пептидная композиция, содержащая пропиленгликоль, являющаяся оптимальной для изготовления и применения в инъекционных устройствах

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один агонист GLP-1 и пропиленгликоль, причем пропиленгликоль содержится в композиции в концентрации от примерно 8 мг/мл до примерно 50 мг/мл, а композиция имеет рН от примерно 7,3 до примерно 8,3, где агонист GLP-1 является производным GLP-1(7-36) или GLP-1(7-37), или аналога GLP-1(7-36)-амида, или аналога GLP-1(7-37), причем указанное производное содержит остаток лизина и липофильный заместитель, присоединенный к эпсилон-аминогруппе указанного лизина с помощью спейсера или без спейсера.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что концентрация пропиленгликоля составляет от примерно 8 мг/мл до примерно 25 мг/мл.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что концентрация пропиленгликоля составляет от примерно 8 мг/мл до примерно 16 мг/мл.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит консервант.

5. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что содержание консерванта составляет от 0,1 до 20 мг/мл.

6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит буферное вещество.

7. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что буферное вещество выбрано из группы, состоящей из глицилглицина, L-гистидина, 2-[4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил]-этансульфоновой кислоты, бицина и динатрийфосфата дигидрата.

8. Композиция по п.7, отличающаяся тем, что липофильный заместитель содержит от 8 до 40 атомов углерода.

9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что спейсер является аминокислотой.

10. Композиция по п.9, отличающаяся тем, что агонист GLP-1 является Arg ³⁴,

Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).

11. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что агонист GLP-1 выбран из группы, состоящей из Gly⁸-GLP-1(7-36)-амида, Gly⁸ -GLP-1(7-37), Val⁸-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸ -GLP-1(7-37), Val⁸ASP²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸ASP²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu ²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸ Lys²²-GLP-1(7-37), Val⁸Arg²² -GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Arg²²-GLP-1(7-37), Val⁸His²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸ His²²-GLP-1(7-37), Arg34GLP-1(7-37), Arg26,34, Lys36GLP-1(7-36), Arg26GLP-1(7-37) и Gly8, Arg26, 34, Glu37, Lys38GLP-1(7-38), их аналогов и производных любых этих веществ.

12. Способ приготовления фармацевтической композиции по п.1, пригодной для использования в инъекционном устройстве, включающий приготовление композиции по п.1, содержащей агонист GLP-1 и пропиленгликоль, и, возможно, буферное вещество и консервант, где пропиленгликоль содержится в композиции в концентрации от примерно 8 мг/мл до примерно 50 мг/мл, где приготовление композиции включает следующие стадии:

а) готовят первый раствор посредством растворения пропиленгликоля и, возможно, консерванта и буферного вещества в воде;

б) готовят второй раствор посредством растворения агониста GLP-1 в воде;

в) смешивают первый и второй растворы; и

г) доводят рН смеси, полученной на стадии в), до рН от примерно 7,3 до примерно 8,3.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что концентрация пропиленгликоля составляет от примерно 8 мг/мл до примерно 25 мг/мл.

14. Способ по п.12, отличающийся тем, что концентрация пропиленгликоля составляет от примерно 8 мг/мл до примерно 16 мг/мл.

15. Способ снижения образования отложений на производственном оборудовании в процессе изготовления фармацевтической композиции по п.1, содержащей агонист GLP-1, который является производным GLP-1(7-36) или GLP-1(7-37), или аналога GLP-1(7-36)-амида, или аналога GLP-1(7-37), причем указанное производное содержит остаток лизина и липофильный заместитель, присоединенный к эпсилон-аминогруппе указанного лизина с помощью спейсера или без спейсера, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, вводят пропиленгликоль в концентрации от 8 до 50 мг/мл.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что снижение образования отложений на производственном оборудовании в процессе изготовления пропиленгликольсодержащей композиции, по сравнению с количеством отложений, наблюдающимся в случае композиции, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, измеряют в эксперименте на модели заполнения.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что средство для обеспечения изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, выбрано из группы, состоящей из сорбита, сахарозы, глицина, маннита, лактозы моногидрата, аргинина, мио-инозита и диметилсульфона.

18. Способ снижения образования осадков в конечном продукте в процессе изготовления фармацевтической композиции по п.1, содержащей агонист GLP-1, который является производным GLP-1(7-36) или GLP-1(7-37), или аналога GLP-1(7-36)-амида, или аналога GLP-1(7-37), причем указанное производное содержит остаток лизина и липофильный заместитель, присоединенный к эпсилон-аминогруппе указанного лизина с помощью спейсера или без спейсера, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, вводят пропиленгликоль в концентрации в диапазоне от 8 до 50 мг/мл.

19. Способ по п.18, отличающийся тем, что снижение образования осадков в конечном продукте измеряют по снижению количества флаконов и/или ампул с пропиленгликольсодержащей композицией, которые необходимо уничтожить из-за наличия в них осадков, по сравнению с количеством флаконов и/или ампул с композицией, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, которые необходимо уничтожить из-за наличия в них осадков.

20. Способ по п.18, отличающийся тем, что средство для обеспечения изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, выбрано из группы, состоящей из сорбита, глицерина, сахарозы, глицина, маннита, лактозы моногидрата, аргинина, мио-инозита и диметилсульфона.

21. Способ снижения засорения инъекционных устройств фармацевтической композицией по п.1, содержащей агонист GLP-1, который является производным GLP-1(7-36) или GLP-1(7-37), или аналога GLP-1(7-36)-амида, или аналога GLP-1(7-37), причем указанное производное содержит остаток лизина и липофильный заместитель, присоединенный к эпсилон-аминогруппе указанного лизина с помощью спейсера или без спейсера, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, вводят пропиленгликоль в концентрации в диапазоне 8-50 мг/мл.

22. Способ по п.21, в котором снижение засорения инъекционных устройств пропиленгликольсодержащей композицией, по сравнению с засорением, наблюдающимся в случае композиции, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, измеряют в эксперименте на модели применения.

23. Способ по п.21, отличающийся тем, что средство для обеспечения изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, выбрано из группы, состоящей из инозита, мальтозы, глицина, лактозы и маннита.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим пептид и пропиленгликоль, к способам приготовления таких композиций и к применению таких композиций для лечения заболеваний и состояний, для которых показано применение пептида, содержащегося в этих композициях. Настоящее изобретение также относится к способам снижения засорения инъекционных устройств пептидной композицией и снижения отложений в производственном оборудовании в процессе изготовления пептидной композиции.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Включение средств, обеспечивающих изотоничность, в фармацевтические композиции, содержащие пептиды, широко известно, и одним из наиболее часто используемых в таких композициях изотонических средств является маннит. Однако авторы настоящего изобретения наблюдали, что маннит создает проблемы в процессе производства пептидных композиций, поскольку он кристаллизуется, образуя осадки в производственном оборудовании и в конечном продукте. Такие осадки повышают потребность в очистке оборудования в процессе производства композиции, что приводит к снижению производственной мощности. Кроме того, такие осадки могут привести к снижению выхода конечного продукта, так как может возникнуть необходимость уничтожить флаконы/ампулы, содержащие пептидную композицию, если в них будут присутствовать частицы. Наконец, авторы настоящего изобретения наблюдали, что присутствие маннита в пептидных композициях, предназначенных для введения посредством инъекций, приводит к засорению инъекционных устройств.

Соответственно, желательно найти изотонический агент, альтернативный манниту, для включения в композиции, содержащие пептиды, и более конкретно для включения в пептидные композиции, вводимые посредством инъекций.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что пептидные композиции, содержащие пропиленгликоль в определенных концентрациях, образуют меньше осадков в производственном оборудовании и в конечном продукте, а также меньше засоряют инъекционные устройства. Композиции согласно настоящему изобретению могут быть составлены с использованием любого пептида, и они являются также физически и химически стабильными, что обеспечивает их стабильность при хранении и пригодность для инвазивных (например, посредством инъекции, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, внутривенной инъекции или инфузии) и неинвазивных (например, назального, орального, пульмонарного, трансдермального или трансмукозального, например буккального) способов введения.

Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей пептид и пропиленгликоль, в которой пропиленгликоль содержится в концентрации 1-100 мг/мл, а рН композиции лежит в диапазоне от 7 до 10. В предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению также включает в себя буферное вещество и консервант.

