приведенные в следующих таблицах, и растворяют в воде для инъекции при перемешивании. Водорастворимые активные агенты, такие как, например, натриевая соль гепарина (состав А) или сальбутамола сульфат (состав В), растворяют в полученном растворе, добавляют лецитин и липофильный циклоспорин А и диспергируют при перемешивании, затем смесь гомогенизируют в течение 10 мин в Ultraturax и перемещают в гомогенизатор высокого давления. Эту смесь подвергают гомогенизации в течение 5 циклов при высоком давлении около 1000 бар. Затем отбирают образец и проверяют требования, предъявляемые к составу. Когда размер капель или частиц, измеренный в Malvern Zetasizer становится равным менее 100 нм, а индекс полидисперсности <0,35, коллоидный препарат подвергают фильтрации в стерильных условиях. По 2 мл этого препарата помещают в полиэтиленовые ампулы в асептических условиях в стерильной комнате по технологии выдувание - заполнение, и 5 ампул герметизируют в алюминиевых блистерах, заполненных газообразным азотом.

Пример 13, состав А	Концентрация (вес./вес.%)
Циклоспорин А	0,40
Tween 80	0,28
Phospholipon G 90	3,60
NaCl	0,5
Натриевая соль гепарина	2,0
Хлорид натрия	0,025
Вода для инъекции	до 100,0
Пример 13, состав В	Концентрация (вес./вес.%)
Циклоспорин А	0,40
Tween 80	0,28
Lipoid S100	3,60
NaCl	0,5
Сальбутамола сульфат	0,50
Натрия эдетат	0,05
Вода для инъекции	До 100,0