Настоящее изобретение также относится к способам изготовления фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения способ приготовления пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление первого раствора посредством растворения консерванта, пропиленгликоля и буферного вещества в воде;

б) приготовление второго раствора посредством растворения пептида в воде;

в) смешивание первого и второго растворов; и

г) регулирование рН смеси, полученной на стадии в), до желаемого значения рН.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения способ приготовления пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление первого раствора посредством растворения консерванта и буферного вещества в воде;

б) добавление пропиленгликоля к первому раствору;

в) смешивание первого раствора со вторым раствором, содержащим пептид, растворенный в воде; и

г) регулирование рН смеси, полученной на стадии в), до желаемого значения рН.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения способ приготовления пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление раствора посредством растворения консерванта, буферного вещества и пропиленгликоля в воде;

б) добавление пептида к раствору, полученному на стадии а); и

в) регулирование рН раствора, полученного на стадии б), до желаемого значения рН.

Настоящее изобретение также относится к способам лечения с использованием фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению, в которых композиции вводятся в количестве, эффективном для борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством, при которых показано введение пептида, содержащегося в композиции.

Кроме того, настоящее изобретение относится также к способу снижения отложений на поверхностях производственного оборудования в процессе изготовления пептидной композиции, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, вводят пропиленгликоль в концентрации от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения степень снижения отложений на поверхностях производственного оборудования в процессе изготовления композиции, содержащей пропиленгликоль, по сравнению с отложениями, наблюдающимися при использовании композиции, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, измеряют в эксперименте на модели заполнения такого оборудования.

Настоящее изобретение также относится к способу снижения образования осадков в конечном продукте в процессе изготовления пептидной композиции, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, вводят пропиленгликоль в концентрации от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения степень снижения образования осадков в конечном продукте измеряют по снижению числа флаконов и/или ампул с композицией, содержащей пропиленгликоль, которые необходимо уничтожить из-за наличия в них осадков, по сравнению с числом флаконов и/или ампул с композицией, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, которые необходимо уничтожить из-за наличия в них осадков.

Настоящее изобретение также относится к способу снижения засорения инъекционных устройств пептидной композицией, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, в композицию вводят пропиленгликоль в концентрации от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения степень снижения засорения инъекционного устройства композицией, содержащей пропиленгликоль, по сравнению с засорением, наблюдающимся в случае композиции, содержащей ранее использовавшееся средство для обеспечения изотоничности, измеряют в эксперименте на модели использования такого устройства.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг.1 представлена фотография высушенных на предметных стеклах капель композиций плацебо (не содержащих пептида), представляющих собой (слева направо): композицию, не содержащую средства для обеспечения изотоничности (то есть содержащую только воду, консервант и буферное вещество), композиции, содержащие в качестве средства для обеспечения изотоничности маннит, сорбит, ксилит, сахарозу или глицерин, а самое правое стекло содержит маннит с пептидом Arg³⁴, Lys²⁶ (N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).

На Фиг.2 представлены светомикроскопические изображения нескольких высушенных капель композиций плацебо, содержащих в качестве средства для обеспечения изотоничности (слева направо) маннит, аргинин, инозит или глицерин.

На Фиг.3 представлены светомикроскопические изображения засоренных игл, заполненных композициями плацебо, содержащими в качестве средства для обеспечения изотоничности мио-инозит, мальтозу или глицерин.

На Фиг.4 представлены светомикроскопические изображения засоренных игл, заполненных композициями плацебо, содержащими в качестве средства для обеспечения изотоничности глицин, лактозу или маннит.

На Фиг.5 представлена фотография наполнительно-разливочного оборудования после 24-часового эксперимента на модели заполнения оборудования композицией на основе Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37), содержащей мио-инозит.

На Фиг.6 представлены фотографии отложений на наполнительно-разливочном оборудовании после 24-часового эксперимента на модели заполнения оборудования композицией плацебо, содержащей маннит.

На Фиг.7 представлены фотографии отложений на иглах, заполненных композициями на основе Arg³⁴,Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37), содержащими маннит (верхний рисунок) и пропиленгликоль (нижний рисунок).

СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей пептид или смесь пептидов и пропиленгликоль, причем конечная концентрация пропиленгликоля в композиции составляет от 1 до 100 мг/мл, а конечное значение рН композиции находится в диапазоне от 7 до 10.

Показано, что фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению являются оптимальными для производственного процесса, поскольку они образуют меньшее количество осадков в производственном оборудовании по сравнению с композициями, содержащими другие средства для обеспечения изотоничности, по результатам измерений в экспериментах на моделях заполнения оборудования, описанных в Примерах, Кроме того, обнаружено, что фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению оптимальны для использования в инъекционных устройствах, поскольку они обеспечивают снижение засорения инъекционных устройств по сравнению с композициями, содержащими другие средства для обеспечения изотоничности, по результатам измерений в экспериментах на моделях применения инъекционных устройств, описанных в Примерах.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть составлены с использованием любого пептида, примеры таких пептидов включают в себя, но не ограничиваются этим, глюкагон, гормон роста человека (hGH), инсулин, апротинин, Фактор VII, активатор тканевого плазминогена (ТРА), Фактор VIIa, FFR-Фактор VIIa, гепариназу, АКТГ, гепаринсвязывающий белок, кортикотропин-рилизинг-фактор, ангиотензин, кальцитонин, глюкагоноподобный пептид-1, глюкагоноподобный пептид-2, инсулиноподобный фактор роста-1, инсулиноподобный фактор роста-2, факторы роста фибробластов, желудочный ингибиторный пептид, рилизинг-фактор гормона роста, пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза, секретин, энтерогастрин, соматостатин, соматомедин, паратиреоидный гормон, тромбопоэтин, эритропоэтин, гипоталамические рилизинг-факторы, пролактин, тиреоидстимулирующий гормон, эндорфины, энкефалины, вазопрессин, окситоцин, опиоиды, DPP IV (дипептидилпептидазу IV), интерлейкины, иммуноглобулины, ингибиторы комплемента, ингибиторы серинпротеазы, цитокины, рецепторы цитокинов, тромбоцитарный фактор роста (PDGF), факторы некроза опухолей, рецепторы факторов некроза опухолей, факторы роста и их аналоги и производные, при этом каждый из перечисленных пептидов представляет собой альтернативный вариант осуществления настоящего изобретения.

В данной заявке определение «аналог» используется для обозначения пептида, в котором один или несколько аминокислотных остатков исходного пептида замещены другими аминокислотными остатками и/или к исходному пептиду добавлены один или несколько аминокислотных остатков. Такое добавление может иметь место либо на N-терминальном конце, либо на С-терминальном конце исходного пептида, либо на обоих концах. В типичном случае «аналог» является пептидом, в котором 6 или менее аминокислот заменены, и/или добавлены, и/или удалены из исходного пептида, более предпочтительно пептидом, в котором 3 или менее аминокислот заменены, и/или добавлены, и/или удалены из исходного пептида, и наиболее предпочтительно пептидом, в котором одна аминокислота заменена, и/или добавлена, и/или удалена из исходного пептида.

В данной заявке термин «производное» используется для обозначения пептида или его аналога, который химически модифицирован посредством введения органического заместителя, например сложноэфирной, алкильной или липофильной функциональной группы, при одном или нескольких аминокислотных остатках пептида или его аналога.

В одной из форм осуществления настоящего изобретения пептид, предназначенный для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является агонистом GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1), при этом под «агонистом GLP-1» понимают любой пептид, который полностью или частично активирует рецептор GLP-1 человека. В предпочтительном варианте осуществления изобретения «агонист GLP-1» является любым пептидом, который связывается с рецептором LGP-1, предпочтительно с константой сродства (K_D) или эффективной концентрацией (ЕС₅₀) менее 1 мкМ, например менее 100 нМ, по результатам измерения способами, известными в данной области техники (см., например, WO 98/08871), и обнаруживает инсулинотропную активность, причем инсулинотропная активность может быть измерена in vivo или in vitro с помощью анализов, известных специалистам в данной области техники. Например, агонист GLP-1 может быть введен животному, а через некоторое время может быть измерена концентрация инсулина.

Способы идентификации агонистов GLP-1 описаны в WO 93/19175 (Novo Nordisk A/S), а примеры подходящих аналогов и производных GLP-1, которые могут быть использованы согласно настоящему изобретению, включают примеры, описанные в WO 99/43705 (Novo Nordisk A/S), WO 99/43706 (Novo Nordisk A/S), WO 99/43707 (Novo Nordisk A/S), WO 98/08871 (аналоги с липофильными заместителями) и в WO 02/46227 (аналоги, слитые с сывороточным альбумином или с Fc-фрагментом Ig) (Novo Nordisk A/S), WO 99/43708 (Novo Nordisk A/S), WO 99/43341 (Novo Nordisk A/S), WO 87/06941 (The General Hospital Corporation), WO 90/11296 (The General Hospital Corporation), WO 91/11457 (Buckley et al.), WO 98/43658 (Eli Lilly & Co.), EP 0708179-A2 (Eli Lilly & Co.), EP 0699686-A2 (Eli Lilly & Co.), WO 01/98331 (Eli Lilly & Co.).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонист GLP-1 выбран из группы, состоящей из GLP-1(7-36)-амида, GLP-1(7-37), аналога GLP-1(7-36)-амида, аналога GLP-1(7-37) или производных любого из этих веществ.

В одном из вариантов осуществления изобретения агонист GLP-1 является производным GLP-1(7-36)-амида, GLP-1(7-37), аналога GLP-1(7-36)-амида или аналога GLP-1(7-37), которое содержит липофильный заместитель.

В этом варианте осуществления настоящего изобретения производное GLP-1 предпочтительно содержит три липофильных заместителя, более предпочтительно два липофильных заместителя и наиболее предпочтительно один липофильный заместитель, присоединенный к исходному пептиду (то есть GLP-1(7-36)-амиду, GLP-1(7-37), аналогу GLP-1(7-36)-амида или аналогу GLP-1(7-37)), причем каждый липофильный заместитель предпочтительно содержит 4-40 атомов углерода, более предпочтительно 8-30 атомов углерода, еще более предпочтительно 8-25 атомов углерода и наиболее предпочтительно 14-18 атомов углерода.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель содержит частично или полностью гидрированный циклопентанофенантреновый скелет.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель является неразветвленной или разветвленной алкильной группой.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель является ацильной группой неразветвленной или разветвленной жирной кислоты. Предпочтительно липофильный заместитель является ацильной группой, имеющей формулу СН₃(СН₂ )_nCO-, где n является целым числом от 4 до 38, предпочтительно целым числом от 12 до 38, и наиболее предпочтительно имеет формулу СН₃(СН₂)₁₂СО-, СН₃ (СН₂)₁₄СО-, СН₃(СН₂ )₁₆СО-, СН₃(СН₂)₁₈ СО-, СН₃(СН₂)₂₀СО- или СН ₃(СН₂)₂₂СО-. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения липофильным заместителем является тетрадеканоил. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения липофильным заместителем является гексадеканоил.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель имеет отрицательно заряженную группу, например группу карбоновой кислоты. Например, липофильный заместитель может быть ацильной группой неразветвленной или разветвленной алкан- , -дикарбоновой кислоты с формулой НООС(СН₂) _mCO-, где m является целым числом от 4 до 38, предпочтительно целым числом от 12 до 38, и наиболее предпочтительно имеет формулу HOOC(CH₂)₁₄CO-, HOOC(CH₂) ₁₆CO-, HOOC(CH₂)₁₈CO-, HOOC(CH ₂)₂₀CO- или НООС(СН₂)₂₂ СО-.

В производных GLP-1 согласно настоящему изобретению липофильный заместитель (или заместители) содержит функциональную группу, которая может быть присоединена к одной из следующих функциональных групп аминокислоты исходного GLP-1 пептида:

(а) к аминогруппе, соединенной с альфа-атомом углерода N-терминальной аминокислоты;

(б) к карбоксильной группе, соединенной с альфа-атомом углерода С-терминальной аминокислоты;

(в) к эпсилон-аминогруппе любого из остатков Lys;

(г) к карбоксильной группе R-группы любого из остатков Asp и Glu;

(д) к гидроксильной группе R-группы любого из остатков Tyr, Ser и Thr;

(е) к аминогруппе R-группы любого из остатков Trp, Asn, Gln, Arg и His, или

(ж) к тиоловой группе R-группы любого из остатков Cys.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель присоединен к карбоксильной R-группе любого остатка Asp или Glu.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель присоединен к карбоксильной группе, соединенной с альфа-атомом углерода С-терминальной аминокислоты.

В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения липофильный заместитель присоединен к эпсилон-аминогруппе любого из остатков Lys.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель присоединен к исходному GLP-1 пептиду при помощи промежуточной группы (спейсера). Промежуточная группа должна содержать по крайней мере две функциональные группы, одна из которых соединена с функциональной группой липофильного заместителя, а другая - с функциональной группой исходного GLP-1 пептида.

В одном из вариантов осуществления изобретения промежуточная группа является остатком аминокислоты, кроме Cys или Met, или дипептидом, например -Gly-Lys. В контексте настоящего изобретения фраза «дипептид, например - Gly-Lys» означает любую комбинацию двух аминокислот, кроме Cys или Met, предпочтительно дипептид, в котором С-терминальным аминокислотным остатком является Lys, His или Trp, предпочтительно Lys, a N-терминальным аминокислотным остатком является Ala, Arg, Asp, Asn, Gly, Glu, Gln, lle, Leu, Val, Phe, Pro, Ser, Tyr, Thr, Lys, His или Trp. Предпочтительно аминогруппа исходного пептида образует амидную связь с карбоксильной группой аминокислотного остатка или дипептидного спейсера, а аминогруппа аминокислотного остатка или дипептидного спейсера образует амидную связь с карбоксильной группой липофильного заместителя.

Предпочтительными промежуточными группами (спейсерами) являются лизиновая, глутаминовая, аспарагиновая, глициновая, бета-аланиновая и гамма-аминобутаноильная группы, каждая из которых представляет отдельный вариант осуществления изобретения. Наиболее предпочтительными спейсерами являются глутаминовая и бета-аланиновая группы. Если спейсером является Lys, Glu или Asp, его карбоксильная группа может образовывать амидную связь с аминогруппой аминокислотного остатка, а его аминогруппа может образовывать амидную связь с карбоксильной группой липофильного заместителя. Если в качестве спейсера использован Lys, в некоторых случаях между -аминогруппой Lys и липофильным заместителем может быть введен еще один спейсер. В одной из форм осуществления настоящего изобретения таким дополнительным спейсером является янтарная кислота, которая образует амидную связь с -аминогруппой Lys и с аминогруппой, присутствующей в липофильном заместителе. В другой форме осуществления таким дополнительным спейсером является Glu или Asp, который образует одну амидную связь с -аминогруппой Lys, а другую амидную связь - с карбоксильной группой, присутствующей в липофильном заместителе, то есть липофильный заместитель является N -ацилированным остатком лизина.

В одном из вариантов осуществления изобретения спейсер представляет собой группу неразветвленной алкан- , -дикарбоновой кислоты, содержащую от 1 до 7 метиленовых групп, причем этот спейсер образует мостик между аминогруппой исходного пептида и аминогруппой липофильного заместителя. Предпочтительно спейсером является янтарная кислота.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу СН₃(СН₂)_pNH-СО(СН₂ )_qCO-, где p является целым числом от 8 до 33, предпочтительно от 12 до 28, a q является целым числом от 1 до 6, предпочтительно 2.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу CH₃(CH₂ )_rCO-NHCH(COOH)(CH₂)₂CO-, где r является целым числом от 4 до 24, предпочтительно от 10 до 24.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу СН₃(СН₂ )_sCO-NHCH((СН₂)₂СООН)СО-, где s является целым числом от 4 до 24, предпочтительно от 10 до 24.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель является группой, имеющей формулу СООН(СН ₂)_tCO-, где t является целым числом от 6 до 24.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу -NHCH(СООН)(СН₂) ₄NH-СО(СН₂)_uCH₃, где u является целым числом от 8 до 18.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу СН₃ (СН₂)_vCO-NH-(СН₂)_z -СО, где v является целым числом от 4 до 24, a z является целым числом от 1 до 6.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу -NHCH(COOH)(CH ₂)₄NH-COCH((CH₂)₂COOH)NH-CO(CH ₂)_wCH₃, где w является целым числом от 10 до 16.

В одном из вариантов осуществления изобретения липофильный заместитель вместе с присоединенным к нему спейсером является группой, имеющей формулу -NHCH(COOH)(CH ₂)₄NH-CO(CH₂)₂CH(COOH)NHCO(CH ₂)_xCH₃, где х является нулем или целым числом от 1 до 22, предпочтительно от 10 до 16.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонистом GLP-1 является Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонист GLP-1 выбран из группы, состоящей из Gly⁸-GLP-1(7-36)-амида, Gly⁸-GLP-1(7-37), Val⁸-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸-GLP-1(7-37), Val⁸Asp²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Asp²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu ²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-amida, Val⁸ Lys²²-GLP-1(7-37), Val⁸Arg²² -GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Arg²²-GLP-1(7-37), Val⁸His²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸ His²²-GLP-1(7-37), их аналогов и производных любых этих веществ.

В еще одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонист GLP-1 выбран из группы, состоящей из Arg²⁶-GLP-1(7-37); Arg³⁴-GLP-1(7-37); Lys³⁶-GLP-1(7-37); Arg^26,34Lys³⁶ -GLP-1(7-37); Arg^26,34-GLP-1(7-37); Arg^26,34 Lys⁴⁰-GLP-1(7-37); Arg²⁶Lys³⁶ -GLP-1(7-37); Arg³⁴Lys³⁶-GLP-1(7-37); Val ⁸Arg²²-GLP-1(7-37); Met⁸Arg²² -GLP-1(7-37); Gly⁸His²²-GLP-1(7-37); Val ⁸His²²-GLP-1(7-37); Met⁸His²² -GLP-1(7-37); His³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸-GLP-1(7-37); Val⁸-GLP-1(7-37); Met⁸-GLP-1(7-37); Gly ⁸Asp²²-GLP-1(7-37); Val⁸Asp²² -GLP-1(7-37); Met⁸Asp²²-GLP-1(7-37); Gly ⁸Glu²²-GLP-1(7-37); Val⁸Glu²² -GLP-1(7-37); Met⁸Glu²²-GLP-1(7-37); Gly ⁸Lys²²-GLP-1(7-37); Val⁸Lys²² -GLP-1(7-37); Met⁸Lys²²-GLP-1(7-37); Gly ⁸Arg²²-GLP-1(7-37); Val⁸Lys²² His³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸Glu²² His³⁷-GLP-1(7-37); Val⁸Glu²² His³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸Glu²² His³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸Lys²² His³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸Lys²² His³⁷-GLP-1(7-37);Gly⁸Arg²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Val⁸Arg²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸Arg²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸His²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Val⁸His²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸His²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸His³⁷-GLP-1(7-37); Val⁸His³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸His ³⁷-GLP-1(7-37); Gly⁸Asp²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Val⁸Asp²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Met⁸Asp²²His ³⁷-GLP-1(7-37); Arg²⁶-GLP-1(7-36)-амида; Arg ³⁴-GLP-1(7-36)-амида; Lys³⁶-GLP-1(7-36)-амида; Arg^26,34Lys³⁶-GLP-1(7-36)-амида; Arg ^26,34-GLP-1(7-36)-амида; Arg^26,34Lys⁴⁰ -GLP-1(7-36)-амида; Arg²⁶Lys³⁶-GLP-1(7-36)-амида; Arg³⁴Lys³⁶-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸ -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸-GLP-1(7-36)-амида; Met ⁸-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Asp²²-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Glu²²His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Asp²²-GLP-1(7-36)-амида; Met⁸ Asp²²-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Glu²² -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Glu²²-GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Glu²²-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸ Lys²²-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Lys²² -GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸His²²His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Arg²²-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸ Arg²²-CLP-1(7-36)-амида; Met⁸Arg²² -GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸His²²-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸His²²-GLP-1(7-36)-амида; Met⁸ His²²-GLP-1(7-36)-амида; His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Arg²²His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Arg²²His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Val⁸ His³⁷-GLP-1(7-36)-амида; Met⁸His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Asp²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Asp²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Asp²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Glu²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Glu²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Lys²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸Lys²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Met⁸Lys²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Gly⁸Arg²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Val⁸His²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; Met⁸His²²His³⁷ -GLP-1(7-36)-амида; и их производных.

В еще одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонист GLP выбран из группы, состоящей из Val⁸Trp¹⁹ Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²² Val²⁵-GLP-1(7-37), Val⁸Tyr¹⁶ Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶ Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Leu¹⁶ Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Tyr¹⁸ Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²² His³⁷-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²² lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶ Glu²²Val²⁵lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶Glu²²lle³³ -GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²Val²⁵ lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶ Glu²²Val²⁵-GLP-1(7-37), их аналогов и производных любого из этих веществ.

В еще одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агонистом GLP-1 является эксендин-4 или эксендин-3, аналог эксендина-4 или эксендина-3 или производное любого из этих веществ.

Примеры эксендинов, а также их аналогов, производных и фрагментов, которые можно включить в настоящее изобретение, описаны в WO 97/46584, US 5424286 и WO 01/04156. В US 5424286 описан способ стимуляции выделения инсулина с помощью полипептида эксендина. Описанные полипептиды эксендины включают HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX, где Х=Р или Y, и HX1X2GTFITSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS, где Х1Х2=SD (эксендин-3) или GE (эксендин-4)). В WO 97/46584 описаны усеченные варианты пептида эксендина. Описанные пептиды усиливают секрецию и биосинтез инсулина, но снижают секрецию и биосинтез глюкагона. В WO 01/04156 описаны аналоги и производные эксендина-4 и получение этих молекул. Аналоги эксендина-4, стабилизированные посредством слияния с сывороточным альбумином или Fc-фрагментом Ig, описаны в WO 02/46227.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения аналогом эксендина-4 является HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-амид.

Если пептид, предназначенный для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является агонистом GLP-1, то агонист GLP-1 содержится в композиции в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 100 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50 мг/мл и наиболее предпочтительно в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 10 мг/мл.

В одном из вариантов настоящего изобретения пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является инсулин, при этом под «инсулином» понимают инсулин человека [тогда как под «инсулином человека» понимают инсулин, имеющий последовательность аминокислот, показанную в работе D.S.H.W. Nicol and LF. Smith: Nature, (1960) 4736:483-485, которая включена в данную заявку посредством ссылки], аналоги инсулина человека, производные инсулина человека или их смеси, при этом примеры аналогов и производных инсулина описаны в ЕР 0792290 (Novo Nordisk A/S), EP 0214826 и ЕР 0705275 (Novo Nordisk A/S), US 5,504,188 (Eli Lilly), EP 0368187 (Aventis), патентах США 5,750,497 и 6,011,007, ЕР 375437 и ЕР 383472, и такие инсулины могут включать (но не ограничиваются этим) NPH-инсулин, Lys 29 (N -тетрадеканоил) дез(В30)-инсулин человека, LysB29-(N -( -глутамил-N -литохолил) дез(В30)-инсулин человека, N B29-октаноилинсулин, смесь в соотношении 30/70 быстродействующего инсулин-цинка (SemiLente®) с инсулин-цинком продолжительного действия (Ultralente®), которая продается под торговым названием Lente®, инсулина глардин (Lantus®) или инсулин-цинк длительного действия (Ultralente®), LysB28 ProB29 инсулин человека (Humalog®), AspB28 инсулин человека, инсулин аспарт (Novolog®), или смесь в соотношении 30/70 инсулина аспарта и инсулина аспарта протамина (NovoMix®).

В одном из вариантов осуществления изобретения инсулин является производным инсулина человека или аналога инсулина человека, причем производное содержит по меньшей мере один остаток лизина, а липофильный заместитель присоединен к эпсилон-аминогруппе остатка лизина.

В одном из вариантов осуществления изобретения остаток лизина, к которому присоединен липофильный заместитель, расположен в положении В28 пептида инсулина.

В альтернативном варианте осуществления настоящего изобретения остаток лизина, к которому присоединен липофильный заместитель, находится в положении В29 пептида инсулина.

В еще одном из вариантов осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, соответствующей карбоновой кислоте, имеющей по меньшей мере 6 атомов углерода.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, разветвленной или неразветвленной, которая соответствует карбоновой кислоте, имеющей цепь из атомов углерода длиной от 8 до 24 атомов.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, соответствующей жирной кислоте, имеющей по меньшей мере 6 атомов углерода.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, соответствующей линейной насыщенной карбоновой кислоте, имеющей от 6 до 24 атомов углерода.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, соответствующей линейной, насыщенной карбоновой кислоте, имеющей от 8 до 12 атомов углерода.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является ацильной группой, соответствующей линейной, насыщенной карбоновой кислоте, имеющей от 10 до 16 атомов углерода.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является олигооксиэтиленовой группой, содержащей до 10, предпочтительно до 5, оксиэтиленовых мономеров.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения липофильный заместитель является олигооксипропиленовой группой, содержащей до 10, предпочтительно до 5, оксипропиленовых мономеров.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретение относится к производному инсулина человека, в котором аминокислотный остаток В30 удален или является остатком любой аминокислоты, которая может кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys; аминокислотные остатки А21 и В3 являются, независимо друг от друга, остатками любых аминокислот, которые могут кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys; Phe^B1 может быть удален; -аминогруппа Lys^B29 имеет липофильный заместитель, который содержит не менее 6 атомов углерода; и 2-4 иона Zn ²⁺ могут быть связаны с каждым инсулиновым гексамером, при условии, что, когда В30 является Thr или Ala, А21 и В3 одновременно являются Asn, a Phe^B1 не удален, то 2-4 иона цинка связываются с каждым гексамером производного инсулина.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретение относится к производному инсулина человека, в котором аминокислотный остаток В30 удален или является остатком любой аминокислоты, которая может кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys; аминокислотные остатки А21 и В3 являются, независимо друг от друга, остатками любых аминокислот, которые могут кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys, при условии, что когда остаток аминокислоты В30 является Ala или Thr, то по меньшей мере один из остатков А21 и В3 не является Asn; Phe ^B1 может быть удален; а -аминогруппа Lys^B29 имеет липофильный заместитель, который содержит не менее 6 атомов углерода.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретение относится к производному инсулина человека, в котором аминокислотный остаток В30 удален или является остатком любой аминокислоты, которая может кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys; аминокислотные остатки А21 и В3 являются, независимо друг от друга, остатками любых аминокислот, которые могут кодироваться генетическим кодом, за исключением Lys, Arg и Cys; Phe^B1 может быть удален; -аминогруппа Lys^B29 имеет липофильный заместитель, который содержит не менее 6 атомов углерода; и 2-4 иона Zn ²⁺ могут быть связаны с каждым инсулиновым гексамером.

Когда пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является инсулин, инсулин содержится в композиции в концентрации от примерно 0,5 мг/мл до примерно 20 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 1 мг/мл до примерно 15 мг/мл.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является hGH или Met-hGH.

Если пептид, предназначенный для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является hGH или Met-hGH, hGH или Met-hGH содержится в композиции в концентрации от примерно 0,5 мг/мл до примерно 50 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 1 мг/мл до примерно 10 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является GLP-2 или его аналог или производное.

Если пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является GLP-2, или его аналог, или производное, GLP-2, или его аналог, или производное содержится в композиции в концентрации от примерно 1 мг/мл до примерно 100 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 1 мг/мл до примерно 10 мг/мл.

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является Фактор VII или Фактор VIIa или его аналог или производное.

Если пептидом, предназначенным для включения в композицию согласно настоящему изобретению, является Фактор VII, или Фактор VIIa, или его аналог, или производное, Фактор VII, или Фактор VIIa, или его аналог, или производное содержится в композиции в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 10 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 0,5 мг/мл до примерно 5 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения конечная концентрация пропиленгликоля в композициях согласно настоящему изобретению составляет от примерно 1 до примерно 50 мг/мл.

В другом из вариантов осуществления настоящего изобретения конечная концентрация пропиленгликоля в композициях согласно настоящему изобретению составляет от примерно 5 до примерно 25 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения конечная концентрация пропиленгликоля в композициях согласно настоящему изобретению составляет от примерно 8 до примерно 16 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения конечная концентрация пропиленгликоля в композициях согласно настоящему изобретению составляет от примерно 13 до примерно 15 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения конечная концентрация пропиленгликоля в композициях согласно настоящему изобретению составляет от примерно 13,5 до примерно 14,5 мг/мл.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 9,5, где термин «примерно», используемый в отношении рН, означает + или - 0,1 единицу рН от указанного числа.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,0.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет рН в диапазоне от примерно 7,2 до примерно 8,0.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,3.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет рН в диапазоне от примерно 7,3 до примерно 8,3.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция содержит, кроме пептида и пропиленгликоля, буферное вещество и/или консервант.

Когда в композицию согласно настоящему изобретению необходимо включить буферное вещество, буферное вещество выбирают из группы, состоящей из ацетата натрия, карбоната натрия, цитрата, глицилглицина, гистидина, глицина, лизина, аргинина, дигидрофосфата натрия, динатрий гидрофосфата, фосфата натрия и трис(гидроксиметил)-аминометана или их смесей. Каждый из этих конкретных буферов представляет собой альтернативный вариант осуществления настоящего изобретения. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения буферное вещество является глицилглицином, дигидрофосфатом натрия, динатрий гидрофосфатом, фосфатом натрия или их смесью.

Если в композиции согласно настоящему изобретению необходимо включить фармацевтически приемлемый консервант, консервант выбирают из группы, состоящей из фенола, m-крезола, метил-р-гидроксибензоата, пропил-р-гидроксибензоата, 2-феноксиэтанола, бутил-р-гидроксибензоата, 2-фенилэтанола, бензилового спирта, хлорбутанола и тиомеросала или их смесей. Каждый из этих конкретных консервантов представляет собой альтернативный вариант осуществления настоящего изобретения. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения консервант является фенолом или m-крезолом.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения консервант содержится в композиции в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 25 мг/мл и наиболее предпочтительно в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 10 мг/мл.

Использование консерванта в фармацевтических композициях хорошо известно специалисту в данной области техники. Для удобства мы даем ссылку на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция может также содержать хелатообразующий реагент, причем хелатообразующий реагент может быть выбран из солей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), лимонной кислоты и аспарагиновой кислоты или их смесей. Каждый из этих конкретных хелатообразующих реагентов представляет собой альтернативный вариант осуществления настоящего изобретения.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения хелатообразующий реагент содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения хелатообразующий реагент содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 2 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения хелатообразующий реагент содержится в композиции в концентрации от 2 мг/мл до 5 мг/мл.

Использование хелатообразующего реагента в фармацевтических композициях хорошо известно специалисту в данной области техники. Для удобства мы даем ссылку на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция может также содержать стабилизатор, выбранный из группы высокомолекулярных полимеров или низкомолекулярных соединений, причем такие стабилизаторы могут включать (но не ограничиваются ими) полиэтиленгликоль (например, PEG 3350), поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон, карбоксиметилцеллюлозу, различные соли (например, хлорид натрия), L-глицин, L-гистидин, имидазол, аргинин, лизин, изолейцин, аспарагиновую кислоту, триптофан, треонин или их смеси. Каждый из этих специфических стабилизаторов представляет собой альтернативный вариант осуществления настоящего изобретения. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения стабилизатор выбран из группы, состоящей из L-гистидина, имидазола и аргинина.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 50 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 10 мг/мл до 20 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 20 мг/мл до 30 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения высокомолекулярный полимер содержится в композиции в концентрации от 30 мг/мл до 50 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 50 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 10 мг/мл до 20 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 20 мг/мл до 30 мг/мл. В следующем варианте осуществления настоящего изобретения низкомолекулярное соединение содержится в композиции в концентрации от 30 мг/мл до 50 мг/мл.

Использование стабилизатора в фармацевтических композициях хорошо известно специалисту в данной области техники. Для удобства мы даем ссылку на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению может также содержать поверхностно-активное вещество, причем поверхностно-активное вещество может быть выбрано из детергента, этоксилированного касторового масла, полигликолизированных глицеридов, ацетилированных моноглицеридов, сложных эфиров жирных кислот и сорбита, полоксамеров, например 188 и 407, сложных эфиров жирных кислот и полиоксиэтиленсорбита, производных полиоксиэтилена, например его алкилированных и алкоксилированных производных (твины, например Твин-20 или Твин-80), моноглицеридов или их этоксилированных производных, диглицеридов или их полиоксиэтиленовых производных, глицерина, холевой кислоты или ее производных, лецитинов, спиртов и фосфолипидов, глицерофосфолипидов (лецитинов, кефалинов, фосфатидилсерина), глицерогликолипидов (галактопиранозидов), сфингофосфолипидов (сфингомиелина) и сфингогликолипидов (церамидов, ганглиозидов), DSS (докузата натрия, докузата кальция, докузата калия), SDS (додецилсульфата натрия или лаурилсульфата натрия), дипальмитоилфосфатидной кислоты, каприлата натрия, желчных кислот и их солей и конъюгатов с глицином и таурином, урсодезоксихолевой кислоты, холата натрия, дезоксихолата натрия, таурохолата натрия, гликохолата натрия, N-гексадецил-N,N-диметил-3-аммоний-1-пропансульфоната, анионных (алкил-арил-сульфонаты) моновалентных поверхностно-активных веществ, пальмитоиллизофосфатидил-L-серина, лизофосфолипидов (например, 1-ацил-sn-глицеро-3-фосфатных эфиров этаноламина, серина или треонина), алкильных, алкоксилалкильных сложноэфирных, алкоксиалкильных простых эфирных производных лизофосфатидила и фосфатидилхолинов, например лауроильных и миристоильных производных лизофосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина и модификаций полярных групп головки, то есть холина, этаноламина, фосфатидной кислоты, серина, треонина, глицерина, инозита и положительно заряженных DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, лизофосфатидилсерина и лизфосфатидилтреонина, амфотерных ионных поверхностно-активных веществ (например, N-алкил-N,N-диметиламмоний-1-пропансульфонатов, 3-холамидо-1-пропилдиметиламмоний-1-пропансульфоната, додецилфосфохолина, миристоиллизофосфатидилхолина, лизолецитина куриных яиц), катионных поверхностно-активных веществ (четвертичных аммониевых оснований) (например, цетилтриметиламмония бромида, цетилпиридиния хлорида), неионных поверхностно-активных веществ, блок-сополимеров полиэтиленоксида/полипропиленоксида (Pluronics/Tetronics, Triton X-100, додецил- -D-глюкопиранозид) или полимерных поверхностно-активных веществ (Твин-40, Твин-80, Бридж-35), производных фусидовой кислоты (например, тауро-дигидрофусидата натрия и т.п.), длинноцепочечных жирных кислот с С6-С12 и их солей (например, олеиновой кислоты и каприловой кислоты), ацилкарнитинов и их производных, N -ацилированных производных лизина, аргинина или гистидина или ацилированных по боковой цепи производных лизина или аргинина, N -ацилированных производных дипептидов, содержащих любые комбинации лизина, аргинина или гистидина и нейтральных или кислых аминокислот, N -ацилированных производных трипептидов, содержащих любые комбинации нейтральной аминокислоты и двух заряженных аминокислот, или поверхностно-активное вещество может быть выбрано из группы производных имидазолина или их смесей. Каждое из этих специфических поверхностно-активных веществ образует альтернативный вариант осуществления изобретения.

Использование поверхностно-активных веществ в фармацевтических композициях хорошо известно специалисту в данной области техники. Для удобства мы даем ссылку на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены с использованием стандартных методик, например, так, как описано в Remington Pharmaceutical Sciences, 1985, или в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995, причем эти стандартные методики в фармацевтической промышленности включают в себя растворение и смешивание ингредиентов так, чтобы получить желаемый конечный продукт.

Как указано выше, в предпочтительном варианте осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению содержат, кроме пептида и пропиленгликоля, буферное вещество и/или консервант.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения способ приготовления такой пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление первого раствора посредством растворения консерванта, пропиленгликоля и буферного вещества в воде;

б) приготовление второго раствора посредством растворения пептида в воде;

в) смешивание первого и второго растворов; и

г) регулирование рН смеси, полученной в пункте в), до желаемого значения pH.

В другом из вариантов осуществления настоящего изобретения способ приготовления такой пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление первого раствора посредством растворения консерванта и буферного вещества в воде;

б) добавление пропиленгликоля к первому раствору;

в) смешивание первого раствора со вторым раствором, содержащим пептид, растворенный в воде; и

г) регулирование рН смеси, полученной на стадии в), до желаемого значения рН.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения способ приготовления пептидной композиции включает в себя:

а) приготовление раствора посредством растворения консерванта, буферного вещества и пропиленгликоля в воде;

б) добавление пептида к раствору, полученному на стадии а); и

в) регулирование рН раствора, полученного на стадии б), до желаемого значения рН.

Композиции согласно настоящему изобретению оптимальны для изготовления и применения в инъекционных устройствах, так как они образуют меньшее количество отложений на поверхностях производственного оборудования и меньше засоряют инъекционные устройства, вышеуказанные способы приготовления можно использовать для изготовления пептидных композиций, пригодных для изготовления и применения в инъекционных устройствах.

Композиции согласно настоящему изобретению пригодны для введения млекопитающим, предпочтительно человеку. Путем введения композиций согласно настоящему изобретению может быть любой путь, который эффективно транспортирует пептиды, содержащиеся в композиции к соответствующему или желательному месту действия, например оральный, назальный, буккальный, пульмональный, трансдермальный или парентеральный путь введения.

Благодаря способности пропиленгликоля снижать засорение инъекционных устройств по сравнению с другими средствами для обеспечения изотоничности, в частности по сравнению с маннитом, в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению можно вводить нуждающемуся в них пациенту парентерально. Парентеральное введение можно выполнить посредством подкожных, внутримышечных или внутривенных инъекций с помощью шприца, возможно с помощью шприца-ручки. Альтернативно, парентеральное введение можно выполнить с помощью инфузионного насоса.

Следующим вариантом является композиция, которая может иметь форму порошка или жидкости, для введения композиции в форме назального или пульмонального спрея. В качестве следующего варианта композиция может быть также введена трансдермально, например, из пластыря, возможно ионофоретического пластыря, или трансмукозально, например буккально. Вышеуказанные возможные пути введения композиций согласно настоящему изобретению не следует считать ограничивающими объем изобретения.

Несомненно понятно, что в зависимости от пептида или пептидов, включенных в композиции согласно настоящему изобретению, композиции можно использовать в способах лечения заболеваний или состояний, при которых показано использование пептида. Специалист в данной области техники должен понимать, что при использовании в таких способах лечения композиции следует вводить в количестве, эффективном для лечения состояния или заболевания, с целью которого введен пептид, причем «эффективное количество» или «количество, эффективное » следует понимать как дозу, достаточную для того, чтобы лечение пациента с заболеванием или состоянием, подлежащим лечению, было эффективным по сравнению с лечением без введения этой дозы. Следует понимать, что «эффективное количество» является эффективной дозой, которая должна быть определена квалифицированным практикующим врачом, который может менять дозировки для достижения желаемой реакции. Факторами, которые необходимо учитывать при определении дозы, являются эффективность, биодоступность, желаемые фармакокинетические/фармакодинамические профили, состояние или заболевание, подлежащее лечению (например, диабет, ожирение, потеря веса, язва желудка), факторы, связанные с пациентом (например, вес, состояние здоровья, возраст и т.д.), наличие одновременно вводимых лекарственных препаратов (например, инсулина), время введения или другие факторы, известные практикующему врачу.

Настоящее изобретение относится также к способу снижения отложений на производственном оборудовании во время производства пептидной композиции, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, в композицию вводят пропиленгликоль в концентрации в диапазоне от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение отложений на производственном оборудовании во время производства пропиленгликоль-содержащей композиции, по сравнению с отложениями, наблюдаемыми в случае композиции содержащей ранее использовавшееся средство для придания изотоничности, измеряют в эксперименте на модели заполнения оборудования, как описано в Примерах.

Средство для придания изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, представляет собой сорбит, сахарозу, глицин, маннит, моногидрат лактозы, аргинин, мио-инозит и диметилсульфон.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 1 до примерно 50 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 5 до примерно 25 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 8 до примерно 16 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 9,5.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,0.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,2 до примерно 8,0.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,3.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,3 до примерно 8,3.

Настоящее изобретение относится также к способу снижения образования осадков в конечном продукте во время изготовления пептидной композиции, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, в композицию вводят пропиленгликоль в концентрации от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение образования осадков в конечном продукте измеряют по снижению числа флаконов и/или ампул с пропиленгликоль-содержащей композицией, подлежащих ликвидации из-за наличия в них осадков, по сравнению с числом флаконов и/или ампул с композицией, содержащей ранее использовавшееся средство для придания изотоничности, подлежащих ликвидации из-за наличия в них осадков.

Средство для придания изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, представляет собой сорбит, сахарозу, глицин, маннит, моногидрат лактозы, аргинин, мио-инозит и диметилсульфон.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 1 до примерно 50 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 5 до примерно 25 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 8 до примерно 16 мг/мл.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 9,5.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,0.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,2 до примерно 8,0.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,3.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,3 до примерно 8,3.

Настоящее изобретение относится также к способу снижения засорения инъекционных устройств, при котором вместо средства для обеспечения изотоничности, ранее использовавшегося в такой композиции, в композицию вводят пропиленгликоль в концентрации от 1 до 100 мг/мл.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение засорения инъекционного устройства пропиленгликоль-содержащей композицией по сравнению с засорением, наблюдающимся при использовании композиции, содержащей ранее использовавшееся средство для придания изотоничности, измеряют в эксперименте на модели применения инъекционного устройства, как описано в Примерах.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения средство для придания изотоничности, вместо которого используют пропиленгликоль, выбрано из группы, состоящей из инозита, мальтозы, глицина, лактозы и маннита.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 1 до примерно 50 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 5 до примерно 25 мг/мл.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения вместо средства для придания изотоничности, ранее использовавшегося в вышеуказанной композиции, используют пропиленгликоль в концентрации от примерно 8 до примерно 16 мг/мл.

В другой форме осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 9,5.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,0 до примерно 8,0.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая пропиленгликоль, имеет рН в диапазоне от примерно 7,2 до примерно 8,0.

Все научные публикации и патентные документы, процитированные в данной заявке, включены в нее посредством ссылки. Приведенные ниже примеры иллюстрируют различные аспекты изобретения, но ни каким образом не ограничивают объем изобретения.

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Пример 1

Эксперименты на модели заполнения, капельный тест и тест на засорение при замене маннита

Поскольку лабораторные эксперименты показали, что композиции без пептидов («плацебо») в отношении засорения игл и образования отложений на иглах дают те же результаты, что и композиции с пептидами в концентрации 0,3-5,0 мг/мг, отборочные исследования в Примере 1 были выполнены с использованием плацебо, за исключением тех случаев, когда указано иное.

Приготовление композиций с различными средствами для обеспечения изотоничности

Консервант (5,5 мг/л фенола) и буферное вещество (1,24 мг/мл динатрий фосфата дигидрата) растворяли в воде и при перемешивании добавляли средство для обеспечения изотоничности. рН доводили до рН 7,9 с использованием гидроксида натрия и/или хлористоводородной кислоты. В заключение композицию фильтровали через фильтр с порами диаметром 0,22 мкм. Средства для обеспечения изотоничности, испытанные в каждой композиции, и их концентрации показаны в Таблице 1.

Таблица 1
Состав испытанных композиций
№ композиции	Модификатор тоничности
1.	Глюкозы моногидрат (38,0 мг/мл)
2.	Лактозы моногидрат (65,0 мг/мл)
3.	Мальтоза (67,2 мг/мл)
4.	Глицин (15,1 мг/мл)
5.	Полиэтиленгликоль 400 (77,5 мг/мл)
6.	L-аргинин (24,6 мг/мл)
7.	Мио-инозит (35,2 мг/мл)
8.	Пропиленгликоль (13,7 мг/мл)
9.	Диметилсульфон (18 мг/мл)
10.	Маннит (35,9 мг/мл)
11.	Сорбит (39,6 мг/мл)
12.	Ксилит (39,5 мг/мл)
13.	Сахароза (79,1 мг/мл)
14.	Глицерин (16 мг/мл)

Осмолярность

Была определена осмолярность различных композиций плацебо, и результаты показаны в Таблице 2.

Изотонический раствор имеет осмолярность порядка 0,286 осмоль/л. Как можно видеть из Таблицы 2, три композиции (с ПЭГ 400, сахарозой и ксилитом) отличались от изотоничности более чем на 20% (0,229-0,343 осмоль/л), однако в этих экспериментах осмолярность не влияла на результаты, хотя для дальнейших экспериментов тоничность композиций следовало отрегулировать.

Таблица 2
Результаты измерений осмолярности композиций
№ композиции	Средство для обеспечения изотоничности	Осмолярность
1.	Глюкозы моногидрат (38,0 мг/мл)	0,315
2.	Лактозы моногидрат (65,0 мг/мл)	0,283
3.	Мальтоза (67,2 мг/мл)	0,306
4.	Глицин (15,1 мг/мл)	0,286
5.	Полиэтиленгликоль 400 (77,5 мг/мл)	0,370
6.	L-аргинин (24,6 мг/мл)	0,318
7.	Мио-инозит (35,2 мг/мл)	0,285
8.	Пропиленгликоль (13,7 мг/мл)	0,268
9.	Диметилсульфон (18 мг/мл)	0,274
10.	Маннит (35,9 мг/мл)	0,284
11.	Сорбит (39,6 мг/мл)	0,310
12.	Ксилит (39,5 мг/мл)	0,351
13.	Сахароза (79,1 мг/мл)	0,346
14.	Глицерин (16 мг/мл)	0,262

Капельный тест

Каплю каждой из композиций помещали на предметное стекло и давали ей высохнуть. Осадок исследовали визуально невооруженным глазом и с помощью светового микроскопа.

Фотография высушенных капель некоторых композиций приведена на Фиг.1. На фотографии хорошо видно, что маннит образует осадок на предметном стекле после высыхания. Не наблюдалось осадков в случае сорбита, ксилита, сахарозы и глицерина. Самая правая капля содержит маннит и Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-CLP-1(7-37).

На Фиг.2 представлены вещества, давшие наибольшие осадки (маннит, аргинин, инозит) на предметном стекле. Для сравнения показан глицерин, который не дает осадков.

Тест на засорение

В этом тесте с каждой композицией испытывали по 10 шприцов-ручек NovoPens® объемом 1,5 мл с иглами NovoFine 30® G (иглы калибра 30), 5 из которых располагали в вертикальном положении и 5 - в горизонтальном. Системы шприцов-ручек в промежутках между испытаниями хранили при комнатной температуре. Каждый день иглы исследовали на предмет образования осадков и перед инъекцией в ткани выполняли продувку сжатым воздухом. Отмечали степень сопротивления и засорения, если они были. Инъекции производили ежедневно одной и той же иглой и так поступали в течение 9 рабочих дней со всеми композициями.

Результаты теста на засорение представлены в Таблице 3.

Из Таблицы 3 и Фиг.3 видно, что инозит и мальтоза засоряли иглу. Для сравнения на Фиг.3 показан глицерин, который не засоряет иглу. Из Фиг.4 и Таблицы 3 видно, что композиции, содержавшие глицин, лактозу и маннит, образовывали большие отложения на игле. В случае глицина отложения представляли собой капли, высохшие на стержне иглы, тогда как в случае лактозы и маннита отложения наблюдались на кончике иглы.

Модель заполнения оборудования

1 л каждой композиции использовали для эксперимента на модели заполнения, который длился 24 часа. Через 24 часа оборудование осматривали на предмет наличия отложений.

На основании результатов исследований на модели заполнения (данные не приведены) композиции плацебо можно разделить на три категории:

1. Средства для обеспечения изотоничности, которые не образуют отложений на наполнительно-разливочном оборудовании: ксилит, глицерин, глюкозы моногидрат, мальтоза, ПЭГ 400 и пропиленгликоль.

2. Средства для обеспечения изотоничности, которые образуют мало отложений и обладают лучшими свойствами при заполнении, чем маннит: сорбит, сахароза и глицин.

3. Средства для обеспечения изотоничности, которые сопоставимы с маннитом или хуже него: маннит, лактозы моногидрат, аргинин, мио-инозит и диметилсульфон.

Вывод

В эксперименте на модели заполнения было обнаружено, что ксилит, глицерин, глюкоза, мальтоза, ПЭГ 400, пропиленгликоль, сорбит, сахароза и глицин являются подходящими кандидатами для замены маннита. Однако, поскольку глюкоза является восстанавливающим сахаридом и поэтому может вызывать нежелательное разложение компонентов композиции, этот модификатор тоничности был отвергнут. Кроме того, была отвергнута мальтоза из-за засорения игл. Это привело к следующему выбору: глицерин, ксилит, сорбит, сахароза, глицин, пропиленгликоль и ПЭГ 400, у которых по результатам капельного теста, засорения игл и модели заполнения были обнаружены свойства, подходящие для использования их в качестве кандидатов для замены маннита в пептидных композициях.

Однако, исходя из приведенных ниже соображений, в качестве средства для обеспечения изотоничности для дальнейшего исследования посредством сравнения с маннитом из всех кандидатов был выбран пропиленгликоль:

а) было показано, что пропиленгликоль не влияет на физическую и химическую стабильность композиций, содержащих Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-CLP-1(7-37);

б) было показано, что пропиленгликоль не влияет на испытания антимикробных консервантов; и

в) применение пропиленгликоля не требует проведения дополнительных исследований токсичности.

Пример 2

Сравнение композиций плацебо, содержащих маннит и пропиленгликоль, в экспериментах на модели заполнения и на модели применения

Приготовление композиций

Консервант и буферное вещество растворяли в воде и при перемешивании добавляли средство для обеспечения изотоничности. рН доводили до желаемого значения с использованием гидроксида натрия и/или хлористоводородной кислоты. В заключение композицию фильтровали через фильтр с порами диаметром 0,22 мкм. Составы композиций были следующими:

Динатрий фосфата дигидрат:	1,42 мг/мл
Фенол:	5,5 мг/мл
Пропиленгликоль или маннит:	13,7 или 35,9 мг/мл
Вода для инъекций:	До 1,0 мл
рН:	7,90

Эксперимент на модели заполнения

Эксперимент на модели заполнения, длившийся 24 часа, был проведен так, как описано в Примере 1, и через 24 часа наполнительно-разливочное оборудование было осмотрено на предмет наличия отложений. В случае композиции, содержавшей пропиленгликоль, не было обнаружено отложений на оборудовании. Для сравнения - при использовании композиции, содержавшей маннит, через 24 часа на оборудовании были обнаружены большие отложения (см. Фиг.6).

Эксперимент на модели применения

Для эксперимента на модели применения был проведен тест на засорение, как описано в Примере 1. Одну и ту же иглу использовали в течение всего периода исследования, равного десяти рабочим дням, и ежедневно иглу осматривали на предмет наличия отложений. На Фиг.7 приведены фотографии игл, заполненных композициями, содержавшими пропиленгликоль (верхний ряд) или маннит (нижний ряд). При использовании в качестве средства для обеспечения изотоничности маннита отложения на иглах были обнаружены в 48% случаев, тогда как при использовании в качестве средства для обеспечения изотоничности пропиленгликоля отложений обнаружено не было.

Пример 3

Сравнение пропиленгликоля и маннита в композициях, содержащих Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37)

Приготовление композиций

Консервант, средство для обеспечения изотоничности (маннит или пропиленгликоль) и буферное вещество растворяли в воде и доводили рН до желаемого значения. Arg ³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37) растворяли в воде при медленном перемешивании. Затем два раствора смешивали и доводили рН до желаемого значения с использованием гидроксида натрия и/или хлористоводородной кислоты. В заключение композицию фильтровали через фильтр с порами диаметром 0,22 мкм. Составы композиций были следующими:

Arg³⁴, Lys²⁶ (N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37) (6,25 мг/мл),

Динатрийфосфата дигидрат (1,42 мг/мл),

Фенол (5,5 мг/мл),

Маннит или пропиленгликоль (35,9 или 14,0 мг/мл),

Вода для инъекций (до 1,0 мл),

рН: 8,15

Эксперимент на модели применения

Для эксперимента на модели применения был проведен тест на засорение, как описано в Примере 1, за исключением того, что была использована игла калибра G31. Одну и ту же иглу калибра G31 использовали в течение всего периода исследования, равного десяти рабочим дням, и ежедневно иглу осматривали на предмет наличия отложений. На Фиг.7 приведены фотографии игл, не содержащих отложений, если они были заполнены композициями, содержавшими пропиленгликоль (нижний ряд), и игл, в которых были обнаружены отложения, если они были заполнены композициями, содержавшими маннит (верхний ряд).

В случае композиций, содержавших маннит, засорение иглы наблюдали в 1 из 10 случаев в День 4, в 2 из 10 случаев - в День 5, в 3 из 10 случаев - в День 8 и в 4 из 10 случаев - в день 9. Для сравнения в случае композиций, содержавших пропиленгликоль, не наблюдалось засорения игл.

Предполагается, что результаты, сходные с результатами, полученными при применении вышеописанной композиции, содержащей пропиленгликоль, могут быть получены, если рН будет доведен до 7,40, 7,70 или 7,90. Кроме того, дополнительными композициями, которые можно испытать, являются композиции следующего состава:

Буферные вещества: глицилглицин (1,32 мг/мл), L-гистидин (1,55 мг/мл), ГЭПЭС (HEPES - 2-[4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил]-этансульфоновая кислота) (2,38 мг/мл) или бицин (1,63 мг/мл)

Консерванты: фенол (5,0 или 5,5 мг/мл), бензиловый спирт (18 мг/мл) или смесь m-крезола и фенола (2,5/2,0 мг/мл)

Пропиленгликоль: 14,0 или 14,3 мг/мл

Вода для инъекций: до 1,0 мл

рН: 7,70, 7,90 или 8,15

Пример 4

Влияние концентрации пептида на засорение игл

Композиции, содержащие Arg ³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37), были приготовлены так, как описано в Примере 3, с использованием концентраций пептида, варьировавших в диапазоне 0-5 мг/мл Arg³⁴, Lys ²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37). Составы композиций были следующими:

Лираглютид: 0, 0,3, 3 и 5 мг/мл

Динатрийфосфата дигидрат: 0,71 мг/мл

Натрия дигидрофосфата дигидрат: 0,62 мг/мл

Маннит: 36,9 мг/мл

Фенол: 5,0 мг/мл

Вода для инъекций (до 1,0 мл)

рН: 7,40

Эксперимент на модели применения был проведен так же, как в Примере 3, за исключением того, что была использована игла калибра G30, и результаты (данные не приведены) показали, что эффект засорения иглы композициями, содержащими маннит, по сравнению с отсутствием засорения композициями, содержащими пропиленгликоль, не зависел от концентрации пептида.

Пример 5

Засорение игл композициями, содержащими Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека или NovoMix 30 и маннит

Приготовление композиций

Композиция, содержавшая Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека, была приготовлена следующим образом:

а) Был приготовлен первый раствор посредством растворения буферного вещества, хлорида натрия, консервантов (фенола и m-крезола) в воде;

б) Был приготовлен второй раствор Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулина человека и ацетата цинка в воде;

в) Содержащий пептид раствор, приготовленный на стадии б), был добавлен к раствору, приготовленному на стадии а); и

г) рН раствора был доведен до желаемого значения рН.

Композиция, содержавшая Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека и приготовленная вышеуказанным способом, имела следующий состав: Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека (2400 нмоль), фенол (1,80 мг/мл), m-крезол (2,06 мг/мл), маннит (30,0 мг/мл), динатрий фосфата дигидрат (0,890 мг/мл), хлорид натрия (1,17 мг/мл), ацетат цинка (65,6 мкг/мл), вода для инъекций (до 1,0 мл), рН: 7,4.

Композиция, содержавшая NovoMix 30, была приготовлена следующим образом:

а) Приготовили раствор посредством растворения буферного вещества, хлорида натрия, фенола, маннита и гидроксида натрия в воде.

б) Приготовили раствор хлорида натрия, фенола и маннита в воде.

в) Приготовили раствор протамина сульфата в воде.

в) Приготовили раствор инсулина, хлористоводородной кислоты и цинка в воде.

г) Смешали растворы б), в) и г).

д) Добавили раствор е) к раствору, полученному на стадии а).

е) Отрегулировали рН раствора до желаемого значения рН и кристаллизовали раствор при комнатной температуре.

ж) Приготовили раствор посредством растворения m-крезола, фенола и маннита в воде.

з) Раствор ж) добавили к кристаллической фракции, полученной на стадии е); и

и) Отрегулировали рН раствора до желаемого значения рН.

Композиция, содержавшая NovoMix 30 и приготовленная вышеуказанным способом, имела следующий состав: инсулин аспарт (100 единиц/мл), протамина сульфат (примерно 0,33 мг/мл), фенол (1,50 мг/мл), m-крезол (1,72 мг/мл), маннит (30,0 мг/мл), динатрий фосфата дигидрат (1,25 мг/мл), хлорид натрия (0,58 мг/мл), цинк (19,6 мкг/мл), вода для инъекций (до 1,0 мл), рН: 7,3.

Результаты

Эксперимент на модели применения был проведен так же, как в Примере 3, с использованием игл калибра G31, при этом 20 игл были исследованы в течение 20 дней. Были получены следующие результаты: засорение игл было обнаружено в случае Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулина человека в День 2 (5%), день 3 (70%) и в День 4 (100%). Засорение игл в случае NovoMix 30 было обнаружено в День 3 (5%), День 4 (10%), День 5 (35%), День 6 (40%), День 8 (50%), День 9 (55%) и День 10 (80%). Следовательно, влияние маннита на засорение игл не зависит от типа пептида, включенного в композицию, так как сопоставимый эффект засорения наблюдался при использовании Arg³⁴, Lys²⁶ (N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37), Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулина человека и NovoMix 30.

Пример 6

Испытание композиций, содержащих Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(B30)-инсулин человека или NovoMix 30 и пропиленгликоль

Приготовление и состав композиций, содержащих Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека или NovoMix 30, являются такими же, как описано в Примере 5, за исключением того, что маннит будет заменен на пропиленгликоль в концентрации, обеспечивавшей изотоничность. Эксперимент на модели применения проводят, как описано в Примере 5.

На основании того факта, что засорение композициями, содержащими Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека или NovoMix 30 и маннит, было сходным с засорением, наблюдавшимся в случае композиций, содержащих Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37) и маннит, можно предположить, что влияние пропиленгликоля на засорение игл композициями, содержащими Lys 29 (N -тетрадеканоил)дез(В30)-инсулин человека или NovoMix 30 и пропиленгликоль, будет сходным с действием композиций, содержащих Arg³⁴, Lys²⁶(N -( -Glu(N -гексадеканоил)))-GLP-1(7-37) и пропиленгликоль